第一篇：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范

題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼1/13

病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范

一、病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)規(guī)范：

凡新入我科的病理技術(shù)員均需進行免疫組化理論知識的學(xué)習(xí)、培訓(xùn)，經(jīng)考核合格、具備病理技術(shù)員技士資質(zhì)后方能從事免疫組織化學(xué)染色。

二、病理科免疫組織化學(xué)染色操作規(guī)范 1.免疫組織化學(xué)染色前的準備事項(一)組織切片的制備

常規(guī)切片脫蠟至水（組織固定需用10%中性甲醛）(二)抗體的選擇、稀釋和保存

（1）選擇抗體應(yīng)先了解其反應(yīng)譜和適用條件〔包括適用切片(石蠟切片抑或冷凍切片)、稀釋度和溫育時間等〕。

（2）對于未曾使用過的新抗體，應(yīng)按照有關(guān)說明書的提示，以幾個不同的稀釋度對適宜檢材(已知陽性切片/涂片)進行預(yù)試驗;根據(jù)染色陽性表達的程度和檢材背景著色程度，確定用于染色的最適稀釋度（3）抗體的原液應(yīng)于分裝后置于一20℃冷室中保存，切勿反復(fù)凍存(以免效價 降低)。（4）抗體的工作液可置于4℃冰箱中保存。（5）抗體的稀釋。

(1)一般用0.01M PBS(生理鹽水磷酸鹽緩沖液)，pH值7.2。(2)或用0.05M TBS(生理鹽水三經(jīng)基氨基甲烷緩沖液)，pH值7.6。(3)必要時可按需要加適量小牛血清清蛋白。(三)被檢測組織內(nèi)抗原的修復(fù)

（1）經(jīng)4%中性甲醛之類含醛基固定劑固定的組織，其切片中的抗原決定簇因醛的交聯(lián)作用而被封閉，從而影響抗原一抗體反應(yīng)。進行免疫組織化學(xué)染色前，對于組織切片進行抗原修復(fù)處理，會使組織中的固有抗原盡量多地暴露出來，提升了大部分檢測抗體的陽性率和反應(yīng)強度。有的抗體不需要進行抗原修復(fù)。應(yīng)按抗體試劑說明書的提示決定是否進行被檢測組織內(nèi)的抗原修復(fù)。（2）抗原修復(fù)緩沖液。

(l)一般為0.01M檸檬酸緩沖液(2.1g檸檬酸溶于100ml蒸餾水中，用2M NaOH調(diào)節(jié)pH值至6.0)。(2)有些抗體需要特殊修復(fù)緩沖液，如高PH值的EDTA(50mM Tris.，10mM EDTA，pH9.0)，或商品化的該高題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼2/13

pH修復(fù)液等。

（3）抗原修復(fù)的常用方法。(l)胰蛋白酶消化法: ①組織切片脫蠟、水化。

②滴加一滴0.1%胰蛋白酶液于組織切片上。

③37℃下溫育20-40min(溫育時間取決于組織經(jīng)4%中性甲醛固定時間的長短和被檢測抗原)。

④蒸餾水沖洗，終止反應(yīng)。

⑤阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

⑥進行免疫組織化學(xué)染色。（配制0.1%胰蛋白酶液時，應(yīng)將0.1g胰蛋白酶溶于0.1%無水氯化鈣水溶液(pH值7.8)中。）

（2)胃蛋白酶消化法: ①組織切片脫蠟、水化.②滴加胃蛋白酶工作液于組織切片上。

③37℃下溫育10-30min(一般為10min，可延至30min，取決于組織經(jīng)4%中性甲醛固定時間的長短).④浸人蒸餾水，終止反應(yīng)。

⑤進行免疫組織化學(xué)染色。用1%胰蛋白酶液37℃下處理20min。(應(yīng)以 0.1M HCI配制胃蛋白酶工作液。過度的胃蛋白酶消化會使組織結(jié)構(gòu)破壞、切片 脫落。)（3)微波修復(fù)抗原法: ①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。

②將組織切片置于容器(塑料盒或玻璃缸)中，并向其中加人抗原修復(fù)液 200ml，蓋上具有小孔的蓋子。

③將該容器置于微波爐(705-800W)中央加熱(95℃)5min，2次(于兩次之間，應(yīng)向容器中添加蒸餾水50ml，嚴防組織切片干燥)。

④將該容器移出微波爐，置于室溫下冷卻15-20min。

⑤蒸餾水沖洗。

⑥阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。

⑦用TBS或 PBS液沖洗。

⑧進行免疫組織化學(xué)染色。(4)熱水浴法: 題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼3/13

①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。

②向裝組織切片的容器加人足量(例如200ml)抗原緩沖液，置于水浴鍋中，加熱至95-99℃(不沸騰)預(yù)熱。

③將組織切片插人已預(yù)熱的容器內(nèi)，溫育20-40min。

④將該容器由微波爐移出，置于室溫下冷卻20min。⑤室溫下，用TBS、PBS或水洗。

⑥蒸餾水沖洗。

⑦阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。

⑧用TBS或PBS液沖洗。

⑨進行免疫組織化學(xué)染色。

（5)壓力鍋法: ①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。

②向4-5.5L的不銹鋼壓力鍋中加人抗原修復(fù)緩沖液(約為鍋容積的2/3)，不加閥情況 下加熱至沸騰。

③將組織切片插放于金屬切片架上，并置于壓力鍋內(nèi)沸騰的緩沖液中。

④加閥情況下，將組織切片加壓2min。

⑤壓力鍋自行冷卻或以流水冷卻減壓后，持續(xù)20min。

⑥將冷卻后的切片取出，蒸餾水沖洗后，置于TBS或PBS液中(以免組織切片干燥)。

⑦蒸餾水沖洗。

⑧阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。

⑨用TBS或PBS液沖洗。

⑩進行免疫組織化學(xué)染色。

（四）組織切片中內(nèi)源性酶的阻斷

1.內(nèi)源性過氧化物酶 主要存在于紅細胞、嗜中性粒細胞、單核細胞了嗜酸性粒細胞和組織內(nèi)。阻斷方法:最常用0.3%-0.5%H2O2-甲醇液，作用15-30min，阻斷液必須使用時新鮮配制。由于阻斷內(nèi)源性過氧化物酶常同時導(dǎo)致被測抗原變性(使特異性著色減弱)，而大部分組織不含有內(nèi)源性過氧化物酶，所以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶一般不必作為常規(guī)步驟。必須阻斷內(nèi)源性過氧化物酶時，可安排在第一抗體反應(yīng)后進行，以減少抗原的破壞。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼4/13

2.內(nèi)源性堿性磷酸酶 主要存在于嗜中性粒細胞和內(nèi)皮細胞。阻斷方法:應(yīng)用1M左旋咪唑，作用15-30min。

3.內(nèi)源性生物素 肝、胰、腎等的細胞內(nèi)含有多量生物素或類生物素物質(zhì)。阻斷方法:先將切片浸于卵白素(0.5μg/ml)中15min，以緩沖液洗凈后，移浸于生物素飽和溶液中15min，再用緩沖液洗去多余的生物素飽和液;也可應(yīng)用商供的阻斷試劑盒(按說明書操作)。(五)正常血清保護

作為檢測試劑的抗體蛋白帶有一定的負電荷，免疫組織化學(xué)染色時，易與帶有正電荷的組織〔特別是纖維組織、變性和(或)壞死的細胞、嗜酸性粒細胞等〕發(fā)生靜電吸引而導(dǎo)致非特異性染色。去除這種非特異性染色最有效的方法是，在滴加第一抗體前，先滴加用于制備第二抗體動物的非免疫血清或是滴加除制備第一抗體動物以外的其他動物非免疫血清，濃度為1：5-1：20;必要時可滴加2%-5%牛 血清清蛋白。正常血清保護作用時間10-20min。用于阻斷非特異性結(jié)合的血清不能有明顯的溶血。(六)緩沖液

用于稀釋抗體，洗滌切片的緩沖液主要有兩種。1.TBS(0.05M，pH7.6)，Tris一HCl緩沖液(0.SM，pH 7.6)100ml 8.5%NaCl 100ml 蒸餾水加至 1000ml Tris一HCI緩沖液(0.5M，pH7.6)三經(jīng)甲基氨基甲烷(Tris)61g HCl 37ml 蒸餾水加至 1000ml 2．PBS(0.IM，pH 7.6)Na2 HPO4 · 12H2O2 29g NaH2PO4 · 2H2O 3g NaCl 85g 蒸餾水加至 1000ml 使用時用蒸餾水稀釋10倍即成0.0lM。

二、免疫組織化學(xué)染色常用方法 題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼5/13

(一)直接法 1.脫蠟和水化。

2.3%過氧化氫或0.5%過氧化氫甲醇液，5min。

3.TBS或PBS緩沖液洗滌。4.抗原修復(fù)。

5.無關(guān)動物正常血清(適當稀釋)20-30min。

6.甩去正常動物血清，滴加適當稀釋的辣根過氧化物酶標記抗體，或增強的酶標多聚物一步法(Enhanced Polymer One-step Staining，EPOS)抗體于切片上，20-60min。7.TBS或PBS緩沖液洗滌。

8.0.04%-0.05%DAB(二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸)H2O2液顯色5-10min，鏡下觀察控制顯色時間。底物配法:DAB 40-50mg；0.05M TBS(pH 7.6)l00ml；3% H2O2 100-200ml。9.緩沖液洗，流水洗滌。10.蘇木精淡染細胞核。11.脫水，透明，封片。(二)間接法

l-5步同“直接法”。

6.滴加第一抗體于切片上，濕盒內(nèi)溫育30-60min。7.TBS或PBS緩沖液洗滌。

8.HRP標記抗體或用增強的酶標記多聚物(Enhanced Labeled一 Polymer Sys-tem，ELPS)抗體滴加切片上，濕盒內(nèi)溫育30min。9-14步同“直接法”的7-11步。(三)過氧化物酶一抗過氧化物酶(PAP)法 1-5步同直接法。

6.適當稀釋的第一抗體，濕盒內(nèi)溫育30-60min。7.緩沖液洗滌。

8.第二抗體，濕盒內(nèi)溫育30min。9.緩沖液洗滌。

10.滴加PAP，濕盒內(nèi)溫育30min。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼6/13

11-15步同“直接法”的7-11步。

雙PAP法:上述操作進行到第10步后，再重復(fù)7-10步1次，然后繼續(xù)11-15步。(四)葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫酶法 1-5步同“直接法”。

6.第一抗體，濕盒溫育30-60min。7.緩沖液洗滌。

8.酶聯(lián)SPA，濕盒溫育30min。9.緩沖液洗滌。

10-13步同“直接法”的8-11步。(五)ABC法和SABC法

ABC法是卵白素-生物素-酶復(fù)合物(Avidin--Biotin--Peroxidase Complex)法的簡稱。SABC法是鏈霉卵白素-生物素-酶復(fù)合物(Streptavidin一Biotin一peroxidase Complex)法的簡稱。l-5步同“直接法”。

6.第一抗體，濕盒溫育30-60min.7.緩沖液洗滌。

8.生物素化的第二抗體，30min。9.緩沖液洗滌。

10.ABC復(fù)合物或SABC復(fù)合物(皆于使用前新鮮配制)，30-60min。11-15步同“直接法”7-11步。(六)LSAB(SP)法

LSAB(SP)法，是標記的鏈酶卵白素-生物素(Labeled Streptavidin--Biotin)法的簡稱，操作步驟同“ABC法”，只是以LSAB復(fù)合物替代ABC復(fù)合物。(七)CSA法

CSA法是催化信號放大(Catalyzed Signal Amplifieation)法的簡稱。1-5步同“直接法”。6.第一抗體，15-30min。7.緩沖液洗滌。

8.生物素標記的第二抗體，15-30min。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼7/13

9.緩沖液洗滌。

10.鏈霉卵白素-生物素-HRP復(fù)合物(用前新鮮配制)，15min。11.緩沖液洗滌。12.放大液，15min。13.緩沖液洗滌。

14.HRP-StrePtavidin，15min。15-19步同“直接法”的7-11步。(八)二步法Envision System Envision是通過一個多聚葡聚糖骨架聯(lián)接成一個多聚體。1-5步同“直接法”。6.第一抗體，30-60min。7.緩沖液洗滌。

8.Envision TM，10-30min。9-13步同“直接法”的7-11步。(九)雙重免疫組織化學(xué)法.Sequential(1)鼠或兔抗體1，30-60min。

(2)Envision TM，羊抗鼠/羊抗兔/HRP，30 min。(3)DAB(棕色)，2-10 min。(4)鼠或兔抗體2，30-60 min。

(5)Envision TM，羊抗鼠/羊抗兔/AP，30 min。(6)AP(紅色)。2.Simnl一Aaneous(1)混合鼠抗體1和兔抗體2，4℃，過夜或60 min。(2)Envision TM羊抗鼠/HRP和羊抗兔/AP。(3)AP染色。(4)HRP染色。

上述方法除注明溫度者外，均可在室溫(20-25℃)環(huán)境中進行;第一抗體溫育后，如有必要可置于4℃題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼8/13

下過夜。

三、免疫組織化學(xué)染色的常用抗體標記物(一)上皮源性標記物 1.一般性標記物

（1）CK(角蛋白)CK亞型:①CK5/6;②CK7;③CK8;④CK10/13;⑤CK18;⑥CK19;⑦CK20。(2)EMA(上皮細胞膜抗原)。

2.特異性和(或)相對特異性上皮標記物

（1）CEA(癌胚抗原，標記胃癌、大腸癌).（2）CA242(腫瘤相關(guān)粘液抗原，標記胰腺癌、大腸癌)。

（3）TG(甲狀腺球蛋白，標記甲狀腺癌).（4）PSA(前列腺特異性抗原，標記前列腺癌)。

（5）PSAP(前列腺特異性酸性磷酸酶，標記前列腺癌).（6）34βE12(標記前列腺底細胞).（7）AFP(甲胎蛋白，標記肝癌、內(nèi)胚竇癌).（8）Hepatoeyte(標記肝細胞癌)。

(9)β-HCG(β-絨毛膜促性腺激素，標記胎盤滋養(yǎng)層細胞腫瘤、生殖細胞腫瘤).（10）CA125(卵巢癌).（二)間葉源性標記物

主要是Vimentin(vim，波形蛋白)等.（三）肌源性標記物 1.Desmin(Des，結(jié)蛋白)2.Actin(肌動蛋白）.3.SMA(平滑肌肌動蛋白).4.MSA(肌特異性肌動蛋白).5.Myosin(肌球蛋白).6.Myoglobin(MG，肌紅蛋白)7.Myogen(肌漿蛋白).題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼9/13

8.MyoDI(肌調(diào)節(jié)蛋白).(四)血管源性標記物 FⅧRAg(第8因子相關(guān)抗原).CD31 CD34 UEA-l BNH9.(五)組織細胞源性標記物 1.CD68/KP-l.2.Lysozyme(溶菌酶)。3.a1-AT(a1-抗胰蛋白酶).4.a1-ACT(al-抗胰糜蛋白酶)5.Mac387.淋巴造血組織源性標記物 1.全淋巴細胞

(1)CD45/LCA(白細胞共同抗原）。(2)TdT(末端脫氧核昔酸轉(zhuǎn)移酶)。(3)CD30/Ki-1。2.全B細胞(1)Igκ。(2)Igλ。(3)CD20/L26。(4)CD79a。

(5)BLA36(B淋巴細胞抗原)。3.B細胞亞型(1)CDl0。

(2)CD21(標記濾泡性樹突狀細胞)。(3)CD23。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼10/13

(4)CD35(標記濾泡性樹突狀細胞)。(5)CD38.4.全T細胞(1)CD3。(2)CD5。(3)CD43。(4)CD45RO/UCHL-1.5.T細胞亞型(1)CDla。(2)CD4。(3)CD8。6.NK細胞(1)CD56。(2)CD57/Leu-7。(3)CD16/Leu-11。7.粒細胞和單核巨噬細胞(1)CD11c/LeuM5。(2)CD15/LeuM5。(3)Lysozyme(溶菌酶)。(4)al-AT(al-抗胰蛋白酶)。(5)al-ACT(al-抗胰糜蛋白酶)。(6)CD68.(7)S-100蛋白.(8)Mac387。8.其他

(1)EMA(上皮細胞膜抗原).(2)CD99(尤因肉瘤標記物).(3)ALK-l(間變性淋巴瘤激酶)。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼11/13

(4)HLA-DR。(5)Bel-2。(6)Bel-6。(7)Bel-10。(8)Ki-67。

(9)CyclinD1(周期素D1)。(10)CD25。

(11)CD34。

（七）神經(jīng)源性標記物 1.S-100蛋白.2.NSE（神經(jīng)原特異性烯醇化酶）.3.Leu7。

4.Neurofilament(NF，神經(jīng)微絲蛋白)。5.GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白）

（八）神經(jīng)內(nèi)分泌源性標記物 1.激素標記物(1)CA(兒茶酚胺)。(2)5-HT(5-經(jīng)色胺).(3)垂體激素。

①GH(促生長素)。

②PRL(催乳素)。

③ACTH(促腎上腺皮質(zhì)激素).④TSH(促甲狀腺素).⑤FSH(促濾泡素).⑥LH(促黃體素)。(4)甲狀腺。

①TG(甲狀腺球蛋白)。

②CT(降鈣素)。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼12/13

(5)甲狀旁腺:PTH(甲狀旁腺素)。(6)胰島。

①Insulin(胰島素)。

②Glueagon(胰高糖素)。

③VIP(舒血管腸肽).④PP(胰多肽).⑤Someitostatin(生長抑素)。

⑥Gastrin(胃泌素)。2.非激素標記物

(1)NSE(神經(jīng)原特異性烯醇化酶).(2)CgA(嗜鉻素A).(3)SY(突觸素).3.激素受體

（1）ER(雌激素受體）.（2）AR(雄激素受體）.（3）PR(孕激素受體).(九)細胞增殖標記物 1.PCNA(增殖細胞核抗原).2.Ki-67.（十）黑色素標記物 1.S-100蛋白.2.HMB45.3.Melanoma。

(十一）癌基因和（或）抑癌基因 1.bel-2.2.c-erbB-2.3.p53 4.p16(多腫瘤抑制基因)。題目：病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本號1.0 修改日期： 頁碼13/13

5.nm23。(十二)病原體標記物

1.Myoeobaeterium Bovis(分枝桿菌，抗卡介苗)。2.HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原).3.HBcAg(乙型肝炎病毒核心抗原).4.HPV(人乳頭狀瘤病毒)5.HTLV-1(人類T細胞白血病病毒)。

第二篇：病理科操作規(guī)范及流程

病理標本的驗收規(guī)范及流程

病理科應(yīng)有專人驗收普通活體組織病理學(xué)檢查(常規(guī)活檢)申請單和送檢的標本。

(二)病理科驗收人員必須：

1． 同時接受同一患者的申請單和標本。

2． 認真核對每例申請單與送檢標本及其標志（聯(lián)號條或其他寫明患者姓名、送檢單位和送檢日期等的標記）是否一致；對于送檢的微小標本，必須認真核對送檢容器內(nèi)或濾紙上是否確有組織及其數(shù)量。發(fā)現(xiàn)疑問時，應(yīng)立即向送檢方提出并在申請單上注明情況。3．認真檢查標本的標志是否牢附于放置標本的容器上。

4．認真查閱申請單的各項目是否填寫清楚，包括：①患者基本情況［姓名、性別、年齡，送檢單位（醫(yī)院、科室）、床位、門診號/住院號、送檢日期、取材部位、標本數(shù)量等］，②患者臨床情況［病史（癥狀和體征）、化驗/影象學(xué)檢查結(jié)果、手術(shù)（包括內(nèi)鏡檢查）所見、既往病理學(xué)檢查情況（包括原病理號和診斷）和臨床診斷等］。5．在申請單上詳細記錄患者或患方有關(guān)人員的電話號碼，以便必要時進行聯(lián)絡(luò)，并有助于隨訪患者。

(三)驗收標本人員不得對申請單中由臨床醫(yī)師填寫的各項內(nèi)容進行改動。

不合格標本的處理規(guī)范與程序

1． 申請單與相關(guān)標本未同時送達病理科；

2．申請單中填寫的內(nèi)容與送檢標本不符合； 3．標本上無有關(guān)患者姓名、科室等標志； 4．申請單內(nèi)填寫的字跡潦草不清； 5．申請單中漏填重要項目； 6．標本嚴重自溶、腐敗、干涸等； 7．標本過小，不能或難以制做切片；

8．其他可能影響病理檢查可行性和診斷準確性的情況。

病理科不能接收的申請單和標本一律當即退回申請醫(yī)師，不予存放，并記錄。病理標本檢查和取材規(guī)范及程序

1.取材前閱讀申請單中的內(nèi)容，初步判斷病變的性質(zhì)。2.核對申請單的編號與標本的編號、標本的份數(shù)是否相符。３.對于核對無誤的標本應(yīng)按下列程序取材：

３.１小標本和不完整的標本通常為活檢標本，應(yīng)按如下標準取材。

３.１.1應(yīng)描述和記錄送檢標本的數(shù)量（少量時精確計算，多量時進行估計）、大?。ㄈ舾蒻m或cm；多量時聚攏測量）、形狀、色澤和質(zhì)地等。

３.１.2少量的小標本應(yīng)全部取材制片。

３.１.３多量的小標本，原則上全部取材制片；數(shù)量過多時，可盡量多地取材制片，剩余的標本應(yīng)置于4%的中興甲醛中妥善保存?zhèn)溆谩?/p>

３.１.４.黏膜和皮膚組織應(yīng)“立埋”，即將黏膜面與包埋盒的 底面垂直。

３.１.5使用鑷子夾取標本時須嚴防擠壓組織。３.２大標本通常為手術(shù)標本，應(yīng)按如下標準取材：

３.２.1 記錄切除標本的手術(shù)類型。

３.２.2應(yīng)描述和記錄送檢標本的大?。ㄈS長度，mm或cm）、形狀、色澤、表面、質(zhì)地等，球形或接近球形的標本可測其直徑（mm或cm）。必要時稱重（g或kg）。

３.２.3檢查切面：通常沿標本長徑切開或剪開（囊性標本時），3 描述和記錄其形狀特點，例如囊性和實性及其所占比例、色澤、質(zhì)地、紋理、壞死；囊腫壁的厚度及其內(nèi)外表面、囊腔內(nèi)容物及其性狀等，有的臟器，例如前列腺、胰腺、甲狀腺等，應(yīng)間隔一定距離（甚至間距2mm左右）做多個平行切面，檢查有無微小腫物。

３.２.4帶有臟器的標本，應(yīng)描述和記錄病變處與有無臟器的毗鄰關(guān)系特點。

３.２.5必要時，繪簡圖說明巨檢病變的特點和解剖學(xué)關(guān)系，病注明取材部位的編號，以便鏡檢時定位。

３.２.6切取有代表性病變區(qū)域的組織制片，適量包括與病變區(qū)域毗鄰的“正?！苯Y(jié)構(gòu)和壞死組織等。

３.２.7完整切除的腫瘤標本，切取的組織塊應(yīng)包括其包膜，較

大的腫瘤應(yīng)酌情多處包膜取材。

３.２.8切取組織塊的刀具必須鋒利，嚴防擠壓組織。３.２.9切取組織塊的數(shù)量，依巨檢病變的具體情況酌定，一般以滿足診斷需要為準。組織塊的面積，通常在2cmx1.5cm以內(nèi)，厚度不宜超過3mm（快速包埋制片時則應(yīng)盡量薄些）。

３.２.10組織塊的切面應(yīng)平整。需要指定組織塊的包埋面時，可將其非包埋面切出凹痕作為標記。管壁和囊壁組織應(yīng)立埋。

４.標本攝影，必要時酌情進行（標本固定前或固定后）。５.切取組織塊的編號、數(shù)量和取材后是否尚有標本存留等均應(yīng)在活檢記錄單的肉眼檢查描寫欄內(nèi)和取材工作單中注明，以便鏡檢時核對切片。例如，1.組織較少，全部包埋制片者，可注明“全”字；2.針吸、內(nèi)鏡取材或少量易碎的組織，須用軟紙妥善包裹（以防制片過程中丟失），可注明“包”字；3.取材后尚有存留的標本，可注明“留”字等。

６.需要重新肉眼檢查標本時，應(yīng)在有關(guān)病例活檢記錄單中補充必要的文字描述，需要補充切取組織塊時，應(yīng)按上述取材操作程序進行，并應(yīng)在相關(guān)活檢記錄單、取材工作單中和編號小條上注明“補”字。常規(guī)石蠟包埋組織切片規(guī)范及程序

１.脫水（常溫下）

3.2.1乙醇-甲醛（AF）液固定：60~120min。3.2.2 80%乙醇：60~120min。3.2.3 95%乙醇Ⅰ：60~120min。3.2.4 95%乙醇Ⅱ：60~120min。3.2.5 無水乙醇Ⅰ：30~60min。3.2.6無水乙醇Ⅱ：30~60min。3.2.7無水乙醇Ⅲ：30~60min。２.透明

a..二甲苯Ⅰ：20 min。b.二甲苯Ⅱ：20 min。c.二甲苯Ⅲ：20 min。

３.浸蠟

3.3 石蠟Ⅰ（45~50℃）：60 min。3.4 石蠟Ⅱ（56~58℃）：60 min。3.5 石蠟Ⅲ（56~58℃）：60 min。4 包埋

４.１先將熔化的石蠟傾入包埋模具中，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子輕輕夾取已經(jīng)浸蠟的組織塊，使組織的最大面或被特別指定的組織面埋入熔蠟中，應(yīng)將組織塊平整地置放于包埋模具底面的中央處。包埋于同一拉塊的多塊細小組織應(yīng)彼此靠近并位于 同一平面上；腔壁、皮膚和黏膜組織必須垂直包埋（立埋）。４.２將與組織塊相關(guān)的病理號小條置入包埋模具內(nèi)熔蠟的一側(cè)。

４.３待包埋模具內(nèi)的熔蠟表面凝固后，即將模具移入冷水中加速凝固。

４.４從包埋模具中取出凝固的包埋蠟塊（簡稱蠟塊），用刀片去除組織塊周圍的過多石蠟（組織周圍保留1~2mm石蠟為宜）。將包埋蠟塊修整成為規(guī)則的正方形或長方形。

４.５將病理號小條牢固地烙貼在蠟塊一側(cè)（編號應(yīng)清晰可見）。４.６把修整好的蠟塊烙貼在支持器上，準備切片。４.７使用包埋機的方法按有關(guān)廠商的說明書操作。5 切片

5.1 切片刀或一次性切片刀必須鋒利。5.2 載玻片必須潔凈、光亮。

5.3 將切片刀或刀片安裝在持刀座上（以150為宜）。

5.4 細心移動刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。

5.5 修塊（粗切）。用右手勻速旋轉(zhuǎn)切片機輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊完整地全部切到。修塊粗切片的厚度為15~2μm。

5.6 調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為4~6μm），進行切片。5.7 以專用小鑷子輕輕夾取完整、無刀痕、厚薄均勻的蠟片放入 伸展器的溫水中（45℃左右），使切片全面展開。

5.8 將蠟片附貼于載玻片上。蠟片應(yīng)置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，留出載玻片左（或右）1/3的位置用于貼附標簽。蠟片與載玻片之間無氣泡。

5.9 必須立即在置放了蠟片的載玻片一端，用優(yōu)質(zhì)記號筆或刻號筆準確、清楚地標記其相應(yīng)的病理號。

5.10 將置放了蠟片的載玻片呈45℃斜置片刻；待載玻片上的水分流下后，將其置于烤箱中烘烤（60~62℃，30~60min），然后即可進行染色。

5.11 內(nèi)鏡小的活檢，穿刺等組織需連續(xù)切片不少于６片。5.12 針對不同組織（如小活檢，骨組織，淋巴結(jié)等），優(yōu)化制片，染色流程，保證切片質(zhì)量。術(shù)中快速冰凍切片的規(guī)范及程序

１.冰凍切片的制備

１.１打開照明開關(guān)，打開冰凍切片機的玻璃箱蓋。１.2選擇凍頭，在凍頭滴上冰凍切片機包埋劑適當。１.3 待組織完全冷凍后，將凍頭移到切片刀口的凍口內(nèi)，扭緊凍頭，進行切片，切片時有節(jié)奏的來回推動搖手柄，切得完整且較薄的切片（厚度8-9um），即可貼在玻璃片上。

１.4 將切好的片子用95%的乙醇固定，然后進行染色、封片、鏡檢（同石蠟切片H-E染色步驟）。

１.5 工作完畢后將凍頭上組織取出，放回送檢的標本袋內(nèi)，用10%的中性甲醛固定液固定。

１.6清掃切冰凍切片機箱，將凍頭擦干后放回冰凍切片機內(nèi)。

１.7關(guān)好冰凍切片機的玻璃箱蓋，關(guān)閉照明電源。２.冰凍切片機須24h開機，長假或節(jié)假日前檢查切片機箱內(nèi)的結(jié)凍情況，必要時關(guān)機，化霜，清潔冰凍切片機。３.注意事項

３.1 制作冷凍切片所需的試劑和設(shè)備等應(yīng)處于隨時可供使用狀態(tài)。

３.2 切取的組織塊大小適宜（厚度<2mm），并盡快置于冷凍組織切片機上制備切片。

３.3 調(diào)節(jié)冷凍程度，試切合合適時便迅速切片。冷凍不足無法切片，冷凍過度切片易碎。

３.4 冷凍切片固定液

95%乙醇

50ml ４.單體標本的冰凍制片應(yīng)在１５min內(nèi)完成。術(shù)中快速冰凍診斷的規(guī)范及程序

１.臨床醫(yī)師在術(shù)前向患者或近親屬告知術(shù)中快速病理診斷的局限性，簽署術(shù)中快速病理診斷知情同意書。

２.從標本接收到發(fā)出報告的時間，應(yīng)在病理申請單上注明。３.有條件的由兩位中／高級稱職的病理醫(yī)師共同簽署快速活檢的病理診斷意見。對于病變疑難、手術(shù)切除范圍廣泛和會嚴重致殘的手術(shù)中快速活檢，應(yīng)由兩位高級稱職的病理醫(yī)師共同簽署會診意見。主檢病理醫(yī)師簽名的字跡應(yīng)能辨認。

４.快速活檢診斷意見一般在收到送檢標本后３０min內(nèi)發(fā)出；同一時間段內(nèi)相繼收到的多例患者標本或是同一例患者的多次標本，其發(fā)出報告的時間依次類推。對于疑難病變，可酌情延時報告。５.對于難以即時快速診斷的病變（例如病變不典型、交界性腫瘤病變或送檢組織不足以明確診斷等），主檢病理醫(yī)師應(yīng)向手術(shù)醫(yī)師說明情況，恰如其分地簽發(fā)病理診斷意見或告知需要等待常規(guī)石蠟切片進一步明確病理診斷。

６.主檢病理醫(yī)師簽署的快速活檢病理診斷意見，以書面形式報告（可傳真或網(wǎng)絡(luò)傳輸）。快速活檢病理診斷意見報告書發(fā)出前應(yīng)認真核對無誤。

７.冷凍切片后剩余組織的處理

７.１ 冷凍切片后剩余的冷凍組織（簡稱 “凍后”）和冷凍切片取材后剩余、未曾冷凍的組織（簡稱“凍剩”），均應(yīng)保存，用以制備常規(guī)石蠟切片，以便與冷凍切片進行對照觀察。７.２“凍后”／“凍剩”組織的蠟塊和切片需與同一病例手術(shù)后送檢的切除標本編為同一病理號，并作出綜合性診斷。

７.３當冷凍切片病理診斷意見與其“凍后”組織的常規(guī)石蠟-HE片的病理診斷不一致時，該例的病理診斷一般應(yīng)以石蠟-HE片診斷為準。常用特殊染色的操作規(guī)范

膠原纖維染色

Van Gieson(VG)苦味酸-酸性品性紅法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片脫蠟至水。

3、用Weigrt鐵蘇木精液染5-10min。

4、流水稍洗。

5、1%鹽酸-乙醇迅速分化。

6、流水沖洗5-10min。

7、用Van Gieson液染1-2min。

8、傾去染液，直接用95%乙醇分化和脫水。

9、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 膠原纖維呈鮮紅色。細胞質(zhì)、肌纖維和紅細胞呈黃色，胞核呈藍褐色。Maasson三色法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中。用Bouin液或Zenker固定時，流水沖洗組織塊過夜，效果更好。常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片脫蠟到水。組織塊經(jīng)Zenker液固定時應(yīng)對切片進行除汞處理：（1）切片脫蠟后，以0.5%碘乙醇作用10min；（2）稍水洗；（3）以5%硫代硫酸鈉作用5min；（4）流水沖洗10min。

3、gert鐵蘇木精液染5-10min。

4、流水沖洗。

5、1%鹽酸-乙醇分化。

6、流水沖洗5-10min。

7、麗春紅酸性品紅液染5-10min。

8、蒸餾水稍洗。

9、1%磷鉬酸水溶液處理約5min。

10、不用水洗，直接用苯胺藍液復(fù)染5min。

11、0.2%冰醋酸處理1min。

12、95%乙醇脫水并洗去冰醋酸。

13、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 膠原纖維呈藍色。細胞質(zhì)、肌纖維和紅細胞呈紅色，胞核呈藍色。

網(wǎng)狀纖維染色

氫氧化銀氨液浸染法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片脫蠟至水。

3、酸化高錳酸鉀液氧化5min。

4、稍水洗。

5、2%草酸水溶液漂白1-2min。

6、稍水洗。

7、2%硫酸鐵銨水溶液媒染5min。

8、稍水洗，再用蒸餾水洗1次。

9、滴加Gordon-Sweet銀氨液，作用1min。

10、蒸餾水稍洗。

11、4%中性甲醛液還原1min。

12、流水沖洗5-10min。

13、以0.2%氯化金調(diào)色1-2min。

14、蒸餾水洗。

15、固定于5%硫代硫酸鈉2min。

16、用核固紅液復(fù)染5-10min或行HE復(fù)染。

17、稍水洗。

18、常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 網(wǎng)狀纖維呈黑色，胞核呈紅色（用核固紅復(fù)染）或（用蘇木精復(fù)染），膠原纖維呈黃棕色，細胞質(zhì)呈淡紅色（用伊紅復(fù)染）。

彈力纖維染色

醛品紅法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片脫蠟至水。

3、用Lugol碘液處理5min。

4、稍水洗。5、5%硫代硫酸鈉處理5min。

6、流水沖洗5min。7、70%乙醇稍洗。

8、醛品紅液浸染10min。9、70%乙醇浸洗2次，每次約30s,至切片不再脫色為止。

10、稍水洗。

11、澄黃基液滴染約1s。

12、稍水洗。

14、常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 彈力纖維呈深紫色，底色為不同程度的黃色。

抗酸桿菌染色

苯酚堿性品紅法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片用汽油松節(jié)油脫蠟2次，每次5-10min。

3、不經(jīng)乙醇洗，只用紗布將切片周圍余液擦干。

4、流水稍洗。

5、滴入苯酚堿性品紅液，于室溫下染15-30min。

6、流水洗去多余染液。

7、有20%硫酸水溶液分化至適當為止。（一般需1-5min）

8、用流水充分沖洗。

9、用Mayer蘇木精淺染細胞核。

10、流水沖洗10-15min。

11、胸風(fēng)扇把切片吹干。隨即二甲苯透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 抗酸（包括麻風(fēng)桿菌和結(jié)核桿菌）呈鮮紅色，胞核呈藍色。

淀粉樣蛋白染色

甲醇剛果紅法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片脫蠟至水。

3、甲醇剛果紅液染10min，傾去余液。

4、用堿性乙醇急速分化約數(shù)秒，鏡下控制。

5、水沖洗5min。

6、蘇木精液淺染細胞核。

7、流水沖洗10min。

8、常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 淀粉樣蛋白呈紅色，細胞核呈藍色。在偏光鏡下，淀粉樣蛋白呈現(xiàn)綠色雙折光。

脂肪染色

蘇丹Ⅲ染色法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中。

2、冷凍切，厚6-10um，如為新鮮組織，須用40%中性甲醛液固定10min，稍水洗后，用60%乙醇稍洗。

3、蘇丹Ⅲ染液浸染1-2min。

4、70%乙醇稍洗去多余染液。

5、流水稍洗。

6、Mayer蘇木精液復(fù)染胞核，必要進用1%鹽酸-乙醇分化。

7、水洗10min，或于稀碳酸鋰水溶液中促藍。

8、阿拉伯糖膠或明膠封蓋。

二、染色結(jié)果 中性脂肪呈猩紅色、橙紅色或橙黃至橙紅色，細胞核呈藍色。

糖原染色

高碘酸-無色品紅（PAS）法。

一、染色程序

1、取新鮮薄片組織，立即用Gendre液固定6-12h或Cornoy液固定3-6h，其間可更換2次固定液，然后轉(zhuǎn)入95%乙醇。

2、無水乙醇按常規(guī)脫水透明，石蠟包埋，切片厚4-5um。

3、取兩張連續(xù)切片，分別作A和B記號，然后把B片脫蠟至水。

4、把B切片置入預(yù)熱至37℃的1%淀粉液，于37℃溫箱內(nèi)消化1h，或用預(yù)熱至37℃的唾液在37℃溫箱消化30min。

5、取出切片稍水洗。

6、在消化過程中，把A片脫蠟至水。

7、在A、B兩片同時滴入0.5%高碘酸水溶液氧化5-8min。

8、流水沖洗2min，再用蒸餾水洗1次。

9、于暗處，無色品紅液加蓋染色10-20min。

10、用0.5%偏重亞硫酸鈉液滴洗2次，每次約1min。

11、流水沖洗2min。

12、1%甲基綠水溶液復(fù)染胞核3-5min，或用Mayer蘇木精液淺染細胞核（必要時用鹽酸乙醇分化，再用流水沖洗）。

13、稍水洗。

14、常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 A片上的細胞質(zhì)呈現(xiàn)亮紅色顆粒為陽性（顯示糖原），經(jīng)消化后B片應(yīng)為陰性。

黏液染色

愛先藍（pH 2.5）法

一、染色程序

1、組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。

2、切片脫蠟至水。

3、愛先藍（pH 2.5）液染10-20min。

4、流水稍洗。

5、核固紅復(fù)染5-10min，或用沙紅染液復(fù)染2-3min。

6、稍水洗。

7、常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。

二、染色結(jié)果 唾液酸黏液和弱硫酸化黏液以及一般黏液均呈藍色，各種強堿酸化黏液不著色或淡染，細胞核呈紅色。免疫組化染色（Envision System）的規(guī)范及程序

1.切片脫蠟水洗：將石蠟切片浸于二甲苯5分鐘，三次。取出切片置于100%無水乙醇中3分鐘，兩次；依次置入90%-70%各級酒精各3分鐘。取出置于蒸餾水中。

2.抗原修復(fù)(根據(jù)一抗說明而定)。

3.取出置于蒸餾水中的切片，甩掉并擦干切片上組織周圍的液體，平放于濕盒中，滴加過氧化酶阻斷劑（通常用3%的過氧化氫）于組織上避光孵育15分鐘。蒸餾水沖洗，再將切片置入TBS緩沖液中，浸泡3分鐘，三次。取出切片，甩掉并擦干切片上組織周圍的液體（組織切勿干燥），平放于濕盒中。

4.滴加50-100毫升一抗工作液于組織上，室溫孵育30分鐘。用TBS液沖洗切片。將切片置入TBS緩沖液中，浸泡5分鐘，三次。取出切片，甩掉并擦干切片上組織周圍的液體（組織切勿干燥），平放于濕盒中。

5.滴加50-100毫升A液于組織上，室溫孵育30分鐘。用TBS液沖洗切片。將切片置入TBS緩沖液中，浸泡5分鐘，三次。取出切片，甩掉并擦干切片上組織周圍的液體（組織切勿干燥），平放于濕盒中。

6.滴加Y預(yù)備好的顯色劑DAB工作液50-100微升，室溫孵育5-10分鐘，或光鏡下控制顯色。顯色完畢后，用蒸餾水沖 洗終止顯色。

7.蘇木精復(fù)染。

8.各級酒精（70%-100%）脫水，每級3分鐘。取出切片置入二甲苯5分鐘，三次。

9.用封片膠封片。

病理診斷的規(guī)范及程序

1.診斷前注意事項

1．1病理醫(yī)師進行診斷前，核對申請單和切片核查是否相符。1.2閱讀申請單上所有填寫的內(nèi)容，對于不清楚的內(nèi)容及時聯(lián)系送檢醫(yī)師。

1.3閱片時必須全面，不要遺漏病變。

1.4疑難病例，應(yīng)由上級醫(yī)師復(fù)核，并簽署全名。1.5因特殊原因遲發(fā)報告，應(yīng)向臨床醫(yī)師說明遲發(fā)的原因。1.6有科內(nèi)疑難病例會診制度（2名以上高級職稱人員參與），并有相應(yīng)的記錄和簽字。

2.病理學(xué)診斷表述的基本類型

2.1 Ⅰ類：檢材部位、疾病名稱、病變性質(zhì)明確和基本明確的病理學(xué)診斷。

2.2 Ⅱ類：不能完全肯定疾病名稱、病變性質(zhì)，或是對于擬診的疾病名稱、病變性質(zhì)有所保留的病理學(xué)診斷意向，可在擬診疾病/病變名稱之前冠以諸如兵變“符合為”、“考慮為”、“傾向為”、“提示為”、“可能為”、“疑為”、“不能排除（除外）”之類的詞語。

2.3 Ⅲ類：檢材切片所顯示的病變不足以診斷為某種疾病（即不能做出Ⅰ類或Ⅱ類病理學(xué)診斷），只能進行病變的形態(tài)描述。

2.4 Ⅳ類：送檢標本應(yīng)過于細小、破碎、固定不當、自溶、嚴重受擠壓（變形）、被燒灼、干涸等，無法做出病理學(xué)診斷。

病理診斷報告書寫的規(guī)范

1.病理學(xué)診斷報告書的基本內(nèi)容

1.1患者的基本情況，包括病理號、姓名、性別、年齡、送檢醫(yī)師或科室（住院或門診）、住院號和門診號、送驗和收檢日期等。1.2巨檢病變和鏡下病變要點描述。1.3與病理學(xué)診斷相關(guān)技術(shù)的檢驗結(jié)果。1.4病理學(xué)診斷的描述。

1.5對于疑難病例或做出Ⅱ、Ⅲ類病理學(xué)診斷的病例，可酌情就病理學(xué)診斷及其相關(guān)問題附加：建議和注釋及討論等。1.6未經(jīng)本病理科和（或）科外病理會診的病例，可將各方病理會診意見列于該例患者的病理學(xué)診斷報告書中。2.病理學(xué)診斷報告書的書寫要求

2.1病理學(xué)診斷報告書的文字表述力求嚴謹、恰當、精練，條理和層次清楚。

2.2病理學(xué)診斷報告書應(yīng)為一式二份，一份交予送檢方，另一份隨同患者的病理學(xué)檢查申請單和病理學(xué)檢查記錄單一并存檔。主檢病理醫(yī)師必須在每一份病理學(xué)診斷報告書上簽名，不能以個人印章代替簽名，不能由他人代為簽名。主檢病理醫(yī)師簽名的字跡應(yīng)能辨認。

2.3手寫的病理學(xué)診斷報告書必須二聯(lián)復(fù)寫，必須文字規(guī)范、字跡清楚，不得潦草、涂改。

2.4手寫和計算機打印的病理學(xué)診斷報告書中的關(guān)鍵性文字，如“癌”、“瘤”、“ 陽性”、“陰性”和數(shù)字等，要認真核對，不得 有誤。

2.5計算機打印的圖文病理學(xué)診斷報告書提供的病變圖象要準確，具有典型（代表）性，放大倍數(shù)適當。

2.6患者的基本情況項目必須嚴格按照送檢臨床醫(yī)師填寫的文字抄寫或用計算機輸錄于病理學(xué)診斷報告書中，并認真核查無誤，簽發(fā)報告書的病理醫(yī)師和病理科的其他人員都不得改動。2.7病理醫(yī)師不得簽發(fā)虛假的病理學(xué)診斷報告書，不得向臨床醫(yī)師和患方人員提供有病理醫(yī)師簽名的空白病理學(xué)診斷報告書。細胞學(xué)診斷的規(guī)范及程序

１.直接表述性診斷：適用于穿刺標本的細胞病理學(xué)診斷報告。根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察的實際情況，對于某種疾病／病變做出肯定性（Ⅰ類）、不同程度意向性（Ⅱ類）細胞學(xué)診斷，或是提供形態(tài)描述性（Ⅲ類）細胞學(xué)診斷，或是告知無法做出（Ⅳ類）細胞學(xué)診斷。[參考本章第一節(jié)的八(一)項：“病理學(xué)診斷表述的基本類型”] ２.間接分級性診斷：用于查找惡性腫瘤細胞的診斷。

Ⅰ級：未見惡性細胞 Ⅱ級：查見核異質(zhì)細胞 Ⅱa：輕度核異質(zhì)細胞 Ⅱb：重度核異質(zhì)細胞 Ⅲ級：查見可疑惡性細胞 Ⅳ級：查見高度可疑惡性細胞 Ⅴ級：查見惡性細胞細胞病理學(xué)診斷報告書的基本內(nèi)容

1.患者的基本情況項目，包括病理號、姓名、性別、年齡、送檢醫(yī)院／科室（住院／門診）、住院號／門診號、送檢／收驗日期等。2.細胞病理學(xué)診斷的表述（參見上項“細胞病理學(xué)診斷報告表述的基本類型”）。

3.必要時或條件允許時，可酌情就細胞病理學(xué)診斷及其相關(guān)問題附加：①某些建議（例如進行其他有關(guān)檢查、再做活檢、病理科外病理學(xué)會診、密切隨查/隨訪等）；②注釋／討論。

4.經(jīng)過本病理科或/和科外病理會診的病例，可將各方的細胞病理學(xué)診斷意見附于該例的細胞病理學(xué)診斷報告書中。病理學(xué)診斷報告書的發(fā)送

1.病理科自接收標本至簽發(fā)該病理學(xué)診斷報告書的時間，一般為3-5個工作日，細胞病理診斷報告一般為2個工作日。

2.由于某些原因延遲取材、制片，或是進行其他相關(guān)技術(shù)檢測，不能如期簽發(fā)病理學(xué)診斷報告書時，應(yīng)以口頭或書面形式告知有關(guān)臨床醫(yī)師或患方，說明遲發(fā)病理學(xué)診斷報告書的原因。

3.病理科應(yīng)有專人發(fā)送病理學(xué)診斷報告書，并有接受人的簽字。4.病理科已經(jīng)發(fā)出的病理學(xué)診斷報告書被遺失時，一般不予補發(fā)；必要時，經(jīng)病理科主任同意可以抄件形式補發(fā)。

顯微鏡操作的標準化程序

1.目的

正確使用顯微鏡。

2.適用范圍

全體病理科工作人員。3.具體操作

3.1將準備觀察的切片放在載物臺上。

3.2調(diào)光：開啟顯微鏡的電源開關(guān)。

3.3對焦：先用粗調(diào)螺旋把低倍物鏡下降至載物片上6cm處，然后上升物鏡，直接看到物象，再用細螺旋把物鏡調(diào)節(jié)到清晰處。

3.4觀察：用低倍鏡觀察組織的一般結(jié)構(gòu)，然后再用高倍鏡進一步觀察，必要時方使用油鏡，再低倍鏡轉(zhuǎn)至高倍鏡觀察時，只要適當轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)即能看到物像。

3.5放置載物片時注意勿把蓋玻片面向下，以免用高倍鏡觀察時因?qū)Σ坏浇裹c而壓破玻片，甚至損壞鏡頭。

3.6觀察顯微鏡物像時應(yīng)養(yǎng)成同時睜開雙眼的習(xí)慣，眼的觀察位置也要適當，即應(yīng)放在眼點處。

3.7用畢應(yīng)將顯微鏡放回木箱或用罩蓋好。

普洱市人民醫(yī)院病理科操作規(guī)范及流程

目錄

1.病理標本的驗收規(guī)范及流程 ????????1-2 2.不合格標本的處理規(guī)范與程序?????????3 3.病理標本檢查和取材規(guī)范及程序????????.4-6 4.常規(guī)石蠟包埋組織切片規(guī)范及程序???????...7-9 5.術(shù)中快速冰凍切片的規(guī)范及程序????????..10-11 6.術(shù)中快速冰凍診斷的規(guī)范及程序????????.12-13 7.特殊染色的操作規(guī)范????????????14-21 8.免疫組化染色（Envision System）的規(guī)范及程序?22-23 9.病理診斷的規(guī)范及程序?????????????24-25 10.病理診斷報告書寫的規(guī)范??????????.26-27 11.細胞學(xué)診斷的規(guī)范及程序????????????28 12.細胞病理學(xué)診斷報告書的基本內(nèi)容???????????29 13.病理學(xué)診斷報告書的發(fā)送???????????.30 14.顯微鏡操作的標準化程序????????31-32

第三篇：病理科免疫組化技術(shù)員培訓(xùn)

病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)及技術(shù)操作規(guī)范

一、病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)員培訓(xùn)規(guī)范：

凡新入我科的病理技術(shù)員均需進行免疫組化理論知識的學(xué)習(xí)、培訓(xùn)，經(jīng)考核合格、具備病理技術(shù)員技士資質(zhì)后方能從事免疫組織化學(xué)染色。

二、病理科免疫組織化學(xué)染色操作規(guī)范 1.免疫組織化學(xué)染色前的準備事項(一)組織切片的制備

常規(guī)切片脫蠟至水（組織固定需用10%中性甲醛）(二)抗體的選擇、稀釋和保存

（1）選擇抗體應(yīng)先了解其反應(yīng)譜和適用條件〔包括適用切片(石蠟切片抑或冷凍切片)、稀釋度和溫育時間等〕。

（2）對于未曾使用過的新抗體，應(yīng)按照有關(guān)說明書的提示，以幾個不同的稀釋度對適宜檢材(已知陽性切片/涂片)進行預(yù)試驗;根據(jù)染色陽性表達的程度和檢材背景著色程度，確定用于染色的最適稀釋度

（3）抗體的原液應(yīng)于分裝后置于一20℃冷室中保存，切勿反復(fù)凍存(以免效價 降低)。（4）抗體的工作液可置于4℃冰箱中保存。（5）抗體的稀釋。

(1)一般用0.01M PBS(生理鹽水磷酸鹽緩沖液)，pH值7.2。(2)或用0.05M TBS(生理鹽水三經(jīng)基氨基甲烷緩沖液)，pH值7.6。(3)必要時可按需要加適量小牛血清清蛋白。(三)被檢測組織內(nèi)抗原的修復(fù)

（1）經(jīng)4%中性甲醛之類含醛基固定劑固定的組織，其切片中的抗原決定簇因醛的交聯(lián)作用而被封閉，從而影響抗原一抗體反應(yīng)。進行免疫組織化學(xué)染色前，對于組織切片進行抗原修復(fù)處理，會使組織中的固有抗原盡量多地暴露出來，提升了大部分檢測抗體的陽性率和反應(yīng)強度。有的抗體不需要進行抗原修復(fù)。應(yīng)按抗體試劑說明書的提示決定是否進行被檢測組織內(nèi)的抗原修復(fù)。（2）抗原修復(fù)緩沖液。

(l)一般為0.01M檸檬酸緩沖液(2.1g檸檬酸溶于100ml蒸餾水中，用2M NaOH調(diào)節(jié)pH值至6.0)。(2)有些抗體需要特殊修復(fù)緩沖液，如高PH值的EDTA(50mM Tris.，10mM EDTA，pH9.0)，或商品化的該高，10mM EDTA，pH9.0)，或商品化的該高pH修復(fù)液等。（3）抗原修復(fù)的常用方法。(l)胰蛋白酶消化法: ①組織切片脫蠟、水化。

②滴加一滴0.1%胰蛋白酶液于組織切片上。

③37℃下溫育20-40min(溫育時間取決于組織經(jīng)4%中性甲醛固定時間的長短和被檢測抗原)。

④蒸餾水沖洗，終止反應(yīng)。

⑤阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

⑥進行免疫組織化學(xué)染色。（配制0.1%胰蛋白酶液時，應(yīng)將0.1g胰蛋白酶溶于0.1%無水氯化鈣水溶液(pH值7.8)中。）

（2)胃蛋白酶消化法: ①組織切片脫蠟、水化.②滴加胃蛋白酶工作液于組織切片上。

③37℃下溫育10-30min(一般為10min，可延至30min，取決于組織經(jīng)4%中性甲醛固定時間的長短).④浸人蒸餾水，終止反應(yīng)。

⑤進行免疫組織化學(xué)染色。用1%胰蛋白酶液37℃下處理20min。(應(yīng)以 0.1M HCI配制胃蛋白酶工作液。過度的胃蛋白酶消化會使組織結(jié)構(gòu)破壞、切片 脫落。)（3)微波修復(fù)抗原法: ①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。

②將組織切片置于容器(塑料盒或玻璃缸)中，并向其中加人抗原修復(fù)液 200ml，蓋上具有小孔的蓋子。

③將該容器置于微波爐(705-800W)中央加熱(95℃)5min，2次(于兩次之間，應(yīng)向容器中添加蒸餾水50ml，嚴防組織切片干燥)。

④將該容器移出微波爐，置于室溫下冷卻15-20min。

⑤蒸餾水沖洗。

⑥阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。

⑦用TBS或 PBS液沖洗。⑧進行免疫組織化學(xué)染色。(4)熱水浴法: ①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。

②向裝組織切片的容器加人足量(例如200ml)抗原緩沖液，置于水浴鍋中，加熱至95-99℃(不沸騰)預(yù)熱。

③將組織切片插人已預(yù)熱的容器內(nèi)，溫育20-40min。

④將該容器由微波爐移出，置于室溫下冷卻20min。⑤室溫下，用TBS、PBS或水洗。

⑥蒸餾水沖洗。

⑦阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。

⑧用TBS或PBS液沖洗。

⑨進行免疫組織化學(xué)染色。

（5)壓力鍋法: ①組織切片脫蠟、水化(硅化玻片或經(jīng)防脫片膠處理的玻片)。

②向4-5.5L的不銹鋼壓力鍋中加人抗原修復(fù)緩沖液(約為鍋容積的2/3)，不加閥情況 下加熱至沸騰。

③將組織切片插放于金屬切片架上，并置于壓力鍋內(nèi)沸騰的緩沖液中。

④加閥情況下，將組織切片加壓2min。

⑤壓力鍋自行冷卻或以流水冷卻減壓后，持續(xù)20min。

⑥將冷卻后的切片取出，蒸餾水沖洗后，置于TBS或PBS液中(以免組織切片干燥)。

⑦蒸餾水沖洗。

⑧阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后將切片置于蒸餾水中。

⑨用TBS或PBS液沖洗。

⑩進行免疫組織化學(xué)染色。

（四）組織切片中內(nèi)源性酶的阻斷

1.內(nèi)源性過氧化物酶 主要存在于紅細胞、嗜中性粒細胞、單核細胞了嗜酸性粒細胞和組織內(nèi)。阻斷方法:最常用0.3%-0.5%H2O2-甲醇液，作用15-30min，阻斷液必須使用時新鮮配制。由于阻斷內(nèi)源性過氧化物酶常同時導(dǎo)致被測抗原變性(使特異性著色減弱)，而大部分組織不含有內(nèi)源性過氧化物酶，所以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶一般不必作為常規(guī)步驟。必須阻斷內(nèi)源性過氧化物酶時，可安排在第一抗體反應(yīng)后進行，以減少抗原的破壞。2.內(nèi)源性堿性磷酸酶 主要存在于嗜中性粒細胞和內(nèi)皮細胞。阻斷方法:應(yīng)用1M左旋咪唑，作用15-30min。

3.內(nèi)源性生物素 肝、胰、腎等的細胞內(nèi)含有多量生物素或類生物素物質(zhì)。阻斷方法:先將切片浸于卵白素(0.5μg/ml)中15min，以緩沖液洗凈后，移浸于生物素飽和溶液中15min，再用緩沖液洗去多余的生物素飽和液;也可應(yīng)用商供的阻斷試劑盒(按說明書操作)。(五)正常血清保護

作為檢測試劑的抗體蛋白帶有一定的負電荷，免疫組織化學(xué)染色時，易與帶有正電荷的組織〔特別是纖維組織、變性和(或)壞死的細胞、嗜酸性粒細胞等〕發(fā)生靜電吸引而導(dǎo)致非特異性染色。去除這種非特異性染色最有效的方法是，在滴加第一抗體前，先滴加用于制備第二抗體動物的非免疫血清或是滴加除制備第一抗體動物以外的其他動物非免疫血清，濃度為1：5-1：20;必要時可滴加2%-5%牛 血清清蛋白。正常血清保護作用時間10-20min。用于阻斷非特異性結(jié)合的血清不能有明顯的溶血。(六)緩沖液

用于稀釋抗體，洗滌切片的緩沖液主要有兩種。1.TBS(0.05M，pH7.6)，Tris一HCl緩沖液(0.SM，pH 7.6)100ml 8.5%NaCl 100ml 蒸餾水加至 1000ml Tris一HCI緩沖液(0.5M，pH7.6)三經(jīng)甲基氨基甲烷(Tris)61g HCl 37ml 蒸餾水加至 1000ml 2．PBS(0.IM，pH 7.6)Na2 HPO4 · 12H2O2 29g NaH2PO4 · 2H2O 3g NaCl 85g 蒸餾水加至 1000ml 使用時用蒸餾水稀釋10倍即成0.0lM。

二、免疫組織化學(xué)染色常用方法(一)直接法 1.脫蠟和水化。

2.3%過氧化氫或0.5%過氧化氫甲醇液，5min。

3.TBS或PBS緩沖液洗滌。4.抗原修復(fù)。

5.無關(guān)動物正常血清(適當稀釋)20-30min。

6.甩去正常動物血清，滴加適當稀釋的辣根過氧化物酶標記抗體，或增強的酶標多聚物一步法(Enhanced Polymer One-step Staining，EPOS)抗體于切片上，20-60min。7.TBS或PBS緩沖液洗滌。

8.0.04%-0.05%DAB(二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸)H2O2液顯色5-10min，鏡下觀察控制顯色時間。底物配法:DAB 40-50mg；0.05M TBS(pH 7.6)l00ml；3% H2O2 100-200ml。9.緩沖液洗，流水洗滌。10.蘇木精淡染細胞核。11.脫水，透明，封片。(二)間接法

l-5步同“直接法”。

6.滴加第一抗體于切片上，濕盒內(nèi)溫育30-60min。7.TBS或PBS緩沖液洗滌。

8.HRP標記抗體或用增強的酶標記多聚物(Enhanced Labeled一 Polymer Sys-tem，ELPS)抗體滴加切片上，濕盒內(nèi)溫育30min。9-14步同“直接法”的7-11步。(三)過氧化物酶一抗過氧化物酶(PAP)法 1-5步同直接法。

6.適當稀釋的第一抗體，濕盒內(nèi)溫育30-60min。7.緩沖液洗滌。

8.第二抗體，濕盒內(nèi)溫育30min。9.緩沖液洗滌。

10.滴加PAP，濕盒內(nèi)溫育30min。11-15步同“直接法”的7-11步。

雙PAP法:上述操作進行到第10步后，再重復(fù)7-10步1次，然后繼續(xù)11-15步。(四)葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫酶法 1-5步同“直接法”。

6.第一抗體，濕盒溫育30-60min。7.緩沖液洗滌。

8.酶聯(lián)SPA，濕盒溫育30min。9.緩沖液洗滌。

10-13步同“直接法”的8-11步。(五)ABC法和SABC法

ABC法是卵白素-生物素-酶復(fù)合物(Avidin--Biotin--Peroxidase Complex)法的簡稱。SABC法是鏈霉卵白素-生物素-酶復(fù)合物(Streptavidin一Biotin一peroxidase Complex)法的簡稱。

l-5步同“直接法”。

6.第一抗體，濕盒溫育30-60min.7.緩沖液洗滌。

8.生物素化的第二抗體，30min。9.緩沖液洗滌。

10.ABC復(fù)合物或SABC復(fù)合物(皆于使用前新鮮配制)，30-60min。11-15步同“直接法”7-11步。(六)LSAB(SP)法

LSAB(SP)法，是標記的鏈酶卵白素-生物素(Labeled Streptavidin--Biotin)法的簡稱，操作步驟同“ABC法”，只是以LSAB復(fù)合物替代ABC復(fù)合物。(七)CSA法

CSA法是催化信號放大(Catalyzed Signal Amplifieation)法的簡稱。1-5步同“直接法”。6.第一抗體，15-30min。7.緩沖液洗滌。

8.生物素標記的第二抗體，15-30min。9.緩沖液洗滌。

10.鏈霉卵白素-生物素-HRP復(fù)合物(用前新鮮配制)，15min。11.緩沖液洗滌。12.放大液，15min。13.緩沖液洗滌。

14.HRP-StrePtavidin，15min。15-19步同“直接法”的7-11步。(八)二步法Envision System Envision是通過一個多聚葡聚糖骨架聯(lián)接成一個多聚體。1-5步同“直接法”。6.第一抗體，30-60min。7.緩沖液洗滌。

8.Envision TM，10-30min。9-13步同“直接法”的7-11步。(九)雙重免疫組織化學(xué)法.Sequential(1)鼠或兔抗體1，30-60min。

(2)Envision TM，羊抗鼠/羊抗兔/HRP，30 min。(3)DAB(棕色)，2-10 min。(4)鼠或兔抗體2，30-60 min。

(5)Envision TM，羊抗鼠/羊抗兔/AP，30 min。(6)AP(紅色)。2.Simnl一Aaneous(1)混合鼠抗體1和兔抗體2，4℃，過夜或60 min。(2)Envision TM羊抗鼠/HRP和羊抗兔/AP。(3)AP染色。(4)HRP染色。

上述方法除注明溫度者外，均可在室溫(20-25℃)環(huán)境中進行;第一抗體溫育后，如有必要可置于4℃ 下過夜。

三、免疫組織化學(xué)染色的常用抗體標記物(一)上皮源性標記物 1.一般性標記物

（1）CK(角蛋白)CK亞型:①CK5/6;②CK7;③CK8;④CK10/13;⑤CK18;⑥CK19;⑦CK20。(2)EMA(上皮細胞膜抗原)。

2.特異性和(或)相對特異性上皮標記物

（1）CEA(癌胚抗原，標記胃癌、大腸癌).（2）CA242(腫瘤相關(guān)粘液抗原，標記胰腺癌、大腸癌)。

（3）TG(甲狀腺球蛋白，標記甲狀腺癌).（4）PSA(前列腺特異性抗原，標記前列腺癌)。

（5）PSAP(前列腺特異性酸性磷酸酶，標記前列腺癌).（6）34βE12(標記前列腺底細胞).（7）AFP(甲胎蛋白，標記肝癌、內(nèi)胚竇癌).（8）Hepatoeyte(標記肝細胞癌)。

(9)β-HCG(β-絨毛膜促性腺激素，標記胎盤滋養(yǎng)層細胞腫瘤、生殖細胞腫瘤).（10）CA125(卵巢癌).（二)間葉源性標記物

主要是Vimentin(vim，波形蛋白)等.（三）肌源性標記物 1.Desmin(Des，結(jié)蛋白)2.Actin(肌動蛋白）.3.SMA(平滑肌肌動蛋白).4.MSA(肌特異性肌動蛋白).5.Myosin(肌球蛋白).6.Myoglobin(MG，肌紅蛋白)7.Myogen(肌漿蛋白).8.MyoDI(肌調(diào)節(jié)蛋白).(四)血管源性標記物 FⅧRAg(第8因子相關(guān)抗原).CD31 CD34 UEA-l BNH9.(五)組織細胞源性標記物 1.CD68/KP-l.2.Lysozyme(溶菌酶)。3.a1-AT(a1-抗胰蛋白酶).4.a1-ACT(al-抗胰糜蛋白酶)5.Mac387.淋巴造血組織源性標記物 1.全淋巴細胞

(1)CD45/LCA(白細胞共同抗原）。(2)TdT(末端脫氧核昔酸轉(zhuǎn)移酶)。(3)CD30/Ki-1。2.全B細胞(1)Igκ。(2)Igλ。(3)CD20/L26。(4)CD79a。

(5)BLA36(B淋巴細胞抗原)。3.B細胞亞型(1)CDl0。

(2)CD21(標記濾泡性樹突狀細胞)。(3)CD23。

(4)CD35(標記濾泡性樹突狀細胞)。(5)CD38.4.全T細胞(1)CD3。(2)CD5。(3)CD43。(4)CD45RO/UCHL-1.5.T細胞亞型(1)CDla。(2)CD4。(3)CD8。6.NK細胞(1)CD56。(2)CD57/Leu-7。(3)CD16/Leu-11。7.粒細胞和單核巨噬細胞(1)CD11c/LeuM5。(2)CD15/LeuM5。(3)Lysozyme(溶菌酶)。(4)al-AT(al-抗胰蛋白酶)。(5)al-ACT(al-抗胰糜蛋白酶)。(6)CD68.(7)S-100蛋白.(8)Mac387。8.其他

(1)EMA(上皮細胞膜抗原).(2)CD99(尤因肉瘤標記物).(3)ALK-l(間變性淋巴瘤激酶)。(4)HLA-DR。(5)Bel-2。(6)Bel-6。(7)Bel-10。(8)Ki-67。

(9)CyclinD1(周期素D1)。(10)CD25。

(11)CD34。

（七）神經(jīng)源性標記物 1.S-100蛋白.2.NSE（神經(jīng)原特異性烯醇化酶）.3.Leu7。

4.Neurofilament(NF，神經(jīng)微絲蛋白)。5.GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白）

（八）神經(jīng)內(nèi)分泌源性標記物 1.激素標記物(1)CA(兒茶酚胺)。(2)5-HT(5-經(jīng)色胺).(3)垂體激素。

①GH(促生長素)。

②PRL(催乳素)。

③ACTH(促腎上腺皮質(zhì)激素).④TSH(促甲狀腺素).⑤FSH(促濾泡素).⑥LH(促黃體素)。(4)甲狀腺。

①TG(甲狀腺球蛋白)。

②CT(降鈣素)。

(5)甲狀旁腺:PTH(甲狀旁腺素)。(6)胰島。

①Insulin(胰島素)。

②Glueagon(胰高糖素)。

③VIP(舒血管腸肽).④PP(胰多肽).⑤Someitostatin(生長抑素)。

⑥Gastrin(胃泌素)。2.非激素標記物

(1)NSE(神經(jīng)原特異性烯醇化酶).(2)CgA(嗜鉻素A).(3)SY(突觸素).3.激素受體（1）ER(雌激素受體）.（2）AR(雄激素受體）.（3）PR(孕激素受體).(九)細胞增殖標記物 1.PCNA(增殖細胞核抗原).2.Ki-67.（十）黑色素標記物 1.S-100蛋白.2.HMB45.3.Melanoma。

(十一）癌基因和（或）抑癌基因 1.bel-2.2.c-erbB-2.3.p53 4.p16(多腫瘤抑制基因)。5.nm23。(十二)病原體標記物

1.Myoeobaeterium Bovis(分枝桿菌，抗卡介苗)。2.HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原).3.HBcAg(乙型肝炎病毒核心抗原).4.HPV(人乳頭狀瘤病毒)5.HTLV-1(人類T細胞白血病病毒)。

第四篇：病理科制度職責及操作規(guī)范

病理科主任（副主任）醫(yī)師崗位職責

一：資格要求

1：具有主任（副主任）醫(yī)師專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。2：具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格并注冊。二：知識要求

1：精通本專業(yè)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識掌握本專業(yè)國內(nèi)外發(fā)展趨勢，能夠解決疑難特殊病例。能吸收最新科研成果并應(yīng)用于實踐工作。

2：借助工具書能閱讀本專業(yè)的外文資料。

3：熟練掌握計算機操作，取得計算機中級上崗證書（3—5年取得）。

4：通過繼續(xù)教育不斷提高，更新專業(yè)知識水平。三：能力要求

1：理解判斷能力：對診療過程中出現(xiàn)的各種問題做出正確的分析判斷，并妥善進行處理。

2：組織實施能力：能夠組織和開展本專業(yè)的工作，培養(yǎng)下級醫(yī)師，實施和指導(dǎo)本專業(yè)的科研工作。

3：業(yè)務(wù)實施能力：參加并負責簽發(fā)疑難、特殊病理報告及術(shù)中快速冰凍報告。

4：教學(xué)能力：具有承擔專題講座或講課的能力。

5：語言文字能力：具有較強的書面文字能力及口頭表達能力。

病理科主治醫(yī)師崗位職責

一：資格要求

1：具有主治醫(yī)師專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。2：具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格并注冊。二：知識要求

1：熟悉本專業(yè)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識，掌握本專業(yè)國內(nèi)外發(fā)展趨勢，能吸收最新科研成果并應(yīng)用于實踐工作。2：借助工具書能閱讀本專業(yè)的外文資料。

3：熟練掌握計算機操作，取得計算機中級上崗證書（3—5年取得）。

4：通過繼續(xù)教育不斷提高，更新專業(yè)知識水平。三：能力要求

1：理解判斷能力：對診療過程中出現(xiàn)的各種問題做出正確的分析判斷，并進行處理。

2：組織實施能力：能夠?qū)嵤╅_展本專業(yè)的業(yè)務(wù)工作，代教下級醫(yī)師，協(xié)助參與本專業(yè)的科研工作。

3：業(yè)務(wù)實施能力：能夠獨立簽發(fā)常見病病理報告及部分疑難特殊病理報告。

4：語言文字能力：具有一定的書面文字能力及口頭表達能力。

病理科住院醫(yī)師崗位職責

一：資格要求

1：具有住院醫(yī)師專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。2：具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格并注冊。

3：經(jīng)過1年以上的業(yè)務(wù)進修或培訓(xùn)并合格。二：知識要求

1：掌握本專業(yè)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識，了解國內(nèi)外發(fā)展趨勢，能吸收最新科研成果并應(yīng)用于實踐工作。2：借助工具書能閱讀本專業(yè)的外文資料。

3：熟練掌握計算機操作，取得計算機中級上崗證書（3—5年取得）。三：能力要求

1：理解判斷能力：對診療過程中出現(xiàn)的各種問題做出正確的分析判斷。

2：業(yè)務(wù)實施能力：負責活檢的初檢工作，對于常見一般病例可獨立簽發(fā)病理報告。

3：語言文字能力：具有一定的書面文字能力及口頭表達能力。

病理科主任（副主任）技師崗位職責

一：資格要求

1：具有主任（副主任）技師專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。二：知識要求：

1：精通本專業(yè)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識，掌握本專業(yè)國內(nèi)外發(fā)展趨勢并能夠應(yīng)用于工作實踐。

2：借助工具書能閱讀本專業(yè)的外文資料。

3：熟練掌握計算機操作，取得計算機中級上崗證書（3—5年取得）。

4：通過繼續(xù)教育不斷提高，更新專業(yè)知識水平。三：能力要求

1：理解判斷能力：對診療過程中出現(xiàn)的各種問題做出正確的分析判斷，并妥善進行處理。

2：組織實施能力：能夠組織和指導(dǎo)開展本專業(yè)的業(yè)務(wù)科研工作，培養(yǎng)下級技師。

3：業(yè)務(wù)實施能力：熟練掌握本專業(yè)各種儀器的操作及維護。4：教學(xué)能力：具有承擔本專業(yè)專題講座或講課的能力。5：語言文字能力：具有較強的書面文字能力及口頭表達能力。

病理科主管技師崗位職責

一：資格要求

1：具有主管技師專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。二：知識要求

1：熟知本專業(yè)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識，掌握本專業(yè)國內(nèi)外發(fā)展趨勢。2：借助工具書能閱讀本專業(yè)的外文資料。

3：熟練掌握計算機操作，取得計算機中級上崗證書（3—5年取得）。

4：通過繼續(xù)教育不斷提高，更新專業(yè)知識水平。三：能力要求

1：了解判斷能力：對診療過程中出現(xiàn)的各種問題做出正確的分析判斷，并妥善進行處理。

2：組織實施能力：能夠開展本專業(yè)的業(yè)務(wù)工作，代教下級技師，參與本專業(yè)的科研工作。

3：業(yè)務(wù)實施能力：熟練掌握本專業(yè)各種儀器的操作及維護。4：語言文字能力：具有一定的書面文字能力及口頭表達能力。

病理科技師崗位職責

一：嚴格要求

1：具有技師專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。二：知識要求

1：掌握本專業(yè)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識，了解本專業(yè)國內(nèi)外發(fā)展趨勢。2：借助工具書能閱讀本專業(yè)的外文資料。

3：熟練掌握計算機操作，取得計算機中級上崗證書（3—5年取得）。三：能力要求

1：理解判斷能力：對診療過程中出現(xiàn)的各種問題做出正確的分析判斷。

2：業(yè)務(wù)實施能力：熟練掌握本專業(yè)各種儀器的操作。3：語言文字能力：具有一定的書面文字能力及口頭表達能力。

病理科 2010年一月二十日

病理科一般工作制度

1：工作人員必須嚴格遵守醫(yī)院及科內(nèi)的工作制度，服從管理，嚴格遵守各項操作規(guī)程。

2：每位工作人員必須履行自己的職責，精神飽滿，熱情、耐心、負責的接待每位患者。

3：堅持每月定期或不定期的召開科務(wù)會，討論本科發(fā)展及解決科室中存在的問題。

4：在不影響工作的前提下，堅持每月1-2次的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)活動，以提高工作人員的業(yè)務(wù)水平。

5：全科人員在發(fā)揮現(xiàn)有設(shè)備、技術(shù)力量的前提下，努力開展新技術(shù)、新項目，為患者提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

6：每月開展質(zhì)量控制的自查工作、并將檢查結(jié)果與經(jīng)濟效益掛鉤。7：每年安排1-2人進修學(xué)習(xí)、培訓(xùn)（包括短期學(xué)習(xí)班、學(xué)術(shù)會議），不斷提高全體工作人員的診斷、技術(shù)水平。8：做好各項設(shè)備的使用保養(yǎng)記錄，保證機器正常運行。

病理科 2010年一月二十日

病理診斷報告書類別

病理診斷表述的基本類型

Ⅰ類：檢材部位／疾病名稱／病變性質(zhì)明確和基本明確的病理診斷。

Ⅱ類：不能完全肯定疾病名稱/病變性質(zhì)，或是對于擬診的疾病名稱／病變性質(zhì)有所保留的病理診斷意向，可在擬診疾病／病變名稱之前冠以諸如病變可“符合為”、“考慮為”、“傾向為”、“提示為”、“可能為”、“疑為”、“不能排除（除外）”之類的詞語。

Ⅲ類：檢材切片所顯示的病變不足以診斷為某種疾?。床荒茏龀觫耦惢颌蝾惒±碓\斷），只能進行病變的形態(tài)描述。

Ⅳ類：送檢標本因過于細小、破碎、固定不當、自溶、嚴重受擠壓（變形）、被燒灼、干涸等，無法做出病理診斷。

病理科 2010年一月二十日

病理診斷室工作制度

1.主檢醫(yī)師接收切片時，應(yīng)核對切片數(shù)后簽字。

2.主檢醫(yī)師認真閱讀申請單，必要時與有關(guān)臨床醫(yī)師了解更詳細臨床信息，細致全面的閱片，寫出初步診斷。

3.主檢醫(yī)師不能明確診斷的病例交上級醫(yī)師診斷，必要時科內(nèi)討論，提出處理意見。

4.疑難病例應(yīng)用輔助診斷技術(shù)，如特染、免疫組化等協(xié)助診斷。5.病理報告交圖文報告室打印，仔細核對后簽名，一般報告四個工作日發(fā)出。

病理科 2010年一月二十日

術(shù)中冰凍切片報告制度

1.值班醫(yī)師接受標本，并逐項查對姓名、科別、住院號及標本是否相符，立即巨檢及取材，如有疑問請上級醫(yī)師指導(dǎo)取材。必要時與手術(shù)醫(yī)師直接聯(lián)系。

2.技術(shù)人員及時切片，切片厚5um。染色后送主檢醫(yī)生。3.一般冰凍報告由高年資主治醫(yī)師簽發(fā)，遇有下列情況之一者，應(yīng)請上級醫(yī)師會診，共同簽發(fā)。① 所有惡性腫瘤 ② 交界性病變 ③ 良惡性難定的病變 ④ 病理診斷與臨床不符

⑤ 其它疑難病變，主檢醫(yī)師不能明確診斷 4.冰凍報告由傳真發(fā)出，一般情況下小于30分鐘。5.報告發(fā)出后，技術(shù)人員及時將冰凍組織固定。

病理科 2010年一月二十日

病理科會診制度

一、科內(nèi)會診

如有下述情況之一者，由具有高級職稱的病理醫(yī)師會診后簽發(fā)報告：

1.主檢醫(yī)師不能明確診斷。2.臨床與病理診斷不符。3.初次診斷為惡性腫瘤的病例。

4.一組病理醫(yī)師中兩人或多人的診斷意見不一致。5.患者要求得到另外一位醫(yī)師的意見。6.臨床醫(yī)師要求傾聽另外一位醫(yī)師的意見。

二、科外（院外）會診

接受外院個人、單位送檢的病理切片會診，由具有高級職稱的病理醫(yī)師簽發(fā)會診報告。如遇疑難病例，會診醫(yī)師不能明確診斷時，由科內(nèi)高級職稱的醫(yī)師討論后簽發(fā)會診報告。

病理科 2010年一月二十日

病理切片質(zhì)控制度

病理切片質(zhì)量高低，對病理診斷起著重要的作用。因此，努力提高病理切片質(zhì)量，尤為重要?？剖乙扇「鞣N措施，使切片優(yōu)良率達到91%以上。特作如下要求：

1.每日主班醫(yī)師閱片時，要對當日切片存在問題及時向主班技師告知，找出存在問題的原因，及時糾正。2.3.4.對不合格切片及時重切糾正。脫水機的各種試劑每周更換一次。

每月由技師、醫(yī)師共同對病理切片進行抽查、評分，找出問題。并進行科內(nèi)小結(jié)。

病理科 2010年一月二十日

病理診斷質(zhì)控制度

為持續(xù)提高病理診斷準確率及病理醫(yī)師病理診斷水平，減少差錯發(fā)生，根據(jù)有關(guān)標準力爭達到活檢病理診斷準確率≥99.5％，細胞學(xué)病理診斷準確率≥85％，冰凍切片與石蠟切片診斷符合率≥95%，制定如下措施：

① 病理學(xué)診斷報告書一般應(yīng)由具有執(zhí)業(yè)資格的注冊主治醫(yī)師以上（含主治醫(yī)師）的病理醫(yī)師簽發(fā)，常見病的診斷也可酌情準予資格相當?shù)母吣曩Y病理住院醫(yī)師簽發(fā)。② 診斷報告書上應(yīng)有主檢醫(yī)師親筆簽名，主檢醫(yī)師難以明確診斷的應(yīng)行科內(nèi)會診或院外會診。

③ 每月由專人統(tǒng)計分析院外會診意見、手術(shù)前后的診斷結(jié)果，統(tǒng)計診斷的符合率，分析不符原因，制定改進措施。④ 每月由專人統(tǒng)計分析有活檢對照的細胞學(xué)的診斷結(jié)果，統(tǒng)計診斷的符合率，分析不符原因，制定改進措施。⑤ 每月由專人統(tǒng)計冰凍診斷與術(shù)后石蠟切片診斷符合率，分析不符原因，制定改進措施。

⑥ 對少數(shù)經(jīng)會診不能明確診斷的，應(yīng)力爭做到病人隨訪。

病理科 2010年一月二十日

病理質(zhì)控制度

為持續(xù)提高病理診斷準確率及病理醫(yī)師病理診斷水平，減少差錯發(fā)生，根據(jù)有關(guān)標準力爭達到病理切片優(yōu)良率≥91%，活檢病理診斷準確率≥99.5％，細胞學(xué)病理診斷準確率≥85％，冰凍切片與石蠟切片診斷符合率≥95%，制定如下措施：

1.每月由技師、醫(yī)師共同對病理切片進行抽查評分，找出存在問題，制定改進措施并糾正。

2.病理學(xué)診斷報告書一般應(yīng)由具有執(zhí)業(yè)資格的注冊主治醫(yī)師以上（含主治醫(yī)師）的病理醫(yī)師簽發(fā)，常見病的診斷也可酌情準予資格相當?shù)母吣曩Y病理住院醫(yī)師簽發(fā)。

3.診斷報告書上應(yīng)有主檢醫(yī)師親筆簽名，主檢醫(yī)師難以明確診斷的應(yīng)行科內(nèi)會診或院外會診。

4.每月由專人統(tǒng)計分析院外會診意見、手術(shù)前后的診斷結(jié)果，統(tǒng)計診斷的符合率，分析不符原因，制定改進措施。5.每月由專人統(tǒng)計分析有活檢對照的細胞學(xué)的診斷結(jié)果，統(tǒng)計診斷的符合率，分析不符原因，制定改進措施。

6.每月由專人統(tǒng)計冰凍診斷與術(shù)后石蠟切片診斷符合率，分析不符原因，制定改進措施。

7.對少數(shù)經(jīng)會診不能明確診斷的，應(yīng)力爭做到病人隨訪。8.科內(nèi)每月召開一次質(zhì)控小組會議進行總結(jié)。

圖像分析室工作制度

1.接收標本，認真核對病人姓名、科室與標本一致后并簽收登記。

2.認真執(zhí)行物價收費標準，負責劃價扣費。

3.負責病理申請單錄入，病理診斷錄入及圖像分析、采集，認真核對無誤后打印報告。

4.報告打印后審查無差錯后交醫(yī)師簽發(fā)并登記。5.及時將資料裝訂后歸檔。

6.負責查詢病理結(jié)果。

病理科 2010年一月二十日

病理科取材室工作制度

1.病理技術(shù)人員負責接收標本，接受標本時認真核對申請單及送檢標本，填寫項目是否一致：姓名、科室、床號、住院號、標本類型及數(shù)量。

下列情況不予接收：

① 申請單內(nèi)容與送檢標本不符合 ② 標本上無有關(guān)標志，如姓名、科室等

2.技術(shù)人員將申請單編號并將標本按順序排列好等待取材。3.病理醫(yī)師負責巨檢、取材。取材前應(yīng)再次核對標本袋上的標志，如病人姓名、科室等。巨檢內(nèi)容由技術(shù)人員記錄。

4.取材后，將標本固定放好，已備補取材。報告發(fā)出后一周，如臨床無疑問，將標本清理交專門部門處理。

5.每日取材完畢后，認真清洗取材臺基各種器械，關(guān)閉門窗、水電等。

6.每周六集中紅外線消毒。

病理科 2010年一月二十日

細胞學(xué)室穿刺規(guī)范

1、先由臨床醫(yī)師提出申請，穿刺醫(yī)師在詳細了解病人病史及一般情況后決定是否進行穿刺。

2、一般穿刺為體表明顯的、不在危險部位的病變、病人一般情況可以耐受的。

3、在仔細檢查病人后，確定穿刺部位，做好標記，給病人解釋具體穿刺中可能出現(xiàn)的問題后，征得病人或家屬同意后準備穿刺。

4、準備好穿刺用品，穿刺部位消毒后，依無菌操做進行穿刺。

5、穿刺過程中避開明顯血管，平行進針，達到部位后反復(fù)抽吸，穿刺后按壓止血。

6、涂片要求要盡量薄，標記號碼，及時固定涂片。

病理科 2010年一月二十日

技術(shù)室工作制度

1.技術(shù)人員每日上午負責組織包埋，包埋時應(yīng)對號對蠟塊，嚴防差錯發(fā)生。

2.嚴格遵守切片操作規(guī)程，切片厚4~5um。3.染色時統(tǒng)一使用自動染色機程序。4.封片時注意防止氣泡產(chǎn)生。

5.貼上標簽寫上編號，切片編號核對后交主檢醫(yī)師并簽字。6.每日清理干凈各種機器及桌面。

7.根據(jù)工作量的情況及時更換各種液體及染液。8.主班下班前關(guān)好水電、門窗，以防意外發(fā)生。9.負責各機器設(shè)備的維護。

病理科 2010年一月二十日

細胞學(xué)室工作制度

1.接收院內(nèi)外送檢的細胞學(xué)標本并簽收，認真核對病人姓名、科室及標本與申請單是否一致。

2.針吸細胞學(xué)穿刺時，做好消毒并按規(guī)范操作。

3.編號后及時離心、涂片、固定、蘇木素伊紅染色后，封片編號。

4.閱片前認真閱讀申請單各項內(nèi)容，仔細閱讀全片內(nèi)容，結(jié)合臨床寫出診斷報告，交圖文報告室打印后簽字發(fā)出。5.剩余各種標本放冰箱保存，等報告發(fā)出后交保潔部門集中處理，嚴防標本造成環(huán)境污染。

6.報告發(fā)出后，及時將涂片及申請單歸檔。7.每天下班前，關(guān)好水電及門窗。

病理科 2010年一月二十日

病理科資料管理制度

1、常規(guī)活檢、快速冰凍、細胞病理學(xué)檢查、尸檢等的文字資料、非文字資料（蠟塊、切片、涂片等）以及其他相關(guān)資料均為有價值的醫(yī)學(xué)資料，應(yīng)妥為保存。

2、由專人管理。

3、活體組織檢查剩余標本在報告發(fā)出后保存一周。

4、報告申請書每100份為一本由圖文報告室主班技術(shù)員檢查核對后裝訂成冊。

5、蠟塊管理由技術(shù)室負責，每天在切片結(jié)束后按順序歸檔，如需特染、免疫組化、深切，在制好切片后及時歸回原位。

6、切片的管理由診斷組醫(yī)師負責，當班醫(yī)師在閱片后按前后順序歸檔，每月有一名醫(yī)師負責按時統(tǒng)一歸入資料庫，歸庫時應(yīng)仔細檢查核對無誤。

7、免疫組化申請單由免疫組化室技術(shù)員負責整理裝訂。

8、細胞學(xué)涂片除痰陰性涂片外應(yīng)全部保存，送檢體液標本應(yīng)保存在冰箱內(nèi)，直至報告發(fā)出2-3天。

9、出于學(xué)習(xí)或研究的目的，歸檔后的切片及文字資料需要調(diào)閱，調(diào)閱時應(yīng)仔細登記時間、切片號（病理號）、歸還與否、是否損壞。

10、技術(shù)組組長定期抽查各種資料保管情況，發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時處理及處罰。

病理科 2010年一月二十日

切片借閱制度

1、切片借閱由科室安排專人負責，其他人不得私自借出。

2、由患者或家屬提出要求和目的，并出示相關(guān)身份證明及復(fù)印件。

3、負責人調(diào)閱切片及相關(guān)資料，由醫(yī)師審核后借出。

4、登記借閱切片號、切片數(shù)量并由借片人簽名。

5、借閱期最長1月，為防止損壞、丟失，應(yīng)依切片種類及數(shù)量收取押金。

6、歸還切片時借閱人歸還切片及押金收據(jù)并提供其他醫(yī)院的診斷。

7、免疫組化及細胞學(xué)涂片因無法重復(fù)制片，確需借閱的應(yīng)征得科主任同意后方可。

病理科 2010年一月二十日

尸檢工作制度

1、尸檢應(yīng)由臨床醫(yī)師提出申請，死者家屬同意并簽字，填寫申請單，申請單內(nèi)所有項目應(yīng)詳細填寫并簽字，經(jīng)醫(yī)務(wù)部批準，方為有效。并由申請人辦理有關(guān)手續(xù)后，及時送交病理科。

2、檢驗的尸體應(yīng)在死亡2小時后進行，在死亡2小時后則應(yīng)及早進行，以免尸體發(fā)生過多的死后變化，影響病理診斷結(jié)果。如有尸體腐敗現(xiàn)象，不宜解剖。

3、檢驗的尸體涉及法律案件者，原則上應(yīng)由法醫(yī)剖驗。如遇特殊情況，應(yīng)受司法機關(guān)的委托，并提供死者生前的社會情況調(diào)查，報院醫(yī)務(wù)部批準后，方可接受。最后將尸檢報告交委托單位，不與死者家屬發(fā)生直接聯(lián)系。

4、對有醫(yī)療糾紛的病例，臨床應(yīng)提供詳細的病史及其它有關(guān)情況，并了解死者親屬的意見。必要時與有關(guān)人員進行討論，提出解剖目的，使剖驗人員心中有數(shù)，以便作出符合客觀實際的診斷。解剖結(jié)果，以尸檢報告書為準，并將此報告交院醫(yī)務(wù)部。

5、病理醫(yī)師接到尸檢申請后，應(yīng)立即登記編號，及早進行剖驗。尸檢前必須核對死者姓名，年齡，性別無誤后，方可進行。同時詳細閱讀死者的病史和臨床醫(yī)師提出的要求，以加強尸檢的針對性。

6、尸檢同時，應(yīng)安排相關(guān)人員對整個解剖過程進行記錄，對不同臟器、不同病變進行詳細描述，完成尸檢記錄，一般在一個月內(nèi)經(jīng)組織學(xué)檢查后發(fā)出最后的尸檢報告。報告發(fā)出后，全部資料及時歸檔，并清理大體標本，除保留有科研，教學(xué)價值外，一律交后勤部焚化處理。

病理科 2010年一月二十日

切片機操作規(guī)程

1.先切片機鎖扣打開。

2.將切片刀放置在刀架上，調(diào)整好角度。3.將石蠟組織塊放置在蠟塊夾中固定好。4.正常進行正常切片。

5.完成切片后，鎖緊鎖扣（在切片過程中動作要輕，均勻）。6.拆開各部件進行徹底清潔。7.先切片機鎖扣打開。

8.將切片刀放置在刀架上，調(diào)整好角度。9.將石蠟組織塊放置在蠟塊夾中固定好。10.正常進行正常切片。

11.完成切片后，鎖緊鎖扣（在切片過程中動作要輕，均勻）。12.拆開各部件進行徹底清潔。

病理科 2010年一月二十日

染色機操作過程

1.打開電源開關(guān)。

2.按“F1”啟動染色程序。3.打開水龍頭開關(guān)。4.揭開染色盒盒蓋。

5.將需染色切片放置備染盒中按“LOAD”。6.染色完畢后取出切片，按“EXIT”。7.按“F4”退出程序。8.關(guān)閉電源開關(guān)。

病理科 2010年一月二十日

自動染色機染色程序

1.烘片1分鐘

11.水洗10秒 2.二甲苯Ⅰ脫蠟5分鐘

3.二甲苯Ⅱ脫蠟5分鐘

4.二甲苯Ⅲ脫蠟5分鐘

5.無水乙醇5秒

6.無水乙醇5秒

7.95％酒精5秒

8.80％酒精5秒

9.水洗10秒

10.蘇木素染色10分鐘

2010

12.分化15秒 13.水洗返蘭1分鐘 14.伊紅染色15秒 15.水洗5秒 16.80％酒精5秒 17.95％酒精5秒 18.無水乙醇5秒 19.無水乙醇5秒 20.染色程序結(jié)束送EXIT

病理科 年一月二十日

冰凍機操作程序

1.在開機狀態(tài)下先解除操作臺的鎖定，打開冰凍機蓋。2.開啟照明燈。打開手柄鎖，搖動手柄檢查其工作狀態(tài)。3.檢查切片臺是否固定，將切片固定于刀架上。4.將已凍好的組織固定于切片機頭上進行切片。

5.切片完備后鎖定操作臺及手柄鎖，關(guān)照明燈，關(guān)冰凍機蓋。

病理科 2010年一月二十日

EnVision兩步法免疫組化染色步驟

1、石蠟切片烤片12小時，脫蠟至水。

2、高壓修復(fù)：將高壓鍋內(nèi)的EDTA液燒開后，放入切片加蓋，待壓力閥吹起后，定時3分鐘，開蓋自然放涼。

3、蒸餾水洗2遍。

4、放入3%H2O2溶液中，室溫下孵育10分鐘。

5、蒸餾水沖洗2遍。

6、PBS浸洗3次，每次5分鐘（3×5/）。

7、擦去多余PBS液，每張切片上滴加一抗，放入4℃冰箱過夜。

8、PBS浸洗3次，每次5分鐘（3×5/）。

9、擦去多余PBS液，滴加二抗，室溫下孵育45分鐘。

10、PBS浸洗3×5/。

11、加DAB顯色液，顯微鏡下觀察，陽性部位顯棕色，背景無著色，終止顯色。

12、自來水沖洗，蘇木素復(fù)染2—5分鐘、分化液分化、脫水、透明、中性樹膠封片。

脫水機操作程序

1.檢查脫水機內(nèi)各種液體及石蠟是否充分。2.將脫水機調(diào)整至起始位置。

3.將放置組織籃固定于脫水機上，降入液體缸內(nèi)。4.選擇已設(shè)置好的程序1，進行組織標本處理。5.次日停止程序，升起組織籃，將其取下復(fù)位。

病理科 2010年一月二十日

圖文報告系統(tǒng)操作流程

1． 檢查電源后打開電腦。2． 點擊“圖文報告系統(tǒng)”。

3． 點擊“報告登錄”鍵進行病理報告錄入。4． 點擊“改一般信息”鍵對已發(fā)報告進行輸入。5． 點擊“攝像采集”鍵進行病理切片的采集、分析。6． 認真核對無誤后點擊“打印”鍵進行報告打印。7． 下班前退出“圖文報告系統(tǒng)”并關(guān)機，關(guān)電源。

病理科 2010年一月二十日

電子天平操作規(guī)程

1.打開電源開關(guān)。2.打開天平開關(guān)。3.校正到“0”。4.進行藥物稱量。

5.稱量完畢后，關(guān)閉開關(guān)及電源。

病理科 2005年8月

尼康顯微鏡80i熒光使用操作注意事項

1.開機前檢查顯微鏡電源和熒光汞燈電源是否關(guān)閉，在做熒光觀察時最好關(guān)閉顯微鏡主機電源。

2.開機預(yù)熱：落射熒光汞燈電源開啟后，需預(yù)熱最少5分鐘再進行激發(fā)。

3.使用中根據(jù)熒光的強弱選擇不同的減光片。

4.使用激發(fā)后，不能少于30分鐘再停止激發(fā)。在關(guān)閉了激發(fā)光源后，若要再次使用，時間間隔不能少于30分鐘。

5.經(jīng)常觀察汞燈位置是否居中（通過對中望遠鏡進行觀察），如有偏差進行調(diào)節(jié)至對中。

6.顯微鏡使用完畢后，依次關(guān)閉電源開關(guān)，等機器冷卻一段時間后蓋上防塵罩。

病理科 2006年12月

尼康顯微鏡50i圖像采集系統(tǒng)操作流程

1.檢查電源后打開電腦。2.打開圖像傳輸系統(tǒng)按鈕/ 3.打開顯微鏡。

4.雙擊“圖像采集系統(tǒng)”。5.調(diào)整“圖像采集系統(tǒng)”設(shè)置。6.拍攝并保存圖像。

7.拍攝完畢，退出“圖像采集系統(tǒng)”，并關(guān)機。8.關(guān)閉顯微鏡。

9.關(guān)閉“圖像傳輸系統(tǒng)”。

10.關(guān)電源，等機器冷卻一段時間后蓋上防塵罩。

病理科 2006年12月

試劑配制方法

一、蘇木素染液的配制方法：

A液：蘇木素1g，無水酒精10ml;B液：硫酸鋁鉀20克，蒸餾水200ml;兩液分別溶解后混合，加熱煮沸后，徐徐加入紅色氧化汞0.5g，然后將染液迅速冷卻后過濾使用，使用前每100ml加入冰醋酸4ml。

一、伊紅染液的配制方法（一般濃度為0.25~1%）：

伊紅0.5g，蒸餾水100ml，先用20ml蒸餾水溶解伊紅，全部溶解后加入80ml蒸餾水，最后加一滴冰醋酸。

二、分化液的配制方法：

鹽酸0.5ml，70%酒精100ml。

病理科 2005年6月

腎穿刺活檢染色操作常規(guī)

（一）一、常規(guī)染色

蘇木素——伊紅常規(guī)染色

注：石蠟切片伊紅必須染夠2分鐘。

二、特殊染色

（一）PAS（periodic acid shiff reaction）染色1、1%過碘酸10分鐘；

2、蒸餾水水洗5分鐘；

3、shiff 氏液40分鐘，觀察；

4、蒸餾水水洗；

5、蘇木素復(fù)染；

6、常規(guī)脫水、透明、封片。

（二）Masson染色 染色液配制：

1、Regnd氏蘇木素

蘇木素

95%酒精

甘油

雙蒸水2、0．2%酸性水

冰醋酸

蒸餾水

3、甲液（分析純）

麗春紅

酸性復(fù)紅

冰醋酸

蒸餾水

4、乙液（1%磷鉬酸）

磷鉬酸

蒸餾水

5、丙液（苯胺蘭液）

苯胺蘭

冰醋酸

蒸餾水

操作方法：

1、蘇木素

2、甲液

3、蒸餾水水洗；

1g

10ml

80ml

0.2ml 100ml 0.7g

0.3g

1ml

100ml

1g 100ml 2g 1ml 980ml

5-10分鐘；

20分鐘；

10ml

4、分化于乙液

10分鐘；

5、勿水洗直接入丙液

30秒鐘；

6、蒸餾水水洗；

腎穿刺活檢染色操作常規(guī)

（二）7、酸化液

5分鐘； 8、95%乙醇分化、快速脫水、透明、封固。

（三）PASM染色 染液配制

六胺銀染液：

2%硝酸銀水溶液

ml 6%六次甲基四胺（烏洛托品）

25ml 5%硼砂（四硼酸鈉）

2ml 注：四硼酸鈉易結(jié)晶，事先應(yīng)全部溶解。操作方法：

1、1%過碘酸

10分鐘

2、蒸餾水水洗3、5%鉻酸水溶液

40分鐘

4、蒸餾水水洗

5、六胺銀溶液60℃ 40分鐘（20分鐘后

每5分鐘觀察一次）

6、蒸餾水水洗7、0．2%氯化金水溶液

1-2分鐘

8、蒸餾水水洗9、5%硫代硫酸鈉水溶液

1-2分鐘

10、蒸餾水水洗

11、蘇木素復(fù)染、透明、封固。

（四）PASm+Masson套染

1、上接PASm第9步，水洗；

2、甲液

2分鐘；

3、蒸餾水水洗；

4、乙液

10分鐘；

5、勿水洗直接入丙液

30分鐘；

6、蒸餾水水洗入酸化液

5分鐘；

7、95%乙醇分化、快速脫水、透明、封固。

離心機操作規(guī)范

1、將液體標本分裝入離心管中，用天平平衡后對稱地放入離心管托架內(nèi)。

2、蓋上離心機蓋，設(shè)定時間為5分鐘，轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/分，按下“開始”鍵后離心機開始工作。

3、待離心機完全停止運轉(zhuǎn)后，方可關(guān)閉電源，打開離心機蓋，取出標本，蓋好離心機蓋。

4、每日清潔離心機。

生物光學(xué)顯微鏡操作規(guī)程

顯微鏡屬于精密光學(xué)儀器，為了保證顯微鏡系統(tǒng)正常的發(fā)揮功能，特制定本規(guī)程。顯微鏡由專人使用，專人負責日常維護、保養(yǎng)。任何人未經(jīng)許可，不得調(diào)試該設(shè)備。

顯微鏡系統(tǒng)的操作步驟及日常維護、保養(yǎng)注意事項如下：

一、顯微鏡部分

1、去掉防塵罩，打開電源。

2、將試樣置于載物臺墊片，調(diào)整粗/微調(diào)旋鈕進行調(diào)焦，直到觀察到的圖像清晰為止。

3、調(diào)整載物臺位置，找到關(guān)心的視場，進行金相分析。

二、計算機及圖像分析系統(tǒng)

將顯微鏡上的觀察/照相切換旋鈕調(diào)至位置，顯微鏡里觀察到的信息便轉(zhuǎn)換到視頻接口和攝像頭，打開計算機，啟動圖象分析軟件，即可觀察到來自顯微鏡的實時的圖像，找到關(guān)心的視場后將其采集、處理。

三、日常維護、保養(yǎng)及注意事項

為保證系統(tǒng)的使用壽命及可靠性，注意以下事項：

1.試驗室應(yīng)具備三防條件：防震（遠離震源）、防潮（使用空調(diào)、干燥器）、防塵（地面鋪上地板）；電源：220V+-10%,50HZ溫度：0-40℃ 2.調(diào)焦時注意不要使物鏡碰到試樣，以免劃傷物鏡。3.當載物臺墊片圓孔中心的位置遠離物鏡中心位置時不要切換物鏡，以免劃傷物鏡。

4.亮度調(diào)整切忌忽大忽小，也不要過亮，影響燈泡的使用壽命，同時也有損視力。

5.所有（功能）切換，動作要輕，要到位。6.關(guān)機時要將亮度調(diào)到最小。

7.非專業(yè)人員不要調(diào)整照明系統(tǒng)（燈絲位置燈），以免影響成像質(zhì)量。8.更換鹵素燈時要注意高溫，以免灼傷；注意不要用手直接接觸鹵素燈的玻璃體。

9.關(guān)機不使用時，將物鏡通過調(diào)焦機構(gòu)調(diào)整到最低狀態(tài)。

10.關(guān)機不使用時，不要立即該蓋防塵罩，待冷卻后再蓋，注意防火。11.不經(jīng)常使用的光學(xué)部件放置于干燥皿內(nèi)。

12.非專業(yè)人員不要嘗試擦物鏡及其它光學(xué)部件。目鏡可以用脫脂棉簽蘸1:1比例（無水酒精：乙醚）混合液體甩干后擦拭，不要用其他液體，以免損傷目鏡。

病理檢查服務(wù)項目目錄

1、局部切除組織活檢檢查與診斷

2、內(nèi)鏡組織活檢檢查與診斷

3、手術(shù)標本檢查與診斷

4、骨髓組織活檢檢查與診斷

5、穿刺組織活檢檢查與診斷

6、特殊染色：

PAS染色 VG染色 Masson染色 剛果紅染色 抗酸染色

7、普通病理會診

8、細胞學(xué)診斷

病理科

2010年1月20日

第五篇：SMT技術(shù)員操作規(guī)范

SMT技術(shù)員操作規(guī)范

1、設(shè)備維護保養(yǎng)

技術(shù)員負責車間所有設(shè)備的周保養(yǎng)及月保養(yǎng)執(zhí)行工作，同時監(jiān)督員工進行日常清潔工作。

2、設(shè)備操作

技術(shù)員應(yīng)隨時對設(shè)備進行調(diào)整，以保證設(shè)備正常運行。

3、編程

對于編程，技術(shù)員應(yīng)確保一次性編好，不能錯件，少件，多件，極性錯。同時確保程序達到最優(yōu)化，以提升效率。對于修改程序，一定要返回之后再改，改好之后再優(yōu)化，不能直接在擴展程序上改動，防止后面出錯。

4、機器拋料控制

技術(shù)員應(yīng)隨時觀察機器的拋料情況，對于連續(xù)拋料的，要及時調(diào)整機器，減少物料損耗。

5、操機員培訓(xùn)及管理

技術(shù)員負責對操機員的培訓(xùn)及監(jiān)督工作，對于操作員操作不當?shù)牡胤綉?yīng)及時提醒改正。特別是機器的安全操作，及人身安全。

6、爐溫測試

技術(shù)員負責爐溫測試工作，每天至少一次測試，以日期命名文件。注意調(diào)節(jié)溫度，保證PCB焊接品質(zhì)。

7、在線品質(zhì)控制及效率提升

技術(shù)員負責生產(chǎn)線的全部品質(zhì)控制工作，重點監(jiān)控印錫，操機，回流焊接，返修工位。對于貼片機應(yīng)調(diào)試到最優(yōu)化狀態(tài)，減少停機時間，換料時間，減少故障報警率。

編輯：龍人smt事業(yè)部