第一篇：癌癥檢測(cè)新方向-液體活檢

液體活檢介紹

在我國(guó)癌癥篩查結(jié)果中，只有20%是早期，80%的癌癥查出來(lái)都是中晚期了，而這20%的癌癥早期還是體檢查出來(lái)的。”眾所周知，癌癥越早發(fā)現(xiàn)治愈率越高，但患者缺乏相應(yīng)的篩查手段，體檢得來(lái)的報(bào)告結(jié)果，其靈敏度和準(zhǔn)確度都相對(duì)較低。如今在美國(guó)，一種被稱為液體活檢的檢測(cè)方法正開(kāi)始興起，為一些病人省去了手術(shù)活檢和穿刺活檢，這兩種活檢是長(zhǎng)期需要來(lái)指導(dǎo)病人癌癥治療的。目前國(guó)內(nèi)也有一些生物公司在研發(fā)液體活檢技術(shù)----只需抽取6~8ml血，就能篩查是否患有6大常見(jiàn)癌癥（肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、大腸癌、乳腺癌），準(zhǔn)確率超過(guò)80%，花費(fèi)約2000～3000元。

液體活檢是什么？真的像宣傳的那么有效么？

液體活檢作為體外診斷的一個(gè)分支,是指一種非侵入式的血液測(cè)試,能監(jiān)測(cè)腫瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放到血液的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)和循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)碎片,是檢測(cè)腫瘤和癌癥、輔助治療的突破性技術(shù)。

它的優(yōu)勢(shì)在于能解決精準(zhǔn)醫(yī)療的痛點(diǎn),通過(guò)非侵入性取樣降低活檢危害,而且有效延長(zhǎng)患者生存期,具有高性價(jià)比。液體活檢技術(shù)主要包括CTC 和ctDNA，以及外泌體檢測(cè)。

基因突變是腫瘤產(chǎn)生發(fā)展的重要原因，幾乎所有癌癥患者都攜帶有DNA突變，這些突變只存在于腫瘤細(xì)胞而不存在于正常細(xì)胞，因此為腫瘤組織的檢測(cè)與跟蹤提供了方便的特異性生物標(biāo)記。種類(lèi)繁多的突變位點(diǎn)及基因型也為腫瘤的精確診療提供了必要的信息。

1.液體活檢尚不能用于腫瘤早篩。早篩是指對(duì)腫瘤的預(yù)測(cè)，以及早期腫瘤的檢查。因?yàn)橹挥挟?dāng)腫瘤生長(zhǎng)到一定階段后，CTC或者ctDNA進(jìn)入血液，才能通過(guò)液體活檢的方式檢測(cè)出來(lái)。而此時(shí)，腫瘤往往已經(jīng)生長(zhǎng)到一定規(guī)模，不再是早期腫瘤了。

2.液體活檢技術(shù)不是傳統(tǒng)檢查的替代技術(shù)。腫瘤的初步診斷、確診和療效評(píng)估，應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況，結(jié)合影像、腫瘤標(biāo)志物和液體活檢等檢查方式綜合判斷。液體活檢在一定程度上解決了傳統(tǒng)技術(shù)的部分局限性，但尚不足以替代傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)。

一、液體活檢介紹

1.循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells,CTCs）

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells,CTCs）是游離于血液循環(huán)系統(tǒng)中的腫瘤細(xì)胞，來(lái)源于原發(fā)腫瘤組織，是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要方式，也是腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的重要原因，同事還是激發(fā)癌癥致死機(jī)制的重要因素。CTC作為腫瘤細(xì)胞，不僅包含腫瘤的DNA信息，同時(shí)還包含基因組、蛋白質(zhì)組等信息，是研究腫瘤組織信息的豐富來(lái)源。（1）二代CTC檢測(cè)技術(shù) 1.密度梯度離心

可將CTC與紅細(xì)胞白細(xì)胞分離，根據(jù)不同密度沉降在不同區(qū)間而進(jìn)行分離。目前市場(chǎng)上有較多的這種類(lèi)型的試劑盒，F(xiàn)icoll-paque solution（Pharmacia Fine Chmeicals，Sweden），OncoQuick等。2.過(guò)濾法

依據(jù)CTC體積大雨血細(xì)胞的特性，對(duì)CTC進(jìn)行捕獲。CTC的直徑約為10~20um，而血細(xì)胞大小為7~12um，通過(guò)過(guò)濾，留下體積比較大的CTC.隨著對(duì)CTC研究深入，發(fā)現(xiàn)很多CTC與白細(xì)胞大小類(lèi)似甚至只有它一半或者更小。這些小或者超小CTC的數(shù)目比例在某些腫瘤中可高達(dá)三分之一。3.微控流芯片

針對(duì)CTC的體積和可變形性對(duì)CTC進(jìn)行捕獲，CTC的捕獲率和特異性可達(dá)到80%以上。不僅能夠檢測(cè)CTC的數(shù)量，而且可以分離活細(xì)胞進(jìn)行其他分析，是未來(lái)CTC檢測(cè)的發(fā)展方向，微流控芯片內(nèi)CTC的分選富集方法主要分為生物化學(xué)方法和物理分離法。生物化學(xué)方法指的是選擇特異性抗體對(duì)細(xì)胞表面表達(dá)的標(biāo)志物進(jìn)行特異性的抗原抗體吸附，達(dá)到分選的目的，物理法主要應(yīng)用外力場(chǎng)（電、磁場(chǎng)、流體場(chǎng)、超聲波等）基于細(xì)胞間的物理特性差異（大小、變形性、密度、介電性等）進(jìn)行分離。4.其他分離方法

核心原理還是利用CTC免疫學(xué)和物理學(xué)特性，但是缺乏臨床數(shù)據(jù)驗(yàn)證。（2）CTC臨床應(yīng)用

1.輔助診斷。主要是在常規(guī)手段無(wú)法對(duì)早期腫瘤進(jìn)行判斷時(shí)進(jìn)行。

2.療效評(píng)估。癌癥患者進(jìn)行化療、靶向治療后進(jìn)行CTC檢測(cè)，若CTC數(shù)量減少，則提示治療方式可能有效，相比于現(xiàn)階段的CT、MRI等檢查手段，CTC檢測(cè)技術(shù)操作更方便，應(yīng)用更簡(jiǎn)單，可以更及時(shí)地提示醫(yī)生該患者是否適合化療或者靶向治療。

3.術(shù)后監(jiān)測(cè)。以肺癌為例，肺癌患者手術(shù)后約50%可能復(fù)發(fā)，術(shù)后監(jiān)測(cè)非常重要，目前主要監(jiān)測(cè)手段是3或6個(gè)月進(jìn)行CTC檢查，因活檢無(wú)法高頻次檢查，而CTC可以克服這個(gè)缺點(diǎn)，及時(shí)檢測(cè)血液中CTC的變化，在癌癥發(fā)生的早期就及時(shí)進(jìn)行治療，能提高患者存活率。

2.血漿游離腫瘤DNA(Cell-Free' Circulating Tumor DNA，ctDNA)

ctDNA:是指人體血液循環(huán)系統(tǒng)中不斷流動(dòng)的攜帶一定（包括突變、缺少、插入、重排、拷貝數(shù)異常、甲基化等）來(lái)自腫瘤基因組的DNA片段。CtDNA的主要來(lái)源包括：1.來(lái)自壞死的腫瘤細(xì)胞 2.來(lái)自凋亡的腫瘤細(xì)胞 3.循環(huán)腫瘤細(xì)胞 4.來(lái)自腫瘤細(xì)胞分泌的外排體。

cfDNA最成熟的應(yīng)用是NIPT（無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)），抽取孕婦靜脈血分析胎兒游離的片段DNA，判斷胎兒患唐氏綜合征（21、18、13三體綜合征）的概率。已經(jīng)是國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的優(yōu)生優(yōu)育篩查手段。

對(duì)ctDNA的分析包括定性和定量的分析，其中定性分析包括檢測(cè)基因突變、缺失、插入、融合、重排、拷貝數(shù)變異、甲基化、微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）和雜合性缺失（LOH）等，定量分析就是計(jì)算ctDNA在血液中實(shí)時(shí)的含量，定性和定量均可反應(yīng)腫瘤的存在和嚴(yán)重程度。理論上說(shuō)，一個(gè)細(xì)胞含有約6~7pg的DNA,1ml血能提取10ng游離DNA,相當(dāng)于來(lái)自約2000~3000個(gè)凋亡細(xì)胞的DNA量，但是一般情況下只占整個(gè)循環(huán)DNA的1%，甚至0.01%。因此，這對(duì)DNA的檢測(cè)技術(shù)提出了比較高的要求。目前國(guó)內(nèi)外均沒(méi)有成熟產(chǎn)品，主要有兩個(gè)方向：一是應(yīng)用測(cè)序技術(shù)直接獲取ctDNA序列信息，另外利用DNA擴(kuò)增技術(shù)（PCR）檢測(cè)包含特定序列的ctDNA的濃度。

ctDNA的技術(shù)發(fā)展可以預(yù)測(cè)向著高精度和高通量的方向發(fā)展。NGS由于其價(jià)格因素，未來(lái)還是用于研發(fā)，所以最新的研究都集中在富集靶向DNA,將富集后的DNA做深度測(cè)序可以大幅度降低成本，但是如何高效準(zhǔn)確的富集目的DNA序列仍舊是ctDNA檢測(cè)的瓶頸。所以還是處于前期發(fā)展階段，離真正走向臨床還有一段距離要走。3．外泌體

外泌體（exosome）是細(xì)胞分泌出的小泡，小泡中包含蛋白質(zhì)、DNA、信使RNA以及一些非編碼RNA，是細(xì)胞之間溝通的載體，研究發(fā)現(xiàn)這些外泌體與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及抗藥性具有一定的相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞以這些小泡為載體幫助其逃過(guò)免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，這些小泡一方面給腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移指引方向，另一方面也創(chuàng)造適合腫瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境。

外泌體攜帶的信息多樣化。其中的蛋白質(zhì)和核酸，均可用于癌癥的早診、復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)、抗藥性監(jiān)測(cè)等相關(guān)方面的分析。而且外泌體在數(shù)量上多于CTC,更容易富集，在形式上分泌小泡能夠有效保護(hù)核酸類(lèi)物質(zhì)，克服了ctDNA在血液中易降解的問(wèn)題，在臨床應(yīng)用上有廣泛前景。但是外泌體的研究尚處于臨床早期，參與公司較少。4．液體活檢技術(shù)比較

二、市場(chǎng)現(xiàn)狀

癌癥液體活檢作為基因測(cè)序產(chǎn)業(yè)下的一個(gè)細(xì)分領(lǐng)域，與基因測(cè)序有著非常相似的產(chǎn)業(yè)鏈模式。現(xiàn)有基因測(cè)序產(chǎn)業(yè)鏈分為上游儀器與耗材生產(chǎn)銷(xiāo)售企業(yè)，中游檢測(cè)服務(wù)提供企業(yè)，以及下游數(shù)據(jù)分析企業(yè)，由于單純提供測(cè)序服務(wù)技術(shù)門(mén)檻不高、競(jìng)爭(zhēng)激烈，導(dǎo)致中游測(cè)序服務(wù)企業(yè)利潤(rùn)微博。故國(guó)內(nèi)大多數(shù)有能力的測(cè)序服務(wù)公司都自行提供結(jié)果分析服務(wù)，在腫瘤基因檢測(cè)領(lǐng)域更甚?；驕y(cè)序公司提供的腫瘤檢測(cè)報(bào)告幾乎都會(huì)提供相關(guān)的基因突變位點(diǎn)分析，供醫(yī)生參考，因此，腫瘤液體活檢產(chǎn)業(yè)鏈可以劃分為上游器械耗材企業(yè)和中下游監(jiān)測(cè)分析企業(yè)。上游企業(yè)的核心競(jìng)爭(zhēng)力是技術(shù)。提供核心技術(shù)的CTC分析儀、數(shù)字PCR儀、二代測(cè)序儀及配合使用的試劑盒關(guān)鍵技術(shù)掌握在國(guó)外幾個(gè)公司手里，而且技術(shù)壁壘較高，專利保護(hù)嚴(yán)格，這幾個(gè)國(guó)外大公司相當(dāng)于壟斷瓜分大部分市場(chǎng)。在國(guó)內(nèi)基因測(cè)序行業(yè)中，國(guó)外儀器提供商的議價(jià)能力很強(qiáng)，為擺脫這種影響，部分國(guó)內(nèi)公司奮發(fā)圖強(qiáng)，嘗試自主研發(fā)儀器耗材或者通過(guò)重組并購(gòu)上游企業(yè)。已有幾家國(guó)內(nèi)公司通過(guò)并購(gòu)實(shí)現(xiàn)二代測(cè)序儀的生產(chǎn)。但在比拼核心技術(shù)方面，國(guó)內(nèi)“山寨版”性能與同功能的國(guó)外版性能有不小的差距，而且國(guó)內(nèi)產(chǎn)品同質(zhì)化嚴(yán)重，競(jìng)爭(zhēng)激烈。

目國(guó)內(nèi)的腫瘤液體活檢也綁上了火箭般的速度發(fā)展。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，自2012年以來(lái)成立做二代測(cè)序的公司都達(dá)到了200多家，而開(kāi)展腫瘤液體活檢多數(shù)采用二代測(cè)序技術(shù)對(duì)ctDNA進(jìn)行分析。所以液體活檢初期發(fā)展階段，在腫瘤組織活檢市場(chǎng)上有強(qiáng)勢(shì)銷(xiāo)售地位的公司如若緊跟CTC、ctDNA的潮流，發(fā)揮原有市場(chǎng)的作用，對(duì)其進(jìn)行部分產(chǎn)品替代，即可快速搶占液體活檢市場(chǎng)份額。即誰(shuí)有渠道進(jìn)入醫(yī)院就能占山為王。

中下游企業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)點(diǎn)除了銷(xiāo)售渠道，就剩下數(shù)據(jù)解讀分析能力了。樣本量越大、信息越全面來(lái)源數(shù)據(jù)越可靠的數(shù)據(jù)庫(kù)必定更受市場(chǎng)青睞。國(guó)內(nèi)的基因測(cè)序公司都在積極積累自有數(shù)據(jù)庫(kù)并優(yōu)化基因數(shù)據(jù)的解讀分析能力，但都沒(méi)有形成絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也有待建立。

三、審批制度

在美國(guó)的醫(yī)療器械拿到臨床準(zhǔn)入有“雙通道制”，第一是可以通過(guò)FDA認(rèn)證，拿到臨床準(zhǔn)入，產(chǎn)品可以在市場(chǎng)上推廣和銷(xiāo)售；二是獲得CLIA認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室，可以實(shí)現(xiàn)臨床實(shí)驗(yàn)室的消費(fèi)級(jí)和科研應(yīng)用。CLIA實(shí)驗(yàn)室能夠根據(jù)市場(chǎng)的現(xiàn)實(shí)需求，快速地開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室自建項(xiàng)目，并通過(guò)在臨床上的應(yīng)用給與可靠的臨床指導(dǎo)。CLIA認(rèn)證解決了基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用之間低效率轉(zhuǎn)化甚至脫節(jié)的問(wèn)題，對(duì)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和研究成果轉(zhuǎn)化有非常重要的意義。美國(guó)大部分液態(tài)活檢公司都是走CLIA認(rèn)證而非FDA認(rèn)證。國(guó)內(nèi)也借鑒這種方式來(lái)規(guī)范基因檢測(cè)公司的競(jìng)爭(zhēng)。國(guó)內(nèi)的基于基因檢測(cè)的液態(tài)活檢項(xiàng)目進(jìn)入臨床也實(shí)行雙重監(jiān)管，所有儀器設(shè)備，試劑歸CFDA報(bào)批管理，臨床實(shí)驗(yàn)室歸屬衛(wèi)計(jì)委這與美國(guó)CLIA認(rèn)證制度類(lèi)似，即要求試點(diǎn)單位內(nèi)部有嚴(yán)格的質(zhì)量控制，并且相關(guān)工作人員需經(jīng)培訓(xùn)合格上崗，則不受CFDA對(duì)儀器和試劑的注冊(cè)限制。未來(lái)ctDNA的發(fā)展將會(huì)嚴(yán)重依賴渠道資源及疾病樣本資源，且CFDA對(duì)產(chǎn)品臨床資質(zhì)的管理也將越來(lái)越嚴(yán)格，未來(lái) ctDNA公司最可能的業(yè)務(wù)模式為：

①國(guó)家批準(zhǔn)的臨床應(yīng)用試點(diǎn)單位自行進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，類(lèi)似于美國(guó)CLIA實(shí)驗(yàn)室；

②不具有試點(diǎn)資格的企業(yè)通過(guò)與醫(yī)院合作，獲取醫(yī)院外包服務(wù)資質(zhì)，但以科研服務(wù)為主； ③不具有試點(diǎn)資格的企業(yè)通過(guò)與醫(yī)院合作，自行進(jìn)行診斷試劑盒報(bào)批，并把產(chǎn)品投向醫(yī)院。值得注意的是，目前獲得批準(zhǔn)的臨床試點(diǎn)單位數(shù)量較少，對(duì)應(yīng)的樣本量也受限，在大量ctDNA公司激烈競(jìng)爭(zhēng)市場(chǎng)蛋糕的情況下，獲得入場(chǎng)券、保證渠道及樣本優(yōu)勢(shì)將會(huì)非常關(guān)鍵。所以，技術(shù)、渠道資源在ctDNA領(lǐng)域依然缺一不可。

四、國(guó)家政策支持

從精準(zhǔn)醫(yī)療概念的提出，國(guó)家就制定了一系列戰(zhàn)略計(jì)劃積極鼓勵(lì)以DNA測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)的精準(zhǔn)醫(yī)療。2015年3月科技部召開(kāi)國(guó)家首次精準(zhǔn)醫(yī)療戰(zhàn)略專家會(huì)議，提出在2030年以前投入600億元用于精準(zhǔn)醫(yī)療。同月衛(wèi)計(jì)委發(fā)布《國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委醫(yī)政醫(yī)管局關(guān)于腫瘤診斷與治療項(xiàng)目高通量基因測(cè)序技術(shù)臨床應(yīng)用試點(diǎn)工作的通知》，包括14家醫(yī)療機(jī)構(gòu)和6家第三方檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。另外發(fā)布以腫瘤個(gè)體化治療、藥物代謝酶及作用靶點(diǎn)基因檢測(cè)的技術(shù)指南，旨在規(guī)范化推廣相關(guān)技術(shù)。2016年4月國(guó)家發(fā)展改革委員會(huì)下發(fā)了《關(guān)于第一批基因檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用示范中心建設(shè)方案的復(fù)函》正式批復(fù)27個(gè)省市發(fā)改委關(guān)于基因檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用示范中心的建設(shè)方案，從審批進(jìn)度來(lái)看，未來(lái)示范單位的審批已經(jīng)逐漸放開(kāi)。這一系列政策的出臺(tái)顯示出政府對(duì)腫瘤基因測(cè)序從資金到監(jiān)管的全方位支持，也奠定了腫瘤基因測(cè)序的高端發(fā)展路線。

五、國(guó)內(nèi)外液體活檢現(xiàn)有產(chǎn)品

六、液體活檢臨床應(yīng)用方向、七、現(xiàn)狀及展望

2016年3月《第13屆中國(guó)肺癌高峰論壇會(huì)議》專家共識(shí)中也提到了關(guān)于液體活檢：

（1）本次頒布的共識(shí)，首先將共識(shí)的級(jí)別進(jìn)行了分類(lèi)，因?yàn)橐后w活檢屬于新生事物，在許多判斷上全球也沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，因此首先將共識(shí)級(jí)別進(jìn)行分類(lèi)，為未來(lái)共識(shí)的進(jìn)一步升級(jí)奠定了基礎(chǔ)；

（2）共識(shí)二將液體活檢范圍擴(kuò)大到了CTC、ctDNA和外泌體。隨著免疫治療對(duì)人群精準(zhǔn)治療的需求，未來(lái)相信針對(duì)腫瘤特異性免疫細(xì)胞和相關(guān)基因組序列特征的檢測(cè)，用以展開(kāi)免疫治療療效的評(píng)估會(huì)納入共識(shí)二的更新版本中；

（3）共識(shí)三提到NGS的優(yōu)勢(shì)在于檢測(cè)多個(gè)基因變異，隨著一些靶點(diǎn)的復(fù)雜變異形式出現(xiàn)，期待未來(lái)的共識(shí)會(huì)從描述靶點(diǎn)轉(zhuǎn)為描述變異位點(diǎn)，單個(gè)變異位點(diǎn)可能使用傳統(tǒng)的檢測(cè)方式更加合適，而即使是單靶點(diǎn)遇到復(fù)雜變異形式（如無(wú)熱點(diǎn)突變），使用NGS更加合適；

（4）共識(shí)四提到NGS亦可用于研究探索，是其一個(gè)巨大優(yōu)勢(shì)，相信未來(lái)結(jié)合其他液體活檢技術(shù)探索臨床預(yù)后和監(jiān)測(cè)療效也會(huì)寫(xiě)進(jìn)共識(shí)；

（5）共識(shí)五非常全面的關(guān)注到了早期篩查和術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)，且提到目前無(wú)論是CTC還是ctDNA用于早期篩查都都僅限于科研探索。由于技術(shù)的限制，目前的確存在證據(jù)不足問(wèn)題。隨著時(shí)間進(jìn)步，相信在2-3年內(nèi)，不僅新的檢測(cè)技術(shù)會(huì)納入到共識(shí)五中，且應(yīng)用也會(huì)進(jìn)入臨床實(shí)踐級(jí)別；（6）共識(shí)六專家在2A級(jí)別共識(shí)了NGS檢測(cè)要平衡患者利益、倫理和科學(xué)探索之間的關(guān)系，這是目前精準(zhǔn)醫(yī)療的一個(gè)重要特點(diǎn)，每個(gè)患者都是數(shù)據(jù)點(diǎn)，每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)都可能通過(guò)科學(xué)探索貢獻(xiàn)醫(yī)學(xué)和臨床，因此平衡好三者關(guān)系是推動(dòng)精準(zhǔn)醫(yī)療良性發(fā)展的重要基礎(chǔ)。

任何技術(shù)的臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化都會(huì)經(jīng)歷三個(gè)階段：1.技術(shù)性能指標(biāo)的確認(rèn)；2.臨床應(yīng)用可行性的評(píng)估；3.臨床產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化及落地。現(xiàn)階段，液體活檢技術(shù)整體還處于第一階段到第二階段的過(guò)渡中。液體活檢的內(nèi)容包含cfDNA、CTC和外泌體，但其實(shí)技術(shù)成熟度、應(yīng)用廣泛性、法規(guī)支持等方面有很大差異，目前在臨床實(shí)際應(yīng)用中，ctDNA仍是目前最常用的液體活檢。而且，不論是NGS還是ARMS-PCR，目前應(yīng)用較多的還是針對(duì)明確已知的體細(xì)胞突變進(jìn)行靶向藥物治療的指導(dǎo)。對(duì)于多線治療失敗后無(wú)法取組織的患者進(jìn)行液體活檢對(duì)于探索耐藥機(jī)制，進(jìn)行療效監(jiān)測(cè)。NGS相比傳統(tǒng)方法有巨大優(yōu)勢(shì)。但是在技術(shù)尚未完善和標(biāo)準(zhǔn)化之前，野蠻生長(zhǎng)的產(chǎn)業(yè)也許會(huì)帶來(lái)區(qū)域性的失控。

那么液體活檢走到臨床，還有哪些問(wèn)題需要解決？（1）技術(shù)層面

一方面，CTC和ctDNA檢測(cè)手段有待進(jìn)一步提高。CTCs僅少量存在于外周血，且異質(zhì)性很大，所以CTC的分離技術(shù)還面臨著很多挑戰(zhàn)，目前尚未找到特異的CTCs的表面標(biāo)志物，所以依賴表面標(biāo)志物的分離策略難以避免假陰性的出現(xiàn)，多種生物、物理技術(shù)被用來(lái)分離CTCs，使得CTCs的得率有了很大的提升，但是不同技術(shù)的原理不同，導(dǎo)致分離得到的細(xì)胞也各異，對(duì)CTCs的認(rèn)識(shí)還處于盲人摸象的階段，改進(jìn)和規(guī)范化CTCs的分離技術(shù)顯得至關(guān)重要。目前ctDNA檢測(cè)常用驅(qū)動(dòng)基因的檢測(cè)，如外周血EGFR突變檢測(cè)，盡管具有高的特異性，但是敏感性徘徊于50%~70%左右，成為ctDNA檢測(cè)臨床應(yīng)用的瓶頸。

另一方面，基因突變、表觀遺傳學(xué)變化和基因差異表達(dá)是個(gè)體化診療的主要檢測(cè)目標(biāo)。對(duì)應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)包括等位基因特異PCR、甲基特異PCR，芯片技術(shù)和NGS；其原理和技術(shù)參數(shù)均有不同。在臨床應(yīng)用中，只有很好的將樣本類(lèi)型與相關(guān)檢測(cè)技術(shù)相匹配才能獲得最優(yōu)化的臨床產(chǎn)品。滿足可并行檢測(cè)體細(xì)胞基因單一位點(diǎn)突變、基因擴(kuò)增和融合等多種突變類(lèi)型，降低樣本用量。綜合分析當(dāng)前常用技術(shù)不難發(fā)現(xiàn)，真正符合這一要求的技術(shù)并不多，如常用的等位基因特異PCR技術(shù)靈敏度在1～10%左右，可基本滿足腫瘤組織基因檢測(cè)的要求，但在基因突變豐度如此低的液體活檢樣本面前卻顯得束手無(wú)策；ddPCR技術(shù)靈敏度可以達(dá)到0.1‰，可以用于低豐度基因突變檢測(cè)，并已經(jīng)成功應(yīng)用于血漿EGFR檢測(cè)。但ddPCR只能對(duì)已知突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，且不適用于融合基因。相比之下，NGS作為高通量的檢測(cè)技術(shù)優(yōu)勢(shì)就顯得非常明顯；通過(guò)不斷的優(yōu)化，已經(jīng)出現(xiàn)靈敏度達(dá)到萬(wàn)分之一的NGS檢測(cè)試劑盒。而且NGS可以同時(shí)檢測(cè)多種基因突變類(lèi)型，包括體細(xì)胞突變、基因擴(kuò)增和融合，可以對(duì)突變豐度低到0.02%的基因進(jìn)行檢測(cè)，且特意性達(dá)到96%，因此非常適合對(duì)液體活檢進(jìn)行基因檢測(cè)。第三，CTC和ctDNA的診斷價(jià)值還需要更多的研究去驗(yàn)證。目前，CTC在臨床上的使用還局限在術(shù)后或晚期病人計(jì)量外周血中CTCs的數(shù)量，預(yù)測(cè)預(yù)后，CTCs在早期患者中的研究很少，所以CTCs能否用于實(shí)體瘤早期診斷還不明確；CTCs表現(xiàn)出很大的異質(zhì)性，經(jīng)歷了EMT的CTCs，它的表型和基因型是否能準(zhǔn)確復(fù)制原發(fā)腫瘤，如何通過(guò)對(duì)CTCs的特點(diǎn)分析來(lái)指導(dǎo)個(gè)體化治療還有待進(jìn)一步研究。同樣，明確EGFR-TKIs治療過(guò)程中ctDNA中敏感和耐藥基因的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律還需要更多的臨床數(shù)據(jù)； ctDNA是否能用于癌癥篩查還需要解決以下疑問(wèn)：首先，增加檢出靈敏性的同時(shí)也增加了基因雜音的干擾，從而導(dǎo)致了假陽(yáng)性的增加；其次，不是所有的癌癥都與離散的和一致的早期基因突變有關(guān)，很多癌癥在疾病的任何階段以意想不到的方式產(chǎn)生多種突變；此外，不是所有的腫瘤都會(huì)以相同的方式向血液中釋放ctDNA；最重要的是，任何新的診斷檢測(cè)必須經(jīng)歷臨床驗(yàn)證，這是常規(guī)獲批的必要步驟。（2）醫(yī)學(xué)倫理層面

尚不成熟的技術(shù)推向市場(chǎng)帶給大眾的是恐慌多于福祉。近年來(lái)，肺癌的流行病學(xué)譜已發(fā)生了遷移，不吸煙、年輕、女性患者比例逐年增高。原來(lái)單純以年齡和吸煙狀態(tài)作為危險(xiǎn)因素定義的依據(jù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。其次是如何取得早篩和過(guò)度診斷治療的平衡。如果我們窮盡各種檢測(cè)手段，仍然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)可見(jiàn)腫瘤，是否需要對(duì)這部分人群進(jìn)行后續(xù)的隨訪復(fù)查？篩查本身的并發(fā)癥，患者的精神憂慮和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)又如何衡量？

綜合來(lái)看，液態(tài)活檢應(yīng)用前景廣闊，但是現(xiàn)階段更多處于科研探索階段，亟待大規(guī)模的臨床研究驗(yàn)證。液體活檢可以作為組織活檢的補(bǔ)充。能應(yīng)用到臨床上必須經(jīng)過(guò)反復(fù)確認(rèn)，并且是CFDA批準(zhǔn)的試劑盒，必須嚴(yán)格區(qū)分臨床應(yīng)用和臨床研究，對(duì)患者的安全負(fù)責(zé)。對(duì)于液態(tài)活檢產(chǎn)品靈敏度和特異性是最關(guān)鍵要考慮的因素。NGS將會(huì)得到廣泛應(yīng)用，但是對(duì)數(shù)據(jù)的有效性分析將是一個(gè)不小的挑戰(zhàn)，對(duì)數(shù)據(jù)的解讀直接影響對(duì)患者預(yù)后判斷，需要進(jìn)一步提高NGS數(shù)據(jù)分析。

第二篇：探究癌癥尿液檢測(cè)試劑

探究癌癥尿液檢測(cè)試劑

吉林生物研究院發(fā)明快速檢測(cè)癌癥的尿液檢測(cè)試劑

吉林生物研究院日前生產(chǎn)出一種可快速檢測(cè)癌癥的尿液檢測(cè)試劑，這種檢測(cè)試劑能在5分鐘內(nèi)發(fā)現(xiàn)癌癥的早期跡象，從而為治療爭(zhēng)取更多時(shí)間。

吉林生物研究院的科研人員發(fā)表公報(bào)說(shuō)，他們研發(fā)的這種檢測(cè)試劑可以從病人的尿液中找到消化系統(tǒng)類(lèi)癌癥和其他癌癥的腫瘤標(biāo)志物，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，其檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，而且成本不高。腫瘤標(biāo)志物是監(jiān)測(cè)及追蹤癌癥發(fā)展的重要工具。

參與研究的人員介紹說(shuō)，這種檢測(cè)方法操作方便，只需從被檢測(cè)者身上取5ml尿液即可，便可很快完成檢測(cè)，整個(gè)過(guò)程只需5-10分鐘。

研究人員認(rèn)為，這種檢測(cè)方法目前可以投入實(shí)際應(yīng)用，但仍需進(jìn)一步對(duì)其完善的基礎(chǔ)上可以制造出更簡(jiǎn)便快捷精準(zhǔn)的癌癥診斷試劑。

第三篇：早期檢測(cè)可以揪出癌癥因子[最終版]

早期檢測(cè)可以揪出癌癥因子 2013-07-15 00:15:36 北京娛樂(lè)信報(bào) 發(fā)表評(píng)論

信報(bào)訊（記者閆崢）我國(guó)80%的癌癥患者確診時(shí)即屬于中晚期。昨天，記者獲悉，市疾控中心等共同啟動(dòng)癌癥早早期檢測(cè)項(xiàng)目，希望更多的患者能通過(guò)早早期檢測(cè)揪出癌癥的苗頭。專家介紹，癌癥發(fā)展到晚期，5年生存率極低。晚期肺癌一般存活期只有1年，肝癌晚期出現(xiàn)黃疸和腹水存活期為1至3個(gè)月。就肺癌而言，如果能早期發(fā)現(xiàn)，手術(shù)后可以作為慢性病治療，存活幾年、十幾年沒(méi)有問(wèn)題。而目前我國(guó)每年新發(fā)胃癌患者中，七成都是晚期患者；而在日韓，早期胃癌患者占85%。我國(guó)的癌癥治療能力并不低，一些大醫(yī)院的設(shè)備和診治水平已經(jīng)接近發(fā)達(dá)國(guó)家，但癌癥防控的能力比較低。

記者了解到，90%的早期癌癥是沒(méi)有明顯癥狀的，許多人剛剛患癌時(shí)沒(méi)有任何感覺(jué)，等到癌癥發(fā)展到中晚期出現(xiàn)了疼痛、出血、明顯消瘦等狀況時(shí)才開(kāi)始察覺(jué)并重視，這時(shí)去就醫(yī)，大多數(shù)患者已經(jīng)失去了治愈的機(jī)會(huì)。想要早期發(fā)現(xiàn)癌癥只能依靠定期體檢，但健康體檢和防癌體檢是兩碼事。

據(jù)介紹，普通的健康體檢不包括腫瘤篩查，不能發(fā)現(xiàn)腫瘤的蹤跡及癌癥潛伏的隱患。近年來(lái)，市疾控中心和市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心將科研重點(diǎn)放在癌癥的更早期檢測(cè)上，通過(guò)驗(yàn)血發(fā)現(xiàn)包括肝癌、乳腺癌、食道癌、前列腺癌等十多種常見(jiàn)腫瘤的發(fā)生概率，并給予受檢者預(yù)防性建議，對(duì)腫瘤的早期防治提供超早期的預(yù)警。

據(jù)悉，目前國(guó)內(nèi)已有部分公立醫(yī)院和第三方基因檢測(cè)機(jī)構(gòu)開(kāi)展類(lèi)似的癌癥早期檢測(cè)項(xiàng)目，但價(jià)格比較貴。市疾控中心授權(quán)國(guó)藥陽(yáng)光健康管理研究院在全國(guó)開(kāi)展P53基因檢測(cè)后，檢查者的費(fèi)用將明顯下降。

第四篇：液體乳中三聚氰胺的快速檢測(cè) 拉曼光譜法（KJ201908）

附件8

液體乳中三聚氰胺的快速檢測(cè)

拉曼光譜法

（KJ201908）

范圍

本方法規(guī)定了液體乳制品中三聚氰胺快速測(cè)定方法。

本方法適用于生鮮乳、滅菌乳、巴氏殺菌乳、調(diào)制乳和發(fā)酵乳等液態(tài)乳制品中三聚氰胺含量的快速測(cè)定。

原理

樣品經(jīng)沉淀、溶劑提取，加表面增強(qiáng)拉曼試劑對(duì)信號(hào)增強(qiáng)，進(jìn)行拉曼光譜掃描。以704±10cm-1處的拉曼特征峰作為三聚氰胺定量基準(zhǔn)峰，以925±10cm-1或類(lèi)似基質(zhì)中穩(wěn)定存在的拉曼峰為參比峰，根據(jù)三聚氰胺峰與參比峰的相對(duì)強(qiáng)度對(duì)三聚氰胺的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，內(nèi)置儀器內(nèi)進(jìn)行判別。

試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規(guī)定的二級(jí)水。

3.1

試劑

3.1.1

三氯乙酸。

3.1.2

三氯乙酸溶液（5%）：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸（3.1.1）50

g于1

L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。

3.1.3

表面增強(qiáng)試劑：金或銀納米粒子溶膠，或相當(dāng)者。

注：表面增強(qiáng)試劑的參考配制方法：

納米金溶膠：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加熱至沸，劇烈攪拌下準(zhǔn)確加入1.0mL

1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，金黃色的氯金酸水溶液在2min內(nèi)變?yōu)榧t色，繼續(xù)煮沸15min，冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到100mL。增強(qiáng)試劑配制用水為GB/T

6682規(guī)定的一級(jí)水。

納米銀溶膠：取200mL1.0mM硝酸銀（AgNO3）水溶液加熱沸騰，劇烈攪拌下逐滴準(zhǔn)確滴加5.0mL1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，持續(xù)煮沸1h，溶液變?yōu)榛揖G色，冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到200mL。增強(qiáng)試劑配制用水為GB/T

6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1.4

促凝劑：金溶膠的促凝劑：稱取5.85

g氯化鈉，溶于100

mL水中，搖勻，備用，或配制成其他相當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)鹽溶液。銀溶膠的促凝劑：稱取5.85

g氯化鈉和2

g氫氧化鈉，溶于100

mL水中，搖勻，備用，或配制成其他相當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)鹽溶液。

3.2

參考物質(zhì)

三聚氰胺參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見(jiàn)表1，純度≥99%。

表1

三聚氰胺中文名稱、英文名稱、CAS登記號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子質(zhì)量

三聚氰胺

Melamine

108-78-1

C3H6N6

126.12

注：或等同可溯源物質(zhì)。

3.3

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液（500

μg/mL）：精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）適量，分別置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為500

μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。于4℃避光保存，有效期1個(gè)月。

儀器和設(shè)備

4.1

便攜式拉曼光譜儀

穩(wěn)頻激光光源：發(fā)射波長(zhǎng)為785±1

nm，線寬<0.1

nm，能量≥250

mW；光譜分辨率≤15

cm-1；光譜響應(yīng)范圍500

cm-1~2000

cm-1，或大于該響應(yīng)范圍。

4.2

移液器：200

μL、1

mL和5

mL。

4.3

渦旋振蕩器。

4.4

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥6000

r/min。

4.5

電子天平：感量為0.01

g。

4.6

塑料具塞離心管：2

mL。

分析步驟

5.1

試樣的提取

取0.5

g樣品加到2

mL離心管中，再加入1ml

5%三氯乙酸溶液，渦旋30

s混勻；放入離心機(jī)，以不低于6000

r/min轉(zhuǎn)速離心1

min；上清液備用。

5.2

測(cè)定步驟

5.2.1

拉曼光譜儀器參考條件

激光能量≥250

mW，數(shù)據(jù)采集時(shí)間≥2

s。

5.2.2

測(cè)定

在儀器樣品池中依次加入100

μL促凝劑，100

μL表面增強(qiáng)試劑，50

μL樣品（5.1），快速搖晃均勻，等待20

s檢測(cè)（檢測(cè)需在樣品加入后1

min內(nèi)完成）。

5.3

質(zhì)控試驗(yàn)

每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。

5.3.1

空白試驗(yàn)

稱取空白試樣，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。

5.3.2

加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取空白試樣10

g置于15

mL具塞離心管中，加入50

μL三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液（500

μg/mL）（3.3），使三聚氰胺濃度為2.5

mg/kg，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。

結(jié)果判定要求

儀器軟件將測(cè)試結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)中的三聚氰胺進(jìn)行匹配計(jì)算，根據(jù)譜圖704

cm-1（±10

cm-1）處特征拉曼光譜及內(nèi)置校準(zhǔn)曲線，對(duì)樣品中的三聚氰胺進(jìn)行結(jié)果判定：顯示測(cè)試結(jié)果并判定陰性或陽(yáng)性。陰性代表該樣品不含有三聚氰胺或低于2.5

mg/kg，陽(yáng)性則代表該樣品含有三聚氰胺且大于等于2.5

mg/kg。液態(tài)乳表面增強(qiáng)拉曼光譜圖參見(jiàn)圖1。

圖1

液態(tài)乳表面增強(qiáng)拉曼光譜圖

6.1

質(zhì)控試驗(yàn)要求

空白試樣測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。

性能指標(biāo)

7.1

檢測(cè)限

2.5mg/kg。

7.2

靈敏度

靈敏度應(yīng)≥99%。

7.3

特異性

特異性應(yīng)≥85%。

7.4

假陰性率

假陰性率應(yīng)≤1%。

7.5

假陽(yáng)性率

假陽(yáng)性率應(yīng)≤15%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)附錄A。

確證

本方法為初篩方法，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。

其他

本方法所述納米表面增強(qiáng)試劑及促凝劑信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者在使用替代試劑或操作步驟前，須對(duì)其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。

本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB/T

22388-2008

《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》。

附錄A

快速檢測(cè)方法性能計(jì)算表

表A.1

性能指標(biāo)計(jì)算方法

樣品情況a

檢測(cè)結(jié)果b

總數(shù)

陽(yáng)性

陰性

陽(yáng)性

N11

N12

N1.=N11+N12

陰性

N21

N22

N2.=N21+N22

總數(shù)

N.1=N11+N12

N.2=N21+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

顯著性差異(х2)

c2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度（df）=1

靈敏度（p+，%）

p+=N11/N1.特異性（p-，%）

p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）

pf-=N12/N1.=100-靈敏度

假陽(yáng)性率（pf+，%）

pf+=N21/N2.=100-特異性

相對(duì)準(zhǔn)確度，%c

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

a由參比方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果或者樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果；

b由待確認(rèn)方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。

N：任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

C為方法的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測(cè)趨勢(shì)情況綜合評(píng)價(jià)。

本方法負(fù)責(zé)起草單位：江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院。

驗(yàn)證單位：山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、江南大學(xué)、四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院

主要起草人：徐春祥、張淵、張征、顏春榮、胡明燕、劉麗強(qiáng)、姚歡

第五篇：2017年上半年廣東省造價(jià)工程師考試安裝計(jì)量：液體滲透檢測(cè)考試試題

2017年上半年廣東省造價(jià)工程師考試安裝計(jì)量：液體滲透

檢測(cè)考試試題

一、單項(xiàng)選擇題（共25題，每題2分，每題的備選項(xiàng)中，只有 1 個(gè)事最符合題意）

1、某工程本月按照預(yù)算價(jià)格應(yīng)結(jié)算的工程款為1000萬(wàn)元，已知本月人工單價(jià)較基期上漲了1.0%，人工費(fèi)在總費(fèi)用中所占比重為15%，材料價(jià)格上漲了20%，材料費(fèi)在總費(fèi)用中所占比重為40%，則本月應(yīng)結(jié)算的工程價(jià)款是__萬(wàn)元。A．1120 B．1050 C．1085 D．1095

2、有關(guān)道路等級(jí)及路面等級(jí)劃分，下列敘述正確的是（）。A．公路按等級(jí)劃分為快速路、主干路、次干路和支路 B．城市道路等級(jí)劃分為高速路、一、二、三、四級(jí)路 C．二級(jí)公路應(yīng)采用高級(jí)或次高級(jí)路面 D．三級(jí)公路應(yīng)采用中級(jí)路面

3、關(guān)于混凝土模板及支架拆除，說(shuō)法正確的是（）。A．梁側(cè)模拆除時(shí)對(duì)混凝土強(qiáng)度無(wú)任何要求

B．拆模時(shí)應(yīng)先拆除承重模板，后拆除非承重模板

C．后張法預(yù)應(yīng)力構(gòu)件的側(cè)模應(yīng)在預(yù)應(yīng)力鋼筋張拉前拆除 D．同種構(gòu)件的底模拆除時(shí)對(duì)混凝土的強(qiáng)度要求相同

4、對(duì)于國(guó)家投資的項(xiàng)目，施工圖的建筑面積不得超過(guò)初步設(shè)計(jì)的（），否則必須重新報(bào)批。A．9.9% B．8.6% C．3.5% D．5%

5、某工作的總時(shí)差為3天，自由時(shí)差為1天，由于非承包商的原因，使該工作的實(shí)際完成時(shí)間比最早完工時(shí)間延遲了5天，則承包商可索賠工期最多是（）天。A．1 B．2 C．3 D．4

6、建筑物地下室所有墻體都應(yīng)設(shè)置水平防潮層，其中一道設(shè)置在地下室墻附近，另一道設(shè)置的位置應(yīng)當(dāng)是（）。

A．室外地面散水以上150～200mm處 B．室內(nèi)地坪以下60mm處 C．墊層與地面面層之間

D．室外地面散水以下150～200mm處

7、地下室應(yīng)按（）外邊線所圍水平面積計(jì)算。A．外墻勒腳 B．外墻防潮層 C．外墻保護(hù)墻 D．外墻上口

8、采用綜合單價(jià)的工程量清單，將綜合單價(jià)與各分部分項(xiàng)工程的工程量相乘可以得到各分部分項(xiàng)工程的__。A．直接費(fèi) B．部分費(fèi)用 C．全部費(fèi)用 D．全部造價(jià)

9、地下污水處理場(chǎng)及城市水、電、氣、通信等公用設(shè)施。A．地表至-10m深度空間建設(shè)的地下工程。B．-30m～-10m深度空間內(nèi)建設(shè)的地下工程 C．-30m以下建設(shè)的地下工程

D．一50m以下建設(shè)的深層開(kāi)發(fā)建設(shè)工程

10、計(jì)算現(xiàn)澆混凝土樓梯工程量時(shí)，正確的做法是（）。A．以斜面積計(jì)算

B．扣除寬度小于500mm的樓梯井 C．伸人墻內(nèi)部分不另增加 D．整體樓梯不包括連接梁

11、評(píng)標(biāo)委員會(huì)提出書(shū)面評(píng)標(biāo)報(bào)告后，招標(biāo)人一般應(yīng)當(dāng)在__日內(nèi)確定中標(biāo)人，但最遲應(yīng)當(dāng)在投標(biāo)有效期結(jié)束30個(gè)工作日前確定。A．5 B．10 C．15 D．20

12、空心墩按壁厚分為厚壁與薄壁，其中（）為厚壁。A．t/D≥1/10 B．t/D≥1/8 C．t/D≤1/12 D．t/D≤1/6

13、項(xiàng)目規(guī)模合理化的制約因素不包括__。A．投資因素 B．技術(shù)因素 C．市場(chǎng)因素 D．環(huán)境因素

14、為縮短總工期，應(yīng)該采取措施縮短雙代號(hào)網(wǎng)絡(luò)計(jì)劃中（）。A．總時(shí)差最大的工作的持續(xù)時(shí)間 B．自由時(shí)差為零的工作的持續(xù)時(shí)間

C．關(guān)鍵線路上某一項(xiàng)或幾項(xiàng)工作的持續(xù)時(shí)間 D．所有非關(guān)鍵線路的持續(xù)時(shí)間

15、一棟四層坡屋頂住宅樓，勒腳以上結(jié)構(gòu)外圍水平面積每層為930m2，建筑物頂層全部加以利用，凈高超過(guò)2.1m的面積為410m2，凈高在1.2～2.1m的部位面積為200m2，其余部位凈高小于1.2m，該住宅樓的建筑面積為（）m2。A．3100 B．3300 C．3400 D．3720

16、城市地下貯庫(kù)的布置，應(yīng)處理好與交通的關(guān)系，對(duì)小城市的地下貯庫(kù)起決定作用的是（）。

A．市內(nèi)供應(yīng)線長(zhǎng)短

B．對(duì)外運(yùn)輸?shù)能?chē)站、碼頭等位置 C．市內(nèi)運(yùn)輸設(shè)備類(lèi)型 D．貯庫(kù)類(lèi)型和重要程度

17、下列關(guān)于建設(shè)工程索賠程序的說(shuō)法，正確的是__。

A．設(shè)計(jì)變更發(fā)生后，承包人應(yīng)在28天內(nèi)向發(fā)包人提交索賠通知 B．索賠事件在持續(xù)進(jìn)行，承包人應(yīng)在事件終了后立即提交索賠報(bào)告

C．索賠意向通知發(fā)出后的14天內(nèi)，承包人應(yīng)向工程師提交索賠報(bào)告及有關(guān)資料

D．工程師在收到承包人送交的索賠報(bào)告的有關(guān)資料后28天內(nèi)未予答復(fù)或未對(duì)承包人進(jìn)一步要求，視為該項(xiàng)索賠已被認(rèn)可

18、以下屬于中級(jí)抹灰施工方法和施工工藝的是（）。A．三遍成活，陽(yáng)角找方，一底層，一中層，一面層 B．兩遍成活，一底層，一中層，表面壓光 C．多遍成活，一底層，數(shù)中層，分層趕平D．兩遍成活，一底層，一面層，陽(yáng)角找方

19、下列關(guān)于工程變更的說(shuō)法中不正確的是__。A．工程變更總是由承包商提出的

B．工程師審批工程設(shè)計(jì)變更時(shí)應(yīng)與業(yè)主及設(shè)計(jì)單位協(xié)商 C．工程的變更指令應(yīng)以書(shū)面的形式發(fā)出

D．發(fā)生工程變更，若合同中有適用于變更工程的價(jià)格，則應(yīng)以此價(jià)格計(jì)算變更工程價(jià)款 20、（）、墻梁和基礎(chǔ)梁等。A．抗風(fēng)柱 B．排水槽 C．女兒墻 D．吸熱膜

21、信息分類(lèi)體系必須考慮到項(xiàng)目各個(gè)參與方所應(yīng)用的編碼體系的情況，項(xiàng)目信息的分類(lèi)體系應(yīng)能滿足不同項(xiàng)目參與方高效信息交換的需要，這體現(xiàn)了工程造價(jià)信息分類(lèi)的__原則。A．穩(wěn)定性 B．兼容性 C．可擴(kuò)展性 D．綜合實(shí)用性

22、在FIDIC施工合同條件中，下列索賠事件，承包商不能得到經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償?shù)氖莀_。

A．修改設(shè)計(jì) B．施工條件變化 C．傳染病導(dǎo)致的工期延誤 D．業(yè)主原因拖期

23、經(jīng)濟(jì)等方面的專家不得少于成員總數(shù)的__。A．1/2 B．3/5 C．3/4 D．2/3

24、推行工程量（）模式，目的是適應(yīng)我國(guó)建筑市場(chǎng)發(fā)展的要求和國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)的需要，逐步與國(guó)際慣例接軌。A．預(yù)算計(jì)價(jià) B．動(dòng)態(tài)計(jì)價(jià) C．清單計(jì)價(jià) D．靜態(tài)計(jì)價(jià)

25、材料和設(shè)備價(jià)格基礎(chǔ)的__就是“估算日期”。A．開(kāi)始日期 B．結(jié)束日期 C．截止日期 D．中間日期

二、多項(xiàng)選擇題（共25 題，每題2分，每題的備選項(xiàng)中，有 2 個(gè)或 2 個(gè)以上符合題意，至少有1 個(gè)錯(cuò)項(xiàng)。錯(cuò)選，本題不得分；少選，所選的每個(gè)選項(xiàng)得 0.5 分）

1、工程的特點(diǎn)有__。A．大額性 B．動(dòng)態(tài)性 C．復(fù)雜性 D．組合性 E．層次性

2、塔器類(lèi)設(shè)備的半機(jī)械化吊裝機(jī)具主要包括__。A．絞磨 B．卷?yè)P(yáng)機(jī) C．滑輪組 D．鋼絲繩

3、關(guān)于外墻磚砌體高度計(jì)算說(shuō)法正確的有__。

A．有屋架且室外均有天棚者算至屋架下弦底另加200mm B．無(wú)天棚者算至屋架下弦另加 300mm C．平屋面算至鋼筋混凝土底板 D．有框架渠時(shí)算至梁底 E．坡屋面算至梁底

4、田近乎常壓的設(shè)備進(jìn)行氨滲漏試驗(yàn)，當(dāng)達(dá)到試驗(yàn)壓力后5min，試紙未出現(xiàn)__色為合格。A．紅 B．藍(lán) C．黑 D．黃

5、庖工項(xiàng)目管理規(guī)劃的作用包括__。A．制定施工項(xiàng)目管理目標(biāo) B．規(guī)劃合同談判策略及目標(biāo) C．著眼于項(xiàng)目的全過(guò)程

D．對(duì)施工企業(yè)各相關(guān)部門(mén)進(jìn)行績(jī)效評(píng)價(jià)

6、根據(jù)《工程造價(jià)咨詢單位管理辦法》的規(guī)定，下列表述中正確的是__。A．工程造價(jià)咨詢單位合并時(shí)，應(yīng)交回原資質(zhì)證書(shū)，重新申請(qǐng)資質(zhì)等級(jí) B．新開(kāi)辦的工程造價(jià)咨詢單位只能申請(qǐng)乙級(jí)工程造價(jià)咨詢單位資質(zhì)等級(jí) C．工程造價(jià)咨詢單位資質(zhì)年檢結(jié)論分為優(yōu)良、合格和不合格三種 D．對(duì)于年檢不合格的工程造價(jià)咨詢單位，其限期整改時(shí)間為1年 E．工程造價(jià)咨詢單位停業(yè)半年以上時(shí)，應(yīng)當(dāng)辦理備案手續(xù)

7、空圈、暖氣包槽，壁龕的開(kāi)口部分并入相應(yīng)的工程量?jī)?nèi)的項(xiàng)目是__。A．石材樓地面 B．橡膠板樓地面 C．塑料板樓地面

D．現(xiàn)澆水磨石樓地面 E．菱苦土樓地面

8、閥門(mén)等需要拆卸的附件連接上。A．焊接 B．法蘭 C．熱熔 D．絲扣

9、高分子材料種類(lèi)很多，工程通常根據(jù)機(jī)械性能和使用狀態(tài)將其劃分為_(kāi)_。A．塑料 B．玻璃 C．橡膠

D．合成纖維

10、下列關(guān)于建筑物的場(chǎng)地平整工程量的表述中錯(cuò)誤的是__。A．按實(shí)際體積計(jì)算 B．按地下室面積計(jì)算

C．按基坑開(kāi)挖上口面積計(jì)算

D．按設(shè)計(jì)圖示尺寸以建筑物首層面積計(jì)算 E．展開(kāi)面積計(jì)算

11、硅酸鹽水泥的技術(shù)性質(zhì)是其具體應(yīng)用的主要依據(jù)，以下說(shuō)法錯(cuò)誤的是__。A．硅酸鹽水泥不宜用于海岸堤防工程

B．水泥的終凝時(shí)間指從加水拌和到水泥漿達(dá)到標(biāo)號(hào)強(qiáng)度的時(shí)間 C．體積安定性是指水泥在硬化過(guò)程中體積不收縮的特性 D．水泥的凈漿強(qiáng)度是評(píng)定水泥強(qiáng)度等級(jí)的依據(jù) E．水泥堿含量越低越好

12、不定型密封材料有下列的__。A．聚酯橡膠-PVC密封條 B．瀝青嵌縫油膏 C．聚氯乙烯接縫膏 D．自粘性橡膠 E．聚氨酯密封條

13、溫度、壓力及法蘭密封面的形式，可分為_(kāi)_。A．橡膠墊片 B．塑料墊片 C．金屬墊片 D．玻璃墊片

14、在吊裝用的索具中，常用的吊裝工具有__。A．繩索 B．滾杠 C．吊索 D．吊鉤

15、早強(qiáng)劑多用于搶修工程和冬季施工的混凝土。目前常用的早強(qiáng)劑有下列的__。A．硫酸鹽早強(qiáng)劑 B．三乙醇胺早強(qiáng)劑 C．引氣劑

D．氯鹽早強(qiáng)劑 E．復(fù)合早強(qiáng)劑

16、工程造價(jià)所具有的不同于其他商品的特點(diǎn)有__。A．大額性 B．連續(xù)性 C．差異性 D．層次性 E．同一性

17、燃?xì)夤こ讨?，人工燃?xì)獍粗迫》椒ú煌煞譃開(kāi)_。A．干餾燃?xì)?B．裂化燃?xì)?C．氣化燃?xì)?D．天燃燃?xì)?/p>

18、在施工中較常用的球罐拼裝方法有__。A．分片組裝法 B．拼半球組裝法 C．環(huán)帶組裝法 D．拼大片組裝法

19、在下列方法中，__是控制成本的方法。A．網(wǎng)絡(luò)計(jì)劃圖 B．香蕉曲線圖 C．直方圖

D．S形曲線控制法 E．控制圖法

20、針對(duì)預(yù)應(yīng)力筋的布置要點(diǎn)以下說(shuō)法正確的是__。A．波浪形曲線

B．波浪形曲線曲率不宜過(guò)大 C．波浪形曲線曲率不宜過(guò)小

D．預(yù)應(yīng)力筋的重心應(yīng)盡可能地距離截面重心遠(yuǎn)些 E．預(yù)應(yīng)力筋的重心應(yīng)盡可能地距離截面重心近些

21、噪聲的減弱與林帶的__有密切關(guān)系。A．樹(shù)木種類(lèi) B．配置方法 C．高度 D．位置 E．密度

22、項(xiàng)目組織結(jié)構(gòu)中的層次包括__。A．決策層 B．經(jīng)營(yíng)層 C．協(xié)調(diào)層 D．執(zhí)行層 E．操作層

23、下列情況屬于重大偏差的是__。

A．投標(biāo)文件沒(méi)有投標(biāo)人授權(quán)代表簽字和加蓋公章

B．投標(biāo)文件載明的招標(biāo)項(xiàng)目交代期限低于招標(biāo)文件規(guī)定期限 C．明顯不符合技術(shù)規(guī)格、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的要求 D．投標(biāo)文件附有招標(biāo)人不能接受的條件

E．投標(biāo)文件在實(shí)質(zhì)上響應(yīng)招標(biāo)文件，但個(gè)別地方存在漏項(xiàng)或者提供了不完整的技術(shù)信息和數(shù)據(jù)情況

24、某工程雙代號(hào)時(shí)標(biāo)網(wǎng)絡(luò)計(jì)劃執(zhí)行到第4周末和第10周末時(shí)，檢查其實(shí)際進(jìn)度如下圖前鋒線所示，檢查結(jié)果表明（）。

A．第4周末檢查時(shí)工作B拖后1周，但不影響工期 B．第4周末檢查時(shí)工作A拖后1周，影響工期1周

C．第10周末檢查時(shí)工作I提前1周，可使工期提前1周 D．第10周末檢查時(shí)工作G拖后1周，但不影響工期

E．在第5周到第10周內(nèi)，工作F和工作I的實(shí)際進(jìn)度正常

25、低溫不脆裂、抗拉強(qiáng)度高、伸長(zhǎng)率較大等優(yōu)點(diǎn)的防水卷材有（）。A．SBS改性瀝青防水卷材 B．APP改性瀝青防水卷材 C．石油瀝青紙?zhí)ビ蜌?D．聚氯乙烯防水卷材 E．三元乙丙橡膠防水卷材