第一篇：臭氧滅菌在非無菌液體制劑生產(chǎn)過程中的應(yīng)用

臭氧滅菌在非無菌液體制劑生產(chǎn)過程中的應(yīng)用

摘要：簡要分析了非無菌液體制劑生產(chǎn)過程中微生物的控制，重點闡述臭氧對生產(chǎn)設(shè)備和物料管道內(nèi)部的滅菌實驗方法，以及臭氧發(fā)生器的選型和滅菌效果驗證。

近年來對臭氧滅菌在制藥、生物工程、遺傳工程等行業(yè)中的應(yīng)用有大量的報道，在我國藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中臭氧滅菌也是被推薦的滅菌方法之一，國家《消毒技術(shù)規(guī)范》中明確提出臭氧是一種廣譜殺菌劑，可殺滅細(xì)菌繁殖體、芽孢、病毒和真菌等，破壞肉毒桿菌毒素，這充分地說明了臭氧的滅菌原理和特點，同時也為我們在制藥過程中提供了一種全新的滅菌方法。盡管這種方法已被人們所接受，但在具體應(yīng)用中，絕大多數(shù)制藥企業(yè)僅用于對生產(chǎn)環(huán)境的滅菌，而在對生產(chǎn)設(shè)備、容器具、反應(yīng)釜、貯罐和輸液、輸料、輸氣管道及內(nèi)包裝材料、工作服、工藝用水等滅菌中，還沒有得到廣泛的應(yīng)用。本文著重介紹臭氧在非無菌液體制劑生產(chǎn)過程中對生產(chǎn)設(shè)備、容器具、貯罐和輸液、輸料管道滅菌的經(jīng)驗。

非無菌液體制劑微生物控制現(xiàn)狀

非無菌液體制劑在整個藥品制劑中占有很大的比例，如合劑、糖漿劑、溶液劑及外用洗劑等。水性液體藥劑易被微生物污染，尤其是含有糖類、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)更易被污染，在我國液體制劑中絕大部分為中藥制劑，其含有大量的糖類、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)。2010版《中國藥典》對非無菌液體制劑的染菌限度作了嚴(yán)格的規(guī)定：細(xì)菌、霉菌、酵母菌1mL藥液內(nèi)不超過100個CFU，并不得檢出大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、活螨及螨卵等，該類藥物為非最終滅菌制劑，因此需要在生產(chǎn)過程中對每一個環(huán)節(jié)微生物污染的程度進(jìn)行嚴(yán)格控制，來降低最終成品的質(zhì)量風(fēng)險。在非無菌液體制劑的生產(chǎn)過程中，除對原輔料、內(nèi)包裝材料、中間產(chǎn)品及生產(chǎn)環(huán)境、工藝用水的微生物加以控制外，重點應(yīng)防止生產(chǎn)設(shè)備、工具、容器、貯罐和輸液、輸料管道對產(chǎn)品的污染，其滅菌是否可靠，將決定成品微生物數(shù)量是否合格。

一般液體制劑的生產(chǎn)過程由多個生產(chǎn)環(huán)節(jié)組成，有各種設(shè)備、容器、管道、閥門、儀表等復(fù)雜部件連接在一起。傳統(tǒng)消毒滅菌一般用75％乙醇浸泡或用純蒸汽通過管道、容器來進(jìn)行。用75％乙醇浸泡需大量的乙醇，使生產(chǎn)成本提高許多，一般企業(yè)很難做到；最可靠的方法是用純蒸汽對生產(chǎn)線進(jìn)行消毒滅菌，而對于規(guī)模較小的一些非無菌制藥企業(yè)來講，要得到純蒸汽也是件不容易的事情。

資料表明，臭氧具有很強(qiáng)的殺菌作用。臭氧的滅菌原理：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣和單個氧原子；后者具有很強(qiáng)的活性，對細(xì)菌有極強(qiáng)的氧化作用，臭氧氧化分解了細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細(xì)胞膜，將它殺死，多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通氧分子，不存在任何有毒殘留物，無死角，故稱無污染滅菌劑，它不但對各種細(xì)菌（包括大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）有極強(qiáng)的殺滅能力，而且對殺死霉菌也很有效?！断炯夹g(shù)規(guī)范》中提出“臭氧對物品表面上的微生物有殺滅作用”。因此，用臭氧滅菌既可靠又經(jīng)濟(jì)，同時產(chǎn)品質(zhì)量也可得到保證。2 臭氧滅菌實驗

根據(jù)本企業(yè)的實際情況，2007年12月起我公司采用臭氧對非無菌液體制劑生產(chǎn)線進(jìn)行在線滅菌，主要針對生產(chǎn)線上濃配罐、稀配罐、高位槽、灌裝設(shè)備以及物料管道和生產(chǎn)用容器具等。

2.1實驗用設(shè)備

現(xiàn)在市面上已有專為此設(shè)計出的臭氧發(fā)生器，自帶壓縮機(jī)、配置閥門及活結(jié)，可自由移動，通過管路將高濃度的臭氧氣體輸入需滅菌的容器或管道內(nèi)達(dá)到滅菌效果。我公司采用某臭氧設(shè)備制造有限公司生產(chǎn)的臭氧發(fā)生器，其產(chǎn)量為40g/h，出口臭氧濃度8×10-4,功率為0.55kW。

2.2實驗方法

由于整條生產(chǎn)線從配制到灌裝之間，管線和設(shè)備連接復(fù)雜，而配制和灌裝不在同一操作間，管線連接較長，為使滅菌徹底，操作方便，故采用臭氧發(fā)生器流動使用，對不同的生產(chǎn)單元進(jìn)行滅菌。對于臭氧不易通過的部件，進(jìn)行拆卸并用75％乙醇浸泡，而易通過的部件分別通過活結(jié)或軟管進(jìn)行連接，并按操作程序連接好臭氧發(fā)生器，開啟臭氧滅菌。滅菌過程中對于不能完全密封的單元，則采用臭氧發(fā)生器連續(xù)工作，產(chǎn)生高濃度臭氧滅菌，以保證其可靠性。

實驗表明：若被滅菌物表面濕度＞80％滅菌效果會更好，因此，在滅菌之前需用工藝用水對需滅菌系統(tǒng)進(jìn)行沖洗。為防止滅菌后產(chǎn)生二次污染，使用臭氧滅菌前先對所在潔凈區(qū)環(huán)境滅菌。在滅菌過程中，對于密封單元開啟臭氧發(fā)生器工作1h，保留1h；對于不能完全密封單元，采用臭氧發(fā)生器連續(xù)工作2h滅菌。

2.3實驗結(jié)果與討論

通過對該滅菌方法的驗證，經(jīng)測試均符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到了滅菌效果。我們對2年來生產(chǎn)的上百批產(chǎn)品和以往產(chǎn)品進(jìn)行比較（表1），發(fā)現(xiàn)從2008年開始使用臭氧滅菌后，產(chǎn)品一次合格率高達(dá)100%，而以往僅達(dá)85%左右。使用臭氧滅菌前，常會出現(xiàn)成品微生物超標(biāo)而返工，造成企業(yè)生產(chǎn)成本的提高。而現(xiàn)在徹底改變了我公司液體制劑微生物超標(biāo)和返工的現(xiàn)象，使產(chǎn)品的質(zhì)量得到了保證，降低了企業(yè)的生產(chǎn)成本。

表1 2006?2009年產(chǎn)品質(zhì)量統(tǒng)計 臭氧發(fā)生器選型及滅菌效果驗證

由于市面上臭氧發(fā)生器型號較多，我們根據(jù)實際生產(chǎn)需要對臭氧發(fā)生器進(jìn)行了選型，一般的評價指標(biāo)為：臭氧產(chǎn)量、濃度、可靠性、使用壽命、電耗等。由于單元系統(tǒng)滅菌的發(fā)生器的功率比較小，電耗一般不予考慮。對于濃度，由《消毒技術(shù)規(guī)范》知，臭氧濃度一般在60㎎/m3以上，才對物品表面上的微生物有殺滅作用，而設(shè)備內(nèi)部一般濃度在5×10-5以上才進(jìn)行滅菌，表面濕度大滅菌效果會更好。

在選用設(shè)備時，臭氧產(chǎn)量是最重要參考依據(jù)，我們應(yīng)根據(jù)滅菌空間和滅菌濃度進(jìn)行計算。例如，經(jīng)估計我們所需要的滅菌空間為100m3，若為密閉容器，要求殺滅管道或設(shè)備內(nèi)表面的微生物，按要求濃度C不低于5×10-5，經(jīng)計算為84mg/m3，考慮臭氧發(fā)生器的臭氧發(fā)生量在工作1h后自然衰退率S為62.25％，則選擇臭氧發(fā)生器發(fā)生量W（mg/h）：

W＝CV/（1－S）＝84×100/（1－62.25％）＝22251mg/h

考慮到實際損耗選用時不得＜30g/h。

在生產(chǎn)過程中為了滅菌徹底，不留死角，常采用臭氧發(fā)生器連續(xù)工作方式，流通臭氧進(jìn)行滅菌，在選用臭氧發(fā)生器時應(yīng)依據(jù)以上方法進(jìn)行臭氧發(fā)生量的估算，使其產(chǎn)生足夠濃度的臭氧來滅菌。

臭氧發(fā)生器的滅菌可靠性和使用壽命與其工作時間是密切相關(guān)的，可通過滅菌效果驗證來確定。

臭氧滅菌效果驗證過程包括2個方面：(1)臭氧濃度測定：在臭氧發(fā)生器工作一定時間后，采用化學(xué)分析法或儀器測定法，測定結(jié)果不低于60㎎/m3；(2)生物指示劑挑戰(zhàn)性試驗：將枯草桿菌黑色變種芽孢菌片置于器皿內(nèi)的滅菌空間內(nèi)，滅菌結(jié)束后取出器皿進(jìn)行培養(yǎng)，并對結(jié)果評價，應(yīng)＜10CFU/皿。通過以上結(jié)果來確定臭氧發(fā)生器的工作時間和滅菌時間。

總之，臭氧發(fā)生器的選擇要結(jié)合實際情況，準(zhǔn)確估算性能參數(shù)，并對其可靠性進(jìn)行周期性再驗證，以防止由于設(shè)備原因?qū)е庐a(chǎn)品的質(zhì)量風(fēng)險。在選購臭氧發(fā)生器時應(yīng)有備用機(jī)，使用過程中盡可能按“兩用一備，一用一備”的原則購置，備用機(jī)組在設(shè)備維護(hù)或修理過程中交替使用，避免停機(jī)維護(hù)影響正常生產(chǎn)。

結(jié)語

通過以上對非無菌液體制劑生產(chǎn)線滅菌現(xiàn)狀的分析，結(jié)合我公司日常生產(chǎn)中使用臭氧發(fā)生器在線滅菌的經(jīng)驗，并經(jīng)過驗證和大量實驗考察，筆者認(rèn)為采用臭氧發(fā)生器對非無菌液體制劑生產(chǎn)線在線滅菌是一種有效的方法，它解決了產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中易受污染的難題，使產(chǎn)品的質(zhì)量得到了有效保證。

第二篇：凍干粉針劑等非最終滅菌的無菌制劑檢查要點

凍干粉針劑等非最終滅菌的無菌制劑檢查要點

凍干粉針劑等非最終滅菌的無菌制劑檢查要點

防止微生物、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素、微粒污染 廠房 設(shè)備 生產(chǎn)工藝 無菌檢查 物料和中間產(chǎn)品 人員

各個階段（包括滅菌前的各階段）都必須采取預(yù)防措施，以盡可能降低污染

一、廠房 廠房布局和建造 潔凈度級別的標(biāo)準(zhǔn) 關(guān)鍵操作區(qū)的空氣流向 潔凈區(qū)的壓差 潔凈區(qū)的清潔和消毒 環(huán)境監(jiān)控（包括動態(tài)監(jiān)控）HVAC系統(tǒng)的維護(hù)和監(jiān)控

二、設(shè)備

適用于產(chǎn)品的生產(chǎn)、清潔、消毒或滅菌 盡可能采用密閉系統(tǒng) 合理布置和安裝

關(guān)鍵參數(shù)控制和記錄儀表的校準(zhǔn) 設(shè)備的確認(rèn)、維護(hù)和維修 設(shè)備的清潔、消毒或滅菌

共用設(shè)備應(yīng)有防止交叉污染的措施 設(shè)備應(yīng)在確認(rèn)的范圍內(nèi)使用

三、工藝用水

水處理設(shè)施及其分配系統(tǒng)的設(shè)計、安裝和維護(hù)應(yīng)能確保供水達(dá)到適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。水系統(tǒng)的運(yùn)行不應(yīng)超越其設(shè)計能力

注射用水的生產(chǎn)、貯存和分配方式應(yīng)能防止微生物生長

水源、水處理設(shè)施及水的化學(xué)和生物學(xué)污染狀況應(yīng)定期監(jiān)測，必要時還應(yīng)監(jiān)測細(xì)菌內(nèi)毒素。監(jiān)測結(jié)果以及所采取糾偏措施的記錄應(yīng)予歸檔

四、生產(chǎn)工藝

1、配制工序

操作區(qū)的設(shè)置和潔凈度級別 配制設(shè)備的選型 配料處方 稱量操作 稱量記錄

防止污染和交叉污染的措施

2、過濾工序 過濾器的安裝位置 過濾器的相關(guān)信息 過濾器完整性試驗的方法 過濾前后的完整性試驗和記錄 過濾器的更換、消毒或滅菌 發(fā)現(xiàn)過濾器出問題后的處理

3、無菌灌裝工序 關(guān)鍵操作區(qū)和生產(chǎn)設(shè)備 清潔、消毒或滅菌 動態(tài)環(huán)境的監(jiān)控

無菌灌裝用各類物料、器具的準(zhǔn)備或滅菌處理 生產(chǎn)用氣體 人員的無菌操作 裝量控制

培養(yǎng)基模擬灌裝驗證 無菌檢驗樣品的取樣

檢查等其他活動不能影響正常的生產(chǎn)

4、凍干工序

凍干產(chǎn)品的包裝形式、裝量 凍干產(chǎn)品的裝載方式和裝載數(shù)量 凍干工藝和曲線 凍干工藝的驗證

凍干產(chǎn)品進(jìn)出冷凍干燥室的操作 凍干機(jī)的滅菌 凍干機(jī)

關(guān)鍵參數(shù)控制和記錄儀表的校準(zhǔn) 管路的連接 凍干的記錄

五、無菌檢驗 無菌室及環(huán)境監(jiān)控 取樣計劃 取樣量和檢驗量 培養(yǎng)基和菌種管理 無菌檢驗方法 樣品表面消毒處理

陽性檢驗結(jié)果的調(diào)查和處理

六、物料 物料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 物料的來源 物料的取樣和檢驗 物料的供應(yīng)商審計 物料供應(yīng)商的變更

七、中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制

應(yīng)特別注意監(jiān)控中間產(chǎn)品微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素污染情況 已配制的中間產(chǎn)品含量檢測極為關(guān)鍵 澄清度檢查 可見異物檢查 應(yīng)100％檢查

可制備含有可見異物的標(biāo)準(zhǔn)樣品對操作人員進(jìn)行培訓(xùn)

八、人員 人員的培訓(xùn) 人員的衛(wèi)生習(xí)慣 體檢檔案和匯總

潔凈區(qū)內(nèi)人員的工作服及穿著 無菌操作

粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗是對粉針車間使用F2000/12/600型灌裝機(jī)在局部百級工作環(huán)境中進(jìn)行凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程防止微生物污染的水平可以達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力。通過檢查確認(rèn)找出粉針車間進(jìn)行凍干粉針劑灌裝作業(yè)過程中的控制要求，為今后對粉針車間進(jìn)行凍干粉針劑灌裝作業(yè)管理確定依據(jù)。凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗驗證方案

方案制訂：

制訂日期：

方案批準(zhǔn)：

批準(zhǔn)日期：

目錄

1.概括………………………………………………………………………………………………1 1.1目的 ……………………………………………………………………………………………1 1.2范圍 ……………………………………………………………………………………………1 1.3責(zé)任 ……………………………………………………………………………………………1 2.確定可接受的合格標(biāo)……………………………………………………………………………2 3.培養(yǎng)基性能測試…………………………………………………………………………………2 3.1微生物生長性能試驗 …………………………………………………………………………2 3.2培養(yǎng)基無菌性試驗 ……………………………………………………………………………2 4 模擬分裝用無菌粉末……………………………………………………………………………2 4.1模擬分裝用無菌粉末應(yīng)具有的特性 …………………………………………………………2 4.2 無菌性試驗……………………………………………………………………………………3 4.3 抑菌性試驗……………………………………………………………………………………3 4.4 溶解性試驗……………………………………………………………………………………3 5 模擬分裝過程操作規(guī)程及操作人員控制………………………………………………………3 6 操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測………………………………………………………………4 6.1 模擬分裝使用西林瓶及膠塞無菌性檢測……………………………………………………4 6.2 微生物控制與監(jiān)測……………………………………………………………………………4 6.3 塵埃粒子監(jiān)測…………………………………………………………………………………5 7 取樣計劃及取樣點………………………………………………………………………………5 7.1 取樣計劃………………………………………………………………………………………5 7.2 取樣點…………………………………………………………………………………………6 8 模擬分裝…………………………………………………………………………………………6 8.1 無菌粉針劑模擬分裝方法……………………………………………………………………6 8.2 液體培養(yǎng)基制備及進(jìn)入無菌分裝區(qū)方法……………………………………………………6 8.3 液體培養(yǎng)基分裝工具的選用及處理使用方法………………………………………………6 8.4 無菌粉針劑模擬分裝試驗……………………………………………………………………7 8.5 液體培養(yǎng)基分裝………………………………………………………………………………7 9 微生物培養(yǎng)………………………………………………………………………………………7 9.1 陰性對照………………………………………………………………………………………7 9.2 陽性對照………………………………………………………………………………………7 9.3 試驗樣品培養(yǎng)…………………………………………………………………………………7 10 試驗結(jié)果評價…………………………………………………………………………………8 11 驗證制度及再驗證時間安排…………………………………………………………………8 12 確認(rèn)方案執(zhí)行日期……………………………………………………………………………9

1、概括

凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗是在其他各個系統(tǒng)（諸如滅菌系統(tǒng)、公用系統(tǒng)、無菌環(huán)境保持系統(tǒng)、設(shè)備驗證、設(shè)備清洗過程驗證等）驗證工作完成的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。采用培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗方法進(jìn)行。1.1、目的

用和實際生產(chǎn)工藝相同的條件與操作方法（包括生產(chǎn)環(huán)境），向凍干制品容器（西林瓶）內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過濾器過濾的培養(yǎng)基，然后將此模擬制品在適當(dāng)條件下培養(yǎng)，以確認(rèn)工藝過程的可靠性。證明在凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程以防止微生物污染的水平達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力，或提供保證所生產(chǎn)產(chǎn)品的無菌性的可信限度達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的證據(jù)。1.2、范圍

此驗證方案適用于粉針車間凍干粉針劑灌裝過程驗證。1.3、責(zé)任

生產(chǎn)技術(shù)部、質(zhì)量保證部、QC化驗室、粉針車間、設(shè)備部負(fù)責(zé)驗證方案的執(zhí)行，主要工作內(nèi)容如下： ①、編訂及實施驗證方案； ②、實施確認(rèn)并提供確認(rèn)資料； ③、匯編測試資料于最終報告內(nèi)；

④、協(xié)調(diào)參與驗證過程的人員和部門，確保驗證的各項要求；

⑤、將成功的結(jié)果及分裝過程的需求規(guī)范化，并制定相關(guān)文件待核準(zhǔn)下發(fā)。

2、確定可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)

警戒限：可信限為95%時污染概率大于0.05%； 合格限：可信限為95%時污染概率小于0.1%。分裝量與污染控制數(shù)關(guān)系表

模擬分裝數(shù)量/瓶

污染控制數(shù)量/瓶

模擬分裝數(shù)量/瓶

污染控制數(shù)量/瓶 3000～4742

0

4743～6294

小于1 6295～7751

小于2

7752～9151

小于3

3、培養(yǎng)基性能測試

模擬分裝試驗采用胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基，通過下述試驗對培養(yǎng)基微生物生長性能進(jìn)行確認(rèn)。首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后備用。3.1 微生物生長性能試驗

將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支試管中，在一半數(shù)量的試管中接種枯草桿菌，接種量為<100CFU；在另一半數(shù)量的試管中接種白色念珠菌，接種量為<100CFU。接種后蓋塞、封口，將接種有枯草桿菌的試管放于30～35℃下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的試管放于20～25℃下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少有50%以上接種的各試管的培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長。3.2 培養(yǎng)基無菌性試驗

將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支無菌試管中，蓋塞、封口。其中50支試管放于30～35℃下培養(yǎng)7天，同時將另外50支試管放于20～25℃下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)各試管培養(yǎng)基中應(yīng)無任何微生物生長。

4、模擬分裝過程操作規(guī)程及操作人員控制

4.1、模擬分裝試驗中使用的西林瓶和膠塞的清洗、滅菌，分裝設(shè)備的清洗、消毒，與產(chǎn)品接觸的分裝設(shè)備部件的清洗、滅菌、安裝過程必須遵循與實際生產(chǎn)操作相同的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。4.2、灌裝機(jī)灌裝速度保持與正常凍干粉針劑灌裝及半壓膠塞生產(chǎn)時的速度相同。

4.3、所有參加模擬試驗的操作人員均應(yīng)經(jīng)過GMP、無菌操作、無菌更衣程序技術(shù)等相關(guān)知識的培訓(xùn)并經(jīng)考核合格。

4.4、參加模擬試驗的操作人員數(shù)及人員構(gòu)成應(yīng)嚴(yán)格控制，非規(guī)定的驗證小組成員嚴(yán)禁在模擬試驗過程中進(jìn)入模擬試驗現(xiàn)場，模擬試驗現(xiàn)場人員數(shù)不得超過5人，人員的進(jìn)入及退出應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序，減少不必要的人員進(jìn)入及退出次數(shù)?？蛇M(jìn)入模擬試驗現(xiàn)場的人員名單如下： 部門

姓名

部門

姓名 設(shè)備部

質(zhì)量保證部

生產(chǎn)技術(shù)部

QC化驗室

QC化驗室

粉針車間

QC化驗室

粉針車間

粉針車間

粉針車間

粉針車間

粉針車間

5、操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測

進(jìn)行模擬試驗過程中，對以下各項進(jìn)行監(jiān)測。5.1、模擬試驗使用西林瓶及膠塞無菌性檢測：

按第6條取樣計劃的規(guī)定要求，對模擬試驗使用的西林瓶及膠塞進(jìn)行取樣，檢測其無菌性，合格標(biāo)準(zhǔn)為各樣品不得存在無菌性不合格情況。5.2、微生物控制與監(jiān)測：

①、在模擬試驗過程中，對操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位的微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測。其取樣方法、取樣頻率、取樣要求、取樣點分布見第6條取樣計劃。合格標(biāo)準(zhǔn)：手套全部檢出菌數(shù)<2個、霉菌<1個；

一個操作人員雙臂、前胸的3個取樣點檢出菌數(shù)之和<10個。

②、對無菌區(qū)墻壁、門、設(shè)備以及操作人員可能接觸的各種表面進(jìn)行無菌程度檢驗。其取樣方法、取樣點、取樣頻率見第6條取樣計劃。在進(jìn)行取樣時其取樣面積應(yīng)保持在25cm2。合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)<3個、霉菌<1個；

萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)<10個、霉菌<2個，地面檢出菌數(shù)<25個、霉菌<3個。③、對空氣中微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測，其取樣方法、取樣點、取樣頻率見第6條取樣計劃。合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)<1個； 萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)<10個、霉菌<3個；

④、微生物數(shù)量監(jiān)測試驗所采用的培養(yǎng)基應(yīng)為經(jīng)過無菌及微生物生長性能檢驗合格的培養(yǎng)基。⑤、污染調(diào)查、微生物鑒別方法、污染發(fā)生時應(yīng)采取的措施執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。5.3塵埃粒子監(jiān)測

按第6條取樣計劃的規(guī)定要求，對灌裝室進(jìn)行空氣質(zhì)量監(jiān)測，其監(jiān)測結(jié)果應(yīng)能證明關(guān)鍵區(qū)域空氣質(zhì)量達(dá)到百級潔凈區(qū)的空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

6、取樣計劃及取樣點 6.1取樣計劃：

監(jiān)測項目

取樣方法

取樣頻率

取樣要求

模擬試驗西林瓶無菌檢查

隨機(jī)取樣

每灌裝500瓶取樣一次

每次取樣10支

模擬試驗使用膠塞無菌檢查

隨機(jī)取樣

每灌裝500瓶取樣一次

每次取樣10枚

操作人員無菌性檢查

棉簽擦拭法

模擬試驗開始前，試驗進(jìn)行一半時間，試驗結(jié)束后，分別對操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測

取樣時，被取樣的操作人員應(yīng)離開分裝機(jī)，在灌裝室的一角將雙臂平伸，靜止不動，取樣人員按棉簽擦拭取樣法在最短時間內(nèi)取樣。每次對同一操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測時，其取樣點應(yīng)不相同

無菌灌裝區(qū)無菌性檢查

棉簽擦拭法

模擬試驗開始前，試驗進(jìn)行一半時間，試驗結(jié)束后，分別根據(jù)取樣點要求對無菌區(qū)進(jìn)行取樣監(jiān)測

根據(jù)取樣點要求取樣，取樣面積固定，每次取樣面積為25cm2。每次應(yīng)選擇不同位置取樣，其重點為操作者可能接觸的各種表面。

空氣微生物數(shù)量監(jiān)測

沉降平皿法

每小時取樣一次

根據(jù)取樣點分布圖布置培養(yǎng)皿，各取樣點每小時更換取樣皿進(jìn)行檢測。灌裝機(jī)附近設(shè)置四個以上的取樣平皿連續(xù)暴露取樣。另有一個平皿應(yīng)放置于微生物監(jiān)測室情況最差的部位。

浮游菌采樣

每30分鐘監(jiān)測一次

取樣操作時應(yīng)由專人進(jìn)行

塵埃粒子監(jiān)測

粒子計數(shù)器

每30分鐘監(jiān)測一次

監(jiān)測應(yīng)由專人按標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行 6.2 取樣點：

①、操作人員無菌性檢查取樣點：操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位。

②、無菌灌裝區(qū)無菌性檢查取樣點：其取樣重點為無菌灌裝區(qū)內(nèi)墻壁、門、設(shè)備表面以及操作人員可能接觸的各種表面。每次取樣應(yīng)包括：一側(cè)內(nèi)墻壁，無菌灌裝區(qū)內(nèi)門把手，膠塞清洗機(jī)開門螺旋，灌裝機(jī)上塞料斗，西林瓶滅菌烘干隧道出口處理瓶轉(zhuǎn)盤，灌裝機(jī)控制面板，物料周轉(zhuǎn)桶、周轉(zhuǎn)托盤等處。③、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測沉降平皿法取樣點：取樣點見附件《凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗空氣微生物監(jiān)測沉降平皿取樣點分布圖》。

④、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測浮游菌測試取樣點：按無菌灌裝區(qū)面積等分進(jìn)行取樣，每個測試點距離1米，測試點距內(nèi)墻面0.5米，另外在分裝面、膠塞清洗機(jī)膠塞出口處、西林瓶滅菌烘干隧道出口處分別增加一個測試點。

⑤、塵埃粒子監(jiān)測取樣點：按無菌灌裝區(qū)面積等分進(jìn)行取樣，每個測試點距離1米，測試點距內(nèi)墻面0.5米，另外在分裝面、膠塞清洗機(jī)膠塞出口處、西林瓶滅菌烘干隧道出口處分別增加一個測試點。

7、模擬灌裝

7.1 凍干粉針劑模擬灌裝方法：

凍干粉針劑模擬灌裝方法采用將一定量的無菌液體培養(yǎng)基通過灌裝機(jī)灌裝于西林瓶中并進(jìn)行半壓膠塞，然后在凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干試驗并進(jìn)行全壓膠塞，壓鋁蓋密封。模擬試驗量為5000瓶。7.2 液體無菌培養(yǎng)基制備方法：

將經(jīng)過第3項檢測合格的培養(yǎng)基在配制室內(nèi)按每30g加1L注射用水的比例配制50L液體培養(yǎng)基備用。

7.3 無菌粉針劑模擬灌裝試驗：

7.3.1 模擬灌裝試驗用西林瓶數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000支無菌西林瓶。7.3.2 模擬灌裝試驗用膠塞數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000枚無菌膠塞。7.3.3 模擬灌裝試驗用鋁蓋數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000枚鋁蓋。

7.3.4 模擬灌裝試驗用周轉(zhuǎn)盤數(shù)量：按生產(chǎn)工藝對周轉(zhuǎn)盤進(jìn)行清潔消毒，以每只周轉(zhuǎn)盤裝量290支計算，準(zhǔn)備25只潔凈周轉(zhuǎn)盤備用。

7.3.5 模擬灌裝試驗灌裝量：每支西林瓶灌裝7ml液體培養(yǎng)基。

7.3.6 液體培養(yǎng)基的除菌過濾：對在配制間配制好的液體培養(yǎng)基按正常生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行除菌過濾并存放于無菌儲罐內(nèi)。

7.3.7 灌裝機(jī)灌裝速度：灌裝機(jī)灌裝及半壓膠塞速度為260瓶/分。7.3.8 模擬灌裝試驗操作流程：按凍干粉針劑生產(chǎn)工藝流程進(jìn)行。

7.3.9 模擬灌裝試驗灌裝過程要求：在進(jìn)行模擬灌裝試驗時，當(dāng)灌裝進(jìn)行至一半時，使設(shè)備空轉(zhuǎn)一小時以上再繼續(xù)進(jìn)行模擬灌裝試驗，完成剩余的試驗制品的灌裝。

7.3.10 根據(jù)5.1項及6項要求，在每臺灌裝機(jī)分裝完成500瓶時，隨機(jī)抽取未分裝的西林瓶及膠塞10枚供檢測使用。

7.3.11 凍干模擬試驗：培養(yǎng)基灌裝半壓膠塞以后，將半壓膠塞的樣品瓶轉(zhuǎn)移到凍干機(jī)內(nèi)，進(jìn)行凍干的模擬試驗。試驗中，冷凍溫度不得低于3℃。凍干時間設(shè)定為24小時，抽真空、全壓塞后按生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行鋁蓋密封作業(yè)。至此供試品已全部制備完成。

7.3.12 取樣原則：由于培養(yǎng)基灌裝試驗分為兩個階段進(jìn)行，因此將全部樣品分為四個不同時間段進(jìn)行樣品標(biāo)示，即第一階段灌裝試驗開始時、第一階段灌裝試驗結(jié)束時、第二階段灌裝試驗開始時、第二階段灌裝試驗結(jié)束時四個時間。其標(biāo)記法為“1-1”、“1-2”、“2-1”、“2-2”。標(biāo)記點為周轉(zhuǎn)盤。

8、微生物培養(yǎng) 8.1 陰性對照：

在模擬灌裝過程中，使用20支潔凈試管灌裝7ml培養(yǎng)基，密封后進(jìn)行現(xiàn)場用培養(yǎng)基無菌性試驗。其20瓶陰性對照品應(yīng)均不得長菌。8.2 陽性對照：

為確認(rèn)無菌灌裝容器中培養(yǎng)基的促菌生產(chǎn)能力，取低濃度菌接種于進(jìn)行挑戰(zhàn)性陽性試驗用的4支對照試管中，2瓶接種濃度<100個微生物/0.1ml的枯草桿菌芽孢；另2瓶接種濃度<100個微生物/0.1ml的白色念珠菌。接種后將接種枯草桿菌芽孢的西林瓶放于30～35℃下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的西林瓶放于20～25℃下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少需有1支容器被證實有菌生產(chǎn)。如2個容器內(nèi)均沒有菌增殖，則應(yīng)在確認(rèn)試驗操作有誤后，重復(fù)試驗1次，此次試驗應(yīng)在2個容器內(nèi)均有菌生產(chǎn)的情況。8.3 試驗樣品培養(yǎng)：

模擬灌裝生產(chǎn)的全部樣品在適宜的溫度下培養(yǎng)14天，先在較低溫度（20～25℃）下培養(yǎng)7天，然后在較高溫度（30～35℃）下培養(yǎng)7天，較低溫度與較高溫度一般相差10℃。在第三天和第七天之間至少觀察培養(yǎng)基灌裝品的微生物的生產(chǎn)情況一次，并且在檢測期間的最后一天至少再觀察一次，并對污染的瓶中的微生物進(jìn)行總結(jié)其特點。若發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)明確記錄樣品號及數(shù)量，同時應(yīng)檢查鋁蓋、膠塞的密封情況；若有破損應(yīng)記錄并檢查其破損原因。對于微生物污染的樣品應(yīng)進(jìn)行鑒別試驗，鑒別的內(nèi)容至少應(yīng)包括菌落、細(xì)胞形態(tài)學(xué)及革蘭染色特性等。

9、試驗結(jié)果評價

評價無菌模擬灌裝試驗結(jié)果的主要指標(biāo)之一是微生物污染水平，如果試驗結(jié)果證明其污染水平超過規(guī)定的合格限度（參見第2項規(guī)定），則應(yīng)立即停止生產(chǎn)，調(diào)查并記錄污染產(chǎn)生的原因。在調(diào)查結(jié)束并采用相應(yīng)的措施后應(yīng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基無菌模擬灌裝試驗。原因調(diào)查至少應(yīng)包括如下項： a、生產(chǎn)環(huán)境微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)； b、生產(chǎn)環(huán)境懸浮粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)； c、人員污染的監(jiān)測數(shù)據(jù)；

d、HEPA過濾器的完整性檢測、粒子、風(fēng)速等； e、操作間的空氣流向、壓差； f、操作人員的操作方法、培訓(xùn)情況； g、模擬灌裝試驗過程中的異常情況； h、無菌室生產(chǎn)工具及其他用品的儲存狀況； i、鑒別污染微生物的種、屬，以尋找污染源的線索； j、無菌室的清潔、清潔堆規(guī)程的培訓(xùn)及執(zhí)行情況； k、無菌生產(chǎn)用設(shè)備的控制系統(tǒng)和監(jiān)測系統(tǒng)的校正； l、生產(chǎn)前、生產(chǎn)后過濾器的完整性檢測結(jié)果； m、相關(guān)產(chǎn)品、相關(guān)生產(chǎn)過程存在的問題等。

原因調(diào)查結(jié)束后，應(yīng)根據(jù)調(diào)查所確定的或可能發(fā)生的原因制定糾正或改進(jìn)方案并予以實施。當(dāng)改進(jìn)方案實施之后應(yīng)重復(fù)模擬灌裝試驗。

10、驗證制度及再驗證時間安排

10.1對于新建的凍干粉針劑生產(chǎn)線在其正式投入生產(chǎn)前必須進(jìn)行培養(yǎng)基無菌模擬灌裝試驗，合格后才可投入生產(chǎn)；

10.2對于已投入使用的凍干粉針劑灌裝生產(chǎn)線，每年至少進(jìn)行2次培養(yǎng)基無菌模擬灌裝試驗； 10.3每個在凍干粉針劑灌裝生產(chǎn)線上的工作人員，每年至少參加1次成功的培養(yǎng)基無菌模擬灌裝試驗；

10.4當(dāng)生產(chǎn)用設(shè)備、設(shè)施，從事凍干粉針劑灌裝生產(chǎn)操作的人員結(jié)構(gòu)，工藝方法有重大改動時均必須進(jìn)行培養(yǎng)基無菌模擬灌裝試驗，以證明其改動對已經(jīng)驗證了的凍干粉針劑灌裝工藝過程不產(chǎn)生不良影響。

11、確認(rèn)方案執(zhí)行日期

方案執(zhí)行日期為：年月日~年月日

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