第一篇：大豆異黃銅甙元提取方法的研究

大豆異黃銅甙元提取方法的研究

大豆異黃酮（soybean isoflavone）是大豆種子中的一類次生代謝產(chǎn)物，近年來大量研究表明：大豆異黃酮具有預(yù)防癌癥、心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥、抗氧化和降低婦女更年期綜合癥等重要生理功能，引起了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注，大豆異黃酮成了世界各國科學(xué)家研究的熱點(diǎn)。大豆異黃酮是一種多元酚類混合物，分為游離型的甙元和結(jié)合型的糖甙兩類，而大豆及大豆食品中的大豆異黃酮主要以糖甙型形式存在，人體一般不吸收此種形式的異黃酮。據(jù)文獻(xiàn)報道，甙元形式的異黃酮比糖甙形式的異黃酮具有更高的生物活性?？梢姶蠖怪挟慄S酮甙元含量不足5%，但比糖甙型表現(xiàn)出更高的生物學(xué)活性，因此，如何從大豆中提取出甙元形式的異黃酮從而大大提高其生理活性，就成了近年來大豆異黃酮研究中的一個熱點(diǎn)。目前較常見的大豆異黃酮提取方法有：熱水浸提、乙醇及乙酸乙酯等有機(jī)溶劑浸提法等，其提取產(chǎn)品中異黃酮是以糖甙結(jié)合的形式存在。為獲得高生物活性的游離型大豆異黃酮甙元，我們提出酸堿水解法提取大豆異黃酮的新工藝，該提取方法利用大豆異黃酮甙、大豆異黃酮甙元以及大豆異黃酮甙元鈉鹽在分子極性上的差異，最終提取出大豆異黃酮甙元成分。具體提取工藝如下：大豆→粉碎→酸水解→堿水解→乙醚萃取→酸中和→乙醚萃取→異黃酮甙元粗提品。通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了堿水解的最佳提取工藝條件。結(jié)果表明，堿水解的最佳條件是：堿解pH 8.75，溫度50℃，提取時間90min，此條件下大豆異黃酮甙元提取率為44.3％，粗提品純度達(dá)19.9％。

關(guān)鍵詞：大豆異黃酮 甙元 酸堿水解 提取

第二篇：異文化の研究方法

異文化の研究方法について

この地球にはたくさんの國家がある。國によって言葉や文化などが違うことは私たちにとって誰でも知っていることである。こういう違う文化は一般的に「異文化」と呼ばれている。

聖書にこういう話がある：God afraid human to build the Babel Tower, so He made human has different language to make them chaos.この話は本當(dāng)かどうか私は分からない、ただ社會を研究するときに、異なる文化は「理解」（Understand）と「結(jié)合」(Combine)に意味するではないかと思う。私たちは他の國から何を?qū)Wべるか、その國の文化はどういう意味なのか、これは異文化研究するためにもっとも基本な方法である。

ある國の文化生活に入る前に、まず自分の立場（Researcher’s position）をはっきり分からなければならない：私は傍観者（visitor）であるか、それとも參與者（involver）であるか、ということだ。なぜかというと、研究の立場によって観點(diǎn)が違うからだ。參與者は文化研究に通じて、もっとも経験を得る人かもしれない。しかし、參與者は本來の意味を変え、その文化を自分なりの意味の文化に変えてしまう可能性がある。というのは、社會研究者はあまり社會に參與しすぎないほうがいいと思う。一方、傍観者は最初から最後まで自分の観點(diǎn)を持つことができる。しかし、回りの人と交流しなければ、現(xiàn)実の社會でその研究して得た結(jié)論が実現(xiàn)することは難しい、その結(jié)論は一部だけのものにすぎない（One face of it）。とういうことで、研究者の立つ場（Researcher’s position）は非常に重要である。

他國の文化と比較するときに、もう一つの注意しなければならない問題は、研究者の総體的な見方（Researcher’s perspective）である。つまり、その研究者は他國の伝統(tǒng)文化を受け入れるつもりがあるかどうかということである。例えば、強(qiáng)い國は弱い國によくこう言っている：“Your country is a waste land, I come here to save you” or “To improve your poor life”… しかし、研究者が異文化社會に入る前に、本來の考え方を忘れ、その國の生活に入ってみなければならないと思う。一番最初の問題は、“Try to change them”ではなく、“Understand them”ということである。その國の文化を全部理解した後に“Improve or change the tradition”ということを考えても遅くない。

以上の問題を注意すれば、私たちは異文化を研究するために一番根本なやり方を見付け、それにその文化を理解することができると思う。もちろん、他國の文化に參與し、そしてその國の人々と付き合う方法がたくさんあるが、研究者にとって、自分なりの方法を見付たほうがいい。ということで、たくさん存在する異文化を研究するために、できるだけ自分に合う研究方法を見つけ、その社會に參與することが大切である。しかも、別の國の人々と接する同時に、その異文化から學(xué)び、ほかの生活方法も見つけられると思う、これは“Learning from Researching”とも言えるだろう。

第三篇：多糖的提取純化及分析鑒定方法研究

多糖的提取純化及分析鑒定方法研究

王霄

(合肥工業(yè)大學(xué) 生物與食品工程學(xué)院，安徽 合肥230009)

摘要：詳細(xì)介紹了動植物多糖的常見提取純化方法的最新研究進(jìn)展，并比較了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。每種方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，在提取時應(yīng)根據(jù)所選材料的性質(zhì)選用不同的方法，有些方法在一定的條件下可與別的方法協(xié)同作用，并對糖的含量測定及分析鑒定方法的研究進(jìn)展作了概述。

關(guān)鍵詞：多糖；提?。患兓?；分析鑒定；研究進(jìn)展 中圖分類號：TU 411.01文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Progress of Polysaccharides Extraction, Purification and Identification Methods

WANG Xiao

(School of Biological and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China)

Abstract: This paper reviews the extraction, purification and identification methods of animal and plantpolysaccharides, and compares the advantages and disadvantages of each mothed.Each mothed has its own advantages and disadvantages, appropriate mothed should be selected according to the nature of the chosen material, and some of these methods can be synergy with other methods under certain conditions.In addition, analysis and identification of polysaccharides are outlined.Key words: polysaccharides;extraction;purification;analysis and identification;research progress

菌來源的糖綴合物具有廣泛的藥理及生物活性

0多糖概述

多糖（polysaccharide）是由糖苷鍵結(jié)合的糖鏈，至少要超過10個以上的單糖組成的聚合糖高分子碳水化合物。由相同的單糖組成的多糖稱為多糖，如淀粉、纖維素和糖原；以沒的單糖組成的多糖稱為雜多糖，如阿拉伯膠是由戊糖和半乳糖等組成。多糖不是一種純粹的化學(xué)物質(zhì)，而是聚合程度不同的物質(zhì)的混合物。多糖類一般不溶于水，無甜味，不能形成結(jié)晶，無還原性和變旋現(xiàn)象。多糖也是糖苷，所以可以水解，在水解過程中，往往產(chǎn)生一系列的中間產(chǎn)物，最終完全水解得到單糖。

近年來，國際上對糖及糖復(fù)合物的研究己成熱點(diǎn)，糖類結(jié)構(gòu)測定和生物活性研究取得了明顯的進(jìn)展。大量實(shí)驗(yàn)事實(shí)揭示糖類是重要信息分子，參與許多生理和病理過程

[1-2]

[3]。

在對各種中藥材化學(xué)成分研究的過程中，人

們逐步提高了對植物多糖的關(guān)注。植物多糖研究比較深入的是茶多糖、菜籽多糖、南瓜多糖、苦瓜多糖、銀杏葉多糖、枸杞多糖等等，植物多糖在抗生素替代物及保健品領(lǐng)域已經(jīng)取得很好的應(yīng)用。多糖作為重要的生物活性物質(zhì)具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、降低糖脂、延緩衰老等活性，在醫(yī)療保健、食品、動物養(yǎng)殖等領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景

[4-7]。

1多糖的提取工藝

1.1 水提醇沉法

水提醇沉法是提取多糖最常用的一種方法。多糖是極性大分子化合物，提取時應(yīng)選擇水、醇等極性強(qiáng)的溶劑。用水作溶劑來提取多糖時，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提滲濾，然后將提取液濃縮后，在濃縮液中加乙醇，使其最

。到目前為止。己有

300余種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離出來，其中從中草藥、食藥用菌中提取的水溶性多糖最為重要。已發(fā)現(xiàn)有100多種中草藥、食藥用

終體積分?jǐn)?shù)達(dá)到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性質(zhì)，使多糖從提取液中沉淀出來，室溫靜置5 h，多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和得率均較高。影響多糖提取率的因素有：提取溫度、浸提料液比、提取時間以及提取次數(shù)等。為此，研究者對影響多糖提取工藝的這些因素進(jìn)行了大量研究。林娟[8]

等研究表明水提法提取甘薯多糖的優(yōu)化工藝條件為：提取溫度85℃，加水比1：7，提取時間2.5h，提取率為26．71％。劉永[9]

等研究表明：最佳提取條件為95℃，料液比1：20(g：mL)，提取時間2h，提取3次，茶葉多糖含量為35.92 mg/g。

水提醇沉法提取多糖不需特殊設(shè)備，生產(chǎn)工藝成本低，安全，適合工業(yè)化大生產(chǎn)，是一種可取的提取方法。但由于水的極性大，容易把蛋白質(zhì)、苷類等水溶性的成分浸提出來，從而使提取液存放時腐敗變質(zhì)，為后續(xù)的分離帶來困難，且該法提取比較耗時，提取率也不高[10]。

1.2酶法提取

酶技術(shù)是近年來廣泛應(yīng)用到有效成份提取中的一項(xiàng)生物技術(shù)，使用酶可降低提取條件，在比較溫和的條件下分解植物組織，加速有效成分的釋放或提取。此外，使用酶還可分解提取液中淀粉、果膠、蛋白質(zhì)等非目的產(chǎn)物。此法可使后續(xù)的濃縮和脫蛋白工藝更簡易、省時，粗多糖的純度更高。但會提高生產(chǎn)成本，對提取條件要求較高。楊云

[11]

等人采用的單酶法和復(fù)合酶法提取大棗多糖，單酶法提取多糖含量最高可達(dá)44.69％，而復(fù)合酶法多糖最高含量可達(dá)68.13％。1.3超聲波提取

超聲法是利用超聲波對細(xì)胞組織的破碎作用來提高多糖浸出率的，具有快速、安全、簡便、成本低、多糖提取率高，成分又不被破壞等優(yōu)點(diǎn)，但對提取設(shè)備要求較高。李進(jìn)偉

[12]

等通過響應(yīng)面

分析法考察超聲波功率、提取時間、提取溫度、料液比對棗多糖得率與純度的影響，得出棗多糖最佳的提取工藝條件為：超聲波功率86～96W，提取溫度45～53℃，提取時間20min，料液比1:20（g:ml），棗多糖得率7.63%，純度35.57%。與傳統(tǒng)的水浴浸提法相比，該方法不僅縮短了提取時間，且提高了棗多糖得率與純度。1.4微波提取

微波萃取是高頻電磁波穿透萃取媒質(zhì)，到達(dá)被萃取物料的內(nèi)部，能迅速轉(zhuǎn)化為熱能使細(xì)胞內(nèi)部溫度快速上升，細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁承受力，細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)有效成分流出，在較低的溫度下溶解于萃取媒質(zhì)，通過進(jìn)一步過濾和分離，獲得萃取物料。趙怡紅

[13]

等研究表明北冬蟲夏草

多糖微波提取最佳條件：微波功率550W、固液比l：30、提取時間30s、提取1次，多糖收率3.67％。劉青梅

[14]

等研究結(jié)果表明:對于紫菜多糖

提取微波提取優(yōu)于熱水提取,微波凍融提取效果最佳,提取率最高達(dá)7.45%,而熱水提取率為2.05%.影響微波浸提的主要因素為浸提時間,其次是微波功率和液固質(zhì)量比。優(yōu)選方案為微波功率200W、提取時間8 min、水與紫菜液固質(zhì)量比40:1。

1.5超臨界流體提取

超臨界流體提取法根據(jù)某些氣體在超臨界狀態(tài)下具有特殊的液相性質(zhì)，對一些組分有較好的溶解性，用來提取目的產(chǎn)物。一般采用CO2超臨界萃取多糖組分。朱俊玲

[15]

通過超臨界CO2流體

萃取處理蘆薈多糖，多糖得率為85.1％，是傳統(tǒng)方法的1.5倍。超臨界萃取的最佳工藝條件是乙醇用量為250 ml/100g蘆薈、萃取壓力為25 MPa、萃取溫度為35℃。1.6超濾法

超濾是一種膜分離技術(shù)。該技術(shù)應(yīng)用于多糖的提取，具有不損害活性、分離效率高、能耗低、設(shè)備簡單、可連續(xù)生產(chǎn)、無污染等優(yōu)點(diǎn)[16]。

1.7酸提法

有些多糖適合用稀酸提取，并且能夠得到更高的提取率。如趙宇等

[17]

對海蒿子多糖的提取方

法研究發(fā)現(xiàn)，從多糖提取得率來看，酸提法優(yōu)于傳統(tǒng)的水提法。不過此方法只在一些特定的植物多糖提取中占優(yōu)勢，目前報道的并不多。不過在操作上還是應(yīng)該嚴(yán)格控制酸度，因?yàn)樵谒嵝詶l件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂。1.8堿提法

與酸提法類似，有些多糖在堿液中有更高的提取率，尤其是含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。不過，也應(yīng)控制堿的濃度，因?yàn)橛行┒嗵窃趬A性較強(qiáng)時也會發(fā)生水解。

2多糖純化方法

2.1除蛋白

根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等有機(jī)溶劑中變性的特點(diǎn)，用V（氯仿）∶V（戊醇或正丁醇）為5∶1 或4∶1，混合物劇烈振搖20～30 min，蛋白質(zhì)變性生成凝膠，離心分離，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)。此種只能除去少量蛋白質(zhì)，效

率不高，須反復(fù)多次，多糖有損失。但此方法比較溫和，在避免多糖降解上效果較好，如配合加入一些蛋白質(zhì)水解酶，用Sevage 法效果更佳。李婉婷

[18]

研究結(jié)果表明木瓜蛋白酶-Sevage法除

去款冬花多糖中的蛋白最為理想，該法的最佳工藝條件為：木瓜蛋白酶的酶底比為l％，pH值7.0，先在50℃水浴中酶解2h，再經(jīng)Sevage法脫蛋白3次，其蛋白脫除率為88.95％，多糖保留率為92.63％。2.2透析法

透析法是利用一定孔目的膜，使無機(jī)鹽或小分子糖透過，而將大分子的多糖截留下來從而達(dá)到純化多糖的目的。此法的關(guān)鍵是要選擇孔目合適的透析膜。纖維膜孔徑為2～3nm，可使單糖分子通過，分離效果較好，透析時常需要多次換水，溶液的pH值維持在6.0～6.5范圍內(nèi)。2.3凝膠柱層析法

凝膠柱層析法主要是根據(jù)多糖分子的大小和形狀不同而達(dá)到分離目的。但溶液流經(jīng)多孔性凝膠柱時，小分子已擴(kuò)散人孔中，各溶質(zhì)依分子量大小順序依次流出。此方法快速、簡單、條件溫和。常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sephamse)，以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑。此法還可進(jìn)行多糖相對分子量的測定。王赫

[19]

采用Sephadex G-100凝膠色譜柱

分離純化，從龍膽水溶性多糖中分離純化得到2 種不同的均一多糖組分TP-

1、TP-2。2.4纖維素住層析法

纖維素陰離子交換劑柱層析對多糖的分離是利用pH 6時，酸性多糖能吸附于交換劑上，中性多糖不吸附，用pH相同離子強(qiáng)度不同的緩沖液將酸性強(qiáng)弱不同的酸性多糖分別洗脫出來。常用的陰離子交換纖維素有DEAE-纖維素和ECTEOLA纖維素。張?zhí)m杰

[20]

等就采用DEAE-纖維素柱分離

北五味子多糖，分別得到了白色結(jié)晶和黃色粉末兩種多糖產(chǎn)物。

3多糖的分析

3.1含量的測定

測定方法：硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、比色定量法、分光光度法、紙色譜法、離子交換色譜法、yaphe [21]

法、薄層色譜法、酶法、原子吸

收法

[22]、HPLC法、凝膠電泳法、親和電泳法連、續(xù)流動分析法檢測法

[23]、次亞碘酸鹽定量法、蒽

酮-硫酸法（總糖）、DNS法

[24]

（還原法）、磷鉬

比色法、鄰鉀苯胺比色法等。每種方法只對某些多糖的測量效果好。比色法分光光度法離子交換色譜法酶法和電泳法等可同時用于多糖的定性定量分析。3.2純度鑒定

多糖是高分子化合物，其純品微觀上是不均一的，通常所說的多糖純品實(shí)質(zhì)上是一定分子量范圍的均一組分。多糖純度鑒定的常用方法：超離心、高壓電泳、凝膠層析、HPLC法等。現(xiàn)在應(yīng)用較多的是HPLC法，旋光度測定[25]

也是純度

測定的一種方法。3.3分子量的測定

多糖分子量的測定是研究多糖性質(zhì)的一項(xiàng)重要工作常用方法：滲透壓法、蒸氣壓滲透劑法、端基法、粘度法、光散射法、凝膠色譜法、超過率法、沉淀法、凝膠電泳法、HPLC法、超離心分析法、分子篩色譜法、GPC法

[26]。

4多糖的鑒定

4.1 多糖一級結(jié)構(gòu)測定

多糖的一級結(jié)構(gòu)分析，主要是分析組成多糖的單糖類型、數(shù)目連接方式及苷建構(gòu)型。常用化學(xué)法和儀器分析法。多糖組分與分子比例測定法：部分酸解法、完全酶解法、色譜法；吡喃、呋喃環(huán)形式結(jié)構(gòu)的分析：紅外光譜；連接次序：選擇性光譜法、糖苷鍵順序水解、核磁共振； α-β-異頭異構(gòu)體：糖苷酶水解核磁共振；羥基被取代情況：甲基化反應(yīng)、氣相色譜、過碘酸氧化、Smith降解法和測硫酸基法（terho法）、核磁共振、質(zhì)譜法；糖鏈、肽鏈連接方式：單糖與氨基酸組成、稀堿水解法、肼解反應(yīng)；多糖結(jié)構(gòu)的分析方法很多，迄今沒有一種方法可以單獨(dú)完成多糖結(jié)構(gòu)的分析。儀器分析與化學(xué)方法相結(jié)合是常用的多糖結(jié)構(gòu)測定方法。4.2多糖高級結(jié)構(gòu)測定

目前研究多糖的二級結(jié)構(gòu)常用的手段是NMR技術(shù)，如2D-NMR，13C譜，通用的方法是將現(xiàn)代NMR技術(shù)與理論計(jì)算相結(jié)合通過一定的理論計(jì)算篩選構(gòu)象，主要的理論計(jì)算方法有從頭計(jì)算、豐度經(jīng)驗(yàn)計(jì)算及經(jīng)驗(yàn)力場計(jì)算

[27]

。圓二色

譜法（CD）也可用于糖的構(gòu)象分析,張麗萍等

[28]

應(yīng)用譜測定了金頂側(cè)耳多鍺的水溶液構(gòu)象近年來，以精確三維結(jié)構(gòu)知識為基礎(chǔ)揭示重要生命活

動的規(guī)律已達(dá)到前所未有的深度和廣度[29]，多糖

作為一類重要的生物活性大分子其結(jié)構(gòu)的研究勢

必推動對多糖的認(rèn)識向深層次發(fā)展。多糖的應(yīng)用展望

我國對多糖的研究起步較晚，但近年來的工作取得了較大的進(jìn)展，愈來愈多的多糖被發(fā)現(xiàn)并證實(shí)它們具有復(fù)雜廣泛的生物活性和功能。隨著對多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性機(jī)理，功效因子會更加明確，它的應(yīng)用領(lǐng)域也將會更加拓寬。然而，由于多糖本身結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，種類繁多，其結(jié)構(gòu)測定和分離純化有很大的難度；有些多糖在天然植物中的含量低且不易分離及多糖的藥理作用與諸多因素有關(guān)，給多糖的研究和應(yīng)用帶來許多的挑戰(zhàn)，這需要相關(guān)行業(yè)的人士共同應(yīng)對。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Benzie, I., and Strain, J.The Ferric Reducing Ability ofPlasma(FRAP)as a Measure of Antioxidant Power.AnalyticalBiochemistry.1996.239:70–76.[2] Wang, C., Sun, Z.Earthworm polysaccharide and its antibacterialfunction on plant-pathogen microbes in vitro.European Journal of

Soil Biology.2007.43:S135-S142.[3] Zhang, Z., et al.(2011).Isolation and antioxidant activities ofpolysaccharides extracted from the shoots of Phyllostachys edulis

(Carr.).Int.J.Biol.Macromol.49(4): 454-457.[4] Li, R., et al.(2009).Extraction, characterization of Astragaluspolysaccharides and its immune modulating activities in rats withgastric cancer.Carbohydrate Polymers 78(4): 738-742.[5] Li, S.-g., et al.(2008).Characterization and anti-tumoractivity of a polysaccharide from Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.Carbohydrate Polymers 73(2): 344-350.[6] Mazumder, et al.(2002).Isolation, chemical investigation and antiviralactivity of polysaccharides from Gracilaria corticata(Gracilariaceae,Rhodophyta).Int.J.Biol.Macromol.31(2002)87-95

[7] Chen, X., et al.(2011).Extraction, purification, characterization andhypoglycemic activity of a polysaccharide isolated from the root ofOphiopogon japonicus.Carbohydrate Polymers 83(2): 749-754.[8] 林娟, 邱宏瑞, 林霄,等.甘薯多糖的提取純化及成分分析[J].中國糧油學(xué)報, 2003, 18(2): 64-66.[9] 劉永, 成戰(zhàn)勝.茶葉多糖的提取純化及其單糖組分的鑒定[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 2005, 31(6): 134-136.[10] 徐翠蓮, 杜林洳, 樊素芳,等.多糖的提取分離純化及分析鑒定方法

研究[J].河南科學(xué), 2009., 27(12): 1524-1529.[11] 楊云.酶法提取大棗多糖的研究[J].食品科學(xué), 2003,10(24): 93-95.[12] 李偉進(jìn), 丁霄麟.超聲波提取金絲小棗多糖的工藝研究[J].林產(chǎn)化

學(xué)與工業(yè), 2006, 26(3): 73-76.[13] 趙怡紅, 邱玉華.微波法與傳統(tǒng)工藝提取北冬蟲夏草多糖的比較研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技, 2009(3): 68-69.[14] 劉青梅, 楊性民, 鄧紅霞.采用微波技術(shù)提取紫菜多糖的工藝研究[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報, 2005, 21(2): 153-156.[15] 朱俊玲.超臨界流體萃取蘆薈多糖的研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2011(7):67-68.[16] Hanju Sun，Ding Qi，Jiaoyun Xu.Fractionation of polysaccharides

from rapeseed by ultrafiltration: Effect of molecular pore size and operation conditions on the membrane performance.Separation and Purification Technology, 2011,80:670-676.[17] 趙宇, 李志富, 任少紅, 等.海蒿子多糖的提取方法研究[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2004, 25(5): 429-430.[18] 李婉婷.款冬花多糖提取及分離純化研究[D].西安: 西北大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2010.[19] 王赫.龍膽多糖的提取純化及其組成糖分析[J].中國醫(yī)藥指南，2011, 9(21): 250-251.[20] 張?zhí)m杰, 張維華, 趙珊紅.北五味子果實(shí)中多糖的提取純與化研究

[J].鞍山師范學(xué)院學(xué)報, 2002, 4(1): 94-96.[21] 李 鋒, 唐鳳翔, 林海英, 等.耳突麒麟菜多糖的提取分離及表征

[J].福州大學(xué)學(xué)報, 2003, 31(1): 106-110.[22] 武 云, 張 馳.富硒黑木耳中硒多糖提取分離工藝的優(yōu)化[J].湖北

農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 46(5): 821-823.[23] 沈光林, 孔浩輝, 張心穎, 等.流動注射分析儀在煙草分析中的應(yīng)

用[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊, 2000, 36(11): 490-492.[24]

劉 強(qiáng), 石麗花, 尹利端, 等.松花粉多糖提取檢測方法研究進(jìn)展

[J].農(nóng)產(chǎn)品資源, 2007, 35(24): 45-48.[25] 聶凌鴻, 寧正祥.廣東淮山水溶性多糖的分離純化及體外抗氧化活

性的研究

[J].食品科學(xué), 2003, 24(11): 129-133.[26] 劉 榮, 孫 芳, 陳秀麗, 等.松仁多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)的初步分析[J].林

產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 2008, 28(4): 115-117.[27] 來魯華, 楊顯婷.寡糖的構(gòu)象分析[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1992, 22(4): 290-294.[28] Reinhold V N, Reinhold B B, Costello C E.Carbohydrate

molecular weigh profiling:sequence, linkage, and brunching

data:Es-CID [J].Anal Chem, 2005，67(1), 1772-1784.[29] Mock K K, Davey M, Cottrell J S.The analysisifunderivatized oligosacchridesby matrix ssisted laser deaorption mass

spectrometry[J].Biochem Biophys Res Comm, 2011, 177(2):

644-651.

第四篇：論文單細(xì)胞蛋白的提取方法及發(fā)展方向研究

------------------------學(xué) 院 畢 業(yè) 論 文

學(xué) 院（系）：

專

業(yè)：

學(xué) 生 姓 名：

學(xué)

號：

指 導(dǎo) 教 師：

評 閱 教 師：

完 成 日 期：

e

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【摘 要】本文簡單概述了單細(xì)胞蛋白，及單細(xì)胞蛋白在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、飼料等方面的應(yīng)用；闡明了單細(xì)胞蛋白的開發(fā)和生產(chǎn)前景

【關(guān)鍵詞】 單細(xì)胞蛋白 安全性 提取制備工藝 應(yīng)用 發(fā)展前景

目 錄

引言: 單細(xì)胞蛋白的營養(yǎng)價值極高，氨基酸的組成較為齊全，含有人體必需的8種氨基酸，而且生產(chǎn)效率高，生產(chǎn)原料來源廣，可以工業(yè)化生產(chǎn)，它不僅需要的勞動力少，不受地區(qū)、季節(jié)和氣候的限制，而且產(chǎn)量高，質(zhì)量好。所生產(chǎn)的蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)含量高，對人體無致病作用，味道好并且易消化吸收，對培養(yǎng)條件要求簡單，生長繁殖迅速等。單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)過程也比較簡單，目前有多種提取工藝。單細(xì)胞蛋白不僅能制成“人造肉”，供人們直接食用，還常作為食品添加劑，用以補(bǔ)充蛋白質(zhì)或維生素、礦物質(zhì)等。單細(xì)胞蛋白既可變廢為寶，又可獲得高層次的綜合經(jīng)濟(jì)效益，解決環(huán)境污染問題。單細(xì)胞蛋白作為飼料蛋白，已被世界廣泛應(yīng)用。作為一種新型食品原料的問世，單細(xì)胞蛋白單細(xì)胞蛋白液受到都可接受性、安全性等問題。因?yàn)閱渭?xì)胞蛋白的核酸含量在4%～18%，食用過多的核酸可能會引起痛風(fēng)等疾病。此外，單細(xì)胞蛋白作為一種食物，人們在習(xí)慣和心理上一時也難以接受。因此 1

研究單細(xì)胞蛋白的提取方法及發(fā)展方向是一個必要的問題。

內(nèi)容：

《單細(xì)胞蛋白的提取方法及發(fā)展方向研究》

單細(xì)胞蛋白的概述

單細(xì)胞蛋白：英文名Single-Cell-Protein，簡稱SCP。是從人工培養(yǎng)的單細(xì)胞生物中獲得的菌體蛋白質(zhì)，又叫微生物蛋白，菌體蛋白。作為一種生物化工高新技術(shù)產(chǎn)品單細(xì)胞蛋白是由許多工農(nóng)業(yè)廢料及石油廢料微生物菌體。因而，單細(xì)胞蛋白不是一種純蛋白質(zhì)，而是由蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白質(zhì)的含氮化合物、維生素和無機(jī)化合物等混合物組成的細(xì)胞質(zhì)團(tuán)。單細(xì)胞蛋白的特點(diǎn)：

第一，營養(yǎng)物質(zhì)極為豐富。其中，蛋白質(zhì)含量高達(dá)

40%～80%，（而作物中蛋白質(zhì)含量最高的大豆僅達(dá)35％~45％），比大豆高10%～20%，比肉、魚、奶酪高20%以上；從氨基酸的組成來看，單細(xì)胞蛋白中除含硫氨基酸不足外，其他氨基酸含量充足并保持良好的平衡。同時還含有多種維生素、碳水化合物、脂類、礦物質(zhì)，以及豐富的酶類和生物活性物質(zhì)，如輔酶A、輔酶Q、谷胱甘肽、麥角固醇等。

第二，原料來源廣泛，可就地取材，廉價大量地解決原料問題。一般有以下幾類：1.碳水化合物。2.烴類、石油、天然氣及相關(guān)產(chǎn)品，如原油、柴油、甲烷、乙醇等；3.無機(jī)氣體4.有機(jī)工農(nóng)業(yè)廢水（①農(nóng)業(yè)廢物、廢水，如秸稈、蔗渣、甜菜渣、木屑等含纖維素的廢料及農(nóng)林產(chǎn)品的加工廢水；②工業(yè)廢物、廢水，如食品、發(fā)酵工業(yè)中排出的含糖有機(jī)廢水、亞硫酸紙漿廢液等；）

第三，單細(xì)胞蛋白質(zhì)生產(chǎn)周期短，效率高。如酵母菌在良好條件下每接種100千克，1天即可獲得2500千克酵母，其生長繁殖速度約為大豆的1300倍，為動物生長的2000倍。微生物的生長速度世代周轉(zhuǎn)迅速因此生產(chǎn)效率高。

第四，節(jié)約土地，可以完全工業(yè)化生產(chǎn)。生產(chǎn)不受季節(jié)氣候的制約，易于人工控制，同時由于在大型發(fā)酵罐中立體式培養(yǎng)占地面積少。單細(xì)胞蛋白生產(chǎn)比農(nóng)業(yè)生產(chǎn)需要的勞動力少，又不受地區(qū)、季節(jié)和氣候條件的制約，可在占地有限的小設(shè)備上進(jìn)行，不僅數(shù)量大，而且質(zhì)量好，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過現(xiàn)有糧食品種的蛋白質(zhì)。

第五，單細(xì)胞生物易誘變，比動、植物品種容易改良，因此可采用物理、化學(xué)、生物學(xué)方法定向誘變育種，獲得蛋白質(zhì)含量高、質(zhì)量好、味美，并易于提取蛋白質(zhì)的優(yōu)良菌種。

第六，核酸含量高，細(xì)菌細(xì)胞中核酸含10%-18%。酵母（干基）6%-11%,肉只有2%。核酸過多會抑制動物的生長，若攝入過多的核酸，會造成血液中含酸量上升，大多數(shù)動物和人代謝利用核酸的能力有限，可導(dǎo)致體內(nèi)尿酸積存。由于尿酸在生理的PH條件下是微溶的，它會在關(guān)節(jié)沉淀或析出結(jié)晶，造成痛風(fēng)或風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；又由于在尿中含量大于其溶解度，會在泌尿系統(tǒng)中沉淀成結(jié)石。單細(xì)胞蛋白的安全性： 核酸問題：

核酸的組成成分嘌呤堿基，在動物體內(nèi)會轉(zhuǎn)變成尿酸，尿酸在無脊椎動物、魚類、兩棲類和許多哺乳動物體內(nèi)會在尿酸酶的作用下繼續(xù)轉(zhuǎn)變成水溶性更大的尿囊素，因此飼料中即使有很高含量的嘌呤存在不會造成危害。人體內(nèi)尿酸酶含量很低，嘌呤基本分解代謝物為低溶解度的尿酸攝入過多的嘌呤化合物則會使血漿和尿液中尿酸含量過高從而導(dǎo)致它在關(guān)節(jié)與軟組織中積累和形成尿路結(jié)石。另外，細(xì)胞中有難于消化的類脂——細(xì)胞膜，影響蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。因此在使用時要限量使用。所以作為人類食品的SCP其攝入量必須加以控制。成年人每日攝入核酸量不得超過2g，食用的SCP也必須是除核酸產(chǎn)品。

食品安全對SCP的影響：

SCP作為飼料蛋白已被廣泛的應(yīng)用，但作為人類食品聯(lián)合國蛋白質(zhì)咨詢組織對SCP的安全性評價做出了一系列的規(guī)定：生產(chǎn)菌株不是病原菌，不產(chǎn)生毒素；石油原料中多環(huán)芳香族烴含量低，農(nóng)產(chǎn)品原料中重金屬與農(nóng)藥的殘留量不能超過標(biāo)準(zhǔn)；培養(yǎng)及產(chǎn)品處理過程中無污染，無溶劑殘留；產(chǎn)品中應(yīng)無病原菌、無活細(xì)胞、無原料和溶劑殘留；產(chǎn)品必須進(jìn)行小白鼠和大白鼠的毒性試驗(yàn)和兩年的致癌實(shí)驗(yàn)，還要進(jìn)行傳代遺傳、哺乳、致畸及變異應(yīng)實(shí)驗(yàn)。這些試驗(yàn)通過后，還要安排

作人的臨床試驗(yàn)，測定scp對人的可接受性和耐受性。可用于食品的scp生產(chǎn)的酵母菌主要有釀酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母和乳清酵母(脆壁克魯維酵母）等。

單細(xì)胞蛋白的提取方法：

單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)要求：生產(chǎn)菌種繁殖速度快，菌體收量大；原料價格低，易得到或利用工農(nóng)業(yè)廢料；菌種營養(yǎng)要求底，培養(yǎng)方法簡單；發(fā)酵時不易污染雜菌，分離回收容易；菌體蛋白含量高，氨基酸組成好，適口性好；菌體及蛋白無毒性、病原性及致癌性；不產(chǎn)生廢水及其他污染；易于包裝運(yùn)輸和儲藏。

單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)步驟包括原料處理、發(fā)酵基質(zhì)的調(diào)配、發(fā)酵條件的控制、菌體回收及分離、純化等幾個環(huán)節(jié)。發(fā)酵過程中溫度的控制、氧的供應(yīng)及熱量的排放是生產(chǎn)中要注意的問題。飼用單細(xì)胞蛋白生產(chǎn)可采用固體發(fā)酵，使用單細(xì)胞蛋白生產(chǎn)采用液體發(fā)酵工藝，發(fā)酵結(jié)束后，收獲的方法有離心分離和壓濾法。菌體收獲后必須洗滌數(shù)次，以盡量將培養(yǎng)基洗掉。藻類的培養(yǎng)則是在池內(nèi)進(jìn)行，并需要足夠的光照，培養(yǎng)過程要經(jīng)常攪拌以補(bǔ)充表面養(yǎng)分。單細(xì)胞蛋白的一般工藝流程：

通氣 原料 —— 上清液

↓ ↓ ↑

菌種→種子擴(kuò)大 →發(fā)酵罐培養(yǎng) →培養(yǎng)液 → 分離 →菌體

↓ 動物飼料←干燥←洗滌或分解← ↓

↓

食品←干燥←純化←蛋白質(zhì)抽取←分離←水解

近幾年主要的單細(xì)胞蛋白提取制備工藝技術(shù)及應(yīng)用有：（1）菌糠單細(xì)胞蛋白飼料生產(chǎn)方法

（2）單細(xì)胞蛋白質(zhì)作為魚類和貝類飼料的用途（3）利用皂素生產(chǎn)廢水發(fā)酵生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的方法（4）單細(xì)胞蛋白材料的用途（5）一種單細(xì)胞蛋白飼料的生產(chǎn)方法

（6）僅微溶于水或不溶于水的活性物質(zhì)和單細(xì)胞蛋白質(zhì)材料的混合 物的水分散體

（7）利用柑桔廢渣生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白(SCP)飼料的方法（8）利用提取甾體皂甙元的殘?jiān)a(chǎn)單細(xì)胞蛋白的方法（9）一種單細(xì)胞蛋白質(zhì)飼料及其加工工藝

（10）冷法絮凝提取味精廢液中單細(xì)胞蛋白質(zhì)的方法（11）單細(xì)胞蛋白和蔗糖的生產(chǎn)方法

（12）利用抗氨固氮菌生產(chǎn)富硒單細(xì)胞蛋白,維生素E和菌肥的方法（13）固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白（14）一種單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)方法（15）生產(chǎn)甜菜渣單細(xì)胞蛋白的新方法（16）利用啤酒廢渣生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白（17）粗淀粉一步法生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白技術(shù)

（18）固態(tài)法單細(xì)胞蛋白(SCP)塔式發(fā)酵機(jī)（19）糟渣原料生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料技術(shù)（20）一種利用濃醪酒糟生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的方法（21）一種利用海洋酵母菌生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的工藝（22）利用廢糖蜜生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料的方法

（23）用大豆乳清廢水生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的復(fù)配酵母的制備方法（24）柑橘皮渣單細(xì)胞蛋白飼料生產(chǎn)技術(shù)

單細(xì)胞蛋白的應(yīng)用：

一、SCP 在飼料中的應(yīng)用

單細(xì)胞蛋白含有蛋白質(zhì)、碳水化合物、無機(jī)鹽、維生素等，其豐富的營養(yǎng)，可作為飼料的蛋白源，配制飼料可代替部分魚粉。例如用假絲酵母及產(chǎn)朊酵母作為菌種，利用亞硫酸廢液或石油生產(chǎn)酵母菌體，可用于牲畜飼料。用它喂養(yǎng)家禽、家畜，效果好、生長快，奶牛產(chǎn)奶多，雞產(chǎn)蛋率增高，并能增強(qiáng)機(jī)體免疫力。據(jù)分析，酵母單細(xì)胞蛋白中蛋白質(zhì)含量為45％－55％，比大豆高30％以上；細(xì)菌的單細(xì)胞蛋白中蛋白質(zhì)的含量高達(dá)70％，比大豆高50％，比魚粉高20％。因此，在各類飼料中加入單細(xì)胞蛋白添加劑，可以取得諸如使豬長得更快、牛產(chǎn)奶更多這樣的效果。

二、SCP在食品加工中的應(yīng)用：

SCP在食品加工中也有著重要作用，（1）可以增加谷類產(chǎn)品的營養(yǎng)價值。選用高賴氨酸含量的單細(xì)胞蛋白加到面包等谷物食品中可提高植物蛋白的生物價，也可提高谷物食品中的維生素。（2）它能

提高食品的物理性能，例如：經(jīng)組織化處理的濃縮蛋白具有理想的咀嚼性、松脆性、在水中無分散性。把活性干酵母加入意大利烘餅中可提高其延薄性能，把食用酵母以1%～3%的比例加入肉制品中可提高肉與水及脂肪的結(jié)合能力。（3）它還能提高食品的風(fēng)味，例如：酵母的濃縮蛋白質(zhì)具有顯著的鮮味，已被廣泛作為飼料、肉汁等食品的增香劑。酵母質(zhì)壁分離物可作為烘烤食品的增香劑。

三、SCP的其他應(yīng)用：

由于SCP中維生素、礦物質(zhì)含量豐富，因此常用于補(bǔ)充許多食物所需全部或部分的維生素和礦物質(zhì)。以酵母菌和假絲酵母菌生產(chǎn)的SCP，可直接用作人的食品。從酵母菌體重可提取輔酶A、細(xì)胞色素C及維生素等藥物，此外，SCP還可用于合成現(xiàn)穩(wěn)和粘合劑。

單細(xì)胞蛋白的發(fā)展前景：

食品安全對單細(xì)胞蛋白生產(chǎn)的影響：

全世界對食品安全的重視也限制了SCP的發(fā)展。食品安全不僅表現(xiàn)在人的直接食品對飼料的原料的安全性也提出了要求。傳統(tǒng)的以石油化工為原料為主要碳源（烴類、甲醇、乙醇、乙酸等）的SCP生產(chǎn)既有安全問題又受到石油短缺的影響。廢棄物為原料的SCP粗放生產(chǎn)方式生產(chǎn)也存在著化學(xué)和有害物質(zhì)的污染問題。原料的問世，都會產(chǎn)生可接受性、安全性等問題。單細(xì)胞蛋白也不例外。此外，單細(xì)胞蛋白作為一種食物，人們在習(xí)慣上一時也難以接受。但經(jīng)過微生物學(xué)家的努力，這些問題會得到圓滿解決。

單細(xì)胞蛋白的發(fā)展前景：

中國作為一個人口大國，人口眾多不僅糧食趨于緊張，食物結(jié)構(gòu)以植物蛋白為主，動物蛋白的攝入量與歐美各國相差懸殊，而且人民的食品結(jié)構(gòu)中存在著嚴(yán)重的蛋白質(zhì)供應(yīng)不足。而世紀(jì)生物科技革命的主戰(zhàn)場在大農(nóng)業(yè)。開展新農(nóng)業(yè)科技革命，應(yīng)以生物工程為中心，改革傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)，創(chuàng)建新型農(nóng)業(yè)。微生物新型農(nóng)業(yè)的開發(fā)是生物工程技術(shù)推動農(nóng)業(yè)發(fā)展的主要體現(xiàn)。發(fā)展微生物新型農(nóng)業(yè)，由植物、動物資源為主組成的“二維結(jié)構(gòu)”傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)，調(diào)整為植物種植業(yè)、動物養(yǎng)殖業(yè)和微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化業(yè)的“三維結(jié)構(gòu)”的新農(nóng)業(yè)，這是一個產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)健全、資源節(jié)約型農(nóng)業(yè)；此外，白色農(nóng)業(yè)是節(jié)土、節(jié)水型農(nóng)業(yè)，能緩解傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)“與人爭地”、“與人爭水”日益尖銳的矛盾。

微生物單細(xì)胞蛋白也更適合我國的國情，一但進(jìn)入大規(guī)模的商品化生產(chǎn)，必將對緩解蛋白飼料緊張、促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展、增強(qiáng)人民的體質(zhì)發(fā)揮重要的作用，因此發(fā)展單細(xì)胞蛋白產(chǎn)業(yè)具有廣闊開發(fā)前景。

我們每年有數(shù)千萬噸的稻殼、棉籽殼、玉米芯等農(nóng)業(yè)廢棄物可以用來作為單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)原料。據(jù)有人測算，僅僅利用這些廢棄物的２０％，就可形成年產(chǎn)１００萬噸單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)能力，在工業(yè)生產(chǎn)的廢渣廢水中含有糖類和其他營養(yǎng)物質(zhì)，從工廠排放后極易發(fā)生腐敗，嚴(yán)重污染環(huán)境。利用這些廢棄資源生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白不僅可降低水的生物需氧量和化學(xué)需氧量，從而減輕環(huán)境污染。既可變廢為寶，又可獲得高層次的綜合經(jīng)濟(jì)效益，解決環(huán)境污染問題。單細(xì)胞蛋白作

為飼料蛋白，已被世界廣泛應(yīng)用。許多國家單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)已具有+很大的規(guī)模，取得了豐碩成果。德國、美國、前蘇聯(lián)、加拿大等國早已用單細(xì)胞高活性生物飼料代替了魚粉。

SCP單細(xì)胞蛋白的開發(fā)與生產(chǎn)一方面，微生物蛋白食品的開發(fā)可以緩解耕地減少、糧食緊缺的矛盾，另一方面，高蛋白的微生物蛋白食品的開發(fā)，也有利于改善人們的食品結(jié)構(gòu)，滿足我們既要吃飽、又要吃好的要求。不僅為解決人類食品和飼料問題開辟了新的途徑，并且單細(xì)胞蛋白質(zhì)研究發(fā)展的實(shí)驗(yàn)要比研究農(nóng)作物或家畜的實(shí)驗(yàn)易于進(jìn)行，而且在極短的時間內(nèi)就可得到有價值的數(shù)據(jù)與結(jié)果，而人類自身也會直接從單細(xì)胞工業(yè)的發(fā)展中享受到巨大的利益。

一座占地不多，年產(chǎn)10萬t單細(xì)胞蛋白的微生物工廠，能相當(dāng)于11.9988×104 hm2耕地生產(chǎn)的大豆蛋白質(zhì)，或是19.998×106 hm2原飼養(yǎng)牛羊生產(chǎn)的動物蛋白質(zhì)。發(fā)展白色農(nóng)業(yè)，可實(shí)現(xiàn)“人畜分糧”的目標(biāo)，能極大地緩解糧食緊缺問題，白色農(nóng)業(yè)的微生物飼料為畜牧業(yè)的發(fā)展提供保障。我國現(xiàn)有秸稈6億多t，若其中2億t秸稈通過微生物發(fā)酵工程轉(zhuǎn)化為飼料，則可得到800億kg飼料糧，約為目前我國年用飼料糧的1/2，真正實(shí)現(xiàn)“人畜分糧”。通過引進(jìn)新物種，開發(fā)挖掘潛在生態(tài)位，增加多功能循環(huán)鏈，提高系統(tǒng)綜合生產(chǎn)力。微生物肥料、食用菌和沼氣菌的引入，填補(bǔ)了農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中的一些潛在生態(tài)位；微生物肥料和微生物農(nóng)藥的應(yīng)用，可以減少能源、資源消耗，減輕環(huán)境污染，實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)動植安全生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境保護(hù)；食用菌及沼氣菌的引入食物鏈后具有多種功能，如可實(shí)現(xiàn)食品、飼料、燃料

和肥料的協(xié)調(diào)生產(chǎn)和利用，大大提高了有機(jī)廢棄物的利用效率；微生物生態(tài)環(huán)保護(hù)劑可清除空氣中韻有毒氣體、水和土壤中的有害重金屬及有害化學(xué)物質(zhì)，是世界上正在發(fā)展的一項(xiàng)環(huán)保新產(chǎn)業(yè)。新型微生物農(nóng)業(yè)的崛起，標(biāo)志著我國新的農(nóng)業(yè)科技革命的到來，它符合生態(tài)大農(nóng)業(yè)的發(fā)展要求，必將使我國的農(nóng)業(yè)發(fā)展走上一條高效和可持續(xù)發(fā)展之路。單細(xì)胞蛋白作為當(dāng)前比較尖端的科技產(chǎn)品，還處于剛剛起步階段，尤其在我國還不成熟，其發(fā)展前景是廣闊的

參考文獻(xiàn)：

⑴王爾冒 主編 食品營養(yǎng)與衛(wèi)生 科學(xué)出版社出版，2004 ⑵周家春 食品行業(yè)新技術(shù) 化學(xué)工業(yè)出版社，2005 ⑶郭雪山，肖玫 單細(xì)胞蛋白的應(yīng)用及其開發(fā)前景 中國食物與營養(yǎng) 2006，5，5 ⑷錢愛東 食品微生物學(xué) 中國農(nóng)業(yè)出版社 2008，2、⑸魏瑤.單細(xì)胞蛋白[J] 四川糧油科技 2003，4

致謝詞

美好的大學(xué)生活，伴著這篇論文的最后一個字結(jié)束。三年的時光，學(xué)習(xí)充盈了我知識的寶箱，生活豐盈了我稚嫩的羽翼，讓我不斷地成長。

這篇論文是我學(xué)習(xí)成果、無數(shù)教誨、關(guān)愛和幫助的結(jié)晶。很慶幸這些年來我遇到了許多恩師益友。感恩之情難以用語言量度，謹(jǐn)以最樸實(shí)的話語致以最崇高的敬意。

首先，我要感謝我的指導(dǎo)教師冷妍老師。不僅在論文的完成上給予我指導(dǎo)，還在三年的學(xué)習(xí)上、生活上還是工作上都給予了我無私的幫助和熱心的照顧，讓我在諸多方面都有所成長。其次，感謝我的專業(yè)課老師，你們傳授給我的知識讓

我在食品檢測和營養(yǎng)學(xué)的理論和實(shí)踐中不斷地前進(jìn)，是我成長的源泉，也是完成本論文的基礎(chǔ)。同時，我要感謝遼陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院所有教過我的老師，是他們傳授給我方方面面的知識，拓寬了我的知識面，培養(yǎng)了我的功底。還要感謝我的各位朋友、同學(xué)、室友等能和相遇、相交、相知是人生的一大幸事。

最后，感謝我的家人，他們是我生命中永遠(yuǎn)的依靠和支持，他們無微不至的關(guān)懷，是我前進(jìn)的動力；他們的殷殷希望，激發(fā)我不斷前行。沒有他們就沒有我，我的點(diǎn)滴成就都來自他們。

 本論文的完成遠(yuǎn)非終點(diǎn)，文中的不足和淺顯之處則是我新的征程上一個個新的起點(diǎn)。我將繼續(xù)前行！

第五篇：木本植物基因組DNA提取方法的對比研究開題報告

1.選題依據(jù)

1.1 論文題目及研究領(lǐng)域

1.1.1 論文題目: 木本植物基因組ＤＮＡ提取方法的對比研究 1.1.2 研究領(lǐng)域: 木本植物DNA的提取研究 1.2 論文研究的理論意義和應(yīng)用價值

DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學(xué)研究的主要對象,因此DNA的提取也應(yīng)是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本談不上進(jìn)行分子生物學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)。植物DNA的提取和純化是植物基因工程研究的基礎(chǔ)操作，實(shí)施分子標(biāo)記，基因文庫的構(gòu)建，基因分離及遺傳轉(zhuǎn)化和鑒定等都是以提取DNA為前提。如何簡捷高效地提取到純凈、合格的DNA分子，一直是植物生物學(xué)者關(guān)注的問題。

隨著DNA分子標(biāo)記技術(shù)和重組DNA技術(shù)的發(fā)展，制備完整、純度較高的基因組DNA日益顯得重要。我們在進(jìn)行木本植物DNA水平遺傳多樣性研究時，首先遇到的問題是如何快速獲得較完整、純度較高的基因組DNA。由于植物細(xì)胞與動物細(xì)胞不同，具有一層堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，且含有較多的多糖、色素、脂質(zhì)和多酚等物質(zhì)，給植物DNA提取帶來很多困難，特別是多糖和多酚類物質(zhì)不易與DNA分開。相對于草本植物，多年生木本植物的次生代謝類物質(zhì)含量更高，高質(zhì)量的DNA提取難度更大[1]。

大多數(shù)植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白質(zhì)、多糖、單寧和色素等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)有時很難從DNA中除去，大多數(shù)蛋白質(zhì)可通過酚-氯仿-異戊醇處理后變性、沉淀除去，絕大部分RNA可通過經(jīng)RNase 處理后除去。但大多數(shù)木本植物富含多糖、多酚類物質(zhì)，DNA常受到嚴(yán)重的多酚污染，造成DNA沉淀物難以溶解或溶液色深；多糖污染直接影響基因組DNA的限制性核酸內(nèi)切酶的酶切效果。多酚類、多糖物質(zhì)的污染會造成AFLP酶切連接等后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果差，甚至后續(xù)PCR沒有擴(kuò)增產(chǎn)物[2]。在大多數(shù)木本植物基因組DNA的提取方法中，SDS法和CTAB法是目前最為常用的兩種方法。

本試驗(yàn)以細(xì)胞生物學(xué)研究為基礎(chǔ)，以如何獲取高質(zhì)量、高純度DNA為目的，比較CTAB法和SDS法紅豆杉和銀杏基因組DNA的提取效果，對兩種方法提取的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析和紫外吸收分析，分別對兩種方法所提取的紅豆杉和銀杏基因組DNA的效率和質(zhì)量進(jìn)行分析，從中選出一種更適合木本植物基因組DNA的提取方法。

1.3 DNA提取研究概況和發(fā)展趨勢

Avery在1944年的研究報告中寫道：“當(dāng)溶液中酒精的體積達(dá)到9/10時，有纖維狀物質(zhì)析出。如稍加攪拌，它就會象棉線在線軸上一樣繞在硬棒上，溶液中的其它成份則呈顆粒狀沉淀。溶解纖維狀物質(zhì)并重復(fù)數(shù)次，可提高其純度。這一物質(zhì)具有很強(qiáng)的生物學(xué)活性，初步實(shí)驗(yàn)證實(shí)，它很可能就是DNA（誰能想到?。薄NA分子的物理化學(xué)研究導(dǎo)致了現(xiàn)代生物學(xué)翻天覆地的革命，這更是Avery所沒有想到。Fricdrich Miescher ,瑞士生物學(xué)家，有機(jī)化學(xué)家。1868年醫(yī)學(xué)畢業(yè)以后，在著名的有機(jī)化學(xué)家Hoppe-Seyle的實(shí)驗(yàn)室以膿細(xì)胞為材料，研究淋巴細(xì)胞的組成。1869年他從膿細(xì)胞的細(xì)胞核中分離出含有大量磷的“核素”即是DNA,是人類第一次真正提取的的DNA。

年代初,DNA被證明是所有生物最主要的遺傳物質(zhì)。隨著生物化學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)的發(fā)展,基因工程和生物技術(shù)的創(chuàng)立,DNA的有關(guān)技術(shù)也得到了飛速發(fā)展。DNA提取方法成了這些研究和應(yīng)用中最重要的技術(shù)之一。目前已經(jīng)建立了用于各種不同目的的DNA提取方法,這些方法也被用于生物學(xué),尤其是生物工程的各個方面。但是,對于不同的植物樣品,由于其組織成分的差異,采取的DNA 提取方法不完全一致。.文獻(xiàn)綜述

2.1 南方紅豆杉概況

紅豆杉屬(Taxus L．)植物屬紅豆杉科，為常綠喬木或灌木。紅豆杉(Taxus mairei)又名紫杉、赤柏松，是第三世紀(jì)孑遺植物，被稱為植物王國里的“活化石”，因其資源稀少，被列為世界珍稀樹種加以保護(hù)，在我國為珍稀瀕危物種。在幾千萬年的歷史長河中，紅豆杉是歷經(jīng)強(qiáng)度陽光、低薄空氣、高溫干旱、嚴(yán)寒冰川等地球氣候巨變的考驗(yàn)，演化遺留下來的物種。其樹體極大的適應(yīng)存活能力所具有的各種生物石堿、化合物，既是本身生存的需要，也是現(xiàn)在被人類認(rèn)識和開發(fā)的珍稀貴重藥物。南方紅豆杉廣泛分布福建、浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川等省，生于海拔1300米以下，喜濕潤的微酸性粘質(zhì)土壤，多生長在山的中下部及溝谷旁，常與刺栲、絲栗栲、甜櫧、木荷、杜英、楓香、杉木等混生。2.2 南方紅豆杉的化學(xué)組分

根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)共測定我國南方紅豆杉的平均化學(xué)指標(biāo)分別為(10項(xiàng)): 原料含水率7.94﹪、冷水抽提物0.385﹪、熱水抽提物0.765 ﹪、乙醚抽出物2.855﹪、NAOH抽出物12.17 ﹪、苯醇抽出物1.391 ﹪、木素含量27.01 ﹪、半纖維素含量11.78 ﹪、綜纖維素含量65.5 ﹪、PH值5.33[3]。2.3 紅豆杉主要價值

紅豆杉因其次生代謝物質(zhì)紫杉醇良好的抗癌效果而受到人類的關(guān)注，從紅豆杉樹皮和嫩葉中提取的紫杉醇，是繼阿霉素和順鉑之后被公認(rèn)最好的廣普、強(qiáng)活性天然抗癌藥。紅豆杉除了重要的藥用價值以外，其獨(dú)特的外觀造型、四季常青的鮮艷綠色，又是不可多得的綠化樹種，具有很高的觀賞價值。其次紅豆杉屬植物木材由于其優(yōu)良品質(zhì)還是不可多得的木材樹種。2.4 銀杏概況

銀杏（Ginkgo Liloba L.）俗稱白果，公孫樹。最早出現(xiàn)于3.45億年前的石炭紀(jì)，曾廣泛分布于北半球的歐、亞、美洲，與動物界的恐龍一樣稱王稱霸于世，至50萬年前，發(fā)生了第四紀(jì)冰川運(yùn)動，地球突然變冷，絕大多數(shù)銀杏類植物瀕于絕種，唯有我國自然條件優(yōu)越，才奇跡般的保存下來。所以，科學(xué)家稱它為“活化石”，“植物界的熊貓”。2.5 銀杏主要價值

銀杏葉也具有重要的藥用價值。到目前為止已知其化學(xué)成分的銀杏葉提取物多達(dá)160余種。主要有黃酮類、萜類、酚類、生物堿、聚異戊烯、奎寧酸、亞油酸、蟒草酸、抗壞血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。中國科學(xué)院植物所等單位于60年代用銀杏葉研制出舒血寧針劑，經(jīng)試驗(yàn)對冠心病、心絞痛、腦血管疾病有一定的療效。同時，銀杏葉也可以作為農(nóng)藥使用[4]。

3.實(shí)驗(yàn)原理

2.1 CTAB法提取原理

CTAB(cetyltriethyammoniumb romide,十六烷基三甲基溴化銨)法是一種快速簡便提取植物基因組DNA的方法：先將新鮮的葉片放在液氮中研磨，破碎其細(xì)胞，然后加入CTAB分離緩沖液。再經(jīng)氯仿-異戊醇抽體除去蛋白質(zhì)，最后得到DNA。

2.2 SDS法提取原理

SDS法(Sodium dodecyl sulfate，十二烷基磺酸鈉)先將新鮮的葉片在液氮中研磨破碎其細(xì)胞壁，然后加入SDS使其細(xì)胞膜破裂。并同時將蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)同核酸分開。加入KAc可使SDS—蛋白質(zhì)復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)楦〉拟淃}形式，使沉淀更加完全[5]。

2.3 紫外吸收法分析原理

組成核酸分子的堿基，均具有一定的吸收紫外線特性，最大吸收值在波長為25038 ［3］丁曉東，呂柳新.從頑拗植物荔枝中提取基因組DNA技術(shù)的研究［J］.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報.2000，6(2)：142370.［5］王景雪, 孫毅, 高武軍.-種簡便實(shí)用的植物總DNA提取方法[J].山西大學(xué)學(xué)報，2000，23(3): 27139.［8］黃豐, 周聯(lián)等.植物中藥材總DNA提取方法比較[J].中藥新藥與臨床理,1999 ,10(1): 1814.［11］李思光，羅玉萍, 陳萬秋等.獼猴桃基因組DNA的提取及其RAPD擴(kuò)增研究[J].南昌大學(xué)學(xué)報，2001，25(3):264–268.