DF-1雞胚成纖維傳代細胞的染色體制備及核型分析、致瘤性試驗研究方案

材料與方法 細胞 DF-1細胞、CEF細胞、Hela細胞。裸鼠 2月齡（或體重18～22g）、或乳鼠（3~5日齡）、或小鼠（8~10g）。細胞營養(yǎng)液 細胞生長液為無血清培養(yǎng)基。細胞染色體制備和核型分析

4.1 染色體標本制備 按常規(guī)方法分別將DF1細胞進行秋水仙素處理、細胞消化與低滲處理、細胞固定與在固定、滴片與染色。

4.2 染色體特征及數(shù)目、細胞核型分析 取有絲分裂中期的細胞進行姬母薩染色檢查，（總共需要150個視野的圖片）。細胞致瘤性試驗

5.1 細胞樣品的制備 按常規(guī)方法制備好DF-1細胞。

5.2 陽性對照細胞 將Hela細胞經(jīng)胰酶消化分散，離心收集細胞。制成含活細胞數(shù)約106cells/0.2ml的細胞懸液。

5.3 陰性對照細胞 按常規(guī)方法制備的雞胚成纖維細胞（CEF），制成含活細胞數(shù)約107cells/0.2ml的細胞懸液。

5.4 致瘤性試驗

5.4.1和5.4.2任選其一。

5.4.1 將細胞樣品分別皮下注射裸鼠30只，每只107 cells /0.2ml細胞。

5.4.2 取3~5日齡乳鼠或8~10g小鼠，用抗胸腺血清處理后，將細胞樣品分別皮下接種18只，每只107 cells /0.2ml細胞。

5.4.3 陽性對照 每只裸鼠皮下或肌肉注射106 cells /0.2ml，共注射5只裸鼠，為陽性對照。（如以乳鼠或小鼠試驗，注射劑量不變，數(shù)量為3只）。

5.4.4 陰性對照：每只裸鼠皮下注射107 cells /0.2ml，共注5只裸鼠，為陰性對照。（如以乳鼠或小鼠試驗，注射劑量不變，數(shù)量為3只）。

5.5 實驗動物檢查及處理

5.5.1 逐日觀察至14日，檢查有無結(jié)節(jié)或腫瘤形成。如有結(jié)節(jié)或可疑病灶，應在觀察至少7～14日后剖檢，進行病理組織學檢查。

5.5.2 未發(fā)現(xiàn)結(jié)節(jié)的動物，對其中的一半動物觀察21日后剖檢，另外一半動物觀察12周后剖檢，觀察各個淋巴結(jié)核器官中是否形成結(jié)節(jié)，如有懷疑，應進行病理組織學檢查。不應有移植瘤形成。

5.5.3 陽性對照組觀察21日后，應出現(xiàn)明顯的腫瘤。

5.5.4 陰性對照組觀察21日，應為陰性。

試驗要求提供以上的圖片