第一篇：H1N1亞型豬流感診斷方法的研究新進展?

龍源期刊網(wǎng) http://.責(zé)任編輯 陳玉敏 責(zé)任校對 李巖

第二篇：豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 學(xué)號：004A30106001

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究 Study of eperythrozoon suis morphology

diagnosis method

學(xué)生姓名：李楠 指導(dǎo)老師：張久麗 所在院系：網(wǎng)絡(luò)教育學(xué)院 所學(xué)專業(yè)：動物醫(yī)學(xué) 研究方向：豬病研究

東 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 中國·哈爾濱 2012年3月

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

摘 要

附紅細胞體病是由附紅細胞體寄生于動物紅細胞和血漿中而引起的一種人畜共患的熱性傳染病。患病動物廣泛，隱性感染率高。臨床以發(fā)熱、貧血、黃疸為主要特征。2011年8月，某個體養(yǎng)豬場飼養(yǎng)的育肥豬群，臨床主要表現(xiàn)為精神沉郁、高熱、胸腹皮下有大小不等的出血點或紫斑等。我們從中選取15頭病豬，對其進行了形態(tài)學(xué)學(xué)檢查方法的比較研究。

在瑞氏、吉姆薩、吉-瑞氏染色幾種常規(guī)染色的基礎(chǔ)上，首次運用PAS染色和Goodpasture染色對豬附紅細胞體病形態(tài)學(xué)診斷方法進行了比較觀察研究。血涂片Goodpasture染色紅細胞被染成橘黃色，周邊清晰。附紅細胞體被染成乳白色；PAS染色紅細胞被染成淡橘紅色，明顯變形，附紅細胞體呈乳白色。形態(tài)學(xué)診斷方法比較結(jié)果表明： PAS及Goodpasture方法檢出率較高，瑞氏染色最低。

本次試驗表明，除常規(guī)染色外，PAS和 Goodpasture 兩種特殊染色法可用于附紅細胞體病診斷。

關(guān)鍵詞：豬

附紅細胞體病

形態(tài)學(xué)診斷

I

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

Abstract Swine Eperythrozoonsis was a contagion of the human and livestock by Eperythrozoonsuis infecting.The swine was parasitized by the Eperythrozoonsuis that it was a microorganism on red cells and in plasm and marrow.All kinds of animal mould be infected by the Eperythrozoonsuis.All kinds of animal would be infected by the Eperythrozoonsuis.severe economic loss was formed by the sick.Eperythrozoonsis were reported in our country.In the august 2011, the pig were breed on iangsu.Fever, jaundice, anaemia and icterus were manifested in these pigs.This experiment took 15 nature in feeted Epehrozoonosis young pigs for experiment alanimal.The Observation of the Morphology of Swine Eperythrozoonsis was maked by Wright’s, Giemsa, Giemsa-Wright’s, Goodpasture and PAS methods.Under optical microscope after Goodpasture we can see the blood cells are orange, The E.suis was staine creamy and stick to surfaces of blood cell show a radial pattern.After PAS we can see the blood cells are orange The E.suis was staine creamy.E.suis stick to surfaces of blood cell show coronavirus-like.The detectiong rate of PAS and Goodpasture was higher than Wright’s.The results of this study suggest that Goodpasture stain and PAS stain can also play a role in the test of eperythrozoonosis except conventional diagnostic methods of Giemsa,Wright's stain.Key words: Pig, eperythrozoon suis, morphology diagnosis

II

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

目 錄

摘要???????????????????????????????????I Abstract?????????????????????????????????II 1 前言??????????????????????????????????1 1.1 研究的目的和意義??????????????????????????1 1.2 國內(nèi)外研究文獻綜述?????????????????????????1 1.3 本文研究的主要內(nèi)容?????????????????????????1 2 材料與方法?????????????????????????????????2 2.1材料?????????????????????????????2 2.2方法?????????????????????????????2 3結(jié)果?????????????????????????????4 3.1鮮血壓片鏡檢?????????????????????????????4 3.2瑞氏染色鏡檢???????????????????????????4 3.3姬姆薩染色鏡檢????????????????????????????4 3.4吉姆薩-瑞氏染色鏡檢????????????????????????4 3.5 Goodpasture 染色鏡檢????????????????????????4 3.6 過碘酸-雪夫氏(PAS)染色鏡檢???????????????????????5 4 分析與討論????????????????????????????5 4.1 臨床癥???????????????????????????5 4.2解剖學(xué)變???????????????????????????5 4.3各種染色的比較觀察????????????????????????5 參考文獻?????????????????????????????????8 附錄???????????????????????????????????9 致謝???????????????????????????????????11 III

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究 前言

1.1 研究的目的和意義

附紅細胞體病呈全球性分布和全國性分布，無地域差異，發(fā)病動物種類廣泛。在高熱、多雨且吸血昆蟲繁殖滋生的夏秋發(fā)生較多。

從 20 世紀中期代豬附紅細胞體病被發(fā)現(xiàn)至今，豬附紅細胞體病已成為一種危害日益嚴重的人獸共患傳染病。我國是畜牧產(chǎn)品生產(chǎn)大國，大部分地區(qū)陸續(xù)報道了豬感染附紅細胞體病的事例，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了很大的經(jīng)濟損失。為了我國養(yǎng)豬生產(chǎn)也得健康發(fā)展，實踐中更要嚴格控制本病的發(fā)生和流行。盡管近幾年國內(nèi)對此病的研究取得了很大的進展，但還需更進一步的進行深入的研究與探討。因此清楚透徹的對豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法進行研究對對犬瘟熱的正確診斷和防制有很重大的意義。

1.2 國內(nèi)外研究文獻綜述

附紅細胞體?。‥perythrozoonosis, EH）是一種人獸共患病，是由血液寄生物—附紅細胞體（Eperythrozoon）寄生于紅細胞表面引起的傳染性、熱性、溶血性疾病。該病以紅細胞壓積降低、血紅蛋白濃度降低、白細胞增多、發(fā)熱、貧血、黃疸為主要臨床特征[1, 2]。此病也被稱為 “紅皮病”，“類邊蟲病”，能感染、牛、羊及馬屬動物，人類也可感染[1, 2]。

1929 年 Schiling 首次報道鼠附紅細胞體病[3]。豬附紅細胞體病最早于 1932年由 doyle 在印度發(fā)現(xiàn)[4]。1934 年 neitz 等在綿羊的紅細胞周圍發(fā)現(xiàn)多形態(tài)微生物[5]。1981 年晉希明在家兔體內(nèi)發(fā)現(xiàn)兔附紅細胞體[3]。1986 年，puntarie 等正式描述了人類附紅細胞體病[6]。自 80 年代后，該病作為一種人畜共患的傳染病，日益受到國內(nèi)外各方面的關(guān)注，已有近30 個國家和地區(qū)報告發(fā)生該病。特別是自 1993 年以來，附紅細胞體病在我國很多地方爆發(fā)流行，已成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要疫病之一。豬附紅細胞體病多呈隱性經(jīng)過，并且易與豬的常見病混合感染，難以準確診斷，使病情復(fù)雜難以有效控制而暴發(fā)，給養(yǎng)殖戶帶來很大的經(jīng)濟損失[4]。附紅細胞體對苯胺色素易于著染[4]，革蘭氏染色為陰性[7]，瑞氏染色為藍紅色。姬姆薩染色呈紫紅色，吖啶橙染色觀察附紅細胞體為典型的橘黃色光，對碘不著色[7,8]。姬姆薩-瑞氏混合液染色，紅細胞呈淡紫色，輪廓清晰，豬附紅細胞體呈藍紫色[9,10]。Macchiavllo 染色紅細胞核、附紅細胞體呈紫紅色，紅細胞呈藍色[11]。Feulgen 反應(yīng)顯微鏡下觀察，紅細胞呈綠色，附紅細胞體、白細胞核均呈紫紅色，但二者的大小懸殊，易于區(qū)別[11]。附紅細胞體可對不同年齡和品種的易感動物造成感染，在臨床上以幼齡及體弱動物發(fā)病較多見，隱性感染率高，豬EH的感染率可高達90%以上[12,13]。

1.3 本文研究的主要內(nèi)容

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

3.染色方法：推片自然干燥后，滴加瑞士染色液，染色3min，然后加等量蒸餾水再染5min，蒸餾水沖洗。

4.染色步驟：用蠟筆于血膜兩端各劃一道橫線，以防染色液外溢，將血片放在水平支架上；滴加染色液，以蓋滿血膜為度，染色 1～2min；再加等量的緩沖液，小心地和染色液均勻，再染 5～8min 后，再用蒸餾水或自來水沖洗。沖洗時應(yīng)平置載玻片，是水流緩慢流過載玻片，以免染色液色素沉積，干燥后鏡檢。

2.2.3 吉姆薩染色

吉姆薩(Giemsa)染液的配制

1.取 1.5g 吉姆薩粉末放入 50mL 甘油，置于 60℃溫箱，約 3h 后溶解。

2.取出后倒入 50mL 中性甲醇，即為母液。于棕色瓶可長久保存。需要注意的是，有的甲醇內(nèi)含醋酸，會使染液中的伊紅沉淀出來，不利染色。

3.將母液與 0.1 mol/L PBS(PH6.9～7.2)按 1:9 混合即成工作液。吉姆薩染液對 pH 極敏感，偏酸時染色過紅，偏堿時則過藍。所以，工作液宜現(xiàn)用現(xiàn)配。

4.染色步驟：取固定后的血液涂片，滴加姬姆氏染色應(yīng)用液至蓋滿血膜（約 2mL）或?qū)⒀庞谑⒂型瑯尤疽旱娜旧字?。根?jù)室溫的高低染色20～40min，流水沖洗，干燥后鏡檢。

2.2.4 吉姆薩-瑞氏染色

1.染色試劑：瑞氏染粉 0.8～1g，吉姆薩染粉 0.5g，甘油 33mL 甲醇500mL。

2.配制方法：將瑞氏染粉放入研缽中，加入少量甘油研磨，再加入少量吉姆薩染粉磨，再加入少量甘油磨，倒出，將未溶部分，繼續(xù)加入甘油磨??直至全溶，加入甲醇，或中間加入甲醇亦可。

3.染色步驟與吉姆薩染色步驟相同。

2.2.5 Goodpasture 染色

試劑：50%硝酸銀溶液：5g硝酸銀（AR）溶解在10mL蒸餾水中，保存在鋁箔包裹的玻璃容器內(nèi)，可穩(wěn)定保存1年。明膠顯影：2g 明膠粉末溶解在99mL蒸餾水中，加1mL甲酸。

染色步驟：

l.在一培養(yǎng)皿底部放一張蒸餾水潤濕的濾紙，上放兩根竹簽，置水浴內(nèi)保溫60℃。

2.將玻片標本正面向上平放其上，將50%硝酸銀溶液和明膠顯影液以2:1體積混勻，加至玻片上，覆以蓋片，至玻片標呈現(xiàn)褐色為止，一般3～4min。

3.自來水流洗去蓋片和染料，空氣中晾干。

4.顯微鏡下鏡檢。

2.2.6 過碘酸-雪夫氏（PAS）染色

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

形態(tài)不一，變形明顯，部分紅細胞呈橢圓形、鈍點狀腎形或三角形。附紅細胞體被染成乳白色，清晰地附著于紅細胞的表面，或呈放射狀黏附于紅細胞的周邊，在血漿中也可看到大量呈乳白色的附紅細胞體（圖 3-5）。

3.6 過碘酸-雪夫氏(PAS)染色鏡檢

紅細胞被過碘酸-雪夫氏液染成淡橘紅色。其大小不一，少數(shù)呈碎狀，有明顯的變形，邊緣不整，有突起，呈星狀或鋸齒狀。附紅細胞體被染成乳白色，附狀于紅細胞表面，尤其是紅細胞的周邊很明顯。由于紅細胞的周邊有大量附紅細胞體附著，使紅細胞體呈現(xiàn)冠狀病 分析與討論

4.1臨床癥狀

病豬被毛粗亂，走路時步態(tài)不穩(wěn)，精神沉郁，全身皮膚黃染，可視粘膜蒼白或黃染，兩耳輕度腫脹，耳尖干燥，在病豬的耳朵末梢、四肢內(nèi)側(cè)、胸腹皮膚有大小不等的出血點或紫斑，如如鱗片狀，指壓不褪色；食欲減退甚至廢絕，消瘦、貧血，四肢步態(tài)不穩(wěn)，體溫升高至41℃，呼吸、心率加快；部分病情嚴重的氣喘、呼吸困難，有不同程度的嘔吐、腹瀉。發(fā)病2～3d后，病豬后肢站立不起，尿赤黃，大便干燥等（圖4-1）。

4.2 解剖學(xué)變化

急性病死豬血液稀薄如水樣，凝固不良，全身皮膚黃染病豬耳部、四肢、胸腹部、臀部皮膚上有許多出血點。四肢、耳部的皮膚出現(xiàn)局灶性壞死。眼結(jié)膜白，下頜淋巴結(jié)、胃腸等全身淋巴結(jié)腫大、水腫，切面多汁呈黃色；出血，尤其蒼是體表淋巴結(jié)腫大明顯；皮下脂肪出血，心外膜脂肪黃染，胸腔和腹腔積液；心肌蒼白松軟，肺腫脹，充血水腫間質(zhì)增寬，胸腔和腹腔積液；肝臟腫大變性，質(zhì)地脆弱，部分區(qū)域呈淡黃或灰白色。膽囊腫大膽汁濃稠；脾臟腫大、質(zhì)軟脆，有暗紅色出血點出血；胃大彎水腫，胃底部出血，胃粘膜脫落，部分病例的結(jié)腸系膜水腫。腸粘膜出血，水腫，小腸壁變薄，腸粘膜脫落，部分腸道積液；腦膜充血、并有針尖狀出血點，腸系膜淋巴結(jié)腫大呈索狀；腎周圍脂肪及心冠脂肪呈淡黃色腎臟蒼白、水腫，包膜下有出血點； 膀胱積尿，尿液呈深黃色胃粘膜出血，水腫，膀胱粘膜有點狀出血；肌肉蒼白、水腫（圖 4-2）。

4.3 各種染色的比較觀察

豬附紅細胞體感染根據(jù)臨床癥狀病理變化并結(jié)合實驗室血液壓片、涂片染色等作出診斷。

血液壓片鏡檢目前是以觀察到紅細胞呈不規(guī)則形態(tài)即判斷為感染附紅細胞體。診斷時要注意，由于動物體內(nèi)血液生化、營養(yǎng)代謝，以及使用不同的生理鹽水作稀釋液等因素也會引

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

粒狀、小塊狀或彌漫均勻紅色。PAS反應(yīng)的陽性程度通常以強陽性、陽性、弱陽性和陰性來表示。紅細胞系列糖原含量程度標準（-）胞質(zhì)無顆粒（+）有少數(shù)紅色顆粒（++）有較粗紅色顆?；驈浡t色（+++）有粗大紅色顆?；蛏罴t色（++++）有粗大紅色塊狀或紫紅色。通過本次試驗可以看到，Goodpasture染色和PAS染色能很好的區(qū)別附紅細胞體及染色素雜質(zhì)，且操作簡便易行，能很有效的對豬附紅細胞體病做出診斷，適宜在生產(chǎn)實踐中加以推廣。

本研究豐富了豬附紅細胞體病形態(tài)學(xué)診斷方法。觀察了豬附紅細胞體在不同染色方法下呈現(xiàn)不同的顏色特性和檢出率，PAS 及 Goodpasture 方法檢出率較高，瑞氏染色最低。實踐中可根據(jù)不同條件、不同需要來選擇其中的一種或幾種方法進行染色。

豬附紅細胞體形態(tài)學(xué)診斷方法研究

致 謝

時光荏苒，我即將結(jié)束我的大學(xué)生活，邁向新的工作崗位。在我學(xué)習(xí)生活期間，老師們對我進行了無私的幫助和嚴格的教導(dǎo)，特別要向我的指導(dǎo)教師吉潔老師致以敬意。他以嚴謹?shù)膶W(xué)風(fēng)，廣博的知識，熱忱的態(tài)度贏得了廣大學(xué)生的尊敬。在我論文創(chuàng)作完成期間，他給予我莫大的幫助與鼓勵。

我還要向我學(xué)院其他教師致意，向曾經(jīng)傳授我知識的老師等表達我真誠的謝意，正是在您們的言傳身教下，我才得以成長、進步。

我還要向在我生活上關(guān)心我的父母表示感謝，正是他們給予我物質(zhì)與精神的支持，幫助我成長與進步。

第三篇：認識新型豬流感及防護方法

認識新型豬流感及防護方法

《宣導(dǎo)》新聞小辭典╱認識新型豬流感及防護方法

截止目前為止，墨西哥及美國西南地區(qū)爆發(fā)豬流感疫情爆發(fā)人感染豬流感疾情，已經(jīng)攀升到103人死亡，請各位親友注意，避免至疾區(qū)旅遊或至此出差、旅遊返臺者，注意自身健康及防護~

新聞小辭典╱新型豬流感(一)何謂豬流感？

A型流感病毒H1N1，墨西哥大流行為變種病毒，同時帶有豬流感、禽流感和人流感的基因，秋冬是它的好發(fā)季節(jié)，但全年都會傳染。(二)豬流感有何癥狀？

感染到豬流感，癥狀跟感冒非常類似，會發(fā)燒到38.5度以上，咳嗽、喉嚨痛，肌肉、關(guān)節(jié)和骨頭痠痛、疲勞、流鼻水、胸腹疼痛、噁心、腹瀉的情況，最後會出現(xiàn)嚴重的肺炎。(三)豬流感的致死率？

在墨西哥，致命率有6.7%，死亡病患大多是25到40歲的壯年人。(四)如何預(yù)防豬流感？

◎勤洗手

◎避免到人多的地方

◎不要跟他人一起吃一盤食物或一杯飲料(五)傳染方式

飛沫傳染如打噴嚏、咳嗽或身體接觸傳染，散播病毒。

已經(jīng)排除吃豬肉會傳染的可能，所以請大家放心囉。(六)疫區(qū)

墨西哥爆發(fā)的新型流感疫情之外，其他如美國，紐西蘭、法國、西班牙、加拿大及以色列、澳洲、蘇格蘭、哥倫比亞，都有疑似感染的病患出現(xiàn)。

(七)豬流感V.S一般流感 比一比

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Subject: 認識新型豬流感及防護方法

《宣導(dǎo)》新聞小辭典╱認識新型豬流感及防護方法

截止目前為止，墨西哥及美國西南地區(qū)爆發(fā)豬流感疫情爆發(fā)人感染豬流感疾情，已經(jīng)攀升到103人死亡，請各位親友注意，避免至疾區(qū)旅遊或至此出差、旅遊返臺者，注意自身健康及防護~

新聞小辭典╱新型豬流感(一)何謂豬流感？

A型流感病毒H1N1，墨西哥大流行為變種病毒，同時帶有豬流感、禽流感和人流感的基因，秋冬是它的好發(fā)季節(jié)，但全年都會傳染。(二)豬流感有何癥狀？

感染到豬流感，癥狀跟感冒非常類似，會發(fā)燒到38.5度以上，咳嗽、喉嚨痛，肌肉、關(guān)節(jié)和骨頭痠痛、疲勞、流鼻水、胸腹疼痛、噁心、腹瀉的情況，最後會出現(xiàn)嚴重的肺炎。(三)豬流感的致死率？

在墨西哥，致命率有6.7%，死亡病患大多是25到40歲的壯年人。(四)如何預(yù)防豬流感？ ◎勤洗手

◎避免到人多的地方

◎不要跟他人一起吃一盤食物或一杯飲料(五)傳染方式

飛沫傳染如打噴嚏、咳嗽或身體接觸傳染，散播病毒。

已經(jīng)排除吃豬肉會傳染的可能，所以請大家放心囉。(六)疫區(qū)

墨西哥爆發(fā)的新型流感疫情之外，其他如美國，紐西蘭、法國、西班牙、加拿大及以色列、澳洲、蘇格蘭、哥倫比亞，都有疑似感染的病患出現(xiàn)。

(七)豬流感V.S一般流感 比一比