第一篇：塑封機(jī)的工作原理與操作方法淺析

塑封機(jī)的工作原理與操作方法淺析

編輯：湖湘文印聯(lián)盟

塑封機(jī)的工作原理是在電機(jī)的拖動(dòng)下保持勻速轉(zhuǎn)動(dòng)，通過發(fā)熱裝置將膠輥加熱，加上一定的壓力，兩張預(yù)涂膠的塑封膜相對(duì)粘貼在被塑封物上。

由此看出，在工作時(shí)，膠輥的損耗是比較大的，因此在保養(yǎng)時(shí)，應(yīng)該特別注意膠輥的保養(yǎng)與維護(hù)。另外，我們?cè)谄綍r(shí)操作機(jī)器時(shí)，也應(yīng)注意操作方法，切忌錯(cuò)誤操作；這樣在保養(yǎng)時(shí)可以省些麻煩，延長(zhǎng)機(jī)器的使用壽命。

塑封機(jī)的操作方法介紹：

1、將塑封機(jī)平穩(wěn)妥放置在工作平臺(tái)上。

2、將控制面板上的調(diào)節(jié)溫度旋鈕，置于溫度較低的刻度位置，電源開關(guān)在關(guān)的位置。

3、接通電源，插頭要插按牢靠，打開電源開關(guān)，紅色電源指示燈亮，塑封機(jī)同時(shí)開始升溫。

4、根據(jù)塑封膜熱熔溫度的高低和劃片厚度的不同，調(diào)節(jié)溫度旋鈕，設(shè)定適宜的溫度。

5、當(dāng)綠色指示燈亮?xí)r，表示溫度已到設(shè)定溫度可以進(jìn)行塑封工作。

6、將塑封膜分開，將資料頁夾在中間，使塑封膜的涂膠面面對(duì)被塑封物，然后將塑封膜合上。

7、從前向后送入塑封機(jī)中加熱，經(jīng)前后膠輥對(duì)壓后，從后工作面板輸出，即可得到良好的塑封件。

8、塑封工作結(jié)束后，不要立即關(guān)機(jī)，首先將溫度調(diào)節(jié)旋鈕置于最低溫度刻度位置，運(yùn)轉(zhuǎn)5分鐘后再關(guān)機(jī)，以利膠輥使用壽命。

9、關(guān)機(jī)時(shí)先關(guān)掉電源開關(guān)，然后切斷電源。

第二篇：高中史料教學(xué)的原理與操作方法

高中史料教學(xué)的原理與操作方法

王錫文（廣東省中小學(xué)教師工作室，特級(jí)教師）

“歷史是一門既包括描述也包括解釋的學(xué)科。”隨著歷史課程改革的推進(jìn)，史料教學(xué)的重要性將越來越突出。運(yùn)用史料解釋歷史、還原歷史現(xiàn)場(chǎng)，進(jìn)而理解歷史成為新課程改革以來中學(xué)歷史課堂教學(xué)改革的亮點(diǎn)之一，也是實(shí)現(xiàn)三維目標(biāo)的必由途徑。可以說，幾乎每一節(jié)歷史課，都會(huì)有史料教學(xué)的環(huán)節(jié)。同時(shí)，在近幾年來的高考命題改革中，作為一種重要的能力考查目標(biāo)，史料分析的色彩和比重在試卷中將越來越顯著。幾乎可以說，“沒有史料無以成題”。

一、歷史史料教學(xué)的地位和現(xiàn)狀

（一）歷史史料的分類

史料是研究和認(rèn)識(shí)歷史的依據(jù)，是“重現(xiàn)”歷史的基礎(chǔ)。一般來說，史料愈是確鑿、豐富，人們經(jīng)過研究和解釋，對(duì)歷史的認(rèn)識(shí)也就愈是真切，對(duì)歷史的“重現(xiàn)”也就愈接近它的本來面貌。史學(xué)專家們一般把史料分為三類，即文獻(xiàn)史料、實(shí)物史料、口述史料。．文獻(xiàn)史料。一切以文字形式記載的資料，如官私史書、文書檔案、文集日記、野史筆記，以及各方面的書籍和近代以來出現(xiàn)的報(bào)刊、雜志等；也包括了碑刻、摩崖，以及考古發(fā)現(xiàn)的甲骨文、金文、簡(jiǎn)帛、墓志等都屬于文獻(xiàn)史料。今天，除了以紙張為載體的文獻(xiàn)資料以外，還有大量以電子媒介為載體的文獻(xiàn)資料。對(duì)于世界上發(fā)生的大小事件，人們通過電子郵件、BBS 跟帖等方式表明自己的態(tài)度，歷史記載變得更加豐富多樣，也為我們利用好文獻(xiàn)史料組織教學(xué)活動(dòng)提供更為廣闊的資源。．實(shí)物史料。是歷史上人類活動(dòng)遺留下來的各種物件，主要是各種歷史遺存和考古發(fā)現(xiàn)，如遺址、墓葬及出土文物等。．口述史料。是指人們口頭講述并被記錄下來的資料，其記錄的方式有筆錄、錄音、錄像等多種。這些資料包括神話、傳說、故事、史詩、俗諺、遺訓(xùn)，以及回憶錄、對(duì)話錄、采訪記、座談錄音等。

從另外一個(gè)角度分類，也可以把史料大體分為第一手史料和第二手史料。一般說來，第一手史料是指原始資料，即歷史人物、事件、現(xiàn)象發(fā)生的那個(gè)時(shí)代留下來的材料，特別是當(dāng)事人和目擊者提供的史料，直接反映了所研究對(duì)象的情況；第二手史料是指距離那個(gè)時(shí)代較遠(yuǎn)的記錄、轉(zhuǎn)述，或者后人的研究成果，間接反映了研究對(duì)象的情況。一般來說，第一手史料的史料價(jià)值較高，但也不是絕對(duì)，古人說：“不識(shí)廬山真面目，只緣身在此山中?！笔妨系淖珜懻?，有時(shí)也會(huì)“當(dāng)局者迷”，反倒不如后人或者局外人看得全面、客觀。

（二）當(dāng)前歷史史料教學(xué)的現(xiàn)狀

當(dāng)前史料教學(xué)進(jìn)行得如火如荼，涌現(xiàn)了大量?jī)?yōu)秀的教學(xué)案例。下面談?wù)勔恍﹩栴}。第一，教師的理念沒有跟上。不少教師僅僅是把史料教學(xué)理解為史料的簡(jiǎn)單堆積，并沒有把史料教學(xué)與三維目標(biāo)緊密聯(lián)系，更沒有有意識(shí)地培養(yǎng)學(xué)生的質(zhì)疑精神和質(zhì)疑的能力。在課堂上，給出大量史料，也只是做“依靠教材既定論點(diǎn)，加以佐證”的工作而已。這樣的話，違背了史料教學(xué)法的初衷。史料教學(xué)的教學(xué)目標(biāo)是什么？用什么方法比較好？培養(yǎng)學(xué)生的基本能力有哪些？等這些基本問題搞清楚了，才有助于歷史教師在使用史料教學(xué)中高效勝出。

第二，學(xué)生的能力有待提高。在目前的教法下，大多數(shù)學(xué)生“史從證來、論從史出、史論結(jié)合”的歷史思維能力沒有得到很好培養(yǎng)，質(zhì)疑意識(shí)和質(zhì)疑能力比較低下。日常學(xué)生對(duì)教師的提問，大部分僅僅局限于自己對(duì)教材或者自己在建構(gòu)知識(shí)網(wǎng)絡(luò)時(shí)遇到了不懂的地方，是一種對(duì)文本低級(jí)的疑惑。而質(zhì)疑，應(yīng)該是一種超越文本對(duì)問題提出自己看法的意識(shí)和能力。在很多地方，課堂還是教師一言堂，并沒有“發(fā)揮學(xué)生的主體作用”。學(xué)生對(duì)大量、不同的觀點(diǎn)的史料，顯得無所適從，帶有恐懼感。

第三，史料的獲取途徑狹窄。也許這個(gè)本來不應(yīng)該是問題，但是卻是制約史料教學(xué)的另一大因素。捫心自問，除了大學(xué)時(shí)候的教材和工作之后斷斷續(xù)續(xù)買了幾本書，我們手頭上還有什么別的資料？日常大量瑣碎的工作占據(jù)了中學(xué)教師不少的時(shí)間，使得我們無暇看書，漸漸與高校的學(xué)術(shù)研究脫節(jié)。

第四，教學(xué)時(shí)間安排失當(dāng)。一節(jié)四十分鐘或者四十五分鐘的歷史課，應(yīng)該如何合理安排呢？指導(dǎo)學(xué)生閱讀史料的時(shí)間是多少呢？學(xué)生練習(xí)的時(shí)間又是多少呢？不少老師都比較糊涂。

二、例談歷史史料教學(xué)的策略與方法

在實(shí)際教學(xué)活動(dòng)中，如何鑒別史料、選擇史料、分析史料，不少一線教師都遇到了困惑。本視頻試圖從這些問題著手，拋磚引玉，希望給廣大教師提供參考。

（一）從哪里選取史料

史海浩瀚，單文字史料就多如牛毛，隨著時(shí)代的發(fā)展，史料的記載方式還包括了圖片、音頻、視頻等。史料如此豐富，史料的來源當(dāng)然也豐富多樣的，獲取的途徑相當(dāng)多。

作為中學(xué)教師，史料的來源首推教科書，教科書的大字小字、插圖等是教材編者精心選取的，是課堂教學(xué)的第一材料，平時(shí)在教學(xué)中應(yīng)充分利用好課本的素材。其次，可以從網(wǎng)絡(luò)上擷取史料。一般采用關(guān)鍵詞、關(guān)鍵句搜索的辦法就可以找到相關(guān)史料，相當(dāng)方便；另外還有不少網(wǎng)站提供大量的學(xué)術(shù)史料。但網(wǎng)絡(luò)資料有其自身弊端，教師在采納網(wǎng)絡(luò)資料的時(shí)候要充分鑒別真?zhèn)闻c準(zhǔn)確性。

再次，從歷史專業(yè)書籍和歷史專業(yè)論文中選取。這就意味著廣大一線教師要多關(guān)注史學(xué)動(dòng)態(tài)，與時(shí)俱進(jìn)，擴(kuò)大閱讀范圍。

另外，可以從每一年的高考試題和各類模擬題中找史料。近幾年的高考題或模擬題都以“新材料、新情境”出現(xiàn)，涌現(xiàn)了很多新穎的史料，可以為教學(xué)所用。除了上述的途徑，還可以通過看新聞、到檔案館或博物館參觀等方式來獲取?？傊?，方式多種多樣，只要平時(shí)多留意多積累，肯定可以構(gòu)造屬于自己的史料庫。

（二）怎樣選取史料

選取史料組織教學(xué)之前，先要明確幾個(gè)大的原則：一是根據(jù)課程標(biāo)準(zhǔn)，靈活調(diào)整教學(xué)的目標(biāo)，并選取史料（更多選取第一手史料），有所偏重；二是根據(jù)學(xué)生情況來選擇史料（不宜選取文字閱讀量過大的史料），對(duì)癥下藥；三是研讀史料，精心設(shè)問，置疑解惑；四是選擇多樣化的史料，豐富課堂內(nèi)容，在觀點(diǎn)的碰撞中鍛煉學(xué)生思維；五是帶著問題去研讀史料，多選取能夠激發(fā)學(xué)生情感、態(tài)度、價(jià)值觀的史料。

1.根據(jù)課程標(biāo)準(zhǔn)，靈活調(diào)整教學(xué)的目標(biāo)，并選取史料（更多選取第一手史料），有所偏重

《普通高中歷史課程標(biāo)準(zhǔn)(實(shí)驗(yàn))》就知識(shí)與能力方面的課程標(biāo)準(zhǔn)中明確指出 “在掌握基本歷史知識(shí)的過程中，進(jìn)一步提高閱讀和通過多種途徑獲取歷史信息的能力；通過對(duì)歷史事實(shí)的分析、綜合、比較、歸納、概括等認(rèn)知活動(dòng)，培養(yǎng)歷史思維和解決問題的能力?！逼渲虚喿x與獲取歷史信息，需要在教學(xué)中學(xué)會(huì)運(yùn)用史料；而對(duì)歷史事實(shí)的分析更要建立在史料的搜集、甄別與運(yùn)用上。課標(biāo)還就教學(xué)過程與方法方面提出了“努力做到論從史出、史論結(jié)合”、“注重探究學(xué)習(xí)”、“養(yǎng)成獨(dú)立思考的學(xué)習(xí)習(xí)慣”等要求?！疤骄繉W(xué)習(xí)、獨(dú)立思考”，需要建立在對(duì)歷史本來面貌的認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上，特別需要進(jìn)行史料教學(xué)；而“論從史出，史論結(jié)合”更是對(duì)教學(xué)中史料的運(yùn)用提出明確和更高的要求。從國(guó)家新課程標(biāo)準(zhǔn)的表述中，不難看出，善于運(yùn)用史料教學(xué)，在中學(xué)歷史課堂教學(xué)過程中是十分必要的。課標(biāo)是教材編寫的出發(fā)點(diǎn)，更是教師平時(shí)備課上課的依據(jù)，在史料教學(xué)中，應(yīng)緊緊按照課標(biāo)的要求，設(shè)置每一課的教學(xué)目標(biāo)。華附劉敏老師的《王安石變法》一課的課標(biāo)要求為：（1）了解王安石變法的歷史背景；

（2）歸納王安石變法的主要內(nèi)容，評(píng)價(jià)其歷史作用。在學(xué)習(xí)新課之前，教師布置了《自學(xué)提綱》，加上平時(shí)的“通史講壇”活動(dòng)，學(xué)生可以自己掌握變法的歷史背景和主要內(nèi)容，因此劉老師將課堂的重點(diǎn)列為課標(biāo)的后部分——評(píng)價(jià)王安石變法。劉老師通過史料教學(xué)來引導(dǎo)學(xué)生身臨其境王安石的時(shí)代，用歷史的眼光來評(píng)價(jià)這場(chǎng)偉大的變法，并引導(dǎo)學(xué)生聯(lián)系改革開放三十年后的今天，得出啟迪，落實(shí)情感態(tài)度價(jià)值觀目標(biāo)。

相比劉老師的“循規(guī)蹈矩”，東莞東華高級(jí)中學(xué)的李小萍老師的《洋務(wù)運(yùn)動(dòng)》一課同樣采用了史料教學(xué)法，但更顯得“靈活多變”?！堆髣?wù)運(yùn)動(dòng)》一課，在高中三本必修中都有所涉及，分別是必修Ⅰ的第 12 課，必修Ⅱ的第 10 課，必修Ⅲ的第 20 課。課程標(biāo)準(zhǔn)里是這樣規(guī)定的：“簡(jiǎn)述鴉片戰(zhàn)爭(zhēng)后中國(guó)經(jīng)濟(jì)結(jié)構(gòu)的變動(dòng)和近代民族工業(yè)興起的史實(shí)，認(rèn)識(shí)近代中國(guó)資本主義產(chǎn)生的歷史背景?！薄傲私怿f片戰(zhàn)爭(zhēng)后中國(guó)人學(xué)習(xí)西方、尋求變革的思想歷程，理解維新思想在近代中國(guó)社會(huì)發(fā)展過程中所起的作用?！憋@然，課標(biāo)的這兩處要求都沒有明確要求把握洋務(wù)運(yùn)動(dòng)，但岳麓版教材里有關(guān)近代中國(guó)經(jīng)濟(jì)結(jié)構(gòu)的變動(dòng)和影響民族工業(yè)發(fā)展的因素，皆與洋務(wù)運(yùn)動(dòng)相關(guān)。因此，李老師在立足于課程標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)學(xué)生現(xiàn)階段對(duì)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)的模糊和片段理解，著力點(diǎn)在閱讀新材料材料，根據(jù)新情境，提取信息，得出更人性化的新認(rèn)識(shí)，通過細(xì)節(jié)來展示一個(gè)和學(xué)生以往結(jié)論中不一樣的洋務(wù)運(yùn)動(dòng)，針對(duì)高三學(xué)生提出了這樣的教學(xué)目標(biāo)：“能通過觀念細(xì)節(jié)的變化分析洋務(wù)運(yùn)動(dòng)前的時(shí)代挑戰(zhàn)；能通過李鴻章和張之洞的洋務(wù)人生認(rèn)識(shí)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)艱難曲折的應(yīng)戰(zhàn)細(xì)節(jié)；學(xué)會(huì)通過新材料得出新認(rèn)識(shí)，提升材料分析的史學(xué)能力；通過李鴻章和張之洞的洋務(wù)人生感悟中國(guó)近代歷史改革者的艱難、智慧、局限以及他們事業(yè)深遠(yuǎn)的影響?！?/p>

從上面這兩位教師的教學(xué)目標(biāo)設(shè)計(jì)，我們可以看出教學(xué)活動(dòng)的設(shè)計(jì)或教學(xué)資源的選取，在一般情況下都是以主題為中軸而展開的；教學(xué)設(shè)計(jì)系統(tǒng)的各個(gè)基本構(gòu)成要素，也是圍繞主題聯(lián)結(jié)而來的。不管是采用史料教學(xué)法，還是使用其它的教學(xué)方法，都要先確定好本課的教學(xué)主題，即課堂的教學(xué)靈魂。

2.根據(jù)學(xué)生情況來選擇史料（不宜選取文字閱讀量過大的史料），對(duì)癥下藥 學(xué)生是課堂的主體，學(xué)生的情感、行為變化是衡量教學(xué)有效性的最重要的尺度之一，史料的選取要根據(jù)學(xué)生的實(shí)際情況。學(xué)生在學(xué)習(xí)本堂課的知識(shí)前，他們已有的知識(shí)技能怎樣？學(xué)習(xí)本課主要需要準(zhǔn)備哪些學(xué)習(xí)方式或?qū)W習(xí)方法，學(xué)習(xí)本課需要準(zhǔn)備怎樣的情感態(tài)度與價(jià)值觀呢？

為了更好的了解學(xué)生的情況，李小萍老師在課前設(shè)置了一個(gè)問卷調(diào)查，要求他們選取其中之一解答，也可全部解答。如下：

（1）洋務(wù)運(yùn)動(dòng)中的哪些人物你最感興趣，為什么？選取一二簡(jiǎn)述。（2）當(dāng)時(shí)的清政府是否需要一場(chǎng)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)？觀點(diǎn)自選，說明之？

（3）洋務(wù)運(yùn)動(dòng)創(chuàng)辦過程的那個(gè)環(huán)節(jié)你最渴望探求，為什么？試用自己的方式來完成你的心愿。（4）洋務(wù)運(yùn)動(dòng)的指導(dǎo)思想是什么？你對(duì)這個(gè)思想的認(rèn)識(shí)和評(píng)價(jià)是什么？為什么？

（5）在傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)里洋務(wù)運(yùn)動(dòng)的目的是什么？你的觀點(diǎn)有和不同？為什么？（6）洋務(wù)運(yùn)動(dòng)是否能讓中國(guó)富強(qiáng)起來？為什么？（觀點(diǎn)自選，史論結(jié)合說明）（7）對(duì)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)的評(píng)價(jià)，史學(xué)家范文瀾和胡繩認(rèn)為“洋務(wù)運(yùn)動(dòng)是反動(dòng)的賣國(guó)的運(yùn)動(dòng)，其作用在于加深了中國(guó)的半殖民地化?！?，華東師范大學(xué) 歷史系教授夏東元指出：洋務(wù)運(yùn)動(dòng)是“以學(xué)習(xí)和利用西方先進(jìn)的科舉技術(shù)來維護(hù)和拯救清王朝為首的封建統(tǒng)治的活動(dòng)?！蹦阃饽男┯^點(diǎn)？你怎樣評(píng)價(jià)洋務(wù)思想和洋務(wù)運(yùn)動(dòng)？你能說明自己的觀察視角和評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)嗎？從國(guó)人對(duì)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)前后不同的評(píng)價(jià)，你認(rèn)識(shí)到了什么？

從學(xué)情調(diào)查中，教師發(fā)現(xiàn)學(xué)生對(duì)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)中的李鴻章和他的洋務(wù)事業(yè)有特別的渴望，但是他們?nèi)狈ο鄳?yīng)的資料，無從探究，也不可能得到更多的認(rèn)識(shí)。針對(duì)學(xué)生的情況，李老師精心設(shè)計(jì)了這節(jié)課，引導(dǎo)學(xué)生在新材料、新情景下重新構(gòu)建對(duì)洋務(wù)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行全方位的認(rèn)識(shí)和探究，力圖跳出學(xué)生已有觀念的限制，引導(dǎo)學(xué)生在細(xì)節(jié)中探尋一個(gè)真實(shí)的洋務(wù)運(yùn)動(dòng)和洋務(wù)派。

根據(jù)學(xué)生情況來選擇史料，除了表現(xiàn)在課前的調(diào)查和跟蹤，更重要的是表現(xiàn)在針對(duì)學(xué)生的情況選擇合適的史料，不同年齡和能力的學(xué)生需要使用不同形式的史料。高中生閱讀史料，提取要點(diǎn)的能力還有待加強(qiáng)，因此我們課堂選擇的材料最好是那些大眾化、容易理解的史料；并且要對(duì)難度較大的原始文獻(xiàn)進(jìn)行加工和編輯，刪掉文獻(xiàn)中難懂和沒用的部分，當(dāng)然也不能過分改寫和編輯，以至于改變文獻(xiàn)的原意。

李小萍老師在新課一開始給學(xué)生展示了三則簡(jiǎn)單有趣的史料“英國(guó)人的膝蓋能彎曲嗎？”“夷和洋不一樣嗎？”“胡林翼被嚇暈了?！边@三則史料側(cè)重于細(xì)節(jié)，反差較大，在課堂的開始就制造一個(gè)思維的沖擊點(diǎn)，在驚奇的刺激下學(xué)生的思維被調(diào)動(dòng)。課堂的開頭有凝神、起興之效。第二則史料內(nèi)部本身有矛盾而且又能和第一個(gè)細(xì)節(jié)對(duì)應(yīng)，二者形成一個(gè)相互的比較和發(fā)展。第三則史料充滿戲劇性，在課堂上制造笑點(diǎn)之外更能制造思維點(diǎn)。三則史料容易理解，材料之間起到了闡明與沖突的作用，達(dá)到了史料教學(xué)的效果。

一般來說，對(duì)史料的摘引與轉(zhuǎn)述較可行的方法有三種，一是對(duì)那些易于知曉但散于各處的文獻(xiàn)資料，用“摘引”的方法，將有關(guān)的文字資料摘出來放在一起來說明某個(gè)問題；二是對(duì)那些文字難懂且篇幅較大的文獻(xiàn)，宜采用“轉(zhuǎn)述”的方法，即教師將其內(nèi)容用通俗易懂的話介紹給學(xué)生；三是摘引和轉(zhuǎn)述兩者相結(jié)合，這一種形式常用。

3.研讀史料，精心設(shè)問，置疑解惑

一節(jié)好課，史料選取是否恰當(dāng)，有沒有組織學(xué)生針對(duì)史料進(jìn)行有效的研討十分重要。有的教師在備課過程中選取了大量的史料，但在教學(xué)實(shí)踐中卻將這些極有價(jià)值的史料只作“走馬觀花”似的瀏覽，這樣就起不到史料教學(xué)法的效果。在教學(xué)中，史料要精心選取，并且精心設(shè)問，方能突顯史料教學(xué)的效果。對(duì)待典故史料，需要細(xì)嚼慢咽，逐句過關(guān)。在一些教學(xué)內(nèi)容中，我們常常會(huì)引用官私史書、碑刻、墓志等文獻(xiàn)史料。教師對(duì)一些冷僻的讀音、字義，難懂的典故等細(xì)節(jié)，要給予講解，不能粗枝大葉，脫離學(xué)生的實(shí)際認(rèn)知情況。

東莞的李小萍老師在上《洋務(wù)運(yùn)動(dòng)》一課時(shí)，在史料選擇上采用了李鴻章寫給恭親王奕的一封信：“鴻章竊以為天下事窮則變，變則通。中國(guó)士大夫沉浸于章句小楷之積習(xí)，武夫悍卒又多粗蠢而不加細(xì)心，以致用非所學(xué)，學(xué)非所用。??鴻章以為，中國(guó)欲自強(qiáng)則莫如學(xué)習(xí)外國(guó)利器。欲學(xué)習(xí)外國(guó)利器則莫如覓制器之器，師其法而不必盡用其人。欲覓制器之器與制器之人，則我專設(shè)一科取士，士終身懸以為富貴功名之鵠，則業(yè)可成，業(yè)可精，而才亦可集。”

這封信在歷史上比較出名，是史學(xué)家研究李鴻章洋務(wù)人生必不可少的材料。但這份典型材料長(zhǎng)度較長(zhǎng)，而且多是文言文，對(duì)于高中生來說閱讀有一定的難度。這就需要教師在設(shè)置問題、解釋史料上下功夫了。為此，李小萍老師選擇在課前就先提供材料，留給學(xué)生充足的時(shí)間閱讀史料。同時(shí)選擇了學(xué)生的認(rèn)知沖突點(diǎn)來設(shè)置問題，因?yàn)檫@段材料里體現(xiàn)出的李鴻章和學(xué)生原有認(rèn)識(shí)里的李鴻章是有一定矛盾沖突的，材料里的李鴻章是一個(gè)改革家，一個(gè)有遠(yuǎn)見卓識(shí)、又本著經(jīng)世致用的傳統(tǒng)精神的改革家，與平日教科書里那個(gè)“狹隘”的李鴻章不太一樣。李老師設(shè)置了兩個(gè)問題（1）根據(jù)材料，提取李鴻章認(rèn)為改革的必要性何在？提取李鴻章的改革規(guī)劃。（2）李鴻章的這封信被蔣廷黻譽(yù)為 19 世紀(jì)最有價(jià)值的文章，值得再三的閱讀，在信中體現(xiàn)了李鴻章的哪些遠(yuǎn)見卓識(shí)呢？ 問題精辟有力，貼近史料，緊扣目標(biāo)，引發(fā)了課堂的一個(gè)小高潮，學(xué)生通過一封信引發(fā)的思考，對(duì)李鴻章的再認(rèn)識(shí)，逐漸形成。在層層深入后，李老師又找到了“李鴻章請(qǐng)修鐵路卻遭到反對(duì)”的原始史料，組織學(xué)生在研讀史料中學(xué)會(huì)找關(guān)鍵詞，再通過關(guān)鍵詞去總結(jié)核心問題，解決疑惑。

4.選擇多樣化的史料，豐富課堂內(nèi)容，在觀點(diǎn)的碰撞中鍛煉學(xué)生思維平時(shí)的歷史課堂教學(xué)所選用的史料形式應(yīng)該是多種多樣的，史料的形式包括歷史文獻(xiàn)、摘錄、歷史地圖、統(tǒng)計(jì)資料、歷史圖片、藝術(shù)作品、名言警句、詩詞楹聯(lián)、民間傳說、照片郵票、漫畫插圖、音像資料等。將各種形式的史料結(jié)合起來使用，培養(yǎng)學(xué)生“史由證來，論從史出，史論結(jié)合”的歷史思維，我們的歷史課堂也更有生命力。

劉敏老師在《王安石變法》一課就選擇了多樣化的史料，除了我們常見的文字史料外，還有漫畫材料（“西夏軍隊(duì)與北宋作戰(zhàn)”的漫畫）；柱狀圖表（北宋官員增長(zhǎng)圖、北宋兵員增長(zhǎng)圖、北宋前期的財(cái)政收支圖）；直觀的數(shù)據(jù)史料（收復(fù)河湟五州，拓地 2000 余里，受撫羌族 30 萬帳）等等。李老師的課堂所采用了的史料同樣豐富多樣，有各種漫畫插圖、還有歷史地圖、音像資料等。其中既有一手史料，也有大量的二手史料。當(dāng)然，史料不是越多越好，而是要精心挑選，有所取舍。選擇的史料應(yīng)能全面反映所考擦的歷史現(xiàn)象，避免選擇非典型性材料。

5.帶著問題去研讀史料，多選取能夠激發(fā)學(xué)生情感、態(tài)度、價(jià)值觀的史料 不少教師都有過困惑，采用史料教學(xué)法的時(shí)候如何落實(shí)情感、態(tài)度、價(jià)值觀目標(biāo)呢？比較可行的方法是制造認(rèn)知或思維的沖突點(diǎn)。華附劉敏老師在講述《王安石變法》時(shí)，用了“歷史的遺憾”的標(biāo)題引出王安石變法的背景。她選取的材料為“公元 1127 年，靖康之變。距離王安石發(fā)起他那著名的變法運(yùn)動(dòng)剛好五十八年；距離司馬光廢除這些變法，也過去四十一年；距離另一位反對(duì)變法的蘇東坡去世，相隔了二十六年。這三人，在中國(guó)歷史上享有同樣偉大的名聲，并且一度是相互傾慕的好朋友。因?yàn)檫@場(chǎng)變法，三人漸行漸遠(yuǎn)，終于徹底葬送了友情，并且成為政治上的死敵。”這樣的材料引人思考，提高了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，有利于激發(fā)學(xué)生情感、態(tài)度、價(jià)值觀。

除此，劉老師還羅列了大量史料，比如“不愿讓人抬、不坐轎的宰相；拒奢華、拒納妾的宰相”的精辟概括、“拒喝上司包拯的敬酒”的趣味小故事等，生動(dòng)刻畫了王安石的性格特征，展示了一個(gè)有強(qiáng)烈社會(huì)責(zé)任感、有豐富的地方工作經(jīng)驗(yàn)、品德高尚、意志堅(jiān)定、性情執(zhí)拗的北宋改革家形象。

另外，史料教學(xué)不僅僅是教師收集史料，通過多媒體課件提供給學(xué)生研討，也可以組織學(xué)生進(jìn)行自主探究，合作學(xué)習(xí)。如讓學(xué)生針對(duì)某些問題搜集史料(設(shè)疑)→選擇史料(甄別)→整理分析史料→運(yùn)用史料(講述、討論等)→撰寫小論文。華附劉老師的課堂就鮮明體現(xiàn)了上述特色。史料的學(xué)習(xí)始終貫穿其中，在過程中突出培養(yǎng)了學(xué)生實(shí)踐能力和獨(dú)立思考能力等。

總之，史料教學(xué)法只是一種教學(xué)策略之一，其原理和方法都應(yīng)服務(wù)于課堂的目標(biāo)，服務(wù)于學(xué)生的發(fā)展。

參考資料

【相關(guān)資源】

1.論史料教學(xué)（CAJ）

2.論史料教學(xué)的分層進(jìn)行方法及操作原則 _ 以 _ 中國(guó)近代史 _ 為例（CAJ）3.論史料教學(xué)的價(jià)值 _ 兼論中學(xué)歷史教學(xué)發(fā)展趨勢(shì)(CAJ)4.史料教學(xué)略論(CAJ)5.史料教學(xué)淺談(CAJ)

6.史料教學(xué)與其它教學(xué)方法的整合(CAJ)7.談中學(xué)歷史新課改背景下史料教學(xué)的加強(qiáng)(CAJ)8.關(guān)于高中歷史史料教學(xué)現(xiàn)狀的調(diào)查與分析(KDH)9.課改背景下史料教學(xué)作用新探(KDH)10.利用史料教學(xué)培養(yǎng)學(xué)生的綜合素質(zhì)(KDH)

11.美國(guó)歷史教育的特點(diǎn)之一 _ 收集和使用第一手資料(KDH)12.史料教學(xué)淺議(KDH)

13.史料教學(xué)在歷史課堂中的運(yùn)用(KDH)14.談歷史學(xué)科的史料教學(xué)(KDH)15.談新課程背景下的史料教學(xué)(KDH)16.試論史料的歷史教學(xué)應(yīng)用(NH)

17.試論史料在美國(guó)中學(xué)歷史教學(xué)中的運(yùn)用(NH)18.對(duì)美國(guó)史料教學(xué)的方法論及實(shí)踐意義之探索(NH)19.王錫文：對(duì)外開放格局的形成教學(xué)設(shè)計(jì) 20.一課時(shí)講完隋唐史的實(shí)驗(yàn) 21.李小萍：洋務(wù)運(yùn)動(dòng)教學(xué)設(shè)計(jì)

高一歷史學(xué)習(xí)的障礙與破除》

許多老師感覺教高三比教高一輕松，這是有道理的，高一學(xué)生的歷史學(xué)習(xí)習(xí)慣尚沒建立起來，反而有諸多的障礙在那里等著老師破除，老師是一個(gè)教書先生，又要承擔(dān)更為繁重的清道夫的工作，且要在道路的兩旁催發(fā)四季的美景，在道理的終點(diǎn)建造一個(gè)巍峨英華的發(fā)展中心，這怎不叫一個(gè)辛勞呢？高三呢？學(xué)生早就整裝待發(fā)在跑道上，教師只要在他們的跑車?yán)锛舆M(jìn)去適當(dāng)?shù)娜剂暇涂梢粤?，至于自我的操控那是車手的事情了，教師主要是欣賞賽車的盛況與等著收獲賽終的儀式，二郎神三只眼，也常做翹起二郎腿的愜意姿態(tài)的。那么高一的學(xué)生，歷史學(xué)習(xí)的障礙有哪些呢？我粗略籠絡(luò)了一下，至少一下六處。

第一，學(xué)科多，作業(yè)多，歷史學(xué)習(xí)沒時(shí)間。周三下午，監(jiān)考?xì)v史模塊考試，徜徉于奮筆疾書的學(xué)生森林里，我感覺大腦呼吸到了負(fù)氧離子，特別的舒坦，有唐太宗天下英雄盡入轂中矣的浩然之氣。于是深切感悟到那些頻繁考試和毫不猶豫批發(fā)作業(yè)量的學(xué)科的老師，他們?yōu)楹文前愕淖鳛?，原來其中幸福多多啊。我們的學(xué)生早已經(jīng)沒有了個(gè)性，早已經(jīng)成為作業(yè)與考試的奴隸，所以在考試和作業(yè)中才能是溫順可愛的形象，沒有考試和作業(yè)，他們是不會(huì)關(guān)注歷史的。但我們的歷史，卻太多的歷史使命感，至于我們的老師不忘記那一份良心驅(qū)使下的惻隱之心，告誡自己作業(yè)要少，考試要少，不要驚擾了學(xué)生發(fā)展的夢(mèng)。而其他學(xué)科，則是品嚐作業(yè)與考試如蜜的狗熊了，歷史的時(shí)間被完全擠兌掉了。

第二，學(xué)習(xí)的板塊不完整。學(xué)習(xí)有預(yù)習(xí)、聽習(xí)、復(fù)習(xí)這三習(xí)板塊，共同構(gòu)成一個(gè)學(xué)習(xí)過程。因?yàn)闅v史復(fù)習(xí)的時(shí)間被擠兌掉，所以造成學(xué)生歷史學(xué)習(xí)的板塊殘缺問題，這是很有害的。今年我將作業(yè)資料上的作業(yè)前置為預(yù)習(xí)性作業(yè)，發(fā)現(xiàn)學(xué)生大部分能自我解決，作業(yè)的質(zhì)量在表面上看與后置性作業(yè)沒有明顯差別，這說明學(xué)生的預(yù)習(xí)階段是認(rèn)真的?！贿^，作業(yè)的內(nèi)在質(zhì)量還是有區(qū)別的，前置性的作業(yè)，學(xué)生更多是查閱教材來完成的，并非教師所期望的先看書，然后作業(yè)的程序，后置性的作業(yè)呢，學(xué)生更多是脫離開教材，更多依賴回憶、調(diào)取內(nèi)化庫存的結(jié)果，這導(dǎo)致作業(yè)的效果的不同。

因?yàn)闆]有復(fù)習(xí)環(huán)節(jié)，前兩個(gè)環(huán)節(jié)的學(xué)習(xí)效果被時(shí)間銷蝕掉，最終幾乎剩余為零，這是一個(gè)零化的學(xué)習(xí)游戲，有點(diǎn)悲哀的色調(diào)。我常給學(xué)生算一筆賬，一節(jié)歷史課40分鐘，一課的作業(yè)要花費(fèi)40分鐘，這樣平均下來，每天的歷史學(xué)習(xí)用時(shí)在半個(gè)小時(shí)以上，因?yàn)闆]有復(fù)習(xí)，這每周的幾個(gè)小時(shí)就等于荒廢掉，人生的好大一段失去了意義，實(shí)在是傷懷的孽業(yè)。

第三，不科學(xué)的課堂觀。一個(gè)課堂過程里，包括眼看、口動(dòng)、腦思腦記、手動(dòng)、耳聽，這中間，腦子的運(yùn)動(dòng)主要內(nèi)容是思維和記憶。很多學(xué)生的課堂觀是錯(cuò)誤的，以為課堂上就一個(gè)播撒汗水的過程，是聽課攝取、手記筆記的任務(wù)，卻并沒有收獲記憶的機(jī)制，其實(shí)。學(xué)生應(yīng)學(xué)習(xí)收割機(jī)的原理，收割與入倉(cāng)的工作同時(shí)進(jìn)行，然后待課堂結(jié)束了，學(xué)習(xí)的內(nèi)容基本打包了。一些學(xué)生不懂得這個(gè)課堂的原理，課堂的效率就比較低。一些學(xué)生甚至把課堂作為最放松的時(shí)間，課下有大量的作業(yè)在那里被逼迫著，課堂上用腦是輕松的、聽講是享樂的，這種課堂最為輕松的情況，讓人哭笑不得。

第四，歷史為副業(yè)的思想。大部分學(xué)生是要選學(xué)理科的，這就導(dǎo)致他們將歷史做副業(yè)，只求60分萬歲，沒有將歷史學(xué)精的心理姿態(tài)。這樣的思想具有感染性和傳染性，這個(gè)學(xué)生的歷史學(xué)習(xí)會(huì)比較敷衍，這種思想傳染下去，整個(gè)班級(jí)的風(fēng)氣也將是敷衍的，班級(jí)的基調(diào)就會(huì)發(fā)生偏移，歷史教師不可不警惕。第五，初中學(xué)習(xí)缺陷制約高中學(xué)習(xí)。舉一個(gè)例子，我出了一個(gè)依靠徐州來判斷淮海戰(zhàn)役的題目，學(xué)生的錯(cuò)誤率比較高，原因之一是歷史教材中對(duì)三大戰(zhàn)役只羅列了名稱，沒有展開，另一個(gè)原因則是學(xué)生初中的地理學(xué)習(xí)，人文地理很是薄弱，他們不知道中國(guó)這樣一個(gè)重要的交通樞紐和區(qū)域性中心城市，這對(duì)于現(xiàn)代中學(xué)生來說，無疑是一種諷刺。但這種諷刺實(shí)實(shí)在在存在的，這就是中國(guó)如今的教育。這種初中教育導(dǎo)致的知識(shí)缺陷，對(duì)高中歷史的教學(xué)是很影響的。

第六，對(duì)中國(guó)教育的叛逆思想與行為。有個(gè)學(xué)生，極力否定中國(guó)式教育，在課堂上表現(xiàn)為對(duì)筆記、作業(yè)、記憶的不屑，將許多的表現(xiàn)給予了不作為。他的課堂表現(xiàn)是糟糕的，考試同樣糟糕，但他并不反省，反而認(rèn)為這是一種個(gè)性的光輝。這樣的學(xué)生并非少數(shù)，因?yàn)榉侵髁鞯拿撔?，他們大多是淪落為邊緣人的，應(yīng)試教育傷害了他們，他們同時(shí)也傷害著教育環(huán)境，成為一個(gè)很吊詭的群體。

那么我們?nèi)绾纹平馍鲜龅膸追N問題呢？

第一、將學(xué)習(xí)的環(huán)節(jié)完善起來。（1）適當(dāng)增加考試，歷史不拒絕考試，通過考試端正學(xué)生態(tài)度，激勵(lì)學(xué)生情致，檢驗(yàn)學(xué)生學(xué)情；（2）增加課后作業(yè)，最好是精選而針對(duì)性強(qiáng)、量少的作業(yè)，保證學(xué)生將復(fù)習(xí)的環(huán)節(jié)重視起來；（3）課堂觀的教育，并調(diào)整課堂的機(jī)制，讓學(xué)生的記憶在課堂上有一定的空間督促和展示。

第二、對(duì)一些應(yīng)試教育不配合的學(xué)生，教師可以利用他們進(jìn)行素質(zhì)教育的點(diǎn)綴，如讓他們進(jìn)行研究性的課題，依靠課堂展示讓他們獲得價(jià)值認(rèn)可，并在這種成就感中由不配合發(fā)展為配合，從而進(jìn)入教育的程序里。排斥不如接納，批判不如認(rèn)可，否定不如激勵(lì)。

第三、建立師生接觸機(jī)制。如成立“教師小助手”小組，使學(xué)生多與教師接觸，在接觸中了解他們，發(fā)展他們，培養(yǎng)一批歷史學(xué)習(xí)上的積極分子，樹立一批學(xué)習(xí)典型，須知，榜樣的力量勝過無量的說教。如成立“后進(jìn)生進(jìn)辦公室談話”機(jī)制，每天都有這樣的一些學(xué)生與教師進(jìn)行接觸，從而給他們心理的照應(yīng)，促進(jìn)他們的學(xué)習(xí)興趣、情感、策略，甚至督促。教師應(yīng)將觸角延伸。

第三篇：關(guān)于《高中史料教學(xué)的原理與操作方法》的一些收獲和建議[推薦]

關(guān)于《高中史料教學(xué)的原理與操作方法》的一些收獲和建議

通過這次《高中史料教學(xué)的原理與操作方法》的培訓(xùn)后，我對(duì)高中歷史史料方面有了一些新的認(rèn)識(shí)和收獲。

一、史料教學(xué)在歷史教學(xué)中的重要地位

高中歷史學(xué)科的特點(diǎn)決定了史料教學(xué)在歷史教學(xué)中具有重要的地位。史料教學(xué)具有明顯的優(yōu)點(diǎn)：能夠激發(fā)學(xué)生的探究欲望。史料是對(duì)教材內(nèi)容的補(bǔ)充，它拓展了歷史知識(shí)，往往能夠把學(xué)生帶進(jìn)歷史的時(shí)空，引發(fā)他們學(xué)習(xí)的興趣；有了學(xué)習(xí)興趣，學(xué)生就會(huì)主動(dòng)參與到教學(xué)活動(dòng)中來，而不是被動(dòng)地接受知識(shí)。

二、史料教學(xué)的面臨的問題

廣大高中歷史教師基本上能從思想上認(rèn)識(shí)到史料教學(xué)的重要意義，認(rèn)識(shí)到史料教學(xué)在促進(jìn)學(xué)生學(xué)習(xí)方式轉(zhuǎn)變上的重要作用，但是史料教學(xué)仍然面臨著一些問題：

第一，“許多高中歷史教師對(duì)于史料教學(xué)的相關(guān)常識(shí)性知識(shí)仍比較缺乏，比如什么是史料？可利用的史料種類有哪些？史料選擇最基本的原則是什么？”

第二，許多教師由于時(shí)間安排不合理，對(duì)于史料抱著有時(shí)間講，沒時(shí)間放過的教學(xué)態(tài)度，造成史料教學(xué)不全面，不系統(tǒng)，難于促進(jìn)學(xué)生歷史思維的發(fā)展、歷史觀的形成以及歷史方法的掌握，更別談培養(yǎng)學(xué)生的探究精神和創(chuàng)新意識(shí)了

第三，基層中學(xué)由于條件限制，所利用的史料基本上局限于課本上的文字或圖片史料，難于開展課外各種史料的搜集、整理、分析、利用等活動(dòng).三、史料教學(xué)方法探討

目前史料教學(xué)的這種現(xiàn)狀，不利于完成新課程的要求，更不利于學(xué)生自主思維的培養(yǎng)。那么，如何改變這種現(xiàn)狀呢？除了教師提高自身認(rèn)識(shí)，加強(qiáng)對(duì)史料知識(shí)的學(xué)習(xí)之外，筆者認(rèn)為還可從以下幾個(gè)方法入手：

（1）由淺入深，循序漸進(jìn)。所選史料或所提問題必須符合客觀的認(rèn)知規(guī)律，遵循由淺入深、循序漸進(jìn)的原則。無論是一段式還是多段式的史料，所設(shè)計(jì)的問題應(yīng)該要有一定的啟發(fā)性，由淺入深，由易到難；無論是一題多問還是幾題幾問，問題之間要相互聯(lián)系，又彼此區(qū)別，角度應(yīng)有所不同，層次有深有淺，形成立體結(jié)構(gòu)。

（2）適當(dāng)補(bǔ)充，加深理解。在教學(xué)中，充分利用新教材的史料是非常必要的，但也不是說就只能完全局限于課本的史料。教師應(yīng)根據(jù)教學(xué)目的和教學(xué)內(nèi)容并結(jié)合學(xué)生的實(shí)際能力適當(dāng)補(bǔ)充相關(guān)史料和提出不同層次的問題，從而逐步培養(yǎng)學(xué)生分析和解決問題的能力。

總之，史料教學(xué)在歷史教學(xué)中具有十分重要的作用，而且隨著教育改革的不斷深入，它的地位將越來越穩(wěn)固。歷史教師應(yīng)在加強(qiáng)理論學(xué)習(xí)的同時(shí)，在教學(xué)實(shí)踐中根據(jù)實(shí)際的需要，不斷地探索史料教學(xué)的方法，從而更好地為中學(xué)歷史教學(xué)服務(wù)。

第四篇：汽車涂料空氣噴涂的原理及噴槍的操作方法概述

汽車涂料空氣噴涂的原理及噴槍的操作方法概述

空氣噴涂的原理是將壓縮空氣從噴槍空氣帽的中心孔噴出，在噴嘴前端形成負(fù)壓區(qū)，使液-氣相急劇擴(kuò)散，使汽車涂料成為微粒，呈漆霧狀飛向并附著在被涂物表面，涂料微粒迅速集聚成連續(xù)的涂膜?？諝鈬娡渴巧鲜兰o(jì)20年代為適應(yīng)快干涂料而開發(fā)的涂裝工藝，如今已有很大改進(jìn)?？諝鈬娡烤哂型垦b效率高、適應(yīng)性強(qiáng)、涂膜質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)，至今仍是應(yīng)用最廣泛的涂裝工藝之一，但同時(shí)它也有漆霧容易飛散、污染環(huán)境等缺點(diǎn)。

空氣噴涂裝置包括噴槍、壓縮空氣供給和凈化系統(tǒng)、輸漆裝置和噴漆室等。噴槍是空氣噴涂的主要工具，對(duì)涂膜的質(zhì)量影響最大。壓縮空氣供給和凈化系統(tǒng)包括空氣壓縮機(jī)、貯氣罐。油水分離器和輸氣管等。壓送式噴槍還需要增壓箱或輸漆泵等輸漆裝置。噴漆室可保護(hù)環(huán)境和保證涂裝質(zhì)量。1，噴槍的種類

噴槍可按很多方式進(jìn)行分類，按混合方式可分為內(nèi)混式和外混式噴槍。內(nèi)混式噴槍的涂料和空氣在空氣帽內(nèi)側(cè)

混合后噴出，可用于噴涂油性漆、多色美術(shù)漆、汽車涂料和涂裝小物件，噴霧圖形也僅限于圓形。外混式噴槍的涂料和空

氣在空氣帽的外側(cè)混合，這種噴槍用途廣泛。

2，噴槍的結(jié)構(gòu)

噴槍一般由槍頭、調(diào)節(jié)部件和槍體三部分組成。槍頭包括空氣帽、涂料噴嘴和針閥等部分，其作用是將漆料霧

化，并以一定圖形噴涂至被涂物表面。調(diào)節(jié)部件是指調(diào)節(jié)涂料噴涂噴出量、空氣流量和噴霧圖形的裝置。槍體

上裝有扳機(jī)和防止漏漆、漏氣的密封件。3，空氣噴涂作業(yè)（1）涂料的霧化

空氣噴涂是通過空氣和涂料混合使涂料霧化，霧化效果直接影響到涂膜的質(zhì)量。涂料的霧化程度取決于空氣噴

出量與涂料噴出量之比Qi。即在涂料噴出量一定的情況下，空氣噴出量決定于空氣帽中心孔與輔助空氣孔噴出

空氣的速度與流量。對(duì)于不同規(guī)格的噴槍，在進(jìn)行噴涂作業(yè)時(shí)為了達(dá)到必要的霧化程度，必須首先確定Qi。盡

管大噴槍的空氣噴出量和涂料噴出量都比小噴槍大，但要達(dá)到相同的霧化程度，其Qi值應(yīng)該是相似的。對(duì)于同 一噴槍，既可以采用增大空氣噴出量的方法，也可以減小涂料噴出量的方法，來增大Qi值，使漆霧變細(xì)。（2）噴槍的調(diào)節(jié)

噴涂作業(yè)前，必須根據(jù)被涂物的形狀、涂裝的質(zhì)量要求，將噴槍的空氣壓力、涂料噴涂量和漆霧圖形的幅寬調(diào)

整到適宜的噴涂條件，而這三者之間有著密切的關(guān)系。A,空氣壓力的調(diào)節(jié)

噴槍的空氣壓力有一定的調(diào)節(jié)范圍?？諝鈮毫Ω?，漆霧粒子細(xì)，分散多，涂料損失大；空氣壓力低，漆霧粒子

粗，涂膜表面粗造，會(huì)產(chǎn)生橘紋、針孔等缺陷，所以應(yīng)適當(dāng)選擇壓力，并且保持壓力穩(wěn)定。B,涂料噴出量的調(diào)節(jié)

涂料噴出量大，工作效率高，但是對(duì)于吸上式和重力式噴槍，涂料噴出量受到空氣壓力（或空氣量）的限制。

由于空氣壓力的升高是有限的，過多地增加涂料噴出量，會(huì)造成漆霧粒子粗，影響涂膜質(zhì)量。壓送式噴槍是通

過調(diào)節(jié)增壓罐的壓力來調(diào)節(jié)涂料噴出量，然后再調(diào)節(jié)噴槍的涂料噴出量調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)，達(dá)到合適的噴出量。

C.噴霧圖形的調(diào)節(jié)

噴霧圖形的大小稱為噴霧幅寬，對(duì)于圖形的噴霧圖形是指它的直徑，對(duì)于橢圓形的噴霧圖形是指它的長(zhǎng)軸長(zhǎng)度

。通過噴槍上部的調(diào)節(jié)螺栓可以控制空氣帽側(cè)面空氣孔的空氣流量，實(shí)現(xiàn)噴霧圖形的調(diào)節(jié)。關(guān)閉側(cè)面空氣孔，噴霧圖形呈圓形，主要用于較小的被涂物表面；打開側(cè)面空氣孔，噴霧圖形變成橢圓形，主要用于大面積噴涂，應(yīng)用廣泛；側(cè)面空氣孔的空氣流量越大，噴霧幅寬越大。雖然增加空氣壓力會(huì)增加噴霧幅寬，但超過一定的

限度，噴霧圖形的中心部分會(huì)變窄直至斷開。橫向噴涂時(shí)，應(yīng)將空氣帽的側(cè)面空氣孔調(diào)到橫軸位置；縱向噴涂

時(shí)，應(yīng)將側(cè)面空氣孔調(diào)到縱軸位置。（3）空氣噴涂的操作要點(diǎn)

噴涂距離、噴槍運(yùn)行方式和噴霧圖形的塔接是空氣噴涂的三個(gè)操作要點(diǎn)。

噴涂距離指噴槍前端到被涂物的距離。一般情況下大噴槍噴漆距離為20-30cm，小噴槍為15-25cm。噴涂距離

越近，在單位時(shí)間形成的涂膜厚，易產(chǎn)生流掛；噴涂距離過遠(yuǎn)，涂膜變薄，涂料損失大，嚴(yán)重時(shí)涂膜表面粗造。

噴槍的運(yùn)行方式包括噴槍與被涂面的角度和噴槍的運(yùn)行速度。噴槍與被涂面應(yīng)垂直，平行運(yùn)行，才能保證噴

涂距離恒定。噴槍的運(yùn)行速度一般在30-60cm/s，并保持恒定。如果噴槍傾斜或運(yùn)行速度多變，都得不到厚度均

勻的涂膜，并且產(chǎn)生缺陷。尤其是在噴涂汽車涂料時(shí)，要特別注意。

漆霧圖形的塔接指噴涂時(shí)，噴霧圖形之間部分重疊。由于噴霧圖形中部較厚，邊沿較薄，所以前后噴霧圖形 的邊沿部分互相塔接，才能保證涂膜厚度均勻。前后塔接的程度一般為有效噴霧圖形幅寬的1/4-1/3，且應(yīng)保持 不變。

（4）選擇噴漆的原則

無論是內(nèi)混式噴槍還是外混式噴槍，在選用時(shí)主要考慮以下四個(gè)因素：槍體的重量和大小、涂料的供給方式、噴嘴口徑和空氣使用量。（1）槍體重量和大小

從減輕勞動(dòng)者的工作強(qiáng)度來看，希望選擇用小型體輕的噴槍。但是小噴槍涂料噴出量和空氣量都比較小，效

率低，不適宜大量涂裝。如果用大型噴槍噴涂小型被涂料物，則會(huì)造成漆霧飛散多，涂裝損失大，也不適合。

因此應(yīng)在滿足噴涂作用條件的情況下，考慮噴槍的重量和大小。（2）涂料的供給方式

涂料用量少、顏色更換頻繁的小批量涂裝可選用涂料罐容量1L以下的重力式噴槍，但不適用于仰面涂裝。涂料

用量稍大、顏色更換次數(shù)多，特別是側(cè)面噴涂時(shí)，選用涂料容量罐1L以下的吸上式噴槍。涂料用量大，顏色比

較單一的連續(xù)噴涂可選用壓送式噴槍，配以容量為10-100L的增壓罐或帶有循環(huán)管路的涂料泵。

（3）涂料噴嘴口徑和空氣使用量

噴涂噴嘴口徑要適應(yīng)所要求的涂料噴出量。噴嘴口徑越大，涂料噴出量越大。因而，黏度高的涂料應(yīng)選用噴 嘴口徑大的噴槍。壓送式噴槍的涂料噴出量隨壓送涂料的壓力增高而增大，可選用噴嘴口徑小的噴槍。噴涂底

漆以及對(duì)涂膜外觀要求不高或涂膜較厚時(shí)可選用噴嘴口徑大的噴槍。噴涂面漆時(shí)，對(duì)漆料霧化要求較高，可選

用噴嘴口徑較小的噴槍。噴嘴口徑不同，空氣使用量也不同。噴嘴口徑小，空氣使用量小，相應(yīng)的涂料噴出量 也小，反之亦然。

4，熱噴涂法

噴涂加熱的涂料稱為熱噴涂。加熱的方式可替代加稀釋劑使涂料粘度下降，所以熱噴涂最初是為了提高硝基

涂料的固含量而開發(fā)的，由于具有涂裝質(zhì)量高、作業(yè)周期短和環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，得到廣泛應(yīng)用。通常熱噴涂設(shè)備是空氣噴涂噴槍配以涂料加熱器。涂料加熱器的加熱方式有熱上加熱、蒸汽加熱、電加熱等，其中電加熱使用方便快捷，控溫準(zhǔn)確，應(yīng)用最廣。為了保持溫度恒定，涂料加熱器與噴槍之間必須形成循環(huán) 通道。

熱噴涂法適用于加熱后黏度顯著下降的涂料，如水溶性涂料、高固含量涂料扽個(gè)，對(duì)于雙組分涂料，可分別

對(duì)兩組分加熱，然后在噴嘴前混合。

第五篇：免疫組化操作方法、原理、步驟以及常見問題處理大總結(jié)

免疫組化操作方法、原理、步驟以及常見問題處理大總結(jié)

1、方法操作不難，最大的難處是出現(xiàn)異常結(jié)果時(shí)如何解決？這就需要掌握免疫組化實(shí)驗(yàn)原理，每一步知道為什么這樣做，這樣你才敢大膽地改革先前的不對(duì)的方法步驟。如抗體孵育條件主要是抗體濃度、溫度、時(shí)間，這三者一般是相互成反比的（相對(duì)），其中濃度是最重要的先決條件，溫度決定反應(yīng)的速度、時(shí)間決定反應(yīng)的量。就拿溫度來說，可以有4度、室溫、37度，我推薦4度最佳，反應(yīng)最溫和，背景較淺；而37度反應(yīng)速度較快，時(shí)間較短；室溫我不太提倡，除非你每次都把環(huán)境溫度控制在一定的范圍，否則，盡量選擇前兩者。

2、免疫組化最大的優(yōu)勢(shì)是定位和定性。相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定性靈敏度高、定位較直接準(zhǔn)確，是定位檢測(cè)分析首選方法。尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。

3、免疫組化結(jié)果定量分析的前提是高質(zhì)量的染色切片。免疫組化結(jié)果也能定量分析，但必須是背景染色淺而特異性染色較深的情況下，分析最為準(zhǔn)確，這種原則可能也是我們?nèi)粘徃鍟r(shí)判定研究結(jié)果的必備條件。

4、免疫組化實(shí)驗(yàn)一定要設(shè)置陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照一般是用肯定表達(dá)這種抗原的切片來做；陰性對(duì)照一般是用PBS或非一抗替代一抗來進(jìn)行反應(yīng)，其余步驟均一致。前者是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無問題；后者是排除有無一抗外的非特異性染色。

5、免疫組化的應(yīng)用廣泛，是當(dāng)前實(shí)驗(yàn)研究的最重要方法之一。如今發(fā)SCI論文時(shí)，明顯感覺僅靠量化的數(shù)據(jù)來發(fā)文章很難，加一些形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)或圖片，老外十分歡迎，可能是怕你學(xué)術(shù)造假吧。當(dāng)然也不能做假陽性或假陰性結(jié)果。

6、免疫組化技術(shù)掌握與否的鑒定標(biāo)準(zhǔn)是同一切片或不同切片中不同抗原均從摸索濃度或條件而做出優(yōu)良的染色切片。我在平時(shí)帶教中就發(fā)現(xiàn)許多研究生把我已經(jīng)摸索很成熟的反應(yīng)條件、濃度、方法步驟，重復(fù)運(yùn)用于同一性質(zhì)的切片和同一種抗體，做出來后就覺得自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法，更換一種抗體后，居然連二抗的種屬來源都拿錯(cuò)了。失敗往往促進(jìn)你去思考試驗(yàn)原理和過程，成功有時(shí)也加快你自傲。

7、實(shí)驗(yàn)方法需要?jiǎng)邮?動(dòng)腦。如今我還不敢說我在免疫組化什么都知道。我只所以今天敢在這里說這說那，這是因?yàn)槲医?jīng)過了反復(fù)的動(dòng)手+動(dòng)腦，把理論原理運(yùn)用于實(shí)踐，在把實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)的問題帶到理論知識(shí)中去解決，最終把理論與實(shí)踐融會(huì)貫通。

一、概念和常用方法介紹

1、定義用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）技術(shù)。

2、原理根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，最后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

3、分類 1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法；親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。

4、目前幾種常用免疫組化方法簡(jiǎn)單介紹

1）免疫熒光方法是最早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。

2）免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前最常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測(cè)系統(tǒng)等。

3）免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。

5、被檢測(cè)的物質(zhì) 組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激 素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。

6、特點(diǎn) 1）特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2）敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義的。

7、從蛋白水平檢測(cè)角度，免疫組化技術(shù)與Western blotting、ELISA的異同1）Western blotting：蛋白質(zhì)免疫印跡，也是利用抗體抗原反應(yīng)原理，結(jié)合化學(xué)發(fā)光等技術(shù)來檢查組織或細(xì)胞樣品內(nèi)蛋白含量的檢測(cè)方法。與免疫組化技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確；當(dāng)然Western blotting也可定性和定位（通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位），但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于免疫組化技術(shù)。2）ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，也是利用抗體-抗原-抗原結(jié)合反應(yīng)原理來檢查體液或組織勻漿中蛋白含量的檢測(cè)。與免疫組化技術(shù)相比，定量最準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測(cè)首選方法之一。

二、實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)介

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物

酶活性。3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜（最好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。8）PBS沖洗，3分鐘×5次。9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。10）PBS沖洗，3分鐘×5次。11）顯色劑顯色（DAB等）。12）自來水充分沖洗。13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/p>

2、即用型二步法 1）脫蠟、水化組織切片。2）根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求，對(duì)組織切片進(jìn)行預(yù)處理。3）0.3%或3%H2O2去離子水孵育5分鐘-30分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS或TBS沖洗。4）滴加一抗，室溫或37℃孵育30~60分鐘，或4℃過夜，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次。5）滴加enhangcer增強(qiáng)劑，37度30min，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次。6）滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體，室溫/37℃孵育30分鐘-1h，PBS/TBS沖洗，3分鐘×5次。7）應(yīng)用DAB溶液顯色。8）蒸餾水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。

三、免疫熒光技術(shù)

1、免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié) 1）冰凍切片制備：建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴(yán)重。2）組織切片固定：切好片風(fēng)干后立即用冰西奈山環(huán)保組織固定液固定5-10min，尤其要較長(zhǎng)時(shí)間保存的白片，一定要及時(shí)固定和適當(dāng)保存。3）血清封閉：為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗來源一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時(shí)間是可以調(diào)整的，一般10-30min。4）一抗孵育條件：在免疫組化反應(yīng)中最重要，包括孵育時(shí)間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果最佳；孵育時(shí)間：這與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，而4度過夜和從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min。具體條件還要摸索。5）二抗孵育條件：二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時(shí)間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應(yīng)。但在免疫熒光中我們一般先把二抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間先定下，然后去摸索一抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間。最后，熒光素標(biāo)記的二抗隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，可能后有大量的游離熒光素殘留，需要注意配制時(shí)小包裝和并進(jìn)行適當(dāng)?shù)碾x心。6）復(fù)染：目的是形成細(xì)胞輪廓，從而更好地對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位。一般常用DAPI復(fù)染。7）封片：為了長(zhǎng)期保存，我們一般用緩沖甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產(chǎn)生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對(duì)面的那個(gè)拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時(shí)為止；當(dāng)發(fā)現(xiàn)液體接觸面在不斷彌散時(shí)，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會(huì)產(chǎn)生氣泡。8）切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當(dāng)?shù)丶訌?qiáng)清洗（延長(zhǎng)時(shí)間和增多次數(shù)）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均為5次*5min。注意（1）單獨(dú)沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。（2）溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；（3）沖洗的時(shí)間要足夠，才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)。（4）PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓(xùn)，當(dāng)時(shí)我買的抗體稀釋液偏酸，結(jié)果背景一片黃（未見特異性染色），建議PH在7.4-7.6濃度是0.01M。（中性及弱鹼性條件（PH7-8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解）9）拍照：有條件的話最好立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序；應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查；防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡；檢查時(shí)間每次以1~2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色；激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象；所以最多不得超過2~3h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再啟用時(shí)，須待燈光充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開啟15-30分鐘后；標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源最好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。

已有的常見免疫組化難題集錦

1、石蠟切片和冰凍切片的比較？（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是今天我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會(huì)破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會(huì)使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí)，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。

2、一抗的選擇要點(diǎn)和技巧是什么？（1）單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。（2）應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Western blotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至表明石蠟切片或冰凍切片。（3）種屬反應(yīng)性的選擇（species reactivity）。這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差異，且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。(4)種屬來源，一般兔來源的多是多克隆；而小鼠來源的多是單克隆，但也有另外。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗。(5)生產(chǎn)廠家的選擇。如santa Cruz公司抗體一般1ml，價(jià)格2100元左右；而chemicon公司一抗一般100ul，價(jià)格2800元左右。這兩個(gè)廠家的同一種抗體它的實(shí)際效價(jià)穩(wěn)定是不同的，我一般用后者抗體做免疫組化效果較好，而前者做Western blotting效果還可以。

3、在什么情況下使用TritonX-100？（1）Triton X-100化學(xué)名稱為聚乙二醇辛基苯基醚，是一種去污劑。在免疫組織化學(xué)(>10um厚切片)和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用Triton X-100 作為細(xì)胞通透劑，在膜上打孔。（2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解細(xì)胞膜、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi)，故在細(xì)胞免疫組化時(shí)尤為推薦使用，這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。（3)Triton X-100既是一種表面活性劑，也有抗氧化作用，具體參閱： http://004km.cn/bbs/post/view?bid=68&id=12301317&sty=1

4、封閉血清的選擇原則是什么？（1）膜上或切片上有剩余的位點(diǎn)可以非特異性吸附抗體，造成后續(xù)結(jié)果的假陽性！（2）封閉血清一般是和二抗同一來源的，血清中動(dòng)物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合，否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合，會(huì)造成背景。（3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能與一抗來源一致。

5、抗體孵育條件的比較？（1）一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果最佳；孵育時(shí)間：這與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，而4度過夜和從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min。（2）二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時(shí)間需要摸索。

6、一抗4度孵育后為什么要進(jìn)行37度復(fù)溫？（1）一方面，防止切片從4度直接放入PBS易脫片；（2）另一方面，使抗原抗體結(jié)合更穩(wěn)定。一般不需要,但對(duì)表達(dá)較弱的抗原可能有用,4度和37度時(shí)分子運(yùn)動(dòng)方式不同,前者分子碰撞機(jī)率和運(yùn)動(dòng)速度小于后者,后者結(jié)合更快,但敏感性也提高了并易造成非特異染色。（3）其實(shí)，我更贊同后一種說法，因?yàn)槲覈L試把肝臟或睪丸片子從4度過夜拿出后，直接用PBS洗沒發(fā)生過脫片現(xiàn)象。事實(shí)勝于雄辯！

7、DAB顯色時(shí)間如何把握？（1）DAB顯色時(shí)間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間，到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗；（2）DAB顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間；（3）此外，若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間；（4）DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時(shí)間過短（最好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時(shí)間過長(zhǎng)。

8、免疫組化結(jié)果如何分析？（1）陽性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野，人工或機(jī)器計(jì)數(shù)陽性著色細(xì)胞，每組3~6張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。（2）灰密度分析法。通過在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。（3）評(píng)分法。通過在光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進(jìn)行評(píng)分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），最終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。對(duì)于以上這幾種方法，各有利弊，請(qǐng)細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

9、在什么情況下進(jìn)行組織抗原修復(fù)，抗原修復(fù)的條件是什么？（1）由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用，從而失去抗原性。通過抗原修復(fù)，使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測(cè)率。（2）修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種，高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種（具體的可以查閱相關(guān)資料，大量的：中性的、高pH的等）。（3）微波修復(fù)，我們一般用6min*4次，效果不錯(cuò)。

10、內(nèi)源性過氧化物酶的滅活時(shí)間和濃度是什么？（1）一般3%過氧化氫滅活時(shí)間短點(diǎn)，可以10min左右；而0.3%過氧化氫則可以適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間，一般10~30min。（2）用西奈山環(huán)保組織固定液配置過氧化氫比雙蒸水或PBS能更好保護(hù)抗原和固定組織作用，過氧化氫孵育時(shí)間過長(zhǎng)易引起脫片。（3）現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后4度避光保存。

11、如何才能充分脫蠟？（1）蠟不溶于水，如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上，將會(huì)引起染色不均勻、陽性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問題，切片在染色前必須徹底脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強(qiáng)，脫蠟時(shí)間較短；（2）脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮，則脫蠟時(shí)間不需很多，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時(shí)間需要延長(zhǎng)，10-20分鐘或更長(zhǎng)。（3）當(dāng)天切的切片，燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色，切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過程，如果預(yù)先切好烤好的切片，在染色前，還必須對(duì)切片進(jìn)行加溫10-20分鐘，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快，效果魁偉更好?？傊?，操作時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié)，不同的室溫，不同的試劑來決定，脫蠟的時(shí)間，原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。

12、如何最大限度地降低組織非特異性染色？（1）縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是最重要的一條。（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色；（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長(zhǎng)二抗來源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果；（5）縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等；（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要；（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。

13、蘇木素復(fù)染時(shí)間的把握？（1）蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況，一般數(shù)秒-數(shù)分鐘。不過這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。即：染色深則分化時(shí)間稍長(zhǎng)些即可；染色淺則再置于蘇木素中染色即可。（2）鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗，然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒（一定動(dòng)作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返蘭即可。（3）如果分化的顏色過淺，可以復(fù)置于蘇木素中染色。

14、PBS的清洗方式選擇、次數(shù)和時(shí)間的選擇？（1）單獨(dú)沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。臨床上每天檢測(cè)的病例很多，所用的抗體種類及項(xiàng)目也多，如果在加入一抗孵育完后，將它們?cè)谝粋€(gè)缸內(nèi)洗，這樣就會(huì)造成交叉污染，影響最后的結(jié)果。正確的做法是單獨(dú)地進(jìn)行沖洗，沖洗的PBS為一次性，保證切片沒有相互交叉污染的機(jī)會(huì)。（2）溫柔沖洗，防止切片的脫落。沖洗切片，取出切片，將PBS從上輕輕地沖洗，讓PBS自上而下流下來，不要拿起切片將PBS對(duì)準(zhǔn)切片沖洗，這樣由于沖出的PBS有一定的沖擊力，很容易使切片周邊引起松動(dòng)，導(dǎo)致切片的脫落。（3）沖洗的時(shí)間要足夠，才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)。沖洗切片有人提出用微振蕩器振染，振下未結(jié)合的各種物，使之不產(chǎn)生背景，此種做法一是浪費(fèi)時(shí)間，二是很容易導(dǎo)致切片的脫落。切片的沖洗據(jù)實(shí)踐認(rèn)為，用一小燒杯柔和地于切片上沖洗，就能徹底沖洗去未結(jié)合的物質(zhì)，無需附加其它條件，沖洗好于切片上再注入PBS，持續(xù)2分鐘左右就完全足夠了。（4）PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。劉彥仿指出：中性及弱鹼性條件（PH7－8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解。免疫組化PBS我們目前常用的PBS的PH在7.4-7.6濃度是0.01M，根據(jù)本室十幾年來的使用情況，認(rèn)為該溶液價(jià)格便宜配制方面，使用效果好。（5）常用試劑的配制和使用。在免疫組織化學(xué)的染色過程中，用得最多的試劑就是緩沖液，因?yàn)榍衅谡麄€(gè)染色中，抗體的加、換、切片的沖洗，DAB的配制都離不開緩沖液?？梢娋彌_液在整個(gè)染色中都起至關(guān)鍵的作用，緩沖液的過酸或偏堿，都將影響染色的結(jié)果。

15、脫片產(chǎn)生的原因和如何防止脫片？（1）多聚賴氨酸玻片質(zhì)量的問題。我原先是買的，邁新按說也是不錯(cuò)的，可是都脫成什么樣子了。后面補(bǔ)做第二批時(shí)用的病理科老師自己做的片子，要好一點(diǎn)。（2）組織切的不好，切片機(jī)的問題例如比較老的舊的機(jī)器切的厚或者不均勻，或者切片者手法不好等。（3）組織的問題，我用的組織癌癥的很多，越是癌癥組織有壞死之類越容易脫。（4）沒烤好，時(shí)間短溫度不夠之類。（5）操作的時(shí)候甩的太猛了，有脫片嫌疑的片子最好不甩或輕輕甩，用衛(wèi)生紙從邊緣上慢慢吸水。（6）修復(fù)的問題：抗原修復(fù)的時(shí)候高壓時(shí)間過長(zhǎng)了，或者放進(jìn)100度的修復(fù)液時(shí)手法不好，咚的一聲就丟進(jìn)去了，這樣超容易脫片。此外，用EDTA修復(fù)比檸檬酸容易脫片，但是你要用到EDTA的時(shí)候也沒辦法，只有從另外的問題上著手。（7）此外，一旦見到有組織漂起來操作就更加要謹(jǐn)慎，用PBS的時(shí)候盡量用泡的，不要沖?；旧习堰@些方面都注意到了，能改善的盡量改善，脫片可以減少很多。

16、背景染色較深的原因有哪些？（1）抗體濃度過高：一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對(duì)其工作濃度進(jìn)行測(cè)試，使每一抗體個(gè)體化，找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應(yīng)如此，不能只簡(jiǎn)單的按說明書進(jìn)行染色。（2）抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)或溫度較高：解決辦法是，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，最好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘，及時(shí)提醒，避免因遺忘而造成時(shí)間延長(zhǎng)?，F(xiàn)在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的1小時(shí)，而是30分鐘，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。（3）DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長(zhǎng)：DAB最好現(xiàn)用現(xiàn)配，如有沉渣應(yīng)進(jìn)行過濾后再用。配制好的DAB不應(yīng)存放時(shí)間太長(zhǎng)，因?yàn)樵跊]有酶的情況下，過氧化氫也會(huì)游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色最好在顯微鏡下監(jiān)控，達(dá)到理想的染色程度時(shí)立即終止反應(yīng)。不過當(dāng)染色片太多時(shí)或用染色機(jī)時(shí)，這樣做似乎不現(xiàn)實(shí)，但至少應(yīng)對(duì)一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控，避免顯色時(shí)間過長(zhǎng)。（4）組織變干：修復(fù)液溢出后未及時(shí)補(bǔ)充液體、染色切片太多、動(dòng)作太慢、忘記滴液、滴液流失等都是造成組織變干的原因。解決的辦法是操作要認(rèn)真仔細(xì)，采用DAKO筆或PAP Pen在組織周圍畫圈，可以有效的避免液體流失，也能提高操作速度。（5）切片在緩沖液或修復(fù)液中浸泡時(shí)間太長(zhǎng)（大于24小時(shí)）：原因上不清楚，但現(xiàn)象存在。有的實(shí)驗(yàn)室喜歡前一天將切片脫蠟至修復(fù)，第二天加抗體進(jìn)行免疫組化染色，如果將裝有切片和修復(fù)液的容器放在4oC冰箱過夜，對(duì)結(jié)果無明顯影響，如果放在室溫，特別是炎熱的夏天，會(huì)出現(xiàn)背景著色，因此，不可存放時(shí)間太長(zhǎng)。（6）一抗變質(zhì)、質(zhì)量差的多克隆抗體：注意抗體的有效期，過期的抗體要麼不顯色要麼背景著色。用新買抗體時(shí)最好設(shè)立陽性對(duì)照和用使用過的抗體作比較。

17、蘇木素復(fù)染后氨水返藍(lán)這一步如何做、濃度多少、時(shí)間多長(zhǎng)?答：返藍(lán)可以用堿性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度溫水、冷水藍(lán)化均可。一般藍(lán)化5~10 min。淡氨水有人用50ml自來水＋三四滴的氫氧化銨