第一篇：日本藥物生殖毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則簡介

日本藥物生殖毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則簡介

來源: CDE 作者: 審評(píng)四部 王慶利 時(shí)間: 2002-11-28 15:23:18審評(píng)四部王慶利

摘要：日本是受沙利度胺危害最大的國家，對(duì)其具有深遠(yuǎn)的影響。直至近日，日本對(duì)藥物生殖毒性的要求依然是ICH三方最為嚴(yán)格的一方。1963年日本制定了最初的胎兒試驗(yàn)法，1965年進(jìn)行了修訂。1975年進(jìn)行了全面修訂，制定了所謂的三段生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)法，并在1984年和1988年進(jìn)行了部分修正。在1993年接受ICH生殖毒性指導(dǎo)原則。其后日本對(duì)生殖毒性試驗(yàn)方面進(jìn)行了深入的研究，特別是在雄性生育力試驗(yàn)方面作出了積極的探索，其研究的相關(guān)結(jié)果被納入了ICH指導(dǎo)原則中。2002年日本發(fā)布了生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)的最新版本，本文介紹了該指導(dǎo)原則的主要內(nèi)容。關(guān)鍵詞：日本 藥物生殖毒性試驗(yàn) 技術(shù)指導(dǎo)原則

基本目的利用哺乳動(dòng)物檢驗(yàn)藥物可能存在的一些對(duì)生殖發(fā)育的不良影響，并公開這些不良的影響，以用于對(duì)人的生殖發(fā)育的安全性/危險(xiǎn)性的評(píng)估。試驗(yàn)方案三段試驗(yàn)方案是最實(shí)際的選擇，通過限定給藥時(shí)間來識(shí)別有可能發(fā)生損害的生殖發(fā)育階段，該方法在一般情況下幾乎對(duì)所有的藥物都有效。但應(yīng)根據(jù)藥物特點(diǎn)、適應(yīng)癥、適用人群、藥代動(dòng)力學(xué)資料、其他藥理毒理資料等方面進(jìn)行科學(xué)靈活的考慮，如單一試驗(yàn)方案或兩段試驗(yàn)方案等。無論選擇何種研究方案，必須能充分暴露和評(píng)價(jià)藥物的生殖毒性，并應(yīng)說明選擇的依據(jù)。試驗(yàn)動(dòng)物不同的動(dòng)物種屬對(duì)藥物的反應(yīng)有很大差別，為了充分暴露毒性，更準(zhǔn)確地外推至人，最好盡可能選用多種動(dòng)物。但是從經(jīng)濟(jì)或其他的理由來看，選擇多種動(dòng)物是不現(xiàn)實(shí)的。在選擇試驗(yàn)動(dòng)物的時(shí)候應(yīng)考慮：①是否宜于做為人類疾病模型。②受試物的代謝方式與人相類似。③由于在生殖毒性試驗(yàn)開始之前就清楚受試物在人體的代謝方式往往是很困難的，故通常使用那些操作比較容易，而且對(duì)其一般的代謝方式和生殖生理非常熟悉的動(dòng)物。④對(duì)動(dòng)物自發(fā)畸形的了解和對(duì)已知的能誘發(fā)生殖毒性物質(zhì)的敏感性。大鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物使用的歷史很長，有關(guān)其生殖生理的知識(shí)及其一般代謝方式已經(jīng)相當(dāng)清楚，具有性成熟期、妊娠期和哺乳期都比較短的優(yōu)點(diǎn)，是生殖毒性研究中獲得經(jīng)驗(yàn)最豐富的動(dòng)物，背景資料較多。由于致畸敏感期毒性導(dǎo)致的毒性后果相對(duì)更嚴(yán)重，日本對(duì)致畸敏感期試驗(yàn)特別重視，認(rèn)為使用多種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，在結(jié)果類推于人時(shí)，能夠提供更為充實(shí)的試驗(yàn)結(jié)果支持。因此，要求嚙齒類動(dòng)物和非嚙齒類動(dòng)物要分別使用一種以上。家兔是首選的非嚙齒類動(dòng)物。家兔體形較大，胎仔觀察比較容易，給予可致胎兒畸形的藥物酞胺哌啶酮，可引起和人類似的畸形。同時(shí)，該段試驗(yàn)使用家兔經(jīng)驗(yàn)豐富，背景資料較多。動(dòng)物數(shù)未說明具體動(dòng)物數(shù)的要求。應(yīng)考慮：①動(dòng)物對(duì)受試物的敏感性，②所采用試驗(yàn)方法，③所要求的精確性等。但通常每組16～20只動(dòng)物用于評(píng)價(jià)，國內(nèi)外取得了一致。給藥途徑和頻率原則上是使用與人相同的給藥途徑。有多種給藥途徑時(shí)，首先應(yīng)考慮能夠出現(xiàn)最強(qiáng)反應(yīng)的給藥途徑。選擇與臨床不同的給藥途徑時(shí)，應(yīng)提供依據(jù)。①經(jīng)口給藥，通常使用胃管強(qiáng)制給藥。摻食法由于動(dòng)物的攝取忌避，往往達(dá)不到所期待的劑量，或是給藥的劑量不準(zhǔn)確，一般不采用。②注射給藥必須注意受試物的性狀及其局部毒性。靜脈注射要注意注射的速度和防止藥液的泄漏。使用穩(wěn)定的注射速度是重要的。腹

腔內(nèi)注射可能會(huì)對(duì)子宮直接產(chǎn)生作用，或是造成對(duì)胎仔胎盤移行，在對(duì)妊娠期動(dòng)物試驗(yàn)時(shí)，一般不用這種方法。③有時(shí)也使用皮下或肌肉內(nèi)注射給藥。④對(duì)于臨床上局部應(yīng)用（皮膚、點(diǎn)眼、點(diǎn)耳、坐劑等）的藥物，可采用其他給藥途徑代替。皮膚給藥時(shí)，應(yīng)避免動(dòng)物舔皮膚或摩擦籠子。脫毛的皮膚上發(fā)生損傷時(shí)，會(huì)造成吸收差異，應(yīng)充分注意。作為皮膚給藥的替代途徑，往往采用皮下注射，這與皮膚的吸收途徑相類似。生殖毒性試驗(yàn)應(yīng)每日給藥。在分段試驗(yàn)中，注意各段間要設(shè)定至少一天的重復(fù)期。給藥劑量試驗(yàn)?zāi)康氖茄芯渴欠駮?huì)對(duì)動(dòng)物生殖發(fā)育帶來不良的影響，研究劑量反應(yīng)關(guān)系及其無毒性劑量。故盡量采用多個(gè)劑量，不能拘泥于三劑量設(shè)計(jì)。為了明確劑量反應(yīng)關(guān)系，設(shè)置較窄的劑量間距是適宜的。適當(dāng)預(yù)試驗(yàn)會(huì)為藥量選擇提供科學(xué)依據(jù)。非妊娠和妊娠動(dòng)物間往往是有毒性差異的，故預(yù)試驗(yàn)首先采用非妊娠動(dòng)物，然后用妊娠動(dòng)物，這樣能夠更多地得到有用的信息。通常把每日1g/kg作為給藥劑量的上限。對(duì)照組陰性對(duì)照的試驗(yàn)結(jié)果是分析整個(gè)試驗(yàn)結(jié)果的必需資料。根據(jù)試驗(yàn)者的判斷可設(shè)計(jì)陽性對(duì)照或比較對(duì)照。不適宜使用對(duì)生殖發(fā)育有致畸等不良影響的物質(zhì)作為溶劑，如果不清楚溶媒和乳化劑對(duì)生殖發(fā)育的影響時(shí)，最好設(shè)計(jì)無處置對(duì)照組。給藥時(shí)期一般生殖毒性試驗(yàn)中雄性動(dòng)物交配前給藥的時(shí)間，被認(rèn)為是涵蓋精子形成全過程和精子成熟所需要的時(shí)間。但是，根據(jù)以日本為中心的的國際共同研究結(jié)果，如果有雄性動(dòng)物生殖器官的病理組織學(xué)檢查，縮短交配前的給藥時(shí)間是可能的。目前雄性動(dòng)物交配前的給藥時(shí)間定為2周或4周。對(duì)2周以上的重復(fù)給藥試驗(yàn)，對(duì)雄性動(dòng)物生殖器官實(shí)施適當(dāng)?shù)牟±斫M織學(xué)檢查，如果未見不良影響，雄性動(dòng)物交配前的給藥時(shí)間可定為2周，但應(yīng)就時(shí)間設(shè)定的理由和妥當(dāng)性進(jìn)行闡述。藥代動(dòng)力學(xué)資料的運(yùn)用關(guān)于生殖毒性試驗(yàn)藥代動(dòng)力學(xué)資料的運(yùn)用，可以大致分為三個(gè)方面：①在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的制定中，有助于確定動(dòng)物種系、給藥劑量和頻率、給藥途徑等。②可確定受試物的吸收程度，暴露量等。③有助于試驗(yàn)結(jié)果的分析評(píng)價(jià)。檢查方法對(duì)親代動(dòng)物存活和一般狀態(tài)觀察至少1次/日。對(duì)出現(xiàn)的毒性癥候，要詳細(xì)觀察其程度和過程。對(duì)發(fā)現(xiàn)死亡的動(dòng)物應(yīng)立即剖檢，分析死亡原因。妊娠動(dòng)物在給藥期間每日測定體重。關(guān)于生殖器官的病理組織學(xué)檢查。通過2周以上的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)而未見影響，也未見一般生殖毒性試驗(yàn)中對(duì)受孕率的影響，可不進(jìn)行特殊的檢查。但當(dāng)發(fā)現(xiàn)對(duì)受孕率有影響時(shí)，必須選用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行精確檢查。可根據(jù)需要進(jìn)行精子檢查，可檢出生殖器官病理組織學(xué)方法難以檢出的精子變化。結(jié)果分析采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行結(jié)果分析評(píng)價(jià)。對(duì)胎仔和哺乳期幼仔試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的時(shí)候，一般是以窩單位。應(yīng)注意與同期陰性對(duì)照和歷史對(duì)照的比較。結(jié)果分析出現(xiàn)困難的時(shí)候，實(shí)施追加試驗(yàn)非常重要。當(dāng)發(fā)現(xiàn)動(dòng)物有畸形發(fā)育和其他不良影響時(shí)，在確認(rèn)劑量反應(yīng)關(guān)系和無毒性劑量的同時(shí)，還必須對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探究，就其對(duì)人的危險(xiǎn)性作詳細(xì)的考察?？煞謩e推定對(duì)親代動(dòng)物和對(duì)子代動(dòng)物的無毒性劑量。對(duì)親代的毒性影響包括一般毒性影響（一般狀態(tài)、體重、攝食量、解剖所見等）和對(duì)生殖的影響（受孕率、妊娠時(shí)間、分娩、哺育等）；對(duì)子代動(dòng)物的影響則為對(duì)其發(fā)育（胎生期死亡、發(fā)育遲滯、畸形、出生后生長發(fā)育障礙等）的影響。參考文獻(xiàn)：生殖發(fā)生毒性試驗(yàn)。見：日本臨床前研究指導(dǎo)原則解說。藥事日?qǐng)?bào)社，2002：49-62【致謝】彭雙清教授和王秀文教授分別提供了日本2002版及上一版指導(dǎo)原則的中文譯文。對(duì)他們的辛苦工作致以衷心的感謝！