第一篇：實(shí)驗(yàn)計劃：MTT法檢驗(yàn)?zāi)郴衔颴的抑癌作用

MTT法檢驗(yàn)化合物X的抑癌作用實(shí)驗(yàn)計劃

1.主要試劑和儀器

MCF-7細(xì)胞系

1640培養(yǎng)基

小牛血清

雙抗：青霉素，鏈霉素

胰酶

四氮唑藍(lán)(MTT)

二甲亞砜(DMSO)

CO2培養(yǎng)箱

96孔板

酶標(biāo)儀

2.分組設(shè)計：

（1）給藥組，加入化合物X的濃度可設(shè)為1 mg/ L、10 mg/ L、100 mg/ L三個濃度梯度，藥物處理時間可設(shè)為12h、24h、36h、48h。

（2）陽性對照組，加入與給藥組相應(yīng)濃度的氟尿嘧啶（有待進(jìn)一步確定），處理時間與給藥組相同。

（3）空白對照組，不經(jīng)藥物處理。

（4）PBS對照組。

（5）調(diào)零組 不加細(xì)胞 相同處理。

本預(yù)實(shí)驗(yàn)選取10 mg/ L的化合物X濃度，處理48h。設(shè)3個平行孔。

3.實(shí)驗(yàn)流程：

培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞

↓

加藥處理

↓

MTT 法檢測細(xì)胞生長抑制率

4.具體實(shí)驗(yàn)方法

4細(xì)胞培養(yǎng)：MCF-7細(xì)胞以5×10cells / mL密度接種在含10 %新鮮小牛血清、100 μg/

mL青霉素、鏈霉素的1640培養(yǎng)液中，置37 ℃、5 % CO2 孵箱中培養(yǎng)，隔天換液一次，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

MTT 法檢測細(xì)胞生長抑制率：取對數(shù)生長期細(xì)胞，在平底96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入5×104cells/ mL 100μL，培養(yǎng)24h后，換液，加入化合物X使其在細(xì)胞培養(yǎng)孔中的終濃度分別為10 mg/ L、100 mg/ L，以加有細(xì)胞而不含藥物的培養(yǎng)液孔為對照，加入與藥物等量的PBS對照。37 ℃、5 % CO2、飽和濕度，培養(yǎng)48 h 后，取出培養(yǎng)板，棄上清，每孔加入濃度為5 g/ L 的MTT 20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，快速棄上清，每孔加細(xì)胞溶解液二甲亞砜150μL，震蕩20 min，最后用酶標(biāo)儀測定各孔于495 nm 下的OD值，計算腫瘤細(xì)胞殺傷率。細(xì)胞殺傷率以如下公式計算：細(xì)胞殺傷率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)孔OD值/ 對照孔OD值)×100 %。根據(jù)各組藥物對MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞殺傷率，運(yùn)用SPSS 軟件中Probit 求出藥物半數(shù)抑制濃度(IC50)。