第一篇：豬場圓環(huán)病毒與其它病原混合感染情況

圓環(huán)病毒病相對于“歷史悠久”的豬瘟是一個新病，1997年Clark等才首次分離到豬圓環(huán)病毒2型（PCV2），我國更是到2000年才有豬群中存在PCV2感染的血清學證據(jù)的報道，但該病給養(yǎng)豬業(yè)帶來的損失則越來越大。

圓環(huán)病毒病會引起斷奶后仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征（PMWS）及豬皮炎腎病綜合征，同時還能引起母豬繁殖障礙、新生仔豬先天性震顫、增生性壞死性肺炎和腸炎等疾病，同時也是豬呼吸道病綜合征的原發(fā)病原之一。

近年越來越被豬病專家重視的免疫抑制病中，圓環(huán)病毒病和豬瘟、藍耳病相提并論。楊漢春老師2009年在學術(shù)年會上指出目前國內(nèi)PVC2呈高感染率，在病死豬組織樣本中檢出率幾乎達100%。

在實際生產(chǎn)中，PCV2單獨感染的情況較為少見，通常為混合感染。Eng等對美國101個豬場中PMWS相關(guān)因素進行研究發(fā)現(xiàn)，PMWS陽性樣本中最普遍的混合感染為藍耳病病毒（72%）、豬肺炎支原體（69%）、豬鏈球菌（69%）和豬流感病毒（55%）。

我國學者陳義祥等調(diào)查顯示，圓環(huán)病毒2型與藍耳病病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬流感病毒混合感染的病料占57.73%，其中與藍耳病病毒混合感染比例最高，約51.85%。近年我國有關(guān)PCV2混合感染的調(diào)查多限于病毒病，本文主要針對病毒病的混合感染情況做了統(tǒng)計，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCV2與藍耳病毒的二重感染最為嚴重，約50.27%，該結(jié)果與國內(nèi)外報道趨勢相一致。截至目前，流行病學和試驗數(shù)據(jù)表明，單獨的PCV2感染并不能足以引起疾病的臨床表現(xiàn)，但并發(fā)或繼發(fā)細菌或病毒感染卻可使死亡率大大增加。

混合感染的普遍性可能與PCV2感染導致免疫抑制有關(guān)，感染豬血液中單核細胞增加，T細胞（主要是CD4+）和B細胞數(shù)量減少，并出現(xiàn)低密度的未成熟粒細胞，導致免疫抑制。由于圓環(huán)病毒發(fā)病豬細胞免疫功能顯著降低，缺乏有效的免疫應答能力，必然出現(xiàn)嚴重的繼發(fā)感染，如副豬嗜血桿菌、鏈球菌、巴氏桿菌等的侵襲。

需要說明的是，目前可導致豬群發(fā)生免疫抑制的病原主要包括豬瘟病毒、藍耳病病毒、圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒及豬肺炎支原體等。最近研究表明，PCV2常見于肺炎支原體感染的支氣管周圍淋巴組織區(qū)域，且肺炎支原體可促進圓環(huán)病毒的感染。

另有研究發(fā)現(xiàn)，在呼吸道綜合征的臨床病例中常見肺炎支原體與PCV2混合感染，而不一定有藍耳病毒或流感病毒的存在。雖未對我國PCV2和肺炎支原體混合感染調(diào)查，但該現(xiàn)象可能是臨床上最為常見的，需要加以重視，同時針對支原體肺炎做好預防免疫。另外，在選擇支原體肺炎疫苗過程中也要注意油佐劑激發(fā)PCV2復制的現(xiàn)象。更多請訪問http:///

第二篇：DNA病原—圓環(huán)病毒2型PCR檢測方法專題

豬圓環(huán)病毒2型PCR檢測方法操作程序

廖榮斌，何啟蓋

（華中農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院）

一、原理

豬圓環(huán)病毒2型感染引發(fā)的仔豬斷奶衰竭綜合癥、腎炎與皮炎、增生性腸炎以及母豬繁殖障礙。通過病原檢測和病毒分離是確證本病的重要手段。豬圓環(huán)病毒分為2種，即圓環(huán)病毒1型和圓環(huán)病毒2型。前者不致病，后者可致病。豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）的基因組大小為1768 bp或1767bp。其中，PCV2 ORF2基

因與免疫保護和毒力等重要特性有關(guān)，同時，此基因與PCV1的同源性較低，通

過合理設(shè)計引物，擴增ORF2，從而可檢測并區(qū)分PCV2與PCV1。

PCR技術(shù)具有快速、敏感的優(yōu)點，已經(jīng)用于許多動物疾病病原的檢測。本試驗是利用我們設(shè)計的引物，通過反應條件的優(yōu)化，以感染豬組織或血液為模板，擴增PCV2的ORF2基因，從而作出感染的結(jié)論。

二、材料準備

1、手術(shù)器械：采樣用。根據(jù)樣品數(shù)量來確定。

2、微量移液器（規(guī)格：2.5?l，10?l，100?l，200?l，1000?l）

3、反應引物

上游引物：CAC GGA TAT TGT AGT CCT GGT；

下游引物：CGC ACC TTC GGA TAT ACT GTC4、磁珠：用于吸附和分離DNA4、PCR儀：東勝創(chuàng)新

5、電泳儀：北京六一電子設(shè)備

6、紫外檢測儀：Bi0-RAD凝膠成像系統(tǒng)

7．相關(guān)溶液及配方：

1╳TAE buffer（電泳緩沖液）配方：（1）稱量Tris：242g，Na2EDTA.2H2O：

37.2g，置于1L的燒杯中；（2）向燒杯中加入約800ml去離子水，充分攪拌溶解；

（3）加入57.1ml的醋酸，充分攪拌；（4）加去離子水將溶液定容至1L后，室 1

溫保存；（5）使用時將室溫保存的該溶液稀釋50倍即可使用。

擴增產(chǎn)物的樣品緩沖液：全式金生物6╳Loading buffer。

三．樣品采集

感染豬或流產(chǎn)的胎兒的肺臟、淋巴結(jié)、脾臟和腎臟；發(fā)熱期豬的抗凝血或血

清；每個樣品用單獨的剪刀或刀片，避免交叉污染。

樣品置冷藏條件下送檢。也可放冷凍保存。

四、模板的制備（DNA提?。?/p>

*（注：所用DNA提取試劑盒為日本TOYOBO產(chǎn)品）

1、取組織100mg（或血液100ml）以下放入1.5ml離心管中，然后加入850?l的溶解吸附液，再使用勻漿器充分勻漿。

2、離心分離（10000rpm，5分鐘)后，將上清液吸入新的1.5ml的離心管內(nèi)。

3、加入40?l磁珠，然后使用渦旋振蕩器劇烈混合10分鐘（注意：加入磁珠前，要把磁珠混勻）。

4、將離心管置于磁性臺架上，放置30秒使磁珠聚集，然后去除上清液。

5、離心管中添加900?l 洗凈液，然后渦旋振蕩劇烈混合5秒。

6、將離心管置于磁性臺架上，放置30秒使磁珠聚集，然后去除上清液。

7、重復步驟5和6.8、離心管中添加900?l 70﹪的乙醇溶液，然后渦旋振蕩劇烈混合5秒。

9、將離心管置于磁性臺架上，放置30秒使磁珠聚集，然后去除上清液。

10、重復步驟8和9.11、添加100?l滅菌水后，劇烈震蕩10分鐘，使DNA溶出。

12、將試管置于磁性臺架上，通過放置30秒使磁珠聚集，然后將含有DNA的上

清液回收至新的1.5ml離心管內(nèi)，上清液即為DNA模板！

13、陰陽性對照的設(shè)立：利用滅菌三蒸水和PCV2陽性病毒液（或者所保存的臨

床PCV2陽性病料）與臨床送檢病料同步提取DNA，分別作為PCV2臨床檢測的陰性

對照和陽性對照。

五、配置PCV2-PCR的標準反應體系（單重擴增）：

10×擴增緩沖液2.5ul

dNTP混合物2ul引物（10mM）各1ul

模板DNA4ul

Taq DNA聚合酶0.15ul

加滅菌三蒸水14.35ul

即總反應體系25ul.六、擴增

將配好樣品的PCR管放入PCR儀中選擇適合反應條件的程序進行擴增。退

火溫度54°C。

反應條件：按如下程序進行擴增: 94℃變性5 min后,進入循環(huán)94℃

30sec,54℃ 40sec, 72℃ 45sec,35個循環(huán)后,72℃延伸10 min。

七、配置瓊脂糖凝膠塊

1、材料：廣口瓶、瓊脂糖、電泳液

2、制作步驟：

（1）、稱取瓊脂糖1克放入廣口瓶內(nèi)。

（2）、取電泳液100ml加入廣口瓶，即為1﹪的瓊脂糖混合液。

（3）、然后放入微波爐中加熱2分鐘，取出后冷卻約56℃。

（4）、倒入容器中，混合液約占容器容積的1/2—2/3。

八、電泳

1、擴增結(jié)束后，每只PCR管中都加入約2.5ul的6╳Loading buffer（電泳樣品

緩沖液）

2、將制備好的凝膠塊放入DNA電泳儀內(nèi)的電泳液中，膠塊有孔的一側(cè)靠近負極。

3、從滴加有電泳樣品緩沖液的樣品中分別取7ul注入膠塊相對應的孔內(nèi)。

4、注入5ul的分子量（DL Mark 2000）對照。

5、電泳到凝膠塊的1/2—2/3處。

九、圖片觀察

1、電泳結(jié)束的凝膠塊放入溴乙錠（熒光物質(zhì)）中浸泡10min。

2、放入成像系統(tǒng)中照膠。

3、結(jié)果判定（目的片段大小是494bp）如圖1.******8M bp

圖1.臨床病豬圓環(huán)病毒PCR檢測的凝膠成像圖片

1：陰性對照；2：陽性對照；3—18：湖北某規(guī)模化豬場送檢病料；其中3—6，8，11—12，15—16為PCV2感染陽性。其余被檢病料為PCV2感染陰性，M(分子標記): DL Mark 2000。

4．結(jié)果分析

（1）感染的判定：PCR結(jié)果為陽性，表明為PCV2感染；陰性表明無PCV2感染。

（2）疾病的判定：由于本病毒感染較廣，PCR陽性結(jié)果需要與豬群的流行病學以及臨床表現(xiàn)（斷奶消瘦、咳嗽、體溫升高、腹股溝淋巴結(jié)腫大）等結(jié)合考慮。

第三篇：豬場疾病混合感染的防治方案探索.doc

一、情況介紹

河南某豬場自2008年12月以來開始發(fā)病，病情：母豬產(chǎn)前1-2周發(fā)熱，不食，眼分泌物增多，部分母豬毛孔有出血現(xiàn)象；產(chǎn)房仔豬兩周左右開始發(fā)病，體溫高達40.5-41℃，精神沉郁，腹式呼吸，眼瞼水腫，分泌物增多，耳朵發(fā)烏、發(fā)紅，25日齡左右、死亡率超過95%；保育豬35-55日齡體溫升高（40.5-41.5℃），耳朵紫黑色，臀部、腹下皮膚呈紫紅色，被毛粗亂，腹式呼吸，腹股溝淋巴結(jié)腫大，腹部皮下有藍色、紫褐色出血點，部分豬有神經(jīng)癥狀，有的豬伴有口吐白沫，后肢關(guān)節(jié)腫脹等癥狀。豬場免疫情況：母豬使用進口藍耳苗，每年普防3次，仔豬沒有免疫藍耳苗；豬瘟疫苗用細胞苗6-8頭份/頭，母豬跟胎免疫；仔豬瘟在20至30日齡首免（不固定），60日齡二免；偽狂犬疫苗母豬跟胎免疫，仔豬偽狂犬疫苗45日齡免疫一次。

二、原因分析及處理措施

懷疑豬群可能存在豬瘟和藍耳病的感染，并繼發(fā)副豬嗜血桿菌、敗血型和腦膜腦炎型鏈球菌等感染。建議：加強消毒；加強豬群飼養(yǎng)管理和藥物保健，特別是要加強產(chǎn)房、保育舍的保溫問題；豬群緊急免疫海利豬瘟活疫苗（脾淋），2頭份/頭；豬群緊急免疫海利藍耳凈，種豬：2頭份/頭，仔豬：1頭份/頭。

三、效果及目前情況

2009年3月份回訪得知，該豬場的疫情得到了很好的控制，母豬發(fā)病率顯著降低，產(chǎn)房仔豬和保育豬發(fā)病率逐漸降低并恢復健康。目前豬場免疫程序調(diào)整如下：海利豬瘟疫苗（脾淋）免疫種豬群春、秋各1次，1頭份/次；仔豬25日、60日海利豬瘟疫苗各一頭份；母豬用藍耳凈普防：4次/年，2頭份/次；產(chǎn)房仔豬10-14日齡和50日齡肌注藍耳凈1次，1頭份/次；母豬用偽狂凈普防：4次/年，2ml/次，產(chǎn)房仔豬3日齡用偽狂凈滴鼻0.5-1ml/頭，45日齡保育豬肌注偽狂凈2ml/頭；產(chǎn)房仔豬18、50日齡肌注鏈球凈2ml/頭。

第四篇：病毒的感染與免疫

醫(yī)學微生物學練習題：病毒的感染與免疫

1.下列病毒中，通過神經(jīng)播散引起全身感染的是____________.A.巨細胞病毒

B.EB病毒

C.單純皰疹病毒

D.狂犬病毒

E.人類免疫缺陷病毒

2.可通過血流播散引起全身感染的病毒是：____________.A.鼻病毒

B.流感病毒

C.麻疹病毒

D.呼吸道合胞病毒

E.單純皰疹病毒

3.在下列病毒中，不通過垂直傳播的是____________.A.乙型肝炎病毒

B.EB病毒

C.人類免疫缺陷病毒

D.單純皰疹病毒

E.流感病毒

4.中和抗體的主要作用是：____________.A.阻止病毒基因的表達

B.阻止病毒吸附細胞

C.阻止病毒脫殼和穿入

D.阻止病毒的生物合成E.阻上病毒的釋放

5.病毒引起細胞病變的機制中，與免疫損傷有關(guān)的是：____________.A.病毒衣殼蛋白對細胞的毒性

B.病毒出芽造成細胞膜損傷

C.病毒改變細胞膜抗原引起細胞損傷

D.病毒包涵體對細胞的損傷

E.病毒的酶抑制細胞的代謝

6.關(guān)于病毒的致病機制，錯誤的敘述是：____________.A.病毒在細胞內(nèi)的復制抑制了細胞的正常代謝

B.病毒合成侵襲性酶類使細胞裂解

C.病毒基因組與細胞DNA整合，使之發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化

D.病毒感染使細胞互相融合而死亡

E.病毒感染細胞膜抗原改變，引起機體免疫病理反應

7.包膜病毒的感染一般不直接導致細胞：____________.A.膜抗原性改變

B.轉(zhuǎn)化

C.融合D.裂解

E.出現(xiàn)包涵體

8.I型干擾素是：____________.A.活化T細胞釋放的殺病毒蛋白

B.病毒感染機體產(chǎn)生的免疫球蛋白

C.細胞感染病毒后產(chǎn)生的糖蛋白

D.細胞感染病毒后產(chǎn)生的脂蛋白

E.抗病毒的化學療劑

9.于擾索抗病毒的作用機制是：____________.A.誘發(fā)細胞產(chǎn)生抗病毒蛋白

B.直接抑制病毒的生物合成C.直接抑制病毒的釋放

D.阻礙病毒吸附于敏感細胞

E.與病毒結(jié)合，阻止其脫殼

10.干擾素的生物活性中不包括：____________.A.抗毒素

B.抗病毒

C.抗腫瘤

D.增強NK細胞的殺傷活性

E.增強巨噬細胞的吞噬功能

11.干擾素的抗病毒作用特點中不包括：____________.A.間接滅活病毒

B.選擇性作用于病毒感染細胞

C.種屬特異性

D.高活性

E.只能針對某種病毒，作用有特異性

12.滅活下列病毒所需溫度最高的是：____________.A.流感病毒

B.乙型肝炎病毒

C.流行性乙型腦炎病毒

D.麻疹病毒

E.甲型肝炎病毒

13.關(guān)于理化因素對病毒的影響，正確的敘述是：____________.A.大多數(shù)病毒耐冷不耐熱

B.60C30分鐘能殺死所有病毒

C.包膜病毒體比無包膜病毒體更耐受反復凍融

D.紫外線不能滅活病毒

E.脂溶劑能破壞病毒衣殼

14.病毒滅活是指在理化因素作用下使病毒失去：____________.A.抗原性

B.感染性

C.血凝特性

D.誘生于擾素的能力

E.融合細胞特性

15.病毒凝集紅細胞（血凝試驗）的機制是：____________.A.紅細胞表面抗原和血凝素抗體結(jié)合B.紅細胞表面受體與病毒表面血凝素結(jié)合C.紅細胞表面病毒抗原與相應抗體結(jié)合D.病毒與結(jié)合在紅細胞表面的抗體結(jié)合E.紅細胞上的血凝素與病毒結(jié)合16.進行病毒病原學檢查的標本遞送要求是：____________.A.孵箱保存

B.室溫保存

C.加入防腐劑

D.冷藏速送

E.加入含抗生素和蛋白的運輔培養(yǎng)基中冷凍速送

17.可從糞便標本中分離的一組病毒是；____________.A.甲型肝炎病毒、乙型腦炎病毒

B.狂犬病毒、輪狀病毒

C.脊髓灰質(zhì)炎病毒、輪狀病毒

D.乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒

E.EB病毒、?？刹《?/p>

18.檢查包涵體可作為：____________.A.病毒在細胞內(nèi)增殖的標志之一

B.衡量病毒毒力強弱的標準

C.診斷乙型腦炎病毒感染

D.鑒定病毒的特異性依據(jù)

E.測定病毒數(shù)量的指標

19.細胞病變效應不包括：____________.A.細胞圓縮、脫落

B.細胞融合C.形成包涵體

D.干擾現(xiàn)象

E.細胞裂解

20.判斷流感病毒接種雞胚尿囊腔是否生長應選：____________.A.紅細胞吸附試驗

B.血凝試驗

C.血凝抑制試驗

D.間接血凝試驗

E.補體結(jié)合試驗

21.用于估計病毒感染性強弱和數(shù)量的實驗方法；____________.A.蝕斑形成試驗

B.TCIDS0或ID50測定

C.ELLSA

D.PCR

E.EIA

22.可用于制備病毒滅活疫苗的理化因素是：____________.A.紫外線

B.甲醇

C.甲醛

D.乙醇

E.乙醛

23.預防病毒病最有效的方法是：____________.A.使用抗毒素

B.使用抗病毒化學療劑

C.使用中草藥

D.使用疫苗

E.使用抗菌藥物

24.脊髓灰質(zhì)炎病毒糖九疫苗后，機體可產(chǎn)生：____________.A.血清LGG、IGM

B.血清LGG、腸黏膜局部SIGA

C.血清LGG、咽部黏膜局部SIGA

D.血清IGA和LGG

E.腸黏膜局部SIGA

25.下述藥物中，對治療病毒感染無效果的是：____________.A.干擾素

B.抗生索

C.聚肌苷酸

D.黃連、黃芩

E.三氮唑核苷

26.接～R活疫苗后，體內(nèi)產(chǎn)生的抗體種類主要是____________.A.IgG、SIgA

B.IgD

C.IgE

D.IgG

E.IEM

27.滅活疫苗的缺點不包括：____________.A.需多次注射

B.免疫維持時間短

C.疫苗成本高

D.誘導細胞免疫反應差

E.可發(fā)生干擾現(xiàn)象降低免疫效果

28.我國目前應用的乙型肝炎疫苗屬于：____________.A.減毒活疫苗

B.滅活疫苗

C.亞單位疫苗

D.多價疫苗

E.基因重組疫苗

1.D 2.C 3.E 4.B 5.C 6.B 7.D 8.C 9.A 10.A

11.E 12.B 13.A 14.B 15.B 16.E 17.C 18.A 19.D 20.B

21.B 22.C 23.D 24.B 25.B 26.D 27.E 28.E

第五篇：教育部創(chuàng)新團隊“人類重要病毒的感染與致病機制”

教育部創(chuàng)新團隊“人類重要病毒的感染與致病機制”

結(jié)題并順利通過驗收

教育部創(chuàng)新團隊“人類重要病毒的感染與致病機制”結(jié)題驗收會議于2011年6月21日上午在武漢大學生命科學學院一樓中廳召開。本次驗收專家組長是侯云德院士，驗收專家還有：中科院武漢病毒研究所胡志紅研究員，中科院武漢水生物研究所桂建芳研究員，華中科技大學楊東亮教授，武漢大學章曉聯(lián)教授。教育部科技司綜合處李楠副處長、武漢大學蔣昌忠副校長、武漢大學科學技術(shù)發(fā)展研究院李平湘常務副院長、武漢大學人事部趙雪梅部長等學校相關(guān)部門領(lǐng)導，以及該團隊成員出席了本次會議。

根據(jù)會議議程的安排，侯云德院士首先介紹了該團隊負責人——吳建國教授的相關(guān)情況后，隨后吳建國教授從創(chuàng)新團隊的基本情況、研究方向及主要研究內(nèi)容、研究進展和研究成果四個方面介紹了該團隊從2008年至2010年的情況。匯報結(jié)束后，評審專家針對該團隊的匯報情況作了深入討論，并經(jīng)獨立打分評議，一致同意通過驗收，成績優(yōu)秀。專家組建議在原有研究方向基礎(chǔ)上進一步凝練研究目標，形成特色，在人類重要病毒的感染與致病機制研究領(lǐng)域形成更大的原創(chuàng)性成果。建議學校和教育部繼續(xù)給予滾動支持。