第一篇：新微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)提綱

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)提綱

1.研究微生物學(xué)的基本技術(shù)有哪些？（顯微鏡技術(shù)、無(wú)菌技術(shù)、純種分離技術(shù)和純種培養(yǎng)技術(shù)）

2.光學(xué)顯微鏡又稱(chēng)“復(fù)式顯微鏡”，由哪兩部分組成？顯微鏡的什么最為關(guān)鍵？為什么？

3.油鏡的放大倍數(shù)為多少？與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需在載玻片與鏡頭間滴加什么？其什么作用？

4.影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？（光源的波長(zhǎng)、物鏡的鏡口角和鏡頭間介質(zhì)的折射率）

5.油鏡使用后應(yīng)怎樣處理？鏡油擦拭的正確方法是怎樣的？

6.制造接種環(huán)、接種針的金屬常用,原因是.7.培養(yǎng)皿的包裝一般以多少套作一包比較合適？5~8套。

8.滅菌吸管的包裝的注意事項(xiàng)：（1）吸管必須干燥;(2)處，塞一小段約1.5cm長(zhǎng)的棉花（不能用脫脂棉）。作用是避免外界及口中雜菌吸入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。

9.空的玻璃器皿一般用，若用濕熱滅菌。則要多用幾層報(bào)紙包扎，外面最好加一層牛皮紙或鋁箔。

10.11.簡(jiǎn)單染色的原理是什么？其主要操作步驟是什么？固定的作用是什么？染色過(guò)程中應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？

12.革蘭氏染的原理及步驟是什么？革蘭氏染色后的正確結(jié)果是什么顏色？

13.你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？ 答：（1）涂片不宜過(guò)厚，以免脫色不完全造成假陽(yáng)性；

（2）脫色，此環(huán)節(jié)最關(guān)鍵。脫色不足，陰性菌被誤染成陽(yáng)性菌；脫色過(guò)度，陽(yáng)性菌被誤染成陰性菌。

（3）菌齡也影響染色結(jié)果。如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或已死亡及部分菌自行溶解了，會(huì)出現(xiàn)陰性反應(yīng)。

14.酵母的死細(xì)胞和活細(xì)胞可通過(guò)哪些方式鑒別？

15.霉菌的直接制片觀察法常用什么染色劑？此染液的優(yōu)點(diǎn)是什么？

16.細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類(lèi)微生物的菌落各有何特點(diǎn)？

17.為什么霉菌菌落的中央與邊遠(yuǎn)、正面與反面在外形、顏色、構(gòu)造等方面常有明顯的差別？放線菌、細(xì)菌和酵母菌呢？（理解）

18.測(cè)量微生物大小的工具是什么？包括哪兩部分？功能各是什么？

19.如何校正目鏡測(cè)微尺刻度？計(jì)算公式？更換不同放大倍數(shù)的目鏡活物鏡時(shí)，是否需要重新校正？

20.培養(yǎng)基按化學(xué)成分、物理狀態(tài)、用途劃分可分為哪幾種類(lèi)型？

21.實(shí)驗(yàn)常用的凝固劑是哪一種？固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基加凝固劑瓊脂的量為多少？瓊脂在什么溫度下溶化？什么溫度下凝固？

22.配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)遵循哪些原則？配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟是什么？配制培養(yǎng)基時(shí)不可用銅鍋或鐵鍋，原因是什么？調(diào)pH一般用什么試劑調(diào)？配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)怎樣配制？

23.培養(yǎng)基分裝時(shí)，液體分裝高度以試管的多少為宜，三角瓶的多少為宜？固體分裝高度以試管的多少為宜，三角瓶的多少為宜？半固體分裝高度以試管的多少為宜？

24.培養(yǎng)基滅菌時(shí)外用牛皮紙包扎的目的是什么？

25.擺斜面的正確方法是什么？

26.棉塞的作用是什么？正確的棉塞要求是什么？棉塞的長(zhǎng)度多少在管口外，多少在管內(nèi)為宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脫脂棉？為什么？

27.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如果來(lái)不及滅菌應(yīng)如何處理？

28.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、馬鈴薯（PDA）培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基或豆芽汁培養(yǎng)基分別培養(yǎng)什么微生物？

29.什么是選擇性培養(yǎng)基？試分析教材P98酵母菌富集培養(yǎng)基和Ashby無(wú)氮培養(yǎng)基的選擇原理。

30.什么是鑒別性培養(yǎng)基？試以EMB培養(yǎng)基為例，分析其鑒別作用的原理。

31.蛋白胨稱(chēng)取時(shí)應(yīng)怎樣？為什么？溶解可溶性淀粉的正確方法是什么？高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基中0.001%FeSO4 7H2O配制的正確方法是什么？

32.配制合成培養(yǎng)基加微量元素時(shí)最好用什么方法加入？天然培養(yǎng)基為什么不需要另加微量元素？

33.馬丁氏培養(yǎng)基中孟加拉紅、鏈霉素的作用是什么？鏈霉素應(yīng)如何加入？

34.采用什么方法能分離到能分解并利用苯作為碳源和能源物質(zhì)的細(xì)菌純培養(yǎng)？（以苯作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基）

答：①?gòu)谋胶枯^高的環(huán)境中采集土樣或水樣；②配制培養(yǎng)基，倒平板，一般僅以苯作為唯一碳源（A），另一種不含任何碳源作為對(duì)照（B）；③將樣品適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄊ断♂尫ǎ坎糀平板；④將平板置于溫度適當(dāng)?shù)臈l件下（37℃）培養(yǎng)，觀察是否有菌落產(chǎn)生；⑤將A平板上的菌落編號(hào)并分別轉(zhuǎn)接至B平板，置于相同溫度條件下培養(yǎng)（在B平板上生長(zhǎng)的菌落可利用空氣中的CO2的自養(yǎng)型微生物）；⑥挑取在A平板上生長(zhǎng)而不在B平板上生長(zhǎng)的菌落，在一個(gè)新的A平板上劃線、培養(yǎng)，獲得單菌落，初步確定為可利用苯作為碳源和能源的微生物純培養(yǎng)物；⑦將初步確定的目標(biāo)菌株轉(zhuǎn)接至以苯作為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，利用相應(yīng)的化學(xué)分析方法定量分析該菌株分解苯的情況。

35.什么是滅菌？消毒？列表比較高溫滅菌或消毒的各大方法的溫度、時(shí)間、適用對(duì)象？

36.干熱滅菌原理是什么？為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需要的溫度高，時(shí)間長(zhǎng)？

37.在干熱滅菌過(guò)程中應(yīng)注意哪些問(wèn)題,為什么？

38.高壓蒸汽滅菌的關(guān)鍵技術(shù)是什么？（壓力上升之前需將鍋內(nèi)冷空氣排盡）

39.高壓蒸汽滅菌開(kāi)始之前，為什么要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降低“0”時(shí)才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物？

免？

40.對(duì)含糖（如葡萄糖或乳糖等）培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，應(yīng)采用大多壓力、多長(zhǎng)時(shí)間滅菌為宜？

41.對(duì)血清、噬菌體濃縮液、氨基酸溶液、維生素溶液、抗生素溶液能否進(jìn)行高壓蒸汽滅菌？應(yīng)采用何種方法除菌為宜？

42.紫外線滅菌的原理及適用對(duì)象是什么？

43.過(guò)濾除菌法的適用對(duì)象是什么？缺點(diǎn)是什么？

44.微生物的平板分離純化技術(shù)是哪位科學(xué)家發(fā)明的？德國(guó)人科赫

45.微生物分離純化常用的方法有哪些？劃線法、單細(xì)胞挑取法、稀釋平板法、選擇培養(yǎng)基法

46.如果要從自然界中篩選能產(chǎn)高溫蛋白酶的菌株，你將如何完成？寫(xiě)出簡(jiǎn)明的實(shí)驗(yàn)方案。

47.如果用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基分離一種對(duì)青霉素具有抗性的細(xì)菌，你認(rèn)為該如何做？

48.稀釋分離時(shí)，為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45～50左右才能傾入到裝有菌液的皿內(nèi)？

49.在恒溫箱中培養(yǎng)微生物時(shí)為何培養(yǎng)皿均需倒置？（①防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)②防止冷凝水的流動(dòng)造成平板表面的“交叉感染”，影響單個(gè)菌落的形成③防止外物掉在培養(yǎng)基上.）

50.請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)分離篩選下列微生物菌種的試驗(yàn)方案（提示：包括采樣、稀釋液制備、培養(yǎng)基名稱(chēng)、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、分離純化方法等）

（1）土壤中鏈霉素產(chǎn)生菌的分離、純化

（2）啤酒泥或酒曲發(fā)酵窖泥中酵母菌的分離、純化

（3）甜酒藥曲或釀酒種曲中霉菌的分離、純化

51.常用菌種保藏方法有哪些？有何優(yōu)缺點(diǎn)？

52.ATCC采用菌種保藏的方法是什么？

53.常用于測(cè)定微生物數(shù)量的方法有哪些？

54.什么是顯微直接計(jì)數(shù)法？工具是什么？此方法的優(yōu)缺點(diǎn)？缺點(diǎn)怎樣克服？

55.利用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，如何計(jì)數(shù)？計(jì)算公式？

56.簡(jiǎn)述測(cè)定化學(xué)消毒劑的殺（抑）菌作用的濾紙片法。

57.某公司推出一種新型飲料，并聲稱(chēng)是100％的純天然產(chǎn)品，不含防腐劑，利用你所掌握的微生物學(xué)知識(shí)，試設(shè)計(jì)一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)來(lái)初步判斷此飲料是否含防腐劑。

58.根據(jù)深層瓊脂培養(yǎng)的特征來(lái)判斷好氧菌、微好氧菌、兼性厭氧菌、專(zhuān)性厭氧菌、耐氧厭氧菌。P103

59.什么是IMViC試驗(yàn)？硫化氫試驗(yàn)？作用是什么？各試驗(yàn)的原理是什么？結(jié)果是什么？

60.我國(guó)衛(wèi)生部門(mén)規(guī)定的飲用水標(biāo)準(zhǔn)是什么？1mL自來(lái)水中的細(xì)菌總數(shù)不可超過(guò)100個(gè)（37℃，培養(yǎng)24h），而1000mL自來(lái)水中的大腸菌群數(shù)則不能超過(guò)3個(gè)（37℃，培養(yǎng)24h）。

61.水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群值各反映了什么？

62.水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定的方法是什么？（平板菌落計(jì)數(shù)法）自來(lái)水、湖水采集的正確方法是什么？

63.水中大腸菌群的檢測(cè)方法---多管發(fā)酵法的基本原理？包括哪3個(gè)部分？陽(yáng)性和陰性判斷的依據(jù)是什么？德漢氏小管起什么作用？溴甲酚紫起什么作用？

64.EMB培養(yǎng)基的鑒別大腸菌群原理是什么？EMB培養(yǎng)基含哪幾種主要成分？在檢查大腸菌群時(shí)，各起什么作用？（乳糖是碳源起選擇作用，大腸菌群能利用，而很多其他細(xì)菌不能利用；蛋白胨是氮源；NaCl是無(wú)機(jī)鹽；伊紅和美藍(lán)作為指示劑）大腸菌群在EMB培養(yǎng)基上的典型菌落特征是什么？

65.包括腸桿菌科的埃希氏菌屬（Escherichia）、腸桿菌屬（Enterobacter）、檸檬酸細(xì)菌屬（Citrobacter）和克雷伯氏屬（Klebsiella）。

66.影響微生物生長(zhǎng)的主要因素有、和等。

67.細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌培養(yǎng)的溫度一般為多少？培養(yǎng)時(shí)間？

68.名詞解釋?zhuān)簾o(wú)菌技術(shù)/操作、分辨率、菌落、菌苔、簡(jiǎn)單染色法、革蘭氏染色法、培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、消毒、滅菌、純培養(yǎng)、石炭酸系數(shù)、大腸菌群

革蘭氏染色法：丹麥醫(yī)生Gram于1884年創(chuàng)立的，是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法?；静襟E是：結(jié)晶紫初染、碘液媒染、乙醇脫色、復(fù)染劑復(fù)染。染色結(jié)果為藍(lán)紫色的細(xì)菌為G+，紅色的細(xì)菌為G-。

無(wú)菌技術(shù)/操作：在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時(shí)防止其被其他微生物污染的技術(shù)。

純培養(yǎng)：在實(shí)驗(yàn)室條件下由一個(gè)細(xì)胞繁殖而產(chǎn)生的后代。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告中的思考題要認(rèn)真復(fù)習(xí)

第二篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

細(xì)菌群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過(guò)濾法(membrane filtration)等。測(cè)定細(xì)胞物質(zhì)的方法有細(xì)胞干重的測(cè)定，細(xì)胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測(cè)定，代謝產(chǎn)物的測(cè)定等。總之，測(cè)定微生物生長(zhǎng)量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。本實(shí)驗(yàn)主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。

一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

（一）目的要求

1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。

2．掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。

（二）基本原理

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱(chēng)計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。目前國(guó)內(nèi)外常用的計(jì)菌器有：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、Peteroff-Hauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等，它們都可用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等懸液的計(jì)數(shù)，基本原理相同。后兩種計(jì)菌器由于蓋上蓋玻片后，總?cè)莘e為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。除了用這些計(jì)菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細(xì)菌學(xué)檢查。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡(jiǎn)單。但此法的缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時(shí)間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來(lái)達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。本實(shí)驗(yàn)以血球計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行顯微鏡直接計(jì)數(shù)。另外兩種計(jì)菌器的使用方法可參看各廠商的說(shuō)明書(shū)。

用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各列有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖l5-1。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為lmm，則每一個(gè)大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.lmm3(萬(wàn)分之一毫升)。

圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造

（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造

（二）A.正面圖；B.縱切面圖； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板；2.蓋玻片；3.計(jì)數(shù)室

計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。

設(shè)五個(gè)中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則

1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）

同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×16×104×B=32000A·B（個(gè)）

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母

2．儀器或其他用具 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無(wú)菌毛細(xì)滴管。

（四）操作步驟

l．菌懸液制備

以無(wú)菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙骸?/p>

2．鏡檢計(jì)數(shù)室

在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3．加樣品

將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無(wú)菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿(mǎn)菌液。

取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。

4．顯微鏡計(jì)數(shù)

加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。

調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對(duì)于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見(jiàn)豎線或只見(jiàn)橫線。

在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格(可選4個(gè)角和中央的一個(gè)中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算樣品的含菌量。

5．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

使用完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。

（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

l．結(jié)果

將結(jié)果記錄于下表中。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml

12345

第一室

第二室

2．思考題

(1)根據(jù)你的體會(huì)，說(shuō)明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?

(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測(cè)方法。

二平板菌落計(jì)數(shù)法

（一）目的要求

學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。

（二）、基本原理

平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可來(lái)自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來(lái)表示樣品的活菌含量。

平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測(cè)。

（三）器材

1．菌種 大腸桿菌菌懸液。

2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。

3．儀器或其他用具lm1無(wú)菌吸管，無(wú)菌平皿，盛有4.5ml無(wú)菌水的試管，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。

（四）操作步驟

l．編號(hào)

取無(wú)菌平皿9套，分別用記號(hào)筆標(biāo)明10-

4、10-

5、10-6。(稀釋度)各3套。另取6支盛有4.5mL無(wú)菌水的試管，依次標(biāo)是10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-6。

2．稀釋

用lmL無(wú)菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測(cè)樣品)，精確地放0.5ml至10-1的試管中，此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。

OptionsEmail Replies將10-1試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。另取一支lml吸管插入10?1試管中來(lái)回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時(shí)不要太猛太快，吸時(shí)吸管伸人管底，吹時(shí)離開(kāi)液面，以免將吸管中的過(guò)濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋?！溆嘁来晤?lèi)推，整個(gè)過(guò)程如圖15-3所示。

放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。

3，取樣

用三支1mL無(wú)菌吸管分別吸取10-

4、10-5和10-6。的稀釋菌懸液各lmL，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無(wú)菌平皿中，每個(gè)平皿放0.2mL。

不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀釋菌液放入平皿臼，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復(fù)平板間的操作誤差。

圖15—3平板菌落計(jì)數(shù)操作步驟

4．倒平板．

盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。由于細(xì)菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細(xì)菌將不易分散或長(zhǎng)成的菌落連在一起，影響計(jì)數(shù)。

待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5．計(jì)數(shù)

培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5

一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。實(shí)際工作中同一稀釋度重復(fù)對(duì)照平板不能少于三個(gè)，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，減少誤差。由10-

4、10-

5、10-6三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。

平板菌落計(jì)數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。

平板菌落計(jì)數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號(hào)，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺(tái)上適當(dāng)吹干，然后用無(wú)菌吸管吸取稀釋好的菌液對(duì)號(hào)接種于不同稀釋度編號(hào)的平板上，并盡快用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。

涂布平板用的菌懸液量一般以0.1ml較為適宜，如果過(guò)少菌液不易涂布開(kāi)，過(guò)多則在涂布完后或在培養(yǎng)時(shí)菌液仍會(huì)在平板表面流動(dòng)，不易形成單菌落。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．結(jié)果

2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表

稀釋度10-410-510-6

Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均

每毫升中的cfu

2．思考題

(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?

(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?

(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。

(4)當(dāng)你的平板上長(zhǎng)出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問(wèn)題出在哪里?

(5)用倒平板法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長(zhǎng)出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間(48h)后觀察結(jié)果?

三 光電比濁計(jì)數(shù)法

一、目的要求

1．了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理。

2．學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。

二、基本原理

當(dāng)光線通過(guò)微生物菌懸液時(shí)，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過(guò)量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測(cè)出(圖15-4)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測(cè)定光密度，作出光密度—菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，以樣品液所測(cè)得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的菌數(shù)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，菌體計(jì)數(shù)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測(cè)定等方法。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

光電比濁計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、迅速，可以連續(xù)測(cè)定，適合于自動(dòng)控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長(zhǎng)等因素的影響。因此，對(duì)于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計(jì)數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過(guò)最大吸收波長(zhǎng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)確定。另外，對(duì)于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進(jìn)行測(cè)定。

圖15—4 比濁法測(cè)定細(xì)胞濃度的原理

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液

2．儀器或其他用具 721型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無(wú)菌吸管，無(wú)菌生理鹽水等。

（四）操作步驟

1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

（1）編號(hào) 取無(wú)菌試管7支，分別用記號(hào)筆將試管編號(hào)為1、2、3、4、5、6、7。

（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無(wú)菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106、12×106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。再分別裝入已編好號(hào)的1至7號(hào)無(wú)菌試管中。

（3）測(cè)OD值 將1至7號(hào)不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長(zhǎng)、1cm比色皿中測(cè)定OD值。比色測(cè)定時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照，并將OD值填入下表

管號(hào)12345678

細(xì)胞數(shù)106/ml

光密度（OD）

每管菌懸液在測(cè)定OD值時(shí)均必須先搖勻后再倒入比色皿中測(cè)定

(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2．樣品測(cè)定

將待測(cè)樣品用無(wú)菌生理鹽水適當(dāng)稀釋?zhuān)瑩u均勻后，用560nm波長(zhǎng)、lcm比色皿測(cè)定光密度。測(cè)定時(shí)用無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照。

各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的相同，否則，測(cè)得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。

3．根據(jù)所測(cè)得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。

（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

l．結(jié)果

每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)×稀釋倍數(shù)

2．思考題

(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?

(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)用價(jià)值?

(3)本實(shí)驗(yàn)為什么采用560nm波長(zhǎng)測(cè)定酵母菌懸液的光密度?如果你在實(shí)驗(yàn)中需要測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)的OD值，你將如何選擇波長(zhǎng)?

四 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

(一)目的要求

1．通過(guò)細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)線。

2．復(fù)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法。

(二)基本原理

大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時(shí)期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱(chēng)為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線，了解其生長(zhǎng)繁殖規(guī)律，這對(duì)人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長(zhǎng)具有重要意義。

用于測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實(shí)驗(yàn)作了介紹。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。也可以直接用試管或帶有測(cè)定管的三角瓶(圖15-5)測(cè)定“klett units”值的光度計(jì)。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個(gè)帶測(cè)定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時(shí)間(橫坐標(biāo))取樣測(cè)定，以測(cè)得的klett units為縱坐標(biāo)，便可很方便地繪制出細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/0.002換算出所測(cè)菌懸液的OD值。

圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶

(三)器材

1．菌種 大腸桿菌

2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

3．儀器或其他用具 722型分光光度計(jì)，水浴振蕩搖床，無(wú)菌試管，無(wú)菌吸管等。

圖15—6 直接用試管測(cè)OD值

(四)操作步驟

1．標(biāo)記

取11支無(wú)菌大試管，用記號(hào)筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。

2．接種

分別用5ml無(wú)菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過(guò)夜培養(yǎng)液(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌大試管中。

3．培養(yǎng)

將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測(cè)定其光密度值。

4．比濁測(cè)定

用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照，選用600nm波長(zhǎng)進(jìn)行光電比濁測(cè)定。從早取出的培養(yǎng)液開(kāi)始依次測(cè)定，對(duì)細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其光密度值在0.1~0.65之內(nèi)(測(cè)定OD值前，將待測(cè)定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。

本操作步驟也可用簡(jiǎn)便的方法代替：

1．用1ml無(wú)菌吸管取0.25ml大腸桿菌過(guò)夜培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計(jì)的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個(gè)大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒(méi)有接種的試管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測(cè)定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。

2．分別在培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測(cè)定OD值。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測(cè)定的準(zhǔn)確度愈高。

(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．結(jié)果

(1)將測(cè)定的OD600值填入下表：

培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值OD600

(2)繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。

2．思考題

(1)如果用活菌計(jì)數(shù)法制作生長(zhǎng)曲線，你認(rèn)為會(huì)有什么不同？?jī)烧吒饔惺裁磧?yōu)缺點(diǎn)？

(2)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所經(jīng)歷的四個(gè)時(shí)期中，哪個(gè)時(shí)期其代時(shí)最短？若細(xì)胞密度為103/ml，培養(yǎng)4.5h后，其密度高達(dá)2×108/ml，計(jì)計(jì)算出其代時(shí)。

(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期？根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？

評(píng)論這張

第三篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)考試題

《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》試題

1、在進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，是否只要滅菌鍋壓力表到達(dá)所需的值時(shí)鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？

2、在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？

3、高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個(gè)步驟？每一步驟應(yīng)注意哪些問(wèn)題？

4、在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？

5、環(huán)境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時(shí)，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？

6、在革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)中，為什么會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性？如何避免？

7、在革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)中，不經(jīng)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌？為什么？

8、為何用計(jì)數(shù)板可以計(jì)得樣品中的總菌值？如何計(jì)算樣品中的菌體濃度？

9、血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)室內(nèi)如有氣泡會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？

10、試分析血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法的誤差來(lái)源，并提出減少誤差的方法和措施。

要求把題目和答案寫(xiě)在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上，統(tǒng)一收齊后和第一次實(shí)驗(yàn)報(bào)告一起送到我辦公室-生科樓104。

第四篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)考核辦法

本科微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)考核辦法

考核方式：按學(xué)號(hào)順序逐一進(jìn)場(chǎng)應(yīng)考?？己藘?nèi)容共8項(xiàng)，每位同學(xué)通過(guò)抽簽考其中的一項(xiàng)內(nèi)容?？己藭r(shí)間：每人限6分鐘內(nèi)完成。

考核地點(diǎn)：微免實(shí)驗(yàn)課上課的實(shí)驗(yàn)室

考核內(nèi)容及要求如下：

1、顯微鏡（油鏡）的使用和保護(hù)方法

（1）、提供一張細(xì)菌玻片標(biāo)本，要求能正確使用油鏡觀察到細(xì)菌的基本形態(tài)。

（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護(hù)方法

2、血清對(duì)倍稀釋法

（1）、用生理鹽水將血清進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān)K濃度達(dá)到1/ 2、1/ 4、1 /8三個(gè)稀釋度。

（2）、掌握血清對(duì)倍稀釋的原理及方法，能正確使用刻度吸管。

3、玻片凝集試驗(yàn)

（1）、要求用傷寒診斷血清，采用玻片凝集試驗(yàn)的方法檢測(cè)待檢細(xì)菌是否為傷寒桿菌。

（2）、要求操作方法、步驟正確，能準(zhǔn)確判斷結(jié)果。

（3）、無(wú)菌操作正確。

4、革蘭氏染色法

（1）、口試回答細(xì)菌涂片的制作方法

（2）、將一張已涂好的細(xì)菌玻片進(jìn)行革蘭氏染色

（3）、要求染色步驟及各項(xiàng)染色時(shí)間正確，操作熟練。

5、細(xì)菌的劃線分離培養(yǎng)技術(shù)

（1）、將細(xì)菌分區(qū)劃線到普通瓊脂平碟上。

（2）、要求劃線分區(qū)正確，接種劃線手法正確、熟練。

（3）、無(wú)菌操作正確。

6、液體和半固體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種方法（無(wú)菌操作）

（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。

（2）、要求各環(huán)節(jié)無(wú)菌操作正確。

7、細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察

（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。

（2）、正確描述液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

（3）、正確觀察出鏡下細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)。

8、抗酸染色法

（1）、正確回答抗酸染色的各個(gè)步驟（包括用加熱法或不加熱法 初染的時(shí)間）。

（2）、操作技術(shù)手法正確熟練

（3）、脫色程度控制較好。

注：經(jīng)一次考核不及格者，可在全班同學(xué)考核結(jié)束后，允許補(bǔ)考一次。補(bǔ)考成績(jī)通過(guò)后只計(jì)及格。

第五篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)

高熹

1120152430 時(shí)間如清風(fēng)般從你我指間滑過(guò),無(wú)聲無(wú)息,快得我們都不曾駐足一望,莫然回首間,本學(xué)期的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)已接近尾聲。一學(xué)期的時(shí)間雖短，但老師的諄諄教誨、同學(xué)們的良好配合和嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作，都將為微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程畫(huà)上一個(gè)完美的句號(hào)。

眾所周知，微生物學(xué)是一門(mén)實(shí)驗(yàn)與理論高度結(jié)合的科目，是一門(mén)以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)與生活生產(chǎn)息息相關(guān)的課程。需要我們不斷地做實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)中觀察、分析相應(yīng)的結(jié)果。所以我認(rèn)為，要做好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要有以下的四個(gè)能力：

1、獨(dú)立思考能力

我想，在這個(gè)過(guò)程中，其中一個(gè)重要的感悟就是獨(dú)立思考的重要性。當(dāng)在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)與預(yù)料過(guò)程所不符，那么必定是過(guò)程中出現(xiàn)錯(cuò)誤，而尋找并解決的這個(gè)過(guò)程是書(shū)本中無(wú)法給予的。做實(shí)驗(yàn)絕對(duì)不能人云亦云，要有自己的看法，這樣就要有充分的準(zhǔn)備，若是做了也不知道是個(gè)什么實(shí)驗(yàn)，那么做了也是白做。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，自己看書(shū)，獨(dú)立思考，最終解決問(wèn)題，從而也就加深了我們對(duì)課本理論知識(shí)的理解，達(dá)到了“雙贏”的效果。

2、突破創(chuàng)新能力

實(shí)際上，在弄懂了實(shí)驗(yàn)原理的基礎(chǔ)上，我們的時(shí)間是充分的，做實(shí)驗(yàn)應(yīng)該是游刃有余的，如果說(shuō)創(chuàng)新對(duì)于我們來(lái)說(shuō)是件難事，那改良總是有可能的。試著通過(guò)自己現(xiàn)有的知識(shí)，多想，多做，多總結(jié)，我想首先是作為一個(gè)求知者在追求知識(shí)的道路上必須堅(jiān)守的原則，其次就是要敢于突破，我們都站在巨人的肩膀上，踮起腳尖即使觸不到天空，也可以更加拓寬自己的視野。

3、現(xiàn)代信息技術(shù)的使用能力

在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)中，有很多特殊的、特定的實(shí)驗(yàn)，如有毒有害物質(zhì)參與且不易排污的實(shí)驗(yàn)、不易操作或難以成功的實(shí)驗(yàn)、需要反復(fù)觀察的實(shí)驗(yàn)、反應(yīng)慢導(dǎo)致單位課時(shí)中難以完成的實(shí)驗(yàn)等。我們?cè)谘芯扛倪M(jìn)措施的同時(shí)，也可以借助于現(xiàn)代信息技術(shù)手段制作視頻資料或多媒體課件進(jìn)行輔助學(xué)習(xí)。

4、動(dòng)手能力

動(dòng)手操作對(duì)激發(fā)微生物學(xué)學(xué)習(xí)興趣、幫助理解微生物學(xué)知識(shí)、培養(yǎng)解決問(wèn)題能力、創(chuàng)新能力等具有重要作用。尤其是微生物學(xué)這樣一種學(xué)科，動(dòng)手能力的強(qiáng)弱與知識(shí)的掌握其實(shí)是同等重要的。如果動(dòng)手能力太弱，所學(xué)習(xí)到的知識(shí)就無(wú)法通過(guò)有效的方式真正組織起來(lái)，那么學(xué)到的知識(shí)就只是輸入而沒(méi)有輸出，只有理論而沒(méi)有實(shí)踐，對(duì)于這樣一門(mén)學(xué)科，這樣的缺陷是致命的，而這樣的能力是必須具備的。

本學(xué)期我們一共完成了十個(gè)實(shí)驗(yàn)，分別是：顯微鏡油鏡的使用、細(xì)菌形態(tài)觀察和細(xì)菌的革蘭氏染色、放線菌、酵母菌、霉菌的形態(tài)觀察和微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)法、培養(yǎng)基的制備、周?chē)h(huán)境中微生物的觀察以及從土壤中分離純化微生物、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定、環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)發(fā)育的影響、細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)、微生物的誘變育種、水中大腸菌群的計(jì)數(shù)—MPN法、乳酸菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、甜酒釀發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵啤酒實(shí)驗(yàn)。

通過(guò)這些微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，不僅是對(duì)我理論課程的加深，更是對(duì)我實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ?一個(gè)顯著的提高。其中，做實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，我認(rèn)為以下的幾點(diǎn)對(duì)于我未來(lái)的學(xué)習(xí)和科研具有重大意義：

1、嚴(yán)格的無(wú)菌操作，在微生物實(shí)驗(yàn)中，由于空氣和環(huán)境中存在大量的微生物，所以很可能造成培養(yǎng)基的污染，影響最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以實(shí)驗(yàn)中，無(wú)菌操作尤為重要。各種實(shí)驗(yàn)用具要嚴(yán)格高溫滅菌，防止用具本身污染。實(shí)驗(yàn)時(shí)，接種環(huán)、接種針、移液管口和涂布器等要在酒精燈下灼燒徹底，防止其上面附著著的微生物污染。在微生物實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，有條件要在超凈工作臺(tái)下操作，降低被污染的概率，相關(guān)操作也要在酒精燈附近進(jìn)行。使用超凈工作臺(tái)時(shí)要嚴(yán)格紫外滅菌和打開(kāi)排風(fēng)扇，手和相關(guān)器材進(jìn)入操作臺(tái)前要用酒精仔細(xì)擦拭，清除表面的微生物。無(wú)菌操作往往能決定著一個(gè)實(shí)驗(yàn)的成敗，學(xué)會(huì)無(wú)菌操作尤為重要。

2、微生物實(shí)驗(yàn)中儀器的使用，我學(xué)會(huì)了高壓滅菌鍋的使用，以前的實(shí)驗(yàn)從未接觸過(guò)，并且還復(fù)習(xí)了紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)和分析天平等儀器的使用，使我更加熟練。

3、微生物實(shí)驗(yàn)中，平板劃線和涂布是最重要的兩項(xiàng)操作，平板劃線要注意畫(huà)的連續(xù)性和可分辨性，平板涂布要涂均勻，否則都會(huì)影響后期的實(shí)驗(yàn)觀察和結(jié)果。另外實(shí)驗(yàn)中其他操作，比如稱(chēng)量準(zhǔn)確性，移液管的使用都很重要，所以操作要十分規(guī)范。

4、實(shí)驗(yàn)中的部分思想對(duì)未來(lái)的科研工作尤為重要，比如每一步都要設(shè)立空白對(duì)照組，在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中做出比較討論，這在未來(lái)的自我進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，這種思想的培養(yǎng)尤為重要。

5、另外，實(shí)驗(yàn)中模式菌的學(xué)習(xí)和使用為未來(lái)科研打好良好基礎(chǔ)，比如典型的革蘭氏陰性菌大腸桿菌和典型的革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都是實(shí)驗(yàn)室的常用菌，如果未來(lái)還要從事微生物相關(guān)工作，這幾種模式菌都必不可少。

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要及時(shí)觀察結(jié)果，過(guò)了兩天才去觀察，結(jié)果部分平板已長(zhǎng)出菌苔，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察造成了很大的困難，所以，結(jié)果觀察同實(shí)驗(yàn)操作一樣重要。

與實(shí)驗(yàn)操作相比，本學(xué)期的微生物學(xué)另一個(gè)重要的是學(xué)會(huì)團(tuán)隊(duì)的重要性，每個(gè)實(shí)驗(yàn)憑借一己之力是無(wú)法完成的，而一個(gè)團(tuán)隊(duì)就可以游刃有余。本學(xué)期的實(shí)驗(yàn)讓我最感動(dòng)是我們一個(gè)小組四名成員的精妙配合，造就了這學(xué)期的良好的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

總之，這學(xué)期的實(shí)驗(yàn)給我留下了深刻的印象，在最后，謝謝老師一學(xué)期的辛苦付出，為我未來(lái)的微生物學(xué)的學(xué)習(xí)和科研打好了良好的基礎(chǔ)。