第一篇：細(xì)菌鑒定方法

細(xì)菌鑒定方法

作為科研生產(chǎn)中最重要的基礎(chǔ)性資源—菌毒種，其收集、保藏及相關(guān)的研究工作在我國(guó)正處于整理、整合以及全方面逐步正規(guī)化階段，細(xì)菌鑒定方法。2003年7月23日，科技部在北京召開了“國(guó)家科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)建設(shè)”部際聯(lián)席會(huì)和專家顧問組成立大會(huì)，正式啟動(dòng)了國(guó)家科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)建設(shè)工作。國(guó)家自然科技資源共享平臺(tái)建設(shè)作為其中的一個(gè)重要組成部分同步啟動(dòng)。作為該項(xiàng)8的一個(gè)重要組成部分，微生物菌種資源整理、整合工作同期啟動(dòng)，在此項(xiàng)工作中，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所承擔(dān)了獸醫(yī)微生物資源整理、整合工作。本所在行業(yè)內(nèi)發(fā)展了數(shù)家加盟單位，在整理、整合菌種資源的過程中遇到了一些實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌鑒定結(jié)果出現(xiàn)偏差的問題。經(jīng)分析調(diào)查，多是由于實(shí)驗(yàn)室人員結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)室的硬件水平差別較大等原因，造成實(shí)驗(yàn)室間鑒定能力的參差不齊，致使鑒定項(xiàng)目完成情況不盡相同，細(xì)菌鑒定結(jié)果出現(xiàn)偏差。

細(xì)菌鑒定是指將分離培養(yǎng)獲得的病原菌，通過純化培養(yǎng)使其達(dá)到不含有其他微生物的純培養(yǎng)程度，繼而進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。而菌種保藏機(jī)構(gòu)在收集一些已經(jīng)凍干的菌種時(shí)，應(yīng)在開啟后經(jīng)過兩代的適應(yīng)性培養(yǎng)方可進(jìn)行復(fù)核性的系統(tǒng)鑒定。系統(tǒng)鑒定是通過細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸測(cè)定方法等檢測(cè)，并用已知標(biāo)準(zhǔn)免疫血清確定分離細(xì)菌的屬、種和型(群)。目前菌種保藏機(jī)構(gòu)通常使用的細(xì)菌鑒定方法大致有以下幾種：

1、傳統(tǒng)方法

常規(guī)宏觀菌落形態(tài)學(xué)觀察，主要觀察菌落在其適合的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況：細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)形態(tài)、大孝顏色是否均勻一致，菌落個(gè)體表面及邊緣的生長(zhǎng)狀況;在液體培養(yǎng)基上的渾濁狀況、沉淀狀況、液面菌膜狀況;半固體上穿刺接種后，觀察細(xì)菌是否沿著接種線生長(zhǎng)以及其生長(zhǎng)狀態(tài)是呈毛刷樣生長(zhǎng)還是均勻生長(zhǎng)，上下生長(zhǎng)是否一致。在鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察結(jié)果是否跟預(yù)期結(jié)果相同。

細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)學(xué)觀察，即通過顯微鏡觀察。觀察前細(xì)菌需要著色，要根據(jù)預(yù)先確定的觀察項(xiàng)目選擇與之相對(duì)應(yīng)的染色方法，目前常用的染色方法包括革蘭氏染色法、美藍(lán)染色法、Ziehl—Neelsen染色法、姬姆薩染色法、鞭毛染色法、芽胞染色法等。盡量挑選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌進(jìn)行染色觀察，此時(shí)的細(xì)菌生長(zhǎng)處于幼期，利于觀察，因?yàn)橐恍╆惻f細(xì)菌的染色結(jié)果會(huì)有變化，如本為革蘭氏陽性菌經(jīng)過長(zhǎng)期擱置后染色結(jié)果可能為革蘭氏陰性。同時(shí)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)要注意培養(yǎng)基的挑選，一些細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)如莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞等，其表達(dá)是需要在特定的培養(yǎng)基上才能正常發(fā)育，有的細(xì)菌如炭疽在一般的培養(yǎng)基上不形成莢膜，只在動(dòng)物體內(nèi)形成明顯的莢膜，所以需先接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后用病料進(jìn)行涂片鏡檢。在鏡檢時(shí)觀察細(xì)菌基本形態(tài)結(jié)構(gòu)和大小及其排列狀態(tài)、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等。

形態(tài)學(xué)鑒定輔以生化試驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中具有重要的意義，生化試驗(yàn)是根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)過程中不同菌種所產(chǎn)生的新陳代謝產(chǎn)物各異，表現(xiàn)出不同的生長(zhǎng)特性。通過生物化學(xué)的方法來檢測(cè)這些物質(zhì)的存在與否，從而能夠得到細(xì)菌的鑒定結(jié)果。如糖(醇)類代謝試驗(yàn)、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、有機(jī)酸鹽和胺鹽利用試驗(yàn)、呼吸酶類試驗(yàn)、毒性酶類試驗(yàn)等。

血清型鑒定是根據(jù)細(xì)菌具有相對(duì)特異性的抗原結(jié)構(gòu)這個(gè)特點(diǎn)進(jìn)行微生物鑒定的特異方法?？乖奶禺愋猿潭扔执嬖谟趯匍g細(xì)菌所共有的共同抗原，這種抗原的存在，能表明其屬性。另一類特異性抗原只存在于特定的種、型，是確定細(xì)菌種、型的重要依據(jù)。通過專門的分型血清即可對(duì)這些細(xì)菌的血清型進(jìn)行鑒定。

細(xì)菌毒力的測(cè)定，病原菌侵入機(jī)體能否引起疾病與其本身的毒力、侵入機(jī)體的數(shù)量和侵入部位有關(guān)。不同的病原菌或同種細(xì)菌不同的型或株，毒力常不一致。常用LD50或ID50表示毒力，即在一定時(shí)間內(nèi)，能使一定條件的某種動(dòng)物半數(shù)死亡或感染需要的最小細(xì)菌數(shù)或毒素量，鑒定材料《細(xì)菌鑒定方法》。毒力測(cè)定在菌種鑒定過程中可用于鑒別一些有代表性的菌株。LD50可用Reed—Muench公式進(jìn)行計(jì)算。

2、儀器自動(dòng)化鑒定

隨著儀器分析技術(shù)的進(jìn)步和計(jì)算機(jī)的廣泛應(yīng)用，微生物菌種鑒定逐漸由傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)觀察和人工生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定發(fā)展進(jìn)入了基于儀器自動(dòng)化分析的鑒定系統(tǒng)階段。近20年來，一系列商品化自動(dòng)鑒定系統(tǒng)相繼推出，并在應(yīng)用中取得理想效果，如VITEK系統(tǒng)、MIDl系統(tǒng)、BIOLOG系統(tǒng)、SENSITl.TRE系統(tǒng)、AUTOSCEpTOR系統(tǒng)以及MICROSCAN系統(tǒng)等。下面以BIOLOG微生物鑒定系統(tǒng)為例，簡(jiǎn)述微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)的工作原理：BIOLOG微生物自動(dòng)分析系統(tǒng)是美國(guó)Biolog公司從1989年開始推出的一套微生物鑒定系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要根據(jù)細(xì)菌對(duì)糖、醇、酸、醋、胺和大分子聚合物等95種碳源的利用情況進(jìn)行鑒定。細(xì)菌利用碳源進(jìn)行呼吸時(shí)，會(huì)將四哇類氧化還原染色劑(TV)從無色還原成紫色，從而在鑒定微平板(96孔板)上形成該菌株特征性的反應(yīng)模式或“指紋圖譜”，通過纖維光學(xué)讀取設(shè)備——讀數(shù)儀來讀取顏色變化(分為“自動(dòng)”和“人工”兩種讀取方式)，由計(jì)算機(jī)通過概率最大模擬法將該反應(yīng)模式或“指紋圖譜”與數(shù)據(jù)庫相比較，可以在瞬間得到鑒定結(jié)果，確定所分析的菌株的屬名或種名。以BIOLOG系統(tǒng)6.01版數(shù)據(jù)庫為例，包含了革蘭氏陰性好氧菌524種、革蘭氏陽性好氣菌341種、厭氧菌361種、酵母菌267種、絲狀真菌(含部分酵母菌)619種以及幾種特殊的致病菌，目前這個(gè)數(shù)據(jù)庫已進(jìn)行更新。利用微生物快速系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定，能節(jié)省時(shí)間，但由于其在數(shù)據(jù)比對(duì)過程中記入一些非特異性的陽性反應(yīng)孔，會(huì)造成偶然誤差，從而引起個(gè)別鑒定結(jié)果不穩(wěn)定，另外此類儀器本身及其耗材價(jià)格均較高。

3、分子生物學(xué)鑒定

分子生物學(xué)鑒定目前比較流行的主要是核酸檢測(cè)技術(shù)，包括基因測(cè)序、指紋圖譜技術(shù)、基因探針技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)(pCR)、GC含量測(cè)定等。pCR和核酸雜交單獨(dú)或結(jié)合在儀器已經(jīng)形成比較經(jīng)典的核酸檢測(cè)技術(shù)，目前這兩者已經(jīng)得到了較大范圍的推廣和應(yīng)用。

下面將簡(jiǎn)單介紹幾種核酸檢測(cè)技術(shù)的原理：

DNA的G+C含量測(cè)定法。此法是根據(jù)細(xì)菌的DNA中G+C含量的特異性來進(jìn)行細(xì)菌鑒定，通過熔解溫度(Tm)法或浮力密度法測(cè)定細(xì)菌DNA中G+C的含量，通過對(duì)比來鑒定細(xì)菌。

擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLp)分析。此法是一種測(cè)定基因組限制性片段的DNA指紋技術(shù)，通過pCR選擇性地?cái)U(kuò)增整個(gè)基因組DNA的內(nèi)切酶片段，在分辨率高的聚丙烯酰氨凝膠上電泳，產(chǎn)生一組特異的DNA限制性片段的指紋圖譜。與其他DNA指紋技術(shù)相比有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：可用于各種大小不同的基因組的指紋分析，為研究細(xì)菌屬乃至株間的親緣關(guān)系提供一個(gè)有效手段;具有一定的靈活性，可通過特異性pCR引物的設(shè)計(jì)和內(nèi)切酶組合的選擇，調(diào)整AFLp圖譜中限制性片段的適宜數(shù)目;由于適用了嚴(yán)格的pCR條件和高分辨率的聚丙烯酰氨凝膠電泳，因而重復(fù)性好，分辨率高;AFLp不僅僅是簡(jiǎn)單的指紋技術(shù)，而且可作為連接遺傳圖譜與物理圖譜間的橋梁而用于基因組的研究。

限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLp)分析。其原理是用限制性內(nèi)切酶將細(xì)菌基因組DNA進(jìn)行切割，之后在瓊脂糖凝膠上電泳分離，以顯示不同種群基因組DNA的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性。RFLp產(chǎn)生的指紋圖譜更適用于細(xì)菌種間及種內(nèi)株間的分型鑒定。

隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性(RApD)分析，又稱為隨意引物pCR(Ap—pCR)。它是一種DNA指紋多態(tài)性分析技術(shù)，其理論依據(jù)是不同的基因組中與隨意引物匹配的堿基序列的位點(diǎn)和數(shù)目可能不同，因而用一組人為設(shè)計(jì)的核苷酸作為引物，通過pCR隨機(jī)擴(kuò)增可產(chǎn)生物種特異性的DNA帶譜。

16S rRNA鑒定。細(xì)菌的核糖體RNA(rRNA)基因高度保守且進(jìn)化速度緩慢，在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過程中保留了rRNA基因結(jié)構(gòu)和功能的同源性，在微生物染色體上可存在多個(gè)拷貝，以rRNA基因片段為探針可檢出含有rRNA基因的DNA片段。分析雜交后得到的rRNA指紋圖，為菌種定型和近緣菌株的鑒定提供了一種新技術(shù)。針對(duì)rRNA基因的核糖體分型可成功地區(qū)分多個(gè)菌種的相關(guān)菌株，因此該技術(shù)也被廣泛稱作核糖體分型技術(shù)。原核生物含有23S、16S和5S三種 rRNA，其大小分別約為3000、1500和120個(gè)堿基。其中作為小亞單位核糖體RNA的16S rRNA的大小最適合于核糖體分型。一般完成l6S rRNA序列測(cè)定后，在GenBank中與已知的序列進(jìn)行BLAST分析，從而得出鑒定結(jié)果。

4、小結(jié)

一般來說，對(duì)于微生物的檢測(cè)或鑒定應(yīng)當(dāng)至少使用三種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證。傳統(tǒng)的分類鑒定需要測(cè)定的項(xiàng)目眾多，工作程序繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)。在某些時(shí)候可以配合分子生物學(xué)的方法進(jìn)行鑒定，如在進(jìn)行菌株的血清型鑒定時(shí)，對(duì)于某些國(guó)內(nèi)資源稀缺的菌株定型血清，而進(jìn)口定型血清價(jià)格昂貴，國(guó)內(nèi)可以開發(fā)分子生物學(xué)分型方法完成菌株的血清分型工作。而在利用分子生物學(xué)方法鑒定菌株血清型時(shí)，經(jīng)常會(huì)遇到有一些菌株的血清型種類繁多，目前還無法通過簡(jiǎn)單的核酸測(cè)定完成血清定型工作，如大腸桿菌，僅O抗原就有上百種血清型，對(duì)于這種情況在使用血清進(jìn)行定型的同時(shí)，還需要繼續(xù)深入研究其分型技術(shù)。目前市場(chǎng)上的微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)雖然基本上都通過了相關(guān)權(quán)威組織的認(rèn)可，在細(xì)菌快速鑒定或初步鑒定中起到了一定的作用，但如前所述，其穩(wěn)定性尚存在一定問題，同樣需要配合其他方法來相互印證，從而完成細(xì)菌鑒定工作。

總而言之，更多地使用傳統(tǒng)與現(xiàn)代相結(jié)合以及不斷發(fā)掘新的鑒定方法才能更好地完善菌種保藏過程中的細(xì)菌鑒定工作。

第二篇：全自動(dòng)細(xì)菌鑒定

全自動(dòng)細(xì)菌鑒定

儀器簡(jiǎn)介：

法國(guó)生物梅里埃公司最新一代應(yīng)用經(jīng)典生化方法進(jìn)行細(xì)菌鑒定的全自動(dòng)儀器，采用了國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)ApI的數(shù)據(jù)庫并繼承發(fā)展了VITEK第一代產(chǎn)品的自動(dòng)化處理技術(shù)，集成了生物梅里埃幾十年的技術(shù)和創(chuàng)新于一體，為當(dāng)今最先進(jìn)的細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)，全自動(dòng)細(xì)菌鑒定。

技術(shù)參數(shù)：

一、鑒定原理：終點(diǎn)法、閾值法;比色、比濁動(dòng)態(tài)分析法

二、菌液濃度控制：液晶數(shù)顯比濁儀，測(cè)量細(xì)菌濃度范圍0.0-7.5麥?zhǔn)蠁挝?。多點(diǎn)測(cè)量，自動(dòng)顯示平均值。

三、自動(dòng)加樣：真空批量加樣法，每批可同時(shí)處理10個(gè)試劑卡，每卡需菌懸液小于4ml

四、自動(dòng)處理測(cè)試卡：自動(dòng)掃描卡片條碼、自動(dòng)核查卡片與標(biāo)本資料、自動(dòng)密封卡片、自動(dòng)上載試卡，自動(dòng)孵育，自動(dòng)每15分鐘進(jìn)行一次檢測(cè)、自動(dòng)卸載完成卡，自動(dòng)報(bào)告結(jié)果。

五、操作軟件：Windows Xp操作系統(tǒng)，簡(jiǎn)易易用圖形界面，鑒定材料《全自動(dòng)細(xì)菌鑒定》。

六、打印機(jī)：激光打印機(jī)，自動(dòng)打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

七、一次性試卡：64孔鑒定/藥敏卡片，帶有條形碼可指示卡片的序列號(hào)和測(cè)試的種類。

八、鑒定細(xì)菌范圍：可全自動(dòng)鑒定菌種400種，包括：

革蘭氏陰性桿菌(含大腸桿菌0157及非發(fā)酵菌);革蘭氏陽性菌(含豬鏈球菌1型、2型和7種李斯特菌);酵母菌;需氧芽胞桿菌(含炭疽芽孢桿菌);奈瑟菌、嗜血桿菌、彎曲菌;厭氧菌

九、鑒定速度：95%常見細(xì)菌≤5小時(shí);其中革蘭氏陰性菌(GN)2～10小時(shí)，革蘭氏陽性菌(Gp)2～8小時(shí)

十、藥敏試驗(yàn)：滿足革蘭氏陰性及革蘭氏陽性兩大類細(xì)菌藥敏試驗(yàn)，速度4—15小時(shí)，95%常見細(xì)菌藥敏≤6小時(shí);抗生素已含第4代頭孢等

十一、工作容量：30個(gè)試驗(yàn)卡

十二、操作步驟：自動(dòng)真空批量接種、自動(dòng)掃描卡片條碼、自動(dòng)核查卡片與標(biāo)本資料、自動(dòng)密封卡片、自動(dòng)上載試卡，自動(dòng)孵育，自動(dòng)檢測(cè)、自動(dòng)卸載廢卡，自動(dòng)報(bào)告結(jié)果

十三、認(rèn)證：ISO9001認(rèn)證:OK;CE或FDA認(rèn)證:OK;進(jìn)口醫(yī)療器械注冊(cè)證：OK

主要特點(diǎn)：

1、自動(dòng)化程度高，操作簡(jiǎn)單易用。

2、數(shù)據(jù)庫齊全，鑒定準(zhǔn)確。

內(nèi) 容 概 述

關(guān)于全自動(dòng)細(xì)菌鑒定等部分檢驗(yàn)項(xiàng)目收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)函

內(nèi) 容 全 文

天津市衛(wèi)生局：

你局《關(guān)于請(qǐng)批準(zhǔn)部分新增檢驗(yàn)項(xiàng)目收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)的函》(津衛(wèi)財(cái)函389號(hào))收悉。經(jīng)審核，對(duì)全自動(dòng)細(xì)菌鑒定等4項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)予以核定，具體收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)(見附件)，自2011年11月20日起執(zhí)行。

二〇一一年十一月二十八日。

第三篇：細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

博檢革蘭氏陰性菌鑒定系統(tǒng)科學(xué)可行的鑒定系統(tǒng)

本系統(tǒng)由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司聯(lián)合山東省出入境檢驗(yàn)檢疫局共同研發(fā)設(shè)計(jì)，經(jīng)CDC、CIQ等部門驗(yàn)證完全符合GB/T 4789.4、GB/T 4789.5、GB/T 4789.6、GB/T4789.7、GB/T4789.8、GB/T 4789.36、GB/T 4789.40，具有與ApI20E和VITEK GNI+相同的鑒定效果，可廣泛用于革蘭氏陰性細(xì)菌的鑒定，細(xì)菌鑒定系統(tǒng)。

方便有效的編碼程序

不同種屬的細(xì)菌具有不完全相同的生化特征。本系統(tǒng)選取21種典型生化試驗(yàn)，并把生化反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為一個(gè)8進(jìn)制數(shù)，通過提供的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫查詢系統(tǒng)可得到實(shí)驗(yàn)菌株歸屬的相對(duì)概率、T值和R值，對(duì)菌株的歸屬進(jìn)行一定程度的鑒定。

強(qiáng)大的數(shù)據(jù)庫支持

當(dāng)前可鑒定的革蘭氏陰性細(xì)菌有112種，基本上涵蓋了常見的革蘭氏陰性細(xì)菌。

共有20種生化管及一個(gè)氧化酶試紙條，另附配套鑒定系統(tǒng)程序（博檢鑒定系統(tǒng)），用于各種革蘭氏陰性菌的生化檢測(cè)

在該套試驗(yàn)系統(tǒng)中,21種生化試驗(yàn)分別為ONpG、精氨酸(ADH)、賴氨酸(LDH)、鳥氨酸(ODC)、檸檬酸鹽利用實(shí)驗(yàn)(CIT)、產(chǎn)硫化氫試驗(yàn)(H2S)、脲酶(URE)、乳糖(LAC)、吲哚(IND)、Vp、明膠(GEL)、葡萄糖(GLU)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、山梨醇(SOR)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)、蜜二糖(MEL)、苦杏仁甙(AMY)、阿拉伯糖(ARA)、氧化酶(OX)。博檢鑒定系統(tǒng)的原理是：不同種屬的細(xì)菌具有不完全相同的生化特征。本系統(tǒng)選取21種典型生化試驗(yàn)，并把生化反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為一個(gè)8進(jìn)制數(shù)，通過提供的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫查詢系統(tǒng)可得到實(shí)驗(yàn)菌株歸屬的相對(duì)概率、T值和R值，對(duì)菌株的歸屬進(jìn)行一定程度的鑒定。將細(xì)菌各項(xiàng)生化反應(yīng)結(jié)果填入附贈(zèng)的記錄卡中，依次每三項(xiàng)為一組，若這三項(xiàng)反應(yīng)均為陽性，則分別記為1、2、4，若為陰性，則相應(yīng)項(xiàng)記為0，鑒定材料《細(xì)菌鑒定系統(tǒng)》。將每組三項(xiàng)的數(shù)值相加，共七組，組成一個(gè)七位數(shù)。將所得七位數(shù)輸入數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)中即可進(jìn)行查詢。若某項(xiàng)生化反應(yīng)結(jié)果較難判斷，則按照陰性進(jìn)行記錄，但查詢時(shí)，應(yīng)在不定的生化反應(yīng)前打鉤。這樣，及時(shí)是不確定生化同樣可以做出鑒定結(jié)果。經(jīng)過我們的反復(fù)試驗(yàn)校正，該實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率大大提高，同時(shí)系統(tǒng)的準(zhǔn)確率接近100%，大大縮短了生化鑒定的時(shí)間，提高了鑒定效率。

BBLCrystalTM半自動(dòng)自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

微生物分離，鑒定的傳統(tǒng)方法繁雜，周期長(zhǎng)，準(zhǔn)確性差，靈敏度低，對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的專業(yè)技術(shù)、操作技能、工作經(jīng)驗(yàn)要求極高。

BBLCrystalTM半自動(dòng)/自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)是BD公司專為中小型微生物實(shí)驗(yàn)室及科研結(jié)構(gòu)而設(shè)計(jì)的經(jīng)濟(jì)型鑒定系統(tǒng)。該系統(tǒng)可在保持鑒定板高度專業(yè)性及數(shù)據(jù)庫強(qiáng)大分析能力的前提下，有效利用微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)配置--普通恒溫孵育箱進(jìn)行鑒定板孵育后進(jìn)行差距自動(dòng)或自動(dòng)低度器進(jìn)行結(jié)果判讀，可最大程度實(shí)現(xiàn)資源共享，并在保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、快速性的基礎(chǔ)上達(dá)到節(jié)約試驗(yàn)成本的目的。而其便攜式設(shè)計(jì)則尤其適合于偏遠(yuǎn)地區(qū)用戶及臨床科研機(jī)構(gòu)流行病學(xué)異地考察。鑒定試驗(yàn)原理：

將傳統(tǒng)的酶、底物生化呈色反應(yīng)與先進(jìn)的BD專利熒光增強(qiáng)顯色技術(shù)結(jié)合以設(shè)計(jì)鑒定反應(yīng)最佳組合，使BBL? CrystalTM鑒定系統(tǒng)具備獨(dú)特、準(zhǔn)確、快速、靈敏的特點(diǎn)

鑒定板配置：

配套提供獨(dú)立分裝的鑒定用肉湯試管，確保無菌狀態(tài)，使用方便。

第四篇：細(xì)菌分離鑒定

細(xì)菌分離鑒定

目的要求：

熟悉臨床標(biāo)本中常見的病原性細(xì)菌的分離鑒定方法，細(xì)菌分離鑒定。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

一、膿汁、咽拭子等標(biāo)本中病原性細(xì)菌的分離與鑒定

(一)標(biāo)本采集

1.膿拭子：用無菌棉簽蘸取患處深部膿液或分泌物少許，置入無菌空試管內(nèi)，送檢。

2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用無菌棉簽挑取膿稠痰塊，置入無菌空試管內(nèi)，送檢。

3.咽拭子：囑病人把口張大，用壓舌板壓住舌根，用無菌棉簽迅速蘸取咽部分泌物，置入無菌空試管內(nèi)，送檢。

4.血標(biāo)本：疑為敗血癥患者，在嚴(yán)格無菌操作下，靜脈采血，床旁直接加入含50ml的肉湯瓶?jī)?nèi)，立即搖勻后送培養(yǎng)。

5.腦脊液：對(duì)疑似流腦患者，作腰椎穿刺取腦脊液，立即行直接床旁接種(送檢過程中應(yīng)注意保溫)。

6.尿道、陰-道分泌物：對(duì)可疑淋病患者，男性可從尿道取材，取材時(shí)導(dǎo)尿管應(yīng)進(jìn)入尿道1cm～2cm，如為剛排尿，應(yīng)等待1h左右;女性則可以從宮頸口取分泌物，當(dāng)內(nèi)窺器插入宮頸口后應(yīng)稍等片刻，再旋轉(zhuǎn)取出，取材應(yīng)立即送檢，不可放置冰箱。

(二)分離鑒定程序

待檢標(biāo)本可直接做涂片染色檢查鑒定，必要時(shí)可做分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)及致病性鑒定。常見的致病性球菌檢查程序如下。

直接涂片、革蘭染色、鏡檢(形態(tài)、排列、染色性)

膿、痰、咽拭子

分泌物、腦脊液 觀察菌落性狀、溶血性、色素

血瓊脂平板→ 涂片、染色、鏡檢

↑ 挑取可疑菌落 生化反應(yīng)

血液、穿刺液 →肉湯培養(yǎng)基 純分離 致病性測(cè)定

↓ 藥敏試驗(yàn)

如培養(yǎng)液混濁時(shí)可涂片、染色、鏡檢

(三)常見臨床標(biāo)本的檢查方法

1．膿拭子

在膿汁中除了球菌外，也有桿菌存在，例如革蘭陽性的有炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌、結(jié)核桿菌、枯草桿菌等，革蘭陰性的有大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌等，此外尚可有真菌、放線菌、螺旋體等。

材料

(1)標(biāo)本：膿拭子

(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板

(3)兔血漿、白色濾紙片、無菌生理鹽水、載玻片

方法 膿汁 → 革蘭染色 → 鏡檢

↓ ↑

血瓊脂平板 →觀察菌落形態(tài)及溶血情況

↓

致病力試驗(yàn)

(1)將膿拭子作革蘭染色，鏡檢(先作培養(yǎng)再涂片以免污染)，鑒定材料《細(xì)菌分離鑒定》。標(biāo)本放置4℃冰箱保存，待報(bào)告發(fā)出后再丟棄。

(2)將膿汁涂布于血瓊脂平板上，再以滅菌接種環(huán)作劃線分離。置培養(yǎng)37℃培養(yǎng)18h～24h。

(3)經(jīng)培養(yǎng)后據(jù)菌落特點(diǎn)及涂片檢查結(jié)果進(jìn)行初步識(shí)別，根據(jù)需要再作進(jìn)一步鑒定。若菌落較大、溶血透明、產(chǎn)生金黃色色素、涂片為革蘭陽性球菌并成堆排列時(shí)可能系葡萄球菌，應(yīng)確定其為何種葡萄球菌;必要時(shí)再作血漿凝固酶試驗(yàn)及甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)，確定其致病力。

2.咽拭子

咽喉中存在的細(xì)菌較多，可以有厭氧及需氧性鏈球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、四聯(lián)球菌、腦膜炎球菌、卡他球菌、喉?xiàng)U菌、結(jié)核桿菌枯草桿菌、百日咳桿菌肺炎桿菌及綠膿桿菌等。此外也可有白色念珠菌奮森螺旋體等。本實(shí)驗(yàn)以咽拭子作為標(biāo)本，重點(diǎn)檢查病原性球菌。

材料

(1)標(biāo)本:咽拭子。

(2)培養(yǎng)基:血瓊脂平板。

方法

咽拭子

↓

血瓊脂平板

↓

觀察菌落形態(tài)及溶血性

↓

革蘭染色，鏡檢

取標(biāo)本涂布于血瓊脂平板，再以滅菌接種環(huán)劃線分離，置37℃培養(yǎng)18h～24h培養(yǎng)。標(biāo)本放置4℃冰箱保存，待報(bào)告發(fā)出后再丟棄。

可根據(jù)下述特點(diǎn)進(jìn)行鑒別：

(1)在菌落周圍產(chǎn)生2mm～4mm寬、界線分明、完全透明的溶血環(huán)、涂片為革蘭陽性球菌并呈鏈狀排列，可能是乙型溶血性鏈球菌。

(2)菌落細(xì)孝半透明、有草綠色溶血環(huán)、涂片為革蘭陽性球菌呈鏈狀排列，可能為甲型溶血性鏈球菌。需要進(jìn)一步與肺炎球菌區(qū)別時(shí)，可做膽汁溶菌試驗(yàn)及菊糖發(fā)酵反應(yīng)。

菌落細(xì)小半透明、不溶血、涂片為革蘭陽性鏈狀排列的球菌時(shí)，為丙型鏈球菌。

(4)菌落扁平邊緣隆起、中央稍凹、半透明、呈草綠色溶血、革蘭染色為陽性雙球菌、呈矛頭狀排列時(shí)為肺炎球菌，應(yīng)以膽汁溶菌及菊糖發(fā)酵反應(yīng)與甲型溶血性鏈球菌區(qū)分。

(5)菌落中等大孝表面光滑、呈灰色、革蘭染色為陰性雙球菌，呈腎形排列時(shí)，可能為腦膜炎球菌，需要進(jìn)一步作氧化酶試驗(yàn)及糖發(fā)酵試驗(yàn)(接種于含血清之葡、麥、蔗糖發(fā)酵管中)。

二、糞便標(biāo)本中腸道桿菌的分離與鑒定

(一)標(biāo)本收集

取患者的糞便或肛-門拭子。

(二)鑒定程序

腸道桿菌為一大群革蘭陰性桿菌，從形態(tài)及染色性上無法鑒別為何種菌，只能依靠生化反應(yīng)和血清學(xué)反應(yīng)進(jìn)行鑒定。

患者糞便(粘液、膿血)→腸道選擇、鑒別培養(yǎng)基(如ss、中國(guó)藍(lán)、伊紅美蘭)

↓

挑取可疑菌落(據(jù)大孝顏色、透明度而定)

↓

雙糖鐵及其他鑒別培養(yǎng)基

↓

據(jù)結(jié)果分析鑒定

↓

玻片凝集(做出特異性診斷)

葡萄糖乳糖動(dòng)力H2S尿素

⊕⊕±--艾希菌屬非致病菌

⊕+---克雷伯菌屬

⊕±+++變形桿菌

⊕-++-乙型副傷寒致病菌

⊕-+±-甲型副傷寒

+-++-傷寒桿菌

+----痢疾桿菌

第五篇：細(xì)菌鑒定手冊(cè)

細(xì)菌鑒定手冊(cè)

一本有代表性的、參考價(jià)值極高、比較全面系統(tǒng)的細(xì)菌分類手冊(cè)，細(xì)菌鑒定手冊(cè)。由美國(guó)布瑞德等人主編。1923年第1版，后于1925、1930、1934、1939、1948、1957、1974年相繼出版了第2至第8版，每個(gè)版本都反映了當(dāng)時(shí)細(xì)菌學(xué)發(fā)展的新成就。其中第8版有美、英、德、法等 14個(gè)國(guó)家的細(xì)菌學(xué)家參加了編寫工作，對(duì)系統(tǒng)內(nèi)的每一屬和種都做了較詳細(xì)的屬性描述。近年來，由于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的滲透，大大促進(jìn)了細(xì)菌分類學(xué)的發(fā)展，使分類系統(tǒng)與真正反映親緣關(guān)系的自然體系日趨接近。第9版(1984，1986)中實(shí)質(zhì)性的變化，象征著細(xì)菌分類學(xué)的發(fā)展進(jìn)入新的階段。第一，手冊(cè)更名，原書名為《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》，第9版由于內(nèi)容增加，范圍擴(kuò)大，提高了手冊(cè)的實(shí)用性，同時(shí)指出各類細(xì)菌間的關(guān)系，所以改名為《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》;第二，由1卷分成4卷，這是考慮到能及時(shí)反映新進(jìn)展和使用者的方便;第三，細(xì)菌在生物界的地位，8、9版間無變動(dòng)，但它們的高級(jí)分類單位有很大變化，尤其嗜鹽細(xì)菌和產(chǎn)甲烷細(xì)菌，根據(jù)胞壁分析和DNA序列分折，另列疵壁菌門，古細(xì)菌綱;第四，趨近自然體系，在各級(jí)分類單位中全面應(yīng)用核酸研究;在表型特征的基礎(chǔ)上，以DNA資料給予決定性的判斷，鑒定材料《細(xì)菌鑒定手冊(cè)》。使人為的分類體系過渡到自然體系的理想進(jìn)一步付諸實(shí)現(xiàn)。

本書是在《一般細(xì)菌常用鑒定手冊(cè)》一書的基礎(chǔ)上編寫而成的。全書分兩大部分:第一部分主要介紹了伯杰(Bergey)系統(tǒng)、常見細(xì)菌的檢索表、屬的提要及種的鑒別等;第二部分介紹了幾種鑒定方法,包括常用的傳統(tǒng)分類基本方法和目前通用的分子生物學(xué)方法及快速鑒定和自動(dòng)化鑒定系統(tǒng)等。

常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)

編者評(píng)論004km.cn

常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)東秀珠蔡妙英等編著科學(xué)出版社目錄序使用說明緒論第一部分常見 細(xì)菌屬的特征描述第一章光合細(xì)菌第二章產(chǎn)芽孢細(xì)菌第三章好氧或兼性厭氧發(fā)酵型革蘭氏...閱讀完整評(píng)論內(nèi)容

常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)

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