第一篇：微生物與生化藥學專業(yè)

微生物與生化藥學專業(yè)

2009年碩士研究生入學復試具體實施辦法

生物與制藥工程學院“微生物與生化藥學”專業(yè)2009年碩士研究生入學復試辦法按《武漢工業(yè)學院2009年碩士研究生復試辦法》執(zhí)行，具體實施辦法如下：

一、復試內(nèi)容

1、綜合面試：包含外語聽說能力測試、專業(yè)知識考核和面試及實踐環(huán)節(jié)測試等復試內(nèi)容。

（1）外語聽說能力測試：主要包括專業(yè)外語和日常用語兩方面的考核，采取口試形式，滿分為100分。

（2）專業(yè)知識考核：滿分為100分。重點考查考生對專業(yè)理論與技能及相關知識的掌握是否扎實、深厚和寬廣，是否具備本專業(yè)研究生入學的基本要求?？己嗽O天然藥物資源利用、藥物設計與合成、藥物的微生物轉(zhuǎn)化和提取、微生物與生化藥物四個方向的問題。

（3）面試及實踐環(huán)節(jié)測試：采取口試形式，滿分為100分。主要考查政治思想品德、專業(yè)綜合知識、實踐動手能力、科學思維、創(chuàng)新能力和反應的能力等。

（4）計分方法：總分＝外語聽說能力測試成績×20%＋專業(yè)知識考核成績×40%＋面試及實踐環(huán)節(jié)測試成績×40%。

說明：考生復試程序為：首先進行專業(yè)知識考核的考試，然后進行逐個面試。面試部分先進行英文自我介紹，導師提問，最后進行實踐環(huán)節(jié)測試。

2、同等學歷加試

同等學歷加試科目：生物工程專業(yè)加試“生物工藝原理”和“分子生物學”；

制藥工程專業(yè)加試“藥劑學”和“藥理學”。均采取筆試形式，滿分為100分，答題時間為120分鐘。

二、復試時間及地點

1、綜合面試：4月13日上午9:00進行專業(yè)知識及綜合面試。地點為生工學院會議室。

2、同等學歷加試： 4月14日上午9:00－11:00，藥理學、生物工藝原理；下午2：00～4：00，藥劑學、分子生物學，地點為生工學院會議室。

三、復試次序

考生的個人復試次序按研究生處提供的名單次序進行?？忌趨⒓訌驮嚂r，應提供復試通知書、畢業(yè)證書（應屆生帶學生證）、個人身份證和準考證。

四、分次復試安排

4月13日以后調(diào)劑我碩士點的考生采用分階段復試方式，靈活復試時間，一考生到校時間為主。

五、復試小組

組長：陳平

成員：劉志國陶興無趙靜國繆禮鴻鐘方旭劉軍閆達中張紅菱

記錄員：王繼剛

聯(lián)系電話：027－83956793聯(lián)系人：王老師

武漢工業(yè)學院生物與制藥工程學院

2009.04.10

第二篇：2013微生物與生化藥學復試

復試分為三部分：

分科面試、英語筆試、專業(yè)課筆試分科面試

考試內(nèi)容比較隨機，2012年考試內(nèi)容有：

①考看視頻回答問題：視頻為配制培養(yǎng)基、使用滅菌鍋。要回答的問題好像是操作注意事項，和不同菌種使用的培養(yǎng)基，比如培養(yǎng)放線菌使用的培養(yǎng)基等。

② 實驗操作部分：顯微鏡的使用和斜面劃線接種，兩個任選一，抽簽方式。③專業(yè)英語筆試：20min，20個選擇題，有關生物方面的專業(yè)詞匯，還有個詞條提示。

④面試：英語口試（自我介紹），與老師交流，老師提問問題

注：聽說2013年的入學面試與2012年不同，沒有①和②，而是換成看圖片辨認儀器；還有專外筆試換成翻譯文獻，是去年獲得諾貝爾獎的文章，有關G蛋白歐聯(lián)受體，30min，翻譯幾段，涉及專業(yè)詞匯。面試部分，面試部分比較靈活，題型隨機，我覺得事先準備個英文自我介紹比較好，不一定怎么考。英語筆試（為四六級考試形式，有聽力，閱讀比較簡單，我感覺聽力的語速介于四六級之間，我們考試那年的考試形式與四六級不太一樣，不是邊聽變涂卡，而是一下聽完，然后再涂卡，可能每年都會有點不一樣，這個需要練習一下）專業(yè)課筆試：包含三科，即分離純化，生物技術制藥，發(fā)酵工藝學原理 ①分離純化，我復習的是課本，不是所有的章節(jié)都考到了，記得我們那年考題里有些什么大分子和小分子的分離純化方法的簡答題，有些關于分離純化的名詞解釋

②發(fā)酵工藝學原理，看的是課件，不記得考過什么了

③生物技術制藥，看的是課本與課件，課件看的稍多些，這科的重點是基因工程部分，好像還有些關于抗體的東西。

可以在學校復印社買到以上三門課的復習資料，如課件，期末試題，或者有人總結的筆記資料等，也有些重復的題，但是好像每年考的都不一樣。另外可以看一些關于微生物的復習材料。

第三篇：天津大學微生物與生化藥學考研真題

天津大學微生物與生化藥學考研真題-考研資料-筆記講義-考研經(jīng)驗談

天津考研網(wǎng)獨家推出天津大學微生物與生化藥學考研資料、真題解析班等輔導資料，幫助考生在考研復習中能夠理清做題思路，出題方向及復習重點。以下為相關資料的介紹。

天津大學微生物與生化藥學考研資料格式為A4紙打印版+手寫版多種資料形式數(shù)百頁，清晰易復習，由多屆優(yōu)秀考生研究生團隊執(zhí)筆，集合多方力量歷時3年積淀精制而成，填補了此專業(yè)原創(chuàng)資料空白的局面，天津考研網(wǎng)已于編寫者簽訂資料保真轉(zhuǎn)讓協(xié)議，各位研友可放心使用參考！特別提示：本站盡力保證資料的有用性，但由于個人復習態(tài)度進度不同，故請酌情參考本資料！

由于天津大學微生物與生化藥學考的是藥學綜合，考試時為四選二科目（普通生物化學、基礎有機化學、基礎生物學、基礎分析化學四部分考題中任選兩部分參加以下資料），請根據(jù)自身報考情況選擇兩科

第一部分天津大學微生物與生化藥學核心原創(chuàng)資料（請按科目選擇4選2）：

天津大學藥學院微生物與生化藥學研究生入學考試初試四選二科目中，每兩科僅參考書目就有很多本，但是并不是都必須要看的，這些科目中可以說知識點繁雜，且聯(lián)系也并不是很緊密，如何對其取舍？對于知識點應掌握到何種程度？對于考試又應怎樣從宏觀上去把握？初試復試又應該怎樣去安排復習進度，最需要關注哪些問題？等等一系列問題，相信本資料都會給出您滿意的答案！

天津大學微生物與生化藥學考研資料為您提供了以下信息，讓您的復習事半功倍：

1、縮小指定書目范圍，并推薦了一些難易程度與真題相近的復習資料，對于備考中的一系列細節(jié)問題：包括復習時間安排、資料獲取等關鍵問題進行解答。

2、非常詳細全面地為大家講解每個章節(jié)的重點，明確指出知識點所應掌握的程度：包括重點記憶、記憶、掌握、理解、了解。針對可能命題知識點以及命題形式給出總結與預測。

3、對于學院內(nèi)部的情況給予介紹，包括老師的最新研究方向、出題老師的相關任命情況等。這些信息對于考生全面了解院校，進行相關選擇具有重要意義。

4、詳細解析天津大學微生物與生化藥學考研歷年真題，按照考試題型進行介紹，對于考生全面?zhèn)淇甲龅叫闹杏袛?shù)，并對以后真題命題進行預測。

5、講解答題技巧，因為天大藥學院藥學綜合300分，考試時間僅有3個小時，如何能在這三個小時中發(fā)揮出自己的最佳水平，如何能盡可能的拿到更多的分數(shù)至關重要。

6、對復試進行詳細分析，包括復試流程、復試內(nèi)容、復試如何準備、復試的答題技巧。準備復試就像是大海撈針，因為其范圍大，時間緊，本資料為大家縮小復習范圍，增強考試信心提出方法，教會給您在面試中何去何從！

資料目錄：

一、天津大學藥學院簡介：對天津大學藥學院建院歷史、學院基礎設施、師資隊伍、招生政策情況、就業(yè)前景、辦學方法與特色等方面給出客觀中肯的評價，有助于考生更加合理地選擇自己的目標院校與方向。

二、藥學院導師情況簡介：從藥物分析、藥物化學、藥劑學、藥理學、生藥學、微生物等分方向介紹導師目前的主要科研課題與成果。

三、獲取信息的相關途徑

四、天津大學微生物與生化藥學考研備考之有機化學

1、備考前準備：資料的選擇途徑與獲取方法、考研大致時間安排、考研心理調(diào)試、租房注意、研友。

2、近年考研真題解析：重點對于從07年之后的真題進行分析，總結其命題規(guī)律，把握出題方向，簡要點明復習重點所在，讓考生對考試不再陌生，心理上占據(jù)優(yōu)勢。本章最后單獨對2011年、2012年真題進行了解析說明

3、復習精要：以歷年真題作為主要依托，介紹考試重點與?？家卓碱}型，精析知識體系，合理安排復習進度，每天進步一點一點，最終收獲一片天！分章節(jié)進行知識點匯總，中間穿插對于知識點的分析，預測考試出題重點與出題形式。

4、補充說明：主要是針對在完成上述內(nèi)容中無法插入或是臨時想到的問題，給予補充說明。例如：計劃設置方法、考前心態(tài)調(diào)整、考場時間安排等等。講一些自身經(jīng)歷的小故事，希望能夠通過這些激發(fā)考生的斗志與毅力，同時更能貼近他們的心聲，感受到考研的精彩與意義！

五、天津大學微生物與生化藥學考研備考之分析化學：考研資料、歷年考研真題和筆記講義構成如有機化學部分

六、天津大學微生物與生化藥學考研備考之生物學：考研參考書目介紹、知識點分析、考研真題分析和命題趨勢，專業(yè)課答題技巧

七、天津大學微生物與生化藥學考研備考之生物化學：考研參考書目介紹、知識點分析、考研真題分析和命題趨勢，專業(yè)課答題技巧

八、復試事項

（一）、講解復試流程與規(guī)則（從2011年起天津大學藥學院復試招生政策已發(fā)生重大變化）。

（二）、舉兩到三個實際例子，通過講故事的方法讓考生真實體驗復試全過程。

第二部分天津大學微生物與生化藥學考研其他重要資料（請按科目選擇4選2）：

★基礎生物化學部分：

1、天津大學基礎生物化學03－05年考研試題；天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-基礎生物化學部分2007-2010年考研真題，原版真題，內(nèi)部渠道獲得（市場獨家最全，全國獨家推出，掌握最新試題動向先人一步），眾所周知天大出題重復率高，一般多年的試題就是一個小題庫，所以歷年試題一定要仔細研究，通過多年試卷可總結出出題重點及思路；

2、天津大學349藥學綜合-基礎生物化學部分2007-2010年考研試題參考答案，解決學生答題后勘誤的困惑，試題保證100%正確率，市面上的答案基本都有錯誤，本套答案為簽約團隊獨家主創(chuàng)，請同學認真分辨市面一些低價劣質(zhì)的資料，以免耽誤考研；

3、基礎生物化學本科課件，天津大學藥學院本科授課課件、筆記講義，ppt格式，只收集到部分重點章節(jié)，圖文并茂；

4、指定參考書籍Stryer《Biochemistry》5th.Edition；黃熙泰、于自然主編《現(xiàn)代生物化學》第二版；

5、天津大學藥學綜合2008-2013年考研大綱，打印版，通過歷年大綱對比可以更深入了解歷年考試考點及參考書目變化情況從而預測趨勢，獨家提供

★有機化學部分：

1、天津大學①基礎化學（含基礎有機化學與分析化學)02—05年考研試題，其中02及05年有詳細參考答案，同時按題型精確分析了02-05年考研試題（有機化學和分析化學）之間的關系、出題思路、出題重點及部分試題介紹，手寫版，此為兩個版本，對比使用效果更好；②天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-有機化學部分2007-2010年原版考研真題，內(nèi)部渠道獲得；③349藥學綜合-有機化學部分2011、2012年考研試題回憶版，眾所周知天大出題重復率高，一般多年的試題就是一個小題庫，所以歷年試題一定要仔細研究，通過多年試卷可總結出出題重點及思路；

2、天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-有機化學部分2007-2009年考研試題參考答案，解決學生答題后勘誤的困惑，試題保證100%正確率，市面上的答案基本都有錯誤，本套答案為天津考研網(wǎng)簽約團隊獨家主創(chuàng)，請同學認真分辨市面一些低價劣質(zhì)的考研資料，以免耽誤考研；

3、有機化學本科課件，天津大學藥學院本科授課課件，ppt格式，只收集到部分考研重點章節(jié)，圖文并茂；

4、有機化學04年校內(nèi)輔導班筆記講義，04年最后一次校內(nèi)主辦輔導班，絕版筆記，藥學院老師主講，所用考生當年成績相當優(yōu)異，手寫版100余頁，字跡工整，重點突出；

5、有機化學輔導班高分考生總結筆記，由參加04年最后一屆校內(nèi)輔導班的考生總結而成，手寫版，按考題題型總結，具有重要參考價值，此資料同04輔導班筆記對比搭配使用，同時贈送按章節(jié)、反應的有機化學總結一份；

6、指定參考書籍邢其毅等著《基礎有機化學》（第二版）教程及配套習題答案、邢其毅等《基礎有機化學習題解答與解題示例》（電子版）；

7、天津大學藥學綜合2008-2013年考研大綱，打印版，通過歷年大綱對比可以更深入了解歷年考試考點及參考書目變化情況從而預測趨勢，獨家提供

★分析化學部分：

1、天津大學①基礎化學（含基礎有機化學與分析化學)02—05年考研試題，其中02及05年有詳細參考答案，同時按題型精確分析了02-05年考研試題（有機化學和分析化學）之間的關系、出題思路、出題重點及部分試題介紹，手寫版，此為兩個版本，對比使用效果更好；②天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-分析化學部分2007-2009年原版考研真題，內(nèi)部渠道獲得；③天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-分析化學部分2011、2012年考研試題回憶版，眾所周知天大出題重復率高，一般多年的試題就是一個小題庫，所以歷年試題一定要仔細研究，通過多年試卷可總結出出題重點及思路；

2、天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-分析化學部分2007-2009年考研試題參考答案，解決學生答題后勘誤的困惑，試題保證100%正確率，市面上的答案基本都有錯誤，本套答案為簽約團隊獨家主創(chuàng)，請同學認真分辨市面一些低價劣質(zhì)的考研資料，以免耽誤考研；

3、分析化學本科課件，天津大學藥學院本科授課課件，圖文并茂，內(nèi)容詳盡，重點突出，ppt格式e-mail發(fā)送，參考書目為：《藥物分析》劉文英主編，人民衛(wèi)生出版社；《分析化學》李發(fā)美主編，人民衛(wèi)生出版社；《藥物分析》盛龍生等編寫，化學工業(yè)出版社；Pharmaceutical Analysis:A Textbook for pharmacy students and pharmaceutical Chemists, David G.Watson，Edinburgh；

4、分析化學高分考生總結筆記，由天大高分考生精心整理而成，手寫版40余頁，全面涵蓋分析化學核心知識點，極具參考價值；

5、分析化學本科生課堂重點思考題及解答，天津大學藥學院本科生老師授課課堂討論題及參考答案，打印版10余頁，附有重點勾畫；

6、天津大學藥學綜合2008-2013年考研大綱，打印版，通過歷年大綱對比可以更深入了解歷年考試考點及參考書目變化情況從而預測趨勢，獨家提供

★基礎生物學部分：

1、天津大學微生物與生化藥學考研科目①349藥學綜合-基礎生物學部分07-09年原版考研真題，內(nèi)部渠道獲得；②天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-基礎生物學部分2010、2013年考研真題（回憶版），眾所周知天大出題重復率高，一般多年的試題就是一個小題庫，所以歷年試題一定要仔細研究，通過多年試卷可總結出出題重點及思路；

2、天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合-基礎生物學部分2007-2009年考研試題參考答案，解決學生答題后勘誤的困惑，試題保證100%正確率，市面上的答案基本都有錯誤，本套答案為天津考研網(wǎng)簽約團隊獨家主創(chuàng)，請同學認真分辨市面一些低價劣質(zhì)的考研資料，以免耽誤考研；

3、天津大學藥學綜合2008-2013年考研大綱，打印版，通過歷年大綱對比可以更深入了解歷年考試考點及參考書目變化情況從而預測趨勢，獨家提供；

第六部分 考研紅寶卷

天津考研網(wǎng)獨家品牌《考研紅寶卷》，包含天津大學天津大學微生物與生化藥學考研科目349藥學綜合的全真模擬預測卷3套并含參考答案及解析過程，與歷年考研真題出題趨勢、思路、側(cè)重點一脈相承，在天津考研學子圈中享有極高聲譽，非常適合在沖刺階段作為全真模擬使用，可以起到摸底測試、查漏補缺的作用，同時具有極高的押題性質(zhì)。

第四篇：藥學微生物學期末歸納總結

二、名詞解釋（20分）

1.異染顆粒_____________胞質(zhì)顆粒中含有一種主要成分為RNA和多偏磷酸鹽的顆粒，其嗜堿性強，經(jīng)亞甲藍染色后著色較深，叫異染顆粒，常見于白喉棒狀桿菌。

2.菌落__________由單個細胞在適宜固體培養(yǎng)基表面生長繁殖，經(jīng)過一段時間后，在培養(yǎng)基表面形成肉眼可見的微生物群落，稱為菌落。3.條件致病菌____________有些細菌在人體皮膚與外界相通的腔道內(nèi)寄生、增殖，當條件改變或因宿主免疫功能下降時引起致病。這類細菌稱為條件致病菌。

4.肥達試驗___________將已知的傷寒沙門菌的O、H抗原和甲乙丙副傷寒沙門菌的H抗原與不同稀釋度的病人血清做凝集試驗。通過檢測抗體滴度的高低和初期、恢復期抗體的增長程度來診斷傷寒和副傷寒。

5.洶涌發(fā)酵____________產(chǎn)氣莢膜梭菌在牛乳培養(yǎng)基中生長時發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時產(chǎn)生大量的氣體，將凝固的酪蛋白沖成蜂窩狀，并將封閉的凡士林沖至試管口等現(xiàn)象。

6.卡介苗___________將有毒力的牛型結核分枝桿菌培養(yǎng)在含膽汁、甘油、馬鈴薯的培養(yǎng)基中，經(jīng)過上百次的接種，歷經(jīng)13年的傳代培養(yǎng)而獲得的減毒活疫苗?？墒谷双@得對結核病的免疫力。

7.菌群失調(diào)____________正常菌群之間的數(shù)量和組成發(fā)生明顯的改變稱為菌群失調(diào)。多見于長期使用抗生素。

8.SPA________即葡萄球菌A蛋白。是葡萄球菌細胞壁的一種表面蛋白。能與人及某些哺乳動物的lgG分子的Fc受體發(fā)生非特異性結合，與吞噬細胞表面的Fc受體爭奪Fc段，降低了抗體的調(diào)理吞噬作用。起到了協(xié)助細菌抗吞噬的作用。

9.SSPE________即亞急性硬化性全腦炎。是一種以白質(zhì)和灰質(zhì)損害為主的全腦炎。由缺損型麻疹病毒慢性持續(xù)感染引起的一種罕見的致命性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)衰退性疾病。

10.轉(zhuǎn)導______是以溫和噬菌體為載體，將供體菌的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)，使受體菌獲得新的遺傳形狀。這樣的方式成為轉(zhuǎn)導。11.HBsAg__________即乙肝表面抗原。存在于Dane顆粒表面、小球型顆粒和管型顆粒中，可大量存在于感染血清中。是HBV感染的重要標志。

12.內(nèi)基小體________是狂犬病病毒在易感動物或人的中樞神經(jīng)細胞中增殖時，可在胞質(zhì)內(nèi)形成圓形或卵圓形的嗜酸性顆粒，稱為包涵體，或內(nèi)基小體。具有診斷價值。

13.細菌的L型_______細菌細胞壁肽聚糖結構在某些理化或生物作用下被破壞或抑制，但在高滲的環(huán)境中仍可存活。稱為細菌的L型。14.質(zhì)粒__________是細菌染色體外的遺傳物質(zhì)，其結構為閉合環(huán)狀雙鏈DNA，可攜帶遺傳信息，控制細菌某些特定的遺傳性狀，并具有獨立自我復制能力。

15.半數(shù)致死量________在一定條件下引起50%實驗動物死亡或感染的最小微生物或毒素的量。

16.基因整合___________在病毒感染宿主細胞的過程中，病毒基因組的DNA片段可插入到宿主細胞的染色體DNA中，這種將病毒基因組與細胞基因組重組的過程，稱為基因整合。

三、簡答題（50分）

1、外毒素與內(nèi)毒素的主要區(qū)別？ 答：外毒素-大部分來源于革蘭陽性菌，少部分來源于革蘭陰性菌；大多數(shù)由活菌分泌釋放；其本質(zhì)是蛋白質(zhì)，不耐熱受熱易分解；抗原性強，經(jīng)甲醛處理可獲得脫毒的類毒素；毒性強，對組織細胞有選擇性毒性效應，引起特殊的臨床表現(xiàn)。

內(nèi)毒素-主要來源于革蘭陰性菌；大多數(shù)由細菌裂解后釋放；其本質(zhì)是脂多糖，耐熱受熱不易分解；抗原性弱，經(jīng)甲醛處理不能獲得類毒素；毒性較弱毒性效應大致相同，引起發(fā)熱、白細胞增多、休克等臨床表現(xiàn)。

2、細菌有哪些特殊結構及其特點？

答：莢膜-不宜染色，具有抗吞噬、粘附、抗有害物質(zhì)損傷等作用。與細菌致病性有關。

鞭毛-菌體上附著的細長絲狀物，是細菌的運動器官，具有特異的抗原性。與細菌致病性有關。

菌毛-分為普通菌毛和性菌毛，前者與致病性有關，后者與遺傳物質(zhì)的傳遞有關。芽孢-由革蘭陽性菌形成，是細菌的休眠體，有助于鑒別細菌，抵抗力強。

3、細菌耐藥性的產(chǎn)生機制？ 答：1.細菌產(chǎn)生滅活酶，即鈍化酶的產(chǎn)生

2.作用靶位的改變

3.細菌細胞膜通透性改變

4.細菌主動藥物外排機制

5.細菌生物被膜的形成。

4、狂犬病的預防和補救措施？

答：預防-捕殺野犬，加強家犬管理并注射犬類狂犬疫苗。

補救-1.清洗傷口，用20%肥皂水、0.1%消毒劑或清水清洗傷口，并用酒精消毒。

2.被動免疫，在傷口周圍注射高效價的狂犬病病毒抗血清。

3.主動免疫，早期接種疫苗可預防狂犬病的發(fā)病。

5、破傷風梭菌致病的治病條件及產(chǎn)生機制？

答：在局部傷口形成厭氧微環(huán)境，如傷口窄而深，有泥土或異物感染，大面積創(chuàng)傷，壞死組織多，局部組織出血等，同時有需氧菌或兼性厭氧菌混合形成厭氧微環(huán)境，有利于破傷風梭菌的形成。

機制：破傷風梭菌沒有侵襲力，只在局部繁殖，產(chǎn)生痙攣毒素。該毒素經(jīng)末梢神經(jīng)、血液及淋巴液進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并通過重鏈與腦組織細胞表面受體結合，通過輕鏈進入細胞發(fā)揮毒素作用。從而破壞了正常的抑制調(diào)節(jié)作用，導致中樞超常反射，出現(xiàn)破傷風特有的角弓反張、牙關緊閉等癥狀。

6、生物學標本采集的原則？

答：早期采集-采集盡量在病程早期及使用抗菌藥物之前。

無菌采集-采集過程中嚴格遵守無菌操作，避免標本污染。

一對一采集-不同細菌用不同方法采集，如厭氧菌、L型細菌。

針對性采集-采集有代表性的標本，相同疾病在不同時期標本不同。

采集標記-采集后做好標記，保證各環(huán)節(jié)準確無誤。

采集新鮮-標本必須新鮮，采集后盡快送檢。

7、正常菌群的生理作用？

答：生物拮抗作用-阻止病原菌侵入機體。

營養(yǎng)作用-正常菌群參與宿主的物質(zhì)代謝、營養(yǎng)轉(zhuǎn)化。免疫作用-正常菌群作為抗原刺激機體發(fā)生免疫應答?？顾ダ献饔?保護組織細胞免受損傷?？鼓[瘤作用-抑制腫瘤的細胞的無限增殖。

8、醫(yī)院內(nèi)感染的預防和控制？

答：合理使用抗生素、避免侵襲性操作、保護易感人群、縮短住院時間、嚴格執(zhí)行病毒隔離措施、重視檢測工作、污物處理。

9、全身感染的常見類型？

答：菌血癥-如細菌進入細胞短暫停留，不產(chǎn)生毒素，傷寒桿菌引起的感染；

敗血癥-如細菌在表面繁殖產(chǎn)生毒素，腦膜炎球菌引起的全身性中毒；

毒血癥-如細菌在表面繁殖，毒素進入血液，白喉棒狀桿菌產(chǎn)生外毒素引起的病變； 膿毒血癥-如細菌侵入細胞，釋放毒素。金葡菌引起的肝膿腫。內(nèi)毒素血癥-內(nèi)毒素進入血液引起的疾病，小兒痢疾。

10、細菌外毒素有哪些毒性作用？

答：細胞毒素作用-如白喉棒狀桿菌產(chǎn)生的白喉毒素，可抑制細胞蛋白質(zhì)的合成，導致靶細胞壞死，心肌損傷，腎上腺出血。

神經(jīng)毒素作用-如破傷風桿菌產(chǎn)生的痙攣毒素，阻斷神經(jīng)元之間遞質(zhì)的傳遞，引起骨骼肌強直性痙攣。

腸毒素作用-如金葡菌產(chǎn)生的腸毒素，引起以嘔吐為主的食物中毒。

11、細菌合成代謝產(chǎn)物的種類及意義？ 答：與致病性有關的產(chǎn)物：侵襲性酶、熱原質(zhì)、毒素；

與檢驗細菌（鑒定與分型）的產(chǎn)物：細菌素、色素； 用于臨床治療的產(chǎn)物：抗生素、維生素。

12、簡述病毒的基本特征？

答：體積微小，以nm計算，能通過慮菌器，需用電鏡觀察；

非細胞結構，其主要有核心和蛋白衣殼組成； 只含一種核酸，DNA或RNA； 嚴格的易感活細胞內(nèi)寄生； 耐冷不耐熱，對抗生素不敏感。

13、大腸桿菌的主要類型及致病特點？

答：ETEC-腸產(chǎn)毒，引起嬰兒和旅游者嚴重腹瀉的主要病原菌。

EIEC-侵襲型，引起兒童成人腹痛、發(fā)熱、膿血便的主要病原菌。

EPEC-致病型，引起嬰幼兒腹瀉的主要病原菌。

EHEC-出血型，引起腹瀉和血樣便，污染食品是其主要傳染源。

EAEC-集聚型，引起嬰幼兒持續(xù)性腹瀉、脫水的主要病原菌。

14、乙肝抗原抗體的檢測有何醫(yī)學意義？

答：有助于診斷；有助于判斷疾病的預后；篩選病原；流行病學調(diào)查；檢測注射疫苗的效果。

15、細菌感染的傳播方式？

答：呼吸道傳播；消化道傳播；血液傳播；蟲媒傳播；性傳播；皮膚傳播；接觸傳播。

16、簡述致病菌的三大致病條件？

答：菌群失調(diào)；宿主免疫功能下降；正常菌群的寄居部位發(fā)生改變。

第五篇：微生物鑒定的生理生化反應匯總

微生物鑒定的生理生化反應

各種細菌具有各自獨特的酶系統(tǒng)，因而對底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也不同。用生物化學方法測定這些代謝產(chǎn)物，可用來區(qū)別和鑒定細菌的種類。利用生物化學方法來鑒別不同細菌，稱為細菌的生物化學試驗或稱生化反應。生物化學試驗的方法很多，主要有以下幾類。

一、碳水化合物的代謝試驗 1．糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗

（1）原理：不同種類細菌含有發(fā)酵不同糖（醇、苷）類的酶，因而對各種糖（醇、苷）類的代謝能力也有所不同，即使能分解某種糖（醇、苷）類，其代謝產(chǎn)物可因菌種而異。檢查細菌對培養(yǎng)基中所含糖（醇、苷）降解后產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力，可用以鑒定細菌種類。

(2)方法：在基礎培養(yǎng)基中（如酚紅肉湯基礎培養(yǎng)基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）類。所使用的糖（醇、苷）類有很多種，根據(jù)不同需要可選擇單糖、多糖或低聚糖、多元醇和環(huán)醇等，見表6-4-1。將待鑒定的純培養(yǎng)細菌接種入試驗培養(yǎng)基中，置35℃孵育箱內(nèi)孵育數(shù)小時到兩周（視方法及菌種而定）后，觀察結果。若用微量發(fā)酵管，或要求培養(yǎng)時間較長時，應注意保持其周圍的濕度，以免培養(yǎng)基干燥。

(3)結果：能分解糖（醇、苷）產(chǎn)酸的細菌，培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應（如酚紅變?yōu)辄S色），產(chǎn)氣的細菌可在小倒管（Durham小管）中產(chǎn)生氣泡，固體培養(yǎng)基則產(chǎn)生裂隙。不分解糖則無變化。

(4)應用：糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗，是鑒定細菌的生化反應試驗中最主要的試驗，不同細菌可發(fā)酵 不同的糖（醇、苷）類，如沙門菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖，大腸埃希菌則可發(fā)酵葡萄糖和乳糖。即便是兩種細菌均可發(fā)酵同一種糖類，其發(fā)酵結果也不盡相同，如志賀菌和大腸埃希菌均可發(fā)酵葡萄糖，但前者僅產(chǎn)酸，而后者則產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，故可利用此試驗鑒別細菌。

表6-4-1 常用于細菌糖發(fā)酵試驗的糖、醇類

單糖 四碳糖：赤蘚糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖

阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖

雙糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麥芽糖（兩分子葡萄糖）三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖 菊糖（多分子果糖）淀粉

醇類 側(cè)金盞花醇 衛(wèi)茅醇 甘露醇 山梨醇 非糖類 肌醇

2．葡萄糖代謝類型鑒別試驗

(1)原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；能進行無氧降解的為發(fā)酵型；不分解葡萄糖的細菌為產(chǎn)堿型。發(fā)酵型細菌無論在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖，而氧化型細菌在無氧環(huán)境中則不能分解葡萄糖。本試驗又稱氧化發(fā)酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）試驗，可用于區(qū)別細菌的代謝類型。

(2)方法：挑取少許純培養(yǎng)物（不要從選擇性平板中挑取）接種2支HL培養(yǎng)管中，在其中一管加入高度至少為0.5cm的無菌液體石蠟以隔絕空氣（作為密封管），另一管不加（作為開放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。

(3)結果： 兩管培養(yǎng)基均不產(chǎn)酸（顏色不變）為陰性；兩管都產(chǎn)酸（變黃）為發(fā)酵型；加液體石蠟管不產(chǎn)酸，不加液體石蠟管產(chǎn)酸為氧化型。(4)應用：主要用于腸桿菌科與其它非發(fā)酵菌的鑒別。腸桿菌科、弧菌科細菌為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于鑒別葡萄球菌（發(fā)酵型）與微球菌（氧化型）。3．甲基紅（MR）試驗

(1)原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進一步被分解為甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下時，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)（如醇、醛、酮、氣體和水），培養(yǎng)基pH在 5.4以上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。

(2)方法：將待試菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培養(yǎng)基中滴加5~6滴甲基紅指示劑，立即觀察結果。

(3)結果判定：呈現(xiàn)紅色者為陽性，桔黃色為陰性，桔紅色為弱陽性。

(4)應用：常用于腸桿菌科內(nèi)某些種屬的鑒別，如大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等為陽性。

4．β－半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）

(1)原理：乳糖發(fā)酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些細菌只有半乳糖苷酶，因而只能遲緩發(fā)酵乳糖，所有乳糖快速發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的細菌均可快速水解鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黃色的鄰硝基酚。用于枸櫞酸菌屬、亞利桑那菌屬與沙門菌屬的鑒別。

(2)方法：將待試菌接種于ONPG肉湯中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：呈現(xiàn)亮黃色為陽性，無色為陰性。

(4)應用：可用于遲緩發(fā)酵乳糖細菌的快速鑒定，本法對于迅速及遲緩分解乳糖的細菌均可短時間內(nèi)呈現(xiàn)陽性。埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷菌屬和腸桿菌屬等均為試驗陽性，而沙門菌屬、變形桿菌屬和普羅威登斯菌屬等為陰性。

5．VP試驗

(1)原理：測定細菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。某些細菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進而與培養(yǎng)基中的精氨酸等含胍基的物質(zhì)結合形成紅色化合物。即V-P試驗陽性。(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，輕輕振搖試管，然后加0.2ml 400g/L KOH，輕輕振搖試管30s至1min，然后靜置觀察結果。

(3)結果：紅色者為陽性，黃色或類似銅色為陰性。

(4)應用：主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別。本試驗常與MR試驗一起使用，一般情況下，前者為陽性的細菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細菌不一定都這樣規(guī)律，如蜂房哈夫尼亞菌和奇異變形桿菌的VP試驗和MR試驗常同為陽性。6．膽汁七葉苷水解試驗

（1）原理：在10%~40％膽汁存在下，測定細菌水解七葉苷的能力。七葉苷被細菌分解生成的七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸櫞酸鐵的二價鐵離子發(fā)生反應形成黑色化合物。

(2)方法：將被檢菌接種于膽汁七葉苷培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h后，觀察結果。(3)結果：培養(yǎng)基完全變黑為陽性，不變黑為陰性。

(4)應用：主要用于鑒別D群鏈球菌與其它鏈球菌的區(qū)別，以及腸桿菌科的某些種、某些厭氧菌（如脆弱擬桿菌等）的初步鑒別。D群鏈球菌本試驗為陽性。7．淀粉水解試驗

(1)原理：產(chǎn)生淀粉酶的細菌能將淀粉水解為糖類，在培養(yǎng)基上滴加碘液時，可在菌落周圍出現(xiàn)透明區(qū)。

(2)方法：將被檢菌劃線接種于淀粉瓊脂平板或試管中，35℃孵育18~24h，加入革蘭碘液數(shù)滴，立即觀察結果。

(3)結果：陽性反應，菌落周圍有無色透明區(qū)，其它地方藍色；陰性反應，培養(yǎng)基全部為藍色。

(4)應用：用于白喉棒狀桿菌生物型的分型，重型淀粉水解試驗陽性，輕、中型陰性；芽胞桿菌屬菌種和厭氧菌某些種的鑒定。8．甘油復紅試驗

(1)原理：甘油可被細菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脫去羧基為乙醛，乙醛與無色的復紅生成醌式化合物，呈深紫紅色。

(2)方法：取被檢菌接種于甘油復紅肉湯培養(yǎng)基中，于35℃孵育，觀察2~8d。應同時做陰性對照。

(3)結果：紫紅色為陽性，與對照管顏色相同為陰性。

(4)應用：主要用于沙門菌屬內(nèi)各菌種間的鑒別。傷寒沙門菌、甲（丙）型副傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、孔道夫沙門菌和仙臺沙門菌本試驗為陰性，乙型副傷寒沙門菌結果不定，其它不常見沙門菌多數(shù)為陽性。9．葡萄糖酸氧化試驗

(1)原理：某些細菌可氧化葡萄糖酸鉀，生成α-酮基葡萄糖酸。α-酮基葡萄糖酸是一種還原性物質(zhì)，可與班氏試劑起反應，出現(xiàn)棕色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于葡萄糖酸鹽培養(yǎng)基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏試劑1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷卻，觀察結果。

(3)結果：出現(xiàn)黃到磚紅色沉淀為陽性。不變或仍為藍色為陰性。

(4)應用：主要用于假單胞菌的鑒定和腸桿菌科菌分群。

二、氨基酸和蛋白質(zhì)的代謝試驗 1．硫化氫試驗

(1)原理：某些細菌能分解含硫氨基酸生成硫化氫，與亞鐵離子或鉛離子結合形成黑色沉淀物。

(2)方法：將待檢菌接種于含硫化物及亞鐵離子的培養(yǎng)基或克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，觀察有無黑色沉淀出現(xiàn)?；蛴么姿徙U紙條，懸掛于KIA管中（白色濾紙，根據(jù)試管大小裁剪適當，在熱的50g/L醋酸鉛飽和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高壓滅菌備用）。醋酸鉛是最敏感的方法。(3)結果：有黑色沉淀物為陽性。

(4)應用：主要用于鑒別腸桿菌科細菌，如沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、愛德華菌屬等為陽性，其它菌屬大多為陰性。但沙門菌屬中亦有部分硫化氫陰性菌株，如甲型副傷寒、仙臺、豬霍亂沙門菌等。2．明膠液化試驗

(1)原理：細菌分泌的胞外蛋白水解酶（明膠酶）能分解明膠，使明膠失去凝固能力而液化。(2)方法：將待檢菌接種于明膠培養(yǎng)基中，35℃孵育24h到7d或更長時間，每24h取出放入4℃冰箱約2h后，觀察有無凝固。

(3)結果：如無凝固，則表示明膠已被水解，液化試驗陽性。如凝固，則繼續(xù)培養(yǎng)。

(3)應用：奇異變形桿菌、普通變形桿菌、沙雷菌屬和陰溝腸桿菌等到能液化明膠，腸桿菌科中的其它細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外，許多假單胞菌也能產(chǎn)生明膠酶而使明膠液化。3．吲哚試驗（靛基質(zhì)試驗）(1)原理：某些細菌有色氨酸酶，能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚與對二甲氨基苯甲醛形成紅色的玫瑰吲哚。

(2)方法：將待檢菌接種于富含色氨酸的蛋白胨水培養(yǎng)基中，35℃孵育24~48h，加入靛基質(zhì)試劑，觀察結果。

(3)結果：紅色為陽性，無色為陰性。

(4)應用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定，如大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌，肺炎克雷伯菌和產(chǎn)酸克雷伯菌等的鑒別。4．苯丙氨酸脫氨酶試驗

(1)原理：測定細菌是否產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶。細菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨后生成苯丙酮酸，加入三氯化鐵試劑后產(chǎn)生綠色反應。若延長時間，會引起退色。

(2)方法：將待檢菌大量接種入苯丙氨酸培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h，滴加100g/L三氯化鐵試劑4~5滴，立即觀察菌落生長處有無綠色出現(xiàn)。(3)結果：有綠色出現(xiàn)為陽性。

(4)應用：變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬均為陽性，腸桿菌科其它細菌均為陰性。5．氨基酸脫羧酶試驗

(1)原理：某些細菌可產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，可用指示劑指示出來。

(2)方法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸或精氨酸）脫羧酶試驗管和1支氨基酸脫羧酶對照管（無氨基酸），各覆蓋至少0.5cm高度的無菌石蠟油，35℃孵育1~4d，觀察結果。

(3)結果：若為溴甲酚紫指示劑，則試驗管紫色為陽性，黃色為陰性，對照管應為黃色。(4)應用：主要用于某些細菌種間的鑒別，如賴氨酸用于產(chǎn)氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）；鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）等。6．精氨酸雙水解酶試驗

(1)原理：精氨酸經(jīng)兩次水解后,生成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在脫羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均為堿性物質(zhì)，故可使培養(yǎng)基變堿，用指示劑指示出來。(1)方法：將待檢菌接種于試驗培養(yǎng)上，置35℃孵箱孵育1~4d，觀察結果。

(2)結果：溴甲酚紫指示劑呈紫色為陽性，酚紅指示劑呈紅色為陽性。黃色為陰性。(3)應用：主要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。7．尿素酶試驗

(1)原理：某些細菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿。(2)方法：將待檢菌接種于含有尿素的培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：紅色為陽性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

(4)應用：主要用于腸桿菌科變形桿菌屬、普羅威登菌屬、克雷伯菌屬及假單胞菌屬的鑒定。

8．霍亂紅試驗

(1)原理：霍亂弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，當加入硫酸后生成亞硝酸吲哚，呈紅色反應。

(2)方法：將待檢菌接種于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入濃硫酸數(shù)滴，觀察結果。(3)結果：呈紅色者為陽性。

(4)應用：霍亂弧菌呈陽性反應，但本試驗并非霍亂弧菌所特有。凡能產(chǎn)生吲哚并還原硝酸鹽為亞硝酸鹽的細菌，均可呈現(xiàn)陽性反應。

三、碳源和氮源利用試驗 1．枸櫞酸鹽利用試驗

(1)原理：某些細菌能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源，而在此培養(yǎng)基上生長，并分解枸櫞酸鹽生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性。

(2)方法：將待檢菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上，置35℃孵育1~4d，逐日觀察結果。

(3)結果：若用溴麝香草酚蘭指示劑，斜面出現(xiàn)菌落或菌苔，培養(yǎng)基變藍色為陽性；無菌落生長，培養(yǎng)基綠色為陰性。

(4)應用：可用此試驗作細菌種屬間鑒定。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通常陽性，粘質(zhì)和液化沙雷菌和某些變形桿菌及枸櫞酸桿菌陽性。此外，銅綠假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌和嗜水氣單胞菌也能利用枸櫞酸鹽。

2．丙二酸鹽利用試驗

(1)原理：某些細菌能利用丙二酸鹽作為唯一碳源，丙二酸鹽被分解生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿。

(2)方法：將待檢菌接種于丙二酸鹽培養(yǎng)基中，置35℃孵育24~48h，觀察結果。(3)結果：培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{色為陽性。顏色無變化為陰性。

(4)應用：腸桿菌科中亞利桑那菌和克雷伯菌屬為陽性，枸櫞酸桿菌屬、腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬有不同生物型反應，其它各菌屬均為陰性。

3．醋酸鈉利用試驗

(1)原理：細菌利用銨鹽作為唯一氮源，同時，利用醋酸鹽作為唯一碳源時，可在醋酸鹽培養(yǎng)上生長，分解醋酸鹽生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。

(2)方法：將被檢菌接種于醋酸鹽培養(yǎng)基中，置35℃孵育2~7d，逐日觀察結果。(3)結果：培養(yǎng)基上有細菌生長，并變?yōu)樗{色為陽性。

(4)應用：主要用于大腸埃希菌和志賀菌屬的鑒別，前者為陽性，而后者為陰性。4．馬尿酸鈉水解試驗

(1)原理：某些細菌可具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵試劑結合，形成苯甲酸鐵沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基中，置35℃孵育48h，離心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化鐵試劑0.2ml，立即混勻，經(jīng)10~15min觀察結果。(3)結果：出現(xiàn)恒定之沉淀物為陽性。(5)應用：主要用于B群鏈球菌的鑒定。

5、乙酰胺利用試驗

(1)原理：許多非發(fā)酵菌產(chǎn)生一種脫酰胺酶，可使乙酰胺經(jīng)脫酰胺作用釋放氨，使培養(yǎng)基變堿。

(2)方法：將被檢菌接種于乙酰胺培養(yǎng)基中，置35℃孵育24~48h，觀察結果。

(3)結果：培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{色為陽性。如不生長，或稍有生長，但培養(yǎng)基顏色不變?yōu)殛幮浴?/p>

(4)應用：主要用于非發(fā)酵菌的鑒定。銅綠假單胞菌、去硝化產(chǎn)堿桿菌、食酸假單胞菌為陽性，其它非發(fā)酵菌大多數(shù)為陰性。

四、酶類試驗 1.氧化酶試驗

(1)原理：氧化酶又稱細胞色素氧化酶，是細胞色素氧化酶系統(tǒng)中的最終呼吸酶。此酶并不直接與氧化酶試劑起反應，而是先使細胞色素C氧化，然后此氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應。因此，本試驗結果與細胞色素C的存在有關。

(2)方法：取潔凈濾紙條，沾取菌落少許，加氧化酶試劑（10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液或10g/L鹽酸二甲基對苯二胺水溶液）1滴，1min內(nèi)觀察結果。也可將試劑滴加到菌落上進行試驗。

(3)結果：陽性者立即變粉紅色，5~10s內(nèi)呈深紫色。無色為陰性。

(4)應用：用于奈瑟菌屬的菌種鑒定，該屬細菌均陽性。此外，也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細菌的區(qū)別，前者陽性，而后者陰性。莫拉菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等均為陽性。

注意事項： ①試驗時應避免接觸含鐵物質(zhì)，以免出現(xiàn)假陽性。②10g/L鹽酸四甲基對苯二胺或10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液為無色溶液，在空氣中易被氧化而失效，故應經(jīng)常更換新試劑，并盛于棕色瓶中，若試劑已變成深藍色，應棄去不用。

2．觸酶試驗

(1)原理：觸酶又稱過氧化氫酶，具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫成為水和原子態(tài)氧，繼而形成氧分子，出現(xiàn)氣泡。

(2)方法：取潔凈玻片1張，用接種環(huán)挑取細菌，加3％H2O2 1滴，立即觀察結果。(3)結果：若立即出現(xiàn)大量氣泡為陽性。無氣泡為陰性。

(4)應用：大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過氧化氫酶，但鏈球菌科陰性，故常用此試驗來鑒定。此外，金氏桿菌屬的細菌也為陰性。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗，結核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

注意事項：①3％H2O2溶液要新鮮配制。②不宜用血瓊脂平板上生長的菌落，因紅細胞含有觸酶，可致假陽性反應，③取對數(shù)生長期的細菌。3．凝固酶試驗

(1)原理：凝固酶試驗是鑒定葡萄球菌致病性的重要試驗。致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶，一種是與細胞壁結合的凝聚因子，稱結合凝固酶，它直接作用于血漿中纖維蛋白原，使發(fā)生沉淀，包圍于細菌外面而凝聚成塊，玻片法陽性結果是由此凝聚因子所致；另一種凝固酶是分泌至菌體外，稱為游離凝固酶，它能使凝血酶原變成凝血酶類產(chǎn)物，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。試管法可同時測定結合型和游離型凝固酶。(2)方法: ①玻片法：在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取待檢培養(yǎng)物與其混合（設陽性和陰性對照）制成菌懸液，若經(jīng)10~20s內(nèi)無自凝現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿1環(huán)，與菌懸液混合，觀察結果。②試管法：于試管內(nèi)加1﹕4稀釋的兔或人血漿0.5ml，再加1~2個待試菌菌落，置37℃水浴，每30min觀察1次結果。

(3)結果：①玻片法：5~10s內(nèi)出現(xiàn)凝集者為陽性。②試管法：如有凝塊或整管凝集出現(xiàn)為陽性。2h后無上述現(xiàn)象出現(xiàn)，則放置過夜后再觀察。

(4)應用：本試驗僅用于致病性葡萄球的鑒定。

注意事項：①玻片法為篩選試驗，陽性、陰性均需進行試管法測定。②血漿必須新鮮。③應使用肝素而非枸櫞酸鹽作抗凝劑抗凝的血漿。④本試驗也可用市購的膠乳凝集試驗試劑盒測定。

4．DNA酶試驗

(1)原理： 某些細菌能產(chǎn)生DNA酶，水解外源性DNA使之成為寡核苷酸。DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則不會。故在DNA瓊脂平板上加鹽酸后，可在菌落周圍形成透明區(qū)。

(2)方法：在DNA瓊脂平板上點種待檢菌，35℃孵育18~24h，用1 mol/L鹽酸傾注平板，觀察結果。

(3)結果：如菌落周圍有透明區(qū)者為陽性，無透明區(qū)為陰性。

(4)應用：主要用于腸桿菌科及葡萄球菌屬某些菌種的鑒定。沙雷菌、變形桿菌和金黃色葡萄球菌DNA酶均陽性。

5．膽汁溶菌試驗

(1)原理：膽汁或去氧膽酸鈉能導致某些細菌溶解，一方面是由于膽汁或去氧膽酸鈉降低了細菌細胞膜上的表面張力，使細菌的細胞膜破損或使菌體裂解。另一方面可能與激活細菌體內(nèi)的自溶酶有關。

(2)方法：①試管法：用純培養(yǎng)物制備1ml生理鹽水濃菌懸液，pH調(diào)至7.0，分裝兩支試管，各0.5ml。其中一管加0.5ml 100g/L去氧膽酸鈉為試驗管，另一管加0.5ml生理鹽水作對照。35℃孵育每小時觀察1次結果。②平板法：在血平板上選取單個可疑菌落，作好標記，直接在菌落上加1接種環(huán)20g/L去氧膽酸鈉（pH7.0），置35℃孵育30min（平板不要翻轉(zhuǎn)）觀察結果。

(3)結果：①試管法：在3h內(nèi)液體透明為陽性。②平板法：如菌落消失，僅留下溶血區(qū)為陽性，菌落不消失為陰性。

(4)應用：用于肺炎鏈球菌的鑒定。6．硝酸鹽還原試驗

(1)原理：硝酸鹽還原反應包括兩個過程，其一是在合成代謝過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細胞內(nèi)其它含氮化合物；另一是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。硝酸鹽還原過程可因細菌不同而異。有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌等；有的細菌可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的銨；有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如沙雷菌屬；有的細菌還可以將其還原產(chǎn)物在合成性代謝中完全利用。硝酸鹽或亞硝酸鹽如果還原生成氣體的終末產(chǎn)物如氮或氧化氮，則稱為脫硝化或脫氮化作用。某些細菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸作用，生成亞硝酸，亞硝酸與試劑中的對氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者與α-萘胺結合生成N-α萘胺偶苯磺酸。

(2)方法：將待檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基（內(nèi)含小倒管）中，35℃孵育1~4d。將甲、乙等量混合液（用時混合）0.1ml加于試管內(nèi)，立即或10min內(nèi)觀察結果。

(3)結果：出現(xiàn)紅色為陽性反應。如欲觀察有無氮氣產(chǎn)生，可于培養(yǎng)基管內(nèi)加1只小倒管，有氣泡產(chǎn)生，則表示有氮氣生成。如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否被分解，可取鋅粉少許加入培養(yǎng)基內(nèi)，如出現(xiàn)紅色表明硝酸鹽仍存在；若不出現(xiàn)紅色，表示硝酸鹽已被分解。

(4)應用：本試驗廣泛用于細菌鑒定。腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；假單胞菌屬中有的細菌能產(chǎn)生氮氣，如銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、斯氏假單胞菌，有的則能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，如鼻疽假單胞菌等；厭氧菌如韋榮菌也能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。7．卵磷脂酶試驗

(1)原理：細菌產(chǎn)生的卵磷脂酶，經(jīng)鈣離子作用，能迅速分解卵黃或血清中的卵磷脂形成混濁沉淀狀的甘油酯和水溶性磷酸膽堿。

(2)方法：取待檢菌劃線接種或點種在卵黃瓊脂平板上，置35℃孵育3~6h，觀察結果。(3)結果：3h后在菌落周圍形成乳白色混濁，即為卵磷脂酶試驗陽性，6h后該混濁圈可擴大到直徑5~6mm。(4)應用：該試驗主要用于厭氧的鑒定。產(chǎn)氣莢膜梭菌和諾維梭菌為陽性，其他梭菌為陰性。蠟樣芽孢桿菌亦為陽性。8．磷酸酶試驗

(1)原理：磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使單磷脂水解，其反應可根據(jù)反應基質(zhì)不同而異，如用磷酸酚酞為基質(zhì)，經(jīng)磷酸酶水解后可釋放酚酞，在堿性環(huán)境中呈紅色。

(2)方法：取待檢菌接種于磷酸酚酞瓊脂平板上，置35℃孵育18~24h，于平皿蓋內(nèi)加1滴濃氨水，熏蒸片刻，觀察結果。亦可用液體培養(yǎng)基，經(jīng)孵育后，向管內(nèi)加400g/L氫氧化鈉溶液1滴，觀察結果。

(3)結果：菌落變?yōu)榧t色者為陽性。

(4)應用：主要用于致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌的鑒別，前者為陽性，后者為陰性。

9．脂酶試驗

(1)原理：細菌產(chǎn)生的脂酶可分解脂肪為游離脂肪酸。在培養(yǎng)基中加入維多利亞藍可與脂肪結合成為無色化合物，如果脂肪被分解，則維多利亞藍釋出，呈藍色。

(2)方法：將待檢菌接種于含維多利亞藍的脂酶培養(yǎng)基中，置35℃孵育24h，觀察結果。(3)結果：培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{色者為陽性，否則可呈無色或粉紅色。

(4)應用：主要用于厭氧菌鑒定。在擬桿菌中產(chǎn)黑色素擬桿菌中間亞種產(chǎn)生脂酶，其它擬桿菌陰性；在梭菌屬中諾維梭菌和產(chǎn)芽胞梭菌也產(chǎn)生此酶，其它梭菌為陰性。10．CAMP試驗

(1)原理：B群鏈球菌（無乳鏈球菌）產(chǎn)生一種“CAMP”因子，此種物質(zhì)能促進葡萄球菌的β-溶血素的活性。因此，可在兩種細菌的交界處溶血力增強，出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)。

(2)方法：在羊血或馬血瓊脂平板上，先以β-溶血的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種。再將待檢菌與前一劃線作垂直接種，兩者應相距1cm，于35℃孵育18~24h，觀察結果。每次試驗應做陰陽性對照。

(3)結果：兩種細菌劃線交接處出現(xiàn)箭頭型溶血區(qū)為陽性。

(4)應用：主要用于B群鏈球菌（陽性）的鑒定，其他鏈球菌均為陰性。11．石蕊牛乳試驗

(1)原理：由于牛乳內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)和糖類，各種細菌對這些物質(zhì)的分解能力不同，故可有數(shù)種不同反應，用以鑒別細菌。(2)將待檢菌接種于石蕊牛乳培養(yǎng)基中，若為芽胞梭菌，要在培養(yǎng)基中加入無菌鐵末，置35℃孵育18~24h，必要時可延長至14d。觀察結果。

(3)結果：①產(chǎn)酸：發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使指示劑變?yōu)榉奂t色。②產(chǎn)氣：發(fā)酵乳糖而同時產(chǎn)氣，可沖開上面的凡士林。③凝固：因產(chǎn)酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④胨化：將凝固的酪蛋白繼續(xù)水解為胨，培養(yǎng)基上層液體變清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白。⑤產(chǎn)堿：乳糖未發(fā)酵，因分解含氮物質(zhì)，生成胺及氨，培養(yǎng)基變堿，指示劑變?yōu)樗{色。(4)應用：主要用于梭菌、鏈球菌和丙酸桿菌的鑒定。

五、抑菌試驗

1．Optochin敏感試驗

(1)原理：Optochin(奧普托欣)是鹽酸乙基氫化羥基奎寧的商品名。對肺炎鏈球菌有特異抑制作用，其作用機制可能是干擾葉酸生物合成作用，而對其它鏈球菌則無此作用。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，貼上一張含5μg奧普托欣紙片，置燭缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：抑菌圈直徑大于14mm為敏感，小于或等于 14mm為陰性。(4)應用：主要用于肺炎鏈球菌（敏感）與其它鏈球菌（耐藥）的鑒別。2．桿菌肽敏感試驗

(1)原理：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎是100%敏感，而其它群鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。故此試驗可對鏈球菌進行鑒別。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，稍干后貼一張含0.04U的桿菌肽紙片，置35℃ 孵育18~24h，觀察結果。

(3)結果：抑菌圈直徑大于10mm為敏感，小于10mm為耐藥。(4)應用：主要用于A群與非A群鏈球菌的鑒別。從臨床分離的菌株中有5%~15%非 A群鏈球菌也對桿菌肽敏感，如6%的B群鏈球菌、7.5%的C群鏈球菌和G群鏈球菌等。3．新生霉素敏感試驗

(1)原理：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低濃度新生霉素所抑制，表現(xiàn)為敏感，而腐生葡萄球菌則表現(xiàn)為耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于M-H瓊脂平板或血平板上，在平板中央貼含5μg/片新生霉素診斷紙片一張，置35℃孵育16~18h，觀察結果。(3)結果：抑菌圈直徑大于16mm為敏感，小于或等于16mm為耐藥。(4)應用：主要用于葡萄球菌某些種的鑒定。4．O/129試驗

(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二異丙基喋啶）能抑制弧菌屬、發(fā)光桿菌屬和鄰單胞菌屬細菌生長，而氣單胞菌屬和假單胞菌屬細菌則耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于堿性瓊脂平板上，將10μg/片及150μg/片的O/129診斷紙片貼于平板上，置35℃孵育18~24h，觀察結果。(3)結果：出現(xiàn)抑菌圈者表示敏感，無抑菌圈者為耐藥。

(4)應用：主要用于弧菌屬、鄰單胞菌屬與氣單胞菌屬的鑒別，弧菌屬和鄰單胞菌屬菌為敏感，氣單胞菌屬菌為耐藥。其它菌屬有發(fā)光桿菌屬為敏感，假單胞菌屬為耐藥。5．氰化鉀試驗

(1)原理：氰化鉀可抑制某些細菌的呼吸酶系統(tǒng)。細胞色素、細胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶均以鐵卟啉作為輔基，氰化鉀與鐵卟啉結合，使這些酶失去活性，使細菌生長受到抑制。(2)方法：將待檢菌接種于氰化鉀培養(yǎng)基中，同時接種一支不含氰化鉀的對照培養(yǎng)基，置35℃孵育24~48h，觀察結果。

(3)結果：細菌在氰化鉀培養(yǎng)基中生長的（不受抑制）為陽性，不生長（抑制）為陰性。(4)應用：腸桿菌科中的沙門菌屬、志賀菌屬和埃希菌屬細菌的生長受到抑制，而其它各菌屬的細菌均可生長。

六、其它試驗

1．克氏雙糖鐵或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗

(1)原理：克氏雙糖鐵(KIA)或三糖鐵瓊脂(TSI)培養(yǎng)基制成高層和短的斜面，其中葡萄糖含量僅為乳糖或蔗糖的十分之一，若細菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸使pH降低，因此斜面和底層均先呈黃色，但因葡萄糖量較少，所生成的少量酸可因接觸空氣而氧化，并因細菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，使斜面部分又變成紅色；底層由于處于缺氧狀態(tài)，細菌分解葡萄糖所生成的酸類一時不被氧化而仍保持黃色。細菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。細菌產(chǎn)生硫化氫時與培養(yǎng)基中的硫酸亞鐵作用，形成黑色的硫化鐵。

(2)方法：用接種針挑取待檢菌的菌落，先穿刺接種到KIA或TSI深層，距管底3~5mm為止，再從原路退回，在斜面上自下而上劃線，置35℃孵 育18~24h，觀察結果。(3)結果：常見的KIA反應有如下幾種： ①斜面堿性/底層堿性：不發(fā)酵碳水化合物，系不發(fā)酵菌的特征。如銅綠假單胞菌。②斜面堿性/底層酸性：葡萄糖發(fā)酵、乳糖（和TSI中的蔗糖）不發(fā)酵，是不發(fā)酵乳糖菌的特征，如志賀菌。③斜面堿性/底層酸性（黑色）：葡萄糖發(fā)酵、乳糖不發(fā)酵并產(chǎn)生硫化氫，是產(chǎn)生硫化氫不發(fā)酵乳糖菌的特征。如沙門菌、亞利桑那菌、枸櫞酸桿菌和變形桿菌等。④斜面酸性/底層酸性：葡萄糖和乳糖（和TSI中的蔗糖）發(fā)酵，是發(fā)酵乳糖的大腸菌群的特征，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。

(4)應用：鑒別腸道桿菌用。KIA或TSI對初分離出的、可疑為革蘭陰性桿菌鑒定特別有用。其反應模式是許多桿菌鑒定表的組成部分，也可作為觀察其他培養(yǎng)基反應的有價值的質(zhì)控依據(jù)。

2．氫氧化鉀拉絲試驗

(1)原理：革蘭陰性細菌的細胞壁在稀堿溶液中易于破裂，釋放出未斷裂的DNA螺旋，使氫氧化鉀菌懸液呈現(xiàn)粘性，可用接種環(huán)攪拌后拉出粘絲來，而革蘭陽性細菌在稀堿溶液中沒有上述變化。

(2)方法：取1滴40g/L氫氧化鉀水溶液（應新鮮配制）于潔凈玻片上，取新鮮菌落少許，與氫氧化鉀水溶液攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環(huán)，觀察能否拉出粘絲。(3)結果：用接種環(huán)拉出粘絲者為陽性，仍為混懸液者為陰性。

(4)應用：主要用于革蘭陰性菌與易脫色的革蘭陽性菌的鑒別。大多數(shù)革蘭陰性菌于5~10s內(nèi)出現(xiàn)陽性反應，有的則需30~45s，假單胞菌、無色桿菌、黃桿菌、產(chǎn)堿桿菌、莫拉菌等大多數(shù)在10s內(nèi)呈陽性，不動桿菌、莫拉菌反應較慢，大多數(shù)菌株在60s內(nèi)出現(xiàn)陽性，而革蘭陽性菌在60s以后仍為陰性。