第一篇：微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告：水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的檢測

實(shí)驗(yàn)六 水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的檢測

摘 要：本實(shí)驗(yàn)以測定公園河流水的細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的數(shù)量，來測定特定地點(diǎn)的水質(zhì)情況。初步介紹了一種通用的方法來檢測水源的健康指標(biāo)，判定水體的質(zhì)量。對(duì)該實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的水源作出了定性的評(píng)價(jià)，以及關(guān)于試驗(yàn)中如何提高梯度重復(fù)的精度的分析。關(guān)鍵字：河流水；細(xì)菌總數(shù)測定；大腸菌群；EMB培養(yǎng)

前言

各種天然水中常含有一定數(shù)量的微生物。水中細(xì)菌總數(shù)往往同水體受有機(jī)污染程度呈正相關(guān)，因而是評(píng)價(jià)水質(zhì)污染程度的重要指標(biāo)之一。細(xì)菌總數(shù)是指1mL水樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)[cfu/g(mL)]，可用稀釋平板計(jì)數(shù)法檢測。水中大腸菌群的數(shù)量可用來判斷水源是否被糞便污染，并可間接推測水源受腸道病原菌污染的可能。

特征：G-無芽孢桿菌，兼性厭氧、在37℃24h內(nèi)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣。多管發(fā)酵法

初發(fā)酵：適當(dāng)稀釋樣品，乳糖發(fā)酵培養(yǎng)，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；

分離培養(yǎng)：伊紅美藍(lán)（EMB）平板上劃線分離，出現(xiàn)紫色、粉紅色特征性菌落； 復(fù)發(fā)酵驗(yàn)證：挑取特征性菌落進(jìn)行乳酸復(fù)發(fā)酵驗(yàn)證。

材料和方法

牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基：用于水中細(xì)菌總數(shù)測定

牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，瓊脂8g，蒸餾水1000ml； pH 7.0 乳糖膽鹽蛋白胨培養(yǎng)基：用于初發(fā)酵

1×：蛋白胨 20g、牛膽鹽 5g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL（調(diào)pH值后加）、水

1000mL、pH 7.2－7.4 三倍濃縮液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量

分裝：1×的培養(yǎng)基分裝9ml/管，3×的培養(yǎng)基分裝5ml/管或50ml/瓶，均裝上德漢氏小管。滅菌條件：115℃，15min。

EMB培養(yǎng)基：用于大腸菌群菌落鑒定

脫水培養(yǎng)基，按說明書操作，水用量為90%。水源：紫竹院河水

儀器： 高壓滅菌鍋、無菌培養(yǎng)皿、試管、吸管、接種環(huán)、德漢氏小管、溫箱、載玻片、酒精燈、顯微鏡等。

試劑 ： 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂粉，伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、膽鹽、革藍(lán)氏染色試劑

具體實(shí)驗(yàn)步驟： 1），相關(guān)器械的滅菌操作，以及前往紫竹院取少量的樣品水。2），按照上述的配料，無菌操作配置培養(yǎng)基。

-1-2-33），細(xì)菌總數(shù)的測定：取上述樣品水，一次稀釋10,10,10,3個(gè)濃度。對(duì)于每個(gè)濃度，取1ml稀釋液加入冷卻好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，立即混勻，每個(gè)濃度重復(fù)一次。將平皿倒置培養(yǎng)在37℃的溫箱24h，計(jì)算平皿的細(xì)菌總數(shù)。4），大腸菌群的測定：將樣品水稀釋成10,10,10,3個(gè)梯度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析 1，細(xì)菌菌落總數(shù)

稀釋濃度及菌落數(shù)

組別 1 2平均 10 12 4 8-1-2-30-1-

210 0 0 0 0 0 0

平板菌落狀況 報(bào)告方式選取 最低稀釋度下菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù)

菌落總數(shù)（cfug , cfu/ml

均小于30

8.0×10

2,大腸菌群總數(shù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果 產(chǎn)酸 產(chǎn)氣 紫黑色

EMB 粉紅色

革蘭-G 氏染

色

結(jié)論 陽性管數(shù) 初發(fā)酵 + + + 原溶液 + + + + + +

+ + +

+ + +

+ + + +

+

+

+ + +

+

0

0

3，EMB 數(shù)據(jù)值計(jì)算 查表可得，MPN=MPN指數(shù)?10ml

接種量最大的一管的水樣ml接種量最大的管：1ml

每100ml水樣中菌數(shù)最大可能值：230

95%可信限值

上限：700

下限：70 水樣的分析得出這樣的結(jié)果：細(xì)菌總數(shù)：80個(gè)/mL

大腸菌群數(shù)：2300個(gè)/L

大腸菌群數(shù)占細(xì)菌總數(shù)：2.88%。

根據(jù)我國《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB5749-85規(guī)定 細(xì)菌總數(shù)不超過100個(gè)，已達(dá)標(biāo)。大腸菌群不得超過1000個(gè)，超標(biāo)。

經(jīng)過嚴(yán)格的消毒處理，大腸桿菌不超過10000個(gè)，水樣達(dá)標(biāo)。

結(jié)論：從上述的水樣分析，我們可以得出此處的河流水污染不是很嚴(yán)重，作為景觀水，已經(jīng)達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)，但是此類水是不能作為飲用水的，可能存在一些糞便的污染，導(dǎo)致大腸菌群的數(shù)量過高，倘若經(jīng)過嚴(yán)格的消毒滅菌，才能飲用。

實(shí)驗(yàn)討論：

1，大腸菌群的定義是什么？、為什么要選擇大腸菌群作為水源被腸道病原菌污染的指示菌？

大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。而由于大腸菌群分布較廣，在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在。大量的調(diào)查研究表明，大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血?jiǎng)游锛S便、人類經(jīng)?；顒?dòng)的場所以及有糞便污染的地方，而且人、畜糞便對(duì)外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對(duì)人體健康危害性的大小。糞便是人類腸道排泄物，其中有健康人糞便，也有腸道患者或帶菌者的糞便，所以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外，同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在（如沙門氏菌、志賀氏菌等），因而食品中有糞便污染，則可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著食物中毒和流行病的威脅，必須看作對(duì)人體健康具有潛在的危險(xiǎn)性。所以大腸菌群是評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，目前已被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。

2，EMB培養(yǎng)基含有哪幾種主要成分？在檢查大腸菌群時(shí)，各起什么作用？

EMB培養(yǎng)基主要包含以下幾種物質(zhì)：蛋白胨，乳糖，蔗糖，磷酸二氫鉀，伊紅Y，美藍(lán)，蒸餾水。EMB培養(yǎng)基的機(jī)制就是靠微生物在發(fā)酵過程中，使培養(yǎng)基發(fā)生分解，產(chǎn)生大量的氫離子，從而改變培養(yǎng)基的PH，由于提前添加的指示劑，在PH值的改變下，就會(huì)發(fā)生顏色的變化，從而鑒定生長的菌種。在檢測大腸菌群的時(shí)候，蛋白胨提供了氮源，磷酸二氫鉀提供了磷元素和鉀元素，實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意的問題以及改進(jìn)： 1，樣品的問題

由于本實(shí)驗(yàn)是一個(gè)檢測的實(shí)驗(yàn)，存在一個(gè)嚴(yán)格滅菌的過程。從采樣，到最后的分析，整個(gè)過程不僅不能讓其他雜菌污染，而且還得保證樣品中本身細(xì)菌的總數(shù)基本不損失。1），采樣的器械必須是經(jīng)過嚴(yán)格滅菌的，而且其本身的構(gòu)造不會(huì)對(duì)微生物的生存造成威脅。2），由于樣品會(huì)處于密閉的過程，水中的含氧量會(huì)慢慢降低，所以對(duì)樣品的處理應(yīng)該盡快處理。3），對(duì)于樣品的稀釋不應(yīng)該用蒸餾水，而應(yīng)該用滅菌的生理鹽水，防止細(xì)菌吸水裂解死亡。4），整個(gè)接種的操作必須正確，不能殺死細(xì)菌，或者引入其他雜菌。2，關(guān)于梯度重復(fù)的問題

本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到一個(gè)很關(guān)鍵的問題，那就是梯度重復(fù)。對(duì)于一個(gè)梯度的實(shí)驗(yàn)量的統(tǒng)計(jì)和處理，我們常常采用重復(fù)，來解決其實(shí)驗(yàn)誤差所造成的影響，但有些時(shí)候重復(fù)增加了大量的工作量，卻沒有根本提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，僅以本實(shí)驗(yàn)為例。在對(duì)細(xì)菌數(shù)量測定時(shí)候，我們每個(gè)梯度設(shè)置了2個(gè)重復(fù)，在事實(shí)上，第一個(gè)梯度的準(zhǔn)確性很高，但是在最后一個(gè)梯度，可能存在很大的誤差。在對(duì)一個(gè)樣品進(jìn)行定量分析的時(shí)候，我們往往要考慮很多干擾它的因數(shù)。假定我們所取的樣品現(xiàn)在要進(jìn)行一個(gè)梯度的稀釋后取樣，當(dāng)前濃度為c，取樣的體積為v，那么假定單位體積內(nèi)只存在一個(gè)細(xì)菌，則可以建立如下的數(shù)學(xué)模型：

w??xni?xnxaix?cv,xi?x?aip,ai?p?kcvcv?cv?

?k?a??i???vc?n?從模型中，我們可以得到最終的表達(dá)式：w?,ai?nvcai??vc??，當(dāng)取樣體積和梯度恒定的時(shí)候，我們不難發(fā)現(xiàn)，增大取樣的重復(fù)數(shù)，可以提高實(shí)驗(yàn)的精確度，但是當(dāng)c足夠大的時(shí)候，分子本身就會(huì)變得無限小，而分母的一次增量遠(yuǎn)不如多次的。同理，當(dāng)c很小的時(shí)候，分子變得很大，分母變得很小，這個(gè)時(shí)候不增加次數(shù)，或者調(diào)解取樣體積，會(huì)造成很高的實(shí)驗(yàn)誤差，所以，本實(shí)驗(yàn)的三個(gè)精度變量就是梯度，取樣體積，梯度重復(fù)數(shù)。鑒于對(duì)本實(shí)驗(yàn)的最后分析，我們覺得，在后兩個(gè)梯度有必要增加重復(fù)數(shù)，雖然增加了工作量，但是可以有效避免較大的實(shí)驗(yàn)誤差帶來的干擾。同樣，在對(duì)其他的實(shí)驗(yàn)樣品處理過程中，原始濃度一般只需要2個(gè)重復(fù)，隨著數(shù)量級(jí)的增加，其重復(fù)的次數(shù)也應(yīng)該發(fā)生變化，不應(yīng)該不-3-5變，諸如在在10，設(shè)置4個(gè)重復(fù)，而10時(shí)候，可以設(shè)置8個(gè)重復(fù)，這樣可以在追求最簡工作量的時(shí)候，獲得最簡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王玉蘭.環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù).北京，化學(xué)工業(yè)出版社.2009,3.[2] 陳堅(jiān).環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008 [3] 錢存柔.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程（第二版）.北京：北京大學(xué)出版社，2008 [4] 周德慶.微生物學(xué)教程（第二版）.北京：高等教育出版社，2002,5.[5] 沈萍.微生物學(xué).北京：高等教育出版社，2000.[6] 徐全智，楊晉浩.數(shù)學(xué)建模（第二版）.北京：高等教育出版社，2008.

第二篇：臨床微生物標(biāo)本檢測和細(xì)菌耐藥監(jiān)測

紅河州第四人民醫(yī)院

臨床微生物標(biāo)本檢測和細(xì)菌耐藥監(jiān)測制度

1.根據(jù)臨床微生物標(biāo)本檢測結(jié)果合理選用抗菌藥物，接受抗菌藥物治療住院患者微生物檢驗(yàn)樣本送檢率不低于30%(相關(guān)指標(biāo)計(jì)算方式見附件5)。

2.感染管理部門應(yīng)對(duì)本院細(xì)菌耐藥情況進(jìn)行監(jiān)測，每三個(gè)月定期分析、評(píng)估監(jiān)測數(shù)據(jù)并發(fā)布相關(guān)信息，提出干預(yù)和改進(jìn)措施，建立細(xì)菌耐藥預(yù)警機(jī)制，配合醫(yī)務(wù)部門監(jiān)督實(shí)施。

3.醫(yī)療機(jī)構(gòu)抗菌藥物管理工作組針對(duì)不同的細(xì)菌耐藥水平必須采取相應(yīng)應(yīng)對(duì)措施。

(1)對(duì)主要目標(biāo)細(xì)菌耐藥率超過30％的抗菌藥物，及時(shí)將預(yù)警信息通報(bào)醫(yī)務(wù)人員。

(2)對(duì)主要目標(biāo)細(xì)菌耐藥率超過40％的抗菌藥物，慎重經(jīng)驗(yàn)用藥。(3)對(duì)主要目標(biāo)細(xì)菌耐藥率超過50％的抗菌藥物，參照藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用。

(4)對(duì)主要目標(biāo)細(xì)菌耐藥率超過75％的抗菌藥物，暫停臨床應(yīng)用，根據(jù)追蹤細(xì)菌耐藥監(jiān)測結(jié)果，再?zèng)Q定是否恢復(fù)臨床應(yīng)用。

4.抗菌藥物管理工作組按照要求向全國抗菌藥物臨床應(yīng)用監(jiān)測網(wǎng)報(bào)送抗菌藥物臨床應(yīng)用相關(guān)數(shù)據(jù)信息，向全國細(xì)菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)報(bào)送耐藥菌分布和耐藥情況等相關(guān)信息。

5.藥事管理委員會(huì)應(yīng)根據(jù)本院微生物培養(yǎng)、藥敏情況，定期進(jìn)行抗菌藥物淘汰或篩選，定期對(duì)抗菌藥物目錄進(jìn)行調(diào)整。

紅河州第四人民醫(yī)院藥事管理委員會(huì)、藥劑科

2011年7月1日

第三篇：環(huán)境中微生物的檢測和分離純化實(shí)驗(yàn)報(bào)告

環(huán)境中微生物的檢測和分離純化

一． 實(shí)驗(yàn)原理

1.微生物的分離與純化

土壤中含有豐富的微生物，可以從中分離純化得到很多有價(jià)值的菌株。

微生物常用的分離方法是平板分離法，根據(jù)某種微生物對(duì)生長條件的不同要求供給它適宜的培養(yǎng)環(huán)境，再用稀釋涂布平板法或稀釋后平板劃線分離，純化該微生物，直到得到純菌株。

2.平板菌落計(jì)數(shù)法

將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中含的菌落數(shù)。

二． 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

1.土壤稀釋溶液

2.取液器（1000ml 1支），培養(yǎng)箱，培養(yǎng)皿（12個(gè)），無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環(huán)，1000ml無菌吸頭若干，記號(hào)筆，酒精燈，火柴，試管架。

三． 實(shí)驗(yàn)步驟

（一）.無菌平板制備

1.采用疊皿法把牛肉凍蛋白膏培養(yǎng)基倒入滅好菌的培養(yǎng)皿中，制作無菌平板

（二）.周圍環(huán)境中微生物的檢測

2.取一平板，分成6個(gè)區(qū)，做好標(biāo)記。同一個(gè)人同一根手指頭按如下要求用力一致進(jìn)行操作：分別用未洗過的手指頭，自來水打濕的手指頭，自來水認(rèn)真洗過的手指頭，洗手液洗過一遍的手指頭，洗過兩遍的，洗手液洗過又用酒精棉球消毒后的手指頭 在六個(gè)區(qū)上涂抹。（平板1）

3.取一平板，分區(qū)，分別用使用過的紙巾，硬幣，舊紙幣，餐卡在不同區(qū)拖動(dòng)。（平板2）

4.在培養(yǎng)基上方抖動(dòng)頭發(fā)數(shù)次。（平板3）

5.取一平板，分區(qū)，用無菌接種環(huán)分別蘸一滴自來水，河水，豆?jié){在不同區(qū)劃線。（平板4）

6.用無菌牙簽取一點(diǎn)牙垢在培養(yǎng)基上劃線。（平板5）

7.取兩個(gè)平板，一個(gè)打開在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放置30分鐘，另一個(gè)在酒精燈火焰邊打開皿蓋1分鐘。（平板6）

8.取一平板，打開蓋，咳幾下。（平板7）

（三）.從土壤中分離微生物

1.采土樣

2.制備土壤稀溶液

3.涂布

吸取100ml稀釋好的土壤稀溶液，較均勻地滴在平板上，再用無菌涂棒涂布均勻，涂1—2分鐘

4.培養(yǎng)

將培養(yǎng)基平板倒置于37℃下培養(yǎng)24小時(shí)

5.菌落計(jì)數(shù)

四．實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.平板1：從未洗到用酒精消毒總體趨勢是菌落數(shù)越來越少，用自來水洗過和用洗手液洗過一遍的菌落數(shù)差不多；

平板2：舊紙幣和硬幣的菌落數(shù)要多；

平板3：抖頭發(fā)的地方附近長出許多菌落；

平板4：自來水菌落最多，其次是河水，河水的菌落分布成“?！弊中?，和當(dāng)時(shí)劃線的形狀一樣，再其次是豆?jié){；

平板5：劃線的地方長出許多菌落；

平板6：放在試驗(yàn)臺(tái)上的平板長出各種形狀的菌斑菌塊，在酒精燈旁的基本沒有菌落；平板7：咳幾下的基本沒有菌落。

2.三張平板均被大片菌苔完全覆蓋，無法計(jì)數(shù)。

五． 實(shí)驗(yàn)討論

1.有關(guān)洗手液我了解到大部分洗手液都只有殺菌而沒有除垢作用，因?yàn)槠渲泻?0%到

70%的酒精，酒精含量低于60%，殺菌效果會(huì)很差，我們用的洗手液可能是酒精含量偏低，所以只用洗手液洗手是不夠的。最好的洗手方法是，先用肥皂洗手去除污垢，再使用洗手液殺菌潤膚。錢上有很多細(xì)菌，少接觸，勤洗手。經(jīng)查閱有關(guān)資料我了解到，牙垢中的細(xì)菌主要是正常口腔內(nèi)存在的鏈球菌、厭氧菌等。牙垢堆積到一定厚度之后，其內(nèi)部緊挨牙齒表面的細(xì)菌因?yàn)榕c空氣隔絕開始轉(zhuǎn)入無氧呼吸。無氧呼吸在此處產(chǎn)生的酸不能及時(shí)被唾液沖走，因此會(huì)腐蝕琺瑯質(zhì)中的礦物成分，并進(jìn)一步促進(jìn)齲齒的形成。在牙根處堆積的牙垢也會(huì)刺激牙齦，導(dǎo)致牙周炎等牙周疾病。所以要飯后刷牙?？諝庵杏卸喾N多樣的細(xì)菌?？葞紫聸]有細(xì)菌的原因可能是沒有使口腔中噴出的氣流或飛沫落到培養(yǎng)基上。

2.第二個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗的原因可能是滴加的溶液過多，或是取液位置不對(duì)細(xì)菌濃度很大

第四篇：6.4.1檢測不同環(huán)境中的細(xì)菌和真菌實(shí)驗(yàn)報(bào)告

初中生物實(shí)驗(yàn)操作

（學(xué)生用）

檢測不同環(huán)境中的細(xì)菌和真菌（探究）

班級(jí)：______ 組別：______ 姓名：____________ 日期：______ 〔目的要求〕:

1.嘗試細(xì)菌、真菌的采樣（接種）和一般培養(yǎng)方法 2.認(rèn)識(shí)細(xì)菌和真菌的菌落 〔材料用具〕: 裝有牛肉汁培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿（已經(jīng)高溫滅菌）、無菌棉棒、透明膠帶、標(biāo)簽紙、放大鏡 〔實(shí)驗(yàn)要求〕: 1.清點(diǎn)實(shí)驗(yàn)器材。

2.在標(biāo)簽紙上標(biāo)出組別、實(shí)驗(yàn)日期、編號(hào)（1號(hào)或2號(hào)），貼在培養(yǎng)皿底面。

3.接種：可選用以下方法

①將培養(yǎng)皿蓋從一側(cè)掀開一條縫隙，用未洗過的手指在培養(yǎng)基上按10秒；

②將培養(yǎng)皿蓋從一側(cè)掀開一條縫隙，用肥皂洗過的手指（不用毛巾擦）在培養(yǎng)基上按10秒；

③將培養(yǎng)皿蓋從一側(cè)掀開一條縫隙，將硬幣或筆帽或一次性衛(wèi)生筷子或飯勺等輕放在培養(yǎng)基上10秒；

④將培養(yǎng)皿蓋從一側(cè)掀開一條縫隙，將頭發(fā)放在培養(yǎng)基上； ⑤打開培養(yǎng)皿蓋，放在實(shí)驗(yàn)室或走廊、操場10分鐘 ⑥用無菌棉簽蘸取飲水機(jī)里的水，涂抹在培養(yǎng)基上；

4.將另一套高溫滅菌后、沒有打開的培養(yǎng)皿不做處理，作為對(duì)照。5.將培養(yǎng)皿放入恒溫箱中進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。6.五天至七天后，用放大鏡觀察出現(xiàn)的菌落。7.將污物倒進(jìn)污物桶，清理實(shí)驗(yàn)器材。

提示：在沒有想好如何工作之前，不能打開培養(yǎng)皿。

實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與結(jié)論：細(xì)菌和真菌的生存需要一定的條件，如水分、適宜的溫度、有機(jī)物等。

第五篇：水及食品中微生物的檢測(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)

水及食品中微生物的檢測

××××××××××

食品微生物檢驗(yàn)方法為食品監(jiān)測必不可少的重要組成部分。它不僅是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是判定被檢食品能否食用的科學(xué)依據(jù)之一。通過食品微生物檢驗(yàn)，可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生環(huán)境,能夠?qū)κ称繁患?xì)菌污染的程度作出正確的評(píng)價(jià)，為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù),提供傳染病和人類，動(dòng)物和食物中毒的防治措施[1]。食品微生物檢驗(yàn)是以貫徹“預(yù)防為主”的衛(wèi)生方針，可以有效地防止或者減少食物中毒人畜共患病的發(fā)生，保障人民的身體健康；同時(shí)，它對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量，避免經(jīng)濟(jì)損失，保證出口等方面具有政治上和經(jīng)濟(jì)上的重要意義。

水是食品生產(chǎn)中的重要原料，必須符合飲用水的標(biāo)準(zhǔn)、水是否合乎標(biāo)準(zhǔn)，除需對(duì)其感官質(zhì)量、放射性物質(zhì)、與健康有關(guān)的無機(jī)成分等進(jìn)行分析測定外，還必須對(duì)微生物進(jìn)行檢測。通常通過水中細(xì)菌總數(shù)和大腸桿菌群數(shù)來確定水的衛(wèi)生質(zhì)量，如果水源被糞便污染，則有可能也被腸道病原菌污染而引起傷寒、痢疾、霍亂等腸道疾病的流行，但腸道病原菌在水中數(shù)量較少，又容易變異死亡。因此，從水中特別是自來水中分離病原菌有困難。而大腸桿菌是腸道好氧菌中最普遍和數(shù)量最多的一種，所以，常將其作為糞便污染的標(biāo)志，即根據(jù)水中大腸桿菌的數(shù)目來判斷水源是否被污染，并間接測水源受腸道病原菌污染的可能性。一般規(guī)定，1ml自來水總的總菌數(shù)不得超過100個(gè)；每1000ml自來水中大腸菌群不超過3個(gè)。同樣，細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)也是大多數(shù)食品微生物指標(biāo)中的兩項(xiàng)指標(biāo)，只是數(shù)量要求隨不同的食品而異。

細(xì)菌總數(shù)是指被檢樣品經(jīng)過處理（如剪碎、研勻），在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。由于一個(gè)活細(xì)胞能形成一個(gè)菌落，因此，菌落就是待測樣品所含的活菌數(shù)。由于每種細(xì)菌都有一定的生理要求（如對(duì)氧、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基的pH等），所以，培養(yǎng)時(shí)應(yīng)該用不同的培養(yǎng)條件及不同的生理?xiàng)l件去滿足其要求，才能將各種細(xì)菌都培養(yǎng)出來。但在實(shí)際工作中，一般都只用一種常用的方法去作細(xì)菌菌落總數(shù)的測定，所得結(jié)果指包括一群能在牛肉膏蛋白胨瓊脂上或其他培養(yǎng)基上生長的嗜中溫性需氧菌的菌落總數(shù)。本實(shí)驗(yàn)通過取樣對(duì)自來水和黃酒中的微生物進(jìn)行了檢測，以期了解該兩樣樣品中微生物含量是否符合飲用標(biāo)準(zhǔn)，并熟悉水及食品中微生物的檢測方法。

食品在食用前的各個(gè)環(huán)節(jié)中，被微生物污染往往是不可避免的。評(píng)價(jià)食品被微生物污染的程度，要采用微生物檢驗(yàn)指標(biāo)采進(jìn)行。常采用的微生物檢驗(yàn)指標(biāo)為三項(xiàng)細(xì)菌指標(biāo)，即細(xì)菌

數(shù)量(主要是菌落總數(shù))、大腸菌群最近似數(shù)（MPN）和致病菌[2]。

1.材料與方法

1.1材料

湖水、黃酒

1.2培養(yǎng)基

肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基；乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基；伊紅美藍(lán)固體培養(yǎng)基；乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基；

1.3儀器

恒溫培養(yǎng)箱（溫州康鼎凈化工程有限公司）；超凈工作臺(tái)（蘇州宏瑞凈化科技有限公司）；蒸汽式高壓滅菌鍋（諸城市永泰機(jī)械有限公司）。

1.4細(xì)菌總數(shù)的測定

1.4.1采樣

瓶裝發(fā)酵酒的取樣：用點(diǎn)燃的酒精棉球灼燒瓶口滅菌，用石炭酸紗布蓋好，再用滅菌開瓶器將瓶啟開，倒入500ml滅菌磨口瓶中，覆蓋一滅菌紗布，輕輕震蕩使氣體逸出，待檢。

湖水的取樣：將無菌帶玻璃塞的廣口瓶浸入離湖面10-15cm水下，盛滿后將瓶口蓋好，再從水中取出，待檢或保存于4℃冰箱保存。1.4.2檢樣稀釋

將1ml待測液加入含9ml無菌水的試管中，制成10-1稀釋液，再吸取1ml稀釋液加入到含含9ml無菌水的試管中，制成10-2稀釋液，同法，配制稀釋度為10-

3、10-

4、10-5的稀釋液。1.4.3傾注培養(yǎng)

選擇10-4和10-5兩個(gè)稀釋液，分別取1ml于平皿內(nèi)，及時(shí)倒入約45℃肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基約15ml，搖動(dòng)混勻，待凝固后將平皿倒置于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h后取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落總數(shù)。

1.5大腸菌群檢驗(yàn)

1.5.1 檢樣稀釋

將1ml待測液加入含9ml無菌水的試管中，制成10-1稀釋液，再吸取1ml稀釋液加入到含含9ml無菌水的試管中，制成10-2稀釋液。1.5.2乳糖膽鹽發(fā)酵

分別取1、10-

1、10-2稀釋液1ml注入乳糖膽鹽發(fā)酵管，每個(gè)稀釋度接種3管，于36±1℃的恒溫箱里倒置培養(yǎng)24±2h，如乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)氣則可報(bào)告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。1.5.3分離培養(yǎng)

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36±1℃恒溫箱倒置培養(yǎng)18-24h。觀察菌落形態(tài)，做革蘭氏染色和復(fù)發(fā)酵證實(shí)實(shí)驗(yàn)。1.5.4復(fù)發(fā)酵證實(shí)實(shí)驗(yàn)

在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上挑?。孩僮霞t色，具有金屬光澤的菌落；②深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；③淡紅色，中心較深的菌落。具有以上特征的菌落均為可疑大腸桿群菌落，挑取1-2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)對(duì)應(yīng)接種到乳糖發(fā)酵管內(nèi)進(jìn)行復(fù)發(fā)酵，于36±1℃的恒溫箱倒置培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡在乳糖發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽性；如不產(chǎn)氣或革蘭氏陽性，則可報(bào)告大腸軍群陰性。

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)菌總數(shù)

表1 湖水的細(xì)菌總數(shù)測定結(jié)果

樣品 1 2平均菌落數(shù) 菌落總數(shù)（個(gè)/ml)

取湖水、黃酒稀釋度為10-4和10-5的稀釋液于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi)混合培養(yǎng)，每一稀釋度2個(gè)平板。將平皿倒置于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h后取出，采用肉眼直接觀察計(jì)數(shù)各平板的菌落數(shù)，并計(jì)算兩者的菌落數(shù)，結(jié)果如表1所示。

由表可知湖水的細(xì)菌含量為1.25*105個(gè)/ml，比黃酒的細(xì)菌含量高。查閱資料得，1ml自來水的總菌數(shù)不得超過100個(gè)，本實(shí)驗(yàn)所測的樣品湖水和黃酒中的菌落總數(shù)均超過100個(gè)，所以細(xì)菌都超標(biāo)，不符合安全標(biāo)準(zhǔn)。

湖水10-4 12 13 12.5

1.3×105

湖水10-55 5

黃酒10-4

0 0 0

<1×104

黃酒10-5

0 0 0

2.2大腸菌群檢驗(yàn)結(jié)果

表2 湖水及黃酒的大腸菌群檢驗(yàn)的結(jié)果

伊紅美籃平板上

稀釋度 管號(hào) 乳糖膽鹽發(fā)酵

有無可疑菌落

1003 1

10-13 1

10-23

分別取黃酒和湖水1、10-

1、10-2稀釋液1ml注入乳糖膽鹽發(fā)酵管，每個(gè)稀釋度接種3管，進(jìn)行乳糖膽鹽發(fā)酵的實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如表2所示。湖水的三個(gè)稀釋度的九只試管中大腸菌群均為陽性，即都含有大腸桿菌。而黃酒的三個(gè)稀釋度的九只試管中大腸菌群均為陰性。查MPN檢索表可得出每100ml湖水中大腸菌群最可能數(shù)>2400個(gè)，每100ml黃酒中大腸菌群最可能數(shù)<30個(gè)。這表明了湖水中大腸桿菌含量較高，而黃酒中大腸桿菌含量較低。

無氣泡

無

紅色

無氣泡 大腸桿菌群陰性

無氣泡

無

紅色

無氣泡 大腸桿菌群陰性

無氣泡

無

紅色

無氣泡 大腸桿菌群陰性

革蘭氏染色 復(fù)發(fā)酵

結(jié)論

3討論

食品中的微生物有許多種類，有的可導(dǎo)致人類產(chǎn)生疾病，有的對(duì)人類無害，也有的可產(chǎn)生一些不能令人忽視的代謝產(chǎn)物，因此食品中的微生物，尤其是一些致病微生物常常是作為人類是否能夠食用該食品的重要指標(biāo)。特別是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，可導(dǎo)致人類感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物對(duì)人類的威脅越來越大。在食品生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷售等各個(gè)環(huán)節(jié)中都有污染致病微生物的可能。一旦污染，微生物將大量繁殖而引起食品腐敗變質(zhì)，或?qū)е率吃葱愿腥竞褪澄镏卸?，?duì)人們的危害極大，快速檢驗(yàn)方法是社會(huì)的迫切需要。

參考文獻(xiàn) ：

[1] 龍夫.食品微生物快速檢測技術(shù)動(dòng)向[J].食品安全, 2004, 6:55-56

[2] 陳慶森, 馮永強(qiáng).食品中致病菌的快速檢測技術(shù)的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].食品科學(xué), 2003, 24(11): 148-152