第一篇：動物病原微生物實驗室檢驗實習(xí)總結(jié)

山西農(nóng)業(yè)大學(xué)

教學(xué)實習(xí)總結(jié)

專 業(yè) 動物檢疫

年 級

班 級

姓 名 學(xué) 號

指導(dǎo)教師 趙宇軍

職 稱 副教授

動物病原微生物實驗室檢驗實習(xí)總結(jié)

實習(xí)時間：2012年5月8日至8月13日

實習(xí)地點(diǎn)：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)實驗室

指導(dǎo)老師：趙宇軍

實習(xí)內(nèi)容：時間過的很快，轉(zhuǎn)眼間三年的大學(xué)生活就結(jié)束了，我們動物檢疫專業(yè)的同學(xué)從五月份開始了為期3個多月的教學(xué)實習(xí)，在眾多輔導(dǎo)老師之中，我有幸跟隨我校動物科技學(xué)院預(yù)防系的趙宇軍教授進(jìn)行學(xué)習(xí)。實習(xí)地點(diǎn)為我校獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)實驗室。實習(xí)內(nèi)容自行選擇。在老師的帶領(lǐng)下我進(jìn)行了大腸桿菌的實驗室檢測和食物中金黃葡萄球菌的檢驗。下面我們來回顧這次實驗。

大腸桿菌的實驗室檢測

一、培養(yǎng)基配置

我們一般用LB液體培養(yǎng)基來擴(kuò)大培養(yǎng)大腸桿菌，培養(yǎng)后可在LB固體培養(yǎng)基上劃線分離。以下為本實驗中培養(yǎng)基配置步驟：

1．稱量：準(zhǔn)確稱取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化鈉0.5g，加水50ml。配置LB固體培養(yǎng)基時還需加1g瓊脂。

2．溶化：加熱熔化，用蒸餾水定容到50mL。配置LB固體培養(yǎng)基時還需加瓊脂，整個過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。3．調(diào)pH：用1mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至偏堿性。

4．滅菌：在兩個250ml的三角瓶中分別裝入50ml LB液體培養(yǎng)基和50ml LB固體培養(yǎng)基，加上棉塞。將培養(yǎng)皿用牛皮紙包好，放入滅菌鍋內(nèi)，1kg壓力滅菌15min。5．倒平板：滅菌后，待固體培養(yǎng)基冷卻至60℃左右時在酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。其過程是：①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁，右手拿裝有培養(yǎng)基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通過火焰；③用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于三角瓶口的縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋；④待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置。

二、滅菌和消毒 1．無菌技術(shù)：①對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；②將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；③為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行；④避免已滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。2．消毒方法：①日常生活經(jīng)常用到的是煮沸消毒法；②對一些不耐高溫的液體，則使用巴氏消毒法；③對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用紫外線進(jìn)行物理消毒；④實驗操作者的雙手使用酒精進(jìn)行消毒。3．滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；②培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋；③表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

三、細(xì)菌的分離

采用劃線分離法，其操作步驟是：將培養(yǎng)皿底部用拇指和無名指固定成傾斜狀態(tài)，在火焰旁將培養(yǎng)皿稍微打開。在此同時，用環(huán)狀接種針在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板培養(yǎng)基的一邊，作第1次平行劃線 3～5條，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然后再用同樣方法，通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線。劃線時，接種針應(yīng)與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養(yǎng)皿邊緣，也不要將培養(yǎng)基劃破。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于恒溫箱培養(yǎng)。

四、菌落和菌種種類的辨認(rèn) 細(xì)菌的菌落表面一般是光滑而濕潤的，有黏稠性，多數(shù)透明或半透明，但也有細(xì)菌的菌落表面是干燥、有褶皺的；放線菌由于有纖細(xì)的菌絲并可產(chǎn)生孢子，所以菌落表面是緊密的絨狀、堅實多皺，長孢子后就成粉末狀，由于菌絲和孢子有多種色素，所以在菌落培養(yǎng)基底部和菌落表面都有不同的顏色，菌落不易用接種環(huán)挑動；酵母菌落類似于細(xì)菌菌落，表面光滑而濕潤，有黏稠性但大多呈乳白色，少數(shù)呈紅色。

食品中金黃葡萄球菌的檢測方法

金黃色葡萄球菌是一種引起人類和動物化膿感染的重要致病菌，也是造成人類食物中毒的常見致病菌之一。本菌廣泛分布于自然界，如空氣、土壤、水及其它環(huán)境中。在人類和動物的皮膚及外界相通的腔道中，也經(jīng)常有本菌存在。據(jù)報導(dǎo)，在正常人群中的帶菌率可達(dá)30%~80%，其中皮膚帶菌率為8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的帶菌率在40~50%以上，因此其可通過各種途徑和方式，尤其是經(jīng)工作人員的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黃葡萄球菌能產(chǎn)生腸毒素，故一旦細(xì)菌污染食品，并在合適的溫度環(huán)境下，細(xì)菌可以大量繁殖并產(chǎn)生腸毒素，從而引起消費(fèi)者食物中毒。

我國對金黃色葡萄球菌目前采用的方法是以國家標(biāo)準(zhǔn)GB.4789-10-84及檢驗檢疫系統(tǒng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN.0172-92作為依據(jù)。整個檢測過程獲得最終結(jié)果須時5天左右，既費(fèi)時又費(fèi)力，并造成貨物積壓，也影響貨物的及時出運(yùn)，并使貨主的倉儲成本提高，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。

多年來很多食品微生物實驗室都在探索和尋找一些準(zhǔn)確性高，并快速的檢測方法，最近我們分別從美國3M公司和法國生物梅里埃公司獲得兩種快速檢測致病性金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基，其名稱為：

① Petrifilm RSA.Count Plate（由美國3M公司研制生產(chǎn)），是一種薄膜型快速檢測金黃色葡萄球菌的計數(shù)平板。

② Baird-parker + RPF Agar.（由法國生物梅里埃公司研制生產(chǎn)的用Baird-Parker瓊脂加免血漿纖維蛋白原的金黃色葡萄球菌檢測計數(shù)平板）。

一、實驗原理

Petrifilm.RSA.測試薄膜是由二部分組成。第一部分是由黃金色葡萄球菌培養(yǎng)基片，此培養(yǎng)基中含有經(jīng)修正的Barid-Parker，營養(yǎng)成分加上以冷水可溶解的膠質(zhì)。第二部分是一種耐熱核酸酶（TNase）反應(yīng)片，含有DNA及甲苯胺蘭(Toluidine Blue-O)及四唑指示劑(Tetraeolium)。此指示劑有助于菌落的計數(shù)及確定葡萄球菌耐熱核酸酶的存在。

耐熱去氧核糖核酸（deoxyribonulcas Dnase）為產(chǎn)毒金葡菌之典型特征，此酶非常耐熱，在100℃加熱30min，不易喪失活性，在130℃之下，其D值為16.6min，此酶之分子量為16800，等電點(diǎn)PH為9.6,耐熱去氧核糖酸與檢測血漿凝固酶相似，是一種鑒定金黃色葡萄球菌的方法，在Petrifilm.RSA 檢測片上，耐熱DNA酶反應(yīng)看起來，呈粉紅色環(huán)帶包圍著一個紅色或蘭色的菌落。

Petrifilm.RSA檢測片，必須與Peyrifilm耐熱核酸酶反應(yīng)片一起使用，單獨(dú)使用將不會顯示菌落，因為具有輔助計數(shù)菌落的指示劑是在反應(yīng)片上，而不是在Petrifilm.RSA檢測片上。

Baird-parker + RPF agar，這一培養(yǎng)基中含有豐富的營養(yǎng)成分，其中以氯化鋰代替亞碲酸鉀，使菌落顏色呈黑色，RPF補(bǔ)充有兔血漿和牛纖維蛋白原，以便檢測凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分圍繞凝固酶陽性菌落周圍沉淀暈環(huán)纖維蛋白的溶解，因此凡存在血漿凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌，將在培養(yǎng)基中呈現(xiàn)有暈環(huán)的黑色菌落，即可確認(rèn)，并作計數(shù)。

二、實驗步驟

材料和方法：

本次實驗采用以下3種試劑：

1.美國3M公司提供的Petrifilm.Rapid.S.aureus Count Plate.2.法國生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker + RPF agar.3.實驗室自配Baird-Park瓊脂（英國Oxoid）及新鮮兔血漿。

菌種來自美國菌種保存中心（America TyP Culture Collection）。金黃色葡萄球菌共10株菌株，其菌號分別為：

ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704

ATCC(K)12600 ATCC(R)65389 ATCC 25923 ATCC 29213 ATCC 8095 ATCC 12598

非金黃色葡萄球菌菌種5株，其菌號分別為：

ATCC 51813（大腸桿菌）、ATCC 624（無乳鏈球菌）、ATCC 51816（陰溝腸桿菌）、ATCC 6051（枯草桿菌）、ATCC 49214（腸炎沙門氏菌）、自然食品檢樣，任意購自市場。

本次實驗是以同一測試樣品經(jīng)均質(zhì)并通過無菌生理鹽水作10倍遞增稀釋后取1至2個稀釋度同時接種上述三種培養(yǎng)基作平行實驗，在取得最終結(jié)果后相互進(jìn)行比對。

上述三種培養(yǎng)基的接種方法是按生產(chǎn)商所提供的使用說明進(jìn)行操作，另外Baird-Parker Agar 培養(yǎng)基是按SN0172-92標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。

A、本次實驗共測試已知標(biāo)準(zhǔn)菌種共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌種5株（包括大腸桿菌、陰溝腸桿菌、腸炎沙門氏菌、枯草桿菌和無乳鏈球菌）。

B、測試自然食品檢樣共101只（其中包括肉11只、肉類14只、水產(chǎn)品17只、牛奶25只、蔬菜22只、豆制品12只）。

三、實驗結(jié)果：

A、被檢菌種10株，金黃色葡萄球菌在三種培養(yǎng)基上都能檢出生長情況良好，同一稀釋度的菌液，除個別菌株外在3種培養(yǎng)基計數(shù)檢測結(jié)果基本都在一個數(shù)量級上，無顯著差異。而5株非金黃色葡萄球菌的菌株在三種培養(yǎng)基上全部不能生長。

B、自然食品檢樣共接種101只，每一檢樣同一稀釋濃度分別同時種三種培養(yǎng)基，最終共檢出金黃色葡萄球菌45只，占全部檢樣的44.5％，其中Petrifilm RSA 檢出陽性結(jié)果為42只，占全部陽性檢樣的93.3％，Baird-Parker＋RPF Agar.檢出陽性結(jié)果26只，占全部陽性檢樣的57.7％。Baird-Parker.Agar 檢出陽性結(jié)果32只，占全部陽性檢樣的71.1％。

四、實驗討論

1.用15株標(biāo)準(zhǔn)菌在3種培養(yǎng)基中的檢測，10株金黃色葡萄球菌以同一濃度接種，結(jié)果生長良好，其最終計數(shù)基本一致，定位在同一數(shù)量級，5株非金黃色葡萄球菌接種上述三種培養(yǎng)基全部不長，說明上述三種培養(yǎng)基對金黃色葡萄球菌選擇良好。

2.以101只自然樣品同一均質(zhì)稀釋液，同時接種三種培養(yǎng)基，從最終結(jié)果來看，對金黃色葡萄球菌的陽性檢出率為44.5％

3.從檢測程序來年，Petrifilm.RSA及Baird-Parker＋RPF.Agar.都在樣品接種后28~30h觀察結(jié)果，并不必再做證實試驗，而如以Baird-Parker Agar檢測，須在接種后48h觀察平板，并挑取可疑菌落轉(zhuǎn)種到營養(yǎng)肉湯中，在經(jīng)18-24h后做血漿凝固酶或耐熱DNA酶試驗進(jìn)行證實，最終計數(shù)，前后約須80h。

4.從本次試驗中觀察，使用上述三種培養(yǎng)基對食品中金黃色葡萄球菌含量的直接計數(shù)檢測，其樣品接種液的含量擬控制在100個/ml以內(nèi)，比較容易分清并計數(shù)，如菌量過濃，則將會影響最后的讀數(shù)，因此對新送的被檢樣品，如在不了解污染的情況下一般必須要做2個以上的稀釋度，同時分別接種，才能獲得較為滿意的結(jié)果。

而在Baird-Parker＋RPF Agar及Baird-Parker.Agar接種時必須將1ml樣液作三只平板涂布（0.3、0.3、0.4ml）這樣就會造成手續(xù)繁瑣試劑消耗較大，但Baird-Parker.RPF.培養(yǎng)基也可以1ml樣液作傾注培養(yǎng)，并作計數(shù)。

5.在整個測試過程中，我們發(fā)現(xiàn)，按使用說明對Petrifilm.RSA.及Barid-Parker＋RPF.Agar，操作規(guī)定在接種24h后觀察結(jié)果，此時往往由于菌落長得經(jīng)較小，特征瓜不明顯，但如果繼續(xù)放置一夜以后金葡萄菌落特征明顯，并可能會經(jīng)第一天觀察數(shù)量有所增加，這樣可以提高檢測結(jié)果的可信度。

6.由于對上述兩種培養(yǎng)基的試用期間我們尚未獲得供應(yīng)商的報價，故無法測算每一樣品的測試成本價格。但可以予計上述兩面種快速檢測培養(yǎng)基的耗材費(fèi)用要高于常規(guī)經(jīng)典方法（Baird-Parker Agar）的費(fèi)用。

7.通過本次實驗，我們感到使用美國3M公司生產(chǎn)的Petrifilm.RSA Plate培養(yǎng)基和法國生物－梅利埃公司生產(chǎn)的Baird-Parker RPF.Agar培養(yǎng)基檢測中的金黃色葡萄球菌?？梢员饶壳俺Ｒ?guī)檢測方法時間可縮短一半。并可以明顯節(jié)省大量人力。這完全符合實驗室快速檢測的要求，尤其是對基層較簡陋的實驗室條件中，更顯其使用方便的優(yōu)越性。

實習(xí)總結(jié)：通過這次嚴(yán)謹(jǐn)而有序的實驗實習(xí)，為我們先前在教學(xué)中學(xué)習(xí)到的知識提供了一個實際的操作實施平臺，也為今后在這方面檢驗技術(shù)的工作起到了指引作用。在過去的學(xué)習(xí)中，我們并不了解具體的病原微生物實驗室檢驗技術(shù)的具體流程，注意事項等等非常關(guān)鍵和必須的防御手段。通過此次生產(chǎn)實習(xí)，使我們對以前所不熟知的問題有了深入的認(rèn)識，也對目前的情況有所思考和感悟。在我看來，動物檢疫人員在我國國民生活中起到了關(guān)鍵作用，民以食為天，沒有認(rèn)真負(fù)責(zé)的實驗檢測，將給社會帶來巨大的飲食災(zāi)難，為此，我感到非常自豪和驕傲。在今后的工作學(xué)習(xí)中，我將一如既往的認(rèn)真下去，無愧自己的職責(zé)和稱號。

在此感謝我院的各級領(lǐng)導(dǎo)，特別是我的指導(dǎo)老師趙宇軍教授。

第二篇：病原微生物檢驗實習(xí)總結(jié)

病原微生物檢驗實習(xí)總結(jié)

大三下學(xué)期5月份，我們動物檢疫專業(yè)的同學(xué)開始了為期2個多月的教學(xué)實習(xí)，在眾多輔導(dǎo)老師之中，我有幸跟隨我校動物科技學(xué)院預(yù)防系的趙宇軍教授進(jìn)行學(xué)習(xí)。實習(xí)的地點(diǎn)就在我校動科樓的微生物實驗室，以前我們曾在這里上過實驗課，所以并不陌生。這次大家來到實驗室為自行選擇課題進(jìn)行相關(guān)實驗操作，我對世界聞名的金黃色葡萄球菌非常感興趣，在老師的帶領(lǐng)下進(jìn)行了相關(guān)食物中該菌的檢驗。下面我們來回顧這次實驗。

一、實驗內(nèi)容：食品中金黃葡萄球菌的檢測方法

金黃色葡萄球菌是一種引起人類和動物化膿感染的重要致病菌，也是造成人類食物中毒的常見致病菌之一。本菌廣泛分布于自然界，如空氣、土壤、水及其它環(huán)境中。在人類和動物的皮膚及外界相通的腔道中，也經(jīng)常有本菌存在。據(jù)報導(dǎo)，在正常人群中的帶菌率可達(dá)30%~80%，其中皮膚帶菌率為8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的帶菌率在40~50%以上，因此其可通過各種途徑和方式，尤其是經(jīng)工作人員的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黃葡萄球菌能產(chǎn)生腸毒素，故一旦細(xì)菌污染食品，并在合適的溫度環(huán)境下，細(xì)菌可以大量繁殖并產(chǎn)生腸毒素，從而引起消費(fèi)者食物中毒。

由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒，在世界各國都極為普遍。特別是在北美及歐洲等地區(qū)發(fā)病率更高。在上述這些國家中，每年有金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例，僅次于沙門氏菌，而在細(xì)菌性食物中毒病例排到第2~3位，有此而造成的經(jīng)濟(jì)損失也相當(dāng)慘重，在我國由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例也時有報導(dǎo)，所以目前世界各國都把金黃色葡萄球菌列為食品衛(wèi)生的法定檢測項目。

我國對金黃色葡萄球菌目前采用的方法是以國家標(biāo)準(zhǔn)GB.4789-10-84及檢驗檢疫系統(tǒng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN.0172-92作為依據(jù)。整個檢測過程獲得最終結(jié)果須時5天左右，既費(fèi)時又費(fèi)力，并造成貨物積壓，也影響貨物的及時出運(yùn)，并使貨主的倉儲成本提高，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。多年來很多食品微生物實驗室都在探索和尋找一些準(zhǔn)確性高，并快速的檢測方法，最近我們分別從美國3M公司和法國生物梅里埃公司獲得兩種快速檢測致病性金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基，其名稱為：

① Petrifilm RSA.Count Plate（由美國3M公司研制生產(chǎn)），是一種薄膜型快速檢測金黃色葡萄球菌的計數(shù)平板。

② Baird-parker + RPF Agar.（由法國生物梅里埃公司研制生產(chǎn)的用Baird-Parker瓊脂加免血漿纖維蛋白原的金黃色葡萄球菌檢測計數(shù)平板）。

二、實驗原理：

Petrifilm.RSA.測試薄膜是由二部分組成。第一部分是由黃金色葡萄球菌培養(yǎng)基片，此培養(yǎng)基中含有經(jīng)修正的Barid-Parker，營養(yǎng)成分加上以冷水可溶解的膠質(zhì)。第二部分是一種耐熱核酸酶（TNase）反應(yīng)片，含有DNA及甲苯胺蘭(Toluidine Blue-O)及四唑指示劑(Tetraeolium)。此指示劑有助于菌落的計數(shù)及確定葡萄球菌耐熱核酸酶的存在。

耐熱去氧核糖核酸（deoxyribonulcas Dnase）為產(chǎn)毒金葡菌之典型特征，此酶非常耐熱，在100℃加熱30min，不易喪失活性，在130℃之下，其D值為16.6min，此酶之分子量為16800，等電點(diǎn)PH為9.6,耐熱去氧核糖酸與檢測血漿凝固酶相似，是一種鑒定金黃色葡萄球菌的方法，在Petrifilm.RSA 檢測片上，耐熱DNA酶反應(yīng)看起來，呈粉紅色環(huán)帶包圍著一個紅色或蘭色的菌落。

Petrifilm.RSA檢測片，必須與Peyrifilm耐熱核酸酶反應(yīng)片一起使用，單獨(dú)使用將不會顯示菌落，因為具有輔助計數(shù)菌落的指示劑是在反應(yīng)片上，而不是在Petrifilm.RSA檢測片

上。

Baird-parker + RPF agar，這一培養(yǎng)基中含有豐富的營養(yǎng)成分，其中以氯化鋰代替亞碲酸鉀，使菌落顏色呈黑色，RPF補(bǔ)充有兔血漿和牛纖維蛋白原，以便檢測凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分圍繞凝固酶陽性菌落周圍沉淀暈環(huán)纖維蛋白的溶解，因此凡存在血漿凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌，將在培養(yǎng)基中呈現(xiàn)有暈環(huán)的黑色菌落，即可確認(rèn)，并作計數(shù)。

三、實驗步驟

材料和方法：

本次實驗采用以下3種試劑：

1.美國3M公司提供的Petrifilm.Rapid.S.aureus Count Plate.2.法國生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker + RPF agar.3.實驗室自配Baird-Park瓊脂（英國Oxoid）及新鮮兔血漿。

菌種來自美國菌種保存中心（America TyP Culture Collection）。金黃色葡萄球菌共10株菌株，其菌號分別為：

ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704

ATCC(K)12600 ATCC(R)65389 ATCC 25923 ATCC 29213

ATCC 8095 ATCC 12598

非金黃色葡萄球菌菌種5株，其菌號分別為：

ATCC 51813（大腸桿菌）、ATCC 624（無乳鏈球菌）、ATCC 51816（陰溝腸桿菌）、ATCC 6051（枯草桿菌）、ATCC 49214（腸炎沙門氏菌）、自然食品檢樣，任意購自市場。本次實驗是以同一測試樣品經(jīng)均質(zhì)并通過無菌生理鹽水作10倍遞增稀釋后取1至2個稀釋度同時接種上述三種培養(yǎng)基作平行實驗，在取得最終結(jié)果后相互進(jìn)行比對。

上述三種培養(yǎng)基的接種方法是按生產(chǎn)商所提供的使用說明進(jìn)行操作，另外Baird-Parker Agar 培養(yǎng)基是按SN0172-92標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。

A、本次實驗共測試已知標(biāo)準(zhǔn)菌種共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌種5株（包括大腸桿菌、陰溝腸桿菌、腸炎沙門氏菌、枯草桿菌和無乳鏈球菌）。

B、測試自然食品檢樣共101只（其中包括肉11只、肉類14只、水產(chǎn)品17只、牛奶25只、蔬菜22只、豆制品12只）。

四、實驗結(jié)果：

A、被檢菌種10株，金黃色葡萄球菌在三種培養(yǎng)基上都能檢出生長情況良好，同一稀釋度的菌液，除個別菌株外在3種培養(yǎng)基計數(shù)檢測結(jié)果基本都在一個數(shù)量級上，無顯著差異。而5株非金黃色葡萄球菌的菌株在三種培養(yǎng)基上全部不能生長。

B、自然食品檢樣共接種101只，每一檢樣同一稀釋濃度分別同時種三種培養(yǎng)基，最終共檢出金黃色葡萄球菌45只，占全部檢樣的44.5％，其中Petrifilm RSA 檢出陽性結(jié)果為42只，占全部陽性檢樣的93.3％，Baird-Parker＋RPF Agar.檢出陽性結(jié)果26只，占全部陽性檢樣的57.7％。Baird-Parker.Agar 檢出陽性結(jié)果32只，占全部陽性檢樣的71.1％。

五、實驗討論

1.用15株標(biāo)準(zhǔn)菌在3種培養(yǎng)基中的檢測，10株金黃色葡萄球菌以同一濃度接種，結(jié)果生長良好，其最終計數(shù)基本一致，定位在同一數(shù)量級，5株非金黃色葡萄球菌接種上述三種培養(yǎng)基全部不長，說明上述三種培養(yǎng)基對金黃色葡萄球菌選擇良好。

2.以101只自然樣品同一均質(zhì)稀釋液，同時接種三種培養(yǎng)基，從最終結(jié)果來看，對金黃色

葡萄球菌的陽性檢出率為44.5％

3.從檢測程序來年，Petrifilm.RSA及Baird-Parker＋RPF.Agar.都在樣品接種后28~30h觀察結(jié)果，并不必再做證實試驗，而如以Baird-Parker Agar檢測，須在接種后48h觀察平板，并挑取可疑菌落轉(zhuǎn)種到營養(yǎng)肉湯中，在經(jīng)18-24h后做血漿凝固酶或耐熱DNA酶試驗進(jìn)行證實，最終計數(shù)，前后約須80h。

4.從本次試驗中觀察，使用上述三種培養(yǎng)基對食品中金黃色葡萄球菌含量的直接計數(shù)檢測，其樣品接種液的含量擬控制在100個/ml以內(nèi)，比較容易分清并計數(shù)，如菌量過濃，則將會影響最后的讀數(shù)，因此對新送的被檢樣品，如在不了解污染的情況下一般必須要做2個以上的稀釋度，同時分別接種，才能獲得較為滿意的結(jié)果。

而在Baird-Parker＋RPF Agar及Baird-Parker.Agar接種時必須將1ml樣液作三只平板涂布（0.3、0.3、0.4ml）這樣就會造成手續(xù)繁瑣試劑消耗較大，但Baird-Parker.RPF.培養(yǎng)基也可以1ml樣液作傾注培養(yǎng)，并作計數(shù)。

5.在整個測試過程中，我們發(fā)現(xiàn)，按使用說明對Petrifilm.RSA.及Barid-Parker＋RPF.Agar，操作規(guī)定在接種24h后觀察結(jié)果，此時往往由于菌落長得經(jīng)較小，特征瓜不明顯，但如果繼續(xù)放置一夜以后金葡萄菌落特征明顯，并可能會經(jīng)第一天觀察數(shù)量有所增加，這樣可以提高檢測結(jié)果的可信度。

6.由于對上述兩種培養(yǎng)基的試用期間我們尚未獲得供應(yīng)商的報價，故無法測算每一樣品的測試成本價格。但可以予計上述兩面種快速檢測培養(yǎng)基的耗材費(fèi)用要高于常規(guī)經(jīng)典方法（Baird-Parker Agar）的費(fèi)用。

7.通過本次實驗，我們感到使用美國3M公司生產(chǎn)的Petrifilm.RSA Plate培養(yǎng)基和法國生物－梅利埃公司生產(chǎn)的Baird-Parker RPF.Agar培養(yǎng)基檢測中的金黃色葡萄球菌。可以比目前常規(guī)檢測方法時間可縮短一半。并可以明顯節(jié)省大量人力。這完全符合實驗室快速檢測的要求，尤其是對基層較簡陋的實驗室條件中，更顯其使用方便的優(yōu)越性。

實習(xí)總結(jié)：通過這次嚴(yán)謹(jǐn)而生動的實驗實習(xí)，為我們先前在教學(xué)中學(xué)習(xí)到的知道提供了一個實際的操作實施平臺，也為今后在這方面檢驗技術(shù)的工作起到了指引作用。在過去的學(xué)習(xí)中，我們并不了解具體的病原微生物實驗室檢驗技術(shù)的具體流程，注意事項等等非常關(guān)鍵和必須的防御手段。通過上學(xué)期生產(chǎn)實習(xí)，使我們對以前所不熟知的問題有了深入的認(rèn)識，也對目前的情況有所思考和感悟。在我看來，動物檢疫人員在我國國民生活中起到了關(guān)鍵作用，民以食為天，沒有認(rèn)真負(fù)責(zé)的實驗檢測，將給社會帶來巨大的飲食災(zāi)難，為此，我感到非常自豪和驕傲。在今后的工作學(xué)習(xí)中，我將一如既往的認(rèn)真下去，無愧自己的職責(zé)和稱號。

在此感謝我的院各級領(lǐng)導(dǎo)，特別是我的指導(dǎo)老師趙宇軍教授。

2010年7月

第三篇：病原微生物實驗室

病原微生物實驗室檢查

為進(jìn)一步加強(qiáng)病原微生物實驗室生物安全的監(jiān)督管理，特別是病原微生物菌（毒）種及樣本的保藏管理工作，預(yù)防生物安全事故的發(fā)生，近日醫(yī)療衛(wèi)生監(jiān)督科對全市設(shè)置病原微生物實驗室的7家醫(yī)療機(jī)構(gòu)（4家市級醫(yī)院、3家中心衛(wèi)生院）的生物安全進(jìn)行監(jiān)督檢查。檢查內(nèi)容包括實驗室基本情況、組織制度、建筑設(shè)計和設(shè)施、防護(hù)設(shè)備、人員培訓(xùn)和上崗情況、病原微生物菌（毒）種和樣本的管理等，并抽查了相關(guān)臺賬資料。

本次共檢查醫(yī)療機(jī)構(gòu)微生物實驗7家，僅第一人民醫(yī)院1家是備案實驗室。抽查從事實驗室業(yè)務(wù)的衛(wèi)生技術(shù)人員29人，其中中級職稱12人，初級職稱17人。7家病原微生物實驗室均按要求劃分清潔區(qū)、半污染區(qū)、污染區(qū)，配備有BSC1000-II生物安全柜，并能出示實驗室生物安全手冊、感染應(yīng)急預(yù)案及工作人員生物安全培訓(xùn)記錄。

檢查中發(fā)現(xiàn)主要存在以下問題：

一、大部分實驗室未經(jīng)嘉興市衛(wèi)生局備案；

二、大部分實驗室門非自動關(guān)閉，可開啟窗戶無紗窗；

三、未配備洗眼設(shè)施或應(yīng)急噴淋裝置；

四、在實驗室內(nèi)直接使用外排式高壓蒸汽鍋滅菌等。

對存在的問題當(dāng)場均提出了整改意見，接下來我所將對存在問題的醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行復(fù)查，督促整改到位，有效預(yù)防生物安全事故發(fā)現(xiàn)。

桐鄉(xiāng)市衛(wèi)生監(jiān)督所

2011.9.20

第四篇：病原微生物實驗室簡介

病原微生物實驗室簡介

病原微生物實驗室的檢測項目和檢測方案根據(jù)臨床需要綜合設(shè)計，做到結(jié)果穩(wěn)定可靠、效率高、檢測周期短，從而為臨床診斷和治療提供及時和可靠的依據(jù)。

血液系統(tǒng)惡性疾病患者常伴免疫功能低下，尤其造血干細(xì)胞移植或長期的放化療后，患者的免疫功能更低，易繼發(fā)各種病原微生物感染，甚至機(jī)會性致病菌爆發(fā)感染，部分患者還可因感染繼發(fā)惡性淋巴細(xì)胞增殖性疾病，常常危及生命危險。

目前常用的病原微生物檢測方法有：病原微生物培養(yǎng)、免疫血清學(xué)檢測、抗原檢測和基因檢測。由于血液系統(tǒng)惡性疾病患者多免疫功能低下，產(chǎn)生抗體困難;病原微生物培養(yǎng)檢測周期長，而且受多種因素影響陽性率很低，不能滿足臨床需要。故檢測病原基因或抗原更能反應(yīng)感染的狀態(tài)。

病原微生物實驗室現(xiàn)已開展了多種血液病患者中常見的致病和機(jī)會性致病的病原微生物定量和定性檢測項目。主要應(yīng)用PCR基因擴(kuò)增檢測的方法對病原微生物進(jìn)分型鑒定，具有檢測靈敏度高、分型準(zhǔn)確、窗口期短、報告速度快的優(yōu)勢。所配備的儀器主要有AB 3500實時熒光定量PCR儀、AB 9700和AB Verity型普通PCR儀。

本實驗室的檢測項目和檢測方案根據(jù)臨床需要綜合設(shè)計，做到結(jié)果穩(wěn)定可靠、效率高、檢測周期短，從而為臨床診斷和治療提供及時和可靠的依據(jù)。

病原微生物實驗室現(xiàn)有人員5人，其中特聘教授1人、碩士學(xué)歷2人、本科1人，?？?人。

項目介紹：

1。病原微生物PCR定性檢測項目：

1)人類皰疹病毒篩查(HHV1-HHV8)

同時篩查8種人類皰疹病毒

2)出血性膀胱炎病毒(BKV、JCV、SV40)

3)人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒1型(HTLV1-RNA)

4)真菌PCR

2。病原微生物PCR定量檢測項目：

人類皰疹病毒

1)單純皰疹病毒(HSV-

1、HSV-2)

2)水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)

3)EB病毒(EBV)

4)巨細(xì)胞病毒(CMV)

5)人類皰疹病毒6型(HHV-6)

6)人類皰疹病毒7型(HHV-7)

7)人類皰疹病毒8型(HHV-8)

呼吸道病毒：

1)呼吸道合胞病毒

2)腺病毒(ADV)

腸道病毒：

1)柯薩奇病毒

2)輪狀病毒

其他特殊病原微生物：

1)微小病毒B19

2)結(jié)核桿菌 3)卡氏肺囊蟲 4)支原體

3。其它病原微生物檢測項目： 1)內(nèi)毒素

2)真菌1，3-β-D葡聚糖檢測(G試驗)

第五篇：莆田市動物病原微生物實驗室生物安全管理責(zé)任書

莆田市秀嶼區(qū)動物病原微生物

實驗室生物安全管理責(zé)任書

根據(jù)《動物防疫法》、《病原微生物實驗室生物安全管理條例》、《獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范》、《動物病原微生物菌（毒）種保藏管理辦法》和《福建省農(nóng)業(yè)廳辦公室轉(zhuǎn)發(fā)農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于做好兩會期間動物病原微生物實驗室生物安全管理工作的通知》（閩農(nóng)廳辦

[2011]48號）等相關(guān)法律法規(guī)、規(guī)章規(guī)定要求，特簽訂本責(zé)任書。

一、乙方應(yīng)制定動物病原微生物實驗室生物安全管理責(zé)任制和責(zé)任追究制，明確本部門是生物安全第一責(zé)任人，落實獸醫(yī)實驗室責(zé)任領(lǐng)導(dǎo)和具體責(zé)任人，并接受當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)行政主管部門的監(jiān)督檢查。

二、乙方應(yīng)健全和完善動物病原微生物實驗室生物安全應(yīng)急處置機(jī)制和安全應(yīng)急預(yù)案，確保應(yīng)急處置有力、有序、有效。

三、乙方應(yīng)加強(qiáng)動物病原微生物實驗室內(nèi)部管理，建立健全動物病原微生物菌（毒）種保管、病原分離、實驗室操作等生物安全管理的規(guī)章制度、技術(shù)規(guī)范以及操作規(guī)程，建立健全消毒處理、自身防護(hù)和安全衛(wèi)生等安全保障制度，并確保各項工作落到實處。

四、乙方應(yīng)加強(qiáng)實驗室人員的學(xué)習(xí)培訓(xùn)，特別是要加強(qiáng)對農(nóng)業(yè)部《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》、《實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）》等規(guī)范的學(xué)習(xí)培訓(xùn)，熟練掌握相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)和要求。同時，要進(jìn)一步加強(qiáng)對從事實驗室管理和技術(shù)人員的技能培訓(xùn)、考核工作，努力提高實驗室工作人員的專業(yè)技能和

實踐操作水平，有效防范實驗室生物安全事故的發(fā)生。

五、乙方應(yīng)嚴(yán)格遵守《病原微生物實驗室生物安全管理條例》，嚴(yán)禁未經(jīng)審批違法從事高致病性動物病原微生物或疑似高致病性動物病原微生物實驗活動的，或擅自改變病原微生物檢測項目范圍。

六、如違反有關(guān)病原微生物實驗室生物安全管理的法律、法規(guī)、規(guī)章、標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范、規(guī)范性文件的規(guī)定，由此產(chǎn)生的法律責(zé)任由乙方負(fù)責(zé)。

七、本責(zé)任書一式貳份，雙方各執(zhí)一份。

甲方：莆田市秀嶼區(qū)農(nóng)業(yè)局乙方：莆田市秀嶼區(qū)動物疫病

預(yù)防控制中心