第一篇：基于合成生物學(xué)技術(shù)的微生物燃料電池菌種分子育種研究范文

基于合成生物學(xué)技術(shù)的微生物燃料電池菌種分子育種研究

雍陽春*，孫建中

江蘇大學(xué)生物質(zhì)能源研究所，江蘇省鎮(zhèn)江市學(xué)府路301號，212013；*email:

微生物燃料電池(MFC)是一種將生物可利用有機質(zhì)(包括工農(nóng)業(yè)廢棄物、污水中的有機物等)直接轉(zhuǎn)化為電能的新型生物產(chǎn)能裝置，可同時實現(xiàn)有機污染物處理和直接產(chǎn)電。其操作條件溫和、能量轉(zhuǎn)化效率高、綠色無污染，是一種理想的節(jié)能環(huán)保生物能源新技術(shù)(1，2)。但是，高性能產(chǎn)電微生物菌種的缺乏嚴重制約了MFC的工業(yè)化進程。

本實驗室系統(tǒng)分析研究了用于MFC的產(chǎn)電微生物的底物電子釋放機制和胞外電子傳遞機制，在此基礎(chǔ)上首次提出并通過合成生物學(xué)技術(shù)對產(chǎn)電微生物進行定向改造，使微生物的電化學(xué)活性及其MFC的產(chǎn)電性能大幅提高(3，4)。一方面，我們研究發(fā)現(xiàn)微生物胞內(nèi)乳酸合成途徑是造成胞內(nèi)電子釋放效率低下的主要原因之一。我們通過代謝工程手段，將乳酸合成途徑阻斷(即敲除乳酸合成關(guān)鍵酶基因ldhA，構(gòu)建基因工程菌ldhA?)，成功將胞內(nèi)電子釋放到胞外電極，提高了MFC的產(chǎn)電性能(3)。在雙室MFC微生物燃料電池中進行研究發(fā)現(xiàn)，基因工程菌ldhA?產(chǎn)電性能較原始菌株大幅提高(最高電流提高約30倍，穩(wěn)定時間至少延長2倍。另一方面，微生物細胞膜通透性差是制約微生物胞內(nèi)電子向胞外傳遞效率的瓶頸。我們通過將來源于Pseudomonas的大孔徑細胞膜孔蛋白(OprF)人工異源表達在大腸桿菌細胞外膜，通過熒光和酶學(xué)方法證實該蛋白的表達使大腸桿菌膜通透性顯著提高。進一步，在恒電位放電實驗和MFC中研究發(fā)現(xiàn)，該基因工程菌(oprF)產(chǎn)電性能大幅提高，并進一步對其機制進行了深入研究。本研究表明微生物菌種的分子育種對提高MFC性能起著關(guān)鍵性作用；而合成生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用使MFC菌種的分子育種研究邁上了新的臺階，將加速推進MFC的工業(yè)化進程。

參考文獻：

1.Logan BE and Rabaey K.2012.Science, 337:686-690.2.Yong YC, et al.2012.ACS Nano, 6: 2394-2400.3.Yong YC, et al.2012.Electrochemistry Communications, 19: 13-16.4.Yong YC, et al.2011.Biosensors & Bioelectronics, 30: 87-92.

第二篇：微生物制藥技術(shù)及研究前景

微生物制藥技術(shù)及研究前景

摘要：在人類基因組工程和生物信息學(xué)的推動下，生物技術(shù)創(chuàng)新日新月異，生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)正在經(jīng)歷一個飛速發(fā)展的新階段，工業(yè)微生物技術(shù)是可持續(xù)發(fā)展的一個重要支撐，是解決資源危機、生態(tài)環(huán)境危機和改造傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)的根本技術(shù)依托。工業(yè)微生物的發(fā)展使現(xiàn)代生物技術(shù)滲透到包括醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、能源、化工、環(huán)保等幾乎所有的工業(yè)領(lǐng)域，并扮演著重要角色。本文通過對研究微生物制藥技術(shù)的研究和前景的綜述，介紹了微生物制藥的原理和方法以及可能對人類醫(yī)學(xué)事業(yè)產(chǎn)生的積極影響，旨在進一步明確為生物制藥在社會發(fā)展過程中重要地位。

關(guān)鍵詞：微生物制藥 生物制品 抗生素

微生物來源的藥物通稱為生物藥物，是微生物在其生命活動過程中產(chǎn)生的，能以極低濃度抑制或影響其他生物機能的低分子量代謝物。包括抗生素和具有其他藥理作用的微生物次級代謝產(chǎn)物，以及以微生物次級代謝為先導(dǎo)化合物、通過生物或化學(xué)方法制得的衍生物。20世紀40年代青霉素問世，開創(chuàng)了微生物藥物的新時代?？股卦谑澜绶秶鷥?nèi)廣泛使用，使人類許多傳染性疾病得到控制；隨著微生物制藥的發(fā)展，它們在腫瘤化療、器官移植以及高膽固醇血癥治療等方面也發(fā)揮重要作用，成為不可缺少的藥物[1]。

微生物制藥在醫(yī)藥工業(yè)中占有重要地位，半個世紀以來微生物轉(zhuǎn)化在藥物研制中一系列突破性的應(yīng)用給醫(yī)藥工業(yè)創(chuàng)造了巨大的醫(yī)療價值和經(jīng)濟效益。目前全世界為生物藥物的總產(chǎn)量占醫(yī)藥工業(yè)總產(chǎn)值的15%左右。在我國微生物制藥也是醫(yī)療工業(yè)的支柱行業(yè)之一。

1.微生物制藥的概念和特點

微生物制藥是利用微生物技術(shù)，通過高度工程化的新型綜合技術(shù)，以利用微生物反應(yīng)過程為基礎(chǔ)，依賴于微生物機體在反應(yīng)器內(nèi)的生長繁殖及代謝過程來合成一定產(chǎn)物，通過分離純化技術(shù)進行提取精制，并最終制劑成型來實現(xiàn)藥物產(chǎn)品的生產(chǎn)[2]。

微生物制藥工業(yè)生產(chǎn)的特點是利用某種微生物以“純種狀態(tài)”，也就是不僅“種子”要優(yōu)而且只能是一種，如其它菌種進來即為雜菌。對固定產(chǎn)品來說，一定按工藝有它最合適的“飯”—培養(yǎng)基，來供它生長。培養(yǎng)基的成分不能隨意更改，一個菌種在同樣的發(fā)酵培養(yǎng)基中，因為只少了或多了某個成分，發(fā)酵的成品就完全不同。如金色鏈霉菌在含氯的培養(yǎng)基中可形成金霉素，而在沒有氯化物或在培養(yǎng)基中加入抑制生成氯化的物質(zhì)，就產(chǎn)生四環(huán)素。

2.微生物制藥技術(shù)

微生物藥物的利用是從人們熟知的抗生素開始的，近年來，由于基礎(chǔ)生命科學(xué)的發(fā)展和各種新的生物技術(shù)的應(yīng)用，報道的微生物產(chǎn)生的除了抗感染、抗腫瘤以外的其他生物活性物質(zhì)日益增多，如特異性的酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、受體拮抗劑和抗氧化劑等，其活性已超出了抑制某些微生物生命活動的范圍。但這些物質(zhì)均為微生物次級代謝產(chǎn)物，其在生物合成機制、篩選研究程序及生產(chǎn)工藝等方面和抗生素都有共同的特點，但把它們通稱為抗生素顯然是不恰當?shù)?，于是不少學(xué)者就把微生物產(chǎn)生的這些具有生理活性（或稱藥理活性）的次級代謝產(chǎn)物統(tǒng)稱為微生物藥物[3]。微生物藥物的生產(chǎn)技術(shù)就是微生物制藥技術(shù)?？梢哉J為包括五個方面的內(nèi)容：

2.1菌種的獲得

根據(jù)資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購買；從大自然中分離篩選新的微生物菌種。新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產(chǎn)的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準確地把所需要的菌種挑選出來，進行生產(chǎn)性能測定。這些特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營養(yǎng)要求、生理生化特性、發(fā)酵周期、產(chǎn)品品種和產(chǎn)量、耐受最高溫度、生長和發(fā)酵最適溫度、最適pH值、提取工藝等。

2.2高產(chǎn)菌株的選育

由于為生物基因突變是對即發(fā)生的，人們正在尋求基因的定向突變經(jīng)誘變劑處理的細胞中只有一部分是突變型菌株，況且，在突變型菌株中又只有一小部分是理想得的正突變體菌株，而有害突變體往往占很大比例；另一方面，從自然界篩選得來的菌株藥物代謝合成能力低，野生型菌株由于長時間生長在非最適條件下，大多只產(chǎn)生不帶10mg/L產(chǎn)物[4]，而對于工業(yè)生產(chǎn)來說，如果不盡心改良，勢必造成成本過高，因而沒有工業(yè)生產(chǎn)價值；即使是以用于工業(yè)生產(chǎn)的菌株，危機不斷提高產(chǎn)量、降低成本，軍中改良也是手段之一要想使菌種產(chǎn)量不斷提高，最根本的還是要依靠本身固有的遺傳特性，這就必須不斷的進行軍中選育、改良。

工業(yè)菌種的育種是運用遺傳學(xué)原理和技術(shù)對某個用于特定生物技術(shù)目的的菌株進行的多方位的改造。通過改造，可使現(xiàn)存的優(yōu)良性狀強化，或去除不良性質(zhì)或增加新的性狀。育種的方法包括：自然選育、誘變育種、雜家育種、基因工程技術(shù)改良菌種。

2.2.1自然選育 自然選育是指為生物細胞群體不經(jīng)人工處理的自發(fā)突變進行菌種選育的育種方法。自然選育也稱自然分離，主要是對菌種加以純化，以獲得遺傳背景較為均一的細胞群體。一般菌種經(jīng)過多次傳代或長期保存后，由于自發(fā)突變或異核體和多倍體的分離，使有些細胞的遺傳性狀發(fā)生改變，造成菌種不純，生產(chǎn)能力下降，亦即菌種退化。因此在工業(yè)生產(chǎn)和發(fā)酵研究中要經(jīng)常進行自然分離，純化菌種。但微生物的自發(fā)突變頻率很低，正突變頻率更低，因而通過自然選育雖能提高菌種生產(chǎn)力或獲得某種優(yōu)良特性菌株，但一般倆說，效率低、進展慢，效果不顯著。因此，經(jīng)常將自然選育和有變育種交替使用，這樣可以收到良好的效果。

2.2.2誘變育種

誘變育種使用不同的誘變劑處理微生物的細胞群體，易誘發(fā)遺傳突變，然后采用漸變、快速和高效的篩選的方法，從中選出所需要的變株。采用這種方法，微生物菌種突變的頻率比自發(fā)突變有大幅度的提高，但所誘發(fā)的遺傳性狀的改變時隨機的，因而需要進行大量的篩選。誘變育種在工業(yè)微生物育種中應(yīng)用最早。當前，發(fā)酵工業(yè)中使用的高產(chǎn)菌株，幾乎都是通過誘變育種而大大提高了生產(chǎn)性能的菌株，故至今仍是菌種改良的主要方法之一。

誘變劑育種的方法但很多，了歸納起來可分為物理誘變劑、化學(xué)誘變劑、和生物誘變劑三大類。

物理誘變劑包括紫外線、快中子、X射線、γ射線、β射線、激光、微波等?；瘜W(xué)誘變劑有烷化劑、嵌合劑、堿基類似物、亞硝酸、抗生素。生物誘變劑有噬菌體和轉(zhuǎn)座引子。

2.2.3雜交育種

雜交育種是將兩個基因型不同的親株的某些遺傳信息，通過雜交重新組合與同一個充足體重，形成新的遺傳型個體的過程。雜交育種包括準性生殖、接合、原生質(zhì)融合。其中原生質(zhì)融合包括選出標記菌株，兩親株分別制備原生質(zhì)體，原生質(zhì)體的再生，融合子的選擇五個步驟。

2.2.4基因工程技術(shù)改良菌種

多年來，由于大量使用甚至濫用抗生素，一直普遍出現(xiàn)耐藥菌，人們希望有更多的新抗生素代替現(xiàn)有瓶中，而常規(guī)方法從微生物中發(fā)現(xiàn)新抗生素已經(jīng)越來越難，如果采用誘變育種方法來尋找新品種，存在選育周期長、效率低以及盲目性、隨機性的問題?；蚬こ蹋粗亟MDNA技術(shù)的實際應(yīng)用，從分子水平上揭開了遺傳的奧秘。隨著這一技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，重組DNA技術(shù)已在微生物菌種改良中起著越來越重要的作用，在工業(yè)上已經(jīng)取得有重要意義的成果。

在微生物菌種改良上，重組DNA技術(shù)可實現(xiàn)微生物藥物的產(chǎn)量單位上的提高，如增加限速酶基因拷貝數(shù)，引入抗性基因和調(diào)節(jié)基因，通過克隆抗生素的全部結(jié)構(gòu)基因改變表達體系提高產(chǎn)量。重組DNA技術(shù)還可通過以下四個方面實現(xiàn)菌種改良（1）阻斷支路代謝，增加有效組分含量（2）構(gòu)建能產(chǎn)生半合成抗生素中間體的基因工程菌（3）構(gòu)建生產(chǎn)新型化合物的基因工程菌（4）引入血紅蛋白基因，改善微生物的工業(yè)性狀[5]。

2.3微生物藥物產(chǎn)生菌的保藏

原始菌種一半活性較低，不能馬上用于生產(chǎn)，必須經(jīng)理自然分離和人工誘變，需要做大量的工作才能獲得穩(wěn)定的優(yōu)質(zhì)菌株，將這個優(yōu)質(zhì)菌株保存起來是工業(yè)菌株管理的一道必要程序，在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中某種產(chǎn)品能否持續(xù)高產(chǎn)，大部分依賴于菌種的穩(wěn)定性。菌種保存的方法有：(1)移植培養(yǎng)保藏法（2）液體石蠟保藏法（3）沙土保藏法（4）麥粒保藏法（5）低溫保藏法（6）冷凍干燥保藏法（7）L-干燥保藏法（8）雙層管瓶保藏法（9）液氮超低溫保藏法。[6]2.4微生物藥物的發(fā)酵工藝

根據(jù)操作方式不同，發(fā)酵工藝分為間歇發(fā)酵，連續(xù)發(fā)酵和流加發(fā)酵三種類型，其中流加發(fā)酵在生產(chǎn)和科研上應(yīng)用最為廣泛。在發(fā)酵工藝中反映發(fā)酵過程變化的參數(shù)分為物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)和生物學(xué)參數(shù)三大類，這些參數(shù)的變化直接影響到發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)率和產(chǎn)物品質(zhì)。對發(fā)酵工藝過程影響較大的是發(fā)酵溫度、pH值、溶解氧、泡沫、菌體濃度和基質(zhì)、發(fā)酵時間[7]等6個方面，他們分別對發(fā)酵過程的影響這里不做贅述。發(fā)酵工藝簡要步驟如下：

（1）首先要了解菌種的來源、生活習(xí)慣、生理生化特性和一般的營養(yǎng)要求。根據(jù)不同類型微生物的生理特性考慮培養(yǎng)基的組成。

（2）其次要了解生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)條件，生物合成的代謝途徑，代謝產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、一般提取方法和產(chǎn)品質(zhì)量。

（3）選擇一種較好的化學(xué)合成培養(yǎng)基做基礎(chǔ)，先做一些試驗性實驗，考察微生物藥物的產(chǎn)量和品質(zhì)。不斷調(diào)整各種營養(yǎng)物質(zhì)和其他物質(zhì)的配比來改善產(chǎn)品的質(zhì)量。

（5）有些發(fā)酵產(chǎn)物，如抗生素等，除了配制培養(yǎng)基以外，還要通過中間補料法，一面對碳及氮的代謝予以適當?shù)目刂?，一面間歇添加各種養(yǎng)料和前體類物質(zhì)，引導(dǎo)發(fā)酵走向合成產(chǎn)物的途徑[8]。

(6)選擇培養(yǎng)及原料時也應(yīng)考慮經(jīng)濟效益。

2.5微生物藥物的分離、精制和鑒別

2.5.1微生物藥物的分離提取

微生物藥物的分離提取的方法有：溶劑萃取法，離子交換法[9]。2.5.2微生物藥物的精致

經(jīng)過分離提取所得的產(chǎn)品一般仍為粗品，需要進一步精制，由于粗品的純度較低，量很少，進一步精制主要借助色譜技術(shù)。按照分離機理，色譜法可分為媳婦色譜、分配色譜、離子交換色譜和排阻色譜。20世紀60年代以后基于技術(shù)的進步發(fā)展了高壓液相色譜技術(shù)，其機理與經(jīng)典色譜相同，但分離效率大大提高[10]。

2.5.3微生物藥物的鑒別

迄今發(fā)現(xiàn)的抗生素級其他有生理活性的微生物產(chǎn)物已逾萬種，采用各種方法和模型其目的是增加新活性化合物出現(xiàn)的幾率，但在篩選中絕大多數(shù)化合物都是已知的，所以微生物產(chǎn)物的鑒別在微生物制藥工業(yè)中也是一個重要步驟[11]?，F(xiàn)階段主要利用的微生物藥物快速準確鑒別的技術(shù)是LC-UV（液相色譜-紫外光譜連用技術(shù)）、LC-MS（液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)）、LC-IR（液相色譜-紅外連用技術(shù)）及LC-NMR（液相色譜-核磁共振連用技術(shù)）。

3.我國微生物制藥的研究進展

過去5年中國創(chuàng)新微生物藥物篩選與發(fā)現(xiàn)研究獲進展，目前已擁有12萬株40萬份的藥用微生物菌株和20萬個微生物發(fā)酵提取品，微生物產(chǎn)物高通量篩選模型150多個，獲得了一批微生物藥物先導(dǎo)化合物或候選物，為創(chuàng)新微生物藥物研發(fā)奠定了良好基礎(chǔ)。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所所長蔣建東近日披露這一信息時稱，中國是擁有生物多樣性最多的國家，具有研究開發(fā)利用微生物藥用資源優(yōu)勢。目前已建立了200萬樣次的規(guī)?；⑸锼幬锔咄亢Y選平臺，每年都有新的微生物藥物品種申請臨床批件，其中可利霉素已完成Ⅲ期臨床試驗，力達霉素和埃博霉素等正進行Ⅱ期臨床試驗。微生物藥物已占全球藥品市場20%以上，占中國內(nèi)地市場的35%以上[12]。

4.結(jié)語與展望

微生物制藥工業(yè)在醫(yī)藥工業(yè)中所占的比例越來越大，這種技術(shù)相比于化學(xué)合成的方法更為簡便，而且經(jīng)濟效益也更高。微生物制藥技術(shù)作為一項新興的技術(shù)，在世界各國衛(wèi)生醫(yī)療、環(huán)境保護等領(lǐng)域已經(jīng)取得了卓越的成績。歐美日等國已不同程度地制定了今后幾十年內(nèi)用生物過程取代化學(xué)過程的戰(zhàn)略計劃，可以看出工業(yè)微生物技術(shù)在未來社會發(fā)展過程中重要地位。如胰島素、氨基酸、牛痘等微生物制藥技術(shù)成熟發(fā)展的產(chǎn)物。21世紀初在微生物制藥領(lǐng)域中，寶曲這一科研成果成為利用微生物制藥成功的典范，尤其是在心腦血管領(lǐng)域占有舉足輕重的作用。一方面隨著制藥工藝的不斷完善和成熟，微生物制藥必然能夠解決更多傳統(tǒng)制藥工藝所不能解決的問題，有利于加速醫(yī)藥衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展。另一方面現(xiàn)代社會以追求綠色高科技，可持續(xù)發(fā)展為目標，隨著能源日益稀缺傳統(tǒng)醫(yī)藥發(fā)展瓶頸日趨嚴重，微生物制藥將在醫(yī)療領(lǐng)域發(fā)揮重大作用。

參考文獻

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第三篇：分子克隆3—蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)

蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)

一、雙雜交和其他雙成分系統(tǒng)

二、用GST融合蛋白進行Far Western 印記來檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用

三、用GST融合蛋白沉降技術(shù)檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用

四、通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白

五、采用GFP和熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)測定蛋白質(zhì)相互作用

六、利用BIAcore通過表面胞質(zhì)基因共振光譜學(xué)分析相互作用的蛋白質(zhì)

七、。。

導(dǎo)言

一、多數(shù)蛋白質(zhì)研究工作可分為四個類別：

1.二、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究的3個層次

1.研究的目的是確定各種可能與目標蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，此時要撒大網(wǎng)，因此生理意義暫時不被看重；

2.感興趣的相互作用蛋白質(zhì)已被確定，研究的目的是通過詳細分析生物學(xué)功能，來確定相互作用的生理學(xué)意義和影響。

3.某中相互作用已被發(fā)現(xiàn)，并且被證實是生理性的，此時研究的目的是提供一種高通量的方法，以發(fā)現(xiàn)能夠按所需的方式調(diào)節(jié)這種相互作用的試劑。

三、與蛋白質(zhì)相互作用直接相關(guān)的另一領(lǐng)域是分子模建：

四、各種技術(shù)應(yīng)用分析：

1.所列方案（1~6），不能證明觀察到的相互作用是直接或間接的，如果研究目的是確定直接相互作用，最終使用的方法中必須采用純化的蛋白質(zhì)。

2.特定蛋白質(zhì)的內(nèi)在性質(zhì)在某種程度上決定了哪種技術(shù)能有效的用于分析蛋白質(zhì)相互作用；`` 3.雙雜交和基于GST-融合的篩選方法（方案1，2，3）適用于撒大網(wǎng)式的應(yīng)用研究。方案2，3只是用來確定體外的相互作用,這種體外的相互作用應(yīng)當進一步在體內(nèi)通過單獨的方法來證實。

4.對于相互作用在生理上的證實和探索，采用內(nèi)源蛋白質(zhì)的免疫共沉淀（方案4）和FRET（方案5）的方法更可??；

5.為快速分析過去已確定的相互作用，雙雜交和GST沉降分析具有一些明顯的優(yōu)勢；

一、雙雜交和其他雙成分系統(tǒng)

二、用GST融合蛋白進行Far Western 印記來檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(一)`引言

1.細菌表達的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白被用于直接測定蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，以及親和純化。

2.融合蛋白的設(shè)計依賴于所選擇的檢測方法和計劃采用的篩選方式。

[1].對于文庫篩選，將盡可能大的探針蛋白包括進去可以增加檢測到的相互作用的數(shù)目。

[2].如果探針蛋白含有已知的相互作用區(qū)，并且他們用于證實預(yù)期的相互作用，那么僅含有這些結(jié)構(gòu)區(qū)域的融合蛋白可能更好。

3.GST成分可以二聚化并能產(chǎn)生背景。

4.籌劃Far Western 印記實驗需要考慮的因素：

[1].最重要的因素是：在沒有過多降解和不溶解蛋白質(zhì)的條件下合成融合蛋白的能力。

[2].從不同融合蛋白制備物得到的結(jié)果可能有所不同，所以監(jiān)控融合蛋白的狀態(tài)是非常重要的，這包括純化期間和純化后，如果蛋白質(zhì)被存放，還包括使用前后。[3].有助于確認蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用特異性的兩個對照是 a)用融合蛋白突變體探測，這種突變體可以破壞相互作用； b)用標記GST來探測膜。？

[4].最終，還要確定是否用變性/復(fù)性循環(huán)來探測膜，這樣設(shè)計是為了使錯誤折疊的蛋白質(zhì)重新折疊成天然構(gòu)像。

a)從SDS-PAGE轉(zhuǎn)移到膜的蛋白質(zhì)通常不需要變性和復(fù)性，如果在檢測SDS-PAGE時沒有產(chǎn)生蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，那么引入變性/復(fù)性過程可能產(chǎn)生陽性結(jié)果； b)在探測表達文庫覆蓋印記的濾膜時，許多研究人員發(fā)現(xiàn)變性/復(fù)性是必需的步驟。[5].5 5.5(二)實驗方案

1.Materials [1].緩沖液和溶液 [2].2.Methods: [1].放射標記蛋白探針的制備 [2].探測膜

3.3(三)注意事項

三、用GST融合蛋白沉降技術(shù)檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用

(一)`引言

1.GST-pull down 利用了GST對谷胱甘肽偶聯(lián)球珠的親和性，從非相互作用蛋白的溶液中純化相互作用蛋白。該技術(shù)對探測蛋白質(zhì)在溶液中的相互作用特別有用，而這種相互作用在膜的分析中可能是檢測不到的。2.GST-pull down通常有兩種應(yīng)用：

1)確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間新的相互作用；

a)未知蛋白可能受濃度的限制，為確定新的相互作用，未知蛋白質(zhì)必須以足夠的量存在，以使這種相互作用能用所選擇的檢測方法觀察到。b)放射標記的細胞裂解液時最常用的蛋白質(zhì)來源

c)在實驗前要考慮：實驗?zāi)康?，探針蛋白的表達等。2)證實探針蛋白與已知蛋白間可疑的相互作用；

a)各種蛋白質(zhì)來源可用于確定和探詢這種相互作用。

b)用于檢測相互作用的方法是由能否獲得對靶蛋白的抗體來決定的；如果抗體得不到，那么就可利用S標記的體外翻譯蛋白或靶蛋白用表位做標簽。必要時，可用編碼蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)然培養(yǎng)細胞，以增加分析蛋白質(zhì)的豐度。c)控制質(zhì)量作用（如非特異性聚集）的影響，并確認探針蛋白同靶蛋白分子間結(jié)合的特異性是非常重要的。

d)結(jié)合特異性的最好控制是包括一種帶有突變相互作用域的GST融合蛋白，喪

35失與這種突變探針蛋白的結(jié)合就表明靶和探針間的正常結(jié)合是特異性的。e)測試假定靶蛋白與GST間的結(jié)合也很重要。

3)3

這兩種實驗的設(shè)計和實施都有所不同。

3.GST-pull down必須對每個蛋白質(zhì)復(fù)合物的分析進行優(yōu)化：

1)發(fā)生相互作用的緩沖液；

2)與融合（探針）蛋白混合的把蛋白的量；所需材料的量主要由把蛋白的豐度和相互作用的親和力決定（實驗開始時兩個參數(shù)通常是未知的。）3)清洗球珠的條件； 4.4(二)實驗方案 A.材料

1.緩沖液和溶液

1）裂解緩沖液：? 2）50%谷胱甘肽瓊脂糖球珠懸液：在裂解緩沖液中配。（Beads are often supplied by commercial vendors in solutions containing alcohols.It is important to wash the beads thoroughly in GST pull-down lysis buffer and to generate a 50/50 slurry of beads in GST pull-down lysis buffer prior to use.）

3）溶于50mmol/L Tris-Cl(pH 8.0)中的還原型谷胱甘肽（20mmol/L）

（glutathione;γ-L-glutamyl-L-cysteinylglycine, GSH）

4）

2.專用設(shè)備

1)沸水浴

2)翻轉(zhuǎn)樣品旋轉(zhuǎn)儀（有，無？）3)谷胱甘肽瓊脂糖球珠 3.細胞和組織 4.附加試劑 B.方法

預(yù)清除細胞裂解液

1.將細胞裂解液與50?l的50%谷胱甘肽瓊脂糖球珠懸液和25?g GST在4℃翻轉(zhuǎn)混合孵育2h（實驗室內(nèi)如何實現(xiàn)？）。需要檢測相互作用的裂解液的量是高度可變的。開始用1×106~1×107個細胞的裂解液。（細胞裂解液提前制備好是否可以？若提前制備好，放于4℃還是-20℃）

a)預(yù)清除步驟主要是從裂解液中除去與GST成分或球珠有非特異性相互作用的蛋白質(zhì)。b)如果相互作用的檢測主要是用針對候選相互作用蛋白質(zhì)的抗體，那么做預(yù)清除并不總是必須的。包含兩種對照很重要：GST加球珠和僅有球珠。

c)在用35S標記的細胞裂解液用于確定新的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用時，預(yù)清除步驟有助于降低本底。

d)實驗的目的是比較GST與GST融合蛋白，有必要對每個反應(yīng)制備足夠量的預(yù)清除細胞裂解液。（多少算足夠？以蛋白質(zhì)的濃度定？還是靶蛋白的表達量來定？）

e)試劑有效的混合是成功的關(guān)鍵，為達到此目的，反應(yīng)應(yīng)在一個合理的體積中進行：一個好的起始值是500~1000?l。

2.在微量離心機上以最大速度在4℃離心混合物2min。（13,000 rpm）3.將上清（就是預(yù)清除的細胞裂解液）轉(zhuǎn)移到新的離心管中。

探測細胞裂解液

4.設(shè)定兩個含等量預(yù)清除細胞裂解液及50?l的50%谷胱甘肽瓊脂糖球珠懸液的微量離心管。在一個管中加約（~5-10 μg）的GST蛋白，另一管中加約（~5-10 μg）的GST融合探針蛋白。將離心管在4℃翻轉(zhuǎn)混合孵育2h。兩個反應(yīng)中加入的探針和對照蛋白終濃度應(yīng)該是相同的。（終濃度相同的意義是什么？如果融合蛋白不純化，如何確保其濃度相同？）

5.在微量離心機上以最大速度離心樣品2min。（13,000 rpm）（谷胱甘肽瓊脂糖球珠的分子量，其連上蛋白后是否可以沉淀下來？）

6.在新的離心管中收集上清。這些樣品可通過步驟10中的SDS-PAGE進行分析。（進行分析的目的：How much of the interacting protein was depleted from the total cell lysate.以優(yōu)化實驗條件）

7.用1ml冰冷的裂解液洗球珠。在微量離心機上以最大速度離心混合物1min。棄去上清。重復(fù)洗三次。（4次---cold spring harbor protocol）8.（可選）加入50?l 20mmol/L的還原型谷胱甘肽到球珠中，洗脫GST融合蛋白及任何與其結(jié)合的蛋白質(zhì)。在微量離心機上以最大速度離心2min。（洗脫方法的缺點：若多次洗脫，最后終體積較大，后續(xù)上樣較麻煩。所以多數(shù)研究者選擇將球珠煮沸以使目的蛋白與GST融合蛋白分離。）

9.將球珠（來自步驟7）或洗脫蛋白質(zhì)（來自步驟8）與等體積的2×SDS-PAGE上樣緩沖液混合。

檢測相互作用蛋白質(zhì)

10.將樣品煮沸4min并作SDS-PAGE分析。

11.檢測與GST融合蛋白結(jié)合的蛋白質(zhì)的方法取決于細胞裂解液是否被的目的。

5S標記以及實驗a)如果目的是檢測與融合蛋白結(jié)合的所有的35S標記的蛋白，就在干膠儀上將膠抽干，并用X線膠片曝光進行放射自顯影。

b)如果目的是檢測特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，就將蛋白質(zhì)從SDS-PAGE轉(zhuǎn)移到膜上，進行免疫印跡分析。

c)如果目的是確定與融合蛋白結(jié)合的蛋白質(zhì)的大小和豐度，而這些蛋白質(zhì)是來自非放射性的裂解液，就用考馬斯亮藍或硝酸銀將膠染色。

(三)注意事項

四、通過免疫共沉淀確定結(jié)合蛋白

(一)`引言(二)實驗方案

A.材料 1.緩沖液和溶液 2.專用設(shè)備 3.細胞和組織 4.附加試劑

B.方法

(三)注意事項

五、采用GFP和熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)測定蛋白質(zhì)相互作用

(一)`引言(二)實驗方案

A.材料 5.緩沖液和溶液

6.專用設(shè)備 7.細胞和組織 8.附加試劑

B.方法

(三)注意事項

六、利用BIAcore通過表面胞質(zhì)基因共振光譜學(xué)分析相互作用的蛋白質(zhì)

(一)`引言(二)實驗方案(三)注意事項

第四篇：大豆重要農(nóng)藝性狀的QTL定位及分子標記輔助育種研究

大豆重要農(nóng)藝性狀的QTL定位及分子標記輔助育種研究 大豆重要農(nóng)藝性狀大多數(shù)是數(shù)量性狀，受多個基因控制，其表現(xiàn)很大程度上受環(huán)境的影響。利用分子標記構(gòu)建飽和的大豆分子連鎖圖譜，可用來研究大豆基因組的排列和特征，標記和追蹤有經(jīng)濟意義的基因，分析復(fù)雜的農(nóng)藝性狀的遺傳特征，并且發(fā)現(xiàn)和克隆控制農(nóng)藝性狀的基因。本研究利用黃淮夏大豆科新3號為父本、中黃20為母本雜交得到192個F2:3家系，利用F2分離群體構(gòu)建的含122個SSR標記、覆蓋1719.6cM、由33個連鎖群組成的連鎖遺傳圖譜。利用復(fù)合區(qū)間作圖法，對F2:3家系的有效分枝數(shù)、主莖節(jié)數(shù)、百粒重、蛋白質(zhì)含量和油份含量等農(nóng)藝性狀的調(diào)查數(shù)據(jù)進行QTL分析，共檢測到三個與株高相關(guān)的QTL，貢獻率均為6％；一個與主莖節(jié)數(shù)相關(guān)的QTL，貢獻率為6％；一個與有效分枝數(shù)相關(guān)的QTL，貢獻率為6%；一個與單粒重相關(guān)的QTL,貢獻率為5%；三個與百粒重相關(guān)的QTL，貢獻率分別為10%、9%和7%；兩個與蛋白質(zhì)含量相關(guān)的QTL，貢獻率分別為5％和6%；一個與油分含量相關(guān)的QTL，貢獻率為8％。同時，利用東北春大豆綏農(nóng)14為父本、綏農(nóng)20為母本雜交得到580個F2分離群體。利用單標記分析方法對90個單株的株高、節(jié)數(shù)、莢數(shù)、蛋白質(zhì)含量和油分含量等農(nóng)藝性狀的調(diào)查數(shù)據(jù)進行了QTL分析，檢測到兩個與株高相關(guān)的QTL，貢獻率分別為42%和23%；三個與節(jié)數(shù)相關(guān)的QTL，貢獻率分別為35%、17%和11%；兩個與莢數(shù)相關(guān)的QTL，貢獻率分別為13%和14%；兩個與秕粒數(shù)相關(guān)的QTL，貢獻率分別為30%和17%；兩個與生物重相關(guān)的QTL，貢獻率分別為12%和11%；一個與百粒重相關(guān)的QTL，貢獻率為16%；三個與蟲食率相關(guān)的QTL，貢獻率分別為11%、12%和13%；三個與病粒率相關(guān)的QTL，貢獻率分別為10%和13%。同時利用復(fù)合區(qū)間作圖法對東北春大豆群體的F2分離群體的農(nóng)藝性狀的數(shù)據(jù)進行QTL分析，檢測到一個與株高相關(guān)的QTL，貢獻率為23%；一個與百粒重相關(guān)的QTL，貢獻率為7%；一個與蟲食率相關(guān)的QTL，貢獻率為12%；一個與病斑率相關(guān)的QTL，貢獻率為25%。這些標記為本試驗的進一步研究奠定了基礎(chǔ)，可以應(yīng)用于分子標記輔助育種，為培育具有優(yōu)良農(nóng)藝性狀的高產(chǎn)、高油或高蛋白品種提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：大豆連鎖遺傳圖譜SSR標記復(fù)合區(qū)間作圖法QTL 貢獻率

第五篇：聚羧酸高效減水劑的低溫合成技術(shù)及性能研究

聚羧酸高效減水劑的低溫合成技術(shù)及性能研究

---青島鼎昌新材料 引言近年來，混凝土外加劑的生產(chǎn)已經(jīng)朝著高性能、無污染方向發(fā)展。以聚羧酸系為代表的第三代高性能減水劑大量應(yīng)用于大型建設(shè)工程。該類減水劑的主要優(yōu)點是摻量低、減水率高、高分散性、高保坍性、引言

近年來，混凝土外加劑的生產(chǎn)已經(jīng)朝著高性能、無污染方向發(fā)展。以聚羧酸系為代表的第三代高性能減水劑大量應(yīng)用于大型建設(shè)工程。該類減水劑的主要優(yōu)點是摻量低、減水率高、高分散性、高保坍性、引氣量小、不泌水等，是配制高強度、高耐久性、大流態(tài)等高性能混凝土的首選減水劑，并被國內(nèi)外公認為環(huán)保型高性能減水劑，對此類減水劑的合成研究是當前混凝土外加劑研究領(lǐng)域的最熱門課題之一。

目前，聚羧酸合成技術(shù)已經(jīng)比較成熟、穩(wěn)定，但仍存在著合成溫度比較高(60 ～80 ℃)，整個反應(yīng)時間比較長(5 ～7 h)，生產(chǎn)效率低的問題對于在低溫條件下、高效合成減水劑的工藝罕見報道，因此開發(fā)出一種合成溫度低、反應(yīng)時間短的合成方法顯得尤為重要。本研究從降低聚合反應(yīng)的溫度(20 ～25 ℃)入手，以異戊烯醇聚氧乙烯醚、甲基丙烯磺酸鈉、丙烯酸、復(fù)合引發(fā)劑 E 等為原料，在較短反應(yīng)時間內(nèi)(2 h)，通過自由基共聚合反應(yīng)合成聚羧酸高效減水劑，實現(xiàn)一種聚羧酸減水劑的低溫合成技術(shù)。試驗

2． 1 主要原料和設(shè)備

異戊烯醇聚氧乙烯醚(TPEG2400)，工業(yè)品;甲基丙烯磺酸鈉(SAMS)，化學(xué)純;丙烯酸(AA)，工業(yè)品;去離子水，工業(yè)品;氫氧化鈉，分析純;引發(fā)劑 E。

DF-101S 集熱式磁力攪拌(河南智誠儀器有限公司);DW-1 型電動攪拌器(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠);分析天平(上海精密儀器有限公司);NJ-160A 水泥凈漿攪拌機(無錫市建鼎建工儀器廠);蠕動泵(保定創(chuàng)銳泵業(yè)有限公司)。2． 2 聚羧酸減水劑的制備

一定量的 TPEG2400 單體和 SAMS 置入四口燒瓶中，加入適量的去離子水，開啟蠕動泵，于2 h 內(nèi)勻速滴加引發(fā)溶劑 E 及 AA 水溶液，反應(yīng)過程中溫度保持在 20 ～25 ℃，滴加完成后，用 w(NaOH)=40% 的水溶液調(diào)節(jié)體系 pH 值至中性，即得聚羧酸產(chǎn)品。2． 3 產(chǎn)品性能測試

水泥凈漿流動度與 1 h 經(jīng)時流動度的測量，按照 GB/T 8077-2012《混凝土外加劑勻質(zhì)性試驗方法》，水灰比 0． 29，減水劑摻量 0． 18%，分別測定水泥凈漿流動度和水泥砂漿減水率。結(jié)果與討論

3． 1 酸醚比對減水劑分散性能的影響

在 25 ℃條件下，固定甲基丙烯磺酸鈉(SAMS)的配比，引發(fā)劑 E 用量為 0． 18%((相對于所有單體總摩爾量的百分比，下同)，保持其他操作條件的相同情況下，考查不同酸醚比 n(AA)∶ n(TPEG2400)對減水劑分散性和分散保持性能的影響，試驗結(jié)果見圖 1。

由圖 1 可知，隨著 n(AA)∶ n(TPEG2400)的增大，凈漿流動度逐漸增大。當 n(AA)∶ n(TPEG2400)= 4時水泥凈漿流動度達到280 mm，1 h 后保持在270 mm。主要是由于減水劑吸附到水泥顆粒表面，TPEG 中的PEO 側(cè)鏈在水泥顆粒間產(chǎn)生良好的空間阻礙作用，使水泥顆粒不能彼此靠近，有效阻礙水泥的絮凝，且-COOH 與 PEO 側(cè)鏈的比例適當，主鏈上帶電荷基團的靜電斥力和側(cè)鏈上的空間位阻效應(yīng)的協(xié)同作用充分發(fā)揮，分子結(jié)構(gòu)合理，各官能團協(xié)調(diào)作用，使減水劑的分散性及分散保持性最好。當 n(AA)∶ n(TPEG2400)﹥4 時水泥凈漿流動度開始明顯下降，可能是因為丙烯酸濃度增大，丙烯酸的自聚傾向增強，很容易形成均聚物，導(dǎo)致水泥的分散性能及分散保持性能下降。

3． 2 SAMS 用量對減水劑分散性能的影響

在 25 ℃條件下，固定 n(AA)∶ n(TPEG2400)為 4∶ 1，引發(fā)劑 E 用量為 0． 18%，保持其他操作條件的不變情況下，考查不同甲基丙烯磺酸鈉對減水劑分散性和分散保持性能的影響，試驗結(jié)果見圖 2。

由圖 2 可知，隨著 SAMS 用量的增加，水泥的凈漿流動度先增大后減小。當 SAMS 用量0． 3 mol 時，減水劑的初始凈漿流動度達到 280 mm，1 h 后保持在 270 mm。這是因為 SAMS 具有親水基團-SO 3 H，具有較好的減水性和緩凝效果，隨著 SAMS 用量的增加，聚合產(chǎn)物的分散性顯著提高，但其用量過大時，SAMS 具有一定的鏈轉(zhuǎn)移作用，會影響減水劑相對分子質(zhì)量的大小，易生成不易溶于水的聚合物。

3． 3 引發(fā)劑 E 對減水劑分散性能的影響

在 25 ℃條件下，固定 n(AA)∶ n(TPEG2400)為4∶ 1，SAMS 0． 3 mol，保持其他操作條件的不變情況下，考查不同引發(fā)劑 E 用量(相對于所有單體總摩爾量的百分比)對減水劑分散性和分散保持性能的影響，試驗結(jié)果見圖 3。

由圖 3 可知，隨著引發(fā)劑用量的增加，水泥的凈漿流動度先增大后減小，當引發(fā)劑用量為 0． 18% 時，水泥凈漿初始流動度達到 280 mm，1 h 后仍保持在 270 mm。當用量繼續(xù)增加時，水泥的凈漿流動度反而下降。

這是因為，在聚合反應(yīng)中，引發(fā)劑不僅能起到引發(fā)聚合反應(yīng)的作用，且具備一定的調(diào)節(jié)分子量作用。引發(fā)劑用量較少時，所得聚合物的主鏈聚合度相對較高，分子量較大，容易產(chǎn)生絮凝，當引發(fā)劑用量過高時，所得聚合物的主鏈聚合度過低，分子量較小，所帶的負電基團較少，靜電斥力小，減水劑的分散性能降低。1

3． 4 反應(yīng)溫度對減水劑分散性能的影響 固定 n(AA)∶ n(TPEG2400)為 4∶ 1，SAMS 的用量 0． 3 mol，引發(fā)劑 E 用量 0． 18%，在室溫下，采用恒溫水浴鍋控制反應(yīng)溫度 10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃進行實驗，考查不同反應(yīng)溫度對減水劑分散性和分散保持性能的影響，試驗結(jié)果見圖 4。

由圖 4 可知，減水劑的分散性隨著反應(yīng)溫度的升高呈現(xiàn)曲線變化。反應(yīng)溫度在 25 ℃時，所得減水劑性能最佳，可使水泥初始靜凈漿流動度達到 280 mm，1 h 后保持在 270 mm。當溫度高于 25 ℃時，引發(fā)劑 E 分解速率較快，聚合速度太快，支鏈太多，殘余單體數(shù)量較多，聚合反應(yīng)不完全。當溫度低于 20 ℃時，引發(fā)劑 E分解速率降低，聚合速度變慢，單體轉(zhuǎn)化率降低。

3． 5 投料方式對減水劑分散性能的影響 根據(jù)自由基聚合原理，投料方式的不同會影響大單體和丙烯酸的共聚傾向及大單體的轉(zhuǎn)化率。在25 ℃條件下，固定 n(AA)∶ n(TPEG2400)為4∶ 1，SAMS 的用量0． 3 mol，引發(fā)劑 E 用量0． 18%，反應(yīng)時間2 h，此處主要考查了不同投料方式對減水劑分散性能的影響:(1)全混法:將 TPEG、SAMS、AA、引發(fā)劑 E 一次性投入三口燒瓶中，控制溫度進行反應(yīng) 2 h。(2)半混法:將一定配比的 TPEG、SAMS、AA 投入三口燒瓶中，引發(fā)劑 E 混合均勻后連續(xù)滴加 2 h 進行反應(yīng)。(3)分別滴加法:將一定配比的 TPEG、SAMS 投入三口燒瓶中，AA 及引發(fā)劑 E 分別同時以滴加加入。試驗結(jié)果見圖 5。

由圖 5 可知，相同條件下，采用分別滴加法所得減水劑流動度較大，初始凈漿流動度達到 280 mm。主要原因是全混法和半混法反應(yīng)體系中，活性較大的單體先行聚合，剩余活性較小的單體聚合速率較低，使得產(chǎn)品中有效成分較少，且分子量不均勻。而分別滴加法有效的控制了活性較高的單體的加入速率，所得產(chǎn)品結(jié)構(gòu)合適、分子量均勻，其凈漿的流動度及保留性比較理想。因此，試驗中采用分別滴加法。

3． 6 反應(yīng)時間對減水劑分散性能的影響

在 25 ℃條件下，固定 n(AA)∶ n(TPEG2400)為 4∶ 1，SAMS 的用量 0． 3 mol，引發(fā)劑 E 用量 0． 18%，保持其他操作條件的相同情況下，考查不同反應(yīng)時間對減水劑分散性和分散保持性能的影響，試驗結(jié)果見圖 6。

在聚合反應(yīng)中，自由基聚合反應(yīng)，一般不存在中間產(chǎn)物，反應(yīng)體系除了生成一定分子量的聚合物，就是未反應(yīng)的單體。隨著反應(yīng)時間的增長，減水劑大分子鏈上接枝的不同官能團的數(shù)目隨之增加，反應(yīng)程度也隨之增加，所得減水劑的流動度也隨之增大。由圖 6 可知，反應(yīng)時間 2 h 時，所得減水劑性能最佳，可使凈漿度達到 280 mm。當反應(yīng)時間超過 2 h，凈漿流動度基本保持不變，因此最佳反應(yīng)時間為 2 h。

3． 7 采用最佳工藝制得的減水劑性能測定

在25 ℃條件下，n(SAMS)∶ n(AA)∶ n(TPEG2400)=0． 3∶ 4． 0∶ 1． 0，2 h 內(nèi)勻速滴加引發(fā)劑 E 及共聚單體AA 于 SAMS、TPEG 混合溶液中，共聚單體 AA 溶液先于引發(fā)劑 E 溶液滴加完畢，再用 w(NaOH)=40% 的水溶液中和，制得聚羧酸系減水劑。對此減水劑進行了水泥凈漿性能測試，在水灰比為 0． 29，摻量為 0． 18%條件下，水泥凈漿初始流動度為 280 mm，1 h 經(jīng)時流動度為 270 mm，減水率達到 29%。合成的聚羧酸減水劑在低摻量下表現(xiàn)出很好的分散性與分散保持性能，且減水效果較好。結(jié)論

(1)本文研究一種聚羧酸減水劑的低溫生產(chǎn)工藝，通過單因素實驗分析，得到最佳工藝條件:反應(yīng)溫度25 ℃，n(SAMS)∶ n(AA)∶ n(TPEG)=0． 3∶ 4． 0∶ 1． 0，引發(fā)劑 E 用量為 0． 18%，反應(yīng)時間 2 h;(2)采用最佳工藝條件合成得到的減水劑，在水灰比為 0． 29，摻量為 0． 18% 條件下水泥凈漿初始流動度為 280 mm，1 h 經(jīng)時流動度為 270 mm，具有較好的分散性與分散保持性能;(3)在混凝土中摻加采用最佳工藝制得的聚羧類減水劑，其減水率可達 27%，且強度越發(fā)穩(wěn)定。與國內(nèi)目前廣泛應(yīng)用的聚羧酸類減水劑相比，該減水劑減水率高，保坍性好，合成工藝簡單，且聚合反應(yīng)過程在室溫下即可完成，耗能更低，成本較低，具有良好的性價比和市場競爭力。

青島鼎昌新材料有限公司，是一家專業(yè)從事混凝土外加劑新材料的企業(yè)，集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術(shù)服務(wù)于一體。公司生產(chǎn)廠位于美麗的青島膠州市，考慮全國客戶產(chǎn)品的使用便捷性，我司先后在廣東省東莞市、陜西省西安市、四川省廣漢市建立分庫房，營銷中心坐落于陜西省古城西安，業(yè)務(wù)面向全國，截止目前成交客戶的數(shù)量已近千家，遍及全國。公司憑借多年的外加劑從業(yè)經(jīng)驗以及強大的技術(shù)團隊支持，先后研發(fā)出一系列適應(yīng)性強、綜合性價比高的混凝土外加劑產(chǎn)品，如：保塑劑系列、緩凝劑系列、改性引氣劑系列、阻泥劑系列、高效還原劑系列、抗泥型功能單體，在很大程度上解決了外加劑復(fù)配過程中坍損快、和易性差、流動性不好、易泌水等技術(shù)難題。

公司的持續(xù)發(fā)展，離不開廣大客戶對我司產(chǎn)品的不斷建議和信任驗證，應(yīng)市場廣大客戶需求公司于2014年建立專業(yè)的工藝技術(shù)研發(fā)團隊，從事聚羧酸常溫合成研究工作，新型的聚羧酸常溫工藝解決了部分客戶和易性、坍損快等技術(shù)問題，簡化了材料及生產(chǎn)的復(fù)雜性同時達到了環(huán)保要求。

我公司將致力于以適應(yīng)性廣泛的產(chǎn)品，先進的技術(shù)和完善的服務(wù)體系，與全國用戶通力合作，來滿足不同市場客戶的需求。竭誠歡迎各界朋友來電咨詢，洽談業(yè)務(wù)!