第一篇：磁敏傳感器競(jìng)爭(zhēng)免疫法檢測(cè)牛奶中的氯霉素殘留量

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磁敏傳感器競(jìng)爭(zhēng)免疫法檢測(cè)牛奶中的氯霉素殘留量

作者：史晶晶 廉潔 周穩(wěn)穩(wěn) 石西增 高云華

來源：《分析化學(xué)》2012年第10期

摘要：利用直接競(jìng)爭(zhēng)免疫原理和巨磁致電阻效應(yīng)，建立了磁敏生物傳感器檢測(cè)氯霉素的方法。制備氯霉素半抗原芯片，依次加入待測(cè)樣品、生物素化抗體、鏈霉親和素磁顆粒偶聯(lián)物，使之發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)，再利用傳感器檢測(cè)芯片上結(jié)合的磁顆粒數(shù)目。通過對(duì)檢測(cè)條件的優(yōu)化，建立了氯霉素濃度與磁顆粒數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。本方法的檢測(cè)范圍為0.05～100.0 μg/L；檢出限為50 ng/L；用于牛奶檢測(cè)，回收率為95.97%～99.36%；批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～3.9%，批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～1.7%；與ELISA方法的一致相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.98。本方法可在30 min內(nèi)快速完成定量檢測(cè)，為快速多靶標(biāo)磁敏競(jìng)爭(zhēng)免疫檢測(cè)體系的建立提供了可行性。

第二篇：水產(chǎn)品中氯霉素的快速檢測(cè) 膠體金免疫層析法（KJ201905）

附件5

水產(chǎn)品中氯霉素的快速檢測(cè)

膠體金免疫層析法

（KJ201905）

范圍

本方法規(guī)定了水產(chǎn)品中氯霉素的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。

本方法適用于水產(chǎn)品中氯霉素的快速測(cè)定。

原理

本方法的測(cè)定以競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理為基礎(chǔ)。樣品中的氯霉素經(jīng)有機(jī)試劑提取，固相萃取小柱凈化，濃縮復(fù)溶后，氯霉素與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和微孔膜檢測(cè)線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線與控制線顏色深淺比較，對(duì)樣品中氯霉素含量進(jìn)行定性判定。

試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為

GB/T

6682

規(guī)定的二級(jí)水。

3.1

試劑

3.1.1

正己烷。

3.1.2

丙酮。

3.1.3

乙酸乙酯。

3.1.4乙腈

3.1.5磷酸二氫鈉，NaH2PO4·2H2O。

3.1.6磷酸氫二鈉，Na2HPO4·12H2O。

3.1.7

氯化鈉

3.1.8

復(fù)溶液：稱取0.12

g磷酸二氫鈉

(3.1.5)置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，制成溶液A；稱取磷酸氫二鈉7.16

g

(3.1.6)置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，制成溶液B。取溶液A

2.8

mL、溶液B

7.2

mL、氯化鈉(3.1.7)0.85

g，用水溶解并稀釋至100

mL，得磷酸鹽緩沖液，即為復(fù)溶液。

3.1.9丙酮-正己烷（1+9）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按體積比1：9混勻。

3.1.10丙酮-正己烷（6+4）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按體積比6：4混勻。

3.2

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分之式、相對(duì)分子質(zhì)量見表1，純度≥98.6%。

表1

氯霉素參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子量

氯霉素

Chloramphenicol

56-75-7

C11H12Cl2N2O5

323.13

注：或等同可溯源物質(zhì)。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1

mg/mL）：精密稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（3.2）10

mg，置于10

mL容量瓶中，用乙腈（3.1.4）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1

mg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。4℃避光保存，有效期6個(gè)月。

3.3.2

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間液A（10

μg/mL）：精密量取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1

mg/mL）（3.3.1）0.1

mL，置于10

mL

容量瓶中，用乙腈（3.1.4）稀釋至刻度，搖勻，制成10

μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間液A。4℃避光保存，有效期3個(gè)月。

3.3.3

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.01

μg/mL）：精密移取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間液A（10

μg/mL）（3.3.2）0.01

mL分別置于10

mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.01

μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新配。

3.4材料

3.4.1固相萃取小柱：Cleanert

Silica，200

mg/6mL。LOT：0170198。

3.4.2免疫膠體金試劑盒（在2～30℃、干燥陰涼條件下保存，在產(chǎn)品有效期內(nèi)使用）。

3.4.2.1

金標(biāo)微孔。

3.4.2.2

試紙條或檢測(cè)卡。

儀器和設(shè)備

4.1

移液器：200

μL、1

mL和5

mL。

4.2

渦旋混合器。

4.3

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000

r/min。

4.4

電子天平：感量分別為

0.01

mg和

0.01

g。

4.5

樣品濃縮儀：如有需要。

4.6

環(huán)境條件：

溫度：15～25℃，相對(duì)濕度：≤60%。

5分析步驟

5.1試樣制備

取具有代表性樣品約500

g，充分粉碎混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標(biāo)記，于常溫保存。

5.2試樣提取和凈化

準(zhǔn)確稱取試樣6

g（精確至0.01

g）置于50

mL具塞離心管中，依次加入1

mL水和8

mL乙酸乙酯（3.1.3），渦旋提取5

min，以4000

r/min離心5

min。轉(zhuǎn)移全部乙酸乙酯層于50

mL具塞離心管中，加入正己烷25

mL，氯化鈉1

g渦旋混勻，4000

r/min

離心1

min，上清液待凈化。5

mL丙酮-正己烷（1+9）（3.1.9）淋洗LC-Si硅膠小柱，棄去淋洗液，將待凈化溶液轉(zhuǎn)移到固相萃取小柱上，棄去流出液，用5

mL丙酮-正己烷（6+4）（3.1.10）洗脫，收集洗脫液，洗脫液于40℃氮?dú)獯蹈?，精密加?00

μL復(fù)溶液（3.1.8），渦旋混合1

min，作為待測(cè)液。

5.3

測(cè)定步驟

5.3.1

檢測(cè)卡與金標(biāo)微孔測(cè)定步驟

吸取150

μL樣品待測(cè)液于反應(yīng)微孔（3.4.2.1）中，抽吸

5～10次使混合均勻，室溫溫育3

min；溫育結(jié)束后，將金標(biāo)微孔中溶液滴加到檢測(cè)卡（3.4.2.2）上的加樣孔中，室溫溫育5～8

min，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

5.3.2

試紙條與金標(biāo)微孔測(cè)定步驟

吸取150

μL樣品待測(cè)液于反應(yīng)微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均勻，室溫溫育3

min；溫育結(jié)束后，將檢測(cè)試紙條（3.4.2.2）吸水海綿端垂直向下插入反應(yīng)微孔中，室溫溫育3

min，從微孔中取出試紙條，去掉試紙條下端的吸水海綿，并于5

min內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判定。

5.3.3

檢測(cè)卡測(cè)定步驟

吸取150

μL樣品待測(cè)液滴加到檢測(cè)卡（3.4.2.2）上的加樣孔中，室溫溫育5～8

min，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

5.4質(zhì)控試驗(yàn)

每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。

5.4.1

空白試驗(yàn)

稱取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

5.4.2

加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取空白樣品6

g或適量（精確至0.01

g）置于15

mL具塞離心管中，加入180

μL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.01

μg/mL）（3.3.3），使氯霉素濃度為0.3

μg/kg，一式2份，按照

5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

結(jié)果判定要求

通過對(duì)比控制線和檢測(cè)線的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。由于長(zhǎng)時(shí)間放置會(huì)引起檢測(cè)線顏色的變化，需在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判定。目視結(jié)果判讀依據(jù)如圖1所示。

6.1

無效

控制線（C線）不顯色，表明不正確操作或試紙條/檢測(cè)卡無效。

6.2

陽(yáng)性結(jié)果

檢測(cè)線（T線）不顯色或檢測(cè)線（T線）顏色比控制線（C線）顏色淺，表明樣品中氯霉素含量高于方法檢測(cè)限，判定為陽(yáng)性。

6.3

陰性結(jié)果

檢測(cè)線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或者檢測(cè)線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當(dāng)，表明樣品中氯霉素含量低于方法檢測(cè)限，判定為陰性。

6.4質(zhì)量控制要求

空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。

結(jié)論

如被測(cè)樣品中氯霉素檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)采用確證方法進(jìn)行確證檢測(cè)。

性能指標(biāo)

8.1

檢測(cè)限

氯霉素為0.1

μg/kg。

8.2

靈敏度

靈敏度應(yīng)≥98%。

8.3

特異性

特異性應(yīng)≥90%。

8.4

假陰性率

假陰性率應(yīng)≤1%。

8.5

假陽(yáng)性率

假陽(yáng)性率應(yīng)≤10%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A

9其他

本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對(duì)其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。

本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB/T

22338-2008

動(dòng)物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測(cè)定

(包括所有修改單)。

附錄

A

定性方法性能計(jì)算表

樣品情況a

檢驗(yàn)結(jié)果b

總數(shù)

陽(yáng)性

陰性

陽(yáng)性

N11

N12

N1.=N11+N12

陰性

N21

N22

N2.=N21+N22

總數(shù)

N.1=N11+N21

N.2=N12+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

顯著性差異(χ2)

χ2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度（df）=1

靈敏度（p+）

p+=N11/N1.特異性（p-）

p-=N22/N2.假陰性率(pf-)

pf-=N12/N1.=1-靈敏度

假陽(yáng)性率(pf+)

pf+=N21/N2.=1-特異性

相對(duì)準(zhǔn)確度

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：N:任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

a由基準(zhǔn)方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果；

b由本方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。

本方法負(fù)責(zé)起草單位：山西省食品藥品檢驗(yàn)所。

驗(yàn)證單位：陜西省食品藥品檢驗(yàn)所、廣東省藥品檢驗(yàn)所、四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院。

主要起草人：李倩、閻安婷、陳煜、楊國(guó)偉。

第三篇：食用油中苯并（a）芘的快速檢測(cè) 膠體金免疫層析法（KJ201910）

附件10

食用油中苯并（a）芘的快速檢測(cè)

膠體金免疫層析法

(KJ201910)

范圍

本方法規(guī)定了食用油中苯并（a）芘的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。

本方法適用于食用油中苯并（a）芘的快速測(cè)定。

原理

本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的苯并（a）芘經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條或檢測(cè)卡中檢測(cè)線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線與控制線（C線）顏色深淺比較，對(duì)樣品中苯并（a）芘進(jìn)行定性判定。

試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規(guī)定的二級(jí)水。

3.1

試劑

3.1.1

正己烷：色譜純。

3.1.2

乙腈：色譜純。

3.1.3

二甲基亞砜（DMSO）。

3.1.4

NaH2PO4?2H2O。

3.1.5

Na2HPO4?12H2O。

3.1.6

氯化鈉。

3.1.7

吐溫-20。

3.1.8

氫氧化鈉溶液（2

mol/L）：稱取80g氫氧化鈉用水溶解，并定容至1L。

3.1.9

PBST溶液：稱取0.2965

g

NaH2PO4?2H2O、2.9

g

Na2HPO4?12H2O、8.76

g氯化鈉與0.55

g吐溫-20用水溶解并定容至1

L。

3.2

參考物質(zhì)

苯并（a）芘參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見表1，純度均≥95%。

表1

苯并（a）芘參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子質(zhì)量

苯并（a）芘

Benzo(a)pyrene

50-32-8

C20H12

252.32

注：或等同可溯源物質(zhì)。

3.3

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.1?mg/mL）：精密稱取適量苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)品（3.2），置于10

mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.1?mg/mL的苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；或可直接購(gòu)買苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。0

℃~5

℃避光保存?zhèn)溆?，有效?年。

3.4

材料

苯并（a）芘膠體金免疫層析試劑盒，適用基質(zhì)為食用油。

3.4.1金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）。

3.4.2

試紙條或檢測(cè)卡。

儀器和設(shè)備

4.1

移液器：100

μL、1

mL、5

mL和10

mL。

4.2

渦旋混合器。

4.3

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000

r/min。

4.4

電子天平：感量為0.01

g。

4.5

氮吹儀或空氣吹干儀（帶溫度控制）。

分析步驟

5.1

試樣制備

取適量有代表性樣品充分混勻。

5.2

試樣提取和凈化除脂

稱取10

g油樣于離心管中，加入5

mL

正己烷（3.1.1）和15

mL

DMSO（3.1.3）并混合均勻。漩渦振蕩2min，然后4000

r/min離心2

min。棄去上層正己烷層。加入5

mL

正己烷（3.1.1），漩渦振蕩30

s，然后4000

r/min離心30

s。棄去上層正己烷層。加入10

mL

氫氧化鈉溶液（2

mol/L）（3.1.8）和15

mL正己烷（3.1.1），漩渦振蕩30s，然后4000

r/min離心30

s。吸取上層正己烷層于15

mL離心管，4000

r/min離心2

min。取全部正己烷層于氮吹管中，50℃氮吹或空氣吹10

min，吹干后加入200μL

DMSO（3.1.3）復(fù)溶，混合均勻，此為待測(cè)液。

5.3

測(cè)定步驟

打開試紙筒，取出所需數(shù)量的紅色反應(yīng)微孔（取出微孔后，立即蓋好桶蓋，以防受潮）。往微孔中加入200

μL的PBST溶液，再加入50

μL待測(cè)液，上下抽吸5~10次至微孔試劑混合均勻，室溫（20℃~25℃）反應(yīng)7

min。將已做好標(biāo)記的試紙條插入至上述紅色微孔中，使樣品墊充分進(jìn)

入樣品中，并計(jì)時(shí)7

min。從微孔中取出試紙條，棄去試紙條下端的樣品墊，進(jìn)行結(jié)果判定。

5.4

質(zhì)控試驗(yàn)

每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。

5.4.1

空白試驗(yàn)

稱取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

5.4.2

加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取空白試樣（精確至0.01

g）置于玻璃試劑瓶中，加入一定體積的苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.1

mg/mL）（3.3.1），使試樣中苯并（a）芘濃度為10

μg/kg，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

結(jié)果判定方式

由于長(zhǎng)時(shí)間放置會(huì)引起質(zhì)控線（C線）與檢測(cè)線（T線）顏色的變化，需在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判定。試紙條與檢測(cè)卡如圖1所示。結(jié)果判定也可根據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

6.1

讀數(shù)儀測(cè)定結(jié)果

通過讀數(shù)儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀，根據(jù)不同廠家儀器規(guī)定進(jìn)行判讀。

無效：質(zhì)控線（C線）不顯色，無論檢測(cè)線（T線）是否顯色，均表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效。

陽(yáng)性：若檢測(cè)結(jié)果顯示“+”（陽(yáng)性），表示試樣中含有待測(cè)組分且其含量大于等于方法檢出限。

陰性：若檢測(cè)結(jié)果顯示“-”（陰性），表示試樣中不含待測(cè)組分或其含量低于方法檢出限。

6.2

目視判定

通過對(duì)比質(zhì)控線（C線）和檢測(cè)線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。

無效：質(zhì)控線（C線）不顯色，無論檢測(cè)線（T線）是否顯色，均表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效。

陽(yáng)性：質(zhì)控線（C線）顯色，若檢測(cè)線（T線）不出現(xiàn)或出現(xiàn)但顏色淺于質(zhì)控線（C線），表示試樣中含有待測(cè)組分且其含量高于方法檢出限，判為陽(yáng)性。

陰性：質(zhì)控線（C線）顯色，若檢測(cè)線（T線）顏色深于或等于質(zhì)控線（C線），表示試樣中不含待測(cè)組分或其含量低于方法檢出限，判為陰性。

6.3

質(zhì)控實(shí)驗(yàn)要求

空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。

C

T

S

C

S

T

C

T

S

C

T

S

C

T

S

C

T

S

加樣孔

無效

陰性

陽(yáng)性

B．檢測(cè)卡

吸水紙

NC膜

樣品墊

無效

陰性

陽(yáng)性

C線

T線

A．試紙條

圖1目視判定示意圖

結(jié)論

當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。

性能指標(biāo)

8.1

檢測(cè)限

10μg/kg。

8.2

靈敏度

≥95%。

8.3

特異性

≥85%。

8.4

假陰性率

≤5%。

8.5

假陽(yáng)性率

≤15%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法參見附錄A。

其他

本方法分析步驟和結(jié)果判定可以根據(jù)廠家試劑盒的說明書進(jìn)行，但應(yīng)符合或優(yōu)于本方法規(guī)定的性能指標(biāo)。

本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對(duì)其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。

本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB

5009.27-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

食品中苯并（a）芘的測(cè)定》。

本方法使用試劑盒可能與苯并（a）蒽、苯并（b）熒蒽、苯并（e）芘、苯并（j）熒蒽等物質(zhì)存在交叉反應(yīng)，當(dāng)結(jié)果判定為陽(yáng)性時(shí)應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。

附錄A

定性方法性能計(jì)算表

表A.1性能指標(biāo)計(jì)算方法

樣品情況a

檢測(cè)結(jié)果b

總數(shù)

陽(yáng)性

陰性

陽(yáng)性

N11

N12

N1.=N11+N12

陰性

N21

N22

N2.=N21+N22

總數(shù)

N.1=N11+N21

N.2=N12+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

顯著性差異（χ2）

χ2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1

靈敏度（p+，%）

p+=N11/N1.特異性（p-，%）

p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）

pf-=N12/N1.=100-靈敏度

假陽(yáng)性率（pf+，%）

pf+=N21/N2.=100-特異性

相對(duì)準(zhǔn)確度，%c

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

a由參比方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果或者樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果。

b由待確認(rèn)方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。

N：任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

C為方法的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測(cè)趨勢(shì)情況綜合評(píng)價(jià)。

本方法負(fù)責(zé)起草單位：廣東省食品檢驗(yàn)所。

驗(yàn)證單位：成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所。

本方法主要起草人：熊含鴻、王立亞、簡(jiǎn)德威、陳思敏、雷毅

第四篇：酶聯(lián)免疫法檢測(cè)蝦中的呋喃唑酮

酶聯(lián)免疫法檢測(cè)蝦中的呋喃唑酮代謝物

摘要建立養(yǎng)殖蝦類中 AOZ殘留 ELISA篩選方法。方法: 酸性條件下利用 2-硝基苯甲醛衍生化, 乙酸乙酯提取, 正己烷去雜質(zhì)后進(jìn)行 ELISA分析。結(jié)果: 方法最低檢測(cè)限為 013 Lg/kg, 向樣品中添加濃度為 015、110和 310Lg/kg3個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液時(shí),平均回收率范圍為 9017% ~ 9519%, RSD 為 4124% ~ 5142%。結(jié)論: 實(shí)驗(yàn)證明該方法適合養(yǎng)殖蝦類中 AOZ殘留篩選。

關(guān)鍵詞：蝦肉;呋喃唑酮代謝物;ELISA

一、前言

呋喃唑酮（FZD）,又名痢特靈,是一種廣譜抗菌藥物，屬于硝基呋喃類藥物，是人工合成的化學(xué)藥。常被摻放在飼料中，用于水產(chǎn)品養(yǎng)殖傳染病的預(yù)防與治療[1]。藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，呋喃唑酮在動(dòng)物體內(nèi)的代謝非?？?，現(xiàn)已明確此類抗生素的原型在體內(nèi) 4 d 后，就已完全分解成其代謝物，所以分析呋喃唑酮時(shí)，只能分析其代謝物[2]。經(jīng)研究表明，呋喃唑酮的代謝物中有相當(dāng)數(shù)量是以其完整側(cè)鏈 3-氨基-2-惡唑烷酮即 AOZ 與蛋白結(jié)合的殘留物形式存在, AOZ 進(jìn)一步代謝可產(chǎn)生具致癌、致突變作用的羥乙基肼[3]，因此檢測(cè)呋喃唑酮代謝物(AOZ)的殘留更具有現(xiàn)實(shí)意義。呋喃唑酮在畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品中的殘留，通過食物鏈傳遞給人類,會(huì)使人體受到損害。另外,其作為人畜共用藥，長(zhǎng)期微量攝入易使人體產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致呋喃唑酮藥物失去醫(yī)療功效[4]。

1990 年 7 月歐盟頒布 2377/90/EEC 條例，將硝基呋喃類藥物及其代謝產(chǎn)物列為 A 類禁用藥物，規(guī)定其在動(dòng)物源性食品中的殘留檢測(cè)限為 1.0 μg/kg。由于對(duì)呋喃唑酮蛋白結(jié)合態(tài)殘留物的安全性產(chǎn)生懷疑，自1995 年起歐盟、日本、美國(guó)等都開始禁止這類抗菌劑在食用的畜禽及水產(chǎn)動(dòng)物中使用，并嚴(yán)格執(zhí)行對(duì)輸入的食用魚，蝦及禽類進(jìn)行殘留檢測(cè)[5]。同許多國(guó)家一樣，我國(guó)農(nóng)業(yè)部制訂的 NY5070-2002《無公害食品水產(chǎn)品中魚藥殘留限量》及 GB18406.4-2001《無公害水產(chǎn)品安全要求》規(guī)定，水產(chǎn)品中不得檢出呋喃唑酮，同時(shí)禁 止在飼料中添加[6]。目前呋喃唑酮在食品中殘留的監(jiān)測(cè)方法主要有高效液相色譜法[7-8]、酶聯(lián)免疫法[9]、分光光度法、原子吸收法[10]等，酶聯(lián)免疫法已受到廣泛重視。本試驗(yàn)主要 使用酶聯(lián)免疫法對(duì)出口蝦中呋喃唑酮代謝物AOZ 的殘留做快速檢測(cè)。

福建省詔安縣海利水產(chǎn)有限公司，是一家集水產(chǎn)品加工、銷售、研究、開發(fā)和養(yǎng)殖于一體的大型出口企業(yè)。該公司于2005年引進(jìn)投建，廠房和生產(chǎn)布局按照《出口食品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生注冊(cè)登記管理規(guī)定》和美國(guó)FDA法規(guī)及歐盟指令進(jìn)行設(shè)計(jì)建造，廠區(qū)占地面積八萬平方米，全封閉配套中央空調(diào)的水產(chǎn)加工車間二萬平方米，生產(chǎn)車間配套高效臭氧殺菌設(shè)施，制冷水機(jī)和大型制冰機(jī)等各種先進(jìn)加工設(shè)備，凍庫(kù)儲(chǔ)存能力達(dá)6000噸，同時(shí)配套建設(shè)大型對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)及蝦苗孵化場(chǎng)，擁有一支高素質(zhì)員工隊(duì)伍，年加工生產(chǎn)水產(chǎn)品15000噸以上，產(chǎn)品近二十種，主要有凍生蝦、凍熟蝦、凍面包蝦、壽司蝦、凍魷魚、凍羅非魚等。公司秉承共同發(fā)展的目標(biāo)，不斷完善質(zhì)量管理體系，執(zhí)著追求品質(zhì),先后獲得了《衛(wèi)生注冊(cè)證書》、《輸美水產(chǎn)品HACCP驗(yàn)證證書》，2005年11月通過了BRC認(rèn)證，2006年1月通過了ISO9001認(rèn)證，2008年通過了歐盟相關(guān)質(zhì)量認(rèn)證，產(chǎn)品獲得了國(guó)外消費(fèi)者的肯定和喜歡，遠(yuǎn)銷日本、美國(guó)、加拿大、墨西哥和香港等國(guó)家和地區(qū)，在國(guó)外贏得了市場(chǎng)。公司自建成投產(chǎn)以來，企業(yè)迅速發(fā)展壯大。

1材料與方法

1.1

樣品

均來自福建省海利水產(chǎn)有限公司。

1.2

主要儀器及設(shè)備

MK3 型酶標(biāo)儀: Thermo 公司；Scientz-10 型均質(zhì)機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；ALC.210.4 電子天平:ACCULAB；DRP-9082 型恒溫培養(yǎng)箱：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；4K15 型高速冷凍離心機(jī)：Sigma公司；HH-w600s 恒溫水箱：山東鄄城新科教學(xué)儀器廠；MS1 Minishaker:IKA；1 000、200、20 μL 微量移液器：GILSON。

1.3

試劑與溶液

呋喃唑酮代謝產(chǎn)物-AOZ 試劑盒：北京望爾生物技術(shù)有限公司；靈敏度為 0.125 μg/kg，包括：AOZ 標(biāo)準(zhǔn)溶液（0、0.05、0.15、0.45、1.35、4.05 ng/mL）、濃縮緩沖液、濃縮提取/洗滌液、衍生試劑、濃縮酶標(biāo)記物、底物溶液、反應(yīng)終止液。正己烷，乙酸乙脂，1 mol/L NaOH，1 mol/L HCl。

1.4方法

1.4.1

樣品處理

蝦去頭去殼，取可食用部分，制成均質(zhì)物。

1.4.2

樣品制備

1）稱取 1 g 已均質(zhì)的樣品于 50 mL 離心管中，依次加入 4 mL 超純水、1.5 mL 1 mol/L HCl，100 μL 衍生試劑，漩渦振蕩 1 min。置 37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中溫育，靜置過夜（約 16 h）。

2）加入 5 mL 原倍緩沖液，0.4 mL 1 mol/L NaOH，5 mL 乙酸乙酯，振蕩混合約 1 min。

3）離心 10 min（3 000 r/min），取 2 mL 上清（乙酸乙酯層）至 10 mL 玻璃管中，于 50 ℃下氮?dú)獯蹈伞?/p>

4）于此玻璃管加入正己烷 1 mL，先將殘留物完全溶解后（若未能完全溶解，可能會(huì)導(dǎo)致回收率降低），再加入 2 mL 原倍萃取/清洗液，振蕩 1 min。

5）將玻璃試管置于 80℃～100℃熱水浴中約 3min，以減少水相與有機(jī)相間的乳化現(xiàn)象。6）離心 10 min（3 000 r/min），吸去上層液（正己烷），棄掉，再吸取下層液（水層）備用。

1.4.3測(cè)定

1）將 AOZ 試劑盒從冰箱中拿出，回溫至室溫。

2）取出相應(yīng)數(shù)量的微孔，各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液和待測(cè)樣品各做 2 個(gè)平行樣，做好記錄。

3）于適當(dāng)?shù)奈⒖字蟹謩e加入 50 μL 標(biāo)準(zhǔn)溶液（0，0.05，0.15，0.45，1.35，4.05 ng/mL）。

4）于另外微孔中加入 50 μL 已完成前處理的樣品溶液。

5）再于每一微孔中另再加入 100 μL 已稀釋的酶標(biāo)記物。

6）輕敲盤子四周，使其充分混合后于室溫（25 ℃）下避光靜置溫育 50 min。

7）微孔中的反應(yīng)液甩掉，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)洗 3 次。

8）最后一次甩掉后，在吸水紙上拍干。

9）于每一微孔中加入底物溶液 100 μL 后，輕敲盤子四周，使其充分混合。

10）于室溫（25 ℃）下避光靜置溫育 30 min。

11）于每一微孔中加入 100 μL 反應(yīng)終止液。

12）用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng) 450 nm 下判讀。

1.5

數(shù)據(jù)處理

1）計(jì)算（B/B0）×100 值。用樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度值（B）除以零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值（B0）再乘以 100。

2）以（B/B0）×100 值為縱坐標(biāo)，以樣品濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)對(duì)數(shù)曲線。

3）根據(jù)每個(gè)樣品的 B/B0值就可以從曲線上讀出相對(duì)應(yīng)樣品的濃度

2結(jié)果

2.1

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

AOZ 標(biāo)準(zhǔn)品的 ELISA 檢測(cè)結(jié)果見表 1。

2.4

試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)

1）A回溫試劑（20℃-24℃）。B恒溫孵育，避免光線照射。

2）、將足夠標(biāo)準(zhǔn)和樣品所用數(shù)量的孔條插入微孔架，標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，記錄下標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。

3）加入50ul標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品液到各自的微孔中，每個(gè)孔加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)時(shí)注意更換移液器的吸頭。

4)加入50ul酶標(biāo)記物溶液（紅帽）到每一個(gè)微孔底部，充分混合。

5)加入50ul抗體溶液（黑帽）到每一個(gè)微孔底部充分混合，在室溫孵育1小時(shí)，覆蓋上薄膜。

6)倒出孔中的流體將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。用250ul樣品洗滌緩沖液充入孔中，重復(fù)兩次。

7)加入100ul基質(zhì)/發(fā)色劑到每一微孔中，充分混合并在室溫暗處孵育15分鐘。

8）加入100ul反應(yīng)終止液到每一微孔中，混合好在450nm處測(cè)量吸光值以空氣為空白，必須在加入停止液后60分鐘內(nèi)讀取吸光值。

9）試劑盒內(nèi)容物要完全回穩(wěn)后再進(jìn)行操作，否則，會(huì)出現(xiàn)吸光值偏低或沒有吸光值。

10）溫浴時(shí)若室溫太低或太高，請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)或縮短溫浴時(shí)間，或直接在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

11）加樣品或試劑時(shí)，吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。

12）加樣和洗板過程中，要避免微孔間的相互污染。

13）整個(gè)試驗(yàn)過程中，勿使微孔干燥。

結(jié)論

本試驗(yàn)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)了海利水產(chǎn)有限公司中呋喃唑酮代謝物 AOZ 的殘留狀況，結(jié)果表明絕大多數(shù)的水產(chǎn)品符合規(guī)定，只有極少數(shù)部分有殘留。用酶聯(lián)免疫法對(duì)蝦肉呋喃唑酮代謝物 AOZ 殘留進(jìn)行測(cè)定，操作簡(jiǎn)易，不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，作為一種快速篩選手段，在食品工業(yè)中有著廣闊的推廣應(yīng)用前景，尤其在水產(chǎn)品出口企業(yè)中，但酶聯(lián)免疫試劑盒的價(jià)格將是最大的制約因素。

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第五篇：食品中玉米赤霉烯酮的快速檢測(cè) 膠體金免疫層析法（KJ201913）

附件13

食品中玉米赤霉烯酮快速檢測(cè)

膠體金免疫層析法

(KJ201913)

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中玉米赤霉烯酮快速檢測(cè)膠體金免疫層析法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用玉米、小麥及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速篩選測(cè)定。

第一法

比色法

2.原理

本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的玉米赤霉烯酮經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條中檢測(cè)線（T線）上的抗原結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線（T線）與控制線（C線）顏色深淺的比較，對(duì)樣品中玉米赤霉烯酮進(jìn)行結(jié)果判定。

3.試劑及材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為GB/T

6682規(guī)定的二級(jí)水。

3.1.試劑

3.1.1.乙腈。

3.1.2.甲醇+水（7+3，體積比）。

3.1.3.稀釋緩沖液（膠體金免疫層析檢測(cè)試劑盒專用提取液或根據(jù)產(chǎn)品使用說明書配置）。

3.2.參考物質(zhì)

玉米赤霉烯酮的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見表1，純度≥95%。

表1

玉米赤霉烯酮參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子量

玉米赤霉烯酮

Zearalenone

17924-92-4

C18H22O5

318.36

注：或等同可溯源物質(zhì)。

3.3.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.3.1.標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈（3.1.1）溶解，配制成濃度為100

μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。﹣18

℃避光保存，有效期6個(gè)月。

3.3.2.標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100

μg/mL）（3.3.1）100

μL，置于10

mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1

μ稀/mL的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作液，2

℃～8

℃避光保存，有效期1個(gè)月。

3.4.材料

玉米赤霉烯酮膠體金免疫層析試劑盒，適用基質(zhì)為玉米、小麥及其碾磨加工品。

4.儀器和設(shè)備

4.1.移液器：100

μL、200

μL、1

mL和5

mL。

4.2.旋渦混合器。

4.3.離心機(jī)。

4.4.電子天平：感量為0.01

g。

5.環(huán)境條件

環(huán)境溫度：20

℃～30

℃。

空氣相對(duì)濕度：最佳測(cè)定濕度45

%～65

%。若濕度低于45

%，相應(yīng)延長(zhǎng)待測(cè)液-試紙條反應(yīng)時(shí)間，以質(zhì)控實(shí)驗(yàn)為準(zhǔn)；若濕度為65

%～80

%，微孔與試紙條拆開后立即使用，避免微孔與試紙條長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中受潮；避免在濕度80

%以上濕度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

6.分析步驟

6.1.試樣制備

按GB

5491扦取的樣品充分碾磨或粉碎混勻，過40目篩。

6.2.提取

準(zhǔn)確稱取試樣5.0

g（精確至0.01

g）于50

mL離心管中，加入20

mL

甲醇+水溶液（3.1.2），用旋渦混合器振蕩3

min，離心分層或靜置分層，上清液備用。

準(zhǔn)確移取0.8

mL稀釋緩沖液（3.1.3）于1.5

mL離心管中，加入25

μL上清液，混勻，待檢。

6.3.測(cè)定步驟

依檢驗(yàn)所需，取相應(yīng)數(shù)量的金標(biāo)微孔和試紙條，做好標(biāo)記。吸取待檢液200

μL于金標(biāo)微孔中，抽吸至孔底的紫紅色顆粒完全溶解，孵育10

min。將試紙條插入金標(biāo)微孔中，反應(yīng)3

min～5

min。

從金標(biāo)微孔中取出試紙條，棄去試紙條下端的樣品墊，觀察顯色情況，進(jìn)行結(jié)果判定。（若試劑盒冷藏保存，使用前需恢復(fù)至實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度。）

7.質(zhì)控試驗(yàn)

每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和陽(yáng)性質(zhì)控試驗(yàn)，可根據(jù)檢測(cè)樣品量制定適宜頻次的質(zhì)控試驗(yàn)。

7.1.空白試驗(yàn)

7.1.1.試劑空白試驗(yàn)：除不稱取試樣外，均按6.2和6.3所述步驟操作。

7.1.2.基質(zhì)空白試驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取空白試樣，按6.2和6.3所述步驟操作。

7.2.陽(yáng)性質(zhì)控試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取玉米赤霉烯酮含量為60

μg/kg的質(zhì)控樣，按6.2和6.3步驟操作?；驕?zhǔn)確稱取空白試樣，加入一定體積的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.3.2），使玉米赤霉烯酮添加量為60

μg/kg，按6.2和6.3步驟操作。

8.結(jié)果判定

通過對(duì)比控制C線和檢測(cè)T線的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。

8.1.無效結(jié)果

無論樣品中有無玉米赤霉烯酮存在，控制C線均會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。若C線未顯色，表明操作不正確或試紙條已失效，檢測(cè)結(jié)果無效（見圖1）。

無效

圖1

試紙條目視判定圖

8.2.陽(yáng)性結(jié)果

控制C線顯色，檢測(cè)T線顯色比C線淺或者沒有顏色，判定為陽(yáng)性（見圖2）。

8.3.陰性結(jié)果

控制C線顯色，檢測(cè)T線顯色比C線深或者一致，判定為陰性（見圖2）。

比色法

圖2

試紙條目視判定圖

8.4.質(zhì)控試驗(yàn)要求

空白試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為陰性，陽(yáng)性質(zhì)控試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。

第二法

消線法

9.原理

本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的玉米赤霉烯酮經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條中檢測(cè)線（T線）上的抗原結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過T線顯色與否進(jìn)行結(jié)果判定。

10.試劑及材料

同3。

11.儀器和設(shè)備

同4。

12.環(huán)境條件

環(huán)境溫度：10

℃～40

℃。

空氣相對(duì)濕度：同5。

13.分析步驟

13.1.試樣制備

同6.1。

13.2.提取

準(zhǔn)確稱取試樣5.0

g（精確至0.01

g）于50

mL離心管中，加入12.5

mL甲醇+水溶液（3.1.2），用旋渦混合器振蕩3

min，離心分層或靜置分層，上清液備用。

準(zhǔn)確移取400

μL稀釋緩沖液（3.1.3）于1.5

mL離心管中，加入上清液(小麥50

μL，玉米80

μL），混勻，待測(cè)。

13.3.測(cè)定步驟

同6.3。

14.質(zhì)控試驗(yàn)

每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和陽(yáng)性質(zhì)控試驗(yàn)，可根據(jù)檢測(cè)樣品量制定適宜頻次的質(zhì)控試驗(yàn)。

14.1.空白試驗(yàn)

14.1.1.試劑空白試驗(yàn)：除不稱取試樣外，均按13.2和13.3所述步驟操作。

14.1.2.基質(zhì)空白試驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取空白試樣，按13.2和13.3所述步驟操作。

14.2.陽(yáng)性質(zhì)控試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取玉米赤霉烯酮含量為60

μg/kg的質(zhì)控樣，按13.2和13.3步驟操作?；驕?zhǔn)確稱取空白試樣，加入一定體積的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.3.2），使玉米赤霉烯酮添加量為60

μg/kg，按13.2和13.3步驟操作。

15.結(jié)果判定

通過觀察檢測(cè)T線顯色與否進(jìn)行結(jié)果判定。

15.1.無效

同8.1

15.2.陽(yáng)性結(jié)果

控制C線顯色，檢測(cè)T線不顯色，判定為陽(yáng)性（見圖3）。

15.3.陰性結(jié)果

控制C線顯色，檢測(cè)T線顯色，判定為陰性（見圖3）。

消線法

圖3

試紙條目視判定圖

16.質(zhì)控試驗(yàn)要求

同8.4

第三法

讀數(shù)儀法

17.具體檢測(cè)步驟及結(jié)果判定可參考相應(yīng)的說明書操作，質(zhì)控試驗(yàn)參照第一法與第二法。

18.結(jié)論

本方法篩查出的陽(yáng)性樣品進(jìn)行確認(rèn)時(shí)，應(yīng)按GB

2761指定方法標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)并判定。

19.性能指標(biāo)

19.1.檢出限

μg/kg。

19.2.靈敏度

靈敏度≥95%。

19.3.特異性

特異性≥90%。

19.4.假陰性

假陰性≤5%。

19.5.假陽(yáng)性

假陽(yáng)性≤10%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。

20.其他

本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為了方便方法使用者，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對(duì)其進(jìn)行考察，滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)時(shí)方可使用。

本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB

5009.209-2016

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定。

附錄A

快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算表

樣品情況a

檢測(cè)結(jié)果b

總數(shù)

陽(yáng)性

陰性

陽(yáng)性

N11

N12

N1.=N11+N12

陰性

N21

N22

N2.=N21+N22

總數(shù)

N.1=N11+N21

N.2=N12+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

顯著性差異（c2）

c2=（?N12-N21?-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1

靈敏度（p+，%）

p+=N11/N1.特異性（p-，%）

p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）

pf-=N12/N1.=100-靈敏度

假陽(yáng)性率（pf+，%）

pf+=N21/N2.=100-特異性

相對(duì)準(zhǔn)確度，%c

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

a樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果；

b由玉米赤霉烯酮膠體金試紙條檢驗(yàn)方法得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。

N：任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

C為方法的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測(cè)趨勢(shì)情況綜合評(píng)價(jià)。

本方法起草單位：成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院。

本方法參與單位：江南大學(xué)、國(guó)家糧食局科學(xué)研究院、廣東省食品檢驗(yàn)所、山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院。

本方法主要起草人：肖全偉、姚蕾珺、王昕、張敏、胥傳來、田洪蕓、沈泓、周露