第一篇：《ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡(柱凝集法)注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》(征求意見稿)

ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡（柱凝集法）

注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡（柱凝集法）注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡（柱凝集法）的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究?jī)?nèi)容，可自行補(bǔ)充。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡（柱凝集法）是指使用凝膠、玻璃微珠等材料進(jìn)行填充微柱，以免疫血液學(xué)、顆粒過篩和離心技術(shù)結(jié)合原理，進(jìn)行人ABO血型的正定型鑒定及RhD抗原的檢測(cè)。

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本指導(dǎo)原則適用于ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡(柱凝集法)以及包含ABO、RhD血型抗原檢測(cè)用途的柱凝集法的血型檢測(cè)卡，但不適用于血源篩查用血型正定型試劑。

本指導(dǎo)原則僅包括對(duì)ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡(柱凝集法)注冊(cè)申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（總局2014年第44號(hào)公告）（以下簡(jiǎn)稱“44號(hào)公告”）的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從抗體生物學(xué)來源、抗體效價(jià)、特異性、靈敏度、有效期等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應(yīng)包括主要組成成分（抗體、凝膠或其他填充物、緩沖液等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。

1.抗體的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)明確寫明抗體的供應(yīng)來源、生物學(xué)來源或克隆號(hào)，抗D抗體應(yīng)明確抗體屬性，是IgM型或IgG型或兩者均含有。

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1.1提供抗體純度。1.2抗體效價(jià)：

將抗A、抗B抗體進(jìn)行倍比稀釋，應(yīng)用試管法分別與A1型、A2型紅細(xì)胞試劑和B型紅細(xì)胞試劑反應(yīng)，與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，抗體效價(jià)不得低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

將抗D抗體進(jìn)行倍比稀釋，應(yīng)用試管法與RhD陽性紅細(xì)胞試劑反應(yīng)，考察抗體效價(jià)。

1.3特異性

抗A抗體應(yīng)與A1型、A2型、A1B、A2B型試劑紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與B型、O型試劑紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)；

抗B抗體應(yīng)與B型、A1B、A2B型試劑紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與A1型、A2型、O型試劑紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)；

抗D抗體應(yīng)與RhD陽性試劑紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與RhD陰性試劑紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)。

所有陽性反應(yīng)不應(yīng)有雙群現(xiàn)象等混合反應(yīng)，所有陰性反應(yīng)不應(yīng)有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

1.4應(yīng)提供不同批次抗體的驗(yàn)證資料。

1.5如為兩株抗體混合，應(yīng)提交驗(yàn)證資料說明混合比例。2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。應(yīng)提交選擇比較過程，提交驗(yàn)證試驗(yàn)資料。

3.填充緩沖液：應(yīng)說明組成成分,并對(duì)外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗(yàn)證。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

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2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件（如介質(zhì)、時(shí)間、溫度等）的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應(yīng)確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。

4.主要反應(yīng)體系的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

反應(yīng)體系的設(shè)臵應(yīng)符合《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》等公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范、指南或標(biāo)準(zhǔn)的要求。如紅細(xì)胞懸液制備要求及紅細(xì)胞濃度的確定、用量的要求、溫度、時(shí)間等；應(yīng)提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機(jī)型號(hào)固定轉(zhuǎn)數(shù)和時(shí)間的方式設(shè)臵離心條件。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)內(nèi)或國(guó)際有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

產(chǎn)品性能研究所采用的儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如紅細(xì)胞試劑、抗人球蛋白試劑、離心機(jī)等。

分析性能評(píng)估試驗(yàn)中應(yīng)明確所有試驗(yàn)每種試劑的用量、試劑紅細(xì)胞的濃度、采用的試驗(yàn)方法。所有試驗(yàn)方法應(yīng)符合 4 / 13

產(chǎn)品說明書的具體操作要求。

分析性能研究應(yīng)采用至少三批產(chǎn)品進(jìn)行。如檢測(cè)卡同時(shí)適用于手工法及全自動(dòng)血型分析儀，應(yīng)分別進(jìn)行性能驗(yàn)證并對(duì)兩者性能進(jìn)行比較。

建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

1.外觀：檢測(cè)卡應(yīng)標(biāo)識(shí)清晰，不同抗體對(duì)應(yīng)不同顏色，封口應(yīng)嚴(yán)密且能夠整條撕脫，檢測(cè)卡內(nèi)填充物均勻，無干枯現(xiàn)象，液面高度一致，無明顯傾斜，離心后應(yīng)無氣泡。

2.特異性：

抗A柱應(yīng)與A1型、A2型、A1B、A2B型試劑紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與B型、O型試劑紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)；

抗B柱應(yīng)與B型、A1B、A2B型試劑紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與A1型、A2型、O型試劑紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)；

抗D柱應(yīng)與RhD陽性試劑紅細(xì)胞發(fā)生陽性反應(yīng)，與RhD陰性試劑紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)。

Ctl柱（如有）均呈陰性反應(yīng)。

所有陽性反應(yīng)不應(yīng)有雙群現(xiàn)象等混合反應(yīng)，所有陰性反應(yīng)不應(yīng)有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

3.靈敏度 3.1凝集強(qiáng)度要求

抗A柱與A1型試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于4+，與A2 型及A2B試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于2+；與A1B試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于3+；

抗B柱與B型試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于4+，與AB型（A1B或A2B）試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)

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時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于3+；

抗D柱與RhD陽性試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于4+。

3.2與試管法的比對(duì)試驗(yàn)

采用同樣的A1型、A2型、AB型、B型、RhD陽性試劑紅細(xì)胞，將試劑卡檢測(cè)結(jié)果與試劑卡使用的抗體采用試管法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，依據(jù)各自的結(jié)果判定方法進(jìn)行凝集強(qiáng)度的判讀，試劑卡凝集強(qiáng)度不得低于試管法。

所有陽性反應(yīng)不應(yīng)有雙群現(xiàn)象等混合反應(yīng)，所有陰性反應(yīng)不應(yīng)有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

4.重復(fù)性

采用A1型、A2型、B型、AB型、O型試劑紅細(xì)胞分別對(duì)抗A柱和抗B柱進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，采用RhD陽性和陰性試劑紅細(xì)胞對(duì)抗D柱進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，使用上述所有試劑紅細(xì)胞對(duì)Ctl柱（如有）進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)。

批內(nèi)重復(fù)性采用同一批次檢測(cè)卡重復(fù)檢測(cè)上述試劑紅細(xì)胞，重復(fù)次數(shù)不少于10次，比較同一批次檢測(cè)卡不同次檢測(cè)之間的檢測(cè)結(jié)果；

日間重復(fù)性采用同一批次檢測(cè)卡每日重復(fù)檢測(cè)上述試劑紅細(xì)胞，重復(fù)天數(shù)不少于10天，比較同一批次檢測(cè)卡不同天檢測(cè)之間的檢測(cè)結(jié)果；

批間重復(fù)性采用至少三批檢測(cè)卡對(duì)上述試劑紅細(xì)胞進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，比較不同批次間的檢測(cè)結(jié)果。

批內(nèi)、日間、批間重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果應(yīng)分別對(duì)應(yīng)一致，對(duì)同一試劑紅細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果凝集強(qiáng)度差異不超過1+。陰性結(jié)果不應(yīng)有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

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5.臨床樣本驗(yàn)證

收集各ABO血型臨床樣本，包括RhD陰性樣本，采用試劑卡進(jìn)行檢測(cè)，將血型鑒定和凝集強(qiáng)度結(jié)果與已上市試劑結(jié)果進(jìn)行比較。臨床樣本的收集應(yīng)考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源。

6.收集臨床弱凝集紅細(xì)胞樣本，驗(yàn)證A、B、O、AB、RhD陽性小于3+及各種凝集強(qiáng)度的情況，并提供各種凝集強(qiáng)度的圖片。

7.收集各種血型的直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證。并提供直接抗人球蛋白試驗(yàn)試劑及檢測(cè)結(jié)果信息。

8.收集弱D、部分D紅細(xì)胞，考察驗(yàn)證抗D柱能否檢出，并明確上述RhD血型的具體確定方法。

9.溶血、脂血、黃疸等樣本的干擾評(píng)價(jià)。10.抗凝劑的適用性研究驗(yàn)證。

（五）陽性判斷值

提供充分的驗(yàn)證試驗(yàn)，體現(xiàn)不同凝集強(qiáng)度的結(jié)果，并明確不同凝集強(qiáng)度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)步驟，提供不同凝集強(qiáng)度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)檢測(cè)卡的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性。

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)

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施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)總體要求及臨床試驗(yàn)資料的內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則》、《辦法》、“44號(hào)公告”的規(guī)定，以下僅結(jié)合ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡的具體特點(diǎn)對(duì)其臨床試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.研究方法

按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品或試管法等效。

2.臨床試驗(yàn)單位的選擇

應(yīng)選擇符合法規(guī)要求資質(zhì)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗(yàn)，不得選擇血站進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于3000例。應(yīng)采用臨床患者進(jìn)行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應(yīng)包括血型

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鑒定易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。血型分布盡量均衡，ABO血型每種均應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RhD陰性樣本建議不少于50例。

4.實(shí)驗(yàn)過程

分別采用考核試劑與對(duì)比試劑依據(jù)各自的說明書對(duì)入組臨床樣本進(jìn)行血型檢測(cè)，記錄結(jié)果應(yīng)具體到凝集強(qiáng)度。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)分別進(jìn)行考核試劑與對(duì)比試劑對(duì)不同ABO血型、RhD血型的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計(jì)算，并以四格表的形式進(jìn)行列表，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的一致性。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致（包括考核試劑與對(duì)比試劑定型結(jié)果不一致、考核試劑與對(duì)比試劑凝集強(qiáng)度差異較大,如≥2+）的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)結(jié)合樣本的復(fù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，最終應(yīng)采用適合的方法進(jìn)行樣本血型的最終確認(rèn)。

如臨床樣本中包含凝集強(qiáng)度小于3+的樣本，應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步確認(rèn)，明確出現(xiàn)弱凝集的原因。

7.臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)作為臨床試驗(yàn)報(bào)告附件提交。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強(qiáng)度和血型定型結(jié)果，如有不符樣本應(yīng)列明第三方確認(rèn)的結(jié)果。

8.臨床試驗(yàn)中應(yīng)注意考核試劑與對(duì)比試劑應(yīng)嚴(yán)格遵守說明書操作要求，如紅細(xì)胞懸液濃度、離心條件等，應(yīng)與說明

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書一致。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料應(yīng)符合“44號(hào)公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。風(fēng)險(xiǎn)分析中應(yīng)充分考慮到各種可能影響檢測(cè)結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進(jìn)行血型定型檢測(cè)時(shí)可能存在一定的干擾、抗體效價(jià)隨放臵時(shí)間延長(zhǎng)的減弱對(duì)結(jié)果的影響等，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險(xiǎn)。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評(píng)估等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（總局2014年第9號(hào)通告）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和“44號(hào)公告”的相關(guān)規(guī)定。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)至少包括外觀、靈敏度、特異性、重復(fù)性、穩(wěn)定性。

產(chǎn)品技術(shù)要求的附錄應(yīng)包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應(yīng)明確抗體來源、克隆號(hào)、純度、效價(jià)、特異性以及功能性驗(yàn)證要求，應(yīng)明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應(yīng)明確組成、pH值等特性及質(zhì)控要求；主要生產(chǎn)工藝應(yīng)以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點(diǎn)；半成品檢定應(yīng)明確半成品的檢驗(yàn)要求及方法。

（十）產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告

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根據(jù)《辦法》要求，申請(qǐng)注冊(cè)的第三類體外診斷試劑應(yīng)在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（總局2014年第17號(hào)通告）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對(duì)ABO、RhD血型抗原檢測(cè)卡說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

1.【預(yù)期用途】

1.1寫明本試劑用于人ABO血型的正定型檢測(cè)及RhD血型抗原的檢測(cè)，同時(shí)明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗(yàn)。

1.2說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【儲(chǔ)存條件及有效期】 說明試劑的儲(chǔ)存條件及有效期。

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3.【樣本要求】

明確紅細(xì)胞制備和濃度要求，明確配套紅細(xì)胞稀釋液，應(yīng)使用生理鹽水，說明溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性要求，明確抗凝劑要求。

4.【陽性判斷值】

明確結(jié)果判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過不同凝集強(qiáng)度的圖例或照片進(jìn)行詳細(xì)解釋。

5.【檢驗(yàn)方法】

寫明具體方法及操作步驟。

明確質(zhì)控要求：應(yīng)根據(jù)相關(guān)規(guī)定進(jìn)行每日質(zhì)控試驗(yàn)。6.【檢驗(yàn)方法的局限性】

6.1未完全去除纖維蛋白原的標(biāo)本，可能因纖維蛋白阻礙紅細(xì)胞沉降而影響檢測(cè)結(jié)果，造成假陽性，建議洗滌后重新檢測(cè)。

6.2被檢標(biāo)本染菌可能造成假陽性結(jié)果。

6.3實(shí)驗(yàn)室溫度低可能導(dǎo)致凝膠顆粒活動(dòng)性減少，單個(gè)紅細(xì)胞穿過困難，從而導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

6.4使用陳舊樣本可能因細(xì)胞破碎，細(xì)胞膜浮于膠中或膠面呈弱陽性反應(yīng)。

6.5對(duì)弱D等檢測(cè)情況進(jìn)行說明。

6.6對(duì)檢測(cè)結(jié)果凝集強(qiáng)度小于3+的情況應(yīng)如何進(jìn)行后續(xù)處理進(jìn)行詳細(xì)說明。

7.【注意事項(xiàng)】

7.1檢測(cè)卡在使用前應(yīng)離心，并小心解開封口膜，避免迸濺。

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7.2強(qiáng)調(diào)紅細(xì)胞懸液濃度范圍，不得過高或過低。7.3微柱中出現(xiàn)溶血情況的處理。

7.4樣本離心時(shí)間和離心力應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求操作。7.5其他。

三、起草單位

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心

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第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件1

酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對(duì)酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測(cè)的第三類體外診斷試劑的注冊(cè)技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。

三、基本要求

（一）基本原則

1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求?！? 2 — 2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對(duì)試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。

3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

4.試劑在研制、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測(cè)有效。

（二）原材料質(zhì)量控制 1.主要生物原料

與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。使用前應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。

主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生

— 3 — 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測(cè)。

（4）效價(jià)

效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（5）功能性實(shí)驗(yàn)

功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)：

（1）牛血清或羊血清

外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗(yàn)：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或— 4 — 沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，蛋白含量≥32mg/ml。

球蛋白含量：取待測(cè)血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化鈉溶液，至1ml，用Lowry方法測(cè)定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。

（2）牛血清白蛋白：

外 觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)≤15分鐘，pH值應(yīng)為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（3）酪蛋白：

應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（4）標(biāo)記用酶

應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。

對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測(cè)、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)龋鶓?yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材

— 5 — 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。

主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更。化學(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。

4.其他物料（1）酶標(biāo)板 ①外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性 采用合適的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計(jì)算CV值。CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。

（2）液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

（3）其他材料

包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?！? 6 — 5.企業(yè)質(zhì)控品

企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對(duì)于定量檢測(cè)試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測(cè)樣品的基質(zhì)基本一致，如待測(cè)樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。

（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)

酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。

1.各種工作液的配制

酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對(duì)定量檢測(cè)試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對(duì)照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時(shí)應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實(shí)驗(yàn)室完成。

各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗(yàn)并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。對(duì)于定量檢測(cè)試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。

應(yīng)對(duì)配制過程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的

— 7 — 功能性實(shí)驗(yàn)及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應(yīng)測(cè)定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對(duì)其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測(cè)定。

2.包被酶標(biāo)反應(yīng)板

包被前應(yīng)對(duì)酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號(hào)、數(shù)量、標(biāo)識(shí)。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗(yàn)合格后方能用于包被。不同批號(hào)的板條不能混用。

選擇經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于2?8℃。

應(yīng)對(duì)包被過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗(yàn)、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時(shí)間等）、包被均一性檢驗(yàn)、干燥過程的監(jiān)控等。

3.分裝和包裝

樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于5%。

分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進(jìn)行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號(hào)等，核對(duì)各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣

檢驗(yàn)人員按試劑的批號(hào)，根據(jù)抽樣申請(qǐng)單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各— 8 — 組分，作號(hào)標(biāo)記、待檢。

（2）半成品檢驗(yàn)

根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)。半成品檢驗(yàn)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。若某類試劑沒有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。對(duì)于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對(duì)定量檢測(cè)試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

企業(yè)應(yīng)該對(duì)每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.成品質(zhì)量控制

產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請(qǐng)單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗(yàn)用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時(shí)應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。

每一批酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測(cè)及注冊(cè)檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。

（1）成品檢驗(yàn)

成品檢驗(yàn)時(shí)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國(guó)家

— 9 — 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)

在批放行前，每一批試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

四、名詞解釋

酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測(cè)樣品中的相關(guān)抗體（和/或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和/或抗原的存在。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《中國(guó)生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

— 10 —

第三篇：核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則3

附件3

核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對(duì)核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對(duì)核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的注冊(cè)技術(shù)審查，其他類核酸檢測(cè)試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。

三、基本要求

（一）基本原則

1.核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和

— 23 — 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專用實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動(dòng)，以最大限度地防止實(shí)驗(yàn)過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測(cè)的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。

3.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

4.核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的引物設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測(cè)設(shè)計(jì)的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。

5.企業(yè)使用新型原材料時(shí)，應(yīng)提供與通行原材料比對(duì)研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。

（二）原材料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料來自市場(chǎng)（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對(duì)物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。

核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。

1.脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為高效液相色譜（HPLC）純、PCR級(jí)，無DNase和RNase污染?！?0℃保存?！? 24 — 2.引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。

凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)（PAGE）或HPLC級(jí)，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。

應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物。-20℃保存。

3.探針

是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。

凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對(duì)探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長(zhǎng)處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、-20℃保存。

4.DNA聚合酶

如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。-20℃保存。

5.尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG

— 25 — 在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。-20℃保存。

6.逆轉(zhuǎn)錄酶

具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性?！?0℃保存。

（三）生產(chǎn)工藝

核酸擴(kuò)增類檢測(cè)試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對(duì)電導(dǎo)率pH、等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制

（1）按批號(hào)抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。

（2）以參考品/對(duì)照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時(shí)進(jìn)行分裝和包裝。2.成品質(zhì)量控制

（1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測(cè)及注冊(cè)檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求?！? 26 —（2）產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。（3）以參考品/對(duì)照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。結(jié)果應(yīng)符合要求。（4）成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。

5．試劑批放行前，應(yīng)對(duì)需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。

四、名詞解釋

核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑：核酸擴(kuò)增技術(shù)泛指以擴(kuò)增脫氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）為手段，檢測(cè)特定核酸序列或篩查特定基因的檢測(cè)技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測(cè)、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。

五、參考文獻(xiàn)

1.《中國(guó)生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

第四篇：6 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(征求意見稿)

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒

注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）

本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒的技術(shù)審評(píng)工作，幫助審評(píng)人員理解和掌握該類產(chǎn)品的原理、組成、性能、預(yù)期用途等內(nèi)容，明確技術(shù)審評(píng)過程中應(yīng)該關(guān)注和重點(diǎn)把握的內(nèi)容，對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評(píng)價(jià)。

本指導(dǎo)原則是對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒的一般要求，審評(píng)人員應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用并對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充要求。

本指導(dǎo)原則是對(duì)技術(shù)審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè) 審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

一、適用范圍

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒用于體外定量測(cè)定人血清或血漿中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的測(cè)定方法目前主要有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的測(cè)定方法目前主要為丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下，L-丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應(yīng)生成乳酸和NAD+。NADH在特定波長(zhǎng)

— 1 —（如：340nm處）有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在此波長(zhǎng)處測(cè)定NADH吸光度下降的速率，即可計(jì)算出ALT活性。從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指采用丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶催化L-丙酮酸和α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，通過在特定波長(zhǎng)處吸光度的變化，計(jì)算丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性，利用全自動(dòng)、半自動(dòng)生化分析儀或分光光度計(jì)，在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶定量測(cè)定所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑。本文不適用于干式丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶同工酶試劑不屬于本指導(dǎo)原則涵蓋的范疇。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號(hào)），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑屬于酶類檢測(cè)試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號(hào)為6840。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性評(píng)價(jià)、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求》（2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容： 1.產(chǎn)品預(yù)期用途及相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況：

（1）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實(shí)驗(yàn)室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程，質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的制備方法及溯源（定值）情況。— 2 — 3.有關(guān)生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動(dòng)物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，人源性材料須對(duì)有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測(cè)予以說明，并提供相關(guān)的證明文件。其他動(dòng)物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說明文件，為保證產(chǎn)品在運(yùn)輸、使用過程中對(duì)使用者和環(huán)境的安全，應(yīng)提供對(duì)上述原材料所采用的滅活等試驗(yàn)方法的說明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定的方法及研究資料；校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：配制、分裝等描述及確定依據(jù)，應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點(diǎn)；反應(yīng)體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）等研究資料。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提交產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體的研究項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評(píng)估時(shí)應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)、檢驗(yàn)人員、— 3 — 適用儀器、試劑規(guī)格和批號(hào)、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。

性能評(píng)估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、精密度、線性區(qū)間、最低檢測(cè)限、分析靈敏度、分析特異性、其它影響檢測(cè)的因素等。1.準(zhǔn)確度

對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)包括：與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（和/或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）的偏差分析、方法學(xué)比對(duì)等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

1.1與國(guó)家（國(guó)際）參考物質(zhì)的比對(duì)研究

使用國(guó)家參考物質(zhì)或國(guó)際參考物質(zhì)作為樣本進(jìn)行測(cè)試，重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算平均值與標(biāo)示值的相對(duì)偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個(gè)濃度的人血清對(duì)試劑盒進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)濃度樣品重復(fù)測(cè)定3次，分別取測(cè)試結(jié)果均值，計(jì)算相對(duì)偏差。1.2回收試驗(yàn)

在人血清樣品中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品溶液或純品，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算回收率。回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.2.1加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液體積與血清體積比應(yīng)不大于1:20或其體積比不會(huì)產(chǎn)生基質(zhì)的變化；

1.2.2加入標(biāo)準(zhǔn)溶液或校準(zhǔn)品溶液后樣品總濃度應(yīng)在試劑（盒）測(cè)定線性范圍內(nèi)；

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液或校準(zhǔn)品應(yīng)有溯源性； 1.3比對(duì)試驗(yàn)

采用參考方法或國(guó)內(nèi)/國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批病人樣品（至少40例樣本），從測(cè)定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或— 4 — 在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報(bào)試劑與參比方法相比不會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和參比試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2精密度 2.1批內(nèi)精密度

測(cè)量精密度的評(píng)估應(yīng)至少包括高、低兩個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個(gè)濃度都應(yīng)在試劑盒的測(cè)量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測(cè)指標(biāo)的正常參考值附近和異常高值樣本。批內(nèi)精密度應(yīng)不大于5.0%。2.2批間精密度

用一份樣本分別測(cè)試3個(gè)不同批號(hào)的試劑（盒），每個(gè)批號(hào)測(cè)定3次，測(cè)定均值。按相對(duì)極差（R）＝（Xmax-Xmin）/Xt×100% 公式計(jì)算。相對(duì)極差應(yīng)不大于10.0%。3.線性區(qū)間

建立試劑線性區(qū)間所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響。

以接近線性范圍上限的高濃度（活性）樣品和接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣品，混合成至少5個(gè)稀釋濃度（xi）。分別測(cè)試試劑盒，每個(gè)稀釋濃度測(cè)試3次，分別求出測(cè)定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測(cè)定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程，并計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)（r）。線性范圍上限至少達(dá)500U/L, 線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。

— 5 — 4.最低檢測(cè)限

最低檢測(cè)限的確定常使用同批號(hào)試劑對(duì)零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20次重復(fù)檢測(cè)，平均值加2倍SD（≥95%置信區(qū)間）即試劑的最低檢測(cè)限。5.分析靈敏度 5.1 速率法

用已知濃度或活性的樣品進(jìn)行測(cè)試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化應(yīng)符合企業(yè)給定區(qū)間。5.2 終點(diǎn)法

稀釋一定濃度樣品（n單位被測(cè)物），測(cè)定吸光度，計(jì)算吸光度值與空白吸光度值有差別的樣品濃度應(yīng)符合企業(yè)給定區(qū)間。6.分析特異性

對(duì)樣本中常見的干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，如膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等。方法為對(duì)模擬添加樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請(qǐng)人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。

7.校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源SOP文件等。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計(jì)算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

— 6 — 8.其他需注意問題

應(yīng)當(dāng)對(duì)多批產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。不同適用機(jī)型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評(píng)估報(bào)告。如注冊(cè)申請(qǐng)中包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項(xiàng)目評(píng)估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應(yīng)低于120例。若引用針對(duì)中國(guó)人群參考值范圍研究的相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)明確說明出處，并進(jìn)行驗(yàn)證。參考值研究結(jié)論應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶（待機(jī)）穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等，申請(qǐng)人應(yīng)至少提供3個(gè)生產(chǎn)批次的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運(yùn)輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等，研究應(yīng)涵蓋產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)，申請(qǐng)人應(yīng)至少能提供穩(wěn)定性末期的除裝量和批間差外的評(píng)價(jià)資料。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究（例如：校準(zhǔn)品穩(wěn)定性應(yīng)選取最易受影響的最小裝量，干粉劑型應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料），實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究的時(shí)間間隔應(yīng)不大于3個(gè)月。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)

— 7 — 證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)研究

臨床評(píng)價(jià)資料應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，同時(shí)研究資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)中的基本問題進(jìn)行闡述。1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于擬申報(bào)產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為對(duì)照試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱待評(píng)試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。2.臨床研究單位的選擇

應(yīng)選擇至少兩家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，體外診斷試劑的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，待評(píng)試劑和對(duì)照試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預(yù)試驗(yàn)工作，最大限度地控制試驗(yàn)誤差。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意— 8 — 改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，待評(píng)試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗(yàn)方案必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。4.研究對(duì)象選擇

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對(duì)象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，建議對(duì)各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。總體樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應(yīng)不低于試驗(yàn)總量的30%。樣本中待測(cè)物濃度應(yīng)覆蓋待評(píng)試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。應(yīng)明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。實(shí)驗(yàn)中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時(shí)，注明貯存條件及時(shí)間，在數(shù)據(jù)分析時(shí)應(yīng)考慮其影響。如果待評(píng)試劑同時(shí)適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個(gè)樣本類型不少于200例的臨床研究，同時(shí)驗(yàn)證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測(cè)試結(jié)果間的一致性（采用待評(píng)試劑檢測(cè)），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。也可以分別對(duì)同時(shí)適用的多個(gè)樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）中試驗(yàn)樣本量一般要求規(guī)定的200例進(jìn)行試驗(yàn)，異常值參照上述規(guī)定。

涉及產(chǎn)品檢測(cè)條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類

— 9 — 型等變更事項(xiàng)，臨床試驗(yàn)采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，在至少2家（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于30%。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對(duì)偏倚/偏差及相對(duì)偏倚/偏差分析等。對(duì)于對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，最常用是對(duì)待評(píng)試劑和參比試劑兩組檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)待評(píng)試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。6.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。6.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

6.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。6.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。6.2具體的臨床試驗(yàn)情況

6.2.1待評(píng)價(jià)試劑和參比試劑的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信— 10 — 息。

6.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品回收（或測(cè)量值）、抽查結(jié)果評(píng)估。6.2.4具體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存等。6.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

6.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、對(duì)異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。

6.3.2定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評(píng)試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。6.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

對(duì)體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié),從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)和相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

風(fēng)險(xiǎn)分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：預(yù)期用途錯(cuò)誤包括：設(shè)計(jì)開始時(shí)未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機(jī)型驗(yàn)證、未針對(duì)特定的樣本類型驗(yàn)證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測(cè)量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯(cuò)誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計(jì)要求的性能、— 11 — 原材料儲(chǔ)存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e(cuò)誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗(yàn)者未按照原料、半成品、成品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組份、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲(chǔ)存或運(yùn)輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果,依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。

進(jìn)口產(chǎn)品的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)當(dāng)包括英文版和中文版，英文版應(yīng)當(dāng)由申請(qǐng)人簽章，中文版由申請(qǐng)人或其代理人簽章。

下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容作簡(jiǎn)要敘述。產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：

（1）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性

（2）YY/T 0638—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)物中酶催化濃度賦值的計(jì)量學(xué)溯源性（3）GB/T 26124-2011 臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）

（4）YY/T 1197-2013丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（IFCC法）（5）WS/T 404.1-2012臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶 — 12 — 2.主要性能指標(biāo)： 2.1外觀：

符合制造商規(guī)定的正常外觀要求。2.2裝量：

液體試劑的裝量應(yīng)不少于標(biāo)示量。2.3試劑空白 2.3.1空白吸光度：

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測(cè)試時(shí)，試劑空白吸光度應(yīng)不小于1.0（340nm,1cm)。2.3.2空白吸光度變化率（終點(diǎn)法不適用）：

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測(cè)試時(shí)，試劑空白吸光度變化率△A/min(37℃，340nm,1cm)應(yīng)不大于0.004。

2.4分析靈敏度

2.4.1速率法：用已知濃度或活性的樣品進(jìn)行測(cè)試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化應(yīng)符合制造商給定區(qū)間。

2.4.2終點(diǎn)法：稀釋一定濃度（n單位）的樣品（檢測(cè)限樣品），測(cè)定吸光度，計(jì)算吸光度值能夠與空白吸光度區(qū)分的樣品濃度應(yīng)符合制造商給定區(qū)間。2.5線性區(qū)間

線性區(qū)間上限至少達(dá)到500 U/L。2.5.1相關(guān)系數(shù)（r）

線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900（線性范圍下限應(yīng)不低于產(chǎn)品的最低檢測(cè)線，不高于參考區(qū)間下限）。2.5.2線性偏差

— 13 — 線性偏差應(yīng)不超過申請(qǐng)人給定值。線性偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應(yīng)注意分段點(diǎn)的確定。2.6精密度 2.6.1批內(nèi)精密度

測(cè)量精密度的評(píng)估應(yīng)至少包括高、低兩個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個(gè)濃度都應(yīng)在試劑盒的測(cè)量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測(cè)指標(biāo)的正常參考值附近和異常高值樣本。批內(nèi)精密度應(yīng)不大于5.0%。2.6.2 批間精密度

用一份質(zhì)控品分別測(cè)試3個(gè)不同批號(hào)的試劑（盒），每個(gè)批號(hào)測(cè)定3次，測(cè)定均值。相對(duì)極差應(yīng)不大于10.0%。2.7準(zhǔn)確度

2.7.1相對(duì)偏差 提供參考物質(zhì)或用參考方法定值的血清測(cè)定，實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值偏差應(yīng)在±15.0%范圍內(nèi)。

2.7.2回收試驗(yàn) 在臨床樣本中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會(huì)產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后樣品總濃度必須在試劑（盒）測(cè)定線性范圍內(nèi)）或純品，回收試驗(yàn)一般選取兩個(gè)或兩個(gè)以上濃度進(jìn)行，回收率應(yīng)在90%～110%之間。

2.7.3比對(duì)試驗(yàn) 用待測(cè)試劑盒與申請(qǐng)人選定分析系統(tǒng)（已在國(guó)內(nèi)上市）分別檢測(cè)不少于40個(gè)在檢測(cè)范圍內(nèi)的人源樣品，用線性回歸方法計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r≥0.990以及每個(gè)濃度點(diǎn)的偏差，偏差應(yīng)不超過申請(qǐng)人給定值。偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應(yīng)注意分段點(diǎn)的確定。

建議按上述優(yōu)先順序，采用上述方法之一測(cè)試試劑盒的準(zhǔn)確度。2.8穩(wěn)定性

檢測(cè)申請(qǐng)人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、精密度、準(zhǔn)確度要求。凍干品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗(yàn)，— 14 — 產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、測(cè)量精密度、準(zhǔn)確度要求。

2.9校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準(zhǔn)確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測(cè)批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。

（十）注冊(cè)檢驗(yàn)

具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評(píng)價(jià)意見。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶項(xiàng)目目前有國(guó)家參考物質(zhì)和國(guó)際參考物質(zhì)，應(yīng)當(dāng)使用國(guó)家參考品或國(guó)際參考物質(zhì)進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)，并符合相關(guān)要求。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，下面對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。1.【產(chǎn)品名稱】

（1）通用名稱，試劑（盒）名稱由三部分組成：被測(cè)物名稱、用途、方法或原理。例如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（丙氨酸底物法）。通用名稱應(yīng)當(dāng)按照《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》規(guī)定的命名原則進(jìn)行命名，可適當(dāng)參考相關(guān)“分類目錄”和/或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。（2）英文名稱應(yīng)當(dāng)正確、完整、直譯，不宜只寫縮寫。2.【包裝規(guī)格】

注明可測(cè)試的樣本數(shù)或裝量，如××測(cè)試/盒、××人份/盒、××mL，— 15 — 除國(guó)際通用計(jì)量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進(jìn)行表述。包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙或其他多試劑類型。

3.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1說明試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清/血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性；同時(shí)應(yīng)明確與目的檢測(cè)物相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況。3.2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶主要用于輔助評(píng)價(jià)肝功能。ALT是反映肝損傷的靈敏指標(biāo)，各種急性肝損傷（如急性傳染性肝炎及藥物或酒精中毒）時(shí)，血清ALT可在臨床癥狀（如黃疸）出現(xiàn)之前急劇升高等，并一般與病情輕重和恢復(fù)情況相平行；慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝淤血等血清ALT也可升高。另外，膽囊炎、膽石癥、胰腺炎、心肌梗死及服用某些藥物（如氯丙嗪、奎寧、水楊酸制劑等）時(shí)可見血清ALT升高。作為支持性資料，申請(qǐng)人應(yīng)提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻(xiàn)或英文SCI文獻(xiàn)等有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景的資料。

4.【檢驗(yàn)原理】應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡(jiǎn)要說明檢驗(yàn)的原理、方法，必要時(shí)可采取圖示方法表示，檢測(cè)原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測(cè)物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述：

如：在ALT的催化下，丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應(yīng)生成乳酸和NAD-。NADH在波長(zhǎng)340nm有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在340nm處測(cè)定NADH吸光度下降的速率，即可計(jì)算出ALT活性。

ALT??? 谷氨酸+丙氨酸 丙氨酸+α-酮戊二酸 ?LDH?? 乳酸+NAD 丙氨酸+NADH+H??+

+5.【主要組成成份】應(yīng)明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；— 16 — 如含有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，除明確組成成份及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級(jí)別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號(hào)，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。例如：

本試劑盒由試劑

1、試劑2和校準(zhǔn)品（選購）組成：

試劑1： 三羥甲基氨基甲烷緩沖液 100mmol/L，L-丙氨酸 500mmol/L，乳酸脫氫酶 1700U/L 試劑2：α-酮戊二酸15mmol/L，NADH 0.18mmol/L 校準(zhǔn)品：含有丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的溶液，校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國(guó)家參考物質(zhì)或國(guó)際參考物質(zhì)。6.【儲(chǔ)存條件及有效期】應(yīng)明確未開封的試劑實(shí)際儲(chǔ)存條件及有效期，開封后的待機(jī)穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。7.【適用儀器】應(yīng)明確可適用的具體品牌、型號(hào)的生化分析儀器。8.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長(zhǎng)期），運(yùn)輸條件,對(duì)已知干擾物的抗干擾性（如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對(duì)測(cè)定的影響，同時(shí)列出干擾物的具體濃度）等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求（如：草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。

9.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括： 9.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)；

9.2試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、測(cè)定主/副波長(zhǎng)、試劑用量、樣本用量、測(cè)定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時(shí)間等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)；

— 17 — 9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、質(zhì)量控制方法。

9.5試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算或讀?。簯?yīng)明確檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算方法。包括對(duì)每個(gè)系數(shù)及對(duì)每個(gè)計(jì)算步驟的解釋。

10.【參考區(qū)間】應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并說明參考值確定方法。

11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】說明可能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

12.【檢驗(yàn)方法的局限性】說明該檢驗(yàn)方法的局限性。當(dāng)測(cè)定值超出線性上限時(shí)，應(yīng)說明使用廠家提供的專用稀釋液或明確稀釋方法，并給出稀釋最大倍數(shù)說明。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)，性能指標(biāo)應(yīng)與技術(shù)要求有關(guān)技術(shù)指標(biāo)的要求一致。13.1試劑空白； 13.2分析靈敏度； 13.3準(zhǔn)確度；

13.4精密度（批內(nèi)精密度和批間精密度）； 13.5線性區(qū)間（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。14.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會(huì)產(chǎn)生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋。

14.4 有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他— 18 — 人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

14.5對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待。14.6其他有關(guān)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定的注意事項(xiàng)。

15.【標(biāo)識(shí)的解釋】如有圖形或符號(hào)，請(qǐng)解釋其代表的意義。16.【參考文獻(xiàn)】注明引用參考文獻(xiàn)，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。17.【基本信息】 17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊(cè)人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息： 注冊(cè)人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號(hào)，生產(chǎn)日期 17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊(cè)人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號(hào)，生產(chǎn)日期 17.2進(jìn)口體外診斷試劑 按照以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊(cè)人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式，生產(chǎn)日期 18 【醫(yī)療器械注冊(cè)證編號(hào)/產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)】應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊(cè)證編號(hào)/產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào) 【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過說明書的變更申請(qǐng)，還應(yīng)該同時(shí)注明說明書的修改日期。

三、參考文獻(xiàn)：

1.《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第

— 19 — 5號(hào)）

2.《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號(hào)）

3.《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）

4.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）

5.《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）

6.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）（原中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司）

7.GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》

8.GB/T 26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》

9.YY/T 0638—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)物中酶催化濃度賦值的計(jì)量學(xué)溯源性

10.YY/T 1197-2013《丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（IFCC法）》 11.YY/T 1227-2014《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》 12.WS/T 404.1-2012臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶

— 20 — 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒 注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則編寫說明

一、編寫原則

編制本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)和規(guī)范注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，簡(jiǎn)稱ALT)測(cè)定試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫工作，同時(shí)幫助審查人員理解和掌握該類產(chǎn)品原理、組成、性能、預(yù)期用途等內(nèi)容，把握技術(shù)審評(píng)工作基本要求和尺度，對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評(píng)價(jià)。

由于丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒產(chǎn)品仍在不斷發(fā)展，審查人員仍需從風(fēng)險(xiǎn)分析的角度認(rèn)真確定申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途與風(fēng)險(xiǎn)管理是否相當(dāng)；由于我國(guó)醫(yī)療器械法規(guī)框架仍在構(gòu)建中，審查人員仍需密切關(guān)注相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及最新進(jìn)展，關(guān)注審評(píng)產(chǎn)品實(shí)際組成、原理、預(yù)期用途等方面的個(gè)性特征，以保證產(chǎn)品審評(píng)符合現(xiàn)行法規(guī)安全、有效的要求。

二、指導(dǎo)原則部分內(nèi)容說明

（一）指導(dǎo)原則主要根據(jù)體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料的要求，借鑒國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關(guān)產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則的體例進(jìn)行編寫，以便于注冊(cè)技術(shù)審評(píng)人員理解。

（二）產(chǎn)品的主要技術(shù)指標(biāo)制定主要參考相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1197—2013《丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（IFCC法）》、GB/T 26124—2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》。

（三）關(guān)于檢測(cè)樣本類型說明：本指導(dǎo)原則起草過程中檢索了全國(guó)范圍內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的注冊(cè)信息，同時(shí)查閱了有關(guān)臨床專著，未能查詢到其他樣本類型中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與臨床適應(yīng)癥的直接對(duì)應(yīng)關(guān)系。為避免對(duì)注冊(cè)申報(bào)企業(yè)和審評(píng)人員造成誤導(dǎo)，本指導(dǎo)原則的適用范圍僅限于血清、血漿兩種樣本類型。

（四）關(guān)于產(chǎn)品名稱說明：本指導(dǎo)原則關(guān)于產(chǎn)品方法學(xué)名稱的舉例參考YY/T 1227-2014《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》，同時(shí)參考了已上市的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒產(chǎn)品（如：將連續(xù)監(jiān)測(cè)法/速率法規(guī)范為丙氨酸底物法，將賴氏法規(guī)范為2,4-二硝基苯肼法）。

（五）關(guān)于注冊(cè)檢驗(yàn)使用有證參考物質(zhì)說明：本指導(dǎo)原則編寫過程中充分參考了產(chǎn)品專業(yè)廠家代表意見，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒配套校準(zhǔn)品可溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW(E)090593）或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（ERM?-AD454/IFCC），故建議注冊(cè)檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)使用國(guó)家參考品或國(guó)際參考物質(zhì)進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)，并符合相關(guān)要求。

（六）關(guān)于綜述資料、產(chǎn)品說明書中有關(guān)與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景的說明：臨床意義的描述參考自《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）》

（七）關(guān)于參考區(qū)間的驗(yàn)證資料中對(duì)健康個(gè)體至少120例的說明：此例數(shù)的規(guī)定，結(jié)合已發(fā)布產(chǎn)品技術(shù)審查指導(dǎo)原則，并參考《WS/T 402-2012臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》以及《C28-A2 如何確定臨床檢驗(yàn)的參考區(qū)間：批準(zhǔn)指南（2000）》。

（八）產(chǎn)品的原材料選擇、生產(chǎn)工藝、使用方法等因素，需按照企業(yè)的研發(fā)資料設(shè)計(jì)，企業(yè)的注冊(cè)資料中應(yīng)包括此方面的研究資料，由于各企業(yè)對(duì)產(chǎn)品的研發(fā)情況不一定相同，故本指導(dǎo)原則中不作強(qiáng)制性要求，注冊(cè)審評(píng)人員應(yīng)按照企業(yè)具體的研究資料進(jìn)行審查。

三、編寫人員

本指導(dǎo)原則編寫人員由浙江省醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)人員、行政審批人員、檢驗(yàn)和臨床專家、產(chǎn)品專業(yè)廠家代表等共同組成，起草過程中廣泛征求了國(guó)家總局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心、相關(guān)省局、有關(guān)體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)和臨床使用單位的意見，以充分利用各方面的信息和資源，綜— 22 — 合考慮指導(dǎo)原則中各個(gè)方面的內(nèi)容，盡量保證指導(dǎo)原則可操作性和指導(dǎo)性。

第五篇：2016-《人類體外輔助生殖技術(shù)用液注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》(征求意見稿)

附件1

人類體外輔助生殖技術(shù)用液注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

（征求意見稿）

一、前言

本指導(dǎo)原則旨在為食品藥品監(jiān)管部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供技術(shù)指導(dǎo)，同時(shí)也為注冊(cè)申請(qǐng)人/生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行人類體外輔助生殖用液體類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)提供參考。

本指導(dǎo)原則系對(duì)人類體外輔助生殖技術(shù)用液體類醫(yī)療器械產(chǎn)品的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人/生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則是對(duì)注冊(cè)申請(qǐng)人/生產(chǎn)企業(yè)和審評(píng)人員的技術(shù)指導(dǎo)性文件，不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行。如果有其他科學(xué)合理的替代方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則所涉及的人類體外輔助生殖技術(shù)用液，是指與人類配子和/或胚胎發(fā)生直接或間接接觸，以獲取、制備、培養(yǎng)、移植或貯存人類配子和/或胚胎的液體類醫(yī)療器械產(chǎn)品，如：取卵液、洗精液、精子梯度分離液、精子制動(dòng)劑、配子緩沖液、卵裂胚培養(yǎng)液、囊胚培養(yǎng)液、胚胎冷凍液、胚胎解凍液、石蠟培養(yǎng)油等。

本指導(dǎo)原則不適用于非按照醫(yī)療器械管理的用以添加到培養(yǎng)基中以改善其性能的培養(yǎng)基補(bǔ)充劑類產(chǎn)品（如白蛋白、血清、抗生素等）。

三、注冊(cè)單元?jiǎng)澐?/p>

化學(xué)成分或配比不同的產(chǎn)品應(yīng)劃分為不同的注冊(cè)單元（用于同一操作步驟的配套產(chǎn)品除外）。

四、注冊(cè)申報(bào)資料要求

注冊(cè)申報(bào)資料按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局2014年第43號(hào)公告《醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》進(jìn)行提供，尤其注意以下幾方面內(nèi)容：

（一）綜述資料

1.詳述產(chǎn)品作用原理，提供在取卵、取精、受精、體外培養(yǎng)、胚胎移植等過程中產(chǎn)品預(yù)期與人體、配子、合子/胚胎接觸的情況，包括接觸部位、接觸方式、接觸時(shí)間（包括多量次產(chǎn)品的積累時(shí)間），提供預(yù)期的最長(zhǎng)接觸時(shí)間的確定依據(jù)及相關(guān)研究資料。

2.以表格形式提供產(chǎn)品配方（投料比）及終產(chǎn)品中所有組成成分的中文標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)名稱、各組分所占濃度、作用。

3.提供產(chǎn)品原材料相關(guān)資料，包括各原材料來源、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及驗(yàn)證數(shù)據(jù)等。申請(qǐng)人/生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)提交相關(guān)資料以說明各組分的安全性、有效性，如材料安全性數(shù)據(jù)表、相關(guān)毒理學(xué)數(shù)據(jù)、臨床應(yīng)用史等支持資料。說明組成材料中是否含有藥品成分，若有請(qǐng)對(duì)其中所含藥品提供獲我國(guó)注冊(cè)或獲生產(chǎn)國(guó)（地區(qū)）批準(zhǔn)上市的證明性文件。關(guān)于產(chǎn)品用水，請(qǐng)?zhí)峁┢滟|(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證報(bào)告。

4.型號(hào)規(guī)格：對(duì)于存在多種型號(hào)規(guī)格的產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)明確各型號(hào)規(guī)格的區(qū)別，對(duì)于各型號(hào)規(guī)格的結(jié)構(gòu)組成、功能及性能指標(biāo)等方面加以描述。

5.描述產(chǎn)品具體采用的包裝容器的材料和規(guī)格。采用的產(chǎn)品包裝容器材料應(yīng)通過毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，提供其來源、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及包裝容器材料的安全性證明資料。明確包裝容器材料是否含有具有潛在致癌、致畸及致突性風(fēng)險(xiǎn)的成分（如鄰苯二甲酸鹽等）。

6.適用范圍和禁忌癥：申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)臨床資料規(guī)范申報(bào)產(chǎn)品的適用范圍，明確產(chǎn)品適用的體外輔助生殖階段及其具體作用。如適用，應(yīng)當(dāng)說明產(chǎn)品不適宜應(yīng)用的某些情況或特定的人群。7.以表格形式提供國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品動(dòng)態(tài)分析情況，包括國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的上市情況及與申報(bào)產(chǎn)品在工作原理、組成成分及含量、性能指標(biāo)、適用范圍等方面的對(duì)比情況。

（二）研究資料 1.產(chǎn)品性能研究

（1）詳述產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)及檢驗(yàn)方法的確定依據(jù)，提供采用的原因及理論基礎(chǔ)，提供涉及到的研究性資料、文獻(xiàn)資料和/或標(biāo)準(zhǔn)文本。

（2）提供各成分濃度選擇的依據(jù)。

（3）若申報(bào)產(chǎn)品的成分及含量與已在國(guó)內(nèi)上市同類產(chǎn)品差別較大，則需提供產(chǎn)品對(duì)配子功能、合子形成、著床前及著床后胚胎生長(zhǎng)發(fā)育、行為發(fā)育影響的臨床前研究資料。必要時(shí)，需進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。

（4）提供本企業(yè)系列產(chǎn)品合用后對(duì)胚胎形成的整體性研究資料。

（5）提供藥物與其他成分相互作用及穩(wěn)定性研究資料。（6）提供產(chǎn)品與市場(chǎng)上其它培養(yǎng)基和輔助生殖技術(shù)溶液兼容性的研究資料。

（7）若含有抗生素成分，請(qǐng)分析說明抗生素對(duì)配子、合子或胚胎的影響。

（8）產(chǎn)品可降解成分的降解可導(dǎo)致組分濃度降低以及有害副產(chǎn)物形成，提供存貯有效期內(nèi)申報(bào)產(chǎn)品中可降解成分降解情況的研究資料，包括關(guān)鍵性組分的降解情況、有害生物副產(chǎn)品的生成情況，分析說明降解產(chǎn)物對(duì)終產(chǎn)品潛在安全有效性的影響。

2.生物相容性評(píng)價(jià)研究

需對(duì)成品中與患者、配子或胚胎直接或間接接觸的材料的生物相容性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

生物相容性評(píng)價(jià)研究資料需包括：（1）生物相容性評(píng)價(jià)的依據(jù)和方法。

（2）產(chǎn)品所用材料的描述及與人體接觸的性質(zhì)。（3）實(shí)施或豁免生物學(xué)試驗(yàn)的理由和論證。（4）對(duì)于現(xiàn)有數(shù)據(jù)或試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)。

對(duì)于可能接觸母體的產(chǎn)品，需考慮進(jìn)行的生物相容性評(píng)價(jià)/試驗(yàn)項(xiàng)目包括細(xì)胞毒性、致敏和陰道刺激；對(duì)于可能接觸卵子、合子或胚胎的產(chǎn)品，需考慮進(jìn)行的生物相容性評(píng)價(jià)/試驗(yàn)項(xiàng)目包括鼠胚形成和遺傳毒性；對(duì)于可能接觸精子的產(chǎn)品，需考慮進(jìn)行的生物相容性評(píng)價(jià)/試驗(yàn)項(xiàng)目包括人精子存活和遺傳毒性。由于囊胚細(xì)胞數(shù)是一項(xiàng)評(píng)價(jià)胚胎發(fā)育狀況的敏感和定量指標(biāo)，因此在具備技術(shù)條件的情況下，鼓勵(lì)鼠胚試驗(yàn)兼用囊胚細(xì)胞計(jì)數(shù)法對(duì)發(fā)育期的胚胎進(jìn)行分析（試驗(yàn)品處理組與陰性對(duì)照組相比囊胚細(xì)胞數(shù)應(yīng)無明顯差異）。

對(duì)于以上不適用的項(xiàng)目，應(yīng)提供充分的理由和論證。如對(duì)于高滲溶液（如配子/胚胎冷凍復(fù)蘇液），可能有些生物相容性評(píng)價(jià)項(xiàng)目不適用。

若可能，各項(xiàng)生物相容性試驗(yàn)需采用樣品原液進(jìn)行。若采用原液進(jìn)行試驗(yàn)不可操作，則進(jìn)行適當(dāng)稀釋/浸提，并提供不使用原液的理由以及稀釋/浸提比例的依據(jù)。

若申報(bào)產(chǎn)品中（包括包裝容器）所含成分具有致癌、致畸及致突性潛在風(fēng)險(xiǎn)，生產(chǎn)商應(yīng)對(duì)該成分的應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)的分析說明，說明有無相關(guān)替代成分，并提供產(chǎn)品致癌性、致突變性及生殖毒性的生物相容性評(píng)價(jià)資料。

3.生物安全性研究

如產(chǎn)品中含有人源性成分和/或動(dòng)物源性成分，請(qǐng)?zhí)峁╆P(guān)于病毒和/或傳染性病原體感染以及免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)分析及控制措施的描述和驗(yàn)證資料（可參考《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證指導(dǎo)原則》和《動(dòng)物源性醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料指導(dǎo)原則》）。對(duì)于含有同種異體材料、動(dòng)物源性材料或生物活性物質(zhì)的產(chǎn)品，生物安全性研究資料應(yīng)包括以下內(nèi)容：說明材料的獲取、加工、保存、測(cè)試和處理過程；闡述來源（包括捐獻(xiàn)者篩選細(xì)節(jié)）,并提供生產(chǎn)過程中對(duì)病毒、其他病原體及免疫源性物質(zhì)去除或滅活方法的驗(yàn)證報(bào)告、工藝驗(yàn)證的簡(jiǎn)要總結(jié)等。對(duì)于人源性成分，還應(yīng)對(duì)其人源供體的病毒傳染風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析說明。

4.滅菌/消毒工藝研究

描述用于保證產(chǎn)品無菌的質(zhì)量保證體系，明確產(chǎn)品滅菌工藝（方法和參數(shù)）和無菌保證水平（SAL），提供滅菌確認(rèn)報(bào)告。如滅菌使用的方法容易出現(xiàn)殘留,需明確殘留物信息及采取的處理方法，并提供研究資料。

5.產(chǎn)品有效期和包裝研究

提供產(chǎn)品有效期的驗(yàn)證報(bào)告（包括產(chǎn)品物理、化學(xué)穩(wěn)定性和包裝密封穩(wěn)定性的驗(yàn)證資料），及開瓶后拋棄日期的驗(yàn)證資料，不同包裝或容器的產(chǎn)品需分別提供。

6.臨床前動(dòng)物試驗(yàn)

如適用，需包括動(dòng)物試驗(yàn)研究的目的、結(jié)果及記錄。7.其他資料

證明產(chǎn)品安全、有效的其他研究資料。

（三）生產(chǎn)制造信息

1.詳述產(chǎn)品生產(chǎn)加工過程，明確產(chǎn)品生產(chǎn)加工工藝，注明關(guān)鍵工藝和特殊工藝，并說明其過程控制點(diǎn)。如適用，請(qǐng)明確產(chǎn)品生產(chǎn)過程中各種加工助劑的使用情況及對(duì)雜質(zhì)（如殘留單體、小分子殘留物等）的控制情況并提交相應(yīng)的驗(yàn)證資料。

2.有多個(gè)研制、生產(chǎn)場(chǎng)地的，需概述每個(gè)研制、生產(chǎn)場(chǎng)地的實(shí)際情況。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

按照《醫(yī)療器械臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》提交臨床評(píng)價(jià)資料。進(jìn)口醫(yī)療器械還應(yīng)提供境外政府醫(yī)療器械主管部門批準(zhǔn)該產(chǎn)品上市時(shí)的臨床評(píng)價(jià)資料。

（五）風(fēng)險(xiǎn)分析資料

體外輔助生殖用液體類產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料應(yīng)注意危害發(fā)生的對(duì)象包括患者/母體（包括捐獻(xiàn)者）、配子、合子和/或胚胎，應(yīng)注意判定產(chǎn)品對(duì)患者、配子、合子和/或胚胎每一種可能的潛在危害，以及危害發(fā)生的原因、危害水平以及采取的降低危害的措施。另外，體外輔助生殖液體類產(chǎn)品應(yīng)注意提供單個(gè)組分的風(fēng)險(xiǎn)分析，尤其是生物源性成分。

（六）產(chǎn)品技術(shù)要求

1.性能指標(biāo)需根據(jù)產(chǎn)品特性制定，包括但不限于：（1）理化性能：外觀、裝量、pH值、滲透壓、重金屬總含量。對(duì)于精子梯度分離液等密度梯度離心介質(zhì)，需制定密度性能指標(biāo)，組織培養(yǎng)油、精子制動(dòng)液需制定黏度要求。

（2）對(duì)于所含藥品成分（如胰島素、抗生素、白蛋白等），需制定藥物定性、定量指標(biāo)。

（3）建議增加特征性組分（除以保持pH值和滲透壓為目的以外的所有水溶性成分）要求和檢測(cè)方法并檢測(cè)，并提供相關(guān)指標(biāo)的確定依據(jù)。關(guān)于特征性檢測(cè)指標(biāo)的要求，如無法在檢測(cè)中心進(jìn)行檢測(cè)，則請(qǐng)以技術(shù)資料形式提供該產(chǎn)品特征性組分的定性定量測(cè)試數(shù)據(jù)。若在終產(chǎn)品中無法測(cè)定，則請(qǐng)進(jìn)行說明，并提供由醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行的其原材料的定性鑒別測(cè)試數(shù)據(jù)。（4）產(chǎn)品使用性能相關(guān)指標(biāo)要求：如對(duì)于精子梯度分離液等精子優(yōu)選產(chǎn)品應(yīng)制定精子回收率等指標(biāo)，精子制動(dòng)劑應(yīng)制定精子制動(dòng)性能指標(biāo)要求。

（5）相關(guān)雜質(zhì)控制指標(biāo)（如適用，如組織培養(yǎng)油等）。（6）無菌，細(xì)菌內(nèi)毒素。

（七）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書需按照總局令第6號(hào)《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》的要求制訂，此外需注意：

1.說明書中應(yīng)明確產(chǎn)品中易降解成分和關(guān)鍵成分在有效期內(nèi)損失情況信息（如谷胱甘肽、丙酮酸、維生素等）。

2.產(chǎn)品說明書及標(biāo)簽中應(yīng)對(duì)產(chǎn)品及包裝材料中相關(guān)致癌、致畸及致突變性成分予以明確（如有，如包裝容器含有鄰苯二甲酸鹽成分等），提示相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)及應(yīng)采取的安全預(yù)防措施。

3.根據(jù)產(chǎn)品與市場(chǎng)上其它培養(yǎng)基和輔助生殖技術(shù)溶液兼容性的研究資料，增加相關(guān)警示信息。

5.明確產(chǎn)品貯存條件及開瓶拋棄日期。

五、參考文獻(xiàn)

[1] GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)》系列標(biāo)準(zhǔn) [2]《中華人民共和國(guó)藥典》

[3] YY/T 0995-2015《人類輔助生殖技術(shù)用醫(yī)療器械 術(shù)語和定義》 [4] YY/T 1434-2016《人類體外輔助生殖技術(shù)用醫(yī)療器械體外鼠胚試驗(yàn)》

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