第一篇：腐敗肝臟中氯氮平的高效液相色譜分析方法研究（精選）

【摘要】 目的建立腐敗肝臟組織中氯氮平的高效液相色譜分析方法。方法采用hypersil ods柱(150mm×

4．6mm id，5(m)，流動(dòng)相為甲醇：水(80：20)，內(nèi)含0．025 mo[／l的磷酸二氫鈉和0．01 mo[／l的十二烷基磺酸鈉(sds)

(ph5)。檢測(cè)波長(zhǎng)為：222 nm，228 nm和259 nm。

結(jié)果 用該方法從腐敗肝臟組織中檢出氯氮平。結(jié)論 所建立的高效液相色譜分析方法適用于腐敗生物檢材中氯氮平的檢識(shí)，能為法醫(yī)鑒定工作提供方法。

【關(guān)鍵詞】氯氮平；腐敗肝臟；hplc

【中圖分類號(hào)】i3919．1；r927．

1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a

【文章編號(hào)】1007—9297(2004)02—0131—0

2study on detection of clozapine in decay liver using hplc．liao lin—chuan，yan you—yi，yang lin ．sichuan universi—

ty，chengdu 610041

【abstractl 0bjective for the purposes of detecting clozapine in decay liver． methods a hplc method was devel—

oped．samples were extracted by ether，compounds were separated on ods hypersil column(4．6mm i．d．×150mm)eluted

with methanol which contain 0．025mol／l nah2po4 and 0．olmol／lsds(ph5)．a(chǎn) sequential ultraviolet detection was used

(222，228 and 259nm)． results clozapine was successfully detected in decay liver samples． conclusion the method in

this study is useful in the forensic cases involved clozapine po ison．

【key wordsl clozapine；decay liver sample；hplc

氯氮平(clozapine)，化學(xué)名為8一氯一11一(4一甲基一1一哌

嗪基)一5h一二苯并[b，e]一[1，4]二氮雜卓，是一種抗精神病

藥，主要用于治療精神分裂癥，由于其具有較高的抗精神分裂癥

療效，又很少產(chǎn)生錐體外系反應(yīng)，故在臨床上得到廣泛應(yīng)用?！?/p>

關(guān)于氯氮平的檢測(cè)方法，國內(nèi)外有學(xué)者已對(duì)血漿及血清等機(jī)體

組織中該藥的檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，_2 但尚未見到肝臟組織

尤其是腐敗組織中該藥物檢測(cè)方法的報(bào)道。本文對(duì)腐敗肝臟組

織中該藥物的檢測(cè)作了嘗試，報(bào)道如下。

儀器及材料

一、儀器

hp1100 series高效液相色譜儀，配以二極管陣列檢測(cè)器，四

元泵及三維hp液相色譜化學(xué)工作站；日本島津uv一260紫外

分光光度計(jì)；高速臺(tái)式離心機(jī)(17 000 r／min)。

二、對(duì)照溶液及試藥

精密稱取氯氮平對(duì)照品，配制成對(duì)照品乙醇溶液，濃度0．0

1mg／ml；甲醇，購自fisher公司；水為超純水(電阻(18 mo)；其他

試劑、試藥均為色譜純或分析純。

三、材料

空白對(duì)照人肝組織，放至腐??；精神病患者腐敗肝組織，生

前服用過氯氮平。

方法及結(jié)果

一、樣品前處理

方法一，取腐敗肝臟組織檢材5 g，用氨水調(diào)節(jié)ph為8，先

后用乙醚10 ml，5 ml振搖萃取兩次，分出乙醚層，合并濾液，過

三氧化二鋁凈化柱凈化，乙醚液用酸性水液反提，酸水提取液經(jīng)

堿化后再用乙醚提??；置乙醚提取液于40℃ 水浴中，揮干溶劑，殘留物用甲醇溶解，16 000 rpm離心5 min后取上清液進(jìn)樣

hplc儀。

方法二，提取溶劑換用氯仿，余同上法，揮干溶劑時(shí)用空氣

流吹干。

二、色譜流動(dòng)相的篩選

本文選用ods hypersil柱(150mm×4．mm id，5 m)為分析

柱；同樣填料(30t~m)短柱為預(yù)柱。先用已知對(duì)照品直接進(jìn)樣，對(duì)

下列流動(dòng)相進(jìn)行了篩選：(1)不同比例的甲醇與水溶液；(2)甲

醇：水：磷酸二氫鈉：十二烷基磺酸鈉的不同配比溶液，ph分別

為4．

5、5．0、5．

5、6．

2、7．0(濃磷酸調(diào)節(jié))。結(jié)果表明流動(dòng)相為甲

醇：水(80：20)，內(nèi)含0．025 mol／l的磷酸二氫鈉和0．01 mol／l的十二烷基磺酸鈉(ph5)，氯氮平有適合的保留時(shí)間，且峰形較

好，拖尾因子最接近1(見圖1 a)。在隨后用生物樣品進(jìn)樣情況

下仍能獲得較滿意的結(jié)果，見圖1(b)(c)。

流速：1．2 ml／min；檢

測(cè)波長(zhǎng)：222 nm，228 nm，259 nm；柱溫：30℃。

用上述乙醚和氯仿提取的樣品進(jìn)樣，比較兩種提取溶劑雜

質(zhì)的干擾情況。

討論

一、樣品前處理方法

由于腐敗肝臟組織中所含成分較復(fù)雜，所以本文采用有機(jī)

溶劑提取，過凈化柱和酸性水液反提凈化，酸水液經(jīng)堿化后再用

有機(jī)溶劑提??；于40℃水浴中揮干溶劑，殘留物用甲醇溶解．16

000 rpm離心后上清液進(jìn)樣hplc儀；雖然操作步驟略多，但卻

能明顯降低檢材中的內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)檢測(cè)的干擾。腐敗肝臟組織

經(jīng)以上預(yù)處理后，取20i~l進(jìn)樣測(cè)定，并通過陣列二極管搜集220

～ 350 nm紫外光譜圖，兩種萃取條件下均能檢出氯氮平，從圖

1(b)(c)可見在兩種溶劑提取回收率接近，但用乙醚提取雜質(zhì)峰更

少。樣品前處理過程中，用氨水調(diào)節(jié)ph為8而不用氫氧化鈉等

· 132 · 法律與醫(yī)學(xué)雜志2004年第11卷(第2期)

其他強(qiáng)堿，主要是考慮到有些藥物在強(qiáng)堿性條件下易分解，而氨 水易揮發(fā)，很容易除去，以免干擾測(cè)定。

mau mau

圖1 氯氮平及肝臟提取物的高效液相色譜圖 figl high performance liquid chromatogram of clozapine(a)and chro．

matogram of extracts from decay liver tissue(b and c)．

a

300 波長(zhǎng)

圖2 氯氮平甲醇溶液的紫外吸收光譜 fig 2 the

ultraviolet spectrum of clozapine in methanol,solution

二、紫外檢測(cè)波長(zhǎng)

在建立高效液相色譜方法時(shí)，需選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)，為

此，將氯氮平用乙醇溶解后，在200～500 nm范圍測(cè)得其紫外光

譜(圖2)，在波長(zhǎng)228 am、259 am和294 am 處均有紫外吸收峰。

作者認(rèn)為雖然在228 am處吸收最強(qiáng)，但由于許多內(nèi)源性雜質(zhì)在短波均有較強(qiáng)吸收，故在靈敏度足夠的情況下，宜選較長(zhǎng)的波長(zhǎng)

如259 am 為主要檢測(cè)波長(zhǎng)。如提取過程樣品凈化較好，選228

am可提高檢測(cè)靈敏度。

三、分析流動(dòng)相

在篩選流動(dòng)相的過程中，發(fā)現(xiàn)氯氮平在柱上有相當(dāng)強(qiáng)的保

留能力，這可能是其結(jié)構(gòu)中的堿性哌嗪基與ods柱上殘留的硅

醇基作用之故。因而用甲醇：水(95：5)流動(dòng)相沖洗近40分鐘

(1ml／min)，仍不能將氯氮平從分析柱上沖出?？紤]氯氮平為有

機(jī)堿類，所以作者通過：(1)選用十二烷基磺酸鈉為離子對(duì)試劑；(2)在甲醇一水中加人一定量的銨鹽；(3)通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的ph值等

3種手段試圖降低樣品在分析柱上的吸附，并使峰形得到改善，結(jié)

果文中選用的流動(dòng)相達(dá)到預(yù)期目的。

四、其他

該方法通過在多種色譜條件比對(duì)保留值及比較陣列二極管

紫外檢測(cè)器所獲得的全光譜紫外圖．可作為定性判別藥物的依

據(jù)。但由于氯氮平的代謝物與氯氮平的色譜行為及紫外光譜很

相似，故在有條件的情況下，應(yīng)結(jié)合其他方法確證。有關(guān)定量方

面的研究另行探討。

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(收稿：2004一ol一10)

第二篇：高效液相色譜系統(tǒng)中氣泡對(duì)檢測(cè)的影響及其解決方法

高效液相色譜系統(tǒng)中氣泡對(duì)檢測(cè)的影響及其解決方法

在我們進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，有時(shí)會(huì)遇到這樣一個(gè)問題：系統(tǒng)的流路中存在氣泡。

由于氣泡的存在，會(huì)造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成分析靈敏度下降；氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì)使流動(dòng)相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏。

造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條：一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈；三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣。

為了避免這類問題的出現(xiàn)，液相色譜實(shí)際分析過程中必須重視對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。常用的脫氣方法有以下幾種：

1.吹氦脫氣法 使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動(dòng)相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國內(nèi)因氦氣價(jià)格較貴，本法使用較少；

2.加熱回流法 此法的脫氣效果較好；

3.抽真空脫氣法 此時(shí)可使用微型真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機(jī)械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會(huì)引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對(duì)多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后再進(jìn)行混合，以保證混合后的比例不變。

4.超聲波脫氣法 它是目前實(shí)驗(yàn)室使用最廣泛的脫氣方法，將配制好的流動(dòng)相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡(jiǎn)便，基本能滿足日常分析的要求。

5.在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲(chǔ)液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，實(shí)現(xiàn)了流動(dòng)相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

其二，在液相色譜系統(tǒng)開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動(dòng)相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。

其三，在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。