第一篇：實(shí)驗一分子生物學(xué)實(shí)驗室的安全規(guī)范,常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作,常.

實(shí)驗一分子生物學(xué)實(shí)驗室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作 【實(shí)驗?zāi)康摹?/p>

(1了解實(shí)驗室規(guī)則與安全;(2了解分子生物學(xué)實(shí)驗室的常規(guī)儀器、設(shè)備、耗材;槍頭,離心管的滅菌(3掌握本實(shí)驗所用儀器的功能和使用方法,尤其是移液槍的使用。(4學(xué)會常用溶液的配置?！緦?shí)驗原理】

生物技術(shù)實(shí)驗不可避免地需要與各種有毒化學(xué)藥品、廢氣廢液以及病原微生物等打交道,所以安全工作是實(shí)驗工作中的重中之重。忽視生物安全可導(dǎo)致實(shí)驗室工作人員的感染,有毒物質(zhì)的泄漏可造成嚴(yán)重后果,因此實(shí)驗室生物安全問題已越來越受關(guān)注,并且已成為全世界共同關(guān)注的問題。

溶液的配置和用具的滅菌是實(shí)驗的第一步,也是很實(shí)驗成功與否很關(guān)鍵的一步。

【實(shí)驗器具、藥品試劑】

一、實(shí)驗器具

1L 藍(lán)蓋瓶4個,500mL 藍(lán)蓋瓶1個,精細(xì)天平,1L量筒2個,500mL量筒2個, 1L燒杯2個,移液槍2套,高壓滅菌鍋, 白色槍頭1袋,黃色槍頭1袋,藍(lán)色槍頭1袋,槍頭盒3種各5個,離心管3種規(guī)格各1袋,鋁飯盒,PH試紙

二、藥品試劑

Tris,HCl,NaCl,EDTA,NaOH,ddH2O,無水乙醇 【實(shí)驗內(nèi)容】

一、實(shí)驗室常見事故分析及若干安全管理對策

二、常規(guī)儀器設(shè)備的使用

(一溫度控制系統(tǒng):冰箱,液氮罐,培養(yǎng)箱,水浴鍋,烘箱(二水的凈化裝置:蒸餾水皿,離子交換器,超純水

(三菌消毒設(shè)備:蒸汽消毒鍋,紫外線、75%乙醇、0.1%SDS(消毒劑,濾器濾膜, 煮沸消毒

(四計量系統(tǒng):稱量系統(tǒng),液體體積的度量,pH值測量,OD值測量,(五離心機(jī):普通離心機(jī),高速離心機(jī),超速離心機(jī),臺式超速離心機(jī)(六電泳系統(tǒng):(七PCR儀:電泳裝置,電泳槽裝置,(八凝膠成像分析系統(tǒng):(九干燥設(shè)備:真空加熱干燥箱,電泳凝膠干燥箱,液氮冷凍干燥,真空泵(十其他:微波爐,制冰機(jī),磁力攪拌器,Tip頭、Eppendorf管,常規(guī)的玻璃或塑 料器皿

(十一移液器的使用

三、常用儲液的配置 1.1 L 滅菌雙蒸水 2.1 L 1 M Tris HCl pH 8.0

取121.1 g Tris加入到700 ml H2O中,用HCl調(diào)PH值到8.0(大約需要50 ml HCl, 定容到1 L。

高溫高壓滅菌后,室溫保存。

注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。

3.500 mL 0.5 M EDTA(pH 8.0 取98.06g EDTA,加入到350 ml H2O中,用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約10 g NaOH。

注意:pH值至8.0時,EDTA才能完全溶解。定容至1 L。

適量分成小份后,高溫高壓滅菌。室溫保存。4.1×TE Buffer 10 ml 1 M Tris HCl pH 8.0 2 ml 0.5 M EDTA 定容至1 L。5.1 L 5 M NaCl 取292.2 g NaCl到700 ml H2O溶解(不要一次加入所有的NaCl,這樣很難溶解 定容至1 L。

高溫高壓滅菌后,4℃保存。

6.70% EtOH(乙醇

7.5 ×TBE 配方1L(Tip: 5 ×TBE較10 ×TBE更穩(wěn)定 54g Tris +27.5g硼酸+20mlEDTA(0.5M,PH8.0 ddH2O定容至1L 8.10%APS:1g 過硫酸銨溶于10ml 的ddH2O。臨用前配制,盛于棕色瓶,存放在4℃冰箱,長時間不用的應(yīng)棄掉,重新配制。

四、儲液,槍頭,離心管的滅菌 1.儲液的滅菌

試劑1,2,3,4,5在高壓滅菌鍋中滅菌15-20min。冷卻至室溫后放入4度冰箱中保存待用。(注意:滅菌時瓶蓋不要擰太緊

2.槍頭的滅菌: 槍頭裝入槍頭盒中濕熱滅菌。121度,15-20分。

為了避免水蒸氣困擾,可以在槍頭盒外包上報紙,或者滅菌后置于溫箱中干燥。3.離心管: 離心管用報紙包好或放于鋁飯盒中,121度滅菌15-20分鐘,滅菌后置于溫箱中干燥?！舅伎碱}】

1、如何處理對環(huán)境有污染的試劑?

2、如何正確使用微量移液器?使用中應(yīng)特別注意哪些事項?

3、如何改變微量移液器的移液量?應(yīng)自大調(diào)到小,還是自小調(diào)到大?為什么?

4、哪些試劑需要高溫高壓滅菌?哪些試劑不能采用高溫高壓滅菌?對于不能采用高溫高壓方式滅菌的試劑如何滅菌?滅菌后試劑如何保存?是否需要分裝?

第二篇：分子生物學(xué)實(shí)驗室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

分子生物學(xué)實(shí)驗室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

一、驗室的常規(guī)儀器、設(shè)備(一)溫度控制系統(tǒng)：

1.冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。

4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。

-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。

-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。

0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗。2．液氮罐：有些實(shí)驗材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個液氮罐（-196℃）具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)。

3．培養(yǎng)箱：37℃恒溫箱用于細(xì)菌的固體培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細(xì)胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來維持培養(yǎng)液的酸度（pH值）。

37℃恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培養(yǎng)。4.水浴鍋：用于保溫。

25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗，各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗的保溫。

25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗。

5.烘箱：主用于烘干實(shí)驗器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干。

（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多實(shí)驗對水純度的要求越來越高。1.蒸餾水皿：單蒸水常難以滿足實(shí)驗要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實(shí)驗要去離子水。

多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì)，不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。

2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。

去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質(zhì)，其中常含有微量的有機(jī)物（樹脂等）。

3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等。

（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學(xué)所用大部分試劑，而且實(shí)驗用具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌。

1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時消毒。大批實(shí)驗物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時進(jìn)行消毒

2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）

一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關(guān)，且產(chǎn)生臭氧污染安全，用于無菌室，超凈臺和塑料用具的消毒。

3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時采用。

（四）計量系統(tǒng)：

1.稱量系統(tǒng)：（各種天平）臺秤、托盤天平、鈕力擺動天平、光電分子天平、精密電子分析天平

2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器，粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶

3.pH值測量：

pH計：測定溶液中H+的直接電位的儀器，主要通過一對電極，在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動勢用pH值表示出來。pH試紙：只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計。而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的pH值，需精確度高（小數(shù)點(diǎn)后兩位）的pH計。

4.OD值測量：光密度、分光光度計是利用物質(zhì)在可見光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標(biāo)之一，通過所產(chǎn)生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值，利用它可進(jìn)行核酸溶液定量和純度的初步判斷。

（五）離心機(jī)：離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因為各種物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異，可利用強(qiáng)大的離心力場，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機(jī)?？晒┥儆?.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，包括收集和分離細(xì)胞、細(xì)胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同，可分為以下幾種類型：

1.普通離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速6000 r/m，最大離心力6000g ①醫(yī)用或臺式離心機(jī)：是離心機(jī)中最簡單而廉價的，最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì)，如紅細(xì)胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細(xì)菌等。

②低速冷凍離心機(jī)：主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)菌的沉淀和收集等。

2.高速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速25000 r/m，最大離心力89000g 有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。

3.超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速9000 r/m，最大離心力694000g。4.臺式超速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速12000r/m，最大離心力625000g。

（六）超凈工作臺：內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備，是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動空氣，經(jīng)過低、中效的過濾器后，通過工作臺面，使實(shí)驗操作區(qū)域成為無菌的環(huán)境。超凈臺按氣流方向的不同大致有幾種類型： ①側(cè)流式：凈化后氣流，從左側(cè)或右側(cè)通過工作臺面，流向?qū)?cè)，或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè)，他們都能形成氣流屏障而保障臺面無菌。

缺點(diǎn)：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現(xiàn)負(fù)壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。

②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動，從而保證外面氣體不能混入。

缺點(diǎn)：在進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗時，對操作人員不利，但可采用有機(jī)玻璃把上半部分遮擋起來，使氣流往下方流出。

（七）電泳系統(tǒng)：電泳技術(shù)是檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質(zhì)等都帶有電荷，當(dāng)它們被置于電場中時，能夠移動。

電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。

① 電泳裝置：電源需經(jīng)穩(wěn)流通過穩(wěn)壓器，既能提供穩(wěn)定的直流電，又能輸出穩(wěn)定的電壓?？捎糜谌N：

常度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓400-1000v 高度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。② 電泳槽裝置：分兩種

水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號水平式電泳槽 垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。

（八）PCR儀：Polymerase Chain Reaction儀，也稱DNA熱循環(huán)儀，基因擴(kuò)增，它是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行的DNA變性，引物復(fù)性，DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)三個過程。

（九）凝膠成像分析系統(tǒng): 對電泳后含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。

（十）干燥設(shè)備：

1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實(shí)驗。

2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進(jìn)行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。

3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶。4.真空泵：許多實(shí)驗都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。

（十一）其他

1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。

2.制冰機(jī)：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實(shí)驗操作所需的低溫環(huán)境，以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。

3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。

真空印記系統(tǒng)，DNA合成/測序儀：這些都是對核酸進(jìn)行深入研究的必備儀器。

4.磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。

5.組織勻漿器：超聲組織及細(xì)胞破碎器，用其進(jìn)行樣品的分離提純實(shí)驗。

6.通風(fēng)櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗還要有有機(jī)玻璃屏蔽。

7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機(jī)溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管：

微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復(fù)使用。對一些要求嚴(yán)格的實(shí)驗，如RNA的提取、保存等操作，應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細(xì)胞培養(yǎng)塑料平板等。9.小型設(shè)備、用具：

定時器、濾膜、保鮮膜、防護(hù)眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）

二、本期實(shí)驗所用主要儀器、設(shè)備的功能及操作 1.酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器。

一般酚是無色透明的結(jié)晶，如呈粉色或黃色，表明其中含有酚的氧化產(chǎn)物，如醌、二酸等，變色的酚不能用于實(shí)驗，因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵，并引起DNA鏈的交聯(lián)。使用前必須在160℃-180℃重蒸餾以去除能引起RNA和DNA斷裂和交聯(lián)的污染雜質(zhì)，從而得到純凈的酚。

2.磁力攪拌器：81-2型恒溫磁力攪拌器

將導(dǎo)電溫度表用導(dǎo)線與二芯插頭連接，插入后面的溫度表孔內(nèi)，當(dāng)溫度上升到預(yù)先調(diào)整好的度數(shù)時即自動停止加熱（控溫攪拌）。主要用于物質(zhì)的快速攪拌、溶解和混勻。如配制試劑，制備酚的水飽和液等。4 3.蒸餾水器：1810B自動雙重純水蒸餾器，石英管加熱式，本器的一次及二次蒸餾均有保護(hù)裝置，使用安全可靠，熱繼電器當(dāng)冷卻水突然中斷或缺水的情況下，即自動切斷電源。干簧繼電器控制二次蒸餾瓶內(nèi)的水位，其高度應(yīng)以在水位降低時能自動切斷電源為準(zhǔn)，從而達(dá)到自動控制水位的目的。

該儀器主要用于制備雙蒸水和三蒸水。

4.離心機(jī)：TGL-16G臺式高速離心機(jī)，最大轉(zhuǎn)速20000rpm，主要用于核酸提取時蛋白質(zhì)的沉淀和有機(jī)相與水相的分層，PCR檢測的瞬時離心。

5.微量取液器：主要用于精確量取微量液體體積和核酸水相的轉(zhuǎn)移。

6.勻漿器：5ml、10ml玻璃勻漿器。主用于組織細(xì)胞的破碎。7.凝膠成像分析系統(tǒng) 主用于核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結(jié)果的紫外觀察和照像。8.PCR儀：PTC-200基因擴(kuò)增儀 體外擴(kuò)增核酸的儀器

9.蒸汽消毒鍋：用于實(shí)驗用試劑、器皿、用具等的滅菌清毒 有電加熱式、電爐加熱式兩種。

10.超凈臺：JJT-1300型潔凈工作臺，側(cè)流式。

原理：吸進(jìn)氣經(jīng)過初、中級過濾皿（無紡布濾過）后，再通過風(fēng)機(jī)經(jīng)高級過濾器（超細(xì)玻璃纖維濾紙制成）而形成潔凈空氣。主要是在局部空氣造成潔凈空氣環(huán)境，以使工作區(qū)域中的懸浮粒子及微生物控制在最低限度內(nèi)。

本臺操作壓為垂直層流壓，因此出風(fēng)面與操作位置不應(yīng)放置多余的物品，以免妨礙氣流的正常流動，影響潔凈度，臺面板上的孔作為通風(fēng)孔，使用時避免有液體或其他物品漏入空中，以免影響內(nèi)部構(gòu)件。風(fēng)速可調(diào)。

使用：75%乙醇消毒2-3次，擺放好實(shí)驗用品。插上電源，紫外消毒30分鐘，啟動風(fēng)機(jī)5m后關(guān)燈，關(guān)燈后10分鐘打開照明燈，即可使用。

11.電泳系統(tǒng)：

①電泳儀：HV-3000型高度三恒多用電泳儀（恒壓、恒流、恒功率）

②電泳槽：水平式兩種。

12．微波爐：主要用于瓊脂糖的快速溶解。