第一篇：近代生物學(xué)發(fā)展史結(jié)課論文-基因組測(cè)序,干細(xì)胞基因工程與未來(lái)人類(lèi)社會(huì)

基因組測(cè)序，干細(xì)胞基因工程與未來(lái)人類(lèi)社會(huì)

基因組測(cè)序是對(duì)某個(gè)物種基因組核酸序列的測(cè)定，最終要確定該物種全基因組核酸的序列。

基因工程又稱基因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來(lái)源的基因(DNA分子)，按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品?；蚬こ碳夹g(shù)為基因的結(jié)構(gòu)和功能的研究提供了有力的手段。

基因工程是生物工程的一個(gè)重要分支，它和細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程和微生物工程共同組成了生物工程。所謂基因工程（genetic engineering)是在分子水平上對(duì)基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技術(shù)，是將外源基因通過(guò)體外重組后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使這個(gè)基因能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)的操作。它是用人為的方法將所需要的某一供體生物的遺傳物質(zhì)——DNA大分子提取出來(lái)，在離體條件下用適當(dāng)?shù)墓ぞ呙高M(jìn)行切割后，把它與作為載體的DNA分子連接起來(lái)，然后與載體一起導(dǎo)入某一更易生長(zhǎng)、繁殖的受體細(xì)胞中，以讓外源物質(zhì)在其中“安家落戶”，進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá)，從而獲得新物種的一種嶄新技術(shù)。健康一直以來(lái)就是全球問(wèn)題之一，這一問(wèn)題可以用從基因組學(xué)出發(fā)的健康和疾病的研究成果來(lái)改變。社會(huì)和其他的環(huán)境因素是產(chǎn)生這些健康狀況差別的主要原因；事實(shí)上，一些人會(huì)對(duì)遺傳因子是否扮演重要角色提出疑問(wèn)。但是有些與疾病關(guān)聯(lián)的變異在不同人種間出現(xiàn)的頻率不同應(yīng)該是導(dǎo)致健康狀況的某些不一致的原因，所以綜合考慮這些信息來(lái)預(yù)防和/或建立公共衛(wèi)生戰(zhàn)略將是有益的。我們必須研究基因組學(xué)和健康狀況差異的關(guān)系，嚴(yán)格評(píng)價(jià)社會(huì)經(jīng)濟(jì)學(xué)狀態(tài)、文化、辨別力、衛(wèi)生行為、飲食、環(huán)境狀況和遺傳對(duì)其的不同影響。

在21世紀(jì)的過(guò)去現(xiàn)在和未來(lái)，糧食問(wèn)題依然是人類(lèi)社會(huì)面臨的一大問(wèn)題，基因工程引發(fā)了一場(chǎng)新的綠色革命，利用基因技術(shù)，農(nóng)業(yè)的生產(chǎn)效率獲得了全面提升。利用基因試驗(yàn)技術(shù)，制成與光合作用有關(guān)的增強(qiáng)基因，培育收獲率高的農(nóng)作物，成倍提高糧食產(chǎn)量；除農(nóng)業(yè)外，畜牧業(yè)、漁業(yè)也發(fā)生了革命性變革，利用基因技術(shù)促進(jìn)家畜的生長(zhǎng)速度，并通過(guò)改變它們機(jī)體的成分，進(jìn)而改變家畜的脂肪與瘦肉的比例，甚至制造攜帶人類(lèi)基因并產(chǎn)生具有治療潛力的家畜。

一、基因工程在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用

基因工程的一個(gè)重要目的是使外源目的基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)，進(jìn)行生物合成，以獲得所需要的具有生物活性的蛋白質(zhì)及多肽產(chǎn)物。

1、發(fā)酵工業(yè)：用大腸桿菌生物人的生長(zhǎng)激素釋放抑制因子是第一個(gè)成功的實(shí)例。這是把人工合成的基因連接到小型多拷貝質(zhì)粒pBR322上，并利用乳糖操縱子β-半乳糖苷酶基因的高效率啟動(dòng)子，構(gòu)成雜種質(zhì)粒而實(shí)現(xiàn)的。在9升細(xì)菌培養(yǎng)液中這種激素的產(chǎn)量等于大約50萬(wàn)頭羊的腦中提取得到的量。除此之外，胰島素、人的生長(zhǎng)激素、人的胸腺激素α-

1、人的干擾素、牛的生長(zhǎng)激素，都可以應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)。藥物60多種。還有些很重要的基因，如纖維素酶的基因，也已在大腸桿菌中克隆和表達(dá)。利用遺傳工程手段還可以提高微生物本身所產(chǎn)生的酶的產(chǎn)量。如可以把大腸桿菌連接酶的產(chǎn)量提高500倍。

2、轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物 植物基因工程在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用發(fā)展迅速，從1996~2001年，在短短的5年中，全世界轉(zhuǎn)基因作物的種植面積就增長(zhǎng)了30倍。我國(guó)轉(zhuǎn)基因作物的種植面積也迅速增長(zhǎng)，目前已位居世界第四。主要用于提高農(nóng)作物的抗逆能力，（如抗除草劑、除蟲(chóng)、抗病、抗干旱和抗鹽堿等），以及改良農(nóng)作物的平治和利用植物生產(chǎn)藥物等方面。

動(dòng)物基因工程是在20世紀(jì)80年代開(kāi)始發(fā)展起來(lái)的，主要用于提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)、生產(chǎn)藥物和用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體。以下是幾點(diǎn)實(shí)例：

a．豆科植物固氮的功能涉及17個(gè)基因，分屬于7個(gè)操縱子，現(xiàn)在已能把它們?nèi)恳虢湍妇?，而且能正常?fù)制，得到基因的產(chǎn)物蛋白質(zhì)多肽，但不具備生物活性。

b．改造玉米胚乳蛋白質(zhì)而使人畜營(yíng)養(yǎng)必須的賴氨酸和色氨酸成分增加的工作也正在著手進(jìn)行。

c．1983．把豆類(lèi)的蛋白質(zhì)基因引入了向日葵，培育出“向日豆”。還將動(dòng)物蛋白基因轉(zhuǎn)移給了馬鈴薯，希望培育出“肉薯”。

d．第二代遺傳工程：基因定位致突變。主要是用定位致變或人工合成基因的方法。通過(guò)改變編碼蛋白質(zhì)基因中的DNA堿基次序，以達(dá)到定向改造蛋白質(zhì)的性質(zhì)，或創(chuàng)造出完全新型的蛋白質(zhì)。

二、基因組測(cè)序、干細(xì)胞基因工程在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用

1．基因治療和基因診斷

基因治療是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療繼斌的目的。如對(duì)細(xì)胞癌變?cè)淼难芯浚湟粋€(gè)重大突破是發(fā)現(xiàn)了原癌基因。人體基因分離，移植以及在整體動(dòng)物中的表達(dá)技術(shù)日趨成熟，使得基因治療研究的方法漸臻完善。已有報(bào)導(dǎo)，用帶有正?；虻臒o(wú)害病毒在體外導(dǎo)入病人的骨髓細(xì)胞;再將這種帶有重組正常的骨髓細(xì)胞送回患者體內(nèi)，從而治療某些酶缺陷造成的遺傳疾病?；蛑委煼椒ㄟ€在探索之中，而現(xiàn)在切實(shí)可行的是限制性片斷長(zhǎng)度的多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）的應(yīng)用。(1)原理：人類(lèi)基因組中很多無(wú)害的堿基變化，可以產(chǎn)生或失去限制性酶切位點(diǎn)。新的切點(diǎn)可使RFL縮短，而切點(diǎn)的失去可使RFL增大。所以不同個(gè)體間，某種酶的RFLP也就可能不同。這種改變沒(méi)有表型效應(yīng)，但以共顯性方式遺傳。(2)mtDNA的RFLP與群體分化起源，遺傳距離

(3)RFLP與偵破

(4)產(chǎn)前診斷。如果根據(jù)遺傳方式，能夠證明某種嚴(yán)重遺傳疾病是跟某一RFLP連鎖的，那么就可以利用RFLP做產(chǎn)前診斷。

a用cDNA探針，尋找與致病基因連鎖的RFLP。

b地中海貧血的基因診斷。圖11-68． 地中海貧血癥是不能產(chǎn)生β珠蛋白的一種重癥貧血，是由于β珠蛋白基因部分缺失引起的。

c苯丙酮尿證是由于苯丙氨酸羥化酶（PH）基因異常引起的。通過(guò)RFLP連鎖分析，做產(chǎn)前診斷。2．基因制藥

基因制藥不僅具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，發(fā)展速度也很快。20世紀(jì)80年代初，第一種基因工程藥物——重組人胰島素投放市場(chǎng)后，利用轉(zhuǎn)基因的工程菌生產(chǎn)的藥物已有60多種，包括細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。20世紀(jì)90年代以來(lái)，我國(guó)自己生產(chǎn)的白細(xì)胞介素-

2、干擾素、乙肝疫苗等近20種基因工程藥物。

三、對(duì)環(huán)境的改善

解決地球污染的最佳途徑就是生命科學(xué)和基因科學(xué)。而轉(zhuǎn)基因技術(shù)在成功改良動(dòng)植物本身的同時(shí)，也給環(huán)境帶來(lái)了潛在的好處。

木材是人們生活的重要建筑原料和造紙?jiān)希蛎磕晟挚撤サ臄?shù)量約3700萬(wàn)公頃。隨著人口的增長(zhǎng)，砍伐量還在逐年上升。然而，砍伐森林會(huì)對(duì)地球生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生破壞作用。盡管許多國(guó)家和地區(qū)采取了相應(yīng)的措施，如設(shè)置伐木配額，保護(hù)天然林，發(fā)展速生林等，但是由于林木成材周期相對(duì)較長(zhǎng)，仍然不能滿足市場(chǎng)需要。森林面積迅速減少，已經(jīng)是一個(gè)全球性的嚴(yán)重生態(tài)問(wèn)題。

以色列和美國(guó)在研發(fā)轉(zhuǎn)基因白楊的試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)一種纖維素捆綁基因(CBD)，將這個(gè)基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞后，植物的纖維素合成率、增長(zhǎng)率得到大幅度提高，樹(shù)木的生長(zhǎng)速度也提高了50%。美國(guó)還與瑞典合作，將生命周期僅4－6周的擬南芥的葉狀基因(LFY)轉(zhuǎn)入歐洲山楊中，獲得的轉(zhuǎn)基因山楊生長(zhǎng)更快，一年就能開(kāi)花成小材，而在一般正常情況下這類(lèi)樹(shù)木成材需要10年或更長(zhǎng)時(shí)間。

同時(shí)將轉(zhuǎn)基因抗病蟲(chóng)技術(shù)應(yīng)用到速生樹(shù)木的培育中，則可以使林木更健康地生長(zhǎng)，進(jìn)一步保證林木的成活。

土地荒漠化是全球性的環(huán)境災(zāi)害。目前，全球荒漠化的面積占整個(gè)地球陸地面積的1/4，它已影響到世界六大洲的100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，全球約有1/6的人口生活在這些地區(qū)。全世界受荒漠化影響的國(guó)家有100多個(gè)，約9億人受到荒漠化的影響和威脅。如沙特和埃及兩國(guó)沙漠面積都占國(guó)土面積的90%以上，澳大利亞的沙漠和半沙漠面積占全國(guó)面積的35%。我國(guó)的荒漠化土地也占國(guó)土面積的27.46%。

為了能讓沙漠披上綠裝，人們一直在尋找沙漠綠化樹(shù)種。白楊樹(shù)能在干旱和鹽堿化土壤等惡劣條件下生存，因此一直在沙漠綠化中扮演著沖鋒隊(duì)的角色。人們根據(jù)白楊樹(shù)的這一特性，不斷研究，逐步揭開(kāi)了植物抗旱的神秘面紗。以色列希伯萊大學(xué)的研究者在白楊樹(shù)細(xì)胞內(nèi)分離出能保證它在惡劣條件下生存的特殊蛋白質(zhì)，研究人員通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，進(jìn)一步提高白楊樹(shù)中這種蛋白質(zhì)的含量，這樣，可因地制宜地培育出抗逆性更強(qiáng)的沙漠綠化樹(shù)種。我國(guó)研究人員也正在將適合沙漠生存的沙棘、紅柳等植物的抗旱、抗寒基因轉(zhuǎn)移到常規(guī)樹(shù)種中，以培育適合西部氣候環(huán)境的樹(shù)種。轉(zhuǎn)基因沙漠綠化樹(shù)種的培育，無(wú)疑將為沙漠地帶生態(tài)環(huán)境的綜合改造找到一條新的途徑。基因組測(cè)序、干細(xì)胞基因工程主要在健康方面和環(huán)境方面造福人類(lèi)，除此之外，它還能在社會(huì)其他領(lǐng)域有貢獻(xiàn)。就像HGP和相關(guān)研究在基礎(chǔ)生物學(xué)和健康方面開(kāi)拓的新領(lǐng)域，同時(shí)為研究社會(huì)問(wèn)題創(chuàng)造了機(jī)會(huì)，甚至可以使我們更全面地了解如何定義自己和他人。

作為一門(mén)新興的學(xué)科和新興的技術(shù)，我們?cè)倏吹剿欣囊幻娴耐瑫r(shí)，也要注意它不利一面，它所造成的危害我們現(xiàn)階段是看不見(jiàn)得，這就警示著我們，要合理利用這項(xiàng)技術(shù)，讓它更好地為我們?nèi)祟?lèi)服務(wù)。

第二篇：分子生物學(xué)與基因工程結(jié)課論文

《分子生物學(xué)與基因工程》

結(jié)課論文

Real-Time PCR在分子生物學(xué)中的應(yīng)用

姓

名：XXX 學(xué)

號(hào)：AXXXXXXX 院

系：生命科學(xué)學(xué)院 班

級(jí)：生科XXX班 任課教師：XXX

二零一二年十二月 Real-Time PCR在分子生物學(xué)中的應(yīng)用

XXX XXX大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 黑龍江哈爾濱 150xxx

摘 要：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）可對(duì)特定基因進(jìn)行擴(kuò)增，因此被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)領(lǐng)域中獲取特定基因或基因片段。定量PCR已經(jīng)從基于凝膠的低通量分析發(fā)展到高通量的熒光分析技術(shù)，即實(shí)時(shí)定量PCR（real-time quantitative PCR）。該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等特點(diǎn)，目前實(shí)時(shí)定量PCR作為一個(gè)極有效的實(shí)驗(yàn)方法，已被廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，成為了分子生物學(xué)研究中的重要工具。關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)定量PCR；基因擴(kuò)增；分子生物學(xué)

1971年Khorana等最早提出PCR理論：―DNA變性解鏈后與相應(yīng)引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，重復(fù)該過(guò)程便可克隆tRNA 基因‖。因當(dāng)時(shí)基因序列分析方法尚未成熟、熱穩(wěn)定DNA聚合酶還未發(fā)現(xiàn)及寡聚核苷酸引物合成仍處于手工和半自動(dòng)階段，核酸體外擴(kuò)增設(shè)想似乎不切實(shí)際，且Smith等已發(fā)現(xiàn)了DNA限制性內(nèi)切酶，使體外克隆基因成為可能，Khorana 等的早期設(shè)想被忽視。1985年Mullis等用大腸桿菌DNA聚合酶 ⅠKlenow片段體外擴(kuò)增哺乳動(dòng)物單拷貝基因成功以及1988年Saiki等將耐熱DNA聚合酶（Taq酶）引入PCR，使擴(kuò)增反應(yīng)的特異性和效率大大提高，并簡(jiǎn)化了操作程序,最終實(shí)現(xiàn)了DNA擴(kuò)增的自動(dòng)化，迅速推動(dòng)了PCR的應(yīng)用和普及。

自從PCR技術(shù)問(wèn)世便很快成為科研、臨床診斷的熱點(diǎn)技術(shù)。但是傳統(tǒng)PCR技術(shù)在應(yīng)用中一是不能準(zhǔn)確定量，二是容易交叉污染，產(chǎn)生假陽(yáng)性。直到1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，上述問(wèn)題才得到較好的解決[1]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fluoro-genetic quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR）是通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR反應(yīng)中，引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA模板的定量，而且具有靈敏度高、特異性和可靠性強(qiáng)、能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)、自動(dòng)化程度高、無(wú)污染性、具實(shí)時(shí)性和準(zhǔn)確性等特點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域[2]。

1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)概述

1.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR原理

1992年Higuchi等首次提出了采用動(dòng)態(tài)PCR方法和封閉式檢測(cè)方式對(duì)目的核酸數(shù)量進(jìn)行定量分析，熒光探針技術(shù)是基于標(biāo)記基團(tuán)的FRET原理而實(shí)現(xiàn)的，當(dāng)某個(gè)熒光基團(tuán)的發(fā)射譜與另一個(gè)熒光基團(tuán)的吸收光譜重疊，且兩個(gè)基團(tuán)距離足夠近時(shí)，能量可以從短波長(zhǎng)（高能量）的熒光基團(tuán)傳遞到長(zhǎng)波長(zhǎng)（低能量）的熒光基團(tuán)，相當(dāng)于短波長(zhǎng)熒光基團(tuán)釋放的熒光被屏蔽，這個(gè)過(guò)程稱為FRET。在探針5’端標(biāo)記一個(gè)報(bào)告基團(tuán)（R），在3’端標(biāo)記一個(gè)淬滅基團(tuán)（quencher，Q），兩者距離很近時(shí)（7-10nm），報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光能被淬滅基團(tuán)所吸收，并依賴其較高的S/N比值（信-噪比, signal-to-noise ratio）和良好的辨別能力進(jìn)行定量檢測(cè)。

熒光擴(kuò)增曲線擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加。PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出起始DNA拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段，PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和CT值。熒光閾值是在熒光擴(kuò)增曲線上人為設(shè)定的一個(gè)值，它可以設(shè)定在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段任意位置上，但一般將熒光域值的缺省設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)被稱為CT值（threshold value）。CT值與起始模板的關(guān)系研究表明，每個(gè)模板的CT值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，CT值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)代表Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。[4][3]1.2 常用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分類(lèi)

1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR熒光染料法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR熒光染料法包括非飽和染料SYBR Green法和飽和染料LC Green法[5]。非飽和染料SYBR Green染料法定量成本低，方法簡(jiǎn)便，不需要設(shè)計(jì)探針，但是特異性低。熒光染料能和任何dsDNA結(jié)合，因此它也能與非特異的dsDNA（如引物二聚體）結(jié)合，使實(shí)驗(yàn)容易產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)。引物二聚體的問(wèn)題目前可以用帶有熔解曲線（melting curve）分析的軟件加以解決。飽和染料LC Green法與SYBR染料法工作原理是一樣的，但與傳統(tǒng)的熒光染料SYBR Green相比有如下優(yōu)點(diǎn)：LC Green染料在進(jìn)行PCR 時(shí)可以以飽和的濃度加入，不會(huì)抑制PCR反應(yīng)，而Sybr Green 染料濃度過(guò)高會(huì)抑制PCR反應(yīng)。從而，利用LC Green染料可以進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析。在進(jìn)行HRM分析時(shí)，由于飽和染料占據(jù)了DNA雙鏈上每一對(duì)堿基上的空位，所以在雙鏈解鏈時(shí)，染料立即與雙鏈脫離，使得熒光信號(hào)發(fā)生較大的變化，而非飽和染料常發(fā)生位置上的遷移，從而對(duì)熒光信號(hào)沒(méi)有大的影響。除LC Green染料外，常用的染料還有Reso Light、Ever Green等，這些都是綠色熒光染料，最佳激發(fā)波長(zhǎng)范圍440-470nm，發(fā)射熒光波長(zhǎng)470-520nm。

1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR探針?lè)?/p>

實(shí)時(shí)熒光定量PCR寡核苷酸探針?lè)ò═aqMan探針?lè)ê蚑aqMan-MGB探針?lè)?。TaqMan 探針?lè)夹g(shù)原理是利用Taq酶的5’—3’外切酶活性，在傳統(tǒng)PCR技術(shù)一對(duì)特異性引物的基礎(chǔ)上增加了一條熒光雙標(biāo)記探針。該探針可與上、下游引物之間的DNA模板序列特異性結(jié)合。探針的5’端標(biāo)以熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)以熒光淬滅基團(tuán)。在PCR退火復(fù)性期，探針與DNA模板特異性結(jié)合。在PCR延伸階段，Taq酶在引物的引導(dǎo)下，沿著模板合成新鏈，當(dāng)移動(dòng)至探針結(jié)合的位置時(shí)便發(fā)揮其5’—3’外切酶活性將探針降解成單核苷酸，使得熒光報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，前者的熒光信號(hào)釋放并被檢測(cè)。因此，每合成一條新鏈就有一個(gè)探針被裂解并釋放出一個(gè)熒光信號(hào)。熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量相對(duì)應(yīng)。

MGB探針與傳統(tǒng)的TaqMan探針比較，有很大的優(yōu)勢(shì)。它可以使探針的長(zhǎng)度縮短，尤其對(duì)AT含量高的序列的 MGB探針的設(shè)計(jì)有很大的幫助；同時(shí)可以提高配對(duì)與非配對(duì)模板間的Tm值差異； 由于在探針的3’端的Quencher基團(tuán)為不發(fā)光的熒光基團(tuán)，并且與Report基團(tuán)在空間的位置更接近，使雜交的穩(wěn)定性大大提高，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果更精確，分辨率更高，可 以進(jìn)行SNP分析。MGB探針實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單，使雜交的重復(fù)性大大提高。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量方法

在實(shí)時(shí)熒光PCR中，模板的定量有兩種方法：絕對(duì)定量和相對(duì)定量。絕對(duì)定量指用已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)推算未知的樣本量；相對(duì)定量指在一定樣品中靶序列相對(duì)于另一參照序列的量的變化。由于每個(gè)模板的CT值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，利用已知起始DNA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品可做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.1 絕對(duì)定量法

該方法是利用標(biāo)準(zhǔn)品作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣本進(jìn)行定量。絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品一般是用質(zhì)粒DNA或是PCR擴(kuò)增產(chǎn)物等制備的。標(biāo)準(zhǔn)品的量根據(jù)260nm的吸光度值計(jì)算得出。由于樣本的濃度完全是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定，所以合適的標(biāo)準(zhǔn)品是定量準(zhǔn)確的關(guān)鍵。一方面標(biāo)準(zhǔn)品與未知樣本應(yīng)具有一致的擴(kuò)增效率，另一方面標(biāo)準(zhǔn)品的定量必須準(zhǔn)確。這就要求標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增序列與樣本完全一致，制備的標(biāo)準(zhǔn)品純度要高，不應(yīng)含有影響定量的因素如Dnase、標(biāo)準(zhǔn)品與未知樣本各自反應(yīng)體系內(nèi)的干擾因素要一致等。該方法的優(yōu)點(diǎn)就是測(cè)定范圍很廣（10～1010拷貝），結(jié)果可直接通過(guò)軟件得出，不需額外計(jì)算。1.3.2 相對(duì)定量法

相相對(duì)定量是指在測(cè)定目的基因的同時(shí)測(cè)定某一內(nèi)源性管家基因，該管家基因主要是用于核苷酸的拷貝數(shù)的比較、反映反應(yīng)體系內(nèi)是否存在PCR擴(kuò)增的影響因素，通常選用的管家基因有GAPDH、β-2微球蛋白和rRNA。使用的β-actin、相對(duì)定量較為早期的方法是用一系列已知外參物做標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線得到目的基因和管家基因的量，再將目的基因同管家基因的比值作為定量的最后結(jié)果。此種方法計(jì)算出未知樣品的量是相對(duì)于某個(gè)參照物的量而言，因此，相對(duì)定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較容易制備，對(duì)于所用的標(biāo)準(zhǔn)品只需知道其稀釋度即可。在整個(gè)試驗(yàn)中，待測(cè)樣品的量來(lái)自于標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終必須除以參照基因的量，即參照基因是1×的樣本，其他的樣本為參照基因的n倍。由于管家基因在各種組織中的恒定表達(dá)，所以可用管家基因的量來(lái)作為標(biāo)準(zhǔn)，以比較來(lái)源不同的樣本，目的基因表達(dá)量的差異，此即相對(duì)定量。這一方法的缺陷是要求外參、目的基因和管家基因的擴(kuò)增效率一致；此外加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標(biāo)相當(dāng)于是進(jìn)行雙重PCR反應(yīng)，存在兩種模板相互的干擾和競(jìng)爭(zhēng)[7]。

1.3.3 相對(duì)定量反應(yīng)循環(huán)值（Ct）比較法

[6]即ΔCT值法，該方法是同時(shí)擴(kuò)增待測(cè)靶基因片段和一個(gè)作為內(nèi)參照的基因片段，一般是一個(gè)內(nèi)源性管家基因片段。這兩個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)可在2管中分別進(jìn)行，也可在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，測(cè)得兩者的CT值之差，即ΔCT。該方法不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。它是根據(jù)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的原理，假設(shè)每個(gè)循環(huán)增加倍的產(chǎn)物數(shù)量PCR反應(yīng)的指數(shù)期得到擴(kuò)增產(chǎn)物的值來(lái)反映起始模板的量通過(guò)數(shù)學(xué)公式來(lái)計(jì)算相對(duì)量。比較Ct法與標(biāo)準(zhǔn)曲線法的相對(duì)定量的不同之處在于其運(yùn)用了數(shù)學(xué)公式來(lái)計(jì)算相對(duì)量，前提是假設(shè)每個(gè)循環(huán)增加一倍的產(chǎn)物數(shù)量，在PCR反應(yīng)的指數(shù)期得到Ct值來(lái)反應(yīng)起始模板的量，一個(gè)循環(huán)（Ct=1）的不同相當(dāng)于起始模板數(shù)2倍的差異。比較不同待測(cè)標(biāo)本DNA的ΔCT值與正常標(biāo)本DNA的ΔCT值的變化，即可對(duì)未知標(biāo)本靶基因的原始拷貝數(shù)作出判斷，從而對(duì)病理狀態(tài)進(jìn)行判斷或診斷。但是此方法是以靶基因和內(nèi)源控制物的擴(kuò)增效率基本一致為前提的，效率的偏移將影響實(shí)際拷貝數(shù)的估計(jì)[8]。最終結(jié)果也是靶序列和參考品的相對(duì)比值。該方法需確定靶序列和參考品的擴(kuò)增效率是否一致；如不一致，則會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用

實(shí)時(shí)定量PCR的應(yīng)用非常廣泛。在科研方面，可定量分析各種基因的表達(dá)[ 9 ]、分析基因變和多態(tài)性[ 10 ]、分析細(xì)胞因子的表達(dá)

[ 11 ]、單核苷酸多態(tài)性（SNP）

[ 12 ]

測(cè)定及易位基因的檢測(cè)

[ 15 ]

[ 13 ]

等；在醫(yī)療方面，可用于免疫組分分析

[ 14 ]、臨床疾病早期診斷、病原體檢測(cè)、耐藥性分析

[ 16 ]、腫瘤研究[ 17 ]和微小殘留病變（MRD）[ 18 ]檢測(cè)等。

以下就其在基因工程研究、病原體的檢測(cè)和腫瘤分子診斷等方面的應(yīng)用及其新進(jìn)展作一簡(jiǎn)述。2.1 基因工程研究領(lǐng)域

實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)的出現(xiàn)不僅加強(qiáng)了有關(guān)對(duì)基因的量的研究方法，而且也加強(qiáng)了對(duì)基因的質(zhì)所發(fā)生變化的研究。它可以檢測(cè)基因突變和基因組的不穩(wěn)定性，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于遺傳分析[19]。

2.1.1

基因表達(dá)研究

由不同的熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記的探針?lè)謩e與野生型和突變基因雜交，探針雜交的效率和其后的切除與雜交有關(guān)。如果一種染料的熒光信號(hào)明顯強(qiáng)于另一種，說(shuō)明它是一個(gè)純合子，如果熒光信號(hào)都增加則表明是一個(gè)雜合子。從使用范圍來(lái)看，它能用于檢測(cè)已知基因序列的任何遺傳病基因的突變和缺失及表達(dá)量的異常，從靈敏度方面看，它能從單細(xì)胞進(jìn)行特異基因擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)植入前基因診斷。PCR技術(shù)還可用于端粒酶的檢測(cè)。使用雙色熒光標(biāo)記探針，結(jié)合不同的引物設(shè)計(jì)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)某些先天性疾病的定量檢測(cè)。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)β地中海貧血癥（β地貧）患者β與γ球蛋白mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果特異性強(qiáng)、定量準(zhǔn)確，為了解β地貧的分子病理機(jī)制及其臨床診斷提供了可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)。迄今對(duì)遺傳性物質(zhì)改變引起的疾病還無(wú)法根治，只能通過(guò)產(chǎn)前監(jiān)測(cè)和產(chǎn)前基因診斷，減少病嬰出生[20]

。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法可用于產(chǎn)前監(jiān)測(cè)和產(chǎn)前基因診斷。

2.1.2

單核苷酸多態(tài)性（SNP）及突變分析

單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism)主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR一個(gè)誘人的應(yīng)用前景是用于檢測(cè)基因突變和基因組的不穩(wěn)定性[21]。基因突變的檢測(cè)基于兩條探針，一條探針橫跨突變位點(diǎn)，另一條為錨定探針，與無(wú)突變位點(diǎn)的靶序列雜交。兩條探針用兩種不同的發(fā)光基團(tuán)標(biāo)記。如靶序列中無(wú)突變，探針雜交便完全配對(duì)，如有突變，則探針與靶序列不完全配對(duì)，會(huì)降低雜交體的穩(wěn)定性，從而降低其熔解溫度（Tm）。這樣便可對(duì)突變和多態(tài)性進(jìn)行分析。

2.1.3

轉(zhuǎn)基因研究

Tesson等確定了實(shí)時(shí)定量PCR的技術(shù)條件，利用兩種發(fā)光探針及適當(dāng)?shù)难h(huán)域值，擴(kuò)增一個(gè)轉(zhuǎn)移后的基因和一個(gè)對(duì)照基因，以分析轉(zhuǎn)基因鼠的接合性[22]。同型結(jié)合的和異質(zhì)接合的動(dòng)物交配后其子代中轉(zhuǎn)基因的傳遞情況符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，該方法為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的同型結(jié)合及異質(zhì)接合提供了明確的鑒定結(jié)果。這項(xiàng)技術(shù)在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物繁育及基因劑量功能效應(yīng)實(shí)驗(yàn)中將有很大用途。

2.2 腫瘤的分子診斷

腫瘤的本質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)基因發(fā)生了變化，是一種多基因異常的疾病，這些異常變化用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法都可以檢測(cè)出來(lái)。目前用此方法進(jìn)行過(guò)端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病ER基因、腫瘤MDR1基因等，盡管腫瘤發(fā)病的分子機(jī)制尚未完全闡明，但相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變的積累是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因之一已得到普遍承認(rèn)[23]。癌基因的突變和表達(dá)增加，在許多腫瘤早期就出現(xiàn)。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)不僅能有效地檢測(cè)到基因的突變，而且可以準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因的表達(dá)量。如定量結(jié)直腸癌淋巴結(jié)的癌胚抗原(CEA)mRNA的表達(dá)量，可作為診斷癌癥微轉(zhuǎn)移的重要依據(jù)[24]。目前，腫瘤患者的生存期已有所延長(zhǎng)，但是緩解期的患者仍存在復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)，因此，微小殘留病變的檢測(cè)對(duì)于進(jìn)一步調(diào)整治療方案至關(guān)重要。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)正成為檢測(cè)腫瘤微小殘留分子標(biāo)志的一種必備工具[25]。Eckert等提出采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)兒童急性淋巴細(xì)胞白血病微殘留病灶，對(duì)兒童急性白血病的治療有重要指導(dǎo)意義。

2.3 病原體的分子檢測(cè)

目前，用此方法還進(jìn)行了對(duì)人類(lèi)結(jié)核桿菌、免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒等病原體的檢測(cè)[26]。同樣在國(guó)內(nèi)，2004年針對(duì)SARS流行性病的檢測(cè)和診斷使得熒光定量PCR技術(shù)得以應(yīng)用和發(fā)展。熒光定量PCR問(wèn)世后的幾年中，積累了大量有關(guān)病原體核酸量與感染性疾病發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后之間關(guān)系的資料，這些研究資料不斷豐富，將形成感染性疾病的臨床分子診斷標(biāo)準(zhǔn)。目前, 實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)已應(yīng)用于肝病、性病以及人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）等各種病原體的臨床診斷，為實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確診斷提供了有效的檢測(cè)方法。

3.小結(jié)

時(shí)熒光定量PCR與其他一些技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用，是今后發(fā)展的方向，如與高級(jí)微型解剖技術(shù)結(jié)合后，能提高形態(tài)學(xué)損傷所至低水平擴(kuò)增的檢測(cè)能力[ 27 ]、可定量分析石蠟包埋儲(chǔ)存樣本中的核酸[ 28]及少量細(xì)胞中的全部轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物[ 29 ]等。此外，微陣列實(shí)驗(yàn)中所選基因表達(dá)水平的測(cè)定仍需使用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)[ 30 ,31 ]，利用該技術(shù)還可使等位基因特異表達(dá)分析以及生化武器證據(jù)甄別成為可能。

通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)目的基因的特異性引物和探針，并優(yōu)化反應(yīng)體系和反應(yīng)循環(huán)參數(shù)，已成功地建立了快速、靈敏、特異的Q-PCR檢測(cè)方法。可實(shí)現(xiàn)大量樣本同時(shí)檢測(cè)，并節(jié)省大量試驗(yàn)時(shí)間和反應(yīng)成本，為基因定量檢測(cè)和準(zhǔn)確定量疾病相關(guān)基因的表達(dá)提供了有效的技術(shù)手段；同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物疾病的早期診斷與基因分期、分型，以及對(duì)人類(lèi)腫瘤轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)后判斷[32]。因此Q-PCR技術(shù)將成為未來(lái)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室必備的研究工具，在臨床上將有更加廣闊的應(yīng)用前景。

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第三篇：《綠色生活與未來(lái)結(jié)課論文》

《綠色生活與未來(lái)結(jié)課論文》

姓名：賈紅果學(xué)號(hào)：091006106 節(jié)次：周日3、4節(jié)

綠色生活

---倡議低碳生活做綠色公民

[摘要]

能源和氣候已經(jīng)成為人類(lèi)共同面對(duì)的兩大危機(jī)，而這兩方面都與高碳排放有關(guān)，高碳排放對(duì)地球環(huán)境產(chǎn)生嚴(yán)重破壞。為造福當(dāng)代，優(yōu)化人類(lèi)生活環(huán)境，我們必須倡導(dǎo)低碳經(jīng)濟(jì)。城市居民生活中碳足跡及危害嚴(yán)重，如何減少碳排量不容忽視。加大宣傳，提高對(duì)低碳生活的認(rèn)識(shí)，為了人類(lèi)的可持續(xù)發(fā)展，倡議在日常生活中過(guò)低碳生活。

[關(guān)鍵詞] 低碳；碳足跡；倡導(dǎo)低碳生活

近年來(lái)，全球氣候變幻無(wú)常、水土流失嚴(yán)重、溫室效應(yīng)明顯、耕地沙化蔓延、生存環(huán)境日益惡化，嚴(yán)重威脅著當(dāng)今世界全人類(lèi)的健康與生命。就我們中國(guó)來(lái)說(shuō)去年入秋以來(lái)，我國(guó)西南、江南、華南部分地區(qū)發(fā)生了嚴(yán)重干旱。在我國(guó)降雨量最為豐富的西南，大部分地區(qū)干旱少雨，旱魃肆虐。農(nóng)田龜裂、塘壩干涸、河溪斷流……3月23日，來(lái)自國(guó)家防總的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，因干旱造成飲水困難的人數(shù)已達(dá)2271萬(wàn)，其中旱情最嚴(yán)重的云、貴、川、桂、渝五省份達(dá)1805萬(wàn)人；我國(guó)耕地受旱面積1.14億畝，其中，作物受旱面積8796萬(wàn)畝(重旱2798萬(wàn)畝，干枯1381萬(wàn)畝)；待播耕地缺水缺墑2612萬(wàn)畝。其中西南五省份耕地受旱面積達(dá)9654萬(wàn)畝，占85%。08、09年的自然災(zāi)害給了我們敲起了警鐘，再加上去年一部美國(guó)災(zāi)難大片《2012》的應(yīng)運(yùn)而生更是讓世界各國(guó)人民為氣候變暖可能給人類(lèi)造成的滅頂之災(zāi)嚇出了一身冷汗。

也許，很多人到現(xiàn)在還沒(méi)有弄明白“哥本哈根”和“哈根達(dá)斯”的區(qū)別，或許還有很多人認(rèn)為《后天》、《2012》只是純粹虛構(gòu)的美國(guó)大片，全球氣候變暖會(huì)議只是和自己沒(méi)有多少關(guān)系的國(guó)際新聞……而實(shí)際上，當(dāng)全球的政治精英們?cè)诘準(zhǔn)锥几绫竟鶠槿祟?lèi)爭(zhēng)取最后一個(gè)機(jī)會(huì)時(shí)，地球變暖衍生的惡魔已悄悄地走近了你我，走進(jìn)了洛陽(yáng)，走進(jìn)了河南，它并不遙遠(yuǎn)，它就在你我身邊瞪著猙獰的眼睛，制造著一個(gè)接一個(gè)禍端。全球暖化，冰川消融，海平面抬升、臭氧層破裂？？我們生活的地球，正在遭受浩劫。專家指出，一切根源在于人類(lèi)生活中燃燒煤炭。石油等排放的二氧化碳。因此，減少二氧化碳排放才是“治本”舉措。

然而減少二氧化碳自然就涉及到低碳，“戒除嗜好！面向低碳經(jīng)濟(jì)”環(huán)境日主題提示人們，“低碳經(jīng)濟(jì)”不僅意味著制造業(yè)要加快淘汰高能耗、高污染的落后生產(chǎn)能力，推進(jìn)節(jié)能減排的科技創(chuàng)新，而且意味著引導(dǎo)公眾反思哪些習(xí)以為常的消費(fèi)模式和生活方式是浪費(fèi)能源、增排污染的不良嗜好，從而充分發(fā)掘服務(wù)業(yè)和消費(fèi)生活領(lǐng)域節(jié)能減排的巨大潛力。轉(zhuǎn)向低碳經(jīng)濟(jì)、低碳生活方式的重要途徑之一，是戒除以高耗能源為代價(jià)的“便利消費(fèi)”嗜好。“便利”是現(xiàn)代商業(yè)營(yíng)銷(xiāo)和消費(fèi)生活中流行的價(jià)值觀。不少便利消費(fèi)方式在人們不經(jīng)意中浪費(fèi)著巨大的能源

低碳生活”雖然是個(gè)新概念，提出的卻是世界可持續(xù)發(fā)展的老問(wèn)題，它反映了人類(lèi)因氣候變化而對(duì)未來(lái)產(chǎn)生的擔(dān)憂，世界對(duì)此問(wèn)題的共識(shí)日益增多。全球變暖等氣候問(wèn)題致使人類(lèi)不得不考量目前的生態(tài)環(huán)境。人類(lèi)意識(shí)到生產(chǎn)和消費(fèi)過(guò)程中出現(xiàn)的過(guò)量碳排放是形成氣候問(wèn)題的重要因素之一，因而要減少碳排放就要相應(yīng)優(yōu)化和約束某些消費(fèi)和生產(chǎn)活動(dòng)。在日常生活中。每個(gè)人都有自己的碳足跡，尤其是城市居民的一

些習(xí)以為常的生活方式和消費(fèi)模式。每天都在產(chǎn)生巨大的能源消耗和溫室氣體排放量。因此生活中的碳足跡不可忽視。

一、居民日常生活成為碳排放的關(guān)鍵。

國(guó)家能源專家咨詢委員會(huì)主任徐錠明說(shuō)。在日常生活中，每個(gè)人都有自己的碳足跡，尤其是城市居民的一些習(xí)以為常的生活方式和消費(fèi)模式，每天都在產(chǎn)生巨大的能源消耗和溫室氣體排放量。吉林大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院教授王憲恩說(shuō)：“據(jù)測(cè)算，1999年到2002年間，26％。二氧化碳排放的城鎮(zhèn)居民生活用能已占到每年全國(guó)能源消費(fèi)量的大約30％是由居民生活行為及滿足這些行為的需求造成的?！痹谏钪刑幪幵凇胺盘肌北热纾喝绻愠孙w機(jī)旅行2000公里，那么你就排放了278千克的二氧化碳；如果你用了100度電。那么你就排放了785千克二氧化碳：如果你自駕車(chē)消耗了100公升汽油，那么你就排放了270千克二氧化碳

二、很多生活習(xí)慣改善有利于減少碳排放。

調(diào)查顯示，我國(guó)城市家庭平均待機(jī)能耗相當(dāng)于這些家庭每天都在使用著一盞15瓦到30瓦的長(zhǎng)明燈，占城市家庭用電量的10％。僅彩色電視機(jī)一項(xiàng)。一年下來(lái)就浪費(fèi)電力幾百億千瓦時(shí)。相當(dāng)于幾個(gè)大型火電廠白白發(fā)電。在城市住房、汽車(chē)等高碳排放領(lǐng)域的消費(fèi)過(guò)程中。一些城市居民存有“你追我趕”式的攀比心理。還有追求大戶型。大排量53的“好大心理”。用“碳排敖計(jì)算器”，簡(jiǎn)單估算一下便知：100平方米的住房，一輛轎車(chē)的三口之家，一年的碳排放近百噸。養(yǎng)成節(jié)約用能源好習(xí)慣意義重大。人們不好的行為不僅帶來(lái)了沙塵，還有暴風(fēng)雪、寒流，暴雨、熱浪等等極端天氣接踵而來(lái)。專家預(yù)測(cè)，全球氣候還會(huì)進(jìn)一步變暖，并且變暖的幅度有可能加大，美國(guó)的《科學(xué)》雜志，刊登了一項(xiàng)最新研究成果，稱2009年之后，至少有一半的年份，全球平均氣溫將超過(guò)歷史上最高的1998年，將有更多的極端天氣頻繁出現(xiàn)，人類(lèi)不得不面臨南北半球冰火兩重天的考驗(yàn)。同時(shí)聯(lián)合國(guó)評(píng)估報(bào)告提醒，人類(lèi)如果不重視環(huán)保，到本世紀(jì)末，平均氣溫最多將上升6.3攝氏度，這是一個(gè)怎樣可怕的數(shù)字？簡(jiǎn)單講，如果平均氣溫上升3攝氏度，僅在亞洲，每年就有700多萬(wàn)人，面臨洪水侵襲。如果氣溫上升4攝氏度，全球就會(huì)有30多億人，面臨缺水問(wèn)題。然而這些生活習(xí)慣的改善卻能減少大量碳的排放。

三、倡議過(guò)低碳生活，做綠色公民。

低碳生活，對(duì)于我們普通人來(lái)說(shuō)，是一種態(tài)度，而不是能力，我們應(yīng)該積極提倡并去實(shí)踐低碳生活，過(guò)低碳生活，創(chuàng)造綠色家園，政府和企業(yè)需要行動(dòng)。我們廣大公民同樣大有可為！倡議大家，從點(diǎn)滴生活小事做起，從現(xiàn)在開(kāi)始。購(gòu)買(mǎi)簡(jiǎn)單包裝的商品，選購(gòu)綠色產(chǎn)品、綠色食物，綠色消費(fèi)；少用一次性制品如木筷。紙杯、紙巾、塑料袋等：減少垃圾。進(jìn)行垃圾分類(lèi)?；厥召Y源；使用節(jié)能電器，電器使用后完全關(guān)閉電源，節(jié)約用電；適度使用空調(diào)；徒步或騎自行車(chē)上班或乘公交車(chē)，為節(jié)能減排出力；使用電子文檔，不要紙張。少用紙張：多植樹(shù)。愛(ài)護(hù)森林。

面對(duì)全球暖化的大危機(jī)，作為大學(xué)生的我們也要為祖國(guó)、為世界來(lái)自己的一份力。我們不能阻止氣溫的上升，不能控制兩極冰川的融化，不能避免云南的干旱。因?yàn)樗鼈兪且呀?jīng)發(fā)生的事實(shí)了，我們只能盡量減少災(zāi)難對(duì)我們?cè)斐傻挠绊憽?/p>

總之，只要每個(gè)公民盡自己的一份力量為低碳生活做出應(yīng)有的貢獻(xiàn)，我們的國(guó)家、整個(gè)世界的環(huán)境將會(huì)有驚喜的改善，朋友們?yōu)榱舜蠹腋鼮榱宋覀冏约鹤屛覀償y起手來(lái)做綠色公民為我們的明天造福吧！

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第四篇：研究生政治課結(jié)課論文——從近代文化發(fā)展史反思中國(guó)傳統(tǒng)文化發(fā)展的今天

從近代文化發(fā)展史反思中國(guó)傳統(tǒng)文化發(fā)展的今天

季羨林說(shuō)過(guò)：“對(duì)本民族文化的珍視，是一個(gè)國(guó)家屹立千年的基石”。從這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，中國(guó)，這個(gè)泱泱五千年的文明古國(guó)，對(duì)文明和文化的傳承，自然是成功的。璀璨的華夏文化也確實(shí)值得我們每一個(gè)中國(guó)人去視若珍寶。但是當(dāng)下中國(guó)出現(xiàn)的文化危機(jī)和社會(huì)道德的集體缺失卻一再拷問(wèn)著我們，中國(guó)文化的發(fā)展到底出了什么問(wèn)題？

前些日子，我一直在讀將夢(mèng)麟先生的《西潮》，這本書(shū)其實(shí)是蔣氏的回憶錄，同時(shí)也是一部鮮活的中國(guó)近代史。蔣先生幼時(shí)深受中國(guó)傳統(tǒng)文化教育的影響，青年時(shí)留學(xué)美國(guó)近十年，有著中西文化背景。歸國(guó)后，擔(dān)任國(guó)民政府教育部長(zhǎng)，主政北大15年，最早提出中西文化觀，對(duì)中國(guó)文化的發(fā)展很有發(fā)言權(quán)。從書(shū)名《西潮》中不難看出，蔣氏已經(jīng)意識(shí)到近代中國(guó)排山倒海般的社會(huì)變革，歸根結(jié)底是源于疾風(fēng)驟雨般的文化變革。從書(shū)中“西風(fēng)東漸”的歷史開(kāi)始反思，我試圖尋找今天中國(guó)文化發(fā)展的癥結(jié)和出路。

中國(guó)社會(huì)當(dāng)下產(chǎn)生種種文化道德的問(wèn)題，我認(rèn)為最根本原因是傳統(tǒng)文化教育的缺失。蔣夢(mèng)麟等近代國(guó)學(xué)大師大多認(rèn)為，中國(guó)文化重道德，而西方文化重科學(xué)。照此說(shuō)來(lái)，如果我們對(duì)傳統(tǒng)文化教育得到位，那么中國(guó)人的道德素養(yǎng)應(yīng)該至少不亞于西方，可是，現(xiàn)實(shí)似乎離這樣的假設(shè)越來(lái)越遠(yuǎn)。

可能有人會(huì)說(shuō)，我們天天講弘揚(yáng)傳統(tǒng)文化，大力發(fā)展民族文化，怎么會(huì)缺失？欲解釋此問(wèn)題，就要先梳理一下中國(guó)文化發(fā)展的脈絡(luò)。

近代以前，以儒家思想為主體，經(jīng)幾千年的積累和發(fā)展，形成了一套文化體系，我們稱之為中國(guó)傳統(tǒng)文化。中國(guó)傳統(tǒng)文化的核心是傳統(tǒng)道德，那時(shí)中國(guó)人對(duì)傳統(tǒng)文化的信奉類(lèi)似于西方人對(duì)宗教的信奉。隨著近代中外戰(zhàn)爭(zhēng)中中國(guó)的頻頻失利，一部分人看到了西方科學(xué)的力量，提出了“中體西用”的主張，中學(xué)為體，西學(xué)為用恰好是這一時(shí)期傳統(tǒng)文化優(yōu)越感的體現(xiàn)。隨著封建王朝的滅亡和革命活動(dòng)的興盛，尤其是到五四運(yùn)動(dòng)之后，學(xué)者對(duì)中國(guó)傳統(tǒng)文化進(jìn)行了大量的批判，中國(guó)走上全面西化的道路。同時(shí)，馬克思主義傳到中國(guó)，隨著新中國(guó)的成立，逐漸成為思想主體。

梳理之后，不難發(fā)現(xiàn)，五四運(yùn)動(dòng)之后，從崇尚西方科學(xué)與制度的全面西化思潮，到建國(guó)初期全面否定傳統(tǒng)文化，大力推行馬克思主義，再到文化大革命的十年浩劫，中國(guó)傳統(tǒng)文化的傳承已經(jīng)出現(xiàn)了大的斷層。這種斷層是過(guò)去幾千年都不曾發(fā)生過(guò)的。因此這種斷層的影響也在今天日漸顯現(xiàn)。所以我認(rèn)為，過(guò)去幾十年對(duì)傳統(tǒng)文化的過(guò)分抨擊，其實(shí)是對(duì)民族文化根基的嚴(yán)重摧殘，靈魂沒(méi)有歸宿，道德滑坡在所難免。難免有人哀嘆：中國(guó)識(shí)字的人多了，懂國(guó)學(xué)的人卻越來(lái)越少了。

發(fā)展中國(guó)文化，我以為以發(fā)展民族文化為最重。中國(guó)傳統(tǒng)文化的精華推崇人心道德，這是我們民族寶貴的財(cái)富，同時(shí)也是民族賴以生存發(fā)展的根基，千萬(wàn)失之不得，否則文化危機(jī)就是民族危機(jī)。

談到發(fā)展，首先要樹(shù)立起國(guó)民對(duì)傳統(tǒng)文化的自信。過(guò)去長(zhǎng)時(shí)間地過(guò)分批判，使國(guó)民對(duì)傳統(tǒng)文化失去自信。中國(guó)傳統(tǒng)文化固然有不符合社會(huì)發(fā)展的部分，但我們也應(yīng)看到其精華所在，去粗取精而不是全盤(pán)否定，對(duì)傳統(tǒng)文化應(yīng)有符合當(dāng)今時(shí)代的新解。從政策面上，應(yīng)全面開(kāi)展國(guó)學(xué)教育，提升國(guó)學(xué)在教育體系中的地位。國(guó)學(xué)是民族之學(xué)，其地位應(yīng)與科學(xué)相當(dāng)，只重科學(xué)不重國(guó)學(xué)就會(huì)導(dǎo)致種種社會(huì)問(wèn)題。讓國(guó)人從小接受優(yōu)秀傳統(tǒng)文化的熏陶，激發(fā)青少年對(duì)中國(guó)國(guó)學(xué)的興趣，是一件功在千秋的事業(yè)。今天播下民族文化的種子，在下一代的心中必會(huì)生根發(fā)芽。重塑傳統(tǒng)文化的地位是一項(xiàng)長(zhǎng)期的工作，只有從現(xiàn)在開(kāi)始，真抓實(shí)干，才能迎來(lái)中國(guó)文化事業(yè)光輝的明天。