第一篇：硫酸銅對大蒜根尖細胞微核效應的實驗

硫酸銅對大蒜根尖細胞微核效應的研究

一、原理

微核(micronuclei)簡稱MCN,是真核類生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生的。在細胞間期，微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外，大小應有主核1/3以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣，也具合成DNA的能力。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產生的，整條染色體或幾條染色體也能形成微核。

二、步驟：

1、大蒜幼根的培養(yǎng)：提前3~5天進行培養(yǎng)，將大蒜瓣剝去外邊膜質枯皮，下端可見許多微微凸起的根原體，將蒜瓣架在燒杯（大小與蒜瓣適宜）口上，杯中盛滿清水，使蒜瓣的下部浸入水中，置溫暖處，注意每天換水，經3~5天后，即可長出1-2cm的嫩根。

2、處理根尖：每組選擇6-8粒發(fā)芽良好的種子，用配制好的不同濃度的硫酸銅溶液（（（（1g/L、、、、5g/L、、、、10g/L））））染毒處理6小時后（使根尖完全浸入處理水樣中，）取出后用蒸餾水沖洗（3次,每次2-3分鐘），并移至蒸餾水中修復培養(yǎng)24小時（蒸餾水浸住根尖）。，對照用自來水處理，處理時間24h。

3、恢復培養(yǎng)：處理后的根尖用自來水浸洗3次，每次2-3min，洗凈后在水中恢復培養(yǎng)24h。

4、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后棄去固定液，或換入70％酒精中保存。

5、酸解：棄去固定液，用清水漂洗2-3次，吸凈水，加入6M鹽酸，于室溫解離10min，棄去鹽酸，漂洗根尖2-3次，徹底洗凈鹽酸。

6、染色：截下1-2mm長的根尖，滴加石炭酸品紅染液，染色10min，加蓋玻片，壓片觀察。

三、理論補充

1、微核是無著絲點的染色體斷片，在有絲分裂后期不能向兩極移動，所以游離于細胞質中，在間期細胞核形成時，即可在它附近看到一到幾個很小的圓形結構，直徑大約是細胞直徑的1／20－1／5，這就是微核（micronucleus）。微核是常用的遺傳毒理學指標之一，指示染色體或紡錘體的損傷。

3、固定是借助于物理方法或化學藥劑的作用，迅速透入組織和細胞將之殺死，并且使其結構和內含物如：蛋白質，脂肪，糖類以及核物質與細胞器等，在形態(tài)結構上盡可能保持生活時的完整和真實狀態(tài)，同時更易于染色，可以較清楚的顯現細胞在生活時不易看清的結構。

4、分離的作用是去除未固定的蛋白質, 同時使胞間層的果膠類物質解體，細胞分散而易于觀察。

實驗結果

3.2 CuSO4溶液下蠶豆根尖微核數的統計

CuSO4濃度（g/L）0（對照組）1510

有無微核無有（少）無無

3.3 由實驗結果可以看到，對照組沒有出現微核，CuSO4溶液濃度在1g/L的時候，蠶豆根尖細胞產生微核，而在5g/L和10g/L硫酸銅溶液時沒有微核出現，原因可能是：高濃度的重金屬溶液處理蠶豆根尖導致微核率下降，但細胞受損傷的程度更為嚴重，使細胞周期不能正常運轉，細胞不能得到更新，植物體生命活動受到更嚴重的影響。

第二篇：暨大朱嘉明遺傳學實驗-小白鼠骨髓嗜多染紅細胞的微核測定

暨南大學本科實驗報告專用紙

課程名稱 遺傳學實驗成績評定

實驗項目名稱小白鼠骨髓嗜多染紅細胞的微核測定指導教師朱嘉明 實驗項目編號實驗項目類型實驗地點生物樓

學生姓名李金超學號

2011051838

學院生命科學技術學院系生物工程學系專業(yè)生物技術 實驗時間2013年月日午～2013月日午溫度℃濕度

1.實驗目的

初步掌握小鼠骨髓嗜多染紅細胞的制片技術,學習微核(micronucleus，MCN)的識別和計數方法。

2.實驗原理

2.1 微核的定義：在間期細胞的細胞質中出現的與核相似的圓形結構，其染色特性與核相似，大小應在主核的1/3以下。

2.2 微核的來源：在細胞分裂間期受理化或生物因子作用而受損的染色體，會產生喪失著絲點的染色體斷片，在進入有絲分裂后期時，這些染色體斷片不能向兩極移動而滯留在赤道板附近，到分裂末期形成子細胞核時，這些片段不能進入子細胞核，形成獨立的游離于細胞質中的微核。

2.3 微核測定：以微核數量的多少來檢測活體內染色體或有絲分裂器損傷的一種遺傳毒性試驗方法。已經證實，細胞內微核率和誘變因子的劑量呈正相關，因此微核試驗法可用于對環(huán)境致突變、致癌、致畸變物質的初級篩選監(jiān)測。2.4 微核試驗的優(yōu)點：經濟、簡單、快速。該方法在敏感性、特異性和準確性方面，與經典的繁雜的中期染色體畸變分析方法基本相當。

2.5 本實驗用注射用環(huán)磷酰胺對小鼠進行腹腔注射，測定骨髓細胞微核率來測定環(huán)磷酰胺的誘變活力。

3.實驗用品

3.1 儀器： 10ml刻度離心管、吸管、解剖剪、解剖刀、止血鉗、1ml注射器、l／2號針頭、載玻片、蓋玻片、染缸、濾紙、計數器、顯微鏡、離心機、5ml注射器、7號針頭、lOml離心管等。

3.2 藥物：小牛血清(經56℃水溶保溫30分鐘滅活)，Giemsa染色液，磷酸緩沖液(Serensen配方，pH6.8—6.9),生理鹽水，注射用水，分析純甲醇，二甲苯，中性樹膠，注射用環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CP)。3.3 實驗動物：體重l8—25克的小白鼠(雌雄均可)。

4.實驗步驟

4.1 動物染毒：取注射用環(huán)磷酰胺結晶（20mg）加入l0ml注射用水，溶解后對小鼠進行腹腔注射，注射劑量為l20－150mg／kg（3.6－4.5mg/30g，目前我們用最高劑量）。24小時后按上述劑量再次注射，末次給藥后6小時取材料(即小鼠經染毒后30小時)4.2 骨髓液的制備：取上述小鼠以頸椎脫臼法處死，剖取兩根股骨，把肌肉剔除干凈，用紗布擦掉附在股骨上的血污和肉后，剪去兩端股骨頭。將股骨置于盛有2ml生理鹽水的小燒杯內，用止血鉗反復夾碎，充分洗脫出骨髓，靜置片刻，去掉骨渣。也可將針斗插入骨髓腔中，用2ml生理鹽水沖洗骨髓腔幾次，將骨髓從骨髓腔中沖洗出來。用吸管將骨髓細胞懸液移入刻度離心管中

4.3 離心：l000rpm離心l0min，然后用毛細吸管吸去上清液，沉淀物滴加小牛血清2滴，充分混勻。

4.4 涂片、干燥：吸取上述混懸液一小滴于載玻片的一端，按血液學常規(guī)涂片法涂片，在空氣中晾干。

4.5 固定：用甲醇固定5一l0分鐘(即使當日不染色，也應固定后保存)。4.6 染色：Ciemsa染色液染色10分鐘左右，然后用pH6.8－6.9的磷酸緩沖液迅速沖洗。

4.7 鏡檢：用濾紙吸干片背面的水分，再小心吸去涂面上的水滴（濾紙不要接觸涂面），便可直接鏡檢。先以低倍鏡、高倍鏡粗檢，選擇細胞分解均勻，細胞無損，染色好的區(qū)域，再換到油鏡觀察。

5.實驗結果