第一篇：疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)研究審評(píng)一般原則的補(bǔ)充說(shuō)明

關(guān)于《疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)研究審評(píng)一般原則》的補(bǔ)充說(shuō)明――傳代細(xì)胞殘留

物質(zhì)的考慮

審評(píng)五部 生物制品室 高恩明

摘要：本文對(duì)《疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)研究審評(píng)一般原則》中細(xì)胞傳代及其殘留物要求的有關(guān)問(wèn)題進(jìn)行了重點(diǎn)闡述

目前，我國(guó)疫苗生產(chǎn)使用的傳代細(xì)胞主要有兩種，一種是非洲綠猴腎細(xì)胞的傳代細(xì)胞系（Vero細(xì)胞）。另一種是中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞的傳代細(xì)胞系（CHO細(xì)胞），雖然《疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)研究審評(píng)一般原則》不涉及CHO細(xì)胞的有關(guān)問(wèn)題，但鑒于CHO細(xì)胞本身存在的問(wèn)題及殘留物質(zhì)的重要性，本文對(duì)有關(guān)問(wèn)題進(jìn)行討論。

CHO細(xì)胞主要作為表達(dá)載體，目前國(guó)內(nèi)用于重組疫苗的表達(dá)，二十世紀(jì)九十年代上市的產(chǎn)品有重組乙型肝炎疫苗，現(xiàn)在仍有一些科研單位或企業(yè)正在研發(fā)某些重組疫苗，試圖采用CHO細(xì)胞表達(dá)。

理論上，傳代細(xì)胞的DNA和蛋白存在致腫瘤的可能性。目前國(guó)內(nèi)的研究資料顯示，CHO細(xì)胞致腫瘤試驗(yàn)陽(yáng)性，逆轉(zhuǎn)錄酶試驗(yàn)陽(yáng)性。為此，《中國(guó)藥典》三部（2005版）對(duì)CHO細(xì)胞表達(dá)的重組乙型肝炎疫苗提出新的要求，要求CHO細(xì)胞殘余DNA含量≤10pg/劑量，CHO細(xì)胞殘余蛋白占總蛋白含量的0.05％以下，并要求在生產(chǎn)工藝中增加病毒滅活工藝。在藥品審評(píng)中，對(duì)于未上市的新疫苗的評(píng)價(jià)，除進(jìn)行技術(shù)審評(píng)之外，還需要進(jìn)行效益/風(fēng)險(xiǎn)比的分析與評(píng)價(jià)。雖然CHO細(xì)胞只作為表達(dá)載體，表達(dá)的目的蛋白尚需純化，CHO細(xì)胞的殘留物質(zhì)很少，但是，仍存在潛在的風(fēng)險(xiǎn)，因此不推薦新的預(yù)防用疫苗采用CHO細(xì)胞表達(dá)，更不能推薦用于嬰幼兒。

近幾年，我國(guó)采用Vero細(xì)胞生產(chǎn)滅活疫苗逐漸增多，疫苗的種類包括人用狂犬病純化疫苗、出血熱純化疫苗、甲型肝炎滅活疫苗、乙型腦炎純化疫苗。Vero細(xì)胞是傳代細(xì)胞系，理論上具有致腫瘤的可能性，已有資料報(bào)導(dǎo)，Vero細(xì)胞在170代以上致腫瘤試驗(yàn)陽(yáng)性；WHO推薦134～150代，認(rèn)為在該代次內(nèi)未發(fā)現(xiàn)致腫瘤性。因此，建議我國(guó)疫苗生產(chǎn)些企業(yè)盡可能采用150代作為使用限定代次。

Vero細(xì)胞殘余DNA、殘余蛋白（包括促生長(zhǎng)蛋白）可能對(duì)人體有潛在的致腫瘤性及其他危害，建議疫苗生產(chǎn)研究單位研究特異性檢測(cè)Vero細(xì)胞蛋白的方法，為今后制定相關(guān)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。此外，目前階段應(yīng)盡量降低疫苗總蛋白含量，間接控制細(xì)胞殘留蛋白。關(guān)于Vero細(xì)胞殘余DNA危害，除了與殘余DNA含量的多少有關(guān)外，還與殘余DNA片斷的大小有關(guān)，殘余DNA含量越高、片斷越大，其潛在的致腫瘤性越大。因此，建議疫苗生產(chǎn)研究單位強(qiáng)化純化工藝，盡量降低殘余DNA含量；此外，研究并建立檢測(cè)Vero細(xì)胞殘余DNA片斷大小的方法，為今后制定相關(guān)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

在上述采用Vero細(xì)胞生產(chǎn)的純化疫苗中，乙型腦炎純化疫苗比較特殊，因?yàn)樗菄?guó)家一類疫苗，即實(shí)施計(jì)劃免疫的疫苗，用于嬰幼兒的免疫接種。因此，對(duì)乙型腦炎純化疫苗的質(zhì)量要求應(yīng)相對(duì)嚴(yán)格，用于計(jì)劃免疫嬰幼兒使用的疫苗，采用Vero細(xì)胞生產(chǎn)是否合適，對(duì)于Vero細(xì)胞DNA殘余量、殘余蛋白含量如何要求有待討論。目前可初步要求DNA殘余量≤10pg//劑量（參照CHO細(xì)胞產(chǎn)品的要求），要求生產(chǎn)企業(yè)建立Vero細(xì)胞殘余蛋白含量的檢測(cè)方法并擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

作者：cde 發(fā)布時(shí)間：2008-6-13 10:47:18