第一篇：大鼠腦挫傷后腦組織β

【摘要】目的 觀察大鼠實(shí)驗(yàn)性腦挫傷后cns內(nèi)b—app蛋白表達(dá)時(shí)空性規(guī)律。方法 采用自由落體撞擊法致大鼠腦挫

傷模型，用免疫組化技術(shù)觀察傷后b—app蛋白在不同時(shí)間(0．5 h、2 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d)的表達(dá)情況，并用計(jì)算機(jī)

圖像分析技術(shù)作定量統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果(1)皮質(zhì)內(nèi)b—app蛋

白在傷后表達(dá)呈一定波動(dòng)性，0．5 h表達(dá)明顯增加后，逐漸下降，h降至最低，低于對(duì)照組，隨后再次表達(dá)增加，3 d達(dá)高峰；(2)傷后24h海馬區(qū)b一-app表達(dá)開(kāi)始逐漸下降，3 d降至最低，1

4d回到對(duì)照組水平；(3)齒狀回(dg)內(nèi)b—app蛋白在傷后12 h低于對(duì)照組。結(jié)論實(shí)驗(yàn)性腦挫傷后皮質(zhì)b—app表達(dá)時(shí)序性

規(guī)律可為腦損傷時(shí)間推斷提供一個(gè)新的參考指標(biāo)，但海馬區(qū)及dg13-一app變化規(guī)律在腦損傷時(shí)間推斷方面價(jià)值不大。

【關(guān)鍵詞】腦挫傷；b淀粉樣前體蛋白；損傷時(shí)間；免疫組織化學(xué)；法醫(yī)病理學(xué)

【中圖分類號(hào)】d919．1

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a

【文章編號(hào)】1007一-9297(2006)02—01 15—04

a study on [3-app expression in experimental brain contusion in rats．he guanglong, zhou yiwu, sa dongmei, et o1．

departerment offorensic pathology,tonal medical college，hust,wuhan 430030

【abstract】obj~five to study the change of13-app expression in diferent wound age and site in the experimental traumatic

brain injury in rats．methods the animal model of cerebral contusion was established by impact to the parietal lobe with a free fall

weight,b—app expression in different wound age was observed with immunohistoehemistry． the results were measured

quantitatively with computer imaging analysis system．male spragure-dawley rats were divided into 3 groups：normal control，sham

operation control and injury group．results(1)th e number of13一app—positive neurons definitely increase in 0．5 h after brain injury．

decline gradually and reach valley bottom in 1213,，increase again and reach the peak in 3 d．(2)in hippoeampus the number of —

app—positive neurons definitely increases after 24 h after brain injury，then dechne gradually and reach valley bottom in 3d．return

to the level of control at 14 d．1,3)in dentate gyms fdg1 the number of i3-app—positive neurons at 12 h is lower than the control

after brain injury． i11e intensity of the immunoreaefivity ofp—app protein changes with time after traumatic brain injury．which might

be used for determ ing injury time．，however．，the change in hippoeampus and dg has little value in determing injury time．

【key words】cerebral contusion，3-app，injury time，immunohistochemistry，forensic pathology

近年來(lái)很多研究發(fā)現(xiàn)，一些神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，如

創(chuàng)傷、感染、中毒、軸索損傷及缺血等，均可影響b淀

粉樣前體蛋白(beta一．a(chǎn)myloid precursor prot, in,p—

app)表達(dá)，國(guó)內(nèi)外已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，但主要集中于

dai和腦缺血后損傷的研究，少見(jiàn)關(guān)于腦挫傷方面報(bào)

道。為此，我們應(yīng)用b—app免疫組織化學(xué)技術(shù)，觀察大

鼠實(shí)驗(yàn)性腦挫傷后在皮質(zhì)和海馬區(qū)表達(dá)情況。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和腦損傷模型制備

44只健康sd大鼠，雌雄不限，體重300±50 g(由

同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供1，隨機(jī)分成正常對(duì)照組

(2只)、假性手術(shù)組(2只)及腦損傷組(傷后0．5 h、2 h、6h、12h、24h、3 d、7 d、14d、共8組，每組5只)按照

參考文獻(xiàn)[1】的方法，利用自由落體裝置致大鼠腦挫傷

模型。

二、組織及切片處理

大鼠腹腔麻醉后，經(jīng)4％多聚甲醛溶液經(jīng)心臟灌

注固定后取出整個(gè)腦組織，沿挫傷灶中央作冠狀切面

取材，石蠟包埋

免疫組織化學(xué)sp法按試劑盒f北京中山公司1說(shuō)

【作者簡(jiǎn)介]何光龍(1978一)，福建平潭人，碩士，主要從事法醫(yī)病理學(xué)方面的研究。teh 0***；e-mail：hg12001@163． net

[通訊作者]周亦武(1964一)，男，博士，教授；研究方向法醫(yī)顱腦損傷、猝死病理及法醫(yī)毒理學(xué)。tel：+86一-27—83657925；e-mail：yiwuh~j—

di遁~sina．com

[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然科學(xué)基金(30570629)；中國(guó)博士后科學(xué)研究基金(2o03034459)；湖北省自然科學(xué)基金(2o03aba140)

· 116 ·

明書(shū)進(jìn)行，一抗為兔抗大鼠b—app多克隆抗體(武漢

博士德公司)，工作濃度為1：70，以pbs替代一抗作為

陰性對(duì)照，dab(~l京中山公司1顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞

核。

三、圖像分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

在b—app免疫組化染色切片的頂葉皮層挫傷灶

周圍、海馬區(qū)及dg，各取5個(gè)視野(6708．9 rrf)，應(yīng)用

hpias一1000全自動(dòng)醫(yī)學(xué)彩色圖像分析系統(tǒng)測(cè)量每個(gè)

視野內(nèi)p—app陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(n)。用sas 8．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件

包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，隨機(jī)組間用snk檢驗(yàn)進(jìn)行顯

著性比較。

結(jié)果

法律與醫(yī)學(xué)雜志2006年第13卷(第2期)

一、he染色組織病理學(xué)改變

傷后6 h內(nèi)挫傷灶周圍小血管及毛細(xì)血管擴(kuò)張、淤血．組織水腫：神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，胞核著色淺

淡．部分神經(jīng)元核深染。傷后12 h～24 h，挫傷灶周圍

神經(jīng)元腫脹，尼氏體消失，胞漿呈嗜伊紅染色，星形膠

質(zhì)細(xì)胞(astrocyte，ast1腫脹；可見(jiàn)白細(xì)胞附壁和游出，挫傷區(qū)散在分布少量中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。傷后

3d，挫傷灶內(nèi)神經(jīng)元消失，其周圍出現(xiàn)少量泡沫細(xì)胞及

核大而深染的ast；傷后7 d挫傷灶形成軟化灶，并見(jiàn)

大量泡沫細(xì)胞；傷后14 d挫傷區(qū)形成囊狀包裹。

對(duì)照組海馬區(qū)錐體細(xì)胞層及dg顆粒細(xì)胞層細(xì)胞

排列整齊、密集。傷后海馬神經(jīng)元腫脹，胞漿呈淡紅

照片

1、照片3·、照片5 分別是對(duì)照組腦皮質(zhì)、ca1、齒狀回[3-app免疫組化；照片2 實(shí)驗(yàn)性腦挫傷3d后腦皮質(zhì)b—app免疫

組化；照片4 實(shí)驗(yàn)性腦挫傷3d后海馬cal j3一app免疫組化；照片6 實(shí)驗(yàn)性腦挫傷12h后齒狀回~

app免疫組化：。

ph0t01、photo3、pho~5 immunostaini“g。f[3-app in control c。rtex, ca 1 and dg．ph0t02．immunostaining。f[3-app in c。rtex

3d y after the xperimental traumatic brain injury．photo4．immunostaining of[3-app in ca 1 0f hippocampus 3 days after the e

xperimen．

tal raumatic brain injury·photo6·immunostaining of 13-app in dg 12 hours after the experimenta1 traumatjc brajn jniury

．

法律與醫(yī)學(xué)雜志2006年第l3卷(第2期)

表1 腦挫傷周圍、海馬區(qū)及dg 免疫組化染色圖像分析結(jié)果

table 1．the number of 13-app positive cells around the contusion site，hippocampus and dg

· ll7 ·

色。細(xì)胞核固縮深染。隨傷后存活時(shí)間延長(zhǎng)，神經(jīng)元嗜

酸性變。尼氏體消失。神經(jīng)數(shù)目減少。錐體細(xì)胞層細(xì)胞

不完整，細(xì)胞胞體縮小。

二、13一app免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

對(duì)照組腦皮質(zhì)13一app見(jiàn)于部分ast及神經(jīng)細(xì)胞

內(nèi)(照片1)；傷后0．5 h b—app陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組

明顯增多。挫傷灶周圍的神經(jīng)元及ast內(nèi)出現(xiàn)棕色顆

粒，顆粒分布于胞漿及核周體。呈戒指環(huán)狀，陽(yáng)性細(xì)胞

呈橢圓形或圓形，突觸未見(jiàn)染色：傷后2 h一12 h陽(yáng)性

細(xì)胞數(shù)逐漸減少且染色減淡。12 h后挫傷灶周圍神經(jīng)

元b—app表達(dá)再度增強(qiáng)，3 d組挫傷灶周圍大量神經(jīng)

元及ast內(nèi)出現(xiàn)深棕色顆粒f照片21。遠(yuǎn)離挫傷灶皮

質(zhì)部分神經(jīng)元及多數(shù)ast也出現(xiàn)陽(yáng)性著色；隨后逐漸

下降。14d組基本回到對(duì)照組水平。實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間

p—app免疫組化染色圖像分析結(jié)果見(jiàn)表1，傷后b—

app陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(n)變化具有一定波動(dòng)性。0．5 h和3 d

分別達(dá)到波峰，而12 h在波谷。0．5 h、12 h和3 d組的n與對(duì)照組比較差異均有顯著性意義(p<0．05)。見(jiàn)圖1。

對(duì)照組海馬區(qū)錐體細(xì)胞內(nèi)已有大量b—app蛋白，陽(yáng)性細(xì)胞被染色成深棕色，多呈戒指環(huán)樣(照片3)；傷

后24 h海馬區(qū)錐體細(xì)胞層陽(yáng)性著色開(kāi)始減淡，陽(yáng)性細(xì)

胞數(shù)減少；3 d組海馬區(qū)部分神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)中淡棕色

顆粒，并可見(jiàn)細(xì)胞核皺縮(照片4)；14 d組基本回到正

常組水平。海馬區(qū)b—app免疫組化染色圖像分析結(jié)果

見(jiàn)表1。海馬區(qū)3 d組的n與對(duì)照組比較差異有顯著

性意義(p<0．05)，見(jiàn)圖

2對(duì)照組dg顆粒細(xì)胞層內(nèi)有大量b—app蛋白表

達(dá)(照片51，傷后僅在12h組見(jiàn)免疫強(qiáng)度減弱(照片

6)。dg b—app免疫組化染色圖像分析結(jié)果見(jiàn)表1。

12h組與對(duì)照組比較差異有顯著性意義(p<0．05)。見(jiàn)圖

3注：1)與對(duì)照組比較：p<0．05；2)與鄰近上組比較：

p<0．0

5皮質(zhì)

會(huì) 35

醫(yī) 5

o

．

q

pit

十皮質(zhì)

圖1 皮質(zhì)挫傷周圍b_app陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(n)隨時(shí)間變化曲線

fig 1 the number of ib-app-po sitive cells and time

relationship in codex

4035

匿 5

o

海馬區(qū)

q

pit

圖2海馬區(qū)b_app陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(n)隨時(shí)間變化曲線

fig 2 the number of 3-app——positive cells and time

relationship in hippocampus

討論

p—app是一種具有受體樣結(jié)構(gòu)的大分子膜整合糖蛋白，相對(duì)分子量約為110 130 kd。它包括膜外較

長(zhǎng)的氨基端、較短的跨膜區(qū)和胞內(nèi)羧基端。細(xì)胞外功

· 118 ·

150

蓄 o

蔞50

0

齒狀回

十齒狀回

圖3 齒狀回b_app陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(n)隨時(shí)間變化曲線

fig 3 the number of 15-app-positive cells and time

relationship in dg

能區(qū)與kunitz蛋白酶抑制劑(kpi)具有高度同源性。b—

app可在人體大多數(shù)細(xì)胞中表達(dá)，普遍存在于血液和

腦脊液中。b—app基因定位于人染色體21q21．2。通過(guò)

選性剪切，可形成至少8種長(zhǎng)度不等的b—app異構(gòu)

體，其中以app695、app714、app710較為常見(jiàn)。afy751、app770皆含有kpi功能區(qū)。[21 app659在神經(jīng)元特

意表達(dá)。app770主要見(jiàn)于ad患者，其他異構(gòu)體則廣

泛表達(dá)。對(duì)b—app的生理功能尚不完全清楚，正常情

況下廣泛表達(dá)于大多數(shù)細(xì)胞，以神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)

胞中含量較豐富，主要經(jīng)非淀粉樣蛋白生成途徑水

解，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)分化、增加神經(jīng)突觸的可塑性、參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、促進(jìn)細(xì)胞黏附、神經(jīng)保護(hù)作用。[31腦挫

傷后b—app參與對(duì)損傷的神經(jīng)元進(jìn)行修復(fù)。

國(guó)內(nèi)外已有部分學(xué)者在dia實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭刑接憘?/p>

后b—app的表達(dá)情況。陳曉剛等[41發(fā)現(xiàn)，早在傷后0．

5h b—app蛋白表達(dá)就開(kāi)始增加，且表達(dá)呈一定的波動(dòng)

性。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)傷后b—app在3 h呈明顯陽(yáng)性表

達(dá)，1 d達(dá)到高峰，3 d后逐漸減弱，14 d基本恢復(fù)正

常。[51 murakami等[61用蛋白印跡分析顯示，彌漫性軸索

損傷后29 h，b—app蛋白表達(dá)增加，免疫組化結(jié)果顯

示皮質(zhì)在傷后24 h～7 d b—app表達(dá)顯著增加，海

馬區(qū)b—app在傷后24 h～3 d積聚于ca3區(qū)。有人在沙鼠短暫性前腦缺血模型中發(fā)現(xiàn)，傷后24h海馬ca

1區(qū)b—app免疫標(biāo)記的神經(jīng)元數(shù)量減少，2 d后又突然

表達(dá)增加，7 d又減少。陳艷昕等181在人腦缺血的海

馬中研究發(fā)現(xiàn)，b—app在缺血2 h～6 h組表達(dá)明顯，4d組達(dá)高峰，4d以后下降，但仍高于對(duì)照組。

本研究發(fā)現(xiàn)，正常腦組織部分神經(jīng)元和ast表達(dá)

b—app蛋白，且主要集中于細(xì)胞核內(nèi)，這主要是其對(duì)

法律與醫(yī)學(xué)雜志2006年第13卷(第2期)

神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)定和維護(hù)起作用。傷后0．5 h13一app蛋白

表達(dá)顯著性增強(qiáng)，這表明p—app作為一種快速反應(yīng)蛋

白．在損傷后被誘導(dǎo)升高，可能是對(duì)腦的保護(hù)。傷后

2h～12 h13一app蛋白表達(dá)降低，具體機(jī)制不詳，可能為

腦挫傷后神經(jīng)元壞死，而使蛋白合成能力降低，這一

時(shí)期的神經(jīng)元變性、壞死也可從he染色中得到驗(yàn)證。

傷后12 h b—app表達(dá)突然升高并于3 d達(dá)到高峰。

傷后皮質(zhì)b—app蛋白表達(dá)呈波動(dòng)性，與一些文獻(xiàn)報(bào)道

【 不同，考慮為采用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒煌?。本次?shí)驗(yàn)首次

利用腦挫傷模型探討b—app蛋白表達(dá)的情況，結(jié)果顯

示傷后b—app蛋白表達(dá)時(shí)序性規(guī)律，可望作為法醫(yī)學(xué)

上推斷腦損傷時(shí)間的客觀指標(biāo)之一。

作者對(duì)腦挫傷后大鼠海馬區(qū)及dg研究中發(fā)現(xiàn)，正常大鼠海馬區(qū)及dg內(nèi)已有大量b—app蛋白表達(dá)，傷后表達(dá)的變化不明顯，分別僅在3 d和12 h組內(nèi)表

達(dá)顯著低于對(duì)照組。這結(jié)果表明在腦挫損傷后，海馬

結(jié)構(gòu)內(nèi)b—app蛋白在腦挫傷中變化不明顯，具體作用

不明確。其表達(dá)情況，對(duì)在法醫(yī)腦損傷上的應(yīng)用價(jià)值

意義不大

綜上所述，通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)腦損傷后b—app蛋白

表達(dá)存在一定時(shí)序性規(guī)律，可望作為法醫(yī)學(xué)上推斷腦

損傷時(shí)間的客觀指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)

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【4] 陳曉剛．廖志剛．劉敏，等． 大鼠腦彌散性損傷早期~-app變化的研究m．中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志．2001，16(4)：198~200

【5] 朱金龍．朱少華．任亮，等．大鼠彌散性軸索損傷后b—app的表達(dá)[j1．

法醫(yī)學(xué)雜志，2005，21(3)：165～168

[61 murakami n．yamaki t．1wamoto y，et a1．experimental brain injury induce

expression of amyloid precursor protein，which may be mimed to

neuronal loss in the hippocampus[j]．j neurotrauma，1998，15(1 1)：993~

lo03

[71 hall ed．oostveen ja．dunn e，et a1．icreased amyloid protein precursor

and apolipoprotein e immunohistochemistry in the selectively

vulnerable hippocampus following transient forebrain isehemi a in gerbils[

j]．eep neurol，1995，135(1)：17~27

【8] 陳艷昕．戚基萍．李光偉，等．b—app在人腦缺血后海馬神經(jīng)元表達(dá)的研究[j1．**醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，38(6)：547～549

(收稿：2005—12—0l；修回：2006—03—11)

第二篇：SD大鼠閉合性小腦挫傷的透射電鏡觀察

【摘要】 目的 探討閉合性小腦挫傷病變發(fā)生發(fā)展過(guò)程。方法 建立閉合性小腦挫傷動(dòng)物模型，分別于損傷后

不同時(shí)間組5 min、10 min、30 min、45 min、60 min、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h與正常組對(duì)照，觀察其電鏡變化。結(jié)果損傷

后不同時(shí)間組，小腦蒲肯野氏細(xì)胞線粒體水腫、空泡化從輕到重，線粒體嵴逐漸消失。神經(jīng)纖維髓鞘疏松斷裂，神經(jīng)原絲

及微管結(jié)構(gòu)模糊，并隨著時(shí)間推移，其損傷越來(lái)越重。損傷后30min，線粒體胞漿中充滿了游離核糖體。損傷后1～2小

時(shí)小腦蒲肯野氏細(xì)胞胞漿濃縮，細(xì)胞核開(kāi)始發(fā)生染色質(zhì)邊集。個(gè)別細(xì)胞核發(fā)生核溶解。至4～6小時(shí)小腦蒲肯野氏細(xì)胞

細(xì)胞核壞死發(fā)展到高峰，然后逐漸減輕。損傷后8小時(shí)，小腦血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體水腫，嵴消失，神經(jīng)纖維髓鞘松解，膠

質(zhì)細(xì)胞核周間隙擴(kuò)張。結(jié)論 閉合性小腦挫傷后不同時(shí)間電鏡變化，為早期損傷時(shí)間推斷的法醫(yī)學(xué)鑒定提供了病理

學(xué)基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】小腦挫傷；電鏡

【中圖分類號(hào)】d919．1；r392．3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a

【文章編號(hào)】1007—9297(2004)02—0126—03

tem observations of closed cerebeilum concussion in sd rats．li xing-biao，hu ” ．lin ke-zhi．department of

pathology，wenzhou medical college，wenzhou，zh~iang province 325027

【abstract】objective to explore the pathogenesis of closed cerebellum concussion in sd rats． methods animal model of

clos ed cerebellum concusion in sd rats were established，the samples was taken at 5 m in，10 rain，30 m in，45 m in，60 min，2 h，h，8 h，12 h after injury respectively，tissue changes in injury group were observed under electron microscope compared with

norma1． results at earler post—injury stage such as 5 min，10 min，30 min，45 min，60 min，2 h，vacuole and edema of mito—

chondria as well as disappeared mitochondria crista become increasingly serious in purkinje cells．myelinolysis such as myelin

loose and rupture in partly，and the structure obscure of neurofibrhs and microtube were seen in time—depended ．m ter injury 1

～ 2 h，purkinje cells of plasma began concentrated ．cellular nucleus began to happen chromatin margination．a(chǎn) few of cellular

nucleus was karyolysis．the peak of cellular necrosis was found at post—injury 4～6 h．m ter injury 8 h．mitochondria edema

and crista disappearance in vascular epithelium cells was observed ．in addition to，loose m yelin of nerve fibers and expansion as—

trocyte interval were also observed． conclusion this experiment results provides the pathological basis for forensic investiga—

tion of clos ed cerebellum concusion in early stage．

第三篇：大鼠腦液壓沖擊傷后細(xì)胞色素C表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究

【摘要】 目的 為法醫(yī)學(xué)上閉合性顱腦損傷的早期診斷和損傷時(shí)間推斷提供依據(jù)。方法 建立大鼠腦液壓沖

擊模型。用免疫組化與圖像分析技術(shù)分別檢測(cè)傷后不同時(shí)間大鼠腦皮質(zhì)、海馬等部位細(xì)胞色素c(cytochrome c，cyt c)的表達(dá)。結(jié)果對(duì)照組大鼠腦內(nèi)cyt c有微量表達(dá)，傷后15分鐘表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)，傷后3小時(shí)達(dá)高峰，1天后開(kāi)始減弱，7天后基本恢復(fù)正常。結(jié)論 cyt c表達(dá)的規(guī)律性可望為閉合性顱腦損傷的早期診斷及損傷時(shí)間推斷提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 閉合性顱腦損傷；cyt c；免疫組織化學(xué)

【中圖分類號(hào)】d919．4；r361 ．

2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a

【文章編號(hào)】1007—9297(2004)03—0219—0

3a study of the expression of cyt c after fluid percussion brain injury in rats．chen wei—jie，zhang kui—ming，du

xian—gang，xing yu，chen shi—wen，liao zhi—gang．west china school ofbasic medicine and forensic sciences

of sichuan university，chengdu，610041，china；people’sprocuratorateof ningde，fu jian 352100，china

【abstract】objective to search the objective evidence for the diagnosis on early brain injury and for estimating the time

since brain injury． methods some rats were hurt by fluid percussion，then sacrifice at different time after i~ury．the ex—

pression of cyt c was detected by immunohistochemistry，and the results were asesed by image analysis system ． results

there was a slight expression of cyt c in control group．in treat—group，he expresion of cyt c increased in 15 minutes after

i~ury，and it reached at peaks in 3 hours after injury，and it began to decrease in 1 day，but remain above control levels t．11 7

days． conclusion the regularity of cyt c expression might be a useful target for diagnosis of early brain injury，and it also

can be used in estimating the time since brain injury．

【key words】closed brain injury；cyt c；lmmunohistochemistry

顱腦損傷在法醫(yī)病理學(xué)鑒定中十分常見(jiàn)。已有研醉，采用張永亮改進(jìn)的dixon液壓沖擊裝置[ 制造損傷

究表明，腦損傷后腦血管，特別是腦內(nèi)小動(dòng)脈及小靜脈模型。分別于傷后15min、lh、3h、6h、12h、ld、4d、7d以

發(fā)生痙攣收縮，腦血流量減少，引起腦部缺血缺氧 衛(wèi)j。4％多聚甲醛溶液進(jìn)行主動(dòng)脈灌注固定處死。在腦打擊

細(xì)胞色素c(cytochrome c，cyt c)是呼吸鏈中的必要成處尾側(cè)3mm部位作冠狀切面，常規(guī)石蠟包埋、切片。

分之一，在線粒體復(fù)合物ⅲ、ⅳ之間傳遞電子。近來(lái)有 正常對(duì)照組大鼠飼養(yǎng)1d后直接處死，手術(shù)對(duì)照組

研究發(fā)現(xiàn)腦缺氧后神經(jīng)元線粒體功能損傷并釋放cyt 大鼠僅行顱骨鉆孑l，不做液壓沖擊，術(shù)后2h處死。兩組

c是神經(jīng)元損害的中心環(huán)節(jié)。目前關(guān)于cyt c在閉 動(dòng)物取材及組織后處理同實(shí)驗(yàn)組。

合性顱腦損傷的診斷與損傷時(shí)間推斷方面的研究報(bào)道

三、主要試劑

較少。本研究對(duì)大鼠腦部進(jìn)行液壓沖擊造成閉合性顱 兔抗鼠cyt c多克隆抗體(武漢博士德生物工程有

腦損傷，觀

察傷后大鼠腦內(nèi)cyt c的表達(dá)情況，以期為 限公司)。

閉合性顱腦損傷的早期診斷及損傷時(shí)間推斷提供依據(jù)。山羊抗兔sp試劑盒、dab顯色劑(北京中山生物

材料與方法 技術(shù)有限公司)。

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

四、染色

健康雄性wistar大鼠50只，體重300～350 g(由四

川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中

心提供)。隨機(jī)分為10組，分別

對(duì)應(yīng)于正常對(duì)照組，手術(shù)對(duì)照組，損傷后15min、lh、3h、6h、12h、ld、4d、7d組，每組5只。

二、動(dòng)物模型的制備

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)10％水合氯醛按0．3g／kg體重腹腔麻

he染色按常規(guī)操作進(jìn)行，免疫組化染色按試劑說(shuō)

明書(shū)進(jìn)行，以pbs代替一抗作陰性對(duì)照。

五、圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

在皮質(zhì)及海馬區(qū)隨機(jī)選取5個(gè)視野，用biomias圖

像分析儀測(cè)量cyt c免疫陽(yáng)性物面積及陽(yáng)性細(xì)胞染色

強(qiáng)度。測(cè)定數(shù)值用±s表示，用spss 10．0 for windows

· 220 ·

進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

一、he染色觀察

正常對(duì)照組和手術(shù)對(duì)照組無(wú)明顯異常改變，實(shí)驗(yàn)組

見(jiàn)大腦皮質(zhì)及蛛網(wǎng)膜下腔出血，腦實(shí)質(zhì)小灶性出血。部

分神經(jīng)元固縮，核小而深染，以挫傷灶周邊分布居多；部

分神經(jīng)元腫脹，彌散分布于腦實(shí)質(zhì)內(nèi)。傷后1h腦水腫

明顯，傷后7d損傷周邊見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞增生。

二、免疫組化染色結(jié)果

正常對(duì)照組和手術(shù)對(duì)照組大鼠腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)

元均有cyt c低水平表達(dá)，光鏡下，可見(jiàn)神經(jīng)元胞漿內(nèi)

有少許棕黃色免疫反應(yīng)陽(yáng)性物(見(jiàn)圖1、2)。傷后

15min，大鼠腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元cyt c表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)。

傷后3h，大鼠腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元cyt c表達(dá)達(dá)高峰，光鏡下，可見(jiàn)神經(jīng)元胞漿內(nèi)有大片棕黃色免疫反應(yīng)陽(yáng)性

物沉積(見(jiàn)圖3、4)。免疫反應(yīng)高表達(dá)持續(xù)到傷后1d，隨

后cyt c表達(dá)逐漸降低，傷后7d，基本恢復(fù)至對(duì)照組水

平。

三、圖像分析

各組均進(jìn)行了圖像分析，結(jié)果見(jiàn)表1，2。

表1 大鼠腦皮質(zhì)傷后不同時(shí)段cyt c的表達(dá)

table 1 expression of cyt c in the different periods in cerebral

cortex of rat brain after injury

*與對(duì)照組相比較p<0．05；**與對(duì)照組相比較p<0．0

1討 論

根據(jù)ohm’s定律，腦血流量的調(diào)節(jié)主要依賴于灌

流壓和血管阻力。在血壓為6．15～13．85kpa范圍內(nèi)，腦血流量主要通過(guò)腦小動(dòng)脈和微動(dòng)脈血管壁平滑肌收

縮和舒張改變血管徑而進(jìn)行自動(dòng)調(diào)節(jié)。于曉軍等制作

大鼠閉合性腦損傷模型，用掃描電鏡對(duì)血管鑄型進(jìn)行觀

察，發(fā)現(xiàn)損傷組大鼠腦內(nèi)小動(dòng)脈痙攣收縮，管徑明顯小

于正常組大鼠腦血管管徑_6 j。這可能是因?yàn)闄C(jī)械性外

力刺激腦部后，腦血管受機(jī)械性牽拉，血管平滑肌發(fā)生

法律與醫(yī)學(xué)雜志2004年第11卷(第3期)

牽張性收縮反射的結(jié)果。腦血管痙攣收縮是外傷后腦

組織缺血缺氧的主要原因。

表2 大鼠海馬傷后不同時(shí)段cyt c的表達(dá)

table 2 expression of cyt c in the different pe riod s

in hippocampus of rat brain after injury

*與對(duì)照組相比較p<0．05；**與對(duì)照組相比較p<0．01

腦組織以有氧代謝為主，幾乎沒(méi)有無(wú)氧代謝能力，對(duì)氧的需求量高。同時(shí)，腦組織中氧和atp的儲(chǔ)備很

少。因而對(duì)缺氧的耐受性差，是機(jī)體對(duì)缺氧最敏感的組

織。缺氧后神經(jīng)元線粒體atp含量迅速下降，線粒體

功能受損。線粒體功能障礙后，線粒體外膜通透性增

高，cyt c釋放入細(xì)胞質(zhì)，線粒體內(nèi)cyt c減少，直接使

細(xì)胞呼吸鏈電子傳遞中斷，導(dǎo)致神經(jīng)元壞死。釋放到胞

質(zhì)中的cyt c還與apaf一1，caspase一9一起裝配組成凋亡復(fù)合體，引起神經(jīng)元凋亡_7 j。壞死和凋亡正是腦損

傷后神經(jīng)元死亡的兩種方式，只是發(fā)生的時(shí)間不同。壞

死在傷后不久發(fā)生，而凋亡在傷后數(shù)小時(shí)才開(kāi)始發(fā)生。

ptrick g．sulliven等用western blot法研究腦損傷后神

經(jīng)元cyt c的釋放情況，發(fā)現(xiàn)傷后3h、6h、12h、24h神經(jīng)

元胞漿中cyt c持續(xù)增強(qiáng)，72h后又有所下降，而線粒

體中cyt c的含量則隨時(shí)間變化而不斷下降_8 j。陳施

艷等制作大鼠缺血模型，發(fā)現(xiàn)大鼠在常溫下缺血3h后，海馬ca1區(qū)神經(jīng)元有大量cyt c陽(yáng)性表達(dá)，24h后表達(dá)

明顯減少，72h后完全消失_9 j。本研究發(fā)現(xiàn)在大鼠腦液

壓沖擊傷后15min在鼠腦皮質(zhì)、海馬等部位cyt c表達(dá)

開(kāi)始增強(qiáng)，3h達(dá)高峰，1d后開(kāi)始減弱，7d后基本恢復(fù)至

對(duì)照組水平。cyt c主要表達(dá)于神經(jīng)元胞漿內(nèi)。與上

述研究基本一致，進(jìn)一步證實(shí)了腦損傷后神經(jīng)元凋亡的存在。

本研究發(fā)現(xiàn)在閉合性顱腦損傷后，神經(jīng)元胞漿cyt

c表達(dá)早期即有增強(qiáng)。且傷后不同時(shí)間其表達(dá)強(qiáng)度和

范圍亦有很大的差異。此可為閉合性顱腦損傷的早期

診斷和損傷時(shí)間推斷提供一項(xiàng)輔助診斷依據(jù)。本研究

洼律與醫(yī)學(xué)雜 2004年第1i卷(第3

結(jié)果來(lái)自動(dòng)物宴騎．在凡顱腦 傷鑒定寓踐巾的虛用尚

有待于進(jìn)步6扦究

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558 5b2

c收稿21104 05 26 蟮回20{14 li7 31i)

作者單位1日兒1大學(xué)華西驀礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院法醫(yī)病理教哥f

室．成都610n4i

2福建省寧德市人民檢察院．3521011

④

目i 正常對(duì)照蛆．鼠腦應(yīng)質(zhì)【ytf微弱表選 400 團(tuán)!正常對(duì)照 ．鼠腦海馬(yl(．里陽(yáng)性表達(dá) {i p(i 圖3 傷后

lh． 質(zhì)cy[(免疫陽(yáng)性信號(hào)．顯著增強(qiáng)4110 目4 傷后3l1海日(‘免幢陽(yáng)性信號(hào)．顯著增強(qiáng)40(1． fig cyl（_l”ill¨i1．·rr i v¨v int erel’r c．．rl ^··r11f¨nir fa[1 he c p e 1．●t-ol“ t cis slight fig2 cyl c 1m mu? rac clⅵ¨ in hipp~~anlp

ⅲ 州 t rni ille p sl¨n(c slighl fi cytt inl～ l·? t? t al 3h afterfluid p ? i．．n ’ uryin rcrehrai

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第四篇：青浦區(qū)組織“企業(yè)家心腦健康管理論壇”

龍?jiān)雌诳W(wǎng) http://.cn

青浦區(qū)組織“企業(yè)家心腦健康管理論壇” 作者：

來(lái)源：《現(xiàn)代工商》2013年第05期

4月24日下午，青浦區(qū)工商聯(lián)、區(qū)企業(yè)家協(xié)會(huì)聯(lián)手有關(guān)健康機(jī)構(gòu)，在區(qū)委黨校舉辦“2013企業(yè)家心腦健康管理論壇”。論壇邀請(qǐng)上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院神經(jīng)外科主任、上海東方腦科學(xué)研究所所長(zhǎng)、上海健康教育協(xié)會(huì)腦健康指導(dǎo)中心負(fù)責(zé)人王桂松教授，為企業(yè)家從心腦血管疾病的危險(xiǎn)因素與早期癥狀、心腦血管疾病的預(yù)防措施及營(yíng)養(yǎng)組方建議，以及如何健康自我管理，遠(yuǎn)離疾病等方面展做專題介紹并互動(dòng)探討。

第五篇：哈爾腦初中召開(kāi)組織生活會(huì)和民主評(píng)議黨員情況匯報(bào)

哈爾腦初中召開(kāi)專題組織生活會(huì)和民主評(píng)議黨員情況

匯 報(bào)

哈爾腦初中黨支部 2017年3月10日 哈爾腦初中召開(kāi)專題組織生活會(huì)和民主評(píng)議黨員情況

匯報(bào)

為了認(rèn)真貫徹落實(shí)“兩學(xué)一做”學(xué)習(xí)教育取得實(shí)效，我校認(rèn)真組織全體黨員學(xué)黨章黨規(guī)、學(xué)習(xí)總書(shū)記系列講話，并按照“兩學(xué)一做”教育實(shí)施方案和計(jì)劃，及時(shí)召開(kāi)專題組織生活會(huì)、開(kāi)展民主評(píng)議黨員工作。按照“四講四有”合格黨員標(biāo)準(zhǔn)，堅(jiān)持問(wèn)題導(dǎo)向，深入查找和解決突出問(wèn)題，嚴(yán)肅認(rèn)真開(kāi)展批評(píng)和自我批評(píng)，進(jìn)一步強(qiáng)化黨的觀念、提高黨性修養(yǎng)，增強(qiáng)“四個(gè)意識(shí)”特別是核心意識(shí)、看齊意識(shí)，更好地發(fā)揮基層黨組織戰(zhàn)斗堡壘作用和黨員先鋒模范作用。現(xiàn)將召開(kāi)組織生活會(huì)和民主評(píng)議黨員情況做以下匯報(bào)：

一、召開(kāi)組織生活會(huì)情況匯報(bào)

2017年3月10日下午學(xué)校支部成員召開(kāi)了組織生活會(huì)。會(huì)議由學(xué)校書(shū)記董立新主持。

會(huì)議緊緊圍繞“政治合格、執(zhí)行紀(jì)律合格、品德合格、發(fā)揮作用合格”四個(gè)方面，結(jié)合“兩學(xué)一做”學(xué)習(xí)教育落實(shí)情況，認(rèn)真分析了在理想信念、黨性原則、思想品德、執(zhí)行黨的紀(jì)律、落實(shí)中央八項(xiàng)規(guī)定、反對(duì)“四風(fēng)”、履職盡責(zé)、務(wù)實(shí)創(chuàng)新等方面的突出問(wèn)題，實(shí)事求是地開(kāi)展了批評(píng)與自我批評(píng)，進(jìn)一步明確了努力方向和改進(jìn)措施。

首先，董立新同志代表支部匯報(bào)了在“兩學(xué)一做”學(xué)習(xí)教育、貫徹落實(shí)黨的方針政策、執(zhí)行黨的紀(jì)律、遵守廉政紀(jì)律、落實(shí)中央“八項(xiàng)規(guī)定”和履行職責(zé)等方面的情況，認(rèn)真檢查了支部成員在黨內(nèi)生活、思想建設(shè)、作風(fēng)建設(shè)、廉政建設(shè)、政治紀(jì)律等方面存在的突出問(wèn)題，并從理想信念、黨性原則、宗旨意識(shí)、責(zé)任意識(shí)等方面深刻地分析了問(wèn)題產(chǎn)生的原因，進(jìn)一步明確了努力方向和整改措施。然后支部成員分別匯報(bào)了個(gè)人重大事項(xiàng)，并對(duì)照征求到的意見(jiàn)和建議，圍繞四個(gè)方面的要求，從思想、作風(fēng)、工作等方面嚴(yán)肅認(rèn)真的開(kāi)展了批評(píng)與自我批評(píng)。

根據(jù)查擺出來(lái)的問(wèn)題，支部成員提出了具體整改措施：

一是加強(qiáng)思想政治建設(shè)，提高領(lǐng)導(dǎo)班子的理論水平和政治素養(yǎng);二是增強(qiáng)宗旨意識(shí)，進(jìn)一步實(shí)在做人做事，守嚴(yán)防松、求實(shí)避虛，做廉潔清正實(shí)干的帶頭人。三是強(qiáng)化管理意識(shí)，提高管理水平要堅(jiān)定正確的政治方向，在制度自信、重大理論和實(shí)踐問(wèn)題、貫徹執(zhí)行中央決策部署、踐行為民宗旨上始終堅(jiān)定不移。四是堅(jiān)持民主集中制，提高支部民主科學(xué)決策水平。五是通過(guò)“群眾路線”和“三嚴(yán)三實(shí)”和“兩學(xué)一做”學(xué)習(xí)教育，集中發(fā)力抓作風(fēng)，全面從嚴(yán)治黨永遠(yuǎn)在路上?！皟蓪W(xué)一做”，就是要推動(dòng)全面從嚴(yán)治黨的要求在基層落地生根，落實(shí)到每個(gè)支部成員，對(duì)鞏固良好政治生態(tài)具有重要意義。

會(huì)議一直在嚴(yán)肅、坦誠(chéng)、和諧、務(wù)實(shí)的氣氛中進(jìn)行，達(dá)到了“團(tuán)結(jié)——批評(píng)——團(tuán)結(jié)”的目的。自我批評(píng)嚴(yán)肅認(rèn)真，直面問(wèn)題，既觸及思想深處，也觸及問(wèn)題實(shí)質(zhì)；相互批評(píng)態(tài)度中肯，坦誠(chéng)相見(jiàn)，既不遮掩問(wèn)題，也不回避矛盾。大家一致認(rèn)為，這是一次積極健康的黨內(nèi)政治生活，對(duì)于進(jìn)一步增強(qiáng)執(zhí)行黨的紀(jì)律的堅(jiān)定性，促進(jìn)思想建設(shè)、作風(fēng)建設(shè)、廉政建設(shè)，全面推進(jìn)黨支部和學(xué)校工作具有重要意義。

二、召開(kāi)民主評(píng)議黨員情況匯報(bào) 為進(jìn)一步加強(qiáng)黨的基層組織建設(shè)和黨員隊(duì)伍建設(shè)，嚴(yán)格黨內(nèi)組織生活，加強(qiáng)黨性鍛煉，保持黨的先進(jìn)性和純潔性，增強(qiáng)黨組織的凝聚力和戰(zhàn)斗力，我校在2017年3月10日召開(kāi)了“兩學(xué)一做”民主評(píng)議黨員工作會(huì)議。

會(huì)上，書(shū)記董立新同志對(duì)活動(dòng)開(kāi)展進(jìn)行了安排。要求全體黨員全面地學(xué)習(xí)，要求牢牢把握黨章中的理論、觀點(diǎn)和內(nèi)容，全面準(zhǔn)確地領(lǐng)會(huì)黨的各項(xiàng)活動(dòng)的基本規(guī)章；要求聯(lián)系實(shí)際的學(xué)，根據(jù)黨章中的黨規(guī)黨法，認(rèn)真研究當(dāng)前的工作情況，切實(shí)做好具體工作，以實(shí)際行動(dòng)落實(shí)十八大精神。他強(qiáng)調(diào)：一個(gè)黨員，就是一面旗幟，是學(xué)校辦學(xué)思想意識(shí)上的骨干，希望通過(guò)本次的民主生活會(huì)，進(jìn)一步強(qiáng)化宗旨意識(shí)和服務(wù)意識(shí)，樹(shù)立骨干意識(shí)，促進(jìn)作風(fēng)轉(zhuǎn)變，同時(shí)，希望每位黨員認(rèn)真落實(shí)整改措施，在工作中嚴(yán)于律己，充分發(fā)揮黨員先鋒模范作用，為學(xué)校教育教學(xué)質(zhì)量提升而共同努力。要求黨員按照前期安排，對(duì)照評(píng)議內(nèi)容，認(rèn)真反思一年的工作，認(rèn)真查找自身存在問(wèn)題，開(kāi)展好批評(píng)和自我批評(píng)，指出相互發(fā)展中存在的問(wèn)題、不足，通過(guò)相互批評(píng)幫助，達(dá)到增強(qiáng)黨性、推進(jìn)工作、共同進(jìn)步的目的。

接著開(kāi)展了民主評(píng)議黨員工作。支部書(shū)記率先進(jìn)行自我批評(píng)后，支部成員、其他黨員直面其發(fā)展中的思想、學(xué)習(xí)、工作、服務(wù)等方面問(wèn)題，直言不諱地提出批評(píng)意見(jiàn)和發(fā)展建議。通過(guò)個(gè)人自評(píng)、黨員互評(píng)、民主測(cè)評(píng)的程序，推選出了劉微微、韓明明、于秀琴等三名優(yōu)秀共產(chǎn)黨員并進(jìn)行學(xué)校表彰，推選出朱麗麗上報(bào)鄉(xiāng)黨委進(jìn)行鄉(xiāng)級(jí)表彰。本次黨員民主評(píng)議活動(dòng)氣氛活躍而和諧，通過(guò)批評(píng)與自我批評(píng)，堅(jiān)持問(wèn)題導(dǎo)向原則，達(dá)到了“剖析自我、認(rèn)知自我、改變自我”的目的，有效增強(qiáng)了黨組織的凝聚力和戰(zhàn)斗力。

哈爾腦初中黨支部

2017.3.10