第一篇：產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素分離和鑒定方法

產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素的分離和鑒定方法毒素檢查

羊只死亡后，盡快取小腸內(nèi)容物（最好是回腸內(nèi)容物），加1%的氯仿防腐，在冷藏條件下送檢。實(shí)驗(yàn)室在收到送檢材料后，用生理鹽水稀釋2~4倍（若內(nèi)容物稀薄，不必稀釋），充分混合后經(jīng)離心沉淀（3000 r/min）15 min，取上清液，用賽氏濾器過(guò)濾后，1份直接注射動(dòng)物（兩只），另1份加1%的胰蛋白酶粉，在室溫處理1 h以致活ε和1毒素，破壞β毒素，然后注射另一組動(dòng)物（兩只）。若無(wú)離心機(jī)和賽氏濾器，可用濾紙反復(fù)過(guò)濾，直到濾液清朗即可。動(dòng)物可用小鼠（靜脈注射0.2 mL~0.4mL）或家兔（靜脈注射2mL~4mL）。注射后至少觀察24h，根據(jù)兩組動(dòng)物的反應(yīng)情況作出判斷。如腸毒素含量低，動(dòng)物也可能于注射后一定時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)輕度昏迷，呼吸加快，經(jīng)1h左右可能恢復(fù)。.正常綿羊腸內(nèi)容物注射后不引起反應(yīng)。

也可用豚鼠進(jìn)行毒素檢查。方法為皮內(nèi)注射上述檢濾液0.2 mL~0.4 mL，觀察48 h，如果有毒素存在，注射部可見(jiàn)壞死變化。中和試驗(yàn)

2.1

取滅菌試管5支，編為1、2、3、4、5號(hào)，然后按表1所列，分別加入含毒素濾液、抗毒素和生理鹽水，每管總量為1.2 mL?；旌虾髮?個(gè)管同時(shí)放置37C溫箱中，中和40 min。

表1

中和試驗(yàn)方法加樣表 管號(hào) 腸內(nèi)容物濾液（mL）

抗毒素（mL）

生理鹽水（mL）

中和 靜脈注射小鼠 B 型 C 型 D 型 E 型 數(shù)量（只）

劑量（mL/只）0.9 0.3----37℃，40min 2 0.4 2 0.9-0.3---2 0.4 3 0.9--0.3--2 0.4 4 0.9---0.3-2 0.4 5 0.9----0.3 2 0.4 2.1.1 小鼠10只，分為5組，每組2只，各組依次靜脈注射上述5個(gè)管中一個(gè)管中的混合液，注射劑量為每鼠0.4 mL，觀察72 h，按表2判斷結(jié)果。

表2

試驗(yàn)結(jié)果判定

第一種 結(jié)果 第二種 結(jié)果 第三種 結(jié)果 第四種 結(jié)果 第五種 結(jié)果 第六種 結(jié)果

B型血清+腸內(nèi)容物濾液

活

腸 毒 素 是 A 型

活

腸 毒 素 是 B 型 活

腸 毒 素 是 C 型 活

腸 毒 素 是 D 型 死

腸 毒 素 是 E 型 死

1.不是魏氏梭菌毒素，考慮其它毒素或毒物

C型血清+腸內(nèi)容物濾液

活 死 活 死 死 死 D型血清+腸內(nèi)容物濾液

活 死 死 活 死 死 2.檢查各型血清，尤其是B型血清是否失效 E型血清+腸內(nèi)容物濾液

活 死 死 死 活 死