第一篇：病理技術(shù)員在分子病理領(lǐng)域作用淺談范文

病理技術(shù)員在分子病理領(lǐng)域的作用 浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科 丁偉

分子病理目前可以分二大類：一類是建立在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上的（比如her2熒光原位雜交、顯色原位雜交等）檢測；另一類是建立在PCR平臺上的（比如測序、熒光定量PCR等）數(shù)據(jù)檢測；報告有二種：一種僅僅是對檢測數(shù)據(jù)進行分析（比如EGFR、K-ras等）。另一種是檢測數(shù)據(jù)用于病理診斷（比如軟組織腫瘤、淋巴瘤等腫瘤的熒光原位雜交技術(shù)或PCR技術(shù)）。

分子基因檢測的歸屬爭議很大:是在病理科做？還是在檢驗科做？藥劑科以及各種實驗室做？大家都在搶，為什么？因為大家看到了利益，看到了學(xué)科的發(fā)展。那么，病理與其他學(xué)科相比優(yōu)勢在那里：

1、樣本的評估？

2、有執(zhí)業(yè)醫(yī)生資格？很多病理醫(yī)生都這么認(rèn)為，其實這些其他學(xué)科都可能做到，他們可以通過學(xué)習(xí)培訓(xùn)，識別腫瘤細(xì)胞，懂得初級的病理診斷并不是難事，由于病理一直在強調(diào)樣本的質(zhì)量控制，檢驗人員也開始學(xué)習(xí)腫瘤診斷。而且我院檢驗的分子實驗室連病理醫(yī)師都有，很多檢驗、臨床藥理都有醫(yī)師。那么我們病理如何才能把分子檢測爭回來？

我們病理的真正優(yōu)勢是什么？我個人認(rèn)為是風(fēng)險控制！由于血液檢查每次送檢的樣本不一樣，那怕某次的結(jié)果是錯誤的，也沒有辦法溯源，檢驗人員可以告訴患者基因發(fā)生了改變：上次檢查血內(nèi)還沒有出現(xiàn)或現(xiàn)在血液內(nèi)不存在了，所以檢驗的檢查風(fēng)險很小。而病理樣本和血液樣本不一樣，病理樣本具有朔源性：患者因為治療效果不好或者其他原因到其他醫(yī)院治療時，往往會拿原來的組織到別的醫(yī)院重新進行基因檢測，如果兩次檢測結(jié)果不一致，如果兩次檢測結(jié)果不一致，患者就可以告你耽誤他的了治療。分子基因檢測任何一次的操作失誤，以及試劑種類不同、品牌不同、實驗方法不同，設(shè)備的誤差，都可能導(dǎo)致結(jié)果的不同。而檢驗與病理唯一的不同是樣本的選擇和樣本的制備（切白片）：因為病理樣本在病理科，這個工作只有在病理科才能完成。患者和檢測單位根本不清楚你給的是那塊，就是給錯了你也不知道。切白片還會引發(fā)污染：我們往往給外單位切白片時，都是在切常規(guī)切片時切的，切片臺上、毛筆都是蠟屑，展片水也不會很干凈，還有切片刀、鑷子，這些都不可能不存在污染。在常規(guī)病理切片時也經(jīng)常會有污染，大多在顯微鏡下能夠分辨出來；當(dāng)與病史不符合時會重切，才避免了誤診，但也有少量的污染因為天衣無縫，也會產(chǎn)生誤診。如果病理科不開展基因檢測（只是外送），不可能有專人負(fù)責(zé)這個工作，也不會有人去參加過專業(yè)培訓(xùn)，更不要說為別人考慮風(fēng)險意識?，F(xiàn)在基因檢測有敏感度大多在1-2%以上，很小的污染就可能影響結(jié)果。那規(guī)范的分子取樣應(yīng)該怎么做？專人負(fù)責(zé)，專人操作，專用機器：

1、切片之前（每操作一個蠟塊），必須使用消毒酒精擦拭切片機，清除殘余蠟屑。

2、用一次性棉簽代替毛筆，一次性刀片一個蠟塊一個刀口。

3、用一次性藥盒作展片工具，每個蠟塊一只。鑷子用完后也要用消毒酒精擦拭。除了試劑質(zhì)量和操作流程以外，仍會有很多無法估量的因素造成分子病理的假陽性或假陰性。隨著患者法律意識和各種醫(yī)學(xué)知識的增強，分子檢測遲早會變成燙手的山芋，回歸到病理科。這種風(fēng)險只有病理科才能控制，也是病理科的真正優(yōu)勢。作為一個病理技術(shù)員，必須要做好室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控。應(yīng)該參加衛(wèi)計委病理質(zhì)控中心PQCC和歐盟EMQN、CAP等測評機構(gòu)的室間質(zhì)評。室間質(zhì)控可以證明你用的方法是合理的、使用的試劑的合格的，操作流程是正確的。同時還應(yīng)該搞好室內(nèi)質(zhì)控：

1、建立科學(xué)的SOP文件。

2、嚴(yán)格按規(guī)范操作。

3、認(rèn)真做好陽性、陰性對照。只有這樣，才能做出穩(wěn)定、正確的結(jié)果。但這幾句話做起來不難，難的是堅持。堅持靠什么？嚴(yán)格的監(jiān)督機制和責(zé)任心。責(zé)任心是指一個人必須勇于承擔(dān)風(fēng)險，主動負(fù)責(zé)的敬業(yè)精神。但我們有關(guān)分子病理檢測規(guī)范在制定時存在一定程度上的不合理性。我們規(guī)定必須是病理執(zhí)業(yè)醫(yī)生才有資格簽發(fā)報告，如果是建立在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上需要對疾病進行診斷的，是正確的。如果是建立在PCR平臺基礎(chǔ)上僅僅是對數(shù)據(jù)的報告那就有很大的問題了：做的人、判讀的人和最終簽發(fā)報告的人常常不是同一個人。試想一下，如果一個病理科：所有的病理醫(yī)生都沒有權(quán)力發(fā)報告，只有科主任才能簽字，結(jié)果會是什么樣子？醫(yī)生們可能會有長期的責(zé)任心嗎？簽發(fā)報告給予了報告人的榮譽感、責(zé)任心，更重要的是必須承擔(dān)風(fēng)險。事實上,分子病理檢測無論是基于組織學(xué)基礎(chǔ)的（FISH）還是建立在PCR平臺上的，大多數(shù)單位都是由技術(shù)員操作，有的甚至連選擇樣本也是技術(shù)員完成的。那如果都是由技術(shù)員操作、判讀，醫(yī)生簽字，醫(yī)生其實存在很大的風(fēng)險，出了問題，由誰負(fù)責(zé)？根據(jù)PQCC測評資料，2012年EGFR檢測，通過率為68%；2013年通過率為79%。而且，這個數(shù)字存在很大的水份。由于所有參評單位的樣本都是一樣的，在一些試劑公司的操作下，有不少單位在對答案，同時還有不少單位沒有參加測評，可以這樣說，就這一個檢測項目，全國至少可能有一半以上的單位檢測結(jié)果是錯的，也就是說有很多醫(yī)生在簽發(fā)錯誤的結(jié)果，我們的患者也有不少在接受了錯誤的治療，這是一個非常嚴(yán)重的問題。誰來負(fù)責(zé)？醫(yī)生還是技術(shù)員？在中國，病理界認(rèn)為病理醫(yī)生嚴(yán)重缺少，個人認(rèn)為并不十分準(zhǔn)確。在發(fā)達(dá)國家，病理醫(yī)生與技術(shù)員的比例是1：3左右，而中國連1：1還不到，如果說中國的病理醫(yī)生缺少的話，那中國的技術(shù)員更缺少，我們的病理醫(yī)生可以把一部分工作分擔(dān)出去。比如取材：中國病理規(guī)范規(guī)定取材必須由有執(zhí)業(yè)醫(yī)生資格的病理醫(yī)生取。但美國、加拿大等發(fā)達(dá)國家，只要有醫(yī)學(xué)背景的經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)獲得資格的人員，就可以取材。比如助理醫(yī)生、專職取材員。也許有醫(yī)生會說，醫(yī)生不取材，診斷有困難。但是實際上很多會診的疑難病理切片，沒有一例是專家親自取材的，怎么就可以診斷？自己不取就不能診斷了？我們不否認(rèn)取材和看大體標(biāo)本對病理診斷的重要性，但如果樣本都按規(guī)范取，描寫的詳詳細(xì)細(xì)，診斷會有困難么？有困難時還可以再去看標(biāo)本，可以重取。目前，在一個規(guī)范的切片質(zhì)量穩(wěn)定的病理科，切片質(zhì)量問題絕大多數(shù)都是由于取材質(zhì)量差導(dǎo)致標(biāo)本固定、脫水不佳引起。我相信，專職取材員一定比現(xiàn)在的很多病理醫(yī)生取得更好！而診斷醫(yī)生，每個人都應(yīng)該配備專業(yè)秘書，從事資料查詢、整理、報告錄入等等輔助性工作，從而把醫(yī)生從雜事中解放出來。這就要求大家都有服務(wù)意識：中國人骨子里具有“奴性”，不尊重為你服務(wù)的人，也不愿意為別人服務(wù)。其實我們生活在人人為我我為人人的世界里，我們都在為別人服務(wù)，別人也在為自己服務(wù)。中國病理事業(yè)的發(fā)展需要病理人解放思想，更換理念。一直以來，我們一直在說病理如何如何不好，待遇如何如何差，錢如何如何少。病理非常缺人，沒人愿意來，惡性循環(huán)。這難道我們自己沒有責(zé)任嗎？如果連病理界精英階層都整天說病理工作不好，那新生怎么敢來，為什么要來？而且，這種聲音就象傳染病，傳遍整個病理界，新的不愿來，來的不安心，工作充滿了怨氣。病理真的那么差嗎？病理專家們賺的錢真的那么少嗎？我們除了沒有紅包，比臨床能少多少？根據(jù)不完全統(tǒng)計（根據(jù)對不少經(jīng)常參加等級醫(yī)院評審專家的了解），一般的病理科在醫(yī)院內(nèi)的收入為中上水平。而且，隨著公民法律意識的健全，各學(xué)科的發(fā)展，病理的地位正在逐漸提高，病理科條件也在不段改善，我們應(yīng)該多在領(lǐng)導(dǎo)決策階層呼吁提高病理的待遇，但在學(xué)科內(nèi)部需要更多的正面宣傳（其實病理科還是有很多優(yōu)勢，病理診斷工作可以長壽，可以防止老年癡呆，可以青春常在，沒看到我們的醫(yī)生七、八十歲了還基本上都在上班賺錢，這是其他學(xué)科沒法比的,病理醫(yī)生一輩子賺的錢也不會少。都說病理風(fēng)險大，其實全國病理醫(yī)生賠錢的真不多，根據(jù)浙江省衛(wèi)生廳統(tǒng)計，病理比檢驗、放射要低得多，形態(tài)學(xué)這東西有時很難說誰對誰錯?；乜垡埠茫t包也好，都是違法的錢，都有風(fēng)險，你要愿意冒這個風(fēng)險，晚上不怕睡不著，想貪那里都有辦法），增加病理的凝聚力和吸引力，這樣，這個學(xué)科發(fā)展才有希望。

對于不用于診斷的分子病理檢測，其性質(zhì)是檢測而不是診斷，我們只是對數(shù)據(jù)進行分析，其報告只能叫分子檢測報告而不能叫分子診斷報告。從法律上講，技術(shù)員有權(quán)簽發(fā)這類檢測報告。因此，我們?nèi)魏稳?、任何機構(gòu)都無權(quán)剝奪法律給予的權(quán)力。有的醫(yī)生認(rèn)為：技術(shù)員沒有能力對檢測結(jié)果進行判讀和分析，更不可能對樣本進行樣本評估，其實是對技術(shù)員的歧視，我們只是分工不同，培養(yǎng)和培訓(xùn)的方向不同，智商相差并不多。而且我們從事分子檢測技術(shù)員大多是碩士生或博士生，他們對分子檢測結(jié)果的判讀和分析比醫(yī)生還要精通，比醫(yī)生還要準(zhǔn)確，憑什么要剝奪他們的權(quán)力？如果他們經(jīng)過診斷的培訓(xùn)，對樣本的評估并不是難事。

那么是不是所有的從事分子工作的技術(shù)員都能簽發(fā)報告？不是的！分子基因檢測是一個高風(fēng)險的行業(yè)，需要較強的專業(yè)知識和有一定的診斷基礎(chǔ)，并經(jīng)過專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，獲得培訓(xùn)證書或上崗證書的才能判讀并簽發(fā)報告。如果我們的技術(shù)員是從常規(guī)技術(shù)轉(zhuǎn)過來，沒有進行系統(tǒng)化的分子生物學(xué)學(xué)習(xí)和培訓(xùn)，沒有病理學(xué)診斷基礎(chǔ)，沒有臨床個體化診斷治療的知識，不能分析檢測過程中出現(xiàn)的問題，那么，不僅不能判讀，就是從事檢測操作，都很危險。同樣，如果我們的醫(yī)生沒有這方面的知識和培訓(xùn)，也不能簽發(fā)報告。

一個行業(yè)要想有生命力，必須賦予其使命感、自豪感和責(zé)任心。如果我們在制訂政策時，只考慮醫(yī)生的利益，而不顧技術(shù)員的利益，不懂得尊重技術(shù)員，不考慮技術(shù)員的前途和發(fā)展，那么，這個行業(yè)就不會有生命力，技術(shù)人員不會安心工作，也就沒有可靠的結(jié)果，這對中國病理事業(yè)是致命的。也許有醫(yī)生會說，只有病理醫(yī)生才能簽字是為了從檢驗科把基因檢測項目搶回來，那是一廂情愿的事，別人根本不認(rèn)可。而且，如果用犧牲技術(shù)員權(quán)益去換取所謂的檢測權(quán)，那么我們不需要，因為這不利于病理學(xué)科的健康發(fā)展。個人認(rèn)為：用于靶向藥物治療的基因檢測，在病理科最終只是過客，過不了多久，血液就可能完全代替組織，到那時，也不用爭了，全部都是檢驗科做的。因此，分子病理的出路還是在用于病理診斷的基因檢測上。

我們必須按法律辦事，如果分子病理檢測如果其數(shù)據(jù)是用于診斷的，那么診斷報告必須由醫(yī)生簽發(fā)。但如果僅僅只是對數(shù)據(jù)的分析和判讀，應(yīng)該誰判讀，誰負(fù)責(zé)，誰簽發(fā)，有責(zé)任才會有正確的結(jié)果。分子病理技術(shù)員除了做好本職工作外，還能做什么？

1、科研：與臨床結(jié)合、申報課題，書寫論文。

2、研發(fā)：研發(fā)新的探針、發(fā)現(xiàn)新的基因、新的技術(shù)新的方法等。

就目前而言，分子病理檢測的主要問題在病理科，而不在其他學(xué)科，其他學(xué)科和我們爭是我們自己不作為，我們不可能自己不做，也不讓別人做。要想讓病理立于不敗之地，必須做好自己的工作，同時與各學(xué)科進行合作。我相信，在病理醫(yī)生和技術(shù)員的共同努力下，中國的分子病理一定會規(guī)范地、迅速地發(fā)展。

第二篇：病理技術(shù)員在分子病理領(lǐng)域的作用

病理技術(shù)員在分子病理領(lǐng)域的作用

浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科丁偉

分子病理目前可以分三類：

1、建立在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上的（比如her2熒光原位雜交、顯色原位雜交等）檢測；

2、建立在PCR平臺上的（比如測序、熒光定量PCR等）數(shù)據(jù)檢測；

3、檢測數(shù)據(jù)用于病理診斷的（比如軟組織腫瘤、淋巴瘤等腫瘤的熒光原位雜交技術(shù)或PCR技術(shù)）。

分子基因檢測的歸屬爭議很大:，是在病理科做？還是在檢驗科做？藥劑科以及各種實驗室做？大家都在搶，為什么？因為大家看到了利益，看到了學(xué)科的發(fā)展。那么，病理與其他學(xué)科相比優(yōu)勢在那里：

1、樣本的評估？

2、有執(zhí)業(yè)醫(yī)生資格？很多病理醫(yī)生都這么認(rèn)為，其實這些其他學(xué)科都可能做到，檢驗有醫(yī)師、臨床藥理也有醫(yī)師，他們可以通過學(xué)習(xí)培訓(xùn)，識別腫瘤細(xì)胞，懂得初級的病理診斷并不是難事，而且我們的檢驗分子實驗室連病理醫(yī)師都有。如何爭回來？

我們病理的真正優(yōu)勢是什么？風(fēng)險意識和風(fēng)險控制！由于血液檢查每次送檢的樣本不一樣，那怕某次的結(jié)果是錯誤的，也沒有辦法溯源，檢驗人員可以告訴患者基因發(fā)生了改變：上次檢查血內(nèi)還沒有出現(xiàn)或現(xiàn)在血液內(nèi)不存在了。所以檢驗的檢查風(fēng)險很小，風(fēng)險意識不強。這種習(xí)慣性思維和工作方法運用到組織分子病理檢測時，就會出現(xiàn)危機：病理樣本和血液樣本不一樣，病理樣本具有朔源性：患者因為治療效果不好或者其他原因到其他醫(yī)院治療時，往往會拿原來的組

織到別的醫(yī)院重新進行基因檢測，如果兩次檢測結(jié)果不一致，如果兩次檢測結(jié)果不一致，患者就可以告你耽誤他的了治療。任何一次操作的失誤，設(shè)備的誤差，以及試劑種類不同、品牌不同、實驗方法不同，都可能導(dǎo)致結(jié)果的不同。這種風(fēng)險還存于樣本采取的過程（切白片）：這個過程充滿了陷阱。由于病理樣本是在病理科的，這個工作只有在病理科完成。這就有了檢測前樣本評估，我可以給你腫瘤細(xì)胞多的組織，也可以給你只有少數(shù)腫瘤大片壞死的組織。作為患者和檢測單位根本不清楚你給的是那塊，就是給錯了你也不知道。切白片還會引發(fā)污染：我們往往給外單位切白片時，都是在切常規(guī)切片時切的，切片臺上、毛筆都是蠟屑，展片水也不會很干凈，還有切片刀、鑷子，這些都不可能不存在污染。在常規(guī)病理切片時也經(jīng)常會有污染，大多在顯微鏡下能夠分辨出來；當(dāng)與病史不符合時會重切，才避免了誤診，但也有少量的污染因為天衣無縫，也會產(chǎn)生誤診。如果病理科不開展基因檢測（只是外送），不可能有專人負(fù)責(zé)這個工作，也不會有人去參加過專業(yè)培訓(xùn)，更不要說為別人考慮風(fēng)險意識?，F(xiàn)在基因檢測有敏感度大多在1-2%以上，很小的污染就可能影響結(jié)果。那規(guī)范的分子取樣應(yīng)該怎么做？專人負(fù)責(zé)，專人操作，專用機器：

1、切片之前（每操作一個蠟塊），必須使用消毒酒精擦拭切片機，清除殘余蠟屑。

2、用一次性棉簽代替毛筆，一次性刀片一個蠟塊一個刀口。

3、用一次性藥盒作展片工具，每個蠟塊一只。鑷子用完后也要用消毒酒精擦拭。除了試劑質(zhì)量和操作流程以外，仍會有很多無法估量的因素造成分子病理的假陽性或假陰性。隨著患者法律意識和各種醫(yī)學(xué)知識的增強，分子檢測遲早會變成燙手的山芋，回歸到病理科。

作為一個病理技術(shù)員，必須要做好室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控。應(yīng)該參加歐盟EMQN、CAP和衛(wèi)計委病理質(zhì)控中心PQCC的室間質(zhì)評。室間質(zhì)控可以證明你用的方法是合理的、使用的試劑的合格的，操作流程是正確的。室內(nèi)質(zhì)控：

1、建立科學(xué)的SOP文件。

2、嚴(yán)格按規(guī)范操作。

3、認(rèn)真做好陽性對照。只有這樣，才能做出穩(wěn)定、正確的結(jié)果。但這幾句話做起來不難，難的是堅持。堅持靠什么？嚴(yán)格的監(jiān)督機制和責(zé)任心?，F(xiàn)實的問題：我們以前有關(guān)分子病理檢測規(guī)范在制定時存在一定程度上的不合理性。我們規(guī)定必須是病理執(zhí)業(yè)醫(yī)生才有資格簽發(fā)報告，如果是建立在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上需要對疾病進行診斷的，是正確的。如果是建立在PCR平臺基礎(chǔ)上僅僅是對數(shù)據(jù)的報告那就有很大的問題了：做的人、判讀的人和最終簽發(fā)報告的人常常不是同一個人。試想一下，如果一個病理科：所有的病理醫(yī)生都沒有權(quán)力發(fā)報告，只有科主任才能簽字，結(jié)果會是什么樣子？簽發(fā)報告給予了報告人的榮譽感、責(zé)任心，更重要的是必須承擔(dān)風(fēng)險。事實上分子病理檢測無論是基于組織學(xué)基礎(chǔ)的（FISH）還是建立在PCR平臺上的，大多數(shù)單位都是由技術(shù)員操作，有的甚至連選擇樣本也是技術(shù)員完成的。那如果都是由技術(shù)員操作、判讀，醫(yī)生簽字，醫(yī)生其實存在很大的風(fēng)險，出了問題，由誰負(fù)責(zé)？

在中國，病理界認(rèn)為病理醫(yī)生嚴(yán)重缺少，個人認(rèn)為并不十分準(zhǔn)確。在發(fā)達(dá)國家，病理醫(yī)生與技術(shù)員的比例是1：3左右，而中國連1：1還不到，如果說中國的病理醫(yī)生缺少的話，那中國的技術(shù)員更缺少，我們的病理醫(yī)生可以把一部分工作分擔(dān)出去。比如取材：中國病理規(guī)范規(guī)定取材必須由有執(zhí)業(yè)醫(yī)生資格的病理醫(yī)生取。但美國、加拿大等發(fā)達(dá)國家，只要有醫(yī)學(xué)背景的經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)獲得資格的人員，就可以取材。比如助理醫(yī)生、專職取材員。也許有醫(yī)生會說，醫(yī)生不取材，診斷有困難。但是實際上很多會診的疑難病理切片，沒有一例是專家親自取材的，怎么就可以診斷？自己不取就不能診斷了？我們不否認(rèn)取材和看大體標(biāo)本對病理診斷的重要性，但如果樣本都按規(guī)范取，描寫的詳詳細(xì)細(xì)，診斷會有困難么？有困難時還可以再去看標(biāo)本，可以重取。目前，在一個規(guī)范的切片質(zhì)量穩(wěn)定的病理科，切片質(zhì)量問題絕大多數(shù)都是由于取材質(zhì)量差導(dǎo)致標(biāo)本固定、脫水不佳引起。我相信，專職取材員一定比現(xiàn)在的很多病理醫(yī)生取得更好！而診斷醫(yī)生，每個人都應(yīng)該配備專業(yè)秘書，從事資料查詢、整理、報告錄入等等輔助性工作，從而把醫(yī)生從雜事中解放出來。這就要求大家都有服務(wù)意識：中國人骨子里具有“奴性”，不尊重為你服務(wù)的人，也不愿意為別人服務(wù)。其實我們生活在人人為我我為人人的世界里，我們都在為別人服務(wù)，別人也在為自己服務(wù)。中國病理事業(yè)的發(fā)展需要病理人解放思想，更換理念。一直以來，我們一直在說病理如何如何不好，待遇如何如何差，錢如何如何少。病理非常缺人，剛畢業(yè)的不愿意來。惡性循環(huán)。這難道我們自己沒有責(zé)任嗎？如果連病理界精英階層都說病理工作不好，那新生怎么敢來，為什么要來？而且，這種聲音就象傳染病，傳遍整個病理界，新的不愿來，來的不安心，工作充滿了怨氣。病理真的那么差嗎？病理專家們賺的錢真的那么少嗎？我們除了沒有紅

包，比臨床能少多少？根據(jù)不完全統(tǒng)計，一般的病理科在醫(yī)院內(nèi)的收入為中上水平。而且，隨著公民法律意識的健全，各學(xué)科的發(fā)展，病理的地位正在逐漸提高，病理科條件也在不段改善，我們應(yīng)該多在領(lǐng)導(dǎo)決策階層呼吁提高病理的待遇，但在學(xué)科內(nèi)部需要更多的正面宣傳，增加病理的凝聚力和吸引力，這樣，這個學(xué)科發(fā)展才有活力。

對于不用于診斷的分子病理檢測，其性質(zhì)是檢測而不是診斷，我們只是對數(shù)據(jù)進行分析，其報告只能叫分子檢測報告而不能叫分子診斷報告。從法律上講，技術(shù)員有權(quán)簽發(fā)這類檢測報告。因此，我們?nèi)魏稳?、任何機構(gòu)都無權(quán)剝奪法律給予的權(quán)力。有的醫(yī)生認(rèn)為：技術(shù)員沒有能力對檢測結(jié)果進行判讀和分析，更不可能對樣本進行樣本評估，其實是對技術(shù)員的歧視，我們只是分工不同，培養(yǎng)和培訓(xùn)的方向不同，智商相差并不多。而且我們從事分子檢測技術(shù)員大多是碩士生或博士生，他們對分子檢測結(jié)果的判讀和分析比醫(yī)生還要精通，比醫(yī)生還要準(zhǔn)確，憑什么要剝奪他們的權(quán)力？如果他們經(jīng)過診斷的培訓(xùn)，對樣本的評估、FISH判讀都不是難事。

那么是不是所有的從事分子工作的技術(shù)員都能簽發(fā)報告？不是的！分子基因檢測是一個高風(fēng)險的行業(yè)，需要較強的專業(yè)知識和有一定的診斷基礎(chǔ)，并經(jīng)過專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，獲得培訓(xùn)證書或上崗證書的才能判讀并簽發(fā)報告。如果我們的技術(shù)員是從常規(guī)技術(shù)轉(zhuǎn)過來，沒有進行系統(tǒng)化的分子生物學(xué)學(xué)習(xí)和培訓(xùn)，沒有病理學(xué)診斷基礎(chǔ)，沒有臨床個體化診斷治療的知識，不能分析檢測過程中出現(xiàn)的問題，那么，不僅不能判讀，就是從事檢測操作，都很危險。同樣，如果我們的醫(yī)生

沒有這方面的知識和培訓(xùn)，也不能簽發(fā)報告。

一個行業(yè)要想有生命力，必須賦予其使命感、自豪感和責(zé)任心。如果我們在制訂政策時，只考慮醫(yī)生的利益，而不顧技術(shù)員的利益，不懂得尊重技術(shù)員，不考慮技術(shù)員的前途和發(fā)展，那么，這個行業(yè)就不會有生命力，也就不會安心工作，這對中國病理事業(yè)是致命的。因此，分子病理檢測如果其數(shù)據(jù)是用于診斷的，提供檢測數(shù)據(jù)可以由操作者簽發(fā)，但診斷報告必須由醫(yī)生簽發(fā)。但如果僅僅只是對數(shù)據(jù)的分析和判讀，應(yīng)該誰判讀，誰負(fù)責(zé)，誰簽發(fā)。

分子病理技術(shù)員除了做好本職工作外，還能做什么？

1、科研：與臨床結(jié)合、申報課題，書寫論文。

2、研發(fā)：研發(fā)新的探針、發(fā)現(xiàn)新的基因、新的技術(shù)新的方法等。

我相信，在病理醫(yī)生和技術(shù)員的共同努力下，中國的分子病理一定會規(guī)范地、迅速地發(fā)展，分子病理檢測也遲早會回規(guī)病理。我的想法只代表我個人的觀點和意見。請謹(jǐn)慎引用。

第三篇：病理技術(shù)員培訓(xùn)[定稿]

病理技術(shù)員培訓(xùn) 概述

?病理學(xué)是研究疾病的病因、發(fā)生機制、病理變化、結(jié)局和轉(zhuǎn)歸的一門學(xué)科。

?病理學(xué)是一門基礎(chǔ)學(xué)科，但又是聯(lián)系基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的橋梁。包括病理解剖學(xué)和病理生理學(xué)。

?病理學(xué)常用研究方法：

1.尸體解剖

2.活體組織學(xué)檢查

3.脫落細(xì)胞學(xué)檢查

4.動物實驗

5.組織和細(xì)胞培養(yǎng)

1.尸體解剖：

遺體→病理解剖、觀察→正確診斷、查明死因、解釋臨床癥狀和體征等臨床現(xiàn)象及時發(fā)現(xiàn)和確診新疾病，特別是傳染病提供第一手科研材料

2.活體組織學(xué)檢查：

局部手術(shù)、嵌取、穿刺針吸→肉眼和鏡下病理觀察→良惡性腫瘤診斷和疑難病例確診 乳腺癌：對乳房腫塊診斷不清，懷疑非實質(zhì)病變者可采取穿刺針吸小塊組織做病理檢查，方法簡單診斷可靠率高，尤其對鑒別診斷有重要價值。如通過各種方法均未取得結(jié)果而仍診斷不清，直接切取活體組織檢查。

前列腺癌：直腸指診DRE，在前列腺癌的篩選檢查中必不可少且簡單、經(jīng)濟、方便和穿刺活檢以早期發(fā)現(xiàn)前列腺癌。前列腺癌的確診必須通過病理活檢證實,經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)下前列腺穿刺活檢術(shù)操作簡單、準(zhǔn)確性高、安全、并發(fā)癥少。胃癌：

3.脫落細(xì)胞學(xué)檢查：腫瘤的普查和早期發(fā)現(xiàn)、早治療（1）宮頸癌：陰道脫落細(xì)胞檢查為早期最有效的檢查

（2）乳腺癌：乳頭溢液者，可收集液體涂片送病理查找癌細(xì)胞。（3）肺癌：反復(fù)痰中查癌細(xì)胞，獲陽性結(jié)果，有確診價值

（4）食道癌：食管拉網(wǎng)細(xì)胞學(xué)，初篩，承受度和敏感性較低，約束了其廣泛使用

（5）膀胱癌：尿脫落細(xì)胞檢查：是一種簡單易行又無創(chuàng)傷的膀胱癌檢查方法，對膀胱癌的診斷有重要價值，膀胱癌病人約85%尿脫落細(xì)胞檢查可呈陽性。

?5.動物實驗:

?6.組織和細(xì)胞培養(yǎng)：

第一節(jié) 標(biāo)本制作的常規(guī)工作 ?1.清潔工作：

工作實驗室要干凈整潔，固體廢棄物要存放于醫(yī)用垃圾袋內(nèi)，防止污染，保持水管通暢。

?2.接受標(biāo)本工作：

核對檢查申請單、送檢標(biāo)本及標(biāo)志，對于送檢的微小標(biāo)本必須認(rèn)真核對容器內(nèi)或濾紙上是否有組織及數(shù)量，容器無名字的應(yīng)立即寫上名字；檢查標(biāo)本固定液是否充足，按順序存放。?3.標(biāo)本登記工作：

將檢查后的標(biāo)本登記在登記卡，包括驗收日期和病理編號，編號寫在申請送檢單右上角，按順序排放，為取材做準(zhǔn)備。?4.標(biāo)本取材工作：

先核對再取材，取材后在按編號放置，脫水盒背面詳細(xì)記錄取材情況，并寫上日期和簽上取材人姓名。

第一節(jié) 標(biāo)本制作的常規(guī)工作

?5.取材后標(biāo)本進行固定、脫水、包埋、切片、染色。

6、染色后貼標(biāo)簽送診斷室觀察，診斷發(fā)出后及時登記診斷結(jié)果，切片蠟塊及時歸檔。?7.存放溶液試劑及染料的容器必須及時貼標(biāo)簽，注明名稱和配制日期。?8.配制強酸試劑、揮發(fā)易燃試劑注意安全。?9.室內(nèi)不用的電器、燈火須及時關(guān)閉。

?10.染色液、脫水液如有沉渣，應(yīng)過濾后備用。第二章

組織切片程序

? 冰凍切片

石蠟切片

火棉膠切片

︳

↓

︳

——————————→先取 材←—————————— ↓

再固 定

↓

冰 凍 ←————————-------沖 水 ∣

↓

∣

脫 水——————————— ∣

↓

↓ ∣

透 明

乙醚酒精 ∣

↓

↓

∣

浸 蠟

膠液滲透

∣

↓

↓

∣

石蠟包埋

火棉膠包埋 ↓

↓

↓

冰凍切片

切 片

切 片 ↓

↓

↓ 染 色

染 色

染 色 ↓

↓

↓ 封 固

封 固

封 固

一、標(biāo)本取材

?切取病變組織或擬研究的組織

?應(yīng)選擇病變或可疑病變的組織。必要時選取病變與正常組織交界處。

?切取標(biāo)本的原則是求準(zhǔn)而不是求量多，所以切取組織宜小不宜大，以不超過24x24mm2為佳，厚度以3—5mm為度，過大過厚會影響對標(biāo)本的固定，另方面也影響切片的制作。

病理科標(biāo)本檢查和取材制度

1、標(biāo)本的檢查和取材由病理醫(yī)師承擔(dān)。

2、病理醫(yī)師通過肉眼仔細(xì)觀察標(biāo)本，判斷病變的部位、大小、浸潤深度及與切緣和周圍組織的關(guān)系，然后挑選有代表性的部位取材，做病理切片。取材必須遵從規(guī)范要求，以保證診斷的準(zhǔn)確性，提供準(zhǔn)確的TNM分期信息和其他與治療、估計預(yù)后相關(guān)的信息。

3、取材前應(yīng)核對申請單編號與標(biāo)本的編號、標(biāo)本的份數(shù)是否相符，申請單與標(biāo)本應(yīng)有雙標(biāo)記和雙核對，并仔細(xì)閱讀申請單中的內(nèi)容，初步判斷病變的性質(zhì)，做到對病變心中有數(shù)。

4、標(biāo)本檢查和取材應(yīng)按照有關(guān)的操作規(guī)范進行；應(yīng)當(dāng)對大體標(biāo)本進行細(xì)致的觀察，并有相應(yīng)的文字記錄。

5、取材結(jié)束后必須核對組織塊，并在取材記錄單上標(biāo)示；隨后將記錄單交病理技術(shù)人員，供切片染色后核對使用。

6、組織塊應(yīng)該每塊分別編號，并做到一一對應(yīng)。

7、取材后剩余的標(biāo)本應(yīng)妥善保存，保存至病理報告發(fā)出后2周時間。

8、剩余的病理標(biāo)本和標(biāo)本容器屬于醫(yī)療廢棄物，應(yīng)按照“醫(yī)療廢物”的規(guī)定處理，不可隨意丟棄。

9、科室質(zhì)量與安全管理小組定期對取材質(zhì)量進行自查，及時總結(jié)和發(fā)現(xiàn)問題，制定措施，持續(xù)改進取材質(zhì)量。標(biāo)本取材原則：

?1.應(yīng)詳細(xì)描述標(biāo)本的數(shù)量、大?。╩m、cm、多量時聚堆測量)、形狀、色澤、和質(zhì)地等

?2.小量小標(biāo)本，應(yīng)全部取材

?3.多量小標(biāo)本，取材后剩余者應(yīng)保管好備用

?4.粘膜和皮膚應(yīng)“立埋”以便觀察各層結(jié)構(gòu) 大標(biāo)本取材：

?記錄標(biāo)本的手術(shù)類型

?描述和記錄標(biāo)本大?。ㄈS長度、形狀、色澤、表面、質(zhì)地等）球形標(biāo)本可測直徑

?切面：沿大面切開，描述和記錄其特點，如實性或囊性，各占比例，色澤、質(zhì)地、出血壞死，囊壁厚度，內(nèi)容物顏色等

?前列腺、甲狀腺、胰腺等臟器應(yīng)間隔一定距離做多個平行破面，以免漏掉微小腫瘤.?取代表性區(qū)域，并與正常組織交界處取材 ?完整瘤體要帶包膜，如甲狀腺、乳腺 ?取材塊的大小2cmx1.5cmx0.3cm ?編號：數(shù)量、剩余組織記錄“留”，全部取材時記錄（全包）一包等，微小組織試做 ?重取材要記錄

活體小組織(小標(biāo)本)取材：

組織標(biāo)本體積小,在取材時應(yīng)特別小心,用伊紅讓標(biāo)本著色,并用插鏡紙包裹,以防丟失,應(yīng)標(biāo)明粒數(shù).多瓶組織應(yīng)將附號標(biāo)清楚.標(biāo)本的來源與收集(一)

1、臨床活檢

2、尸體解剖

3、實驗動物

（二）1、檢查申請單的姓名，標(biāo)本的件數(shù)是否與之相符合。

2、標(biāo)本是否符合要求。取材注意事項

1.及時、盡可能新鮮 2.迅速固定、冷藏

3.刀要快，不要擠壓組織

4.注意研究目的

培養(yǎng)

定量

對比觀察

臨床診斷

臨床病理取材注意事項

1、檢查申請單的姓名是否與標(biāo)本標(biāo)注的姓名相符

2、檢查申請單所列標(biāo)本是否與實際標(biāo)本吻合。

3、檢查申請單所列標(biāo)本件數(shù)是否與實際標(biāo)本件數(shù)吻合。

二

組織固定

概念：用化學(xué)試劑保持尸體、器官、組織和細(xì)胞固有形態(tài)

結(jié)構(gòu)的過程謂固定

所用的化學(xué)試劑謂固定劑或固定液。目的：防止自溶、腐敗，保持良好結(jié)構(gòu) 原理：使組織及細(xì)胞內(nèi)蛋白凝固；

使有關(guān)成分沉淀、變性，成為不溶性物質(zhì) 方法：浸泡

灌注：局部灌注、全身灌注

蒸汽熏蒸

固定的作用

固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止或減少外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)，防止細(xì)胞自溶，以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，更重要的是保存組織或細(xì)胞的抗原性，不但使抗原不致失活，還要使抗原不發(fā)生彌散，以免在免疫組化染色時產(chǎn)生過深的背景。固定的目的

1、能防止細(xì)菌的腐蝕和抑制組織的自溶

2、能凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)或組織液的蛋白等

3、使組織硬化，便于切塊

4、對某些具有傳染性的標(biāo)本，能防止其擴散

5、保存組織細(xì)胞中固有的物質(zhì)

6、保存好大體標(biāo)本

7、可增強染色

固定時間:

常規(guī)組織病理學(xué): 可長時間固定

細(xì)胞病理學(xué)：可長時間固定

細(xì)胞化學(xué)：不宜過長，約1小時為宜

固定后處理：

充分洗滌

固定時間越長，洗滌時間也應(yīng)相應(yīng)增加 固定的注意事項

①一般應(yīng)在離體30分鐘內(nèi)固定,越及時越好,并將組織上的血液,分泌物沖洗干凈

②固定劑的量一般不少于組織塊總體積的4倍以上，一般為10--15倍，容器勿過小。

③固定的時間應(yīng)視組織的種類和大小決定,一般小組織4-6小時,大組織18-24小時或更長。

④有特殊要求的須用特殊的固定劑;超微結(jié)構(gòu)觀察：低溫固定

⑤不同組織在固定時應(yīng)注意特殊的處理方法

⑤不同組織在固定時應(yīng)注意特殊的處理方法

?為防止組織因固定劑作用而發(fā)生變形，對軟薄組織如神經(jīng)、肌腱、腸系膜等應(yīng)先平攤魚吸水紙上，在投入固定劑中，可防止蛋白質(zhì)凝固而引起的扭曲變形；

?對含氣體而浮于液體表面的組織如肺，可連以重物使其下沉，或在組織上覆蓋脫脂棉，以防止組織表面干燥。固定液的選擇

1、盡量選擇對組織收縮少，滲透快的固定液

2、選擇較通用的固定液，既能做好HE的染色，又能做免疫組化標(biāo)記

3、特殊的病例選擇特殊的固定液 如：

狂犬病——丙酮 磷酸酶——丙酮 糖原——無水酒精 ?。

固定液的分類

Ⅰ.醛類：甲醛、戊二醛、多聚乙醛、丙稀醛等 Ⅱ.氧化劑類：四氧化餓（奧酸）、高錳酸鉀、重鉻酸鉀等 Ⅲ.蛋白變性類：醋酸、甲醇、乙醇等 Ⅳ.其它：氯化汞，苦味酸等。固定液

甲醛溶液：福爾馬林，F(xiàn)ormeldehyde

4％甲醛，或 10％福爾馬林

40％甲醛

用于無特要求的組織常規(guī)固定

乙醇（Ethyl Alcohol）: 95%

用于細(xì)胞涂片常規(guī)固定，糖原固定 乙醇乙醚混合固定液: 95% ：

95%乙醇+ 95%乙醚（1:1）

用于細(xì)胞涂片巴氏染色

固定液的使用

（一）甲醛（formaldehyde）

一般市售的含37-40%，平時使用都把它看為100%。它由甲醛氣體飽和于水而成。比重為1.12，有一股刺鼻的氣味。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的，因為它能和多種不同的功能基團結(jié)合。如近來的抗原修復(fù)就是認(rèn)為組織中的蛋白與醛產(chǎn)生交聯(lián)蛋白后，要將它們顯示出來，就必須應(yīng)用溫度高達(dá)92℃以上的抗原修復(fù)液，才能將其交聯(lián)的醛鍵打開，與后來的抗體結(jié)合，將其表達(dá)出來。甲醛的優(yōu)點：

1、收縮較小

2、固定較為均勻，穿透力強

3、能使組織硬化并富有彈性

4、能保存脂肪及脂類物質(zhì)

5、成本較低

甲醛的缺點：

1、成分不純，含少量的甲醇，影響酶反應(yīng)

2、含少量的甲酸，易產(chǎn)生色素

3、不能固定尿酸和糖類物質(zhì)

4、易揮發(fā)、污染環(huán)境

5、易產(chǎn)生醛基、封閉抗原

應(yīng)用甲醛配成的固定液有：

1、緩沖福爾馬林固定液（neutral buffered formaaldehyde）

NaH2PO4·H2O

4g

Na2HPO4（無水）

65g

蒸餾水

900ml

甲醛

100ml 2、10%福爾馬林固定液

甲醛

10ml

自來水

90ml 3、10%福爾馬林鹽固定液

甲醛

10ml

自來水

90ml

NaCl

0.9g

4、Bouin氏固定液

苦味酸飽和水溶液

75ml

甲醛

25ml

冰醋酸

5ml

5、Zonker氏液

氯化汞

5g

重鉻酸鉀

2.5g

硫酸鈉

1g

水

100ml 注：該固定液固定時間為16-24h，染色前應(yīng)用碘酒除去汞鹽的沉淀，否則會影響染色后切片的觀察。

（二）酒精（alcohol）

有無水酒精（99.8%）和工業(yè)酒精（95%）在病理技術(shù)方面，酒精是一種重要的試劑，它可配成不同的濃度來進行脫水，如：60%、70%、80%、90%、95%等，在切片染色前，用酒精來除去二甲苯，在染完色后則用其來脫水。

應(yīng)當(dāng)注意的是，組織脫水時應(yīng)根據(jù)組織的大小、器官或部位、取材的大小來確定脫水時間，一般認(rèn)為濃度越低，脫水時間可以相對延長，如70%可用來長期保存標(biāo)本，但如果在100%的酒精里時間就不能太長，否則組織易脆不利于切片。酒精可以與其它試劑混合，配成混合固定液，如AAF固定液。

酒精的優(yōu)點：

1、可以保存糖原和尿酸結(jié)晶。

2、能在任何比例的情況下與水混合。

3、能溶解苯類物質(zhì)，為染色法中的橋梁試劑。

4、能脫去切片上的水份。

5、可配成混合固定液。、可作為保存標(biāo)本的固定液。7、可用來消毒。

灑精的缺點：

1、可溶解脂類及脂肪物質(zhì)。

2、可沉淀白蛋白，球和核蛋白。

3、滲透力不強。

4、可脫去某些已著染切片的顏色。

5、不作為單獨的固定液。

6、價格昂貴。

三、石蠟包埋制樣 組織塊脫水：

逐級乙醇脫水

透明：二甲苯

浸蠟：65°C

包埋：溶解蠟

（一）脫水 ? 脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機溶劑石蠟的滲入，這一過程稱為脫水。

?脫水劑：乙醇

?一般情況下,應(yīng)將大小標(biāo)本分別脫水.標(biāo)本脫水從低濃度開始,一般人標(biāo)本從70%或75%乙醇,動物標(biāo)本從50%乙醇開始。脫水后組織收縮、變脆。

人工脫水程序

(適應(yīng)于3mm厚的組織塊)1、30%酒精 24h 2、50%酒精 24h 3、70%酒精 24h 4、80%酒精 24h 5、90%酒精 12h 6、95%酒精 4h 7、95%酒精 4h

細(xì)小組織脫水程序

（適合于胃、腸鏡活檢，肝、肺、腎穿刺活檢的組織）1、80%酒精10-15min 2、90%酒精10-15min 3、95%酒精10-15min 4、100%酒精10-15min

5、二甲苯5-10min

6、石蠟15-20min

1、人工脫水法優(yōu)點：

（1）可根椐不同的組織選擇最佳時間。

（2）可避免細(xì)小的組織經(jīng)受不必要的脫水時間,防止組織的硬脆．（３）可靈活掌握，隨時進行觀察和調(diào)整．

2、人工脫水法的不是之處：（1）需耗人力；

（2）必須在白天完成，晚上無法進行換液；

（3）如機器發(fā)生故障，組織塊被擱置在外邊，致使組織干涸，影響了制片的質(zhì)量。

Shandan全封閉電腦控制全自動組織脫水機

該機由電腦、反應(yīng)缸和試劑儲存缸三部分構(gòu)成。

電腦屏幕可顯示時間、溫度、所需時間、是否用真空負(fù)壓等，可根據(jù)不同的時間要求，編制9套不同的組織脫水程序。

1、正常室溫脫水程序 A、10%福爾馬林

2h B、90%酒精

1.5h C、95%酒精

1.5h D、95%酒精

1h E、95%酒精

1h F、100%酒精

1h

2、加溫脫水程序

應(yīng)用正常室溫的脫水時間，再編入加溫程序，加溫的溫度一般在37-40℃

3、真空負(fù)壓脫水程序

應(yīng)用正常室溫的脫水時間，再編入真空負(fù)壓脫水程序

4、周末程序

A、10%福爾馬林10h B、90%酒精10h C、95%酒精10h D、95%酒精10h E、95%酒精10h F、100%酒精2h

G、100%酒精2h H、100%酒精2h I、二甲苯1h J、二甲苯1h K、石蠟65℃真空負(fù)壓1h L、石蠟65℃真空負(fù)壓1h

該機的特點：

1、容量大，一次可處理250-300個包埋盒。

2、全部密閉，試劑不易揮發(fā)，保護了環(huán)境。

3、帶有定期的攪動裝置，使組織固定均勻，脫水徹底，浸蠟充分。

4、脫水過程可使用真空負(fù)壓和加熱。

5、該機占地量小。脫水方法及注意事項:

1.常用試劑為乙醇。

2.快速石蠟切片常用丙酮為脫水劑，尸體解剖標(biāo)本一般在無水乙醇后加丙酮。

3.因為脫水劑的新舊影響脫水時間,必須靈活掌握,根據(jù)本實驗室情況,定時更換脫水劑.?

可用作固定液,也是一種比較好的脫水劑。脫水能力強、速度快,可配制不同濃度進行脫水。但一般情況下,多用在無水酒精的補充脫水。

丙酮脫水性比酒精強,但容易使組織過度硬化,所以應(yīng)適當(dāng)掌握脫水時間。

（二）脫鈣

?骨和其他鈣化組織制片時應(yīng)先脫鈣再切片。將組織置于脫鈣劑中，每日更換新鮮液、直至組織軟化為止。

?常用脫鈣劑是5%---10%硝酸溶液。硝酸 5－10ml 和蒸餾水 加至 100ml。作用迅速，對組織不膨脹，但每日需要更換新鮮溶液，最好早晚各一次，一般1－3天完成。

?脫鈣時間視組織大小和含鈣多少而定，以大頭針可輕松刺入為準(zhǔn)。

1．取材：骨組織固定于10%福爾馬林24小時后再鋸

取厚度約0.5厘米骨片。

2．固定：再以10%福爾馬林固定2天。

3．將組織置于脫鈣劑5%---10%硝酸溶液中，每日更換新鮮液、直至組織軟化為止。

4．流水沖洗24小時（除酸）。

5．進行常規(guī)脫水，透明，浸蠟，切片。

（三）透明 ?透明的目的:

因為大多數(shù)脫水劑不能和石蠟相混合,組織內(nèi)的水份脫干凈后,必須通過透明劑的作用,才能便于浸蠟包埋.↓

↓

既能溶于乙醇又能溶于石蠟

↓

因在此過程中，組織中的乙醇被透明劑取代，使其折光率接近組織蛋白的折光率，組織呈不同程度的透明狀光線可以透過，故稱透明。

常用透明劑種類及注意事項:

1.二甲苯是最為常用的一種透明劑，還有很多種，如三氯甲烷（氯仿），香柏油，苯酚，松節(jié)油等。

2.透明要注意的關(guān)鍵是時間：

透明時間不夠，石蠟不能完全進入組織，影響到包埋切片 ；但是如果透明過度，組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質(zhì)，故組織在二甲苯中不能久留.特別是肝脾等組織.3.制片過程有兩次透明：

第一次組織脫水后透明；

第二次切片染色透明。

（四）浸蠟

1.組織經(jīng)透明后，在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程，稱浸蠟。

2.組織經(jīng)過透明后要浸入石蠟內(nèi),目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內(nèi)部,把軟組織變?yōu)橛羞m當(dāng)?shù)挠捕鹊南瀴K以便切片.3.一般浸蠟須經(jīng)過2到3次,石蠟的溶點為54-60度左右,目前常用的脫水機上是兩個蠟缸.浸蠟時要注意掌握好石蠟的溫度和浸蠟的時間

浸蠟作用

1、可起到填充、支撐的作用。

組織經(jīng)酒精、二甲苯的作用后，其中有許多物質(zhì)被溶解去，如脂肪及脂類物質(zhì)、糖原等。因而遺留下許多腔隙，妨礙了切片。在切片時由于誘導(dǎo)劑的作用下石蠟可以浸入到物質(zhì)的各個角落，當(dāng)石蠟冷卻時，浸入到各處的石蠟就填充在各處的空隙，包括血管和器官等。使組織保持原有的形狀，也使包埋后蠟塊保持平整，便于切片。

2、使切片能完整的切除并保持切片的美觀

浸蠟的方法 ①傳統(tǒng)浸蠟法

將透明好的組織放入熔化的石蠟中浸漬一定的時間。②真空負(fù)壓浸蠟法

將透明好的組織放入浸蠟缸中，然后移入真空負(fù)壓箱內(nèi)，或者脫水機自身配有的真空負(fù)壓裝置進行浸蠟。

浸蠟時間，真空負(fù)壓數(shù)見表。

注意

為了盡可能排除透明劑，浸蠟可以分兩級或三級進行。以熔點較低（54度以下）的軟石蠟作為第一步，然后再換為熔點較高（60-62度）的石蠟作為第二步，第三步。浸蠟時間1－4小時，或更長，并使之過夜則較易切割。但過長會使組織脆硬，切片時易破碎，過短，浸蠟不夠，難以制成高質(zhì)量切片。

（五）包埋

?包埋，就是將已經(jīng)經(jīng)過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內(nèi)，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個程序稱為包埋。?包埋劑凝固后，進一步加強了組織的硬度和韌度而便于進行切片。

包埋時的注意事項：

1、所使用的鑷子，包埋框，最好放于37的恒溫箱內(nèi)，以免這些物質(zhì)過冷（在冬天時）而過早冷卻包埋的石蠟，影響包埋的質(zhì)量，這種現(xiàn)象在沒有石蠟包埋機的單位較為明顯。

2、打開脫水盒，取出組織塊，將一平整的大的一面朝下，并用鑷子壓平，使其保持在一水平面上。

3、每包埋完一塊，應(yīng)附上標(biāo)簽，以免出差錯或張冠李戴。如為塑料包埋盒，則可少去這一步，極為方便。

4、對于管腔的組織如血管、腸、氣管等應(yīng)豎起來包埋對于皮膚及胃、腸、等組織應(yīng)辯認(rèn)好方向。仔細(xì)包埋。

5、細(xì)小多塊的組織，可包埋在一個蠟塊，但應(yīng)保持在同一平面上，以免影響切片。

6、包埋完后，蠟面凝固，便可放入水中加速硬化，如帶有冷凍設(shè)備的包埋機，則可少去這一步。

7、包埋時組織塊不能使其冷卻凝固，應(yīng)保持組織塊上的蠟處于熔化狀態(tài)，這樣包埋時才能和包埋蠟溶為一體。如果組織塊自身的蠟先凝固，包埋后的蠟塊切片時組織與邊蠟分離切不成佳片嚴(yán)重的會崩掉，影響切片。

修切蠟塊

應(yīng)用包埋框包埋的組織塊，切片前一定要將其切好，組織塊與邊蠟應(yīng)保持有0.5cm的厚度，才有利于切片。

1、有利于切片，使切片能連續(xù)切出。

2、減少損傷刀口延長刀口的壽命，以利多切蠟塊。

3、有利于切片的裱貼。例如一張載片要裱兩塊組織時，修切好的蠟塊，就能使它們擺得整齊。

?1.組織取材2毫米厚度，固定于福爾馬林?jǐn)?shù)小時

后再換以新鮮福爾馬林固定數(shù)小時。2.組織流水沖洗6－12小時。3.70％酒精2－4小時。4.85％酒精2－4小時。

5.95％酒精（Ⅰ）2－4小時。6.95％酒精（Ⅱ）2－4小時。7.100％酒精（Ⅰ）2－4小時。8.100％酒精（Ⅱ）2小時。9.二甲苯（Ⅰ）0.5－1小時。10.二甲苯（Ⅱ）0.5小時。11.浸蠟（Ⅰ）2小時。12.浸蠟（Ⅱ）2小時。13.組織包埋。

快速切片診斷是在數(shù)十分中或半小時左右制成切片并作出診斷的一種手段，主要用于手術(shù)中決定手術(shù)的切除范圍和手術(shù)方式?？焖偾衅姆椒òū鶅銮衅涂焖偈炃衅?/p>

?制作快速石蠟切片時，切取組織應(yīng)該薄小，從固定、脫水到浸蠟的全過程都要加溫，一般是先將各種試劑在超聲波快速石蠟脫水儀中預(yù)熱，恒溫下操作，整個過程大約在10－15分鐘即可完成

?快速石蠟包埋法操作過程

（1）先取病變組織于AAF中固定3－5分鐘。（2）95％酒精1分鐘。（3）無水酒精1分鐘

（4）正丁醇1/3丙酮2/3混合液1分鐘（5）二甲苯1分鐘（6）浸蠟1－2分鐘（7）包埋

（六）組織切片 切片機類型：

旋轉(zhuǎn)式切片機

滑動式切片機

（六）組織切片

?石蠟切片的步驟：

1.切片前先把切片刀磨鋒利，將修好蠟塊置冰箱冷凍后放在切片機上 2.將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內(nèi)，調(diào)整到稍離開切片能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口成5-10度夾角。

3.再調(diào)整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架，固定好機頭。

4.根據(jù)需要調(diào)整切片厚度，一般3--5μm為宜。

切片的步驟：

5、搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再進行切制。

6、實踐中可用右手轉(zhuǎn)動切片機手輪，左手用毛筆托起蠟片，協(xié)調(diào)地進行切片操作。

7、切下的切片帶，一端用鑷子輕輕拉起，應(yīng)盡可能將切片帶拉直展開，用毛筆將切片帶從刀口向上挑起，拉下切片帶，然后輕拖鋪于水箱內(nèi)展平，水溫45--55℃為宜。

石蠟切片的步驟：

8、切片附貼前，可先涂蛋白甘油，防止切片在染色時脫片；附貼后放溫箱內(nèi)（65℃左右）烘烤10--30min，也可置于微波爐內(nèi)溫火一分鐘后切片上石蠟完全融化，然后染色。

冰凍切片法：

?常用低溫冷凍切片機

?快速將新鮮組織固定在冷凍切片機中，冷凍數(shù)分鐘即可切片，數(shù)分鐘即可完成，稍后進行快速染色。

?常用于手術(shù)中快速診斷或組織化學(xué)染色和保存脂肪做特殊染色

組織切片 注意事項:

1、持蠟器一定要將蠟塊挾緊挾牢，以免使其跳動而影響切片。

2、刀一定要保持無口、鋒利，一次性刀片做到這一點較容易，大刀片要做到上述要求就比較困難。因此就要認(rèn)真地磨好刀才能保證切片的質(zhì)量。

3、裱片的水溫不能過高或偏低，高者可溶化所切出的切片，低者則展不開切片，使切片留有皺紋，最適的水溫應(yīng)是比石蠟的溶點低2-5℃，如石蠟的溶點為60-62℃，裱片的水溫則可達(dá)55-57℃，余者類推。

4、對于細(xì)小的組織，應(yīng)特別小心修切，防止一刀切下，全部皆休的情況。

5、對于多塊細(xì)小的組織，原則上是每一細(xì)小的組織都應(yīng)有一個切面。修切的時候更應(yīng)特別小心。

6、每切完一塊，裱于載片后應(yīng)隨時刻上編號，以防止差錯或混亂的現(xiàn)象發(fā)生，減少差錯的苗頭。

7、挑切片的毛筆，應(yīng)選用細(xì)小柔軟的毛筆為佳，用時向上挑，決不能往下，以免刀口傷及毛筆。

石蠟切片?？沙霈F(xiàn)的問題

1、石蠟切片不能形成帶狀的原因是室溫低，蠟塊周邊不整齊。

2、石蠟切片，切片卷起的原因是刀的傾斜角度過大或刀不快。

3、石蠟切片出現(xiàn)的皺折的原因是石蠟溶點低，純度不足。

4、石蠟切片出現(xiàn)厚薄不均勻的主要原因是組織塊挾不牢固或組織堅硬如肌瘤等。

5、石蠟切片出現(xiàn)波浪狀的原因是組織塊太硬或骨組織末完全脫鈣。

6、石蠟切片，當(dāng)切片放入水中裱片時，切片周圍的蠟迅即向四邊散開，其主要原因是組織脫水不徹底，浸蠟浸不進去。包埋蠟中含有二甲苯。

7、石蠟切片，當(dāng)切片切出后蠟塊向上時，把已切出的切片帶走并損壞的原因是切片刀背面留有殘余石蠟。

8、組織切片常見的人為性色素沉著物是福爾馬林色素，常見的器官是肝、脾。

9、組織切片常見的外源性色素是碳末，常見的器官是肺。

10、石蠟切片時切片刀的最宜角度是

5℃-30℃

11、一般所稱呼的標(biāo)準(zhǔn)室溫是20℃

12、組織浸蠟的溫度最好為

13、石蠟溶點的最高度高2-3℃即65℃。冰凍切片

一、種類：

1、低溫恒冷箱切片法

2、二氧化碳冰凍切片法

3、甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法

4、半導(dǎo)體冰凍切片法

5、氯乙烷冰凍切片法

二、冰凍切片的目的

1、在手術(shù)進行中。突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷不相符合或者懷疑時需要病理給予確定。

2、了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定以后的治療措施。

3、對于已確定惡性腫瘤的病人則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤細(xì)胞。

4、在剖腹探查所發(fā)現(xiàn)的腫塊。

5、顯示組織中的脂肪類物質(zhì)。

6、某些酶的顯示如ATP酶琥珀酸脫氫酶等。

7、神經(jīng)病理學(xué)中的某些染色法。

8、對某些物質(zhì)所進行的免疫熒光的研究。

三、冰凍切片的操作

（1）本室現(xiàn)有Shandon-AS620E型冷凍切片機的主要性能。左邊的切片臺可達(dá)到-60左右，冷凍箱內(nèi)在0～-30間可任意調(diào)節(jié)，箱面上有電子控制板，裝有急速冷凍，即放上標(biāo)本啟動該鍵機器馬上進行冷凍工作并持續(xù)10分鐘；有冷凍臺溫度顯示冷凍箱內(nèi)溫度顯示；有即時除霜內(nèi)溫度顯示；

有即時除霜鍵，啟動該鍵機器可持續(xù)工作15分鐘，將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉；有照明鍵，啟動該鍵可照明工作間；有消毒鍵當(dāng)進行一星期的工作后，啟動該鍵可對工作間進行消毒；有工作間面的密鎖鍵啟動鍵可將工作間鎖住，除此之外該機的左邊有四個按鍵兩個為快速自動進退、兩個為微小進退、另有一個手動旋鈕，調(diào)節(jié)修塊時的進退。（2）切片取末經(jīng)固定的組織不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整。最好24×24 × 4mm。

（3）取出組織支承器，放平擺好組織周邊滴上包埋劑，速放入冷凍臺上冰凍，小組織應(yīng)先取一組織支承器滴上包埋劑讓其凍成一個小臺再放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。（4）將冷凍好的組織塊夾緊于切片機上修平切面。

（5）調(diào)好厚度，根椐不同的組織而定，一般在5-10um.（6）調(diào)好防卷板，制作冰凍切片的調(diào)節(jié)，關(guān)建在于防卷板的調(diào)節(jié)，這就要求要細(xì)心，準(zhǔn)確，將其調(diào)校，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?，此時切片。冰凍切片在第一時間順利地在刀與防卷板之間通過，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板，取一載片，將其附貼上即可。

（7）用于附貼切片的載片，不能存放入冷凍的地方，于室溫存放即可。因為當(dāng)附貼切片時，從室溫中取出的溫差，當(dāng)溫度較高的載片附貼上溫度低的切片時，由于兩種物質(zhì)溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時，分子間的彼此轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力。使切片與載片牢固地附貼在一起。如果用冷藏的載片附貼切片，就沒有這種現(xiàn)象發(fā)生。

（8）應(yīng)視不同的組織選擇不同冰凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根椐不同的組織而定，不能一概而論，例如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝臟組織和淋巴結(jié)組織等，冷凍箱的溫度可調(diào)在-10℃～-15℃左右。切甲狀腺，脾、腎、肌肉等組織,則應(yīng)調(diào)在-15℃ ～-20℃左右。切帶有脂肪的組織如乳腺組織，應(yīng)調(diào)在-25℃左右，如為大量的脂肪組織時，應(yīng)調(diào)至-30℃。

四、冰凍切片時的注意事項

1、防卷板和切片及持刀架上的地方應(yīng)保持干凈經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余及用柔軟的紙張擦。因為包埋劑常常貼在上述的地方。如果不把它們?nèi)コ?，就會影響切片。使切片不能完整切出?/p>

2、應(yīng)用于冰凍切片的組織不能過大過厚，過大難以切出好片過厚冰凍費時，最好的取材應(yīng)在24 × 24 × 2cm。

3、冰凍組織前組織放于組織支承器上應(yīng)視組織的走勢來給予放置，然后四周加上包埋劑，保持周邊的整齊，如出現(xiàn)凹凸不平的地方，可用刀子將其修平，才不致于影響切片。

4、組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液在未能達(dá)到固定前更不能使用。臨床快速冰凍切片不須要預(yù)先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織反而增加了切片的難度。如果使用了未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現(xiàn)冰晶，這是因為含水溶液的固定液在組織未經(jīng)固定前，其中的水份也會滲入到組織當(dāng)中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時，這些水份就存留于組織中形成了冰晶。

5、當(dāng)切片時，如果發(fā)現(xiàn)組織冰凍過度時，可將冰凍的組織取出來，于室溫中停留片刻，以利于軟化組織，使其不致于過度冰凍。

五、冰凍切片的快速染色

1、用普通染色進行染色（HE染色）

（1）固定、切片用電吹風(fēng)吹干后于10%的福爾馬林鹽或純丙酮中固定2分鐘后自來水沖洗。（2）滴少許蘇木素染液于切片上于酒精燈上加熱染色，當(dāng)見有蒸汽時即可中止染色，快速水洗、分化、用熱水促其藍(lán)化、伊紅對比染色、酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

2、超聲波快速染色法

（1）固定：切片的固定與上同。

（2）把水洗后的切片插入裝有蘇木素的玻璃瓶中超聲波處理30sec或1min,水洗、分化、放于裝有熱水的玻璃瓶中、超聲波處理30sec,酒精脫水，二甲苯透明封固。

結(jié)果：經(jīng)上述各種方法處理后所制作的切片。細(xì)胞核呈藍(lán)色，軟骨基質(zhì)鈣鹽深藍(lán)色，胞漿呈深度不同的粉紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，膠原纖維量粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，切片完整，未見有冰晶出現(xiàn)。第六章 切片染色與封固

一、染色：

利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細(xì)胞的各種成分。

一、染色 ?目的:

將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細(xì)胞等成分染上不同的顏色 產(chǎn)生不同的折射 ,以便在光學(xué)顯微鏡下觀察.?方法:

蘇木素-伊紅染色稱常規(guī)染色,又稱HE染色.其他染色方法稱特殊染色(特染).染色原理

1、化學(xué)反應(yīng)：

利用組織細(xì)胞內(nèi)酸堿性的不同，其與陰陽離子結(jié)合力的不同，染色也不同。如：細(xì)胞核呈酸性＋堿性染料(氧化蘇木素)→深藍(lán)色

細(xì)胞漿呈堿性﹢酸性染料(伊紅染料)→不同深淺的紅色

2、物理作用：

①毛細(xì)管作用及滲透作用

②吸收和溶液作用：如復(fù)紅溶液為紅色，所染

組織也為紅色，但干燥復(fù)紅為綠色

③吸附作用 染色術(shù)語

?⒈媒染劑：與染料或組織發(fā)生結(jié)合作用，促進染色能力的物質(zhì)，如鐵明礬、鉀明礬等。

?⒉促染劑：能使組織易于著色的物質(zhì)，它與媒染劑不同，不直接參與染色反應(yīng)，如醋酸、碳酸等。

?⒊分化劑：如酸堿類分化劑，又稱退色劑；氧化退色劑，主要用于漂白作用。染色步驟: 脫蠟

（1）二甲苯I

5分鐘（2）二甲苯II（應(yīng)完全透明）

5分鐘

逐級降濃度酒精水化脫二甲苯

（3）無水酒精I（變?yōu)椴煌该鳎?/p>

1－2分鐘（4）無水酒精II

1－2分鐘（5）95% 酒精

1－2分鐘

（6）80% 酒精

1－2分鐘（7）自來水洗

片刻

染色步驟

（8）

蒸餾水

片刻

（9）

蘇木素液染核

10—15分鐘（10）自來水沖洗

片刻

（11）1%鹽酸酒精分化

0.5—1分鐘（12）流水沖洗

片刻（13）碳酸鋰飽和水溶液反藍(lán)

1分鐘

（14）流水沖洗

5--10分鐘（15）復(fù)染 0．5％伊紅水溶液（對比染色）

2—5分鐘 染色步驟: ?逐級升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90％酒精）

（16）自來水洗（分化伊紅）

片刻（17）95％酒精I

1－2分鐘（18）95%酒精 II

I—2分鐘（I9）無水酒精 I

1—2分鐘（20）無水酒精II

l－2分鐘 ?透明

（21）二甲苯I

5—10分鐘

（22）二甲苯II

5—10分鐘

（23）蓋玻片下封固

?染色結(jié)果: 細(xì)胞核：藍(lán)色，軟骨基質(zhì)鈣鹽等深藍(lán)色；細(xì)胞漿深淺不同的粉紅色，嗜酸性顆粒鮮紅色；膠原纖維呈粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，紅血球為桔紅色，蛋白基質(zhì)為粉紅色。

? HE（Hematoxin Eosin,HE〕染色 ?1〕蘇木素染色配方： ?

蘇木素

1g ?

純酒精

10ml ?

鉀明礬

20g ?

蒸餾水

200ml ?

氯化汞

0.5g ?2〕伊紅染色配方：

伊紅

0.5-1g ?

蒸餾水

99ml 伊紅染液 ?

配方：伊紅Y（水溶）

0.5—lg

蒸餾水

99ml

若取用伊紅Y（醇溶性）應(yīng)溶于99ml75％或95％的乙醇中。若在伊紅液中加人0.5毫升冰醋酸，可加速其染色過程，并使胞漿的色澤更為艷麗 HE染色過程中的要點： ?切片脫蠟務(wù)必干凈徹底

?脫苯和酒精要徹底

?蘇木素染色液配制及鹽酸酒精分化較為重要

?各級水洗應(yīng)充分及伊紅染色要適當(dāng)

?切片固封樹膠要適當(dāng)

染色時的注意事項

（1）切片烘烤以切片附貼牢固為原則，否則容易掉片。（2）切片脫蠟一定要徹底，不然會導(dǎo)致染色深淺不一。

（3）切片染蘇木素前可令其無水化，這樣可延長蘇木素的壽命。因為每次染色前，切片水洗，然后進入染液雖然每次帶入的水分很少，但隨著次數(shù)的增加，所帶入的水分足可以稀釋染液影響染色的質(zhì)量。

（4）切片在蘇木素的染色時間應(yīng)充分寧過勿不足。對于初學(xué)者來說更應(yīng)過染，否則分化會過度導(dǎo)致染色過淺。

（5）切片分化時，要根椐不同的組織來確定分化時間，并不斷積累經(jīng)驗。

（6）伊紅染色時間也要充分，經(jīng)低濃度灑精時應(yīng)仔細(xì)觀察，必要時快速通過，以免過于褪色。

（7）切片致無水酒精后，不要在控干無水酒精時讓切片干涸，可以不經(jīng)控干直接地進入碳酸二甲苯（也可以進入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有較強的吸水性透明也好很適合南方地區(qū)。（8）切片從二甲苯中取出封固時，切不能讓其干涸，因南方地區(qū)空氣潮濕干涸的切片與空氣接觸，可吸收其水份。這樣的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被著二甲苯，由于它不溶于水起到與水隔絕的作用。

（9）滴中性樹膠封蓋切片，膠不能太濃，太濃膠難以均勻鋪開，且易產(chǎn)生氣泡，又不能太稀過稀的膠由于二甲苯含量較多，當(dāng)切片干燥時，二甲苯揮發(fā)掉，膠封的切片收縮，即可導(dǎo)致一半切片沒有被膠封固的結(jié)果。最合適的膠應(yīng)是滴下成珠。

（10）封固切片時，盛膠的瓶子及瓶蓋四周不要留有余膠，否則瓶蓋難以打開。因此每次用完后都必須將其擦干凈。當(dāng)打不開瓶蓋時應(yīng)放入烤箱中烘烤，即可打開。

（11）標(biāo)簽附貼要認(rèn)真，不要貼得歪歪斜斜，影響切片的外觀.1、切片機的使用，應(yīng)如何注意保養(yǎng)？

切片機座應(yīng)注意平穩(wěn)，切片時應(yīng)注意搖轉(zhuǎn)速度的快慢要盡量保持均勻一致?；瑒用嬉?jīng)常滴上機油，以利于滑動及旋轉(zhuǎn)自如和防銹，切片完后除去殘蠟，取下切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機，以防灰塵落于機上，影響機器的運轉(zhuǎn)。

2、化學(xué)試劑使用時的注意事項

（1）已打開的藥品或染色時的玻璃瓶染色液，每次用后即隨手蓋緊，以免揮發(fā)，易揮發(fā)易吸潮的藥品用后蠟封。

（2）易燃的試劑要遠(yuǎn)離火種，謹(jǐn)防火災(zāi)，因病理科有較多的易燃化學(xué)試劑。

（3）強酸，強堿試劑或有腐蝕性的廢染液，不要直接倒入下水道，以免腐蝕下水道，造成不必要的損失。

（4）易變質(zhì)或易氧化失效的試劑，應(yīng)標(biāo)明配制日期，妥為保存，有的只能一次性用完，因此,應(yīng)本著節(jié)約的原則，用多少，配多少，切勿造成浪費。

3、石蠟切片刀應(yīng)怎樣保養(yǎng)好？

切片刀要經(jīng)常磨，保持鋒利無刀口，每次用完后用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹影響切片。

4、如何使樹膠處于中性狀態(tài)？

取少量無水碳酸鈉，加入到封固用的樹膠中攪拌后放置數(shù)日取其上清液，即為中性樹膠。

5、切片染完蘇木素后的分化，應(yīng)該如何控制和注意什么問題？

（1）分化液中鹽酸不能高于1%，否則會因分化過強而將已著色的顏色大部分脫水，造成染色過淺。

（2）對各種組織應(yīng)視情況而定，如淋巴結(jié)的切片，應(yīng)分化較長時間等。

（3）分化完后，應(yīng)在顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)核中的物質(zhì)不清楚，則應(yīng)繼續(xù)分化至清晰為止。（4）要認(rèn)真操作，細(xì)心觀察，不斷總結(jié)。

6、切片欠佳表現(xiàn)在哪些方面？

切片欠佳的主要表現(xiàn)有：切片見有刀痕皺折、橫裂、折疊、不全、破碎、組織松散。厚薄不勻或呈波浪狀等現(xiàn)象。二

封固

蓋玻片下封固

結(jié)果：胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色，紅細(xì)胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色

國產(chǎn)中性樹膠 封片,注意樹膠量適中,掌握封片手法, 防止氣泡.二

封固 注意事項：

?1.配制封固膠時濃淡要適宜，以恰能滴下成珠為宜，用前攪拌均勻。?2.使用時要適量。

?3.封固切片時，切片上剩余二甲苯不要過多也不要過干，如遇少量氣泡可用鑷子輕壓蓋片，切勿放烤箱內(nèi)，如氣泡不易壓出需將切片置二甲苯后重新封固。第七章 特殊染色

HE染色雖是一種快速、經(jīng)濟、且易掌握的方法，但它不能回答病因?qū)W、Z組織發(fā)生及發(fā)病機制等方面的許多問題。而特殊染色可以協(xié)助解決病理診斷問題。

特殊染色法是為了達(dá)到某些特殊的要求，或是為了觀察特殊的組織結(jié)構(gòu)。

一、脂肪染色

主要用于心、肝、腎的脂肪變性，動脈粥樣硬化，以及因脂肪栓塞導(dǎo)致的死亡病例鑒定等。

試劑配制：蘇丹染液

蘇丹III或蘇丹IV0.5g，70%乙醇250ml，丙酮250ml 染色方法：

1.標(biāo)本常規(guī)甲醛固定后流水沖洗12h；

2.用濾紙吸干標(biāo)本表面的水分，把標(biāo)本放入蘇丹III染液中浸泡30min； 3.用70％乙醇分化，以脂肪組織呈橙黃色，其它組織不著色為佳； 4.水洗后浸存在5％甲醛液中，為了防腐可加入適量的防腐劑。

二 彈力纖維染色法

病理診斷應(yīng)用彈力纖維染色，目的是觀察組織內(nèi)彈力纖維是否增生或破壞、斷裂和崩解，從而幫助診斷。?試劑配制：

地衣紅酒精液

1g ?

70%酒精

100ml ?

濃鹽酸

1ml ?結(jié)果：Taner-Unna法，彈力纖維呈深棕紅色。

Verhoeff鐵蘇木素染色法，彈力纖維呈黑色。

Verhoeff鐵蘇木素染色法 三、六胺銀（PASM〕染色

? 在腎臟活體組織檢查和一些真菌感染的組織選用此方法 PASM染液的配方：

2％硝酸銀水溶液3ml； ?

3％六次甲基四胺液25ml； ?

5％硼砂2ml。

?注：2％硝酸銀配制胺溶液，染色時間40分鐘，溫度 ?

55~60℃，隨時鏡下觀察便于控制。PASM染色法：

?（1〕1％過碘酸水溶液內(nèi)染10分鐘； ?（2〕自來水沖洗，蒸餾水沖洗；

?（3〕入5％鉻酸水溶液40分鐘，出此溶液后用1％亞硫酸鈉除掉鉻酸； ?（4〕自來水洗數(shù)次，蒸餾水洗3－4次；

?（5〕入六胺銀染液（50－60℃〕40分鐘，20分鐘后，每5分鐘鏡下觀察一次，蒸餾水洗四次； ?（6〕入0.2%氯化金水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗三次； ?（7〕入5％硫代硫酸鈉水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗數(shù)次； ?（8〕復(fù)染HE，脫水、透明、封片

?結(jié)果：底膜呈黑色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，背景呈粉紅色

四、淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）

?.淀粉樣物質(zhì)是一種嗜伊紅性物質(zhì)，性質(zhì)屬于糖蛋白成分。組織出現(xiàn)此物質(zhì)稱為淀粉樣變性。

?1〕試劑配制： ?（1〕剛果紅染色液。剛果紅1g，蒸餾水100ml； ?（2〕Harris蘇木素染色液。

淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）?2〕染色步驟：

?（1〕蘇木素染色液浸染2分鐘； ?（2〕0.5%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘； ?（3〕流水洗，蒸餾水洗2次； ?（4〕剛果紅染色液中25分鐘； ?（5〕無水乙醇迅速脫水2次； ?（6〕二甲苯透明，中性樹膠封固。

?結(jié)果：淀粉樣物質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。

第八章

細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)

?細(xì)胞學(xué)檢查是腫瘤病理診斷和普查較常用方法。

?特點：簡便、快速、無創(chuàng)傷，可反復(fù)多次檢查。

?對于腫瘤，只做初步診斷，確診依據(jù)活體組織學(xué)檢查。常規(guī)細(xì)胞病理學(xué)技術(shù)

一、取材、涂片制備

痰涂片、胸水、腹水及尿液制片

二、固定

三、染色(巴氏染色)

常用固定液

（1）等量95%乙醇和乙醚混合液（2）氯仿酒精固定液（3）95%酒精固定液（4）福爾馬林固定液

細(xì)胞學(xué)研究，固定液選擇要根據(jù)實驗要求條件而定，如用細(xì)胞涂片作原位PCR，固定液要選用多聚甲醛。

巴氏染色步驟

1．標(biāo)本95％酒精固定3-5分鐘 2．Harris蘇木素液5-10分鐘

3．水（蒸餾水或自來水）漂洗2-3次 4．1％鹽酸水溶液（或1％鹽酸酒精液）

浸1-3次

5．自來水浸洗1-2次

6．自來水或稀碳酸鋰（100ml蒸餾水中加碳酸鋰飽

和液1滴），涂片返藍(lán)為止

7．依次置入70％→80％→95％酒精，各2分鐘

8．桔黃G6液，1分鐘

9．95％酒精Ⅰ、Ⅱ缸，各1分鐘 10．EA36液，5分鐘

11．95％酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 各1分鐘 12．無水酒精Ⅰ、Ⅱ，各1分鐘 13．二甲苯Ⅰ、Ⅱ，各2分鐘 14．中性樹膠蓋片封固

涂片制備 ?注意要點：

1.涂片動作要輕柔；

2.涂片要均勻，不易太厚或太薄； 3.涂片時要避免來回摩擦損壞細(xì)胞。

?適宜的涂片是涂片的細(xì)胞占玻片的2/3，在鏡下每個視野內(nèi)都布滿細(xì)胞，間隙很小。涂片固定 ?1.濕固定法:

即趁標(biāo)本新鮮而濕潤時即投入固定液內(nèi)，這種標(biāo)本染色后，染色鮮艷，結(jié)構(gòu)清楚。

常用于痰液涂片、陰道涂片、宮頸涂片、穿刺涂片、食管拉網(wǎng)術(shù)涂片等。?2.干燥固定法：

即等待涂片自然或吹風(fēng)機吹干后在固定。?固定液：95%酒精

?固定時間：10--20分鐘 ?染色方法：常規(guī)HE染色

第九章 大體標(biāo)本制作有關(guān)知識 ?1.大體標(biāo)本的收集

通過尸體解剖和活體組織（包括外科手術(shù)切除標(biāo)本和活體組織穿刺標(biāo)本〕檢查時發(fā)現(xiàn)并收集。

?2.大體標(biāo)本的取材：

越新鮮越好

3.大體標(biāo)本的固定

?1〕固定的目的：

將受檢組織盡快地侵入固定液內(nèi)，使組織和細(xì)胞的固有成分迅速凝固，防治自溶和腐敗，使其保持與生活狀態(tài)有相似的結(jié)構(gòu)，以利于切片和觀察。

?2〕固定液的選擇：

A.甲醛（Fomaldehyde〕，又稱福爾馬林，其濃度在4％，它是一種還原劑，極易揮發(fā)，散發(fā)出強烈的刺激性氣體，使人流鼻涕、流眼淚，呼吸道有異物感。B.95％酒精（乙醇〕，除具有固定組織的作用外，尚有脫水作用 3.大體標(biāo)本的固定 ?固定要求：

1.固定后達(dá)到防腐的目的；

2.能長期保存組織原有的體積和特色；

3.標(biāo)本自然顏色長期保存后再做組織切片也不影響染色效果 ?一般用10%甲醛溶液固定，不易用有色的混合固定液。

2.動物標(biāo)本取材:

①動物致死法

麻醉法,空氣栓塞法,斷頭法,擊頭法,股動脈放血法等,要求動作迅速,及時解剖,取材與固定

②動物取材注意事項:

準(zhǔn)備好鋒利的刀剪,固定液,取材應(yīng)新鮮,最好是心臟還在跳動時取材,并立即投入固定液.組織塊厚度不超過3mm(應(yīng)將組織上的血液,滲物,粘液糞便等用生理鹽水沖洗干凈,選好組織塊的切面,切除不需要的部分,再固定),應(yīng)盡可能維持組織原形,對神經(jīng)肌肉皮膚組織,可將其兩端固定在木板或硬紙板上,然后再固定.用化學(xué)反應(yīng)原理，在切片上滴加某種化學(xué)試劑，使之與組織或細(xì)胞中的生物化學(xué)物質(zhì)結(jié)合，再用顯色劑使之顯色，達(dá)到定位、定性地顯示組織或細(xì)胞中的某種物質(zhì)成分，這種技術(shù)稱為組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。其結(jié)果可用顯微鏡和電鏡觀察。結(jié)合定量病理學(xué)技術(shù)，還可對有關(guān)成分定量。

? 糖類 ? 脂類

? 核酸

? 酶類

? 膠原纖維 ? 彈力纖維 ? 神經(jīng)纖維

? 細(xì)胞膜、核膜結(jié)構(gòu)

概念：免疫組織化學(xué)技術(shù)是指利用已知的抗

體與組織中相應(yīng)的抗原結(jié)合，并利用

顯色劑在原位將抗原物質(zhì)顯示出來 原理：抗原＋抗體＋顯色劑

特點：在組織中原位顯示某種特異性抗原 常用顯色劑種類：酶、金屬粒子、同位素

生物素、化學(xué)顯色劑（DAB）結(jié)果觀察：顯微鏡、透射電鏡

抗 原

←

組織中

+

抗 體

←

試劑

↓

抗原抗體復(fù)合物

+

第二抗體

← 標(biāo)記有顯色底物

↓

顯色反應(yīng)

← 顯色劑(DAB)

第四篇：病理-病理科技術(shù)員職責(zé)

病理科技術(shù)員職責(zé)

主任技師職責(zé)

(1)負(fù)責(zé)制訂病理技術(shù)室的建設(shè)及發(fā)展規(guī)劃。

(2)負(fù)責(zé)病理新技術(shù)的開發(fā)及應(yīng)用。

(3)精通各項技術(shù)室工作并指導(dǎo)各項技術(shù)工作，解決各種疑難技術(shù)問題。

(4)組織技術(shù)室人員學(xué)習(xí)，提高業(yè)務(wù)能力。

(5)負(fù)責(zé)制訂進修技術(shù)人員的培訓(xùn)計劃，具體落實安排及指導(dǎo)。

(6)組織技術(shù)室開展科研工作及參加科內(nèi)外科研工作。

(7)在科主任領(lǐng)導(dǎo)下負(fù)責(zé)儀器、設(shè)備、試劑等的選購工作。

(副主任技師按分工履行主任技師崗位職責(zé)的相應(yīng)部分)主管技師職責(zé)

(1)獨立承擔(dān)合格的常規(guī)切片、冷凍切片及涂片制作。(2)獨立承擔(dān)20項以上組織化學(xué)染色工作。(3)獨立開展免疫組化技術(shù)工作。

(4)協(xié)助上級技師承擔(dān)輔導(dǎo)進修技術(shù)人員的教學(xué)工作。(5)在上級技師指導(dǎo)下，獨立開展或參加有關(guān)科研工作。

(6)參加巨檢及尸檢記錄工作，協(xié)助醫(yī)師做好臨床病理討論會前的準(zhǔn)備工作。(7)在主治醫(yī)師指導(dǎo)下，承擔(dān)或參加大體標(biāo)本攝影及大體標(biāo)本制作工作。(8)承擔(dān)儀器的維修、保養(yǎng)工作。

(9)在沒有主任技師的科室，力所能及地承擔(dān)主任技師的相應(yīng)工作。技師職責(zé)

(1)獨立承擔(dān)合格的常規(guī)切片、冷凍切片及涂片制作。(2)在上級技師指導(dǎo)下，參加或承擔(dān)部分主管技師的工作。

(3)在沒有專職檔案管理員、文秘相應(yīng)編制的科室，應(yīng)根據(jù)實際需要分別承擔(dān)下述任務(wù)： 收費、資料歸檔、各項登記工作、診斷報告書的打印及發(fā)送等。

第五篇：病理技術(shù)員崗位工作職責(zé)

技術(shù)員崗位工作職責(zé)

一、病理技術(shù)員必須具備良好的職業(yè)道德、高度的責(zé)任感和嫻熟的操作技能。

二、每位技術(shù)員要認(rèn)真學(xué)習(xí)各種儀器設(shè)備的使用與維護，要以主人翁精神愛惜各類儀器設(shè)備，杜絕任何損害儀器設(shè)備的操作和行為。

三、技術(shù)員要謹(jǐn)慎細(xì)致地處理好制片過程中每一環(huán)節(jié)。不允許粗心大意，以免張冠李戴，貽誤病人。

四、技術(shù)員要及時更換和配制好各類有關(guān)：工作液，確保標(biāo)本處理質(zhì)量。

五、技術(shù)員要與診斷醫(yī)師密切協(xié)作，共同處理標(biāo)本制作過程中出現(xiàn)的各種問題。不允許單方面一味推卸責(zé)任，以免損害病人利益。

六、技術(shù)員要嚴(yán)格把好切片質(zhì)量關(guān)，進修及實習(xí)人員未經(jīng)考核合格者，不得單獨制片和擅自操作各種貴重儀器。