第一篇：用玻璃紙瓊脂平板透析培養(yǎng)法觀察放線菌形態(tài)(附插片培養(yǎng)法)

用玻璃紙瓊脂平板透析培養(yǎng)法觀察放線菌形態(tài)（附插片培養(yǎng)法）

（一）目的：用放線菌的玻璃紙培養(yǎng)物觀察放線菌的個(gè)體形態(tài)

（二）原理：

放線菌自然生長的個(gè)體形態(tài)的觀察現(xiàn)多用玻璃紙瓊脂透析培養(yǎng)法。

玻璃紙具有半透膜特性，其透光性與載玻片基本相同，采用玻璃紙瓊脂平板透析培養(yǎng)，能使放線菌生長在玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取小片，貼放在載玻片上，用顯微鏡鏡檢可見到放線菌自然生長的個(gè)體形態(tài)。

采用插片培養(yǎng)法也能觀察放線菌的個(gè)體形態(tài)。

（三）器材：

1、活材料：培養(yǎng)5-7天的紫色直絲鏈霉菌（Streptomyces violaceorectus）的斜面菌種、吸水鏈霉菌5102（Streptomyces hygroscopicus var.Yingchengensis(5102)）斜面菌種。

2、培養(yǎng)基：高氏一號瓊脂培養(yǎng)基（見附錄

一、10）

器材：無菌平皿、玻璃紙、9ml無菌水若干支、酒精燈、火柴、接種環(huán)、鑷子、玻璃刮鏟、1ml無菌吸管、剪刀、載玻片、顯微鏡。

（四）方法：

（1）將玻璃紙剪成培養(yǎng)皿大小，用舊報(bào)紙隔層疊好后滅菌。（2）將放線菌斜面菌種制成10—3的孢子懸液。

（3）將高氏一號瓊脂培養(yǎng)基熔化后在火焰旁倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿倒15ml左右，待培養(yǎng)基凝固后，在無菌操作下用鑷子將無菌玻璃紙履蓋在瓊脂平板上即制成玻璃紙瓊脂平板培養(yǎng)基。

（4）分別用1ml無菌吸管取0.2ml吸水鏈霉菌（5102）孢子懸液，紫色直絲鏈霉菌孢子懸液分別滴加在兩個(gè)玻璃紙瓊脂平板培養(yǎng)基上，并用無菌玻璃刮鏟涂抹均勻。（5）將接種的玻璃紙瓊脂平板置28—30℃下培養(yǎng)。

（6）在培養(yǎng)至3天，5天，7天時(shí)，從溫室中取出平皿。在無菌環(huán)境下。打開培養(yǎng)皿，用無菌鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分離，用無菌剪刀取小片置于載玻片上用顯微鏡觀察。附：插片培養(yǎng)法：

放線菌的插片培養(yǎng)是將放線菌菌種制成孢子懸液后（濃度以10—2—10—3為好），取0.2ml放在適合放線菌生長的平板培養(yǎng)基上，用玻璃刮鏟涂布均勻，然后將滅過菌的蓋玻片斜插入固體培養(yǎng)基中，置28—32℃下培養(yǎng)，3—5天后取出蓋玻片放在載玻片上鏡檢，可見放線菌的自然生長的個(gè)體形態(tài)。