第一篇：物理化學(xué)在醫(yī)學(xué)檢驗上的應(yīng)用

物理化學(xué)在醫(yī)學(xué)檢驗上的應(yīng)用

物理化學(xué)學(xué)科是化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院四大基礎(chǔ)學(xué)科之一，是一門重點學(xué)科，物理化學(xué)課程為校級重點課程和省級精品課程。承擔(dān)著化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院化學(xué)系、應(yīng)用化學(xué)系、材料科學(xué)系物理化學(xué)課程、基礎(chǔ)實驗課、專業(yè)和公共選修課程。物理化學(xué)是研究化學(xué)現(xiàn)象和物理現(xiàn)象之間的相互聯(lián)系，用物理手段（如：熱、功、壓力、溫度等的測量）來研究化學(xué)現(xiàn)象，以便找出化學(xué)過程中某些最具普遍性的一般規(guī)律的科學(xué)。物理化學(xué)學(xué)科的產(chǎn)生與發(fā)展是為了解決生產(chǎn)實踐和科學(xué)實驗中對化學(xué)現(xiàn)象提出的一些理論問題，從而在理論上指導(dǎo)人們更好地利用化學(xué)反應(yīng)來造福人類。

物理化學(xué)是從物質(zhì)的物理現(xiàn)象和化學(xué)現(xiàn)象的聯(lián)系入手來探求化學(xué)變化基本規(guī)律的一門學(xué)科，它并不是一些人所理解的是物理與化學(xué)的簡單組合。對于生命科學(xué)工作者來說，物理化學(xué)有極大的指導(dǎo)作用，利用物理化學(xué)的基本概念，可以解釋和闡明許多生命現(xiàn)象，并用以指導(dǎo)生命科學(xué)研究工作。

第二篇：分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用進展

分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用進展

[摘要] 分子生物學(xué)技術(shù)是醫(yī)學(xué)檢驗的重要診療手段。本文概述醫(yī)學(xué)檢驗中常用的分子生物學(xué)技術(shù)，列舉其在臨床病原微生物檢驗、腫瘤診斷及評估、遺傳病診斷、免疫系統(tǒng)疾病診斷中的具體應(yīng)用，分析分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用中應(yīng)注意的問題，并對發(fā)展趨勢進行預(yù)測。

[關(guān)鍵詞] 分子生物學(xué)技術(shù)；醫(yī)學(xué)檢驗；應(yīng)用；

進展分子生物學(xué)是以核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子為研究對象的學(xué)科，分子生物學(xué)技術(shù)即建立在核酸生化基礎(chǔ)上的一類研究手段，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗中。研究內(nèi)容也從DNA鑒定、擴展到核酸及表達產(chǎn)物分析，技術(shù)不斷進步為原微生物檢驗、腫瘤診斷及評估、遺傳病診斷、免疫系統(tǒng)疾病診斷提供重要依據(jù)和創(chuàng)新思路?，F(xiàn)就分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用進展進行綜述，試分析應(yīng)注意的問題及預(yù)測發(fā)展趨勢。

醫(yī)學(xué)檢驗中常用的分子生物學(xué)技術(shù)概述

分子生物學(xué)技術(shù)的核心是聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，能在最短的時間內(nèi)擴增。由此衍生出新PCR技術(shù)，如原位PCR技術(shù)、實時定量PCR、鏈置換擴增技術(shù)、LCR、NASBA、TAS等。此外，生物芯片技術(shù)、核酸探針技術(shù)、生物傳感器、SELEX技術(shù)、循環(huán)核酸分析技術(shù)都極大的完善了檢驗技術(shù)，直接解釋生命規(guī)律，在臨床診斷和治療中意義重大。

分子生物學(xué)技術(shù)在臨床中的具體應(yīng)用

2.1 病原微生物檢驗 PCR和生物芯片技術(shù)用于病原微生物檢驗術(shù)與傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定、免疫測定相比，其具有高的敏感性，較短的耗時和更廣的適用范圍[1]。PCR通過向反應(yīng)管中加入特異性引物可同時鑒定出單種或多種病原體，即便存在大量死菌也能得到準確結(jié)果，不受混合標本和微生物生長時間的限制。生物芯片技術(shù)則以其更高的靈敏性和高效率，同時檢測出上百種病原微生物，可用于快速查找樣本的耐藥基因指導(dǎo)臨床用藥。

2.2 腫瘤及遺傳病診斷 研究證實腫瘤及遺傳病幾乎都存在著一定的基因缺陷，只要找到人體中與基因相互作用的結(jié)合點，從基因水平診斷就能準確診斷。通過基因芯片判定靶基因P53抑癌基因的突變，通過分子蛋白質(zhì)組學(xué)、生物傳感器和流式細胞術(shù)診斷腫瘤特異性標志物。在遺傳病中，分子生物技術(shù)能識別患病家族基因存在的特定多態(tài)性，常用技術(shù)有DNA限制性片段長度多態(tài)性分析，單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，熒光原位雜交染色體分析，酶基因調(diào)控和微陣列技術(shù)。

2.3 免疫系統(tǒng)疾病診斷 免疫系統(tǒng)疾病診斷關(guān)鍵是確定基因水平上的調(diào)控表達。如在人類免疫缺陷病毒的研究中，分子生物納米技術(shù)即以抗體為基礎(chǔ)，用免疫分析和磁性修飾的方法來檢測免疫物質(zhì)，通過酶、熒光劑、同位素把特異的抗體抗原與納米磁性微球固定，既能自動檢測人免疫缺陷病毒1型和2型抗體，為人類防治病毒性疾病提供了有力的武器。

分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗應(yīng)用的新進展

現(xiàn)階段分子生物學(xué)新技術(shù)的發(fā)展方興未艾，給人們提供了探索人類生命科學(xué)的工具，推動了檢驗學(xué)發(fā)展。分子生物技術(shù)最顯著的醫(yī)學(xué)成就是對遺產(chǎn)病中的致病基因的準確定位及克隆，早在1998年就完成了遺傳性耳聾的基因克??；2003年SARS肆虐時，科學(xué)家就研制出專門診斷該病的基因芯片；2004年后實現(xiàn)了用多重PCR技術(shù)對我國新生兒多發(fā)的地中海貧血、苯丙酮尿癥、G6DP缺乏癥的產(chǎn)前和病例診斷；近年來，遺傳標記技術(shù)的進步，結(jié)合現(xiàn)有分子學(xué)研究技術(shù)，加速了遺傳基因圖譜的制作和相關(guān)疾病的基因檢測和鑒定，從而為醫(yī)學(xué)檢驗的加速發(fā)展提供了有效的載體。

存在問題及發(fā)展趨勢

現(xiàn)階段面臨的問題主要是技術(shù)相對復(fù)雜和儀器要求太高、藥品和反應(yīng)盒昂貴等[2]，限制了臨床推廣。首先，合理選用檢驗項目的問題，分子生物學(xué)方法具有高特異性和高靈敏性，但臨床中仍要根據(jù)實際需要選用經(jīng)濟合理的檢驗項目，如結(jié)核菌培養(yǎng)和涂片鏡檢就能達到目的，不必舍廉選貴，增加患者負擔(dān)。其次，疾病診斷過度依賴檢驗結(jié)果問題，應(yīng)將臨床資料綜合考慮，不能僅靠分子生物學(xué)技術(shù)檢驗結(jié)果就妄下診斷，忽略標本取樣和檢驗過程中的操作不當(dāng)及病程發(fā)展規(guī)律造成的假陽性或是假陰性，貽誤病情。再者，上級部門管理不足問題，國家相關(guān)部門要擔(dān)任監(jiān)管的職責(zé)，參考國際慣例，制定符合我國醫(yī)學(xué)檢驗現(xiàn)狀的實驗操作管理規(guī)章制度，嚴格培訓(xùn)檢驗人員，規(guī)范試劑的準入和儀器的管理，最大程度保證檢驗結(jié)果的可信度。

雖然分子生物技術(shù)在臨床推廣應(yīng)用中存在著許多尚待解決的問題，但是它仍然顯現(xiàn)出了快速發(fā)展的趨勢。未來其發(fā)展會傾向于：①現(xiàn)有、僅停留在實驗室的分子生物學(xué)技術(shù)逐步向臨床實用型改進，降低實驗投入、簡化操作步驟，推進實驗過程全自動化的實施降低人為因素對結(jié)果的影響，根據(jù)臨床實際修正技術(shù)，提高檢驗的特異性和敏感性。②積極推進實驗室建設(shè)，加大儀器和檢驗人員的培訓(xùn)投入，為分子生物學(xué)的臨床應(yīng)用提供必要的基礎(chǔ)保障，以先進的、可持續(xù)性的實驗檢驗手段為臨床提供可靠的依據(jù)。

參考文獻

[1] Yuregir OO,Sahin FI,Yilmaz Z,et al.Fluorescent in situ hybrid-ization studies in multiple myeloma[J].Hematology,2009,14(2):90-94.[2] 李鵬.現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2007,3(6):161.PCR在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用 關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)檢驗應(yīng)用PCR現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗

王耿新 劉德亮 王志群 陳獻業(yè)

山東省青島市腫瘤醫(yī)院 青島 266042

聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）又稱體外基因擴增技術(shù)或 DNA 擴增技術(shù)。自 1985 年美國 PE-Cetus 公司的 K.B Mullis 等人首創(chuàng)了 PCR 技術(shù)之后，它以相當(dāng)驚人的速度被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)等各個領(lǐng)域?，F(xiàn)今，PCR 技術(shù)已成為一種對標本中特定的 DNA 片段進行分析研究和檢測鑒定的重要方法。近20 年來 PCR 技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)等各個研究領(lǐng)域和臨床應(yīng)用中發(fā)揮了重大的作用，在病原體鑒定、遺傳病診斷、免疫學(xué)研究、癌基因探索及治療等方面都作出了相應(yīng)的貢獻。

1.PCR 技術(shù)的基本原理與特點 [1-2]

PCR 技術(shù)的基本原理是模仿 DNA 體內(nèi)復(fù)制的機制，在體外進行擴增特異的 DNA 片段。它主要是由三個基本步驟組成的循環(huán)反應(yīng)。首先是變性，用加熱的方法使雙鏈 DNA 解鏈成兩股單鏈；其次是復(fù)性，用降溫的辦法使這兩股單鏈按堿基互補的原則分別與加入的兩條人工合成的寡聚核苷酸鏈（引物）結(jié)合成雙鏈；最后是延伸，在合適的緩沖液、鎂離子及脫氧核苷酸存在的條件下，用 DNA 聚合酶進行催化，按堿基配對的原則合成互補鏈。引物從 3 '端進行延伸，合成的方向為 5 '端（一條人工合成的引物）至 3 '端，從而合成與模板 DNA 結(jié)構(gòu)相同的片段。重復(fù)上述三步驟，變性→復(fù)性→引物延伸的過程，經(jīng)過約 30 個周期的循環(huán)（每三個步驟為一周期，約需 2-3 分鐘），1-2 小時就能將所需基因擴增幾百萬倍，使極微量的所需 DNA 達到極易檢測的水平。其擴增效率公式為： Y=（1+X）n，式中 Y 為擴增數(shù)目，X 為放大效率，n 為循環(huán)次數(shù)。

PCR 技術(shù)具有敏感性高、特異性強、操作簡便、快速省時等特點。其靈敏度可達到 Pg 級，甚至達到 fg 級 [3] 水平，而被擴增的基因片段能與原基因片段保持不變。PCR 技術(shù)操作簡便、快速而易掌握，并且對標本要求不高。用過去的方法完成一項試驗少則幾周，多則幾個月。應(yīng)用全自動 DNA 擴增儀，整個 PCR 過程均由電腦控制，只需數(shù)小時即可完成整個試驗過程，用極微量的粗制標本就可獲取目的產(chǎn)物。

2.常用的幾種 PCR 及主要用途 [4-5]

2.1 定量 PCR ：用于 mRNA 定量及轉(zhuǎn)錄水平的研究。

2.2 抗原捕獲 PCR（AC-PCR）：用于病毒感染的檢測。

2.3 不對稱 PCR（Asymmetric PCR）：用于制備探針或測序。

2.4 彩色 PCR（CCA-PCR）“用于檢測某些多型別病毒的混合感染。

2.5 原位逆轉(zhuǎn)錄 PCR（In Situ RT-PCR）：定位檢測細胞中 RNA 病毒感染。

2.6 逆轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）：用于克隆 cDNA、檢測 RNA 病毒、cDNA 探針。

2.7 反向 PCR（inverted PCR）：用于擴增已知基因片段兩側(cè)的未知序列。

2.8 膜 PCR（membrane-bound PCR）：可去除污染的雜質(zhì)或 PCR 產(chǎn)物殘留，檢測低豐度靶 DNA。

2.9 間接原位 PCR（Indirect In Situ PCR）：定位檢測細胞中 DNA 病毒感染，是目前應(yīng)用較廣泛的一種原位 PCR 技術(shù)，其特異性比直接 PCR 強。

3.PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的地位

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，人類疾病多數(shù)是直接或間接與基因有關(guān) [6]，如腫瘤、糖尿病和心血管疾病等。在醫(yī)學(xué)實驗診斷中我們經(jīng)歷了生化和免疫診斷的發(fā)展過程，由于各類擴增技術(shù)的出現(xiàn)使我們進入了基因診斷的新時代并成就了現(xiàn)代意義基因診斷的崛起。這將改變以往對疾病的表型認識和表型診斷，從本質(zhì)上認識疾病和診斷疾病。在各類擴增技術(shù)中，PCR 的地位尤為突出。目前，全世界利用 PCR 技術(shù)診斷感染性疾病每年達幾千萬人次，其費用早已大幅下降，說明 PCR 有著巨大的潛在市場。美國臨床檢驗標準化委員會于 1995 年頒布了關(guān)于感染性疾病分子診斷應(yīng)用范圍、條件和質(zhì)量控制細則等準則文件 [7]。而國際臨床化學(xué)學(xué)會于 1998 年又發(fā)布了關(guān)于分子擴增在臨床診斷中應(yīng)用的質(zhì)量評估基礎(chǔ)的文件并對 PCR 操作的各個環(huán)節(jié)進行了詳細論述 [8]。由此可見，兩個權(quán)威性文件也都肯定了 PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗方面的重要性?；蛟\斷可能將是以后的發(fā)展方向并作為疾病的常規(guī)診斷技術(shù)。

4.PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用

4.1 PCR 技術(shù)在腫瘤方面的應(yīng)用

目前，腫瘤發(fā)病的分子機制尚不完全清楚。研究表明，人類許多常見的腫瘤疾病與某些病毒病因及腫瘤相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變有著密切的關(guān)系。PCR 技術(shù)的腫瘤病毒病因、腫瘤相關(guān)基因、腫瘤相關(guān)抑癌基因等研究方面已取得可喜成果。

據(jù)有關(guān)資料表明 [1，4] 前列腺癌、結(jié)腸癌和 Kaposi 肉瘤等與人巨細胞病毒（CMV）有關(guān)；鼻咽癌和 Burkitt 淋巴瘤與 EB 病毒有關(guān)；原發(fā)性肝癌與乙型肝炎病毒（HBV）有關(guān)；泌尿道腫瘤和食道腫瘤等與人乳頭瘤病毒（HPV）有關(guān)。人類腫瘤病毒病因中較為重要的一類病毒是 HPV，其中大部分只與良性增生有關(guān)，只有 16、18、31、35、39 等十余型與惡性腫瘤關(guān)系密切。PCR 在檢測 HPV，尤其是第 16、18 型有無感染，對子宮頸癌的早期診斷及預(yù)防有著顯著的意義。

目前，已知腫瘤相關(guān)基因有上百多種，但較常見的是 ras 家族的 H-ras、K-ras 和 N-ras 三種癌基因。它們的結(jié)構(gòu)相似，其表達產(chǎn)物是 P21 蛋白。在不同腫瘤中 ras 家族癌基因的 H-ras、K-ras 點突變多集中在第 12 和 61 號密碼子上，而 N-ras 在第 13 號密碼子上多發(fā)生突變。PCR 在癌基因的研究方面主要是 ras 基因與腫瘤的關(guān)系。現(xiàn)已查明與 ras 基因突變有關(guān) [1，2，4，9，10] 的腫瘤有幾十種。如：各種急性慢性白血病、精原細胞癌、惡性黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤、卵巢癌、胰腺病、肺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、子宮瘤等。Rb 基因 [11] 是人類最早（1986 年）發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，其后又相繼發(fā)現(xiàn)了 P53、WT1、NF1、DCC、MCC、APC、P16 和 P21 等抑癌基因。在遺傳性視網(wǎng)膜母細胞瘤研究中發(fā)現(xiàn)位于 13 號染色體上 Rb 基因的缺失與癌變有關(guān)。在許多常見腫瘤，如骨肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤中，常發(fā)現(xiàn)該基因失活 [11]。在對 P53 基因的研究中 [12-14] 發(fā)現(xiàn)該基因的突變和缺失是許多腫瘤發(fā)生的原因，這些腫瘤主要有子宮頸癌、肝癌、成骨肉瘤等。遺傳學(xué)改變主要是引起癌基因激活和抑癌基因的失活，使基因發(fā)生突變、缺失、增加和易位等而導(dǎo)致了細胞癌變。PCR 不但能有效地檢測基因的突變、重排、易位等，而且能準確檢測癌基因表達量，可據(jù)此進行腫瘤早期診斷、鑒別、分型、分期、治療及預(yù)后評估等。

近年，剛興起的熒光定量逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR [10] 在腫瘤診斷、治療和微轉(zhuǎn)移以及微小殘留病灶檢測等方面具有廣泛的應(yīng)用價值。研究表明，癌細胞或癌前期細胞在進入血液循環(huán)以后，通過定量 RT-PCR 檢測外周血腫瘤特異性標志物 mRNA，可進行實體腫瘤的篩查，檢測腫瘤術(shù)后及淋巴轉(zhuǎn)移陰性的病人外周血腫瘤細胞的數(shù)量，以便估計腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，制訂合理的治療方案。另外，定量 RT-PCR 還可用于腫瘤耐藥基因（MDR1）[10] 表達水平檢測，為臨床篩選化療藥物及治療方法提供依據(jù)。

4.2 PCR 技術(shù)在遺傳病方面的應(yīng)用

PCR 技術(shù)首次臨床應(yīng)用 [10] 就是從檢測鐮狀細胞和 β-地中海貧血的基因突變開始的。十幾年來，該技術(shù)在遺傳病診斷的臨床應(yīng)用方面獲得了極大的成功。它能用于檢測已知基因序列的任何遺傳病基因的突變，如倒位、缺失 / 插入、動態(tài)突變、部分高發(fā)的點突變及表達量的異常等都可通過基因分析直接檢測用于臨床進行診斷，像地中海貧血、血友病、杜氏肌營養(yǎng)不良癥、脆 X 綜合征、苯丙酮尿癥等這些遺傳性疾病。PCR 在遺傳病診斷及遺傳病預(yù)防與產(chǎn)前基因診斷方面具有明顯的應(yīng)用價值，PCR 產(chǎn)物直接測序已成為檢測遺傳病基因突變的常用方法。另外，PCR 在鑒定編碼抗生素耐藥性基因 [10]，尤其是在細菌不攜帶同源性序列且取單個菌落進行 PCR 擴增時，具有較高的特異性和敏感性。

4.3 PCR 技術(shù)在感染性疾病方面的應(yīng)用 目前 PCR 在醫(yī)學(xué)檢驗中對感染性疾病的診斷 [10，15] 極具突出，只要核酸序列是清楚的，就可以檢測到任何有限的病原體。一般實驗室可檢出 10-100 個基因拷貝，而目前，病原體抗原檢測方法一般需要 10 5 ～ 10 7 個病原體才能檢測到。PCR 技術(shù)的運用解決了免疫學(xué)檢測的“窗口期”問題，可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。再者，抗體檢測不能判定是現(xiàn)癥感染還是既往感染時，也需要用 PCR 方法來確定。另外，病原體感染后的發(fā)病時間和病情輕重均與病原體數(shù)量有關(guān)。如艾滋?。ˋIDS）由人免疫缺陷病毒（HIV）感染后，可根據(jù) HIV 檢測的含量預(yù)知發(fā)病的時間。因為 AIDS 潛伏期的長短和臨床癥狀的輕重與血液中的病毒量呈顯著相關(guān)。在其它病毒性疾病中也多半存在類似情況，這均需 PCR 來定量說明。

PCR 在 HBV 定量研究中表明，HBV 載量與肝炎的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后以及與藥物療效有關(guān)，并證明定量 PCR 是鑒別 HBV 感染各期的良好工具。該技術(shù)能有效地確定血清 HBeAg 轉(zhuǎn)陰和非活動性攜帶者病人的 HBV DNA 水平，而常規(guī)雜交法則對這些低病毒血癥的 HBV DNA 探測不到。在抗病毒治療中，通過定量 PCR 檢測 HBV 的載量，來觀察拉咪呋啶及多種聯(lián)合用藥治療慢性乙型肝炎的療效具有指導(dǎo)意義。

PCR 對某些傳染性疾病疫苗接種后感染的鑒別也是極為重要的。例如：腮腺炎病毒疫苗接種后感染的病例時有發(fā)生，是疫苗引起的還是野生型腮腺炎病毒引起的，這就需要一種行之有效的方法來進行鑒別，以往的血清學(xué)、病毒培養(yǎng)及探針雜交等方法都很難做到。

過去，對結(jié)核病等其他分支桿菌病的診斷方法雖然很多，但均不夠理想。簡便易行的方法經(jīng)常查不到抗酸桿菌，也無法鑒別結(jié)核桿菌與其他分支桿菌。用分支桿菌培養(yǎng)的方法且陽性率較低又耗時，而麻風(fēng)桿菌在體外又不能培養(yǎng)，主要靠感染組織的涂片或切片鏡檢。其他方法，如血清學(xué)、氣相色譜等方法的敏感性及特異性都不夠理想，PCR 技術(shù)的運用使上述問題得到了解決。還有 PCR 技術(shù)在技術(shù)性病監(jiān)控和性病病原體的檢測方面也正在擴大，并列為監(jiān)控手段和作為檢測的金標準。

5.PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗應(yīng)用中的問題 5.1 假陽性

通常 PCR 在醫(yī)學(xué)檢驗應(yīng)用中所面臨的問題之一是擴增產(chǎn)物污染帶來的假陽性，而實驗室污染又是假陽性的主要因素。只要實驗室被擴增產(chǎn)物污染，擴增片段隨時都可能污染新的樣本并又被同一 PCR 反應(yīng)體系擴增出來而產(chǎn)生假陽性。解決的根本措施就是在封閉狀態(tài)下進行擴增和產(chǎn)物分析。近年發(fā)展了一種熒光定量 PCR 技術(shù)，從根本上解決了 PCR 擴增產(chǎn)物污染和不能定量的問題。該技術(shù)把基因擴增 PCR、分子雜交和光化學(xué)融為一體，實現(xiàn)了對 PCR 擴增產(chǎn)物進行全過程的封閉，并進行實時動態(tài)檢測和自動分析結(jié)果，進一步提高了其特異性。由于造成假陽性的因素相對單一，因此假陽性并不是困惑檢驗工作的主要原因。

5.2 假陰性

PCR 假陰性的原因相對較為復(fù)雜，主要包括有儀器設(shè)備的質(zhì)量、試劑開殼劑和操作問題、PCR 產(chǎn)物的電泳檢測時間及有關(guān) PCR 反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)等。PCR 儀本身的質(zhì)量問題能使擴增效率下降或造成非特異性擴增而出現(xiàn)假陰性或假陽性。離心機的質(zhì)量問題或使用不正確，可造成離心標本模板不能分離而產(chǎn)生假陰性。試劑開殼劑和操作問題造成標本 DNA 沒有暴露出來，致使擴增無法進行而導(dǎo)致假陰性。PCR 產(chǎn)物的電泳檢測時間一般為 48h 以內(nèi)，大于 48h 后帶型不規(guī)則甚致消失不出現(xiàn)擴增條帶而程現(xiàn)假陰性。PCR 反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有模板核酸的制備、引物的質(zhì)量與特異性、酶的質(zhì)量及 PCR 循環(huán)條件等，在這些環(huán)節(jié)中操作不當(dāng)都可引起假陰性。另外，Mg 2+ 濃度和物理因素變性等對 PCR 擴增效率影響也很大。Mg 2+ 濃度過高可降低 PCR 擴增的特異性，濃度過低則影響 PCR 擴增產(chǎn)量。而變性溫度低，變性時間短，極有可能出現(xiàn)假陰性；退火溫度過低，可致非特異性擴增而降低異性擴增效率；退火溫度過高，影響引物與模板的結(jié)合而降低 PCR 擴增效率，最終都可導(dǎo)致 PCR 擴增失敗。還有靶序列變異使引物與模板失去互補序列，其 PCR 擴增也不會成功。

6.PCR 技術(shù)的應(yīng)用前景 自從 PCR 技術(shù)誕生以來，隨著其深入不斷的發(fā)展與完善，許多與其相關(guān)的新類型及改良的新方法在不斷的涌現(xiàn)，這些派生出的新類型和新方法解決了以往傳統(tǒng) PCR 的瓶頸問題。雖然，PCR 可對基因分析直接檢測用于臨床進行診斷，但大部分基因突變還是難以直接檢測。近年來，分子診斷技術(shù)最大突破就是集擴增、檢測和靶定量于一體的實時熒光 PCR 技術(shù)的問世。該技術(shù)的出現(xiàn)，對基因檢測和基因分型的應(yīng)用范圍將進一步擴大，為 PCR 的臨床應(yīng)用帶來曙光。因此，PCR 技術(shù)將有極大的發(fā)展空間和廣泛的應(yīng)用前景，它將對腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)和基因治療等進一步研究及臨床應(yīng)用起著積極重要的作用。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗中，PCR 的應(yīng)用將更加廣泛和深入。相信在不久的將來，隨著 PCR 技術(shù)的更進一步完善，它將作為常規(guī)檢驗方法進行全面普及，發(fā)揮更大的作用，為全人類健康做出更大的貢獻。

參考文獻

1.楊道理 , 王寶成主編.DNA 擴增技術(shù)與醫(yī)學(xué)應(yīng)用.濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社.1992,51-54,283,396.2.郭永軍.聚合酶鏈式反應(yīng)在腫瘤研究中的應(yīng)用.國外醫(yī)學(xué)腫瘤分冊.1991,18(1):1-3.3.陳志杰主編.醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù).濟南 : 山東科學(xué)技術(shù)出版社.1993 ： 544.4.陳意生 , 史景泉主編.腫瘤分子細胞生物學(xué).北京：人民軍醫(yī)出版社.2002 ： 190-192,270,287-288.5.楊占秋 , 劉建軍 , 肖紅 , 等主編.診斷與實驗病毒學(xué).鄭州 : 鄭州大學(xué)出版社.2002:167-169.6.T.D.蓋萊哈特 , F.S.柯林斯 , D.金斯伯格主編.孫開來主譯.醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)原理.北京 : 科學(xué)出版社.2001:92-116.7.Enns RK, Bromley SE, Day SP, et al.Molecular diagnostic methods for infectious diseases;approved guideline.Natl Commit Clin Lab Stand, 1995:1-10.8.Neumaier M, Braun A, Wagener C.Fundamentals of quiality assessment of molecular amplification methods in clinical diagnostics(IFCC document).Clin Chem, 1998,44:12-26.9.王俊茹 , 鄧國仁 , 劉為俊.ras 基因突變與人類腫瘤.癌癥.1993,12(1):82-83.10.盧圣棟主編.生物技術(shù)與疾病診斷——兼論人類基因治療.北京：化學(xué)工業(yè)出版社.2002 ： 83-98,117,142.11.顧健人 , 曹雪濤 , 主編.基因治療.北京：科學(xué)出版社.2001:120-121.12.May Wong, Jack Gruber.Viral Interactions with the P53 Gene in Human Cancer.Journal of the National Cancer Institute, 1994,86(3):177.13.李貸宗 , 曹宇清 , 何麗萍 , 等.人原發(fā)性肝癌 P53 基因缺失和突變.腫瘤.1991,11(5):195.14.陳竺 , 強伯勤 , 方福德主編.基因組科學(xué)與人類疾病.北京：科學(xué)出版社.2001 ： 176.15.Tang YW, Procop GW.Persing DH.Molecular diagnostics of infectious diseases.Clin Chem.1997,43:2021-2038.

第三篇：分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)檢驗中的臨床應(yīng)用及前景

分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)檢驗中的臨床應(yīng)用及前景 班級：2013級科碩6班 專業(yè)：臨床檢驗診斷學(xué) 姓名：姜世濤

學(xué)號：20*** 評分： 導(dǎo)師簽名：

分子生物學(xué)是一門正在蓬勃發(fā)展的學(xué)科，新技術(shù)和應(yīng)用條件的不斷出現(xiàn)，為檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展提供了嶄新的時代并提供新的機遇和挑戰(zhàn)。分子生物學(xué)是以核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子為研究對象的學(xué)科，分子生物學(xué)技術(shù)即建立在核酸生化基礎(chǔ)上的一類研究手段，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗中，同時也逐漸滲入數(shù)理科學(xué)、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、功能基因組學(xué)和環(huán)境基因組學(xué)，研究內(nèi)容也從DNA鑒定、擴展到核酸及表達產(chǎn)物分析，技術(shù)不斷進步為微生物檢驗、腫瘤診斷及評估、遺傳病診斷、兔疫系統(tǒng)疾病診斷提供重要依據(jù)和創(chuàng)新思路。在結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、功能基因組學(xué)和環(huán)境基因組學(xué)蓬勃發(fā)展形勢下，分子診斷學(xué)技術(shù)將會取得突破性進展。一．利用分子生物學(xué)技術(shù)檢測樣品中核酸水平

PCR[1]技術(shù)是目前應(yīng)用較廣泛和成熟的臨床檢測方法，在法醫(yī)學(xué)、常見傳染病、性病、寄生蟲和優(yōu)生優(yōu)育等領(lǐng)域有很高的應(yīng)用價值，尤其對肝炎病毒的早期診斷。1．核酸分子雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)

核酸分子雜交技術(shù)也稱為基因探針技術(shù)，利用核酸的變性、復(fù)性和堿基互補配對的原理，用已知的探針序列檢測樣本中是否含有與之配對的核苷酸序列的技術(shù)，是印跡雜交、基因芯片等技術(shù)的基礎(chǔ)。目前基因芯片技術(shù)可廣泛應(yīng)用在腫瘤基因表達譜差異研究、基因突變、基因測序、基因多態(tài)性分析、微生物篩選鑒定、遺傳病產(chǎn)前診斷等方面。另外，現(xiàn)已獲得一些微生物的全基因序列，包括百余種病毒，多種細菌(流感嗜血桿菌、產(chǎn)甲烷球菌及實驗室常用的大腸桿菌等)和一些酵母等。因此，將一種或多種病原微生物的全部或部分特異的保守序列集成在一塊基因芯片上，可快速、簡便地檢測出病原體，判斷侵入機體引起感染性疾病的病原微生物(病毒、細菌或寄生蟲等)，從而對疾病作出診斷及鑒別診斷。2．單核苷酸多態(tài)性分析(SNP)技術(shù)

在人群中，個體基因的核苷酸序列存在差異性，稱為基因多態(tài)性?；蚨鄳B(tài)性位點普遍存在于人的基因組中。如果在某個家庭中，某一致病基因與特定的多態(tài)性片段緊密連鎖，就可以用這一多態(tài)性片段作為一種”遺傳標記”來判斷家庭成員或胎兒是否攜帶有致病基因。目前認為基因多態(tài)性是個體的”身份證”，因此，基因多態(tài)性分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于群體遺傳學(xué)研究、疾病連鎖分析和關(guān)聯(lián)分析、疾病遺傳機制研究、腫瘤易感性研究、個性化用藥等諸多方面。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)分析技術(shù)為臨床檢測提供了依據(jù)。SNP是一種最常見的遺傳變異，在人類DNA多態(tài)性中，SNP約占90％。SNP是指在基因組內(nèi)特定核苷酸位置上存在兩種不同的堿基。SNP與RFLP和STR等DNA標記的主要不同在于：它不再以”長度”的差異作為檢測手段，而是直接以序列的差異作為標記。由于SNP是二態(tài)的，易于自動化批量檢測，易于計算機分析結(jié)果，因此SNP檢測已廣泛地應(yīng)用于疾病的連鎖分析及關(guān)聯(lián)分析、腫瘤的雜合性缺失研究、疾病遺傳機制研究、個性化用藥研究等諸多領(lǐng)域。盡管SNP檢測在搜尋疾病基因方面有潛在的價值，但實際應(yīng)用中卻比人們想象的要難得多，它需要花費大量的時間進行篩查，才能建立可靠的SNP分析圖譜。3．microRNA是潛在的臨床診斷工具 microRNAs(miRNAs)是一類分布廣泛的小的非編碼蛋白質(zhì)的RNAs，其功能是負調(diào)控基因表達。在正常組織中，miRNA轉(zhuǎn)錄，加工，結(jié)合到靶mRNA的互補位點，通過抑制蛋白翻譯或是改變mRNA的穩(wěn)定性來抑制基因表達，維持細胞生長、增殖、分化和死亡的正常進行。不同miRNA的分布有組織特異性，因此在生理和病理條件下，miRNA的表達水平存在差異。成熟miRNA水平下降可能是由于miRNA生物合成的任何步驟的缺陷造成的，而這最終將導(dǎo)致不適當(dāng)?shù)膍iRNA的靶蛋白的表達。最后的結(jié)果可能導(dǎo)致過度增殖、侵入、凋亡的減少、不能正常分化或者去分化，引起腫瘤的形成。最近的證據(jù)表明，miRNA突變或者異位表達與多種人類癌癥相關(guān)，miRNAs可以起到腫瘤抑制基因或者癌基因的功能。目前已知的miRNA中，大約50％在基因組上定位于與腫瘤相關(guān)的脆性位點，這說明miRNAs在腫瘤發(fā)生過程中起了至關(guān)重要的作用。例如，mir-125b一1，線蟲lin一4的同源基因，在染色體的1lq24脆性位點，在很多乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌病人中有缺失。若能確定多種腫瘤的miRNA表達譜特征庫，可以幫助診斷和治療腫瘤。由于miRNAs可以從福爾馬林固定的石蠟包埋的樣品中分離出來，這使得miRNA表達譜特征庫建立成為可能。在此基礎(chǔ)上，用特定的miRNAs表達差異圖譜，還可以用于預(yù)測病人的預(yù)后。另外從治療的角度，miRNA表達譜可能為臨床上確定一個治療方案提供一個強有力的工具。

二、蛋白組學(xué)技術(shù)在臨床檢驗中的應(yīng)用 隨著生物體全基因組序列的解析，特別是人類基因組序列草圖的完成，基因組學(xué)研究重點不可避免地從結(jié)構(gòu)基因組學(xué)轉(zhuǎn)向功能基因組學(xué)，因此在上世紀90年代中期，蛋白質(zhì)組學(xué)正研究成為基礎(chǔ)研究的重要支柱。蛋白組學(xué)是在基因組學(xué)之后又一組學(xué)，其發(fā)展之迅速，是由于其能夠較為全面的考察蛋白層面的表達情況，有利于獲得各種蛋白、多肽因子等信息從而對相關(guān)機制進行更深入的研究[2]。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的是在不同時間和空間發(fā)揮功能的特定蛋白質(zhì)群體，從而揭示和說明生命活動的基本規(guī)律。與基因組相比蛋白質(zhì)組具有多樣性和可變性，雖然可以通過PCR、基因芯片等方法顯示生物體的基因水平，但mRNA水平(包括mRNA的種類和含量)并不能完全反映出蛋白質(zhì)的表達。由此可見，對一個機體而言，基因的數(shù)目是恒定的，而蛋白質(zhì)的種類和數(shù)目在生理和病理等不同條件下，其表達也不同。若能獲得與某種疾病相關(guān)的蛋白水平的差異表達信息，將為臨床診斷、治療和預(yù)后提供有力依據(jù)。1．蛋白質(zhì)芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是近年來蛋白質(zhì)組學(xué)研究中興起的一種新的方法，它類似于基因芯片，是將蛋白質(zhì)點到固相物質(zhì)上，然后與要檢測的組織或細胞等進行”雜交”，再通過自動化儀器分析得出結(jié)果。這里所指的”雜交”是指蛋白與蛋白之間如(抗體與抗原)在空間構(gòu)象上能特異性的相互識別。例如免疫芯片，是一種特殊的蛋白質(zhì)芯片，它在臨床分子診斷學(xué)有著明顯的發(fā)展?jié)摿?，如腫瘤標志的檢測、不同激素的測定，自身免疫性疾病中多種自身抗體或抗原的檢測和超敏反應(yīng)中多種過敏原的篩查等。

2．液體芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)在臨床檢測中的應(yīng)用根據(jù)探針標記和色譜分析的原理，液體芯片飛行時間質(zhì)譜主要由兩部分組成：磁珠部分即液體芯片部分；飛行時間質(zhì)譜儀部分，用于獲取磁珠捕獲的蛋白質(zhì)質(zhì)量和含量，根據(jù)不同質(zhì)荷比的蛋白質(zhì)在長度一定的真空管中飛行所需時間不同，被測定的蛋白質(zhì)以一系列波鋒的形式出現(xiàn)，并由此繪制出待測蛋白的質(zhì)譜圖，可發(fā)現(xiàn)各樣本間的蛋白質(zhì)表達和含量的異同。

液體芯片一飛行時間質(zhì)譜技術(shù)利用磁珠俘獲腫瘤患者與健康對照體液中低豐度特異蛋白或多肽，經(jīng)飛行時間質(zhì)譜測定和軟件分析，建立由兩者差異表達蛋白或多肽組成的質(zhì)譜圖模型，用于預(yù)測未知樣品的歸屬。液體芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)主要用于從復(fù)雜體液如血清、血漿、尿液、唾液或腦脊液、組織裂解液、細胞培養(yǎng)上清液中發(fā)現(xiàn)潛在的生物標志物。一方面，該技術(shù)能夠在生物液體中檢測指示特異疾病的生物標志物模式或生物標志物譜，另一方面，該技術(shù)還可以鑒定單個的生物標志物候選物。在哈佛大學(xué)女子醫(yī)院、紐約斯隆-凱特琳癌癥研究所、麻省總醫(yī)院、貝勒醫(yī)學(xué)院等世界一流醫(yī)院和醫(yī)學(xué)研究所中，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤、頭頸鱗癌、膀胱癌等的早期診斷研究中。應(yīng)用該技術(shù)可協(xié)助診斷多種遺傳性代謝紊亂疾病，如各種氨基酸代謝失常血癥，包括胱氨酸尿癥、瓜氨酸血癥、酪氨酸血癥、超苯丙氨酸血癥、精氨酸缺乏癥、精氨琥珀酸尿癥和各種超甲硫氨酸血癥；短鏈核長鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥、異戊酸血癥、丙酸血癥、甲基丙二酸血癥、戊二酸血癥和其他各種有機酸代謝失常疾病等。由于液體芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)具有準確度高、快速、高通量、靈敏度高、重復(fù)性好、分辨率高、檢測費用低等特點，是極具潛力的臨床腫瘤早期診斷工具。

三．分子生物芯片技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用

隨著人類基因組計劃(HGP)的完成，蛋白質(zhì)組計劃也已經(jīng)啟動，基因序列數(shù)據(jù)、蛋白序列和功能數(shù)據(jù)以驚人的速度增長，而傳統(tǒng)的生物技術(shù)已經(jīng)不能滿足數(shù)據(jù)倍增的要求，生命科學(xué)需要更快捷、更準確的自動化的生物技術(shù)，而生物芯片在這種情況下應(yīng)運而生。生物芯片(biochip)的概念雖源于計算機芯片但不同于計算機芯片。狹義的生物芯片即微陣列芯片，主要包括cDNA微陣列、寡核昔酸微陣列、蛋白質(zhì)微陣列和小分子化合物微陣列。分析的基本單位是在一定尺寸的基片(如硅片、玻璃、塑料等)表面以點陣方式固定的一系列可尋找的識別分子，點陣中每一個點都可視為一個傳感器的探頭。芯片表面固定的分子在一定的條件下與被檢測物進行反應(yīng)，其結(jié)果利用化學(xué)熒光法、酶標法、同位素法或電化學(xué)法顯示，再用掃描儀等儀器記錄，最后通過專門的計算機軟件進行分析。而廣義的生物芯片是指能對生物成分或生物分子進行快速并行處理和分析的厘米見方的固體薄型器件。生物芯片技術(shù)是融微電子學(xué)、生物學(xué)、物理學(xué)、化學(xué)、計算機科學(xué)為一體的高度交叉的新技術(shù)，具有重大的基礎(chǔ)研究價值，又具有明顯的產(chǎn)業(yè)化前景。經(jīng)過十多年發(fā)展，生物芯片技術(shù)已日臻完善，其應(yīng)用前景非常廣闊，因其具有技術(shù)操作簡易、自動化程度高、檢測目的分子數(shù)量多、高通量等特點，為“基因組計劃”時期基因功能的研究及科學(xué)及醫(yī)學(xué)診斷學(xué)的發(fā)展提供了強有力的工具。在臨床檢驗醫(yī)學(xué)方面，生物芯片技術(shù)已經(jīng)被應(yīng)用于病毒、細茵的檢測自身兔疫性疾病的兔疫標志物的檢測。遺傳性疾病的檢測及腫瘤免疫標志物的單一檢測及其聯(lián)檢等方面。甘志遠等[3]通過呼吸道斑點試驗芯片法檢測呼吸道病毒抗體具有簡便快速、靈敏度和特異度高等優(yōu)點，是臨床呼吸道病毒感染輔助診斷的有效方法。值得推廣使用生物芯片具有操作簡單、信息量大、節(jié)約試劑、減少誤差、診斷快速的特點。在臨床診斷、科學(xué)研究和流行病學(xué)篩選中具有廣泛的應(yīng)用前景，它的的誕生也為人們提供了一種高通量、高效率的腫瘤學(xué)研究手段[4-6]。五．分子生物納米技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用

1.納米科學(xué)技術(shù)是20世紀末期剛剛誕生并正在崛起的新科技。通過直接操縱和安排原子、分子創(chuàng)制新物質(zhì)，納米技術(shù)與醫(yī)學(xué)相結(jié)合，促進了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究技術(shù)的完善、臨床診斷技術(shù)的革新及治療水平的提高[7]。通過應(yīng)用納米技術(shù)，在DNA檢測時，檢測方法更加簡便、快速、準確。美國NASA Ames Center for Nanote Chnology與中南大學(xué)衛(wèi)生部納米生物技術(shù)重點實驗室合作，將碳納米管用于基因芯片，樣本需要量低于1000個NDA分子（傳統(tǒng)DNA檢測的樣本需要量超過106個DNA分子）；需要的樣品量更少，可免去傳統(tǒng)的PcR擴增步驟；結(jié)果可靠、重復(fù)性好、操作簡單、易實現(xiàn)檢測自動化[8]。免疫分析加上磁性修飾已成功地用于各種生物活性物質(zhì)和異生質(zhì)，如藥物、致癌物等的檢測。將特異性抗體或抗原固定到納米磁球表面，并以酶、放射性同位素?zé)晒馊玖匣蚧瘜W(xué)發(fā)光物質(zhì)為基礎(chǔ)所產(chǎn)生的檢測與傳統(tǒng)微量滴定板技術(shù)相比具有簡單、快速和靈敏的特點。霍美俊等[9]利用抗體偶聯(lián)的靶向磁性納米顆粒，同時具有可在病毒感染的細胞周圍特異性富集和磁顆粒可在交變磁場下感應(yīng)升溫的雙重功能，將其作為磁感應(yīng)熱療的靶向介質(zhì)，有望研制出病毒感染性疾病磁感應(yīng)熱療的靶向介質(zhì)。為尋求一條快速診斷EV71病毒感染的新方法，納米細胞分離技術(shù)的出現(xiàn)有助于解決生物醫(yī)學(xué)中快速獲取細胞標本的難題。應(yīng)用納米免疫磁珠檢測早期肺癌患者循環(huán)血液中的腫瘤細胞，可監(jiān)測肺癌的轉(zhuǎn)移情況。2.六．分子生物學(xué)技術(shù)在臨床檢測應(yīng)用中的問題

疾病的發(fā)生是由于人體受內(nèi)外因素的影響，導(dǎo)致機體細胞、組織或器官功能紊亂，歸根到底是核酸、蛋白等分子水平表達異常，由此可見，利用分子生物學(xué)技術(shù)進行臨床檢測是協(xié)助臨床診斷和治療的必不可少的工具。但由于分子生物學(xué)技術(shù)不僅對臨床樣品的處理有較高要求，而且對檢測人員的技術(shù)水平也有要求，這就涉及到從標本收集、處理、檢測和分析等多個環(huán)節(jié)的系統(tǒng)化和規(guī)范化，為此，我國已制定了臨床實驗室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南。

利用分子生物學(xué)技術(shù)進行臨床監(jiān)測，在某些情況下可能存在一定困難，例如與核酸相比，蛋白和多肽作為生物標志的一個優(yōu)勢是它們能夠很容易的在血液、尿液和其他生物體液中找到。這些類型的樣品很容易獲得，并代表了含有豐富的具有潛在信息的生物學(xué)信息分子。但從研究手段方面來說，蛋白質(zhì)研究技術(shù)比核酸技術(shù)相對要復(fù)雜和困難，不僅氨基酸殘基數(shù)量多于核甘酸殘基，而且在蛋白質(zhì)組研究中沒有一種方法象PCR那樣能迅速擴增目的片段，這樣對于豐度低但功能重要的蛋白質(zhì)很難進行大規(guī)模的研究。miRNA雖然是新興的研究領(lǐng)域，但它們與疾病的相關(guān)性日益受到人們的重視，相信隨著基礎(chǔ)研究對miRNA不斷深入的認識，miRNA必將成為臨床檢測中的手段之一。七．參考文獻

[1] 王海英.分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用發(fā)展［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)2011,17（6）16.[2] 解福生，李歡.蛋白組學(xué)在心血管方面的研究進展.醫(yī)學(xué)信息(中旬刊), 2011,8,3812-3813.[3] 甘志遠，顏云盈，朱心智.生物芯片在嬰幼兒呼吸道病原體感染診斷中的應(yīng)用[J].內(nèi)科,2011,6(3):215-216.[4] 王新允，袁玲，鄭海燕等.肺癌中FHIT蛋白表達細胞芯片的研究[J].中國肺癌雜志,2009,12(2):131-134.[5] 朱抿，于軍，周文利等.生物芯片技術(shù)在肺癌研究中的應(yīng)用價值[J].中國肺癌雜志,2011,14,5:441-445.[6] 張戰(zhàn)，朱波，林治華.生物芯片技術(shù)在腫瘤研究中的應(yīng)用[J].重慶醫(yī)學(xué),2011,5(4):493-495..[7] 曲秋蓮，張英鴿.納米技術(shù)和材料在醫(yī)學(xué)上應(yīng)用的現(xiàn)狀與展望[J].東南大學(xué)學(xué)報,醫(yī)學(xué)版,2011,30(1):157-163.[8] 張陽德，納米技術(shù)與外科.中華實驗外科雜志[J].2004,21(10):1159.[9] 霍美俊，張長清，閏妍等.抗EV71多克隆抗體偶聯(lián)的靶向磁性納米顆粒對病毒的特異性富集[J].科技導(dǎo)報,2010,28(16):25-30.

第四篇：PBL教學(xué)法在醫(yī)學(xué)英語教學(xué)上的應(yīng)用

PBL教學(xué)法在醫(yī)學(xué)英語教學(xué)上的應(yīng)用

（廣西中醫(yī)藥大學(xué) 廣西 南寧 530001）

摘要：隨著全球化的進程和經(jīng)濟的發(fā)展，社會對醫(yī)學(xué)院校所培養(yǎng)人才的英語水平的要求日益提升。而當(dāng)前的醫(yī)學(xué)英語教學(xué)卻仍有諸多弊端：日常教學(xué)以教師為中心，學(xué)生被動地接受課堂灌輸?shù)闹R，嚴重缺乏自主能動性；教學(xué)目標以掌握基礎(chǔ)英語知識為主，抑制了學(xué)生的想象力；課堂教學(xué)模式陳舊、缺乏課堂互動活動，更沒有團隊合作意識。因此，探索新型教學(xué)模式，改善英語教學(xué)方式以適應(yīng)社會對人才的需要是勢在必行的。隨之而產(chǎn)生的PBL教學(xué)模式，正日益受到更多的關(guān)注。

關(guān)鍵詞：PBL教學(xué)法；醫(yī)學(xué)英語教學(xué)；應(yīng)用

【中圖分類號】H319 【文獻標識碼】B 【文章編號】2095-3089（2016）34-0009-02

美國 Barrows 教授創(chuàng)立的以問題為基礎(chǔ)的學(xué)習(xí)（problem based learning，PBL）的教學(xué)方法，從 1969 年開展至今，在各學(xué)科的教學(xué)領(lǐng)域中發(fā)揮了獨特且有效的作用，已成為國際上流行的一種教學(xué)方法。以應(yīng)用為目的的外語學(xué)科更是廣泛使用，醫(yī)學(xué)專業(yè)英語作為英語的一個分支學(xué)科，也有越來越多的教師將其推廣到教學(xué)中。PBL 教學(xué)法是以問題為中心、以學(xué)生為主導(dǎo)、教師為引導(dǎo)，采取自主學(xué)習(xí)、小組討論為主要教學(xué)形式的課程模式。與以往傳統(tǒng)的教師為主體的教學(xué)形式不同之處在于，PBL 教學(xué)法是在教師把握整體和指導(dǎo)的情況下，讓學(xué)生自己提出問題并找出解決問題的方法。其能充分調(diào)動學(xué)生的自主能動性和積極性，有助于自學(xué)能力和創(chuàng)新精神的培養(yǎng)。

一、以學(xué)生為中心原則

以往以教師為中心的教學(xué)模式以“填鴨式”教學(xué)為主，學(xué)生被動接受。醫(yī)學(xué)專業(yè)英語作為一門語言學(xué)科，本身就比較枯燥，學(xué)生通過以往的教學(xué)模式學(xué)習(xí)很容易感到困倦，失去興趣，往往到最后是為了考試而學(xué)習(xí)，不能達到學(xué)習(xí)的真正目的。學(xué)習(xí)者應(yīng)該對自己的學(xué)習(xí)負責(zé)，意味著學(xué)生部分或完全有權(quán)力決定那些傳統(tǒng)上由教師決定的事項。PBL教學(xué)法使學(xué)生變?yōu)榻虒W(xué)活動的核心，作為主體的他們既是問題的提出者，更是解決者，成為課堂里真正的參與者，自我?Q定學(xué)習(xí)的內(nèi)容和方式，在討論問題的過程中不斷應(yīng)用語言，從而提高語言的應(yīng)用能力。教師則作為教學(xué)活動的組織者，把握學(xué)習(xí)的總體方向，引導(dǎo)學(xué)生積極主動學(xué)習(xí)，并及時糾正學(xué)生在學(xué)習(xí)過程中存在的錯誤，保證教學(xué)的順利進行。因此，通過以上的教學(xué)方式能讓學(xué)生提高對醫(yī)學(xué)專業(yè)英語學(xué)習(xí)的興趣，學(xué)好這門課程，利于醫(yī)學(xué)生今后更好地將醫(yī)學(xué)專業(yè)英語應(yīng)用于臨床工作中，還讓學(xué)生養(yǎng)成自我學(xué)習(xí)的習(xí)慣，培養(yǎng)他們獨立自主的精神。

二、課前準備

PBL教學(xué)法真正體現(xiàn)了以問題為導(dǎo)向、學(xué)生為中心的教學(xué)理念，教師從傳統(tǒng)的講述者轉(zhuǎn)變?yōu)橐龑?dǎo)者和促進者，學(xué)生由被動接受變?yōu)檎n堂的主導(dǎo)者，大量豐富的知識來源于自我探索和歸納。因此，為了使PBL教學(xué)法能夠有效地應(yīng)用于課堂上，學(xué)生和教師在課前必須做好充分的準備。一方面，學(xué)生應(yīng)熟悉情景對話的日常用語，并樹立講英語的信心和勇氣，盡量努力用英語思維去思考和解決問題；另一方面，英語教師應(yīng)選擇難度適中、醫(yī)院常見、學(xué)生感興趣的情境作為話題；并提出問題，讓學(xué)生以問題為中心，有的放矢地去查閱資料，展開討論。設(shè)計問題時，教師應(yīng)提前熟悉教學(xué)內(nèi)容，使教學(xué)內(nèi)容充分地融入在問題中。設(shè)計的問題應(yīng)系統(tǒng)全面，由點到面，由易到難，確保不同能力水平的的學(xué)生都能參與進來，促進學(xué)生在協(xié)同合作中解決問題，掌握要點，拓展知識面。

三、課堂實施

課堂上，老師按照教學(xué)設(shè)計內(nèi)容，知識重點難點的分布特點，將所有的同學(xué)分成6個小組，分配相應(yīng)任務(wù)，各組組內(nèi)進行討論，綜合本組同學(xué)的意見和其準備的資料，組內(nèi)推薦3到5人進行情景對話的演練或是應(yīng)用英語演講、和表演的方式進行情景劇，根據(jù)抽簽結(jié)果依次上臺表演；每一組表演結(jié)束后，其他小組需對其進行評價，并指出表演過程中表達出的課堂需學(xué)知識，在課堂的最后對所有小組進行評價，主要以涉及到的新知識點作為評價標準。

四、評價體系

對于PBL教學(xué)效果的評價，不單是靠學(xué)生最后一次的期末考試成績決定，作者通常采用考試結(jié)合課堂表現(xiàn)來體現(xiàn)?？荚囈话銠z驗的是學(xué)生對知識熟練掌握和記憶的程度，缺乏對學(xué)生應(yīng)用能力的檢驗，而課堂表現(xiàn)則可以彌補考試的不足。PBL教學(xué)課程中，每組的成員存在著不同分工，最后展示結(jié)果的僅有幾個學(xué)生，但不代表其他學(xué)生就沒有去思考、學(xué)習(xí)。為解決對不同學(xué)生的正確評價，同時鼓勵每位學(xué)生都積極主動參與PBL教學(xué)活動，作者一般先是通過不同組互相打分和教師打分相結(jié)合，給每個組定一個分數(shù)，然后在“組分”的基礎(chǔ)上每個組的成員再根據(jù)情況在小組內(nèi)討論自我評價打分，最后得到每個學(xué)生的課堂表現(xiàn)成績。學(xué)生的最后成績則是由課堂表現(xiàn)成績和期末考試成績兩部分組成。通過這樣的評價體系既檢驗了學(xué)生對知識掌握的情況，教師也了解了學(xué)生對知識的應(yīng)用能力。

目前，在我國雖有部分醫(yī)學(xué)院校實施PBL教學(xué)法，且取得了一定的成果，但總的看來，絕大多數(shù)院校仍以傳統(tǒng)的LBL教學(xué)法為主。大學(xué)英語教學(xué)設(shè)計的重點應(yīng)是提高學(xué)生對專業(yè)英語的實際應(yīng)用能力，以便今后的學(xué)習(xí)及工作。因此，在大學(xué)英語教學(xué)設(shè)計中培養(yǎng)學(xué)生基于問題的學(xué)習(xí)理念尤其重要。盡管推行PBL教學(xué)仍存在多方面的困難和阻力，但隨著多方面的應(yīng)用和推廣，以及經(jīng)驗的廣泛積累，PBL教學(xué)勢必成為一種普遍的教育模式。我們堅信，有計劃、有步驟、有目的地在醫(yī)學(xué)院校進行PBL教學(xué)改革是一種今后的發(fā)展趨勢。PBL教學(xué)法憑借其提高學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力、提高主觀能動性及團隊合作意識等優(yōu)勢，從而培養(yǎng)出更全面、更優(yōu)秀，同時能夠適應(yīng)社會發(fā)展需要的綜合性人才，一定會逐步得到更多的發(fā)展與認可，有著廣闊的應(yīng)用前景。

參考文獻：

[1]王志晨.PBL 教學(xué)模式在醫(yī)學(xué)英語教學(xué)中的實驗研究[J].衛(wèi)生軟科學(xué)，2012，26（5）：25-26，37.[2]張江華，郭偉，才謙.PBL教學(xué)法在藥學(xué)英語教學(xué)中的應(yīng)用[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012（3）：149-150.

第五篇：醫(yī)學(xué)檢驗自薦信

醫(yī)學(xué)檢驗自薦信范文

醫(yī)學(xué)檢驗自薦信范文一

求職信

尊敬的領(lǐng)導(dǎo)：

您好！真誠地感謝您在百忙之中瀏覽這份求職材料。您揭開的將是我人生新的一頁，因為您的厚愛和關(guān)照，我的人生將在此刻出現(xiàn)一個值得紀念的轉(zhuǎn)折點。

我是湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)技系的一名學(xué)生。在即將畢業(yè)的時刻，看到了貴院的招聘啟示。貴院的發(fā)展前景和用人之道我很仰慕，同時我也非常希望能用自己所學(xué)的知識為貴院效力。我認為我完全可以符合貴院的要求，故寫此自薦信請各位領(lǐng)導(dǎo)審查。

在校期間，除了刻苦學(xué)好本專業(yè)課程外，還學(xué)習(xí)了英語，積極的參加學(xué)校、社團組織的活動。豐富的校園生活使我善于與人溝通，并且有較強的語言能力，表達能力。

在實習(xí)期間，我能夠熟練操作和正確使用醫(yī)院檢驗科各科室半自動或全自動各項儀器（血細胞分析儀、尿沉渣儀、血凝儀、全自動生化儀等），并能獨自、準確地鑒定細菌及掌握了體液室、免疫室、血液室、生化室等等。各項手工操作檢查。了解常用檢驗儀器的日常維護和質(zhì)控，并多次輔助帶教老師完成儀器的室內(nèi)質(zhì)控操作。在以下科室進行了系統(tǒng)而全面的實踐經(jīng)驗。生化室、微生物室、門診化驗室、免疫室、血流變室、血庫、臨檢室，掌握了三大常規(guī)的手工操作，微生物標本的接收和處理，常見致病微生物的鑒定及藥敏，輸血科的操作規(guī)程。

我的人生信條就是：事在人為。我認為不論做什么事，只要你想做，并認真去做，就一定能做到。因此，從初中起我就時刻注意把自己鍛煉成一個做事認真、有毅力、樂觀、自信的人，也正因為如此，我才能順利地考取重點高中、全日制大學(xué)。我認為最重要的是保留在自己身上的那種堅忍不拔的精神，這種精神將同樣有助于我勝任貴院的工作。請領(lǐng)導(dǎo)相信我的實力，給我一次證明自己的機會，也同樣證明貴院的正確選擇。

感謝閱讀我的求職信，盼望著早日得到您的佳音！

此致

敬禮！

求職人：

年 月 日

醫(yī)學(xué)檢驗自薦信范文二

尊敬的領(lǐng)導(dǎo)：

您好!

我是**大學(xué)**系醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的一名應(yīng)屆本科畢業(yè)生。通過對貴公司的一些初步了解，本人有意加盟貴公司，為公司盡一份力。為便于公司對我的了解，現(xiàn)自我簡介如下： 大學(xué)四年，是我來之不易的學(xué)習(xí)機會。在這大好時光里，我本著學(xué)好本專業(yè)，盡量擴大知識面，并加強能力鍛煉的原則，大量汲取知識財富，鍛煉了自己的各種能力。我努力的學(xué)習(xí)基礎(chǔ)課，深研專業(yè)知識，并取得了優(yōu)異的成績，多次名列前茅，連年獲得獎學(xué)金。本人在幾年中系統(tǒng)學(xué)習(xí)了臨床醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、檢驗技術(shù)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)、分析化學(xué)、檢驗儀器學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、寄生蟲學(xué)及檢驗、微生物學(xué)及檢驗、免疫學(xué)及檢驗、血液學(xué)檢驗、臨床生物化學(xué)及檢驗等課程。

通過學(xué)習(xí)，本人系統(tǒng)掌握基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗等方面的基本理論知識和基本能力，諳透基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗方面的基本理論知識，受到醫(yī)學(xué)檢驗操作技能系統(tǒng)訓(xùn)練，具有臨床醫(yī)學(xué)檢驗及衛(wèi)生檢驗的基本能力。能成為在各級醫(yī)院、血站及防疫等部門從事醫(yī)學(xué)檢驗及醫(yī)學(xué)類實驗室工作的醫(yī)學(xué)高級專門人才。

通過幾年的學(xué)習(xí)，本人具備以下幾方面的知識和能力：

1.掌握基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的基本理論知識;

2.掌握醫(yī)用化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、病原診斷學(xué)、血細胞形態(tài)學(xué)的基本理論和技術(shù)，了解常用檢驗儀器的基本構(gòu)件和性能;3.具有數(shù)理統(tǒng)計及計算機應(yīng)用的基本能力;

4.熟悉國家衛(wèi)生工作及臨床實驗主管理有關(guān)的方針、政策和法規(guī);

5.了解醫(yī)學(xué)檢驗前沿學(xué)科的理論和技術(shù)的發(fā)展動態(tài);

6.掌握文獻檢索、資料調(diào)查的基本方法，具有一定的科學(xué)研究和實際工作能力。此外，利用課余時間，我還多次參加各種文體活動，鍛煉了自己的交際能力。參加各種興趣小組，將所學(xué)用于實踐，加強了自己的動手能力。因出色的表現(xiàn)，在一年級就參加了校黨委主辦的黨校學(xué)習(xí)，并以優(yōu)異的成績畢業(yè)。同時，我還根據(jù)自己的興趣，輔修經(jīng)貿(mào)英語，選修二外日語等多門人文，管理課程，使自己不僅成為一個合格的專業(yè)人才，而且努力成為一個知識全面，涉獵廣泛的全方位人才。

”寬以待人、潔身自好”是我的處世原則;”精益求精、勇于進取”是我的精神信念;”兢兢業(yè)業(yè)、不斷創(chuàng)新”是我的工作方式。我自信我的能力和熱情使我能勝任貴公司的技術(shù)開發(fā)及其他有關(guān)方面的工作。希望公司給我一次參加面試的機會，我在此靜候佳音。謝謝!

此致

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