第一篇：培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)心得體會 2011年4月11日星期一

培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)心得體會

2011年4月11日星期一

培養(yǎng)基的配制是植物組織培養(yǎng)的第一步，本節(jié)實(shí)驗(yàn)我們每組（五人）配制200ml瓊脂培養(yǎng)基。我們嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，每一步都需要我們認(rèn)真對待，才會保證實(shí)驗(yàn)的成功。下面從以下方面闡述以下我的心得：

首先，填寫配制單需要我們先算出所需各試劑的體積，這就需要用到我們理論課上的知識，準(zhǔn)確計(jì)算，所以平時(shí)一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)理論課。在準(zhǔn)確計(jì)算后，當(dāng)然就是準(zhǔn)確稱量，基于之前實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)，我能夠熟練的用電子天平精確稱量，做到不浪費(fèi)試劑，不弄臟天平。

其次，在將蔗糖和瓊脂置于電爐子上加熱前，將鍋刷干凈，以免混入雜質(zhì)。按實(shí)驗(yàn)步驟加入各試劑，調(diào)PH時(shí)，滴定后混勻迅速取適量低到試紙上觀察，一條試紙可多次使用，切勿造成浪費(fèi)。高壓滅菌時(shí)要按實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)及使用規(guī)格進(jìn)行檢查和使用。

最后，本實(shí)驗(yàn)更讓我體會到與組員團(tuán)結(jié)協(xié)作的重要性，每一步操作都應(yīng)認(rèn)真嚴(yán)謹(jǐn)?shù)倪M(jìn)行，如果負(fù)責(zé)一些不感興趣的部分也同樣要重視，不推辭，比如看滅菌鍋，也是實(shí)驗(yàn)重要的一步。在實(shí)驗(yàn)過程中不能只學(xué)會自己的操作的部分，也要多與同學(xué)老師交流，將理論更好的與實(shí)踐結(jié)合。

無菌操作及愈傷組織誘導(dǎo)技術(shù)實(shí)驗(yàn)心得2011年4月12星期二

本次實(shí)驗(yàn)讓我感受頗深，因?yàn)槲以趯?shí)驗(yàn)中犯了一個(gè)大錯(cuò)誤，上周的實(shí)驗(yàn)是將制成的兩百毫升培養(yǎng)基平均分配到十個(gè)培養(yǎng)基中，而上學(xué)期微生物實(shí)驗(yàn)是平均分配到六個(gè)培養(yǎng)基中，我竟然奇跡般的給記混了，很對不起同組的同學(xué)，幸好還有機(jī)會補(bǔ)過，讓同寢三班的同學(xué)幫忙配了五瓶，還不致影響下次實(shí)驗(yàn)。這個(gè)錯(cuò)誤犯的真的很荒唐，都是因?yàn)槠綍r(shí)不過認(rèn)真，思路不夠清晰，并且想當(dāng)然的認(rèn)為自己想的就是對的，其實(shí)還是應(yīng)該多看書，多于其他同學(xué)交流，不至于由于一個(gè)人的想法或做法錯(cuò)誤影響全組。

我們負(fù)責(zé)給胡蘿卜塊莖消毒的同學(xué)開始竟陰錯(cuò)陽差沒泡升汞，后來經(jīng)提醒我們有不就回來，我們當(dāng)然不該出現(xiàn)這樣的大漏洞，我們也深知自身在實(shí)驗(yàn)過程中的諸多不足，但我們想通過實(shí)驗(yàn)課來更好的提高我們的動手及理論的運(yùn)用能力卻很強(qiáng)烈。在我們出錯(cuò)情況下并沒有慌亂，而是認(rèn)真的想辦法補(bǔ)救，我們會吃一塹長一智，在今后的實(shí)驗(yàn)中認(rèn)真嚴(yán)謹(jǐn)，珍惜每一次實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)的機(jī)會！

第二篇：如何配制干粉培養(yǎng)基

如何配制干粉培養(yǎng)基

配制是要保證充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物質(zhì)都要等培養(yǎng)基完全溶解之后才能添加。

注意事項(xiàng)

1.干粉不包含的成分，常見的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等。這些成分有些是必須添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要決定。

2.配制是要保證充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物質(zhì)都要等培養(yǎng)基完全溶解之后才能添加。

3.配制所用的水應(yīng)是三蒸水，離子濃度很低。

4.所用器皿應(yīng)嚴(yán)格消毒。

5.配制好的培養(yǎng)基應(yīng)馬上過濾，無菌保存于4度。

6.液體培養(yǎng)基主要是為了科研工作的方便而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，它是一種滅菌后保證無菌的溶液，必要時(shí)可制成無內(nèi)毒素等的溶液，可節(jié)省科研人員的工作量。

配制方法

1.在一個(gè)盡可能接近總體積的容器中加入比預(yù)期培養(yǎng)基總體積少5%的雙蒸水。

2.在室溫(20℃到30℃)的水中加入干粉培養(yǎng)基，輕輕攪拌，不要加熱。

3.水洗包裝袋的內(nèi)部，轉(zhuǎn)移全部的痕量干粉到容器內(nèi)。

4.加NaHCO3到培養(yǎng)基中。

5.用雙蒸水稀釋到想要的體積，攪拌溶解。注意不要過分?jǐn)嚢琛?/p>

6.通過緩慢攪拌加入1N NaOH 或1N HCL調(diào)節(jié)pH值，由于pH值在過濾時(shí)會上升0.1到0.3，因而調(diào)節(jié)pH值使它比最終想要的pH值低0.2到0.3。培養(yǎng)基在過濾前要保持密封。

第三篇：食用菌實(shí)驗(yàn)-培養(yǎng)基制作

實(shí)驗(yàn)二

母種培養(yǎng)基制作

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆招泵嬖嚬芘囵B(yǎng)基的配制、消毒與滅菌等制作過程，為菌種轉(zhuǎn)管、組織分離制作母種打下基礎(chǔ)。

二、常用培養(yǎng)基配方

1．馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)

去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000毫升，pH自然。2.PDA綜合培養(yǎng)基

去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，磷酸二氫鉀3.0克，硫酸鎂1.5克，維生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。

三、實(shí)驗(yàn)材料和用具

天平、電爐，18×180毫米試管，止水夾。紗布，棉塞，牛皮紙，皮筋，手套、菜板、刀、恒溫箱，三角漏斗、支架（每組一套）。手提式高壓滅菌鍋。馬鈴薯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂等。

四、實(shí)驗(yàn)步驟與方法 1．PDA培養(yǎng)基的配制 2．裝管、捆把 3．滅菌

鍋內(nèi)加適量水→ 滅菌物品放內(nèi)鍋→

加熱 → 壓力表0.05Pa 時(shí)放氣 →壓力表1.15Pa(121-126℃)時(shí)計(jì)時(shí)30分鐘。

4.擺斜面。滅菌后將試管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板條上，使試管內(nèi)斜面的長度為試管長度的3／5。放置凝固后備用。

五、作業(yè)思考題

1．制作PDA培養(yǎng)基過程中，為什么要用牛皮紙將整捆的棉塞部分封蓋滅菌? 2．滅菌時(shí)，加熱水沸后，在鍋內(nèi)壓力升至0.5Pa 時(shí)，為什么要打開放氣閥? 3．寫出試管培養(yǎng)基制作的工藝流程。4．消毒與滅菌是同一概念嗎?為什么?

實(shí)驗(yàn)三

原種培養(yǎng)基制作

原種即二級種，就是將試管中的母種，接入菌種瓶內(nèi)，等菌絲長滿后形成的菌種。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過實(shí)驗(yàn)初步掌握原種培養(yǎng)基的配料、裝瓶(袋)、滅菌、消毒、接種、培養(yǎng)等生產(chǎn)工藝流程。并了解原種培養(yǎng)基的不同配方及不同的制作方法。

二、實(shí)驗(yàn)材料和用具 天平，立式或臥式高壓滅菌鍋，菌種瓶或菌種袋(菌種瓶口徑3厘米，容積750毫升)，塑料套環(huán)，塑料繩，擦布，錐形搗木。稱，大盆

麥粒，麥麩，棉籽殼，不銹鋼鍋，石膏，碳酸鈣，白糖，牛皮紙，皮筋，三、培養(yǎng)基配方

1．木屑米糠培養(yǎng)基(適用于香菇、木耳、猴頭菇、楊樹菇等木腐生類食用菌)：木屑(鋸木屑)78千克，米糠或麥麩20千克，石膏1千克，蔗糖(俗稱白糖)1千克。料水比為1：1．4～1．6，使含水量達(dá)到60%，即用手握抓材料時(shí)指縫現(xiàn)水而不滴水。

2．麥粒培養(yǎng)基(適用于平菇、草菇、猴頭、金針菇等)： 麥粒200千克，蔗糖2千克，碳酸鈣2千克，水500升。

3．棉籽殼培養(yǎng)基(適于多種食用菌)：

棉籽殼78%，麥麩10%，玉米粉10%，過磷酸鈣1%，白糖l%，水料比約1:1.1-1.2。

四、實(shí)驗(yàn)步驟與方法 1．培養(yǎng)基的配制

1)木屑米糠培養(yǎng)基的配制：

拌料：根據(jù)計(jì)劃生產(chǎn)原種的數(shù)量，計(jì)算出各種原料的用量，分別稱取后，將不溶性輔料和主料摻拌均勻，將可溶性輔料加入水中溶解，逐漸潑入拌好的主料中，摻拌均勻，繼續(xù)加水拌料。拌料時(shí)，邊加水，邊測含水量，以便控制水分，不至過多或不足。含水量的測定：拌好料后，用手抓一把培養(yǎng)料在手中緊握，手指縫中有水滲出但不下滴為適宜。料水比約為1:1.2-1.4 裝瓶（袋）：將培養(yǎng)料裝入750毫升的菌種瓶(或500毫升罐頭瓶)中，邊裝邊搗實(shí)(但不宜過緊，太緊則透氣性差，菌絲生長不良)，以手按結(jié)實(shí)有彈性為宜，一直裝到菌種瓶的瓶肩處。

打孔：培養(yǎng)料裝好后，用錐形木棒從瓶中央向下打一個(gè)洞，洞深離瓶底部2～3厘米，這樣一是可以增加瓶內(nèi)氧氣；二是有助于菌絲沿著洞穴向下蔓延；三是便于固定菌種塊，不致游動而影響成活，有利于瓶下部菌絲生長良好。

擦瓶：打洞后，用濕毛巾或濕布多次將瓶口和瓶外粘附的培養(yǎng)料擦凈，擦干，以免接種后污染

包扎：塞上棉塞，用牛皮紙將瓶口及棉塞包住，用繩扎緊。也可在瓶口上先放一層牛皮紙，再蓋一層聚丙烯塑料薄膜，扎緊瓶口。2)棉籽殼培養(yǎng)基的配制：

棉籽殼原種培養(yǎng)基的配制方法同木屑培養(yǎng)基的相似，只是裝瓶時(shí)培養(yǎng)料的壓實(shí)要比木屑的緊，因棉籽殼顆粒較大，且能留有較多的空隙。3)麥粒培養(yǎng)基的配制：

浸料：將小麥粒用水浸4-8小時(shí)，煮沸20—30分鐘，煮沸的過程中就加入蔗糖。最后使麥粒熟而不開花。濾去水分(濾液可制母種培養(yǎng)基或栽培時(shí)拌料用)，攤在通風(fēng)處晾30—40分鐘，使麥粒表皮不濕為宜。

裝瓶：加入碳酸鈣，拌勻后裝瓶。裝瓶時(shí)要注意邊裝瓶邊將瓶輕輕地扣動，使瓶內(nèi)培養(yǎng)料松緊度上下一致，裝至粒面至瓶肩部。瓶口包扎同前。2．滅菌

包扎好的料瓶（袋）放入高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。在1．5千克／平方厘米壓力下，滅菌2小時(shí)即可。如用土蒸鍋常壓滅菌，須將水燒開后繼續(xù)蒸10小時(shí)，緩慢降溫后取出使用。

六、作業(yè)思考題

1．原種培養(yǎng)基裝滿瓶后，為什么要用濕毛巾或濕布多次擦洗瓶外和瓶頸? 2．原種培養(yǎng)基裝好后，為什么要在當(dāng)天及時(shí)進(jìn)行滅菌? 3．原種培養(yǎng)基裝瓶后，用錐形搗木在其中內(nèi)插一個(gè)圓洞的目的是什么? 4．原種培養(yǎng)基裝滿瓶后，其瓶的上部培養(yǎng)料是松一些好，還是緊一些好?為什么? 5．培養(yǎng)料裝得過松過緊都將產(chǎn)生什么樣的結(jié)果?

第四篇：實(shí)驗(yàn)教案 培養(yǎng)基的制備

實(shí)驗(yàn)一 培養(yǎng)基的制備

一目的要求 明確培養(yǎng)基的配制原理 通過對基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟 二 基本原理

不同培養(yǎng)基中含有不同的微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，其可供微生物生長繁殖用，為微生物提供C源、能源、N源和維生素。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96度溶化，實(shí)際應(yīng)用時(shí)，一般在沸水中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免燒焦，瓊脂在40度時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用，固體培養(yǎng)基中瓊脂含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同有所不同。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：

牛肉膏：3.0g,蛋白胨10.0g,NACl5.0g,水1000ml,pH 7.2-7.4.馬鈴薯培養(yǎng)基是霉菌的基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方如下： 馬鈴薯 100g 蔗糖 10g 瓊脂 10g 水500ml pH 自然 三器材：

1試劑或溶液：馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、蒸餾水。

2儀器或其它用具：試管、三角瓶、燒杯、玻璃棒、天平、牛角勺，紗布、麻繩、牛皮紙、高壓滅菌鍋 四操作步驟 1稱量：

依次稱取馬鈴薯塊、蔗糖、，切碎的瓊脂放入三角瓶中并加入500ml蒸餾水 2 把三角瓶放入鍋中，鍋蓋好后放在電熱爐上加熱，等瓊脂溶解后取出三角瓶 3過濾：趁熱用多層紗布過濾，去除里面的雜質(zhì) 4分裝：將配制好的培養(yǎng)基分裝入試管。

5加塞：分裝完后在試管口塞上塞子，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基造成污染，并保證有良好的勇氣性能。

6包扎：用牛皮紙?jiān)侔靠冢苑罍缇鷷r(shí)弄濕棉塞。7滅菌：用高壓蒸汽鍋在0.1MP下滅菌20min 8擱置斜面：趁熱將試管里的培養(yǎng)基斜面，注意斜面的長度大約為試管長度的1/2 9無菌檢查 五：注意事項(xiàng)

1培養(yǎng)基配制后，必須立即滅菌

2分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管口上，以免沾在塞子上而引起污染

實(shí)驗(yàn)二

革蘭氏染色法

一目的要求

1學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法

2了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性 二基本原理

革蘭氏染色法是1884年丹麥病理學(xué)家christain Gram 創(chuàng)立的而后作了些改進(jìn)，革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇脫色，最后用復(fù)染劑復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌。如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色，該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色法將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，是由這兩類細(xì)菌細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不同決定的。實(shí)際上，當(dāng)用結(jié)晶紫初染后，像簡單染色法一樣，所有細(xì)菌都被染成初染劑的藍(lán)紫色，碘作為媒染劑，它能結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫-碘復(fù)合物，從而增強(qiáng)了染料與細(xì)菌的結(jié)合力，當(dāng)用脫色劑處理時(shí)，兩類細(xì)菌的脫色效果是不同的，革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，壁厚、類脂含量低，用乙醇脫色時(shí)細(xì)胞壁脫水，使肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮水，透性降低，從而合結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被洗脫，而保留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復(fù)染后仍保留初染劑 的藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖較薄、類脂含量高，所以當(dāng)脫色處理時(shí)，類脂質(zhì)被乙醇溶解，細(xì)胞壁透性增大，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物比較容易被洗脫出來，用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的紅色。三器材

1菌種 大腸桿菌

2染色劑：革蘭氏染色液

（1）草酸銨結(jié)晶紫：A 液：結(jié)晶2g：95%乙醇20ml;

B 液：草酸銨0.8g;蒸餾水80ml;

混合AB兩液，靜置48h后使用（）(2)盧戈氏碘液

碘片1g;碘化鉀2g;蒸餾水30ml;(3)95%乙醇

（4）番紅復(fù)染液：番紅25g;95%乙醇 100ml 取上述配好的番紅乙醇溶液10ml和 80ml蒸餾水混勻即成。3儀器或其他用具

顯微鏡 酒精燈 載玻片 接種環(huán) 蒸餾水 四 操作步驟 1制片

（1）涂片：取載玻片，各滴一小滴蒸餾水于玻片中央，有接種環(huán)無菌操作挑取菌苔于水滴中，混合 并涂成薄膜。（2）干燥：室溫自然干燥

（3）固定：涂面朝上，通過2~3次 2 初染

滴加結(jié)晶紫染色1-2Min,水洗 3 媒染

用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋1min，水洗 用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在魄背景下，用滴管流加95的乙醇脫色，直到流出的乙醇無紫色時(shí)，立即水洗，脫色時(shí)間一般20-30min 5復(fù)染

用番紅復(fù)染2min,水洗。并用吸水紙吸干玻片上的殘水。6鏡檢

干燥后，用顯微鏡觀察。

菌體被當(dāng)成藍(lán)紫色的是革蘭氏陽性菌，被染成紅色的革蘭氏陰性菌。實(shí)驗(yàn)三

酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的的鑒別

一目的要求

1觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活的實(shí)驗(yàn)方法 2 掌握酵母菌的一般特征及其與細(xì)菌的區(qū)別 二基本原理

酵母菌是不運(yùn)動的單細(xì)胞真核微生物，共大小通常比常見細(xì)菌大幾倍甚至十幾倍，大多數(shù)酵母以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的分裂繁殖有性繁殖通過接合產(chǎn)生子囊孢子，本實(shí)驗(yàn) 通過美藍(lán)染水浸片來觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈現(xiàn)藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型 變?yōu)闊o色的還原型，因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的，而死細(xì)胞或代謝微弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，借此即可對酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。三器材

1菌種：釀酒酵母培養(yǎng)約2天的純培養(yǎng)物 2溶液或試劑：呂氏堿性美藍(lán)染色液

3儀器或其他用具：顯微鏡，載玻片 蓋玻片 四操作步驟

1美藍(lán)浸片的觀察

（1）在載玻片中央加一滴呂氏堿性美藍(lán)染色液，然后按無菌操作用接中環(huán)挑取水量酵母菌放在染液中，混合均勻。

（2）用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下，使其不著邊際在菌液上

（3）將制片放置約3分鐘，鏡檢。先用低倍鏡，然后用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)，和出芽情況。并根據(jù)顏色區(qū)別死活細(xì)胞。

（4）染色約0.5小時(shí)后再次進(jìn)行觀察，注意死細(xì)胞的數(shù)量是否增加。2 水—碘液浸片的觀察

在載玻片中央加一小滴革蘭氏染液用碘液，然后在其上加3小滴水，取少許酵母菌苔放在水—碘液中混勻，蓋上蓋玻片后鏡檢。五實(shí)驗(yàn)結(jié)果

觀察的酵母菌的形成特征：

實(shí)驗(yàn)四 霉菌的形態(tài)觀察

一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌的形態(tài)的基本方法 2了解甲類常見霉菌的基本形態(tài)特征。二實(shí)驗(yàn)原理

霉菌可產(chǎn)生復(fù)雜的分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長 到一寂階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多。常是細(xì)菌菌體的幾倍到幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有下列三種：直接制片觀察法、載玻片培養(yǎng)觀察法，玻璃紙培養(yǎng)觀察法。三實(shí)驗(yàn)器材

1菌種：黃典霉 青霉 產(chǎn)黃青霉 黑根霉 2溶液與試劑：呂氏美藍(lán)染色液 蒸餾水

3儀器或其他用具：顯微鏡 載玻片 蓋玻片 接種環(huán) 濾紙 四實(shí)驗(yàn)步驟

1在載玻片中央加一滴呂氏堿性美藍(lán)染色液，然后按無菌操作用接種環(huán)挑取少量霉菌放在呂氏堿性美藍(lán)染色液中，混合均勻。

2用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上。3將制片放置約3MIN后鏡檢，先用低倍鏡，后用高倍鏡，觀察霉菌的形態(tài)。五結(jié)果

六思考：霉菌的孢子有哪些形態(tài)。

實(shí)驗(yàn)五

微生物的分離純化

一目的要求

掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù) 二基本原理

從混雜的微生物群體中獲得只含一種工某一株微生物的過程為微生物的分離與純化。常用的方法有：

1簡易單細(xì)胞挑取法

它需要特制的顯微鏡操縱器或其它顯微技術(shù)，因而其使用受到限制。簡易單孢子分離法是一種不需要顯微單孢操縱器，直接在普通顯微鏡下利用低倍鏡分離單孢子的方法，它采用很細(xì)的毛細(xì)管吸取較稀的萌發(fā)的孢子懸液滴在培養(yǎng)皿蓋的內(nèi)壁上，在低倍鏡下逐個(gè)檢查微滳，將只含有一個(gè)萌發(fā)孢子的微滴放在一小塊營養(yǎng)瓊脂片，使其發(fā)育成微菌落，再將微菌落轉(zhuǎn)移2到培養(yǎng)基中，即可獲得公由單個(gè)孢子發(fā)育而成的純培養(yǎng)。2平板分離法

該方法操作簡便，普遍用于微生物的分離與純化，其基本原理包括兩方面：

（1）選擇適合待分離微生物生長條件，如營養(yǎng)、酸堿度、溫度和氧等要求或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。（2）微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個(gè)菌落，可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體，因此可以通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)，獲取單個(gè)菌落的方法，可通過稀釋涂布平板或平板劃線等技術(shù)完成。三器材

1菌種：米曲霉

2培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 馬鈴薯培養(yǎng)基 3溶液或試劑：試管、三角瓶、瓊脂

4儀器或其他用具：無菌玻璃棒、無菌吸管、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)基、樣品 四操作步驟平板劃線分離法

1倒平板：按稀釋涂布平板法倒平板，并用記號筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱，樣品編號和實(shí)驗(yàn)日期。2劃線：在近火焰處左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取樣品懸液一環(huán)在平板上劃線。劃線的方法很多，但無論采用哪種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使之形成 單個(gè)菌落。常用的劃線方法有下列二種：

（1）用接種環(huán)以無菌操作挑取樣品懸液一環(huán)，先平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平等劃線3~4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)基約70度角，并將接種環(huán)上的剩余燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同樣的方法通過第二次劃線部分作第三次劃線 和第四次交平行劃線。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿，倒置于溫箱培養(yǎng)。

（2）挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，倒置下載培養(yǎng)箱中。

（3）挑菌落 同稀釋涂布平板法，一直到分離的微生物認(rèn)為純化為止。五思考題。

第五篇：配制C50砼的幾點(diǎn)心得體會

砼外加劑對水泥的適應(yīng)性

(1)水泥礦石是否穩(wěn)定導(dǎo)致礦物組分是否穩(wěn)定，從而影響到砼外加劑對水泥的適應(yīng)性。

(2)水泥生產(chǎn)工藝，如立窯與回轉(zhuǎn)窯，冷卻制度中的急冷措施控制得怎樣，石膏粉磨時(shí)的溫度等，造成水泥中礦物組分、晶相狀態(tài)，石膏形態(tài)發(fā)生改變，從而影響到砼外加劑對水泥的適應(yīng)性。

(3)水泥中吸附外加劑能力:C3A>C4AF>C3S>C2S，水泥水化速率與礦物組分直接相關(guān)。

(4)水泥存放一段時(shí)間后，溫度下降，使砼外加劑高溫適應(yīng)性得到改善，而且f-CaO吸收空氣中的水后轉(zhuǎn)變成Ca(OH)2，吸收空氣中的CO2后轉(zhuǎn)變成CaCO3，從而使Mwo下降，也使砼和易性得到改善，使新拌砼塌落度損失減緩，砼的凝結(jié)時(shí)間稍延長。

(5)普通硅酸鹽水泥的需水量稍大于礦渣水泥，其保水性好，但一般塌落損失也較快。

(6)C3A含量較高的水泥，塌落度損失快，保水性好。

(7)水泥中親水性摻合料保水性好;火山灰質(zhì)水泥保水性差，易泌水。(8)溫度、濕度高低直接影響砼外加劑對水泥的適應(yīng)性。

(9)配合比中的砂、石級配及砂、石、水、膠材的比例也影響砼外加劑對水泥的適應(yīng)性。砼易出現(xiàn)泌水、離析問題的原因及解決方法 2.1 原因

(1)水泥細(xì)度大時(shí)易泌水;水泥中C3A含量低易泌水;水泥標(biāo)準(zhǔn)稠度用水量小易泌水;礦渣比普硅易泌水;火山灰質(zhì)硅酸鹽水泥易泌水;摻Ⅰ級粉煤灰易泌水;摻非親水性混合材的水泥易泌水。

(2)水泥用量小易泌水。

(3)低標(biāo)號水泥比高標(biāo)號水泥的砼易泌水(同摻量)。

(4)配同等級砼，高標(biāo)號水泥的砼比低標(biāo)號水泥的砼更易泌水。

(5)單位用水量偏大的砼易泌水、離析。

(6)強(qiáng)度等級低的砼易出現(xiàn)泌水(一般)。

(7)砂率小的砼易出現(xiàn)泌水、離析現(xiàn)象。

(8)連續(xù)粒徑碎石比單粒徑碎石的砼泌水小。

(9)砼外加劑的保水性、增稠性、引氣性差的砼易出現(xiàn)泌水。

(10)超摻砼外加劑的砼易出現(xiàn)泌水、離析。

2.2 解決途徑

(1)根本途徑是減少單位用水量。

(2)增大砂率，選擇合理的砂率。

(3)增大水、水泥用量或摻適量的Ⅱ、Ⅲ級粉煤灰。(4)采用連續(xù)級配的碎石，且針片狀含量小。

(5)改善砼外加劑性能，使其具有更好的保水、增稠性，或適量降低砼外加劑摻量(僅限現(xiàn)場)，攪拌站若降低砼外加劑摻量，又可能出現(xiàn)砼塌落度損失快的新問題。泵送砼出現(xiàn)抓底或板結(jié)的原因及解決方法 3.1 原因

(1)嚴(yán)重泌水的砼易出現(xiàn)抓底或板結(jié)(粘鍋)。(2)水泥用量大的砼易出現(xiàn)抓底現(xiàn)象。(3)砼外加劑摻量大的砼易出現(xiàn)抓底現(xiàn)象。(4)砂率小，砼易出現(xiàn)板結(jié)現(xiàn)象。

(5)砼外加劑減水率高，泌水率高，保水、增稠、引氣效果差的砼易出現(xiàn)抓底或板結(jié)現(xiàn)象。3.2 解決途徑

(1)減少單位用水量。(2)提高砂率。

(3)摻加適量的摻合料如粉煤灰，降低水泥用量。(4)降低砼外加劑的摻量。

(5)增加砼外加劑的引氣、增稠、保水功能。4 泵送砼塌落度損失問題的原因及解決方法 4.1 原因

(1)砼外加劑與水泥適應(yīng)性不好引起砼塌落度損失快。(2)砼外加劑摻量不夠，緩凝、保塑效果不理想。(3)天氣炎熱，某些外加劑在高溫下失效;水分蒸發(fā)快;氣泡外溢造成新拌砼塌落度損失快。

(4)初始砼塌落度太小，單位用水量太少，造成水泥水化時(shí)的石膏溶解度不夠;一般，sl0≥20cm 的砼塌落度損失慢，反之，則快。(5)一般，塌落度損失快慢次序?yàn)椋焊咪X水泥>硅酸鹽水泥>普通硅酸鹽水泥>礦渣硅酸鹽水泥>摻合料的水泥。(6)工地與攪拌站協(xié)調(diào)不好，壓車、塞車時(shí)間太長，導(dǎo)致砼塌落度損失過大。4.2 解決途徑

(1)調(diào)整砼外加劑配方，使其與水泥相適應(yīng)。[url="]365JT[/url]施工前，務(wù)必做砼外加劑與水泥適應(yīng)性試驗(yàn)。

(2)調(diào)整砼配合比，提高砂率、用水量，將砼初始塌落度調(diào)整到20cm以上。(3)摻加適量粉煤灰，代替部分水泥。

(4)適量加大砼外加劑摻量(尤其在溫度比平常氣溫高得多時(shí))。(5)防止水分蒸發(fā)過快、氣泡外溢過快。(6)選用礦渣水泥或火山灰質(zhì)水泥。(7)改善砼運(yùn)輸車的保水、降溫裝置。5 泵送砼堵管的原因及解決方法 5.1 原因

(1)砼和易性差，離析，砼稀散。(2)砼拌合物塌落度小(干粘)。(3)砼拌合物抓底、板結(jié)。

(4)采用單粒級石子，石子粒徑太大，泵送管道直徑小。(5)石子針片狀多。

(6)泵車壓力不夠，或是管道密封不嚴(yán)密。(7)膠凝材料少，砂率偏低。(8)彎管太多。

(9)管中異物未除盡。

(10)攪拌砼時(shí)，不均勻，水泥成塊未松散成水泥漿。(11)第一次泵送砼前未用砂漿潤滑管壁。

5.2 解決途徑

(1)檢查砼輸送管道的密切性和泵車的工作性能，使其處于良好的工作狀態(tài)。

(2)檢查管道布局，盡量減少彎管，特別是≤90°的彎管。(3)泵送砼前，一定要用砂漿潤滑管道。

(4)檢查石子粒徑、粒形是否符合規(guī)范、泵送要求。

(5)檢查入泵處砼拌合物的和易性，砂率是否適合，有無大的水泥塊，拌合物是否泌水、抓底或板結(jié)等現(xiàn)象，若有，采取相應(yīng)的措施(見砼泌水、離析問題)。

(6)檢查入泵處砼塌落度、黏聚性是否足夠，若塌落度不足，則適量提高砼外加劑的摻量，或在入泵處摻加適量的高效減水劑，若是砼黏聚性不足，則適量增大砂率或是摻加適量的Ⅱ級粉煤灰。

(7)檢查砼的初始塌落度是否≥20cm，若是砼塌落度損失快而引起的砼堵泵現(xiàn)象，則應(yīng)首先解決砼損失問題(見塌落度損失問題)。