第一篇：胰腺癌基因診斷與基因治療研究進(jìn)展

胰腺癌基因診斷與基因治療研究進(jìn)展

胰腺癌是消化系統(tǒng)較常見的惡性腫瘤，起病隱匿，惡性程度高?，F(xiàn)有的影像學(xué)檢查及血清學(xué)檢查尚不能達(dá)到早期診斷；其治療以胰十二指腸切除術(shù)為基礎(chǔ)，輔以放療和化療，預(yù)后較差。平均5年生存率低于5％，被稱為“癌中之王”[1]。

近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的巨大進(jìn)步發(fā)展起來的基因檢測技術(shù)為胰腺癌的早期診斷提供了方向，為胰腺癌的有效治療提供了新的途徑。本文就胰腺癌基因診斷和基因治療的研究進(jìn)展作簡要綜述。

一、基因診斷 Ⅰ.胰腺腺癌

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是多個(gè)基因異常變化積累的結(jié)果。許多原癌基因、抑癌基因以及DNA錯(cuò)位修復(fù)基因等，都和胰腺癌有著不可分割的關(guān)系。1.原癌基因 1.1 K-ras 與胰腺癌有關(guān)的ras基因家族主要是K-ras和N-ras。其中以K-ras的點(diǎn)突變研究的最為深入和廣泛，可見于90％胰腺癌，明顯高于其他癌[2]。但由于K-ras突變也見于一些良性疾病，臨床上可作為篩選指標(biāo)。某些研究發(fā)現(xiàn)，用外周血漿檢測K-ras突變還可用于評估腫瘤大小、可切除性以及預(yù)后[3]，因此外周血漿檢測K-ras基因突變有望成為快速準(zhǔn)確診斷胰腺癌的方法。1.2 C-erbB－2（Her2/neu）

C-erbB－2基因編碼具酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白Her2/neu，表皮生長因子受體家族成員之一。有結(jié)果顯示近70％浸潤性胰腺導(dǎo)管癌過度表達(dá)Her2/ neu。正常胰腺導(dǎo)管上皮不表達(dá)Her2/neu，82%的平坦型病變導(dǎo)管，86%的乳頭狀病變導(dǎo)管，92%的有異型的乳頭狀病變導(dǎo)管上皮表達(dá)Her2/neu[4]。胰腺癌中Her2/neu的強(qiáng)表達(dá)可能與腫瘤早期增殖有關(guān)，為早期診斷和治療提供了線索。1.3 Bcl-2 Bcl-2的過度表達(dá)見于約50%的胰腺癌，可阻止胰腺癌細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤形成。但無轉(zhuǎn)移的高分化胰腺癌的Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯高于有轉(zhuǎn)移的低分化胰腺癌[5]。1.4 p8 40％以上的胰腺癌過表達(dá)p8基因產(chǎn)物，與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與預(yù)后無關(guān)[

6、7]。

其他如Myc、C-fos、c-raf、HLA-DR-α和C-met基因都與胰腺癌有較大的關(guān)聯(lián)。2.抑癌基因 2.1 p16 P16能抑制細(xì)胞周期蛋白D1－細(xì)胞周期依賴激酶CDK4/6，使細(xì)胞穩(wěn)定的處于G1期，從而破壞整個(gè)通路。p16基因失活使活化轉(zhuǎn)錄因子釋放，促進(jìn)了細(xì)胞周期。約90％胰腺癌有p16基因異常[8]。據(jù)美國俄亥俄州大學(xué)研究，化學(xué)誘導(dǎo)的大鼠胰腺癌中90.3％與p16失活有關(guān) [8]。檢測p16基因突變可為胰腺癌早期診斷提供依據(jù)。2.2 p53

活化的p53上調(diào)p21，作用于細(xì)胞周期蛋白E/CDK2而避免細(xì)胞周期停滯于G1/S期。P53作用的另一個(gè)靶基因是其負(fù)調(diào)控因子MDM2。另外P53蛋白還能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻止有癌變傾向的細(xì)胞產(chǎn)生[8]。約40％－75％的胰腺癌腫存在p53基因的異常。

血清中ｐ53蛋白濃度可用于胰腺癌的診斷及判斷腫瘤的進(jìn)展。2.3 DPC4 進(jìn)化上非常保守的Smad基因家族。產(chǎn)物蛋白是TGF-β受體信號傳導(dǎo)途徑中的必需物質(zhì)。DPC4的丟失可使細(xì)胞過度生長。臨床上發(fā)現(xiàn)近50％胰腺癌都存在DPC4的缺失。DPC4失活被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生中的晚期事件。

其他如LKB1/STK11[9]、APC和MCC[10]、DCC[11]、MPP[12]、TGF-β超家族[13]、三聯(lián)脆組基因FHIT[14]等也有資料表明其與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展具相關(guān)性。3.基因組維持基因 3.1端粒酶

端粒酶是細(xì)胞核內(nèi)的核糖核蛋白酶，具有逆轉(zhuǎn)錄酶的活性。人正常體細(xì)胞端粒酶活性為陰性,而90％左右惡性腫瘤細(xì)胞端粒酶呈活化狀態(tài)。Hiyama等報(bào)道95％的胰腺癌組織中端粒酶活性呈陽性,而11例良性胰腺腫瘤均呈陰性[10]。因此端粒酶可作為胰腺癌診斷的基因標(biāo)記物。3.2 BRCA2 最近的研究發(fā)現(xiàn)具有BRCA2胚系突變的病人其患胰腺癌的危險(xiǎn)性明顯增加。Goggins等發(fā)現(xiàn)在41例胰腺癌中，15例存在BRCA2雜合子缺失，4例存在突變[15]。4.血管生成相關(guān)基因

近年來的腫瘤研究確立了腫瘤血管生成在腫瘤生成、發(fā)展中的地位和作用。腫瘤血管生成相關(guān)基因的檢測有助于胰腺癌預(yù)后的判斷，但作為診斷手段尤其早期診斷還需要進(jìn)一步研究。5.基因芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)是80年代發(fā)展起來的新興技術(shù)，是基因突變分析、基因測序和基因表達(dá)研究的高效手段，具有高度敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。

利用基因芯片技術(shù)可篩選出在胰腺癌中呈特征性表達(dá)的基因，作出早期準(zhǔn)確的診斷。更重要的是應(yīng)用基因工程的方法來校正這些變異基因,可達(dá)到治愈腫瘤的目的。

Ⅱ.其他類型胰腺腫瘤 1.胰腺內(nèi)分泌腫瘤

研究中發(fā)現(xiàn)胃泌素瘤和胰腺內(nèi)分泌腫瘤中MEN－1等位缺失的發(fā)生率58.4％，突變的發(fā)生率23.2％。胃泌素瘤的基因半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)與HER-2/neu相關(guān)。胰腺無功能內(nèi)分泌腫瘤中，大部分有p16的失活，55％的無功能性胰腺內(nèi)分泌腫瘤有DPC4/Smad4的異常。

2.導(dǎo)管內(nèi)乳頭粘液瘤(IPMT)：

65％IPMT有K-ras突變（浸潤性腺癌90％突變），p16和p53雜合子的缺失在浸潤性IPMT中明顯高于非浸潤性IPMT[16]。

二、基因治療 Ⅰ.基因治療策略

1.恢復(fù)抑癌基因和抑制癌基因

重新引入野生型抑癌基因拷貝修復(fù)突變基因的功能，來抑制腫瘤生長或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡，這在高突變率的個(gè)體中，并沒有很大意義。關(guān)鍵是干擾腫瘤細(xì)胞持續(xù)性生長的途徑。胰腺癌中主要用反義核酸和核酶技術(shù)直接破壞癌基因的mRNA的轉(zhuǎn)錄。如將含K-ras反義核苷酸的脂質(zhì)體質(zhì)粒載體經(jīng)腹腔注射胰腺癌小鼠模型，獲得明顯的治療效果[17]。2.酶解藥物前體療法

將非哺乳動(dòng)物某些酶通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入腫瘤部位，再給予無毒性前體藥物治療，其經(jīng)酶解代謝后的毒性產(chǎn)物在局部具有高濃度，能將腫瘤細(xì)胞殺死，而全身反應(yīng)輕微。

在酶解藥物前體治療研究中還發(fā)現(xiàn)存在“旁觀者效應(yīng)”，利用已轉(zhuǎn)導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺死未發(fā)生基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞，或抑制其生長。3.免疫療法

腫瘤的免疫治療就是誘導(dǎo)及增強(qiáng)抗腫瘤的免疫反應(yīng)。主要包括應(yīng)用腫瘤疫苗、轉(zhuǎn)染某些細(xì)胞因子基因和利用抗體等對腫瘤進(jìn)行治療。以腫瘤疫苗研究較為深入。Schnurr等將胰腺癌細(xì)胞提取物載入樹突細(xì)胞制備抗腫瘤疫苗，避免了單一抗原的局限性，結(jié)果表明此種疫苗可以誘導(dǎo)較強(qiáng)的Ｔ細(xì)胞抗腫瘤免疫反應(yīng)[18]。4.抗腫瘤血管生成

Kuo等構(gòu)建的表達(dá)vEGF受體Flk1的病毒載體，通過離體和在體轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞，抑制胰腺癌生長[19]。Ⅱ.基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)

腫瘤基因治療受基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體的限制，包括載體的有效濃度和轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物有效性。目前使用的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法有三種：病毒、非病毒和物理方法。常用的病毒載體有逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒；非病毒載體有裸DNA技術(shù)和脂質(zhì)－DNA復(fù)合物；物理方法主要有細(xì)針注射和電穿孔[20]。病毒載體仍然是目前最有效的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法。

目前已有用于胰腺腫瘤細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，如單克隆鼠白血病病毒（MoMLV）[21]。腺相關(guān)病毒（AAV）載體也已經(jīng)用于胰腺癌細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)[22]。

雜交載體轉(zhuǎn)導(dǎo)是基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。它既保留了原病毒載體的特性，又能解決滴度和免疫應(yīng)答的問題。Ⅲ.胰腺癌基因治療的靶基因 1.K-ras 消除優(yōu)勢途徑：Kuzumaki等從原癌基因v-H-ras得到一種突變N116Y，通過脂質(zhì)體將其導(dǎo)入8種具有K-ras突變的人胰腺癌細(xì)胞株后，發(fā)現(xiàn)可抑制細(xì)胞株的生長，而對正常的細(xì)胞則不起作用[23]。

免疫治療途徑：胰腺腫瘤肽可放大抗原遞呈效應(yīng)，細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL）對突變 4 的ras肽反應(yīng)，能暫時(shí)將胰腺癌細(xì)胞株殺死 [24]。

反義RNA及核酶途徑：在裸鼠模型中轉(zhuǎn)導(dǎo)含反義RNA的質(zhì)粒，能抑制胰腺腫瘤的生長[17]。另外的研究表明，用腺病毒系統(tǒng)轉(zhuǎn)導(dǎo)針對K-ras第12密碼子突變的核酶，發(fā)現(xiàn)突變的K-ras的mRNA和Bcl-2蛋白明顯減少，并且能抑制腫瘤生長和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[25]。2.P16 直接在胰腺腫瘤部位或通過門靜脈注射含p16的腺病毒載體（Adp16），在切除腫瘤后能抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移[26]。3.P53 腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)野生型p53至胰腺腫瘤細(xì)胞，在體內(nèi)外均能抑制腫瘤細(xì)胞的生長。在體內(nèi)研究中，同時(shí)轉(zhuǎn)染p53和p16能提高細(xì)胞凋亡的程度。所以至少在胰腺癌模型中，可以得出p53和p16在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡上具有協(xié)同作用。

最近的研究中發(fā)現(xiàn)88％以上的胰腺癌與CaSm（腫瘤相關(guān)類sm原癌基因）有關(guān)，特別是與腫瘤的惡性表現(xiàn)聯(lián)系緊密。腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)CaSm至胰腺腫瘤后，在體內(nèi)外能抑制腫瘤細(xì)胞生長[27]。

三、結(jié)語

綜上所述有關(guān)胰腺癌基因?qū)W方面的研究進(jìn)展很快, 雖然目前尚未發(fā)現(xiàn)特異表達(dá)于胰腺癌組織的基因，但利用分子生物學(xué)技術(shù)檢測這些基因改變,有希望成為一種新的早期診斷方法。

胰腺癌的基因治療取得了可喜的進(jìn)展。盡管目前采用的任何一種基因治療措施都不盡完善,還存在許多問題,腫瘤的基因治療已經(jīng)顯示了良好的發(fā)展前景,經(jīng)過研究者們的不懈努力,通過基因治療治愈胰腺癌有望成為本世紀(jì)新的有效治療手段。

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第二篇：2013博士研究生中醫(yī)診斷研究進(jìn)展學(xué)術(shù)討論題

2013博士研究生中醫(yī)診斷研究進(jìn)展學(xué)術(shù)討論題

2013-09-05 16:56

1．你如何理解“司揣內(nèi)外”在中醫(yī)診斷方面的意義與運(yùn)用，對中醫(yī)的學(xué)術(shù)研究有何啟示，如何看待經(jīng)典著作的現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義？

2．中醫(yī)對健康狀態(tài)判定方面有何特點(diǎn)，與西醫(yī)體檢相比有何優(yōu)勢，如何開展中醫(yī)健康檢查與中醫(yī)疾病預(yù)警，對此有何具體設(shè)想？

3．中醫(yī)有哪些辨證思維模式？各有何特點(diǎn)？是否可以建立統(tǒng)一的中醫(yī)辨證系統(tǒng)，請?zhí)岢稣磧煞矫娴睦碛刹⒄務(wù)勀愕恼J(rèn)識。

4．如何建立中醫(yī)特有的療效判定標(biāo)準(zhǔn)，這種療效判定標(biāo)準(zhǔn)是否存在客觀指標(biāo)，目前廣泛應(yīng)用的量表法有何長處與不足。應(yīng)從哪些方面入手研究？

5．目前中醫(yī)診查儀器的發(fā)展現(xiàn)況如何，你認(rèn)為影響中醫(yī)診療儀器臨床應(yīng)用的主要障礙是什么，應(yīng)如何取得突破？

6．中醫(yī)證候的診斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)如何確定，有無客觀化的具體指標(biāo)，舌診脈診的表現(xiàn)是否可作為金標(biāo)準(zhǔn)，談?wù)勀愕目捶ā?/p>

7．有人提出中醫(yī)基本病機(jī)的核心是不通、不榮與不平，你認(rèn)為這種提法是否可行，是否可以以此為核心研究中醫(yī)辨證體系？詳細(xì)談?wù)勀愕睦碛膳c設(shè)想。

8．你如何認(rèn)識中醫(yī)辨病與辨證的關(guān)系，中醫(yī)辨病在臨床上有何指導(dǎo)意義。針灸與藥物治療在辨病辨證方面有何區(qū)別。

9．中醫(yī)診斷客觀化研究方面存在哪些問題，有哪些誤區(qū)影響中醫(yī)的發(fā)展，中醫(yī)診斷數(shù)字化量化診斷有無必要與可能，如有應(yīng)如何努力實(shí)現(xiàn)。

要求：本次課將按討論方式進(jìn)行，請博士研究生作好選題、搜集資料、攥寫報(bào)告，可制作PPT，發(fā)言時(shí)間一般不超過15分鐘、做好接受質(zhì)詢的準(zhǔn)備，每人選擇一題，報(bào)班長處。上課按所報(bào)題目參加討論的人數(shù)多少為序，報(bào)的人多的題目優(yōu)先討論，依次進(jìn)行。

第三篇：豬圓環(huán)?、蛐图拌b別診斷技術(shù)研究進(jìn)展

豬圓環(huán)病Ⅱ型及鑒別診斷技術(shù)研究進(jìn)展

摘要：豬圓環(huán)病毒(porcine circovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科，該病毒有2個(gè)血清型：PCV1和PCV2。PCV1廣泛存在于豬體內(nèi)，無致病性；PCV2能直接或間接導(dǎo)致一系列豬的綜合性疾病。如豬繁殖與呼吸道綜合征病毒(PRRSV)，斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)，豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和成年豬皮炎腎病綜合征(PDNS)等，對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重。為了深入了解PCV2致病因素，建立快速鑒別診斷技術(shù)，綜述了PCV2的豬圓環(huán)病毒病及其相關(guān)致病因素和目前應(yīng)用診斷技術(shù)研究情況。為研究探討PCV2的發(fā)生和診斷提供借鑒。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)?、蛐停辉\斷技術(shù)；致病基因

豬圓環(huán)病毒(PCV)是獸醫(yī)學(xué)上已知?jiǎng)游锊《局凶钚〉牟《荆鶕?jù)PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，將其分為PCV1和PCV2兩個(gè)型，其中PCV1無致病性[1]，廣泛存在于豬體內(nèi)及豬源傳代細(xì)胞系。PCV2則具有致病性，在臨床上主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征。PCV對酸性環(huán)境(pH3)、氯仿或者高溫(56℃和70℃)有抵抗作用。PCV在原代胎豬腎細(xì)胞、恒河猴腎細(xì)胞、BHK-21細(xì)胞上不生長，可在PK-15細(xì)胞中生長，但不引起細(xì)胞病變，且需將PCV盲傳多代才能使病毒有效增殖。在接種PCV的PK-15細(xì)胞培養(yǎng)物中加入d-氨基葡萄糖，可促進(jìn)PCV復(fù)制，使得感染PCV的細(xì)胞數(shù)量提高30％。感染PCV的細(xì)胞內(nèi)含有許多胞漿內(nèi)包涵體，少數(shù)感染細(xì)胞內(nèi)含有核內(nèi)包涵體。

PCV2屬圓環(huán)病毒科(Circoviridae)，是最小的無囊膜單鏈環(huán)狀DNA病毒，其單鏈環(huán)狀DNA染色質(zhì)由1759個(gè)堿基組成，有11個(gè)開放閱讀框架，編碼11種蛋白質(zhì)，豬圓環(huán)病毒的抵抗力較強(qiáng)，不易被滅活，在外界環(huán)境中可長時(shí)間存活。由豬圓環(huán)病毒(PCV2)引起的豬圓環(huán)病，臨床表現(xiàn)為體質(zhì)下降、消瘦、皮膚發(fā)白、腹瀉、呼吸困難和黃疸。

PCV2與大多數(shù)典型的豬病原傳播不同，PCV2既可水平傳播，也可垂直傳播。Shibata等在近期研究中隨機(jī)的發(fā)現(xiàn)，臨床健康的豬體內(nèi)含有PCV2[2]，說明PCV2可潛伏于健康豬群中，更出乎意料的是，科研工作者在懷孕母豬和哺乳期母豬的乳汁中檢測出PCV2[3] 1 豬圓環(huán)病毒病及其相關(guān)性致病因素

1.1 相關(guān)的致病因子

PCV2的致病因子主要與免疫刺激、宿主的敏感性和PCV2分離株有關(guān)[4]。研究表明，免疫刺激可以激發(fā)PCV2從感染向疾病方向發(fā)展而出現(xiàn)PMWS的機(jī)能障礙特征，這可能是由PRRSV或豬細(xì)小病毒(PPV)激活了巨噬細(xì)胞，從而促進(jìn)了PCV2的增殖。

在宿主敏感性研究中發(fā)現(xiàn)，長白豬較杜洛克和大白豬更容易出現(xiàn)與PCV2相關(guān)的疾病爆發(fā)，而皮特蘭仔豬對與PCV2相關(guān)的疾病敏感性較低，且公豬的遺傳品系對PCV2相關(guān)疾病發(fā)病情況有顯著的影響。最新的證據(jù)則表明[5]，PCV2分離株在毒力上有一定的差異，但這種微小的分歧可能與病毒的地域來源有關(guān)，而與分離株的病毒毒力無關(guān)。

1.2 PCV2的協(xié)同感染疾病

PCV2的主要協(xié)同感染疾病在最初研究中傾向于豬肺炎支原體、PPV、PRRSV，可是隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)了如豬皮炎與腎炎綜合征、繁殖障礙、母豬流產(chǎn)和死亡綜合征和PMWS等很多疾病可能都會(huì)協(xié)同PCV2感染。

充分的證據(jù)表明，由于PCV2和PPV在豬體內(nèi)具有類似的靶細(xì)胞，而PPV提高免疫系統(tǒng)的功能導(dǎo)致了更嚴(yán)重的疾病，PCV2和PPV的雙重感染會(huì)引發(fā)比單個(gè)感染PCV2更嚴(yán)重的臨床癥狀和病變，在發(fā)生PCV2相關(guān)疾病PMWA的豬群中，PRRSV居最常見的協(xié)同感染因子名單之首，其檢出率高達(dá)52％[6]。豬呼吸道綜合征(PRDC)、增生和壞死性肺炎(PNP)、豬皮炎與腎炎綜合征(PDNS)是發(fā)生在斷奶、育成豬及成年豬群中的疾病，被認(rèn)為是由多種病因共同感染所致，由于PCV2在這些共同感染疾病中普遍存在，其在這些疾病的共同感染中扮演了何種角色已普遍引起了人們的關(guān)注[7-8]，但PCV2與PRRS和PMWS直接相關(guān)的證據(jù)[9-10]，愈來愈明顯。致病基因

PCV的基因組為單股、負(fù)鏈、環(huán)狀DNA，病毒基因組以滾環(huán)模式(rolling circle model)進(jìn)行復(fù)制。PCV2的復(fù)制起始區(qū)位于一個(gè)324 bp的片段上，其包含1個(gè)莖-環(huán)結(jié)構(gòu)、保守的九核苷酸基序(AAGTATTAC)、3個(gè)六核苷酸重復(fù)序列(CGGCAG)和2個(gè)五核苷酸重復(fù)序列，Rep和Rep’的共表達(dá)是起始PCV2的復(fù)制所必須的，對PCV2的保守九核苷酸基序進(jìn)行突變，從而影響病毒的復(fù)制過程，Rep和Rep’蛋白協(xié)同定位于同一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，二者既可以形成同源復(fù)合物，也可以形成異源復(fù)合物。

據(jù)研究報(bào)道認(rèn)為，豬圓環(huán)病的致病基因可能與ORFl-6這6個(gè)編碼框編碼的蛋白有關(guān)，其中ORFl為Rep基因，編碼2種蛋白，負(fù)責(zé)PCV2的復(fù)制；ORF2為Cap基因，編碼Cap蛋白，是PCV2病毒的唯一結(jié)構(gòu)蛋白，可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體；ORF3編碼的一種蛋白可以誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡[11-12]。

研究表明，ORF3誘導(dǎo)TNF-α達(dá)到較高水平可能與并發(fā)PPV和PMWS直接相關(guān)，ORF5誘導(dǎo)的IL-6可能與PDNS有關(guān)(PDNS也是IL-6明顯增強(qiáng))[13]，OFFR2基因表達(dá)的IL-10可能是感染豬逐漸發(fā)展成更嚴(yán)重的PMWS，而ORFl表達(dá)的Thl(IFN-γ)和Th2(IL-13)PMWS和PDNS有某種聯(lián)系[14]。鑒別診斷技術(shù)

3.1 PCR方法

復(fù)合PCR技術(shù)具有單聯(lián)PCR技術(shù)同樣的優(yōu)點(diǎn)，又能一次反應(yīng)同時(shí)方便快捷的檢測鑒別多種不同病原體。夏平安教授[15]等針對可引起豬免疫抑制病的重要病原PRRSV和PCV2建立了一種復(fù)合PCR檢測方法，根據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)美洲型標(biāo)準(zhǔn)株部分開放閱讀框保守序列和PCV2基因保守序列，設(shè)計(jì)合成了2對特異引物，最終建立了可同時(shí)檢測PRRSV和PCV2的復(fù)合PCR診斷方法。

馮志新等研究設(shè)計(jì)合成了一套引物和TaqMan探針，特異性擴(kuò)增PCV2-ORF2基因，通過反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了快速定量檢測PCV2的實(shí)時(shí)PCR方法。該方法具有較好的特異性和重復(fù)性，對PCV2 DNA檢測的下限為1拷貝／uL，敏感性比常規(guī)PCR高106倍[16]。

Chae等報(bào)道了一種半槽式多重PCR，成功進(jìn)行PCV1、PCV2和PPV的鑒別診斷，在98個(gè)精液樣品中發(fā)現(xiàn)，有20個(gè)陽性的PCV和42個(gè)陽性PPV，與半槽式PCR診斷結(jié)果相同。當(dāng)PCV或PPV在人為污染的精液樣本中存在時(shí)，運(yùn)用該技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)：PCV和PPVDNA主要存在精

液和一小部分無精子中。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該方法具有較高的敏感性和特異性，可以很好地區(qū)別PCV或PPV在豬上的感染。

Kathleen運(yùn)用實(shí)時(shí)PCR檢測Rep基因(ORF1)在自然感染的豬群和實(shí)驗(yàn)室人工感染的豬群的肺、淋巴結(jié)等組織，可以檢測到2.2×103～2．2×1010／mLPCV2拷貝數(shù)。同時(shí)，他們檢測到在所有被PMWS感染的豬群中都存在Rep基因，即證明了存在PCV2的混合感染的可能性。

3.2 ELISA和ELISA試劑盒

林彥星等應(yīng)用原核表達(dá)的PCV2衣殼(Cap)蛋白作為診斷抗原，初步建立了一種檢測PCV2抗體的間接ELISA方法[17]。實(shí)驗(yàn)表明該方法具有較高的敏感性和特異性，適于大規(guī)模檢測PCV2血清抗體的流行病學(xué)調(diào)查。秦承學(xué)等將PCV2 ORF1和ORF2基因分別插入桿狀病毒和大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，用親和層析方法提純獲得重組衣殼(Cap)與復(fù)制(Rep)蛋白，用細(xì)胞融合技術(shù)獲得2株Cap和Rep蛋白單克隆抗體，以重組Cap和Rep蛋白作為抗原，通過反應(yīng)重要條件的優(yōu)化，建立了間接ELISA方法，有較好的特異性和重復(fù)性，可用于PCV2抗體檢測和疫苗免疫抗體鑒別診斷[18]。

研究人員研究對3種抗免疫球蛋白G的ELISA試劑盒檢測抗PCV2a和PCV2b抗體，同時(shí)也檢測了抗PCV2和PCV1抗體，55頭3周齡的小豬隨機(jī)分成7組，其中7頭為陰性對照，8頭接種PCV2a，8頭接種PCV2b，8頭接種PCV1，其余的24頭接種不同廠家的3種疫苗，收集1周的血液樣本，分別用3種試劑盒進(jìn)行檢測，反應(yīng)數(shù)值都大于0.94，檢測發(fā)現(xiàn)PCV2a和b抗體沒有根本區(qū)別，沒有檢測出PCV1抗體，但1種試劑盒可鑒別出經(jīng)疫苗B接種的豬體內(nèi)的PCV2a或PCV2b抗體[19]。

3.3 競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(C-ELISA)

Walker以分離的PCV2細(xì)胞培養(yǎng)物作為抗原，以PCV2特異性單克隆抗體作為競爭性反應(yīng)物，C-ELISA敏感性和特異性達(dá)到99.58％和97.14％。McNelilly等建立了PCV特異性抗原捕獲ELISA，其與定量病毒分離，可以區(qū)別PCV的臨床和亞臨床感染。

3.4 間接免疫熒光試驗(yàn)

間接免疫熒光技術(shù)常用于豬圓環(huán)病毒感染的血清學(xué)普查，其特點(diǎn)是快速、特異、敏感，是目前診斷PCV2常用的血清學(xué)方法。在用于抗體檢測時(shí)，可將PCV2按種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的PK-15細(xì)胞上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，經(jīng)丙酮固定干燥后即可。此方法不僅可以用于檢測抗體，而且可以用已知PCV特異性抗體檢測抗原，主要用于PCV的分離鑒定及豬源細(xì)胞PCV污染情況的普查，為疾病診斷和凈化豬源細(xì)胞提供了有效手段。

3.5 免疫金標(biāo)檢測

浙江大學(xué)發(fā)明公開了一種豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)抗原或抗體檢測試紙條。檢測試紙條既可以豬圓環(huán)病毒2型抗原也可以檢測血清中的PCV抗體，檢測試劑條操作簡單，易于大范圍推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。

3.6 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一種新的具有明顯優(yōu)勢的擴(kuò)增技術(shù)，能夠在63℃～65℃等溫條件下擴(kuò)增特異的DNA序列，在30～60min可以得到肉眼可見的結(jié)果，該技術(shù)在禽流感的快速診斷中已成功運(yùn)用。據(jù)研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析表明，此技術(shù)的敏感性高于PCR，同時(shí)，在檢測PCV1，PPV，PRV時(shí)無交叉反應(yīng)，特異性較高，能夠完成對PCV2的快速檢測和定性分析，為PCV2的診斷提供了一種快速敏感的檢測方法。

3.7 基因芯片技術(shù)

基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的，工作原理是應(yīng)用已知核酸序列作為探針與互補(bǔ)的靶核苷酸序列雜交，通過隨后的信號檢測進(jìn)行定性與定量分析?；蛐酒窃谝晃⑿〉幕?硅片、玻片、塑料片等)表面集成了大量的分子識別探針，能夠在同一時(shí)間內(nèi)平行分析成千上萬的基因，進(jìn)行大信息量的篩選與檢測分析?；蛐酒夹g(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于禽流感和口蹄疫等重大疾病的快速診斷及分型和定型，但在PCV2混合感染的相關(guān)疾病的快速診斷和鑒定上還沒見報(bào)道?？梢灶A(yù)見，在不久的未來可能會(huì)出現(xiàn)基因芯片技術(shù)在PCV2引起的相關(guān)疾病上的應(yīng)用。

3.8 原位雜交(ISH)技術(shù)

ISH具有高度敏感性，在國內(nèi)外已經(jīng)建立了多種方法。應(yīng)用ISH既可以對PCV1和PCV2進(jìn)行分型，又可以檢測PCV與其他病毒的混合感染。劉方娜等根據(jù)GenBank中已發(fā)表的豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)基因序列，在ORF2內(nèi)設(shè)計(jì)l對特異性引物，利用PCR反應(yīng)擴(kuò)增出371 bp的核酸片段，回收并純化PCR產(chǎn)物，用地高辛標(biāo)記，建立了地高辛標(biāo)記核酸探針診斷PCV2的方法[20]。該探針與8個(gè)PCV2重組菌的核酸抽提物均能發(fā)生特異性雜交，而與對照組豬圓環(huán)病毒I型(PCVI)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬偽狂犬病病毒(PRV)的核酸雜交均為陰性；對PCV2 DNA的最低檢測量為lOpg。結(jié)論與討論

PCV2與一系列豬的綜合感染相關(guān)，這些疾病包括PMWS，PNP，PDNS，PRDC。很顯然，這些疾病的發(fā)生與發(fā)展，至少與PCV2損毀豬的免疫系統(tǒng)有關(guān)，比如，PMWS發(fā)展是由于免疫系統(tǒng)異常和免疫抑制有關(guān)。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，PCV2在淋巴組織的淋巴細(xì)胞、組織細(xì)胞和巨細(xì)胞廣泛存在，導(dǎo)致體液免疫和細(xì)胞免疫失敗。同時(shí)，由于PCV2分離株在毒力和地理分布上相差較大，這就意味著它的病原學(xué)意義有相當(dāng)高的研究價(jià)值。

有文獻(xiàn)報(bào)道，PCV2可以感染牛，接種PCV2完全可以致死8周齡的小鼠，這是否意味感染別的動(dòng)物還需要進(jìn)行很多的調(diào)查研究。目前，PCV2的研究傾向與動(dòng)物解剖，然后進(jìn)行分型和鑒定，這明顯不利于動(dòng)物安全生產(chǎn)、疾病的控制和人類自生安全。PCR技術(shù)有存在假陽性的問題，ELISA雖然特異性和敏感性較高，但它所用時(shí)間較長，在快速診斷方面顯然不足，LAMP技術(shù)花費(fèi)時(shí)間較少，敏感性和特異性也較高，但他是一個(gè)相對較新的技術(shù)，還需要更多的臨床驗(yàn)證，基因芯片技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于禽流感、口蹄疫和人類重大疾病的快速診斷及分型和定型，但在PCV2診斷和鑒定上還沒見報(bào)道。如何與PCV2相關(guān)疾病的混合感染中進(jìn)行快速的分型和定型鑒定，如何加強(qiáng)傳統(tǒng)診斷技術(shù)的完善，以及加大對PCV2分子致病特性的研究力度，是科學(xué)工作者努力探索的問題；從而建立快速、敏感、準(zhǔn)確的分子診斷技術(shù)和診斷方法，定期檢測和預(yù)測即將流行的毒株，不斷提高傳統(tǒng)技術(shù)敏感度和特異性，同時(shí)不斷推廣和完善新方法、新技術(shù)，為早期、快速、特異、敏感地鑒別診斷此病毒，為有效地防控PCV2暴發(fā)與蔓延具有重大的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義，控制PCV2對全世界養(yǎng)殖業(yè)及公共衛(wèi)生構(gòu)成的巨大威脅。

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第四篇：心理咨詢與診斷

心理咨詢與診斷系統(tǒng)

1.產(chǎn)品簡介

心理咨詢與診斷系統(tǒng)（網(wǎng)絡(luò)版）是輔仁淑凡軟件為心理工作者（咨詢師、心理醫(yī)生等）量身定制的一套集心理咨詢、診斷、治療和檔案管理為一體的大型心理專業(yè)網(wǎng)絡(luò)平臺應(yīng)用系統(tǒng)。能夠提高專業(yè)人員的工作效率，快速提升咨詢師的職業(yè)化水平，同時(shí)也豐富了心理治療的實(shí)現(xiàn)途徑。

2.系統(tǒng)功能

1)心理檔案及數(shù)據(jù)管理功能；

2)標(biāo)準(zhǔn)化的問診、咨詢與治療過程；

3)提供專業(yè)的心理咨詢與治療參考資料；

4)與心理測評系統(tǒng)實(shí)時(shí)綁定。

3.適用機(jī)構(gòu)

各大綜合醫(yī)院、精神衛(wèi)生專科醫(yī)院、心理咨詢中心、學(xué)校（高校，中小學(xué)，職業(yè)技校等）心理咨詢室、個(gè)人心理診所等其他相關(guān)咨詢服務(wù)機(jī)構(gòu)等。??現(xiàn)系統(tǒng)已全面升級，與?輔仁淑凡心理健康綜合管理平臺?實(shí)現(xiàn)無縫融合，可與管理平臺合并使用，咨詢診斷后，直接進(jìn)入管理平臺進(jìn)行測評，實(shí)時(shí)生成并導(dǎo)出測試報(bào)告，使咨詢過程更加優(yōu)化完善。

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第五篇：銀杏的開發(fā)利用與研究進(jìn)展

銀杏科植物的開發(fā)利用與研究進(jìn)展 摘要：本文主要就銀杏類植物的各個(gè)部分的作用及其價(jià)值進(jìn)行綜合闡述，對其研究進(jìn)展進(jìn)行簡單說明，指明其發(fā)展趨勢, 給人們在以后的銀杏栽培及開發(fā)利用方面以啟迪。

銀杏(Ginkgo)是一種多年生木本植物.又名白果樹、公孫樹。銀杏是目前世界上珍稀裸子植物之一其生存歷史可追溯到2 億年前.樹齡達(dá)千余年, 素有‘活化石’之稱。這種古老樹種早在地質(zhì)史第四世紀(jì)冰川期就大批滅絕而僅存于中國、朝鮮半島和日本。我國大部分地區(qū)諸如江蘇、浙江、山東、廣西、貴州、河南、湖北、江西、安徽、四川等省均產(chǎn)銀杏。銀杏是一種孑遺植物。和它同門的所有其他植物都已滅絕。銀杏是現(xiàn)存種子植物中最古老的孑遺植物。變種及品種有：黃葉銀杏、塔狀銀杏、裂銀杏、垂枝銀杏、斑葉銀杏。主要分布在中國中部肥沃的砂質(zhì)土壤，陽光充足的隱蔽處。

1我國銀杏栽培發(fā)展?fàn)顩r

改革開放以來, 我國銀杏栽培發(fā)展速度突飛猛進(jìn)?，F(xiàn)在人們不再是只有走進(jìn)寺廟或名勝古跡地, 才可看到稀有的幾株老銀杏樹, 銀杏的千萬個(gè)子后代都紛紛離開寺廟, 到城市的街道旁、公園里、校園及其他庭院內(nèi)扎根落戶, 到農(nóng)村的田地時(shí)、山坡上和宅邊路旁安了家。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì), 現(xiàn)在全國銀杏栽培面積約13 萬hm2, 僅江蘇、山東兩省栽植銀杏就達(dá)2500 萬株左右(不包括正在培育的數(shù)億株苗木)。通過科學(xué)研究的深入開展和科學(xué)知識的普及, 越來越多的人對銀杏的生長發(fā)育特點(diǎn)有了一定的了解,掌握了銀杏豐產(chǎn)栽培新技術(shù)。從而打破了過去那種把銀杏說成是30年而生, 300年而興, 以及桃三杏四梨五年, 無兒不栽白果園等舊的觀念?，F(xiàn)在可以達(dá)到一年播種, 二年嫁接, 三年見花, 四年見果, 五年果實(shí)產(chǎn)量形成一定規(guī)模。若是以收獲銀杏葉作為主要栽培目的, 則見效更快。

2銀杏的價(jià)值和用途

銀杏科植物，不管是原種還是變種的價(jià)值之高, 效益之大, 用途之廣, 是一般樹種難以比擬。

2.1銀杏樹的環(huán)境價(jià)值

銀杏樹高大挺拔，葉似扇形。冠大蔭狀，具有降溫作用。葉形古雅，壽命綿長。無病蟲害，不污染環(huán)境，樹干光潔，是著名的無公害樹種、有利于銀杏的繁殖和增添風(fēng)景。適應(yīng)性強(qiáng)，銀杏對氣候土壤要求都很寬范?？篃焿m、抗火災(zāi)、抗有毒氣體。銀杏樹體高大，樹干通直，姿態(tài)優(yōu)美，春夏翠綠，深秋金黃，是理想的園林綠化、行道樹種?？捎糜趫@林綠化、行道、公路、田間林網(wǎng)、防風(fēng)林帶的理想栽培樹種。被列為中國四大長壽觀賞樹種（松、柏、槐、銀杏）。

2.2銀杏果的食用價(jià)值

銀杏果俗稱白果，它由肉質(zhì)外種皮、骨質(zhì)中種皮、膜質(zhì)內(nèi)種皮、種仁組成。白果養(yǎng)生延年，銀杏在宋代被列為皇家貢品。日本有每日食用白果的習(xí)慣。西方人圣誕節(jié)必備白果。就食用方式來看，銀杏主要有炒食、烤食、煮食、配菜、糕點(diǎn)、蜜餞、罐頭、飲料和酒類。有祛痰、止咳、潤肺、定喘等功效，但大量進(jìn)食后可引起中毒。白果中含有的白果酸、白果酚，有抑菌和殺菌作用，可用于治療呼吸道感染性疾病。白果水浸劑對各種真菌有不同程度的抑制作用，可止癢療癬。白果外種皮中所含的白果酸及白果酚等，有抗結(jié)核桿菌的作用。白果用油浸對結(jié)核桿菌有很強(qiáng)的抑制作用，用生菜油浸演的新鮮果實(shí)，對改善肺結(jié)核病所致的發(fā)熱、盜汗、咳嗽咯血、食欲不振等癥狀有一定作用。

2.3銀杏果和銀杏樹的經(jīng)濟(jì)價(jià)值

又名白果，屬于干果類，其經(jīng)濟(jì)結(jié)果年限可達(dá)數(shù)千年之久。在諸多的干果中，銀杏的經(jīng)濟(jì)價(jià)值排名第三。白果的價(jià)值主要體現(xiàn)在食用和藥用。中國白果產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的90%，銀杏葉、果是出口創(chuàng)匯的重要產(chǎn)品，尤其是防治高血壓、心臟病重要的醫(yī)藥原料，銀杏葉中提取物可以“捍衛(wèi)心臟，保護(hù)大腦”。已知其化學(xué)成分的銀杏葉化學(xué)提取物多達(dá)160余種。主要有黃酮類、萜類、酚類、生物堿、聚異戊烯、奎寧酸、亞油酸、蟒草酸、抗壞血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。白果的藥用主要體現(xiàn)在醫(yī)藥、農(nóng)藥和獸藥3個(gè)方面。銀杏的外種皮提取物對蘋果炭疽病等11種植物病菌的抑制率達(dá)88%～100%。醇提取物對絲棉金尺蠖3天內(nèi)防治率達(dá)100%，同時(shí)可防治葉螨、桃蚜、二化螟等害蟲。此外，銀杏樹干通直，木材是制樂器，家具的高級材料。銀杏木材優(yōu)質(zhì)，價(jià)格昂貴，素有“銀香木”或“銀木”之稱。銀杏木材質(zhì)具光澤、紋理直、結(jié)構(gòu)細(xì)、易加工、不翹裂、耐腐性強(qiáng)、易著漆、掘釘力小，并有特殊的藥香味，抗蛀性強(qiáng)。銀杏木除可制作雕刻匾及木魚等工藝品，也可制作成立櫥、書桌等高級家具。銀杏木具共鳴性、導(dǎo)音性和富彈性，是制作樂器的理想材料。

2.4銀杏的藝術(shù)價(jià)值

銀杏氣勢雄偉，樹干虬曲、蔥郁莊重。在中國的名山大川、古剎寺庵、無不有高大挺拔的古銀杏，它們歷盡滄桑、遙溯古今，給人以神秘莫測之感，歷代騷人墨客涉足寺院留下了許多詩文辭賦，鐫碑以書風(fēng)景之美妙，文載功德以自傲。選取姿勢優(yōu)美的銀杏，加工制成盆景，將大自然中銀杏的雄姿濃縮在盆盎之中，古特幽雅、野趣橫生，清供案頭，令人怡情怡目。

銀杏樹是著名的長壽樹種，生命力強(qiáng)，葉形奇特，易于嫁接繁殖和整形修剪，是制作盆景的優(yōu)質(zhì)材料，用銀杏樹奶制作的銀杏盆景更是一絕，具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。銀杏是中國盆景中常用的樹種，銀杏盆景干粗、枝曲、根露、造型獨(dú)特、蒼勁瀟灑、妙趣橫生，是中國盆景中的一絕。夏天遒勁蔥綠，秋季金黃可掬，給人以峻峭雄奇、華貴雅之感，近年來日益受到重視，被譽(yù)為“有生命的藝雕”。按照人們不同的欣賞要求，主要有觀實(shí)盆景、觀葉盆景和樹樁盆景幾種類型。

2.5銀杏葉的價(jià)值

銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物銀杏 的葉子。銀杏中含有豐富的黃酮類物質(zhì)。此外, 還含有銀杏內(nèi)醋、銀杏多糖等。其提取物(E G B)具有多種保健功能, 廣泛應(yīng)用于食品及化妝品。

銀杏葉中含有多種黃酮類化合物(如蕓香甙、山奈素-3-鼠李糖甙、山奈酚、槲皮素、異鼠李素等),葉蠟中含有白果醇, 秋季黃葉中還可提取銀杏素和異銀杏黃素等。就目前所知, 銀杏葉片中含有180 余種有機(jī)化合物[ 2, 4] , 這些化合物其中許多具有藥理活性。當(dāng)前人類發(fā)生多且又危害大的首要疾病是心腦血管病, 而治療心腦血管疾病的藥物的有效成分便是銀杏葉中所富含的黃酮類化合物和銀杏內(nèi)酯等。這些化合物對人體能起到擴(kuò)張血管, 軟化血管, 抑制血小板活化因子, 抑制脂質(zhì)過氧化, 清除血液中活性氧和血管壁上廢棄物等良好作用。從而可達(dá)到增加血流量, 降低血液粘稠度, 改善微循環(huán), 防止血小板凝集等方面的積極效果。因此, 對高血壓、冠心病、心絞痛、腦血栓、腦供血不足, 以及由這些疾病所引起的并發(fā)癥(如視網(wǎng)膜距離改變、老年性癡呆、頭昏、頭痛、眩暈、耳鳴、失眠、健忘等)均有極為顯著的療效。到目前為止, 用銀杏葉有效成分制成的藥物應(yīng)是防治心腦血管疾病的最佳天然藥物。近期發(fā)現(xiàn), 銀杏葉黃酮尚具有一定的抗肝損傷作用。

3研究前景

我國銀杏資源相當(dāng)豐富.其擁有量占世界總量的70% 以上，銀杏除作為藥用外.它的提取物更廣泛地用干食品、飲料、化妝品等方面。國外市場己有含銀杏葉提取物的口香糖和巧克力;口本已將銀杏葉提取物添加到紅茶、綠茶、烏龍茶中制成保健茶;香港市場已有銀杏灑、銀杏飲料等產(chǎn)品出售。另外.銀杏葉提取物加入消炎劑能有效地促進(jìn)毛發(fā)生長及改善皮膚末梢血液循環(huán).在美容、美發(fā)上均有顯著功效。目前已有以銀杏提取物為主要成分的生發(fā)劑等。一批發(fā)明專利問世。與國外相比 我國銀杏制劑的開發(fā)尚處干出口原料及粗提取物初級階段.歐洲所需銀杏葉90 % 從我國購買。因此.我們應(yīng)充分利用我國的銀杏資深改變我國出口原料及粗提取物的現(xiàn)狀.進(jìn)一步開發(fā)出有效的銀杏新藥品和保健食品、美容化妝品及飲料等其它銀杏制品。

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