第一篇：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)

一、實驗材料 1．主要儀器設(shè)備

倒置顯微鏡、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、25ml玻璃培養(yǎng)瓶、吸管；10ml尖底離心管、Ф80mm玻璃培養(yǎng)皿、青霉素小瓶、小鼠用解剖器械（包括眼科剪和眼科鑷）2．試劑

RPMI 1640培養(yǎng)液、平衡緩沖生理鹽水(PBS, pH7.2-7.4)、0.25%胰蛋白酶 3．實驗動物

孕14～15天(E14～16)昆白母鼠，領(lǐng)自福建醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。

二、實驗步驟

1.獲取小鼠胚胎

(1)取孕14～15天的母鼠，斷頸處死，置于蠟盤上

(2)75％酒精消毒后，用剪刀和鑷子剪開下腹皮膚，用兩把彎頭止血鉗夾住切口處的皮膚向頭尾兩側(cè)牽拉即剝皮，用眼科彎鑷和眼科彎剪打開腹腔，暴露出子宮。(3)用眼科彎鑷夾住一側(cè)子宮，分離子宮系膜，眼科彎剪剪斷子宮角和子宮頸，將整個子宮分離下來（注意勿使子宮滑落到腹腔外，避免污染）。將子宮置于無菌濾紙上去除血跡。

(4)在超凈臺內(nèi)將子宮移入預(yù)先盛有PBS的培養(yǎng)皿中，洗滌數(shù)次。

(5)將子宮移入另一盛有PBS的培養(yǎng)皿中，用眼科彎剪沿子宮系膜打開子宮，取出帶有胎膜的胎鼠，并用兩把眼科鑷子剔除胎膜，取出胎鼠（一般有12只）。

(6)將胎鼠移入另一盛有PBS的培養(yǎng)皿中，用眼科剪和眼科鑷去除胎鼠的頭、四肢和內(nèi)臟，得鼠胚軀干。

(7)將鼠胚軀干移至另一盛有PBS的培養(yǎng)皿中，用PBS洗滌兩次至無肉眼可見的血色。

2.小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)（組織塊半消化法）

(1)將干凈的鼠胚軀干移至青霉素小瓶內(nèi)（每6個鼠胚軀干裝1瓶），用眼科直剪剪成約1 mm3以下的碎塊。

(2)用5ml的刻度吸管每瓶加入約3ml的PBS，混勻后連同鼠胚碎塊一起移至一尖底離心管中。

(3)室溫下靜置5min，用刻度吸管吸去上清液，留下鼠胚組織碎塊。

(4)向裝有鼠胚碎塊的離心管內(nèi)加入1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，輕輕吹吸30秒（可見組織塊變得較為粘稠）。

(5)加入1 ml 1640培養(yǎng)液終止消化，室溫下靜置5min，吸去上清液，留下鼠胚組織碎塊沉淀。

(6)每個離心管內(nèi)加入5ml 1640培養(yǎng)液懸浮鼠胚組織塊，并接種到25ml的螺口的培養(yǎng)瓶中（接種時應(yīng)用滴管將組織塊混勻）。(7)做好標(biāo)記（如培養(yǎng)日期，細(xì)胞名稱，編號），將裝有鼠胚組織碎塊的培養(yǎng)瓶放入37℃，5％CO2，100％相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(8)培養(yǎng)的頭兩天不要晃動培養(yǎng)瓶，第三天可以觀察，可見組織碎塊附著于培養(yǎng)瓶底，周圍細(xì)胞呈放射狀生長，此時有多種細(xì)胞類型，有的是呈梭形的成纖維細(xì)胞，有的是呈圓形的上皮細(xì)胞。

第二篇：MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞知識總結(jié)（精選）

MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞知識總結(jié)

2008-06-19 00:00 來源：丁香園

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知識總結(jié)

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1517 關(guān)鍵詞： MEF小鼠 胚胎成纖維細(xì)胞

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的富集

1、給13-14天的孕鼠注射大約0.5ml阿佛丁。當(dāng)鼠麻醉后，實施斷頸法處死小鼠。

2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮膚向后拉，暴露出腹膜。用消毒過的工具，剪開腹壁以暴露出子宮角。將子宮角移到10cm的皿里。用10ml不含鈣鎂離子的PBS洗三遍。

3、用剪刀剪開每一測的胚囊,并將胚胎移到培養(yǎng)皿中。

4、用兩副鐘表鑷子將胎盤和膜與胚胎分離開，分離后切除內(nèi)臟（所有深色的東西）。將胚胎轉(zhuǎn)移到(有蓋)培養(yǎng)皿中，用10ml不含鈣鎂離子的PBS洗三遍。

5、用帶有彎鉤的眼科剪將組織剪碎，當(dāng)你剪的很累以致于不能再剪的時候，加入2ml胰蛋白酶/EDTA繼續(xù)剪。再加入另外5ml胰蛋白酶/EDTA，并在37℃孵育大約20分鐘。此時，返回至第一步，對下一只鼠進(jìn)行操作。

6、執(zhí)行1－4步，到將胚胎置于胰蛋白酶/EDTA中這一步。

7、吹打胰蛋白酶/EDTA中的胚胎，直到有很少的組織物殘留。將皿放回培養(yǎng)箱再孵育10分鐘。

8、用20ml培養(yǎng)基以終止胰蛋白酶/EDTA的消化，將皿中的物質(zhì)轉(zhuǎn)移至50ml錐形管中。

9、混勻管內(nèi)的物質(zhì)，加入到含有20ml培養(yǎng)基的T75培養(yǎng)瓶中。每個培養(yǎng)瓶中裝大約3個胚胎。

10、將這些培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過夜。

11、將胚胎置于PBS中，并重復(fù)第5步。

12、第二天更換培養(yǎng)基，以去除碎片和中毒的細(xì)胞及其分泌的物質(zhì)。

13、當(dāng)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞長到80-90%匯合時并仍處于指數(shù)生長期時，是凍存細(xì)胞的最佳時期。一般說來，這發(fā)生在準(zhǔn)備胚胎的第二天。這可能或早或晚發(fā)生，所以請注意觀察你的培養(yǎng)瓶。

注釋：

我們已用CF－1品系的鼠制備了成纖維細(xì)胞。

培養(yǎng)基成分：

88％ DMEM 10％ FBS 1％ NEAA 1% 雙抗

對于新建立的細(xì)胞系，要對樣本進(jìn)行支原體檢測。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的消化/傳代

1、移去MEF培養(yǎng)基

2、用5ml不含鈣鎂離子的PBS洗滌細(xì)胞（以去除胰蛋白酶的抑制物）。

3、每個培養(yǎng)瓶里加入1.5ml的胰蛋白酶/EDTA（0.05%的胰蛋白酶），消化5min。

4、為了使細(xì)胞分散開，輕輕吹打細(xì)胞。

5、每加入1ml的胰蛋白酶/EDTA，加入至少1ml的MEF培養(yǎng)基以終止胰蛋白酶的消化。

6、將細(xì)胞懸液加入到15ml的錐形管中，吹打幾次，使細(xì)胞分散為單個的。

7、在新的T75培養(yǎng)瓶中加入10mlMEF培養(yǎng)基。

8、將細(xì)胞懸液分裝到新的T75培養(yǎng)瓶中，放在37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

注釋：

MEF培養(yǎng)基成分：

89% DMEM(Gibco # 12100-046)10% FBS(Gibco # 16000-044)1% NEAA(Gibco # 11140-050)MEF每傳一代就會生長得更慢些。你第一次傳代的比例可以是1:5，但是最后一次的傳代（第4代或第5代）比例應(yīng)該是1:2。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的凍存

重懸培養(yǎng)基：

80% DMEM 20% FBS 1% NEAA 凍存培養(yǎng)基：

60％ DMEM 30％ FBS 20％ DMSO

1、用不含鈣鎂離子的PBS洗一次細(xì)胞。

2、加入胰蛋白酶/EDTA37℃消化大約5min。

3、將細(xì)胞吹打下來。

4、加入與胰蛋白酶/EDTA等體積的培養(yǎng)基以終止胰蛋白酶的消化。

5、吹散大塊組織。如果還有大塊組織存在，可將懸液加入到50ml的管中使其沉淀。

6、取上清液，將其分裝到錐形管中，1000rpm離心5min。

7、每個凍存瓶中加入0.5ml（凍存液的一半體積）的重懸培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

8、逐滴加入等體積的（0.5ml/瓶）凍存培養(yǎng)基，混勻?，F(xiàn)在DMSO的濃度是10％。

9、每個凍存瓶中加入1ml的細(xì)胞。

10、迅速將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到凍存的容器中，-70℃凍存過夜。（細(xì)胞不能長時間放置在室溫而含有DMSO的情況下）

11、第二天將細(xì)胞放于液氮中長期保存。注釋：

提前標(biāo)注好凍存細(xì)胞的以下信息：

細(xì)胞系名稱

傳代的代數(shù)

凍存細(xì)胞的數(shù)目

日期

Initials 注明凍存/解凍形式

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的解凍/復(fù)蘇

1、將凍存瓶從液氮中取出。

2、放在37℃水浴中快速解凍，being careful not to immerse the vial above the level of the cap.3、當(dāng)僅還有一點冰晶殘留時，用95％的乙醇消毒凍存瓶的外面，并將其置于hood中。（為什么用95％的乙醇消毒？hood是什么？）

4、輕輕地上下翻轉(zhuǎn)細(xì)胞一次，將它們放入15ml錐形管中。

5、想管中逐滴加入10ml培養(yǎng)基。這一步操作不能少于兩分鐘。做快了對細(xì)胞將是一種打擊，你將得到比其他方法具有更低生活能力的細(xì)胞。6、1000rpm離心5min。

7、將細(xì)胞重懸于10ml培養(yǎng)基中，然后放入T75培養(yǎng)瓶中。

8、放入37℃培養(yǎng)箱。

9、注明凍存/解凍的形式，以更新數(shù)據(jù)。

1、關(guān)于如何確底胚胎期12.5d~13d的小鼠？希望大家能夠介紹一下自己所采用的方法，集思廣益。我所采用的方法是選擇同一天出生的三對小鼠，到成熟（8~10 w）后，分三周合籠，（每周合籠一對），然后待最早合籠的小鼠產(chǎn)崽后，再取另兩個雌鼠的胚胎。不知道這樣行不行，也沒注意別人是怎樣做的。另外問了幾個外科的同學(xué)也沒找到可以查出小鼠孕期的儀器。

2、關(guān)于提取MEF的比較好的protocol

3、關(guān)于MEF轉(zhuǎn)染時起耐受性如何？這個我以后主要做這些，可能會積累一定的經(jīng)驗，但現(xiàn)在肯定有各位朋友已經(jīng)從事或正在從事著方面的工作，希望能夠分享經(jīng)驗。

4、關(guān)于其分泌細(xì)胞因子能力？我從一些文獻(xiàn)上發(fā)現(xiàn)，MEF除了作為胚胎干細(xì)胞的飼養(yǎng)層以外，也是研究天然免疫的重要材料，如日本東京大學(xué)的AKIRA的實驗室，大板大學(xué)的takashi fujita實驗室就發(fā)了相當(dāng)多的文章。從這些文獻(xiàn)可以看出，MEF分泌細(xì)胞因子能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于HEK293等工程細(xì)胞，相當(dāng)于肝實質(zhì)細(xì)胞，略低于幾種免疫細(xì)胞。但較免疫細(xì)胞，我認(rèn)為有其不可替代的優(yōu)勢：

（1）其并不是主要發(fā)揮免疫功能的細(xì)胞，只有在受到外界刺激時才會應(yīng)答，分泌細(xì)胞因子，免疫細(xì)胞在不受刺激時也會為了維持穩(wěn)態(tài)而不斷產(chǎn)生細(xì)胞因子，即使有嚴(yán)格的control 組，但專門的免疫細(xì)胞即使是同一種細(xì)胞（DC，NK，T）但不同的細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力也是參差不齊的。會造成control 相對不一致。

（2）另一方面，由于這些免疫細(xì)胞大部分都是懸浮的，不太容易轉(zhuǎn)染，結(jié)果陽性率也會較低。（3）現(xiàn)在的分離MEF的方法很便宜，不復(fù)雜，而分離純的免疫細(xì)胞（如NK，DC），需要MACS，F(xiàn)ACS等，這對目前國內(nèi)的實驗室經(jīng)費相對緊張的情況來說，不是很劃算。因此除非是需要研究某一種免疫細(xì)胞，如果是為了研究天然免疫或者adaptive immune過程中某中基因，或者蛋白，或者某一信號通路等的作用，MEF 細(xì)胞不失為一種選擇。

網(wǎng)友crepi 的觀點：

1、我每次取的是16~18天的胚鼠 個人覺得無礙 我倒更喜歡大一點的胚胎 更好操作一點

2、我取的是皮膚 然后胰酶4度消化過夜 第二天終止消化 撕掉表皮 留下真皮 減碎 用的100目濾網(wǎng)過濾 這個胰酶消化的時間是個關(guān)鍵 時間長了 細(xì)胞容易死 時間少了，表皮不容易揭下來 我有此就是這樣 消化了15個小時 結(jié)果接種下來的細(xì)胞不能貼壁 全死了

3、我用的培養(yǎng)液是DMEM+10%小牛血清 培養(yǎng)液也是關(guān)鍵 因為雖然都是成纖維細(xì)胞比較潑辣 但總歸是原代 可能還是比較嬌嫩 我前幾天就是這樣 后來發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)液出的問題 測的PH值都8.3了 細(xì)胞不死才怪 畢竟細(xì)胞耐酸不耐堿

4、原代培養(yǎng)的最大天敵還是污染

網(wǎng)友baichangming的觀點：

MEF對培養(yǎng)基和血清的要求不高，一般的都行我用過高糖DMEM和D/F-12，生長情況都行，而且看不出什么差別。血清也是以前用幾百塊錢的國產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清也長得也不錯，因為要養(yǎng)干細(xì)胞，所以現(xiàn)在換成進(jìn)口Gibco胎牛的血清（兩千多/500ml），感覺細(xì)胞的狀態(tài)確實好了一些。我的血清濃度一般是16.66666%。

網(wǎng)友北羽迦樓的觀點： 細(xì)胞沒別的，就是很容易老化，一般我都是1:5~1:3傳代，3代之后細(xì)胞就出現(xiàn)衰老了，我感覺年輕增殖能力強(qiáng)的MEF應(yīng)該有著清晰的細(xì)胞輪廓，細(xì)胞立體效果不錯，在相差顯微鏡下，細(xì)胞核清晰，細(xì)胞纖長，正在分裂或是剛剛分裂的細(xì)胞沒有伸出偽足，但是同樣有著更加明亮的輪廓，與細(xì)胞邊緣相比，細(xì)胞呈深色（我覺得是透光效果不好）。一般在4×下觀察最能看出細(xì)胞的狀態(tài)，此時能看到細(xì)胞呈梭形或是三角形。細(xì)胞鋪展很厲害，細(xì)胞的透光效果增加，說明開始衰老。衰老的MEF最好不要做feeder,但是也不是完全不好。但是要是做轉(zhuǎn)染或是感染的話，出現(xiàn)衰老的MEF就不行了。所以一般就是3代以內(nèi)做。

我們用的就是WiCell的protocal養(yǎng)，和前面那位戰(zhàn)友發(fā)的差不多。只是我們用1mg/ml Collengase IV消化40min，用什么酶不重要，我覺得最重要的就是種盤后的換液。原代2小時不管還有多少米貼都不要，傳代復(fù)蘇后一小時就換。消化的時候也是要舍得，0.05%Trypsin-EDTA(GIBCO)，5min消化不下來的也統(tǒng)統(tǒng)不要。因為健康的MEF就是易消化易貼壁。老化以及混雜的其他細(xì)胞（神經(jīng)、上皮）就沒那么快了。

附帶一句，易消化易貼壁是fibroblast的共性。

第三篇：體外受精與早期胚胎培養(yǎng)教學(xué)設(shè)計

一、學(xué)習(xí)目標(biāo)

1.簡述哺乳動物體外受精技術(shù)的主要操作步驟。

2.簡述哺乳動物胚胎的早期培養(yǎng)方法。

3.認(rèn)同體外受精在家畜快速繁殖中的重要意義。

二、教學(xué)建議

1.課時數(shù):本節(jié)教學(xué)建議用2課時。

2.課時側(cè)重點:

(1)體外受精在家畜快速繁殖中的重要意義。

(2)哺乳動物體外受精技術(shù)的主要操作步驟。

3.教學(xué)策略

教學(xué)過程一定要根據(jù)學(xué)生的具體情況、教材的內(nèi)容、教學(xué)的條件綜合考慮進(jìn)行。本節(jié)教材是在哺乳動物體內(nèi)受精和胚胎發(fā)育的理論基礎(chǔ)上,著重簡述哺乳動物體外受精和胚胎早期培養(yǎng)的技術(shù)方法。本節(jié)內(nèi)容簡單,學(xué)生通過閱讀基本能明白。另外,由于所講內(nèi)容技術(shù)性較強(qiáng),與學(xué)生的生活相距較遠(yuǎn),不易引起學(xué)習(xí)興趣,所以教師可采用探究式的學(xué)習(xí)方法,以“試管?！睘槔?創(chuàng)設(shè)出一種新的學(xué)習(xí)情景,在教師的帶領(lǐng)下,讓學(xué)生以胚胎工程學(xué)家的身份出現(xiàn),親歷其境地去思考和探究“體外受精和早期胚胎培養(yǎng)”的過程,領(lǐng)悟其探究的方法,以達(dá)到激發(fā)興趣、培養(yǎng)能力、獲取知識的目的。對具體的教學(xué)方法建議如下。

教師課前搜集有關(guān)“試管牛”技術(shù)及其發(fā)展的資料,并制作“利用屠宰廠牛卵巢收集卵母細(xì)胞,并工廠化生產(chǎn)試管胚胎”的計算機(jī)輔助教學(xué)軟件(或投影片)。同時,教師布置學(xué)生搜集有關(guān)“試管?！钡馁Y料。

在課堂活動中,教師首先提出問題:“你聽說過試管牛、試管羊嗎?你知道什么是試管動物技術(shù)嗎?”從而引出試管動物技術(shù)的概念及體外受精在家畜快速繁殖中的重要意義,提出本節(jié)主題。

第四篇：2015高中生物 3.2體外受精和早期胚胎培養(yǎng)教學(xué)案 新人教版選修3

A．假陰道法 C．電刺激法

B．手握法 D．化學(xué)誘導(dǎo)法

()5．精子獲能的常用化學(xué)物質(zhì)可能是下列哪一種

A．氯化鈣溶液

C．肝素溶液

B．肝臟提取液 D．氨基酸營養(yǎng)液

()6．試管牛采用的技術(shù)是

①胚胎移植 ②基因工程 ③體外受精 ④克隆技術(shù) A．①③

B．②③

C．①②

D．①④

()7．下列各組物質(zhì)組成不全部屬于哺乳動物胚胎培養(yǎng)液成分的是 A．氨基酸、核苷酸、無機(jī)鹽、激素 B．血清、激素、維生素、有機(jī)鹽 C．核苷酸、維生素、血清、無機(jī)鹽 D．有機(jī)鹽、維生素、氨基酸、生長素 8．關(guān)于早期胚胎培養(yǎng)的說法，不正確的是

A．發(fā)育培養(yǎng)液的成分通常含有血清

B．發(fā)育培養(yǎng)液的成分較一般動物細(xì)胞培養(yǎng)液的成分簡單 C．動物種類不同，進(jìn)行胚胎移植的早期胚胎所處階段不同

()D．進(jìn)行胚胎移植之前，可將培養(yǎng)到適宜時期的早期胚胎進(jìn)行保存

9．以下是制定并研究設(shè)計的“試管?！惫S化生產(chǎn)技術(shù)流程，其中正確的順序應(yīng)是()①卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng) ②精子的采集和獲能 ③畫出“試管?！惫S化生產(chǎn)技術(shù)流程圖 ④受精 ⑤胚胎的早期培養(yǎng) A．①②③④⑤

C．①②④③⑤

B．①②④⑤③ D．①②⑤④③

()10．下列關(guān)于培育試管嬰兒的敘述，不正確的是

A．培育試管嬰兒要進(jìn)行體外受精過程 B．試管嬰兒的發(fā)育場所主要在試管內(nèi) C．試管嬰兒的發(fā)育場所主要在母體內(nèi) D．試管嬰兒具有雙親的遺傳特性 11．哺乳動物體外受精的過程是()

①采卵 ②收集精子 ③卵母細(xì)胞的人工培養(yǎng) ④精子獲能處理 ⑤精子和成熟卵子在受精液中共同培養(yǎng) ⑥精子用CaCl2處理 ⑦卵母細(xì)胞用一定濃度的肝素溶液處理 ⑧體外受精 ⑨受精卵培養(yǎng) A．①→②②→⑥⑤⑧⑨ B．①→③②→④⑤⑧⑨ C．①→⑦②→④⑧⑤⑨ D．①→③②→⑥⑧⑤⑨

12．早期胚胎體外培養(yǎng)的過程中，下列哪一項條件是不需要的

A．消毒滅菌 C．充足的光照

B.適宜的溫度 D．適宜的養(yǎng)料和激素

()

()13．關(guān)于牛體外受精胚胎的工廠化生產(chǎn)，敘述正確的是

A．精子和卵子受精形成受精卵后可移入母牛子宮

B．采集的卵母細(xì)胞應(yīng)立即與精子共同放入培養(yǎng)液才能形成受精卵

C．成熟卵子與收集來的精子相遇形成的受精卵，需培養(yǎng)到一定階段才可移植 D．體外受精胚胎的工廠化生產(chǎn)即胚胎發(fā)育和受精過程只需在體外進(jìn)行 14．回答關(guān)于“試管?！迸嘤膸讉€問題。

(1)剛剛排出的精子不能立即與卵子受精，必須在雌性動物的生殖道內(nèi)或體外類似于生殖道的理化條件下發(fā)生相應(yīng)的生理變化后，才能獲得受精能力，這一現(xiàn)象叫__________。(2)生產(chǎn)上常用__________激素促進(jìn)雌性動物排卵，該激素由__________(器官)分泌。(3)受精后的卵細(xì)胞在培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，形成了一個約32個細(xì)胞的小胚胎，此時受精卵大約經(jīng)歷了__________次細(xì)胞分裂，培養(yǎng)液必須含有的不同于植物培養(yǎng)基的成分是__________________。

(4)試管牛培育過程涉及的工程技術(shù)手段主要有

________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。15．據(jù)早期胚胎發(fā)育的過程，回答下列問題：

①受精卵→②卵裂期→③__________→④__________→⑤原腸胚→⑥幼體(1)③、④分別是胚胎早期發(fā)育的什么階段？(在橫線上填出)(2)③階段細(xì)胞達(dá)32個左右，此時細(xì)胞屬于________細(xì)胞，具有__________性。(3)④階段細(xì)胞開始出現(xiàn)__________，__________將來發(fā)育成胎兒的各種組織，______________將來發(fā)育成胎盤和胎膜，出現(xiàn)______腔后，進(jìn)一步擴(kuò)大會導(dǎo)致__________的破裂。

(4)⑤原腸胚階段內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的__________細(xì)胞形成外胚層，下方的細(xì)胞形成內(nèi)胚層，出現(xiàn)________腔。

(5)從受精卵到原腸胚的形成，細(xì)胞的分裂方式是______________。16．請回答胚胎工程和基因工程方面的問題。

(1)應(yīng)用胚胎工程技術(shù)可以培育出“試管?！薄Ｔ嚬芘５呐嘤杞?jīng)過體外受精、________________________、______________以及在母體中發(fā)育和產(chǎn)出等過程。(2)在“試管?！钡呐嘤^程中，要使精子和卵母細(xì)胞在體外成功結(jié)合，需要對精子進(jìn)行處理，使其__________。另外，培養(yǎng)的卵母細(xì)胞需要發(fā)育至減數(shù)第二次分裂的中期，該時期在顯微鏡下可觀察到次級卵母細(xì)胞和___________________________________。(3)通常奶牛每次排出一枚卵母細(xì)胞，采用激素處理可使其一次排出多枚卵母細(xì)胞，常使用的激素是______________。

(4)利用基因工程可以獲得轉(zhuǎn)基因牛，從而改良奶牛的某些性狀?；蚬こ痰乃膫€基本操作步驟是______________、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、______________________和______________________。若要使獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中含有人干擾素，則所構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、________________、________、____________和復(fù)制原點等。將該基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞所采用的方法是______________(顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法)，為獲得能大量產(chǎn)生人干擾素的基因牛，該基因表達(dá)載體應(yīng)導(dǎo)入的受體細(xì)胞是______________(受精卵、乳腺細(xì)胞)。

答案

1．D 2．B 3．D 4．C 5．C 6．A 7．D 8．B 9．B 10．B 11．B 12．C 13．C 14．(1)精子獲能(2)促性腺 垂體(3)5 動物血清(4)體外受精、胚胎的早期培養(yǎng)和胚胎移植

15．(1)桑椹胚 囊胚(2)全能干 全能(3)分化 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 滋養(yǎng)層細(xì)胞 囊胚 透明帶(4)表層 原腸(5)有絲分裂 16．(1)早期胚胎培養(yǎng) 胚胎移植

(2)獲能 第一極體

(3)促性腺激素(其他合理答案也可)(4)獲取目的基因 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測與鑒定 人干擾素基因(或目的基因)終止子 標(biāo)記基因 顯微注射法 受精卵

第五篇：2017-2018年高中生物專題3胚胎工程3.2體外受精和早期胚胎培養(yǎng)檢測新人教版選修3課件

專題3 胚胎工程 3.2 體外受精和早期胚胎培養(yǎng)

1．精子獲能的常用化學(xué)物質(zhì)可能是下列哪一種()A．氯化鈣溶液

C．肝素溶液

B．肝臟提取液 D．氨基酸營養(yǎng)液

解析：精子體外獲能的方法有培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法兩種?；瘜W(xué)誘導(dǎo)法即將精子放在一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液中，使用化學(xué)藥物誘導(dǎo)精子獲能。

答案：C 2．哺乳動物體外受精的過程是()①采卵 ②收集精子 ③卵母細(xì)胞的人工培養(yǎng) ④精子獲能處理 ⑤精子和成熟卵子在受精液中共同培養(yǎng) ⑥精子用CaCl2處理 ⑦卵母細(xì)胞用一定濃度的肝素溶液處理 ⑧體外受精 ⑨受精卵培養(yǎng)

解析：無論是采集的卵子還是精子，在受精以前必須經(jīng)過處理，在受精溶液中培養(yǎng)成具有受精能力的成熟生殖細(xì)胞，然后才能進(jìn)行體外受精。

答案：B 3．愛德華茲以他在體外受精技術(shù)領(lǐng)域做出的開創(chuàng)性貢獻(xiàn)而獲得2010年諾貝爾生理學(xué)或 醫(yī)學(xué)獎。關(guān)于體外受精技術(shù)敘述正確的是()A．獲取的精子經(jīng)獲能后才能進(jìn)行體外受精

B．采集的卵母細(xì)胞應(yīng)立即與精子共同放入培養(yǎng)液中才能形成受精卵 C．精子和卵細(xì)胞受精形成受精卵后即可移入母體子宮 D．精子與卵子相遇后，會發(fā)生頂體反應(yīng)，防止多精入卵

解析：B錯誤，卵子必須處于減數(shù)第二次分裂中期才能進(jìn)行受精，采集的卵母細(xì)胞都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后，才能與獲能的精子受精；C錯誤，成熟的卵細(xì)胞與收集來的精子相遇形成受精卵，需培養(yǎng)到一定階段才可移植；D錯誤，防止多精入卵主要通過透明帶反應(yīng)和卵黃膜封閉作用兩道屏障。

答案：A 4．下圖表示通過體外受精培育試管牛的過程，下列敘述錯誤的是()

A．獲取的精子經(jīng)獲能后才能進(jìn)行體外受精 B．②過程只與細(xì)胞膜的流動性有關(guān) C．③過程的細(xì)胞增殖方式一定是有絲分裂 D．④過程屬于胚胎移植過程

解析：獲取的精子必須要經(jīng)過獲能后才能進(jìn)行體外受精，A正確。②表示受精作用，精子釋放頂體酶后，穿越放射冠和透明帶，精子入卵后，形成雌雄原核，最后雌雄原核融合形成合子，因此受精過程不僅僅與細(xì)胞膜的流動性有關(guān)，B錯誤。③表示受精卵的卵裂，其方式為有絲分裂，C正確。④表示將發(fā)育成的早期胚胎移植入母體，D正確。

答案：B 5．控制哺乳動物的性別對于畜牧生產(chǎn)有著十分重要的意義。目前，分離精子技術(shù)是有效的性別控制方法。例如：牛的含X染色體的精子的DNA含量比含Y染色體的精子的DNA含量高出4%左右，利用這一差異人們借助特殊儀器將它們分離開來，再通過胚胎工程技術(shù)就可培育出所需性別的試管牛(如下圖所示)。

根據(jù)以上信息回答下列相關(guān)問題。

(1)試管動物技術(shù)通常是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下________和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育成早期胚胎后，再經(jīng)胚胎移植產(chǎn)生后代的技術(shù)。

(2)圖中①中采集精子時，常采用________法，獲得的精子經(jīng)________________________ 方法處理后才能進(jìn)行受精過程。

(3)圖中過程③通常采用________技術(shù)。在這個過程中________的精子與卵子相遇時，首先發(fā)生________反應(yīng)釋放出有關(guān)的酶直接溶解卵丘細(xì)胞之間的物質(zhì)。防止多精入卵的生理反應(yīng)有_____________ _____________________________________________________。

解析：試管動物的產(chǎn)生過程是通過人工操作獲取精子和卵子，并使它們在體外條件下成熟和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育成早期胚胎后，經(jīng)胚胎移植而產(chǎn)生后代，試管動物可以有選擇性地獲得所需性別，需對早期胚胎進(jìn)行檢測。

答案：(1)成熟(2)假陰道 化學(xué)藥物(一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液)誘導(dǎo)(3)體外受精 獲能 頂體 透明帶反應(yīng)和卵細(xì)胞膜反應(yīng)

A級 基礎(chǔ)鞏固

1．可以與獲能精子進(jìn)行體外受精的卵母細(xì)胞需要培養(yǎng)到什么時期()A．MⅠ

C．桑葚胚期

B．MⅡ D．囊胚期

解析：卵母細(xì)胞要培養(yǎng)到MⅡ中期時就可以受精了，因為MⅡ中期卵母細(xì)胞細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)已成熟，而MⅠ期卵母細(xì)胞細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)尚未成熟，其細(xì)胞質(zhì)不能支持胚胎的全程發(fā)育。

答案：B 2．發(fā)展試管動物技術(shù)具有重要意義，下列關(guān)于這方面敘述錯誤的是()A．試管動物技術(shù)可解決動物生育率低的問題

B．試管動物技術(shù)可以更多、更有效地利用動物卵母細(xì)胞 C．試管動物技術(shù)可以通過普通家畜繁育良種家畜 D．試管動物技術(shù)不能實現(xiàn)家畜的快速繁殖

解析：試管動物技術(shù)能夠?qū)?yōu)良品種的雌雄生殖細(xì)胞體外受精并發(fā)育成一個個小胚胎，然后將這些小胚胎移植到普通個體子宮內(nèi)“借腹懷胎”，從而實現(xiàn)家畜的快速繁殖，也能夠解決動物生育率低的問題。

答案：D 3．良種試管牛的繁殖過程是：用激素促進(jìn)甲牛多排卵，然后把卵子在體外與人工采集的乙牛的精子進(jìn)行受精，在特定培養(yǎng)基中培育成胚胎，再把胚胎送入經(jīng)過激素處理的丙牛的子宮內(nèi)，孕育成試管牛。下列相關(guān)敘述錯誤的是()A．精卵結(jié)合前都需進(jìn)行培養(yǎng)

B．“促進(jìn)甲牛多排卵”的激素是孕激素 C．甲牛、乙牛對試管牛核遺傳物質(zhì)的貢獻(xiàn)相同 D．該技術(shù)可應(yīng)用于加快優(yōu)良種畜的繁殖

解析：對于從大型動物采集的卵母細(xì)胞。都需經(jīng)體外人工培養(yǎng)成熟后，才具備受精能力；精子也需要進(jìn)行培養(yǎng)使其獲能，A項正確。促進(jìn)動物多排卵的激素是促性腺激素，B項錯誤。試管牛的核遺傳物質(zhì)一半來自甲牛的卵子，一半來自乙牛的精子，C項正確。該技術(shù)可充分發(fā)揮母畜的優(yōu)良特性，可用于加快優(yōu)良種畜的繁殖，D項正確。

答案：B 4．試管嬰兒、試管苗和克隆羊這三者可以說是現(xiàn)代生物科技的杰出成果，下列對其生物學(xué)原理及技術(shù)的敘述，正確的是()A．都屬于無性生殖

B．都屬于細(xì)胞工程的技術(shù)范疇 C．都不會發(fā)生基因重組

D．都體現(xiàn)了分化的細(xì)胞具有全能性

解析：試管嬰兒的原理為有性生殖，其精子和卵細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂形成過程中都會發(fā)生基因重組，但該過程需要動物細(xì)胞培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)；試管苗是植物組織培養(yǎng)的結(jié)果，體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性；克隆羊利用了核移植技術(shù)，體現(xiàn)了動物細(xì)胞細(xì)胞核的全能性。

答案：B 5．培育“試管山羊”的基本過程如下圖所示，若要培育成功，下列敘述正確的是()

A．甲過程中可通過給母山羊注射有關(guān)激素使其超數(shù)排卵 B．乙過程的目的之一是促進(jìn)卵母細(xì)胞和精子的成熟 C．丙過程與乙過程中應(yīng)采用相同成分的培養(yǎng)液

D．丁過程中早期胚胎需移植到與供體性狀相同的代孕母羊子宮內(nèi)

解析：甲為獲取卵母細(xì)胞的過程，用促性腺激素處理母山羊，使其超數(shù)排卵；乙過程的目的之一是促進(jìn)卵母細(xì)胞成熟和使精子獲能，利于精卵細(xì)胞結(jié)合，而不是使精子成熟；乙過程中使精子獲能需要獲能溶液，丙過程為培養(yǎng)早期胚胎，需用發(fā)育培養(yǎng)液，兩者成分不同；丁過程中早期胚胎需移植到與供體生理狀態(tài)相同而不是性狀相同的代孕母羊子宮內(nèi)。

答案：A

B級 能力訓(xùn)練

6．如圖是“試管?！惫S化生產(chǎn)的技術(shù)流程圖，據(jù)圖完成下列問題。

(1)根據(jù)______(填標(biāo)號)判斷，此種繁殖方式是________生殖，其意義在于_________________________________________________ ______________________________________________________。

(2)①過程通常每個卵巢平均可采集________枚可用的卵細(xì)胞，最終可能產(chǎn)下________頭犢牛。

(3)②過程通常采用________法。

(4)④過程一般要經(jīng)歷哪幾個時期？_______________________ ______________________________________________________。

解析：精子和卵子在體外培養(yǎng)條件下受精形成受精卵，并發(fā)育成胚胎，屬于有性生殖。目前，從屠宰場廢棄的卵巢中，每個卵巢平均可采集10枚可用的卵母細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)成熟和受精后，約可獲得4枚可用的胚胎，經(jīng)過移植給受體母牛，最終可得到1～2頭犢牛。對于牛、羊等家畜的精子常采用化學(xué)法使其獲能。體外胚胎大約培養(yǎng)到囊胚期左右移植到母體。

答案：(1)③ 有性 快速大量繁殖良種牛，提高經(jīng)濟(jì)效益(2)10 1～2(3)化學(xué)(4)受精卵、卵裂期、桑葚胚期、囊胚期

7．某醫(yī)院一名試管女嬰出生，該女嬰的父母身體健康。女嬰的母親7年前生下一男嬰，孩子1歲后發(fā)病夭折。5年后，她第二次懷孕，懷孕6個月時，到醫(yī)院抽羊水及臍帶血診斷，發(fā)現(xiàn)胎兒是男孩，卻是血友病患者，于是引產(chǎn)。夫婦二人最后來到醫(yī)院做試管嬰兒。醫(yī)生培養(yǎng)了7個可做活體檢查的胚胎，并抽取每個胚胎1～2個細(xì)胞進(jìn)行檢查后，選擇了兩個活體胚胎進(jìn)行移植，最后一個移植成功。

據(jù)此資料回答下列問題：

(1)試管嬰兒技術(shù)作為現(xiàn)代生物技術(shù)和母親正常懷孕、生產(chǎn)的過程的相同之處是__________________；不同點在于_______________ ______________________________________________________。

(2)血友病是伴X染色體的隱性遺傳病，如果用B和b分別表示正?；蚝脱巡』颍瑒t父母親的基因型分別是________和________。醫(yī)生抽取胚胎的1～2個細(xì)胞后，可通過觀察性染色體形態(tài)判斷早期胚胎的性別，你認(rèn)為醫(yī)生應(yīng)選用________性胚胎進(jìn)行移植，原因是________________________________________________ _____________________________________________________。

解析：(1)試管嬰兒技術(shù)和母親正常懷孕、生產(chǎn)過程都包括精子與卵細(xì)胞結(jié)合形成受精卵的過程，都屬于有性生殖過程。(2)根據(jù)題意可知，男孩患病而親代正常，則父母的基因型分別為XY和XX，在移植時選用女性胚胎，由于該胚胎從父親那里接受X基因，則后代一定表現(xiàn)正常。

答案：(1)雙親產(chǎn)生的兩性生殖細(xì)胞融合為受精卵 試管嬰兒是“體外受精”后產(chǎn)生的受精卵經(jīng)初步發(fā)育后，再進(jìn)行“胚胎移植”的產(chǎn)物

(2)XY XX(順序不能顛倒)女 女性胚胎從父親那里接受X基因，表現(xiàn)型正常 8．下圖為培養(yǎng)“轉(zhuǎn)基因試管?！钡幕具^程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題：

BBb

BBBb

B

(1)A過程一般用________激素處理供體母牛，使其超數(shù)排卵，此前需用激素對供體母牛和代孕母牛進(jìn)行________處理。

(2)采集到的精子在進(jìn)行體外受精前必須進(jìn)行________處理，采集的卵母細(xì)胞也需要培養(yǎng)至________期才能受精。

(3)B過程通常用________法將含有抗凝血酶基因的表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵，這樣培育出來的試管牛進(jìn)入泌乳期后，即可從其乳汁中分離出來所需的________這一藥用蛋白。

解析：(1)通常采用孕激素對供體母牛和代孕母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，這樣才能使供體的胚胎移入受體后有相同或相似的生存和發(fā)育條件，這也是胚胎移植成功與否的關(guān)鍵。其后還要用促性腺激素處理供體母牛，使其超數(shù)排卵。(2)采集到的精子必須進(jìn)行獲能處理，卵母細(xì)胞也需要培養(yǎng)至減數(shù)第二次分裂中期才發(fā)育成熟，具備受精的能力。(3)將目的基因注入動物細(xì)胞常用顯微注射法，所培育的轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中將表達(dá)出該目的基因的產(chǎn)物——抗凝血酶。

答案：(1)促性腺 同期發(fā)情(2)獲能 減數(shù)第二次分裂中(3)顯微注射 抗凝血酶

9．2015年2月3日，英國議會下院通過一項歷史性法案，允許以醫(yī)學(xué)手段培育“三親嬰兒”。三親嬰兒的培育過程可選用如下技術(shù)路線。

據(jù)圖回答下列問題：

(1)由于女性的自然周期產(chǎn)生的卵子太少，捐獻(xiàn)者在取卵前通常需要注射________激素，促使一次有更多的卵泡發(fā)育。

(2)重組細(xì)胞需培養(yǎng)到MⅡ中期的原因是該時期的卵母細(xì)胞才具備________，重組細(xì)胞體外培養(yǎng)所需的氣體主要是

O2和

CO2，CO2的主要作用是_____________________________________________。

(3)從受精卵到三親嬰兒的培育還需要______________和____________等技術(shù)。(4)三親嬰兒的培育技術(shù)________(填“能”或“不能”)避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代，而________(填“能”或“不能”)避免母親的紅綠色盲基因傳遞給后代。三親嬰兒的染色體________(填比例)來自母親提供的細(xì)胞核。

答案：(1)促性腺

(2)(與精子)受精的能力 維持培養(yǎng)液的pH(3)早期胚胎培養(yǎng) 胚胎移植(4)能 不能 1/2(或50%)