第一篇：16sRNA PCR 擴(kuò)增及凝膠電泳分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告[本站推薦]

16sRNA PCR 擴(kuò)增及凝膠電泳分析

微生物學(xué)20092474王紫楓

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．熟悉細(xì)菌活化及培養(yǎng)過程

2．掌握PCR擴(kuò)增技術(shù)及方法

3．掌握凝膠電泳分析技術(shù)

二、實(shí)驗(yàn)原理

rRNA進(jìn)化緩慢，具有高度保守性。不同微生物的rRNA的基因序列在某些位點(diǎn)以不同的幾率發(fā)生突變。同時，小核糖體亞基16sRNA分子量大，攜帶信息量大，可作為屬種鑒定的基礎(chǔ)。

通過篩選的細(xì)菌，做活化培養(yǎng)后，細(xì)菌在緩沖液酶解，通過細(xì)胞破壁、裂解、離心得到RNA相關(guān)序列，在經(jīng)過設(shè)定PCR相關(guān)條件。溫度、循環(huán)次數(shù)，將裂解液加入到體系中進(jìn)行擴(kuò)增。在完成循環(huán)后進(jìn)行凝膠電泳、拍照、序列分析。

三、實(shí)驗(yàn)用品

供試菌種53種、編號試管每株兩個LB固體和液體培養(yǎng)基、Mg2+、無菌水、EB Buffer、TE離心管、移液槍

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1．將供試菌株編號，沒人分得3個菌株。

2．將菌株接入固體培養(yǎng)基進(jìn)行活化，培養(yǎng)24小時。

3．將活化后的菌株挑一環(huán)，接入5ml液體培養(yǎng)基內(nèi)振蕩培養(yǎng)16小時得到菌懸液。

4．取1.5ml菌懸液于離心管，10000轉(zhuǎn)5分鐘棄上清。

5．用無菌水洗滌一次，沉淀懸浮于150ul TE Bufler。

6．將上述懸液在沸水上煮10分鐘，水浴10分鐘，10000轉(zhuǎn)5分鐘離心后，上清液于-20℃保存。

7．取上述上清液1ul于PCR中。

8．3小時PCR擴(kuò)增。

9．將擴(kuò)增后的序列取1ul于EB，并注入電泳槽中。

10． 經(jīng)過電泳后的凝膠，取出于紫外熒光燈中顯色，拍照并分析。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過拍照，僅有2、3、6、9、22、38、39、40號擴(kuò)增出了新的序列顯色明顯。其他沒有擴(kuò)增出來的原因可能是提取過程中丟失。另外第三塊膠板沒有明顯變化的主要原因可能是電泳時入緩沖液使用了舊的緩沖液，并未出現(xiàn)預(yù)期的結(jié)果。

六、注意事項(xiàng)

1．預(yù)制固體培養(yǎng)基瓊脂要加夠量，否則很難凝固。

2．在轉(zhuǎn)接時，挑取的一環(huán)盡量多一些，肉眼可看見的狀態(tài)為宜，生長期長一些。

3．緩沖液先用現(xiàn)配。

第二篇：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室臨床實(shí)驗(yàn)報(bào)告管理制度

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室臨床實(shí)驗(yàn)報(bào)告管理 制度

一、目的：

規(guī)范實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)報(bào)告的管理，保證檢驗(yàn)結(jié)果及時準(zhǔn)確的發(fā)出，確保實(shí)驗(yàn)報(bào)告的安全與保密。

二、適用范圍：

臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

三、職責(zé)：

由臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室專業(yè)技術(shù)人員制定程序文件，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人審核，科室主任批準(zhǔn)實(shí)施。

四、要求 ：

1、檢驗(yàn)報(bào)告的簽發(fā)按實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)審核及報(bào)告程序進(jìn)行。

2、當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)報(bào)告中有缺陷而對其準(zhǔn)確性及有效性產(chǎn)生懷疑時，應(yīng)以通知實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、或科主任處理。

3、若某些原因應(yīng)對已發(fā)出的檢驗(yàn)報(bào)告做重大修改，應(yīng)立即通知樣品檢驗(yàn)的申請人或檢驗(yàn)報(bào)告的使用者，能收回的應(yīng)立即收回，不能收回的應(yīng)采用另外一個文件方式或作出補(bǔ)充聲明。

4、檢驗(yàn)報(bào)告申請人或使用者因特殊原因造成檢驗(yàn)報(bào)告損壞或遺失時，憑據(jù)有效材料可向檢驗(yàn)室申請補(bǔ)發(fā)，補(bǔ)發(fā)報(bào)告必須在備注欄說明補(bǔ)發(fā)報(bào)告。

5、樣品檢驗(yàn)的申請人或檢驗(yàn)報(bào)告的使用者對檢驗(yàn)報(bào)告的內(nèi)容有異議時，可向?qū)嶒?yàn)室提出抱怨，也可向有關(guān)部門提

出申訴，按醫(yī)療糾紛申訴規(guī)定執(zhí)行。

6、實(shí)驗(yàn)室工作人員及報(bào)告發(fā)送者不得以任何形式占有檢驗(yàn)結(jié)果、數(shù)據(jù)和技術(shù)資料，不得公開透露檢驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)信息，不得遺失檢驗(yàn)報(bào)告。

7、各部門工作人員必須嚴(yán)格遵循醫(yī)學(xué)保密原則，對于違反規(guī)定者追究其相關(guān)責(zé)任。