第一篇：人感染 H7N9 禽流感病毒標(biāo)本采集及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略

人感染 H7N9 禽流感 病毒標(biāo)本采集及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略

一、標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)送和檢測(cè)

（一）標(biāo)本采集 為進(jìn)行病例診斷，醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)盡早采集病人的相關(guān)臨床樣本。采 集的臨床標(biāo)本包括病人的上呼吸道標(biāo)本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽 取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道標(biāo)本（如氣管吸取物、肺洗液、肺組織標(biāo)本）和血清標(biāo)本等。應(yīng)當(dāng)盡量采集病例發(fā)病早期的呼吸道標(biāo) 本（尤其是下呼吸道標(biāo)本）和發(fā)病7天內(nèi)急性期血清以及間隔2-4周的 恢復(fù)期血清。如病人死亡，應(yīng)當(dāng)盡可能說服家屬同意尸檢，及時(shí)進(jìn)行 尸體，采集組織（如肺組織、氣管、支氣管組織）標(biāo)本。醫(yī)療機(jī) 構(gòu)采集的呼吸道標(biāo)本每份不少于3ml。血清標(biāo)本每份分為2管，每管不 少于0.5ml。對(duì)人感染H7N9禽流感 病例可能暴露的禽類飼養(yǎng)或交易等場(chǎng) 所，由疾控機(jī)構(gòu)采集禽類糞便、籠具涂拭標(biāo)本和環(huán)境污水等標(biāo)本，技 術(shù)要求參考《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測(cè)方案（2011年版）》。

（二）醫(yī)療機(jī)構(gòu)標(biāo)本檢測(cè)和轉(zhuǎn)送

1.病例的臨床標(biāo)本采集后，有條件開展核酸檢測(cè)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)要 對(duì)呼吸道標(biāo)本開展H7N9禽病毒核酸檢測(cè)，沒有條件開展核酸檢測(cè)的醫(yī) 療機(jī)構(gòu)應(yīng)立即利用快速抗原檢測(cè)試劑進(jìn)行甲型流感病毒抗原檢測(cè)，H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)陽性的臨床標(biāo)本按照B類感染性物質(zhì)進(jìn)行包 裝運(yùn)輸，在低溫條件下，48小時(shí)內(nèi)送到當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，由 當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室上送到省級(jí)疾控中心網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn) 室。甲型快速 抗原檢測(cè)陽性的標(biāo)本，按上述相同的包裝要求24小時(shí)內(nèi)送當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān) 測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室開展核酸檢測(cè)。

2、沒有條件開展上述檢測(cè)工作的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)符合病例定 義的病例后，要立即采集相關(guān)標(biāo)本，按照B類感染性物質(zhì)進(jìn)行包裝運(yùn) 輸，在低溫條件下，24小時(shí)內(nèi)送到當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。

3、流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)策略（流程圖見附件）流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室收檢的呼吸道標(biāo)本每份分為3管，每管應(yīng)不少于 1ml。1 于檢測(cè)，另外2 于復(fù)核和病毒分離。標(biāo)本儲(chǔ)存應(yīng)在-70℃ 或以下溫度，避免反復(fù)凍融。

（1）對(duì)于甲型流感病毒抗原陽性的疑似病例，在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行 H7、H5亞型的檢測(cè)，如檢測(cè)陰性，可繼續(xù)進(jìn)行甲型H1N1流感和季節(jié)性 H3N2流感病毒等檢測(cè)。

（2）對(duì)于有流行病學(xué)接觸史的疑似病例，在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行甲、乙型流感通用引物、H7和H5亞型的檢測(cè)。如上述檢測(cè)均陰性，不再進(jìn) 行流感病毒核酸檢測(cè)。若甲型流感病毒通用引物陽性，H7、H5亞型陰 性，可繼續(xù)進(jìn)行甲型H1N1流感和季節(jié)性H3N2流感病毒等檢測(cè)。

（3）在發(fā)生病例的地區(qū)開展強(qiáng)化監(jiān)測(cè)時(shí)，對(duì)采集的ILI和SARI 病例的呼吸道標(biāo)本在48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行甲、乙型流感病毒通用引物，以及 H5、H7亞型的檢測(cè)。如上述檢測(cè)均陰性，不再進(jìn)行流感核酸檢測(cè)。若 甲型通用引物陽性，H7、H5亞型陰性，按照2010年全國流感監(jiān)測(cè)方案 的要求開展病毒分離。（4）若當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果為H7亞型禽流感病毒 核酸陽性時(shí)，應(yīng)當(dāng)于48小時(shí)內(nèi)將其中2管呼吸道相關(guān)原始標(biāo)本送省級(jí) 疾控中心網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。

（5）省級(jí)疾控中心網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室在接到醫(yī)療機(jī)構(gòu)和本省網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn) 室送檢的H7和H5亞型陽性的呼吸道標(biāo)本時(shí)，具備相應(yīng)生物安全條件的 網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室在2周內(nèi)完成病毒分離工作，并將分離的毒株按要求48小 時(shí)內(nèi)送國家流感中心。未能開展病毒分離的省級(jí)疾控中心網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室 將陽性病例的原始標(biāo)本48小時(shí)內(nèi)送國家流感中心開展病毒分離。

（6）各醫(yī)療機(jī)構(gòu)采集的雙份血清標(biāo)本48小時(shí)內(nèi)送當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè) 網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，由當(dāng)?shù)鼐W(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室48小時(shí)內(nèi)將血清標(biāo)本分別送省級(jí)疾控 中心和國家流感中心開展相關(guān)抗體檢測(cè)，進(jìn)行病例診斷。

（7）對(duì)人感染H7N9禽流感 病例可能暴露的禽類飼養(yǎng)或交易 等場(chǎng)所，采集禽類糞便、籠具涂拭標(biāo)本和環(huán)境污水等標(biāo)本2周內(nèi)開展 甲型流感通用引物、H5、H7和H9亞型檢測(cè)。有條件開展病毒分離的實(shí) 驗(yàn)室對(duì)陽性標(biāo)本開展病毒分離工作，陽性分離株在2周內(nèi)送國家流感 中心。沒有條件開展病毒分離的實(shí)驗(yàn)室在2周內(nèi)將陽性標(biāo)本送國家流 感中心。具體技術(shù)要求可參考《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性 禽流感監(jiān)測(cè)方案（2011年版）》。

（8）對(duì)于甲型通用引物陽性而不能區(qū)分型別或亞型的毒株和陽 性標(biāo)本要求在48小時(shí)內(nèi)送至國家流感中心。

（9）國家流感中心在接到陽性標(biāo)本后2周內(nèi)完成病毒分離工作。

（三）實(shí)驗(yàn)室生物安全基本要求

1、H7N9禽流感病毒實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)和樣本運(yùn)輸按照《人間傳染的病 原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒進(jìn)行 和審批。并建立H7N9 禽流感病毒及樣本保存 制度，并采取可靠的安保措施。

2、未經(jīng)培養(yǎng)的臨床樣本的分裝、滅活和核酸提取應(yīng)當(dāng)在生物安 全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)開展。工作人員應(yīng)著防護(hù)服，佩戴眼罩、N95及以上水平的 等個(gè)人防護(hù)裝備。

3、H7N9禽流感病毒的分離培養(yǎng)須在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

4、樣本采集及實(shí)驗(yàn)活動(dòng)過程中產(chǎn)生的醫(yī)療廢物要分類收集，經(jīng) 壓力蒸汽滅菌或其他可靠滅菌后，按醫(yī)療廢物收集處置。

二、標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果反饋和報(bào)告 開展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的各級(jí)流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室和國家流感中心要 在檢測(cè)工作完成后24小時(shí)內(nèi)將標(biāo)本信息和檢測(cè)結(jié)果錄入到 “中國流感 監(jiān)測(cè)信息系統(tǒng)” “傳染病監(jiān)測(cè)技術(shù)平臺(tái)信息管理系統(tǒng)” 或（環(huán)境標(biāo)本）中。病例標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果在24小時(shí)內(nèi)由流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室所在疾控中 心反饋到病例所在醫(yī)院，由醫(yī)院進(jìn)行病例的報(bào)告。

第二篇：2014年人感染H7N9禽流感病毒培訓(xùn)試題(參考答案)

2014年人感染H7N9禽流感病毒培訓(xùn)試題（參考答案）

1、什么是流感？

流行性感冒，簡(jiǎn)稱流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。最常見的流感起病突然，畏寒、寒戰(zhàn)，高熱，體溫可達(dá)39～40℃，伴頭痛、全身肌肉關(guān)節(jié)酸痛、極度乏力、食欲減退等全身癥狀，常有咽喉痛、干咳，可有鼻塞、流涕等。如無并發(fā)癥，多于發(fā)病3～4天后癥狀好轉(zhuǎn)，但咳嗽、體力恢復(fù)常需1～2周。輕癥者如普通感冒，癥狀輕，2～3天可恢復(fù)。

2、什么是禽流感？

禽流感主要是指禽中流行的由流感病毒引起的感染性疾病。禽流感病毒可分為高致病性禽流感病毒、低致病性禽流感病毒和無致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒目前只發(fā)現(xiàn)H5和H7兩種亞型。由于種屬屏障，禽流感病毒只在偶然的情況可以感染人，既往確認(rèn)感染人的禽流感病毒有H5N1、H9N2、H7N2、H7N3、H7N7、H5N2、H10N7，癥狀表現(xiàn)各不相同，可以表現(xiàn)為呼吸道癥狀、結(jié)膜炎、甚至死亡。人感染高致病性H5N1禽流感病毒后常表現(xiàn)為高熱等呼吸道癥狀，往往很快發(fā)展成肺炎，甚至急性呼吸窘迫綜合癥和全身器官衰竭，甚至死亡。

3、什么是H7N9禽流感病毒？

流感病毒可分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。其中，甲型流感依據(jù)流感病毒血凝素蛋白(HA)的不同可分為1-16種亞型，根據(jù)病毒神經(jīng)氨酸酶蛋白(NA)的不同可分為1-9種亞型，HA不同亞型可以與NA的不同亞型相互組合形成不同的流感病毒。而禽類特別是水禽是所有這些流感病毒的自然宿主，H7N9禽流感病毒是其中的一種。H7N9亞型流感病毒既往僅在禽間發(fā)現(xiàn)，在荷蘭、日本及美國等地曾發(fā)生過禽間暴發(fā)疫情，但未發(fā)現(xiàn)過人的感染情況。

4、H7N9禽流感感染病例的主要臨床表現(xiàn)？

患者一般表現(xiàn)為流感樣癥狀，如發(fā)熱、咳嗽、少痰，可伴有頭痛、肌肉酸痛、腹瀉等全身癥狀。重癥患者病情發(fā)展迅速，多在發(fā)病3～7天出現(xiàn)重癥肺炎，體溫大多持續(xù)在39℃以上，出現(xiàn)呼吸困難，可伴有咯血痰。?？焖龠M(jìn)展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、感染性休克，甚至多器官功能障礙，部分患者可出現(xiàn)胸腔積液等表現(xiàn)。

5、如何預(yù)防H7N9流感？

流感是一種急性呼吸道感染性疾病。勤洗手、室內(nèi)勤通風(fēng)換氣、注意營養(yǎng)、保持良好體質(zhì)有利于預(yù)防流感等呼吸道傳染病。出現(xiàn)打噴嚏、咳嗽等呼吸道感染癥狀時(shí)，要用紙巾、手帕掩蓋口

鼻，預(yù)防感染他人。此外，還要特別注意盡量避免直接接觸病死禽、畜。

6、公眾如何保護(hù)自己？

保持勤洗手、咳嗽和打噴嚏時(shí)遮掩口鼻等個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，能夠有效預(yù)防流感等呼吸道傳染疾病。同時(shí)還應(yīng)避免接觸病死禽、畜。

7、醫(yī)務(wù)人員感染H7N9禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)大嗎？

由于醫(yī)務(wù)人員比普通公眾接觸患有感染性疾病病人的機(jī)會(huì)更多，建議醫(yī)務(wù)人員在診治病人過程中采取必要的防護(hù)措施。在接診疑似或確診H7N9禽流感病例時(shí)，應(yīng)采取標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防加飛沫傳播預(yù)防和接觸預(yù)防。

第三篇：醫(yī)院人感染H7N9禽流感病毒 - 武威市衛(wèi)生局

醫(yī)院人感染H7N9禽流感病毒

核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

一、目的確保人感染H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)過程標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，降低人為不規(guī)范操作對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

二、適用范圍

醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室按照《關(guān)于醫(yī)院開展人感染H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)有關(guān)工作的通知》（衛(wèi)辦醫(yī)政函?2013?383號(hào)）和《關(guān)于做好醫(yī)療機(jī)構(gòu)人感染H7N9禽流感檢測(cè)試劑供給保障工作的通知》（衛(wèi)發(fā)明電?2013?29號(hào)）有關(guān)要求，使用國家疾病預(yù)防控制中心制備或商品化試劑盒開展人感染H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)工作。

三、樣本采集、運(yùn)送和保存

盡量采集病例發(fā)病早期的呼吸道樣本(上呼吸道樣本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道樣本包括痰液、氣管吸取物、肺洗液、肺組織等)?？蓪⒈?、咽拭子收集于同一采樣管中，以便提高檢出率。患者有下呼吸道樣本時(shí)，應(yīng)優(yōu)先采集。

根據(jù)試劑說明書對(duì)樣本采集方法有關(guān)要求，制訂樣本采集標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），并組織樣本采集人員進(jìn)行培訓(xùn)及考

核。樣本的采集應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行。

樣本采集后，按照《人間傳染病的病原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行包裝，用密封容器立即送往實(shí)驗(yàn)室。若氣溫高時(shí)，需放入冰塊降溫。樣本抵達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，24小時(shí)內(nèi)能檢測(cè)的樣本可臵于2～8℃暫時(shí)保存，24小時(shí)內(nèi)無法檢測(cè)的樣本則應(yīng)臵于≤-70℃狀態(tài)保存。如無-70℃保存條件時(shí)，可于-20℃冰箱暫存。樣本避免反復(fù)凍融。

樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存不當(dāng)時(shí)，可因病毒RNA降解出現(xiàn)假陰性結(jié)果，也可因?yàn)闃颖尽拔廴尽背霈F(xiàn)假陽性結(jié)果。

四、PCR檢測(cè)

（一）樣本處理

樣本的核酸提取應(yīng)當(dāng)在樣本處理區(qū)進(jìn)行。按所采用的商品化試劑盒說明書要求，取適量待檢樣本、陽性及陰性對(duì)照進(jìn)行核酸提取。樣本應(yīng)盡可能新鮮，提取過程應(yīng)嚴(yán)防RNA酶污染及操作不當(dāng)導(dǎo)致的RNA降解。提取過程如涉及離心步驟，應(yīng)采用低溫冷凍離心機(jī)；在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行加樣、提取過程中，為防止RNA降解，可將試管架臵于托盤內(nèi)平鋪的碎冰上。提取好的RNA應(yīng)及時(shí)用于檢測(cè)，否則應(yīng)當(dāng)-70℃保存。如無-70℃保存條件，可于-20℃冰箱暫存。

（二）試劑準(zhǔn)備

試劑準(zhǔn)備應(yīng)當(dāng)在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。根據(jù)所用的試劑盒，樣本可進(jìn)行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亞型或H7N9病毒核酸的檢測(cè)。試劑的配制按所用商品化試劑盒說明書進(jìn)行。除酶混合物外，其它試劑在使用前應(yīng)當(dāng)在室溫充分復(fù)融，混勻并瞬時(shí)低速離心。反應(yīng)液分裝時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免管內(nèi)溶液泄露污染儀器。分裝有擴(kuò)增反應(yīng)液的反應(yīng)管應(yīng)當(dāng)扣蓋或裝入密實(shí)袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

（三）加樣

加樣應(yīng)當(dāng)在樣本處理區(qū)進(jìn)行。加樣時(shí)應(yīng)當(dāng)使樣品完全落入反應(yīng)液中，不應(yīng)有樣品粘附于管壁上，加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。

按試劑、儀器說明書完成加樣和PCR反應(yīng)管準(zhǔn)備。

（四）PCR擴(kuò)增檢測(cè)

PCR擴(kuò)增檢測(cè)在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行。待檢PCR管轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)，按順序臵于PCR儀上，編輯樣本信息，按試劑和儀器說明書設(shè)定循環(huán)參數(shù)。

（五）結(jié)果分析

根據(jù)所用試劑盒說明書設(shè)臵基線值（baseline）。熒光閾值（threshold）設(shè)定以閾值線剛好超過陰性對(duì)照品擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的最高點(diǎn)為原則，且Ct值應(yīng)大于

所設(shè)臵的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（或顯示為undet）。使用儀器配套軟件自動(dòng)分析結(jié)果。

（六）質(zhì)量控制

檢測(cè)過程對(duì)可能出現(xiàn)的假陽性和假陰性進(jìn)行質(zhì)量控制，除了檢測(cè)商品試劑盒所提供陽性和陰性對(duì)照外，每次臨床樣本檢測(cè)時(shí)，至少應(yīng)當(dāng)有1份弱陽性和3份陰性質(zhì)控樣本（多份陰性質(zhì)控樣本設(shè)臵對(duì)實(shí)驗(yàn)室“污染”所致假陽性的監(jiān)控更為有效），隨機(jī)放在所檢測(cè)標(biāo)本的中間。弱陽性質(zhì)控樣本可為檢測(cè)陽性的滅活稀釋后保存的臨床樣本、滅活病毒或假病毒顆粒等，如所采用的商品化試劑盒有“內(nèi)標(biāo)”控制假陰性，或弱陽性質(zhì)控樣本來源困難，可暫不設(shè)弱陽性質(zhì)控。陰性質(zhì)控樣本采用標(biāo)本采集管內(nèi)溶液即可。質(zhì)控樣本應(yīng)與臨床標(biāo)本同等對(duì)待，參與樣本核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)全過程。

試劑盒中的陽性和陰性對(duì)照用于判斷實(shí)驗(yàn)室的有效性，按試劑盒說明書進(jìn)行。

（七）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定與解釋。

按照試劑盒說明書進(jìn)行。對(duì)于出現(xiàn)弱陽性結(jié)果的樣本應(yīng)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，并注意與可能的實(shí)驗(yàn)室輕度或樣本交叉“污染”所致假陽性結(jié)果區(qū)別。

五、檢測(cè)結(jié)果報(bào)告

按照試劑盒說明書進(jìn)行。

六、其它注意事項(xiàng)

（一）人感染H7N9禽流感病毒實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)、樣本采集和運(yùn)輸按照《人間傳染的病原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒進(jìn)行管理。從事人感染禽流感檢測(cè)的技術(shù)人員必須經(jīng)過生物安全培訓(xùn)并具備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能，在檢測(cè)過程中必須采取生物安全防護(hù)措施（使用眼罩、N95型口罩等）。樣本核酸提取必須在Ⅱ級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)過年檢合格的二級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有良好的通風(fēng)。

（二）注意儀器設(shè)備的日常和定期維護(hù)，加樣器、擴(kuò)增儀和溫育設(shè)備應(yīng)進(jìn)行定期校準(zhǔn)。試劑盒及一次性使用的無DNA酶和RNA酶PCR反應(yīng)管、離心管、帶濾芯吸頭等應(yīng)進(jìn)行每批質(zhì)檢。

（三）實(shí)驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作；各區(qū)物品、工作服等均應(yīng)當(dāng)專區(qū)專用，不得交叉使用。實(shí)驗(yàn)后應(yīng)及時(shí)清潔工作臺(tái)，以防污染。

（四）每批實(shí)驗(yàn)室后，可采取實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)、10%次氯酸鈉溶液擦洗地臺(tái)面、紫外照射等措施，消除可能存在的擴(kuò)增產(chǎn)物氣溶膠污染。

（五）使用中國疾控中心制備試劑開展檢測(cè)工作時(shí)，可參考相應(yīng)試劑盒說明書（見附件1、2）有關(guān)要求。