第一篇：全國獸醫(yī)生物制品企業(yè)簡介

全國獸醫(yī)生物制品企業(yè)

山東?。?）：齊魯動物保健品有限公司、青島易邦生物工程有限公司、青島澳蘭百特生物工程有限公司、山東綠都生物科技有限公司、山東濱州沃華生物工程有限公司、青島寶依特生物制藥有限公司、山東泰豐生物制品有限公司、山東濱州華宏生物制品有限責任公司

江蘇?。?）：乾元浩南京生物藥廠、揚州優(yōu)邦生物制劑有限公司（金宇）、揚州威克生物工程有限公司（金宇）、南京天邦生物科技有限公司、南京南農高科技股份有限公司、南京梅里亞動物保健有限公司

北京市（4）：北京市獸醫(yī)生物藥品廠、乾元浩北京生物藥廠、北京信得威特科技有限公司、北京翎羽禽病防治技術開發(fā)有限公司

上海市（4）：上海海利生物藥品有限公司、上海佳牧生物制品有限公司、申聯生物醫(yī)藥有限公司、上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司

四川?。?）：中牧成都藥械廠、成都精華生物制品有限公司、四川華神獸用生物制品有限公司、四川世紅生物技術有限公司

吉林?。?）： 吉林省五星動物保健藥廠、吉林鯨象動物藥業(yè)有限公司、吉林正業(yè)生物制品有限責任公司、吉林中特生物技術有限公司

廣東?。?）：廣東永順生物制藥有限公司、大華農生物藥品有限公司、華南農大生物藥品有限公司

河南?。?）：乾元浩鄭州生物藥廠、洛陽普萊柯生物工程有限公司、河南省寶依特生物技術有限公司

黑龍江（3）：哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司、黑龍江省生物制品一廠、黑龍江化血研生物技術有限公司

湖北?。?）：武漢科前動物生物制品有限責任公司、武漢中博生化有限公司、湖北精牧獸醫(yī)技術開發(fā)有限公司

江西?。?）：中牧江西生物藥廠、南昌梅里亞有限公司、九江博萊生物制品有限公司 甘肅?。?）：農科院蘭州獸醫(yī)研究所、中牧蘭州生物藥廠

浙江?。?）：浙江薦量生物工程有限公司、浙江易邦生物技術有限公司

云南省（2）：云南生物制藥有限公司、乾元浩保山生物藥廠

河北?。?）：瑞普生物藥業(yè)有限公司

陜西?。?）：楊凌綠方生物工程有限公司

廣西（1）：廣西壯族自治區(qū)生物制品廠

遼寧?。?）：遼寧益康生物制品有限公司

福建?。?）：福州大北農生物技術有限公司

重慶市（1）：重慶永健生物技術有限責任公司 湖南?。?）：湖南亞華種業(yè)股份有限公司 青海?。?）： 青海生物制品廠

新疆（1）：新疆天康畜牧生物技術股份有限公司 山西?。?）：山西隆克爾生物制藥有限公司 內蒙古（1）：金宇集團保靈生物藥品有限公司

第二篇：獸醫(yī)生物制品電子教案

烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

第一章

緒

論

第一節(jié)

獸用生物制品的概念與命名原則

一、獸用生物制品與獸用生物制品技術

（一）獸用生物制品的概念

獸用生物制品：是根據免疫學原理，利用微生物、寄生蟲及其代謝產物或免疫應答產物制備的一類物質。這類物質專供相應疾病的診斷、預防和治療之用。狹義上講，獸用生物制品主要指疫苗、免疫抗血清及診斷制劑；廣義上講，獸用生物制品還應包括各種血液制劑、抗生素、非特異性免疫制劑等。由此可見，獸用生物制品的含義和內容也將隨著科學技術的發(fā)展而成為獸用保健制品。

（二）獸用生物制品技術概念與內容 獸用生物制品技術：獸用生物制品技術是在動物微生物、免疫學、動物傳染病的基礎上，采用生物學、生物化學及生物工程等技術和方法，研究和制備獸用生物制品，用以解決動物疫病防治的一門新興應用技術。

主要內容包括兩個方面：1是獸用生物制品的生物學，即研究病原微生物及宿主的關系。2是研究獸用生物制品的工藝學、制造、保藏、使用方面的內容。

二、獸用生物制品的命名原則

農業(yè)部規(guī)定的《獸醫(yī)新生物制品管理辦法》有10條原則

1、命名原則：明確，簡練，科學。

2、不用商品名和代號。

3、一般制品為：動物名稱+病名+制品名稱，如豬瘟兔化弱毒疫苗。

4、共患病不列出動物名：如破傷風類毒素或抗毒素。

5、疫苗名稱要規(guī)范，主動免疫的菌苗，疫苗統(tǒng)稱為疫苗。

6、分活疫苗和死疫苗。

7、同一類不同毒株的疫苗，全稱后面加括號注明，如豬丹毒活疫苗（GC42）--是哈爾濱獸研所通過豚鼠370代選育后，再通過雛雞42代選育成的弱毒疫苗。豬丹毒活疫苗（G4T10）是江蘇獸研所，將370代的菌，再通過培養(yǎng)基里加錐黃素，50代選育的。

8、聯苗：動物名稱+若干病名+X聯苗，如豬瘟、豬丹毒、豬肺疫三聯疫苗。簡稱豬三聯。

9、多價苗：動物名+病名+若干血清型+X價疫苗，如仔豬黃白痢K88，K99，P987三價弱毒疫苗。

10、生物制品制造方法不注明，屬企業(yè)秘密。

第二節(jié) 獸用生物制品的分類及應用

一、獸用生物制品的分類

獸用生物制品種類繁多，只有進行分類，才便于學習和實踐中使用和區(qū)別，常規(guī)的分類有兩種，1是按性質和用途分類；2是按物理和制造進行分類，下面先講第一種分類方法。

（一）獸用生物制品按性質分類：

有預防用的疫苗和類毒素，有診斷用的診斷劑，有治療用的高免血清，有調整微生態(tài)平衡的微生態(tài)制劑，以及非特異免疫增強劑等。

1、疫苗（vaccine）：接種動物能產生自動免疫的一類生物制品，有微生物、寄生蟲及其代謝產物組成。

過去人們習慣將病毒、立克次氏體制成的叫疫苗，將細菌、支原體和螺旋體制成的叫菌苗?，F在農業(yè)部統(tǒng)一規(guī)定，“由特定細菌、病毒、立克次氏體、螺旋體、支原體，及寄生烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

蟲制成的主動免疫制品，一律稱為疫苗，可分別叫它們什么細菌疫苗或什么病毒疫苗。

（1）常規(guī)疫苗：由病原微生物完整本身加工制備的叫之。

A、滅活疫苗（死疫苗）：用物理或化學方法將病原微生物殺死，仍保留免疫原性。一般是由強毒力微生物制成，多加上佐劑，提高免疫效果。

滅活疫苗的優(yōu)缺點：

優(yōu)點：a，安全，無副作用，不返祖不散毒。

B，不中和母源抗體和機體抗體。

C，運輸保存方便，多為水劑濕苗。

缺點：a，需多次免疫，抗原用量大，價格貴。

B，只能注射，需要佐劑，僅刺激體液免疫。

弱毒疫苗的優(yōu)缺點和滅活疫苗相反，不再重復。a)自身或自家滅活疫苗

從患病動物自身病灶分離病原微生物制成的滅活疫苗，如人反復葡萄球菌感染，可選用此方法做苗；對動物可用本場分離的病菌制成滅活疫苗，用于本場，具有抗原的針對性，如仔豬黃白痢自家滅活疫苗，鏈球菌自家滅活疫苗。b)組織滅活疫苗

利用含病原微生物多的組織制成的滅活疫苗，如兔瘟滅活疫苗，豬園環(huán)病毒自家組織滅活苗。B、活苗（弱毒疫苗）

用人工方法使病原微生物變異減毒而制成。

分強毒活疫苗，如宋朝我國制備的人痘疫苗；還有中等毒力的雞新城疫I系，法氏囊中等毒力苗，傳支H52等。

弱毒疫苗：卡介苗—人工培育13年230代；雞新城疫I系—自然脫毒篩選；炭疽疫苗—高溫誘變。豬瘟兔化弱毒疫苗—鈍感動物。

化學誘變疫苗：豬丹毒疫苗—培養(yǎng)基里加錐黃素；仔豬副傷寒疫苗—培養(yǎng)基里加醋酸砣；豬肺疫疫苗—培養(yǎng)基加海鷗洗衣粉。

a)同源疫苗：由病原微生物本身減毒制成，大多數是這樣的疫苗。

b)異源疫苗：含同類屬抗原的非同種微生物制備成。如：雞馬立克氏病，用火雞皰疹病毒疫苗預防；犬瘟熱病---用人麻疹疫苗可以預防；人天花病—用牛痘疫苗預防。

在疫苗中，僅有少數是異源疫苗，即不同微生物，同類抗原少，像鑰匙開鎖一樣，其他鑰匙開這個鎖純屬偶然。

c)單價疫苗：利用同一株微生物（這個微生物就一個血清型）或一種微生物的單一抗原制成。如豬大腸桿菌K88疫苗，禽流感H5N1疫苗。d)多價疫苗：是同一種微生物的若干血清抗原菌株制成，如：大腸桿菌K88，K99，P987三價疫苗；口蹄疫O、A雙價疫苗。

e)混合疫苗，又叫聯苗：不同微生物按一定方法混合制成，如：豬三聯疫苗，即是豬瘟、豬丹毒、豬肺疫三聯疫苗。

（2）新型疫苗

A.亞單位疫苗：利用微生物一種或幾種亞單位結構制成的疫苗。如：流感的血凝素，神經氨酸酶，肺炎雙球菌的莢膜多糖等，都可以做成疫苗。

B.化學疫苗：用化學方法提取微生物的有效免疫成分而制成。比亞單位疫苗更簡單，如提取莢膜多糖可以做成。

C.合成肽苗：人工合成肽抗原，與適當載體和佐劑配合而成。如流感病毒的烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

18肽疫苗，口蹄疫的多肽疫苗已經使用。

D.基因工程疫苗：通過DNA重組技術而制成的新型疫苗，主要有： a)基因缺失疫苗：切除病原微生物的有害基因而制成，如偽狂犬TK基因缺失，還有gE，gG基因的缺失。

b)基因工程活載體疫苗：將目的基因插入到細菌或病毒體內表達。如將流感病毒血凝素基因插入到牛痘疫苗，將志賀氏菌的基因插入到沙門氏菌中表達。

c)病毒抗體復合物疫苗：是由相應抗體包埋病毒制成。特點是安全，病毒緩慢釋放。

d)基因疫苗：即DNA疫苗，將編碼某種蛋白質的DNA注入體內，在體內表達出某種蛋白質抗原，具有免疫作用。

自殺DNA疫苗：為防止DNA重組或改變機體的基因，或使機體致癌，設計了自殺DNA疫苗，即該基因注入體內后，復制若干代后自動關閉。e)抗獨特疫苗：利用抗原和抗體是鏡像關系原理設計出的疫苗。

Ag------動物---Ab1-Ab1-----動物---Ab2（抗獨特疫苗）

Ab2----動物----Ab3，這里Ag和Ab2是一樣的，Ab1和Ab3是一樣的。

利用抗獨特疫苗免疫動物，使動物產生的抗體（Ab3=Ab1）可對抗原來的。微生物。

E.類毒素（脫毒毒素）: 由細菌外毒素經過0、3%--0、4%甲醛處理脫毒制成，如破傷風類毒素，白喉類毒素。

2、診斷劑

用于免疫學診斷，是由抗原或抗體組成，原理是抗原或抗體是特異性結合，利用已知一方，可以檢測另一方的存在。實際中可以用于傳染病診斷，抗體水平檢測以及病原微生物的鑒定。常用的有以下6類方法：

2)凝集反應用的抗原或抗體：如雞白痢或布氏桿菌凝集抗原。3)補體結合反應用的抗原或抗體。

4)沉淀反應：炭疽沉淀反應—ascoli實驗，法氏囊抗體檢測。5)標記用抗原或抗體：熒光抗體，酶標抗體-elisa 6)鑒定細菌用的多價血清或因子血清—沙門氏菌 7)PCR-聚合酶鏈反應

3、高免血清

人工高度免疫動物提取的血清，用于傳染病的治療和緊急預防—如豬瘟血清，小鵝瘟血清，法氏囊卵黃抗體等。

4、微生態(tài)制劑

即益生素或叫EM（有效的微生物制劑），是有益的活菌制劑，調節(jié)機體微生態(tài)平衡，達到預防或治療疾病的目的。常見的細菌有乳酸桿菌、雙歧桿菌、地衣芽孢桿菌，蠟樣芽孢桿菌等。

益生元：促進有益細菌生長的物質，如雙歧因子，寡聚糖等。

(二)按制造方法和物理性狀分類

1、普通制品：一般方法制備的生物制品，如炭疽桿菌芽孢苗。

2、精制制品：對普通制品進行濃縮和精制，如精制的破傷風類毒素或抗毒素。

3、液狀制品：也叫濕苗，多為滅活疫苗或診斷制品。

4、凍干制品：將疫苗冷凍干燥，可更好保護微生物的活性，弱毒疫苗多為凍干制品，另激素、血清、補體等也可以凍干。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

5、佐劑制品：非特異增強疫苗的免疫應答物質，如鋁膠，蜂膠，油類，卡介苗等。

二、獸用生物制品的應用 1.用于動物疫病的防治 2.用于動物疫病的診斷 3.用于動物疫病的治療

4.用于動物的保健

第三節(jié) 獸用生物制品的發(fā)展史與發(fā)展前景

一、獸用生物制品的發(fā)展史

古代歷史上的成績：早在1000多年前，宋真宗時期，我國人民就已經會用痊愈天花病人的干痘痂粉，吹入鼻孔，預防人的天花病，叫吹花。后傳給俄羅斯和土、耳其等國家。預防牛瘟，我國甘肅省早知道，用康復牛的血，灌服給其他牛，可以預防牛瘟。

1796年，英國鄉(xiāng)村醫(yī)生琴納，用牛痘漿給人接種預防天花成功，1980年全世界消滅了天花疫苗也叫牛痘苗的代名詞（vaccine），沿用至今。

1881-1884年，法國巴斯德，發(fā)明了炭疽疫苗、禽霍亂疫苗及狂犬疫苗。1921年，卡介苗誕生，用13年230代培育成功。后又發(fā)展有白喉抗毒素及破傷風類毒素和抗毒素。

我國豬瘟兔化弱毒疫苗質量世界第一；發(fā)明的 牛肺疫兔化弱毒疫苗，為我國消滅牛肺疫起到了關鍵作用，馬傳貧白細胞活疫苗，為 我國填補了空白，豬三聯弱毒疫苗，也是我國首創(chuàng)—打破了細菌和病毒疫苗不能混合生產的 歷史。

其次，畜禽常用的疫苗和血清，我國都可以自己生產。

特殊疫苗，我國研制有雞球蟲病疫苗，豬囊蟲疫苗及弓形體疫苗。還有水產用的嗜氣單胞菌疫苗和 草魚出血熱滅活疫苗。輔助治療的副免疫制品有豬干擾素，白細胞介素等。

凍干技術的改進，用真空箱內壓蓋技術，為弱毒疫苗生產質量提高作出了貢獻。

華中農大程煥春院士，自主開發(fā)研制的偽狂犬基因缺失疫苗，填補了我國該疫苗的 空白。

我國除上述生物制品外，還開發(fā)研制了大量診斷試劑，傳統(tǒng)有雞白痢全血平板凝集抗原和布氏凝集抗原，結核菌素等。新研制有ELISA各種診斷試劑，基本滿足國內畜禽疾病的診斷。

2001年時，我國獸醫(yī)生物制品有188種，滅活疫苗56種，活疫苗57種，抗血清7種，診斷試劑61種，其他制品7種。最近幾年，我國新增生物制品更多，有力的促進了我國畜牧業(yè)的發(fā)展。

二、獸用生物制品的發(fā)展前景

我國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展速度快，豬雞的飼養(yǎng)躍居世界第一。但是，畜禽疫病十分嚴重，我國畜禽出欄率比外國發(fā)達地區(qū)低的多。新疫病不斷出現，舊的病死灰復燃。當前，迫切需要高質量的生物制品來解決問題，今后生物制品的方向應該是：

1、傳統(tǒng)疫苗為主，多聯多價苗倍出

傳統(tǒng)疫苗有質量穩(wěn)定，價格低廉的優(yōu)勢，在農村廣大地區(qū)，起主導作用；一些多聯多價疫苗，將降低勞動成本，成為畜牧業(yè)發(fā)展的新需求。

2、提高疫苗質量，研制新型疫苗

SPF，是 指無特定病源動物，雞胚，細胞是弱毒疫苗質量的關鍵，但是，部分疫苗不是用SPF原料生產的，造成疫苗的污染和散毒，需要從原料上進行治理。還有新的疫病無疫苗預防：圓環(huán)病毒，藍耳病，雞白痢等，需要加大研究力度。

3、研究新型的基因工程疫苗是發(fā)展方向 我國已經有偽狂犬基因缺失疫苗，對篩選野毒攜帶起重要作用，如果把這個技術推廣到烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

豬瘟等其它疫苗上，將更好地凈化野毒的攜帶者。DNA疫苗也是發(fā)展的 方向。

4、試劑盒標準化，簡單化

當前我國試劑盒不穩(wěn)定，非特異性高，需要國家扶持和發(fā)展；國外質量高，但價格貴，不適用農村推廣；操作麻煩也是解決的問題。

5、微生態(tài)制劑、寄生蟲疫苗、魚類疫苗發(fā)展空間大

我國加入WTO，要求出口綠色產品，為達到這個質量，就需要微生態(tài)制劑；寄生蟲和魚類疫苗特少，需要研究開發(fā)。

6、加快生物制品GMP建設，與世界接軌

全國06年就要求獸醫(yī)藥廠，必須達到GMP標準，否則要關閉；但是，有借批號的，合并、分廠現象多。是上有政策，下有對策。

7、完善獸醫(yī)法規(guī)，加強生物制品管理

我國已經頒布了《中華人民共和國防疫法》和《獸醫(yī)生物制品管理辦法》，問題是 執(zhí)行不力，監(jiān)督不力，需要進一步完善和加強。學習外國獸醫(yī)官制度，是當務之急。

思考題：

1、基本概念：獸用生物制品，獸用生物制品技術，疫苗，弱毒疫苗，滅活疫苗。

2、簡述生物制品的分類與應用。

3、簡述生物制品的命名原則。

4、結合我國獸用生物制品現狀，試述獸用生物制品的發(fā)展前景。

第二章

細菌和病毒的培養(yǎng)技術

第一節(jié)

細菌培養(yǎng)技術

細菌培養(yǎng)技術是生物制品制造的基礎，一些內容在微生物學已經學習過，這里主要講一些重要的細菌培養(yǎng)技術。

一、細菌培養(yǎng)技術

熟悉細菌的生長曲線，因為不同的生物制品，要用不同時期的細菌，如細菌疫苗，要數期或穩(wěn)定期細菌；芽孢疫苗，要衰老期細菌；外毒素要老齡細菌。

其次，要根據不同細菌用不同的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，用不同的培養(yǎng)方法（需要氧氣，微需氧，厭氧。另培養(yǎng)溫度，pH，滲透壓等。）。

二、細菌培養(yǎng)的基本技術 步驟：先分離出單個菌落→斜面培養(yǎng)基→生化或血清鑒定→菌種保存→生產生物制品→先接種到斜面菌種→小三角瓶肉湯→大三角瓶肉湯。

（一）細菌分離培養(yǎng)（目的是稀釋病料，得到單個典型菌落）。

1、需氧菌分離培養(yǎng)：分段劃線、傾注培養(yǎng)。

2、微需氧培養(yǎng)：鴨疫巴氏桿菌，牛布氏桿菌病，豬傳染性胸膜肺炎菌等，用蠟燭缸方法。

3、厭氧菌培養(yǎng)：用皰肉基，物理除氧氣（加氮氣，氫氣），化學除氧：焦性沒食子酸加燒堿。

（二）細菌的規(guī)模培養(yǎng)

生物制品是產品，一般要大規(guī)模培養(yǎng)，才能滿足基層需要。

1、菌種接種量：1-3%，過少生長慢，過度帶入有害產物多，影響生長。

2、培養(yǎng)時間：菌苗，對數期和穩(wěn)定期的細菌好；芽孢疫苗：衰老期細菌；外毒素：需要1周時間培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，如果有少量污染，可以提前滅活終止培養(yǎng)。

3、培養(yǎng)方法：根據不同制品的性質和要求，選育不同方法。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

①固體表面培養(yǎng)：多用于診斷劑，也有菌苗生產?？呻S意調節(jié)細菌濃度，但操作麻煩，勞動量大。

培養(yǎng)方法有克氏瓶，大平皿，到入菌夜，L玻棒刮抹接種，培養(yǎng)后加生理鹽水，再用L棒刮洗下細菌混懸液。

②液體靜止培養(yǎng)：一般細菌疫苗多用，用大三角瓶（5000ml）或發(fā)酵罐，裝入培養(yǎng)基1/2—-2/3量，需氧培養(yǎng)，要5小時搖動一次，增加氧氣濃度。培養(yǎng)厭氧細菌，可以裝滿培養(yǎng)基，上面加少量石蠟油，隔絕空氣，下加肝塊或肉渣（皰肉基），它們氧化，吸收氧氣，達到除氧氣目的。液體培養(yǎng)含菌量低，多需要濃縮。

③液體深層通氣培養(yǎng)（發(fā)酵罐）：可自動調節(jié)溫度、氧氣、pH、營養(yǎng)、攪拌，注意消泡沫和污染。

④透析培養(yǎng)：半滲透膜作用，營養(yǎng)可以不斷補充，可以提高細菌和毒素含量。⑤連續(xù)培養(yǎng)：營養(yǎng)不斷加入，培養(yǎng)好的細菌不斷流出。

（三）細菌計數技術

細菌疫苗必須有一定含菌量，才有好的免疫效果。所以，應該對生產的疫苗計算含菌量。

1、直接顯微鏡檢查計數

①定量定面積染色計數：10vul菌夜，涂抹1cm2面積的載玻片上，干燥固定染色，油鏡下觀察，油鏡直徑是0、16mm，視野面積是0、02mm2，1cm2面積有50萬個油鏡視野，多觀察幾個視野，算出一個視野細菌平均數X50萬X100，即每ml含細菌量。

②比例法計數（也叫對照法）

如用已知人紅細胞為500萬/mm3（可以把紅細胞0、4%甲醛固定，長期使用），取一環(huán)紅細胞放在載玻片上，另取一環(huán)菌夜與紅細胞混勻涂片，干燥固定染色，顯微鏡下檢查，如，果平均每個視野是一個紅細胞，10個細菌，那么，被檢查細胞為5000萬/ mm3，1ml是500000萬個細菌。

③估計計數法

接種環(huán)直徑在0、5cm，取一環(huán)細菌液，涂抹在載玻片上，大約0、5—1 cm2，干燥固定染色，顯微鏡檢查，如果每個視野平均是1—9個細菌，菌夜含量是105-6個/ml，10—99為107-8個/ml，100以上為109-10個/ml，密不可計為1010個以上/ml。

④紅細胞計數室法：

X（細菌量）Y/80*400*稀釋倍數*10=細菌數/ mm3，變ml乘1000。（Y是5個中方格細菌總數，乘10是計數室的高度為0、1mm，計數室1內mm2，有400個小格，有25個中格，每個中格是16個小格）。該方法多用于計數大的細菌或酵母菌、細胞。、比濁比色法

①比濁管法

含菌量與渾濁度正比，用已知菌含量的試管與標準比濁管相比，找出規(guī)律，如1億細菌=1號比濁管顏色，10億等10號，以后，用未知細菌液與標準管比色，得出大致細菌含量。

②美藍還原褪色法：含細菌多，使美藍褪色快。10ml牛奶，加1ml美藍液（1/3000），37度水浴，褪色少于20分鐘，細菌多于2000萬/ml，20-2小時，為400—2000萬；2----

5、5小時為50—400萬；

5、5小時以上，為少于50萬/ml，為一級牛奶；如果用于細菌苗，應先用已知細菌找出規(guī)律。

3、活菌計數：原理，一個菌落是一個細菌的后代，數菌落就知道含菌量，也叫菌落形成單位—CFU：colony format unite。

①傾注法（GB方法）：菌液10倍遞減稀釋，選2-3個稀釋度，各取1ml于平皿，加45-50營養(yǎng)瓊脂，37度培養(yǎng)，計算菌落，乘稀釋倍數，即每ml細菌數。

②平板表面涂布法：先做好營養(yǎng)瓊脂平板，將不同稀釋度菌液0、1ml加上，玻璃棒刮烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

勻，37度24h培養(yǎng)，計算菌落乘稀釋度乘10=菌數/ml ③微量滴板法：將不同稀釋度菌液，各取0、02ml滴在營養(yǎng)瓊脂板上，一板可以滴多點，自然擴散，37度培養(yǎng)，計算每點菌落乘50乘稀釋度=菌數/ml。

三、培養(yǎng)基

微生物學已經學過，自己溫習，重點熟悉：

1、不同微生物用不同的培養(yǎng)基來培養(yǎng)

2、注意各種營養(yǎng)物資濃度配比

3、調節(jié)合適的pH范圍

第二節(jié) 病毒的培養(yǎng)技術

一、病毒的復制與培養(yǎng)

病毒為專性細胞寄生物，必須在活細胞內生存，其復制過程是：吸附，進入，脫殼，生物合成，裝配和釋放。微生物已經講，自己復習。

二、病毒的動物接種增殖

（一）、病毒材料的處理

1、病毒的釋放：剪碎研磨，冰凍融及超聲波處理。

2、除雜菌：細菌過濾器過濾，高速離心取上清夜；其次是抗生素處理，加500—1000u青霉素和鏈霉素，4度過夜殺菌。

（二）動物選擇

1)健康動物、SPF動物； 2)未接種相應病毒疫苗動物 3)適宜年齡和體重 4)易感動物。

（二）接種方法：皮下，肌肉，靜脈，腹腔，腦，胸腔等

三、雞胚的接種

（一）雞胚的選擇

1、健康的SPF雞胚

2、白殼，薄殼消毒蛋

3、沒免疫相應病毒疫苗 4、5-7天照蛋，去無精、死胚雞蛋

5、畫出氣室，接種24h照蛋，定時收病毒。

（二）雞胚的接種和收獲

避開血管和心臟，確定接踵部位，先碘酒消毒，再酒精消毒，用三棱針或12號針頭鉆孔，然后可以接種。預先準備好病料，注射器，融化的石蠟。

1、卵黃囊接種：用5-8天雞胚，在氣室中心，胚胎對側刺入3cm（先用三棱針鉆孔）。用于病毒，立克次氏體，衣原體接種。

2、尿囊腔接種，用9-11日雞胚，在氣室邊緣下2cm，避開血管，40°進針0、5-

1、5cm。適應雞新城疫，鴨肝炎，雞傳染支氣管炎病毒接種。

3、羊膜腔接種：用10-12日雞胚，在胚胎對側進針，有抵抗時注入病毒。

4、絨毛尿囊膜接種：選11—13日雞胚，先造人工氣室，然后在人工氣室內注射，適合痘病毒，皰疹病毒等。

另外，還有腦，胚體，靜脈接種，難度大，科研使用。

不同病毒用不同接種途徑，培養(yǎng)時間不同，收獲組織也不同。

（三）影響禽胚增殖病毒的因素 烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

1、種蛋質量：要用SPF蛋，母源抗體存在，抗生素（對立克次氏體和衣原體）。

2、孵化環(huán)境：溫度是37、8--38℃，濕度53-57%，通風，定時翻蛋。

3、接種技術：無菌操作和消毒，收獲根據不同病毒，收獲病毒時間不同，不要臭蛋和渾濁蛋。收獲后測效價，加雙抗-20℃保存。

四、細胞增殖病毒技術

1、細胞培養(yǎng)概念：利用機械、酶、化學方法使組織或單層細胞分散成單個或2-4個細胞的懸液，進行培養(yǎng)。

(1)原代細胞：新鮮組織制備的單細胞進行培養(yǎng)，一般僅可以傳代3代。

(2)二倍體細胞：自繼代細胞選出的也特殊生物學標志的細胞，染色體是二倍體，可傳代50-100代，主要做疫苗生產。

(3)傳代細胞：非二倍體，多為癌細胞，可無限生長，如Hela細胞，多用做病毒研究，不能做疫苗生產。

2、細胞培養(yǎng)的方法

(1)靜止培養(yǎng)：細胞懸液接入培養(yǎng)瓶中，密封置溫箱培養(yǎng)，細胞沿瓶子壁長成單層，為最簡單培養(yǎng)病毒方法。

(2)轉瓶培養(yǎng)：細胞懸液在轉瓶旋轉培養(yǎng)，10-20轉/h，細胞貼壁生長，需要營養(yǎng)液少。(3)懸浮培養(yǎng)：通過震蕩，轉動使細胞懸浮于液體中培養(yǎng)。

(4)微載體培養(yǎng)：以固體小顆粒為載體，便于細胞附著，載體擴大了表面積。(5)中空纖維培養(yǎng)：細胞在中空纖維內生長。(6)微囊化培養(yǎng)：細胞在微囊中生長。

3、細胞的制備

細胞間有膠原蛋白，要破壞它們才變成分散單細胞。

1)機械分散：將組織剪碎成1mm3小塊，再擠壓通過銅絲網孔，可得到單細胞。2)酶消化法：常用胰酶破壞細胞間質，活力1：250，濃度是0、25%，pH7、4-

7、6。3)鰲合劑分散法：EDTA可除去維護細胞間結合的Ga++和Mg++，常用于單層細胞的分散。

4、細胞培養(yǎng)的要素

(1)營養(yǎng)物資：培養(yǎng)液（含氨基酸，犢牛血清，維生素，鹽，糖等成分）?，F多用成品細胞培養(yǎng)基，engle液，RPMI-1640和DMEM等。

(2)接種量：與單細胞生長成正比，量過大，因細胞碎片產生毒性作用，過小，不易長成單層。不同細胞有不同接種量，如鼠腎細胞50萬/ml，雞成纖維細胞20—40萬ml，豬腎細胞80萬/ml，血球計數室計數。

(3)pH、溫度、氣體環(huán)境：pH7、2-

7、4，不低于6、8，不高于7、6；溫度一般是37℃，過高容易死亡，過低生長慢，20--25℃，細胞緩慢長。氣體環(huán)境，一是橡皮塞蜜蜂培養(yǎng)；二是CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5、污染問題：

細菌、真菌、支原體污染，加一定量抗生素可殺菌，如加青鏈霉素100u，有霉菌污染加制霉菌素。

病毒污染：有組織代毒和培養(yǎng)帶毒，前者用SPF動物組織可以解決，后者注意滅菌和消毒。

膠原蟲：（存在犢牛血清），血清37℃培養(yǎng)1個月以上，高速離心，檢查沉淀物。

5、病毒增殖技術

(1)選敏感動物細胞。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

(2)(3)(4)(5)注意營養(yǎng)，溫度和pH。

接種量和方法：1-10%接種，V/V；分同步和異步接種。支原體污染，加抗生素。

細胞病變：CPE，有圓縮、聚合、合胞體、包涵體，輕微病變，以及無細胞病變。

(6)收獲：CPE到80%收獲，反復凍融，離心取上清夜，測效價，加雙抗，-20℃保存。

思考題：

1.細菌規(guī)模化培養(yǎng)方法有哪些？ 2.細菌計數技術有哪些？

3.用動物培養(yǎng)病毒時，如何選擇動物？

4.用雞胚培養(yǎng)病毒的接種方法有哪些？如何收獲病毒？ 5.細胞培養(yǎng)的方法有哪些？ 6.細胞培養(yǎng)病毒需要哪些條件

第三章 滅活劑、凍干保護劑、與免疫佐劑

第一節(jié) 滅活劑

一、滅活與滅活劑

（一）滅活：殺死病原微生物，但不影響免疫原性；其次是破壞血清的補體，以免干擾血清學反應結果。

滅活劑：滅活微生物的化學試劑。

（二）滅活方法：物理滅活：加熱、及射線滅活微生物，此方法免疫原性易破壞，現很少使用（血清56°C半小時滅活補體用此方法）。

化學滅活：用化學試劑將病原微生物殺死，此方法經常使用。

二、常用的滅活劑種類和原理

（一）甲醛：是最古老常用的滅活劑，現在我國用的26種滅活疫苗，均以甲醛為滅活劑。

性質：甲醛為刺鼻的氣體，水溶液叫福爾馬林，濃度為36%-40%。10°C以下易聚合成三聚甲醛或多聚甲醛，為白色沉淀。

原理：甲醛的醛基起滅活作用，可使

蛋白質的氨基→羥甲基胺

羧基→亞甲基二醇單酯

羥基→羥甲基酚

巰基→硫代亞甲基二醇

濃度：需氧菌甲醛濃度到0、1%--0、2%，厭氧菌0、4%--0、8%，病毒0、05%--0、4%，原則是濃度低，時間短，溫度低可以滅活細菌，盡量減少破壞抗原（通常加入量，以福爾馬林量計算，不再折合甲醛濃度）。

（二）烷化劑：將烷基引入，形成烷基取代物，使微生物變性死亡。

原理：主要破壞病毒的核酸，作用于A：G堿基，引起DNA單鏈斷裂或雙鏈鉸連。

此類常用于病毒滅活，種類有AEI—N-乙酰乙烯亞胺，加入濃度到0、05%。

BEI—二乙烯亞胺，濃度0、02%；EEI—2—乙基乙烯亞胺，GDA—縮水甘油醛。

滅活后加硫代硫酸鈉可終止滅活，防止抗原損失。

保存：AEI，0--4°C一年，--20°C二年；BEI 0--4°C保存一個月。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

（三）苯酚（石碳酸）人類用的 第一個消毒藥，具有特殊氣味的無色結晶，易潮解成水溶液，與光、氧后顏色變紫色。

原理：蛋白質變性以及抑制氧化脫氫酶，芽孢和病毒對它抵抗力強。滅活濃度：抑菌作用是0、2—0、5%（血清防腐），殺菌是1%，殺葡萄球菌是3%。消毒常用它的衍生物，來蘇兒（甲酚皂）3—5%濃度，特殊氣味，覆蓋其他氣味，也是醫(yī)院常用的。

（四）結晶紫（龍膽紫），也叫紫藥水，堿性染料，也叫甲紫或甲基青蓮，化學名，六甲基副玫瑰苯胺。

原理：堿性陽離子可結合細菌陰離子羧基；干擾細胞壁粘肽合成；常作用于革蘭氏陽性菌。

生物制品的應用有豬瘟結晶紫疫苗，雞白痢染色抗原。

（五）β—丙酰內酯

良好病毒滅活劑，性狀是無色有氣味液體，易潮解和高溫失效，5°C密封保存好，現主要用于狂犬滅活苗。

三、影響滅活作用的因素

（一）藥物的特異性：酚類不能殺滅真菌和病毒，陽離子的結晶紫，主要作用于G+菌。

（二）微生物的種類和特異性：G+菌和G-菌對藥物敏感不一樣，繁殖體和芽孢對藥物敏感也不一樣。

（三）藥物濃度：濃度愈大，滅活越快，抗原也損失大；但是，95%酒精沒75%酒精殺滅細菌好。

（四）溫度：溫度與滅活成正比，每升高10度，金屬類殺菌作用增加2—5倍。但高溫超過40°C，抗原也損失大。

（五）時間：滅活時間與溫度和濃度成反比，即滅活殺菌 長，溫度舊低，濃度也 低，就可以殺滅細菌。

（六）pH：堿性快，酸性慢，酸性環(huán)境對 抗原保護好。

（七）有機物存在：環(huán)境的 有機物減低滅活的效果，微生物也是有機物。

四、滅活疫苗時的注意事項 1、2人參加滅活，注意藥品名和量，滅活后標記。

2、37°C滅活一天后，接種適宜培養(yǎng)基—無菌檢查。

3、動物試驗，滅活苗制成后，注射小白鼠0、2ml，兩只，觀察3天。

4、使用試驗：用戶可先注射1-2頭，觀察1—2天，看有無過敏，應激等反應，證明安全，才全群使用。

思考題：

1、什么叫滅活和滅火劑？

2、滅活劑的種類有哪些？

3、影響滅活的因素是什么？

4、滅活的注意事項有哪些？

第二節(jié) 凍干保護劑

凍干保護劑也叫穩(wěn)定劑，是防止微生物在凍干過程中受到破壞。A、按作用原理分兩類：

滲透劑：能滲入細胞，使胞內外滲透壓平衡，防止慢凍時損傷細胞。有甘油，蔗糖，而甲基亞砜。

非滲透劑：防止細胞內外物質交換在速凍時保護細胞。有 蛋白質，聚乙烯吡咯酮。B、按保護劑分子量分類： 烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

低分子量保護劑：糖、氨基酸類。高分子量保護劑：脫脂牛奶、明膠。C、按化學性質分類：

復合物：脫脂牛奶，血清。糖類：蔗糖、乳糖。

鹽類：乳酸鈣、谷氨酸鈉。醇類：甘油，山梨醇，甘露醇。酸類：檸檬酸，氨基酸。

聚合物：葡聚糖，聚乙烯吡咯酮。

一、凍干保護劑的組成和作用

按組成將保護劑分為營養(yǎng)液，賦形劑，抗氧化劑。

營養(yǎng)液：使受損細胞修復：脫脂牛奶，蛋白質，氨基酸，糖類。賦形劑：骨架作用，制品形成網孔結構，易溶解----蔗糖，乳糖?？寡趸瘎罕Ｗo酶類，防止氧化—VC，VE，硫代硫酸鈉。保護劑的作用：

1)防止細胞內水結晶和細胞失去水分。2)平衡細胞內外滲透壓，防止細胞破裂。3)助于細胞修復以及凍干后復蘇。

二、影響凍干保護劑效果的因素

判斷保護劑的好壞，從凍干后的存活率，以及生物制品的保質期研究。然后對不同物質篩選不同配方，選出好的保護劑。

1、保護劑的種類：不同微生物用不同的保護劑。

2、保護劑的濃度：5—10%的葡萄糖保存大腸桿菌存活率高。

3、保護劑配制方法：糖、血清、維生素不能高溫滅菌，糖可以114°C30分鐘滅菌，其他可以過濾除菌。

4、保護劑的pH：一般為6-8。

三、常用的凍干保護劑

生物制品保護劑很多，各國家不同，如雞新城疫苗（ND），我國是5%蔗糖脫脂牛奶；日本是5%乳糖、0、15%聚乙烯吡咯酮、1%馬血清。

(一)不同微生物用不同保護劑

細菌疫苗：10%蔗糖；5%蔗糖脫脂牛奶；5%蔗糖、1、5%明膠；10-20%脫脂牛奶。厭氧菌苗：0、1%谷氨酸鈉、10%乳糖；10%脫脂牛奶；

7、5%葡萄糖血清。病毒疫苗：多用混合保護劑，如5%蔗糖脫脂牛奶。

（三）幾種常用的保護劑

5%蔗糖脫脂牛奶—新城疫疫苗 明膠蔗糖保護劑---禽霍亂疫苗 聚乙烯吡咯酮乳糖—厭氧菌

SPGA（蔗糖76、62g，磷酸二氫鉀0、52g，磷酸氫二鉀1、62g，谷氨酸鈉0、83g，牛血清蛋白10g，去離子水1000ml）雞馬立克氏疫苗。

保護劑的添加：一般是疫苗和保護劑1：1加入（5%蔗糖脫脂牛奶—新城疫疫苗），還有是按疫苗量加入保護劑到規(guī)定濃度（如5%蔗糖明膠保護劑，加疫苗是先配濃度高的40%的蔗糖、12%明膠，然后按疫苗1份，保護劑7份混合。）。

弱毒疫苗飲水：加0、2%奶粉，以中和水中的 有害離子和毒性物質。思考題： 烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

1、什么叫凍干保護劑？組成和作用是什么？

2、影響凍干保護劑效果的因素有哪些？

3、常用凍干保護劑有哪些？

第三節(jié) 免疫佐劑

一、佐劑的概念：

概念：adjuvant一詞來源于拉丁語，即輔佐之意。免疫佐劑是一種非特異免疫增強劑，先注射或和抗原同時注射，能明顯增強免疫反應。最新概念：凡是增強抗原特異性免疫反應的物質，均叫佐劑。

作用機理：

1、抗原遞程—助于吞噬細胞的吞噬和抗原傳遞。

2、抗原尋找—增加抗原目標，改變抗原構型，吸引吞噬細胞。

3、免疫調節(jié)—增強免疫應答，包括細胞免疫和體液免疫。佐劑的分類：

按物理性質：顆粒型佐劑，非顆粒佐劑。按生物學性質：微生物和非微生物佐劑。按存儲時間：儲存型和非存儲型。

（一）顆粒型佐劑—將抗原包括成顆粒狀。

1、鹽類佐劑—氫氧化鋁膠，明礬，磷酸三鈣等。

2、油類佐劑 A、弗氏佐劑：1935年，美籍匈牙利學者Freund發(fā)明，分弗氏不完全佐劑：礦物油75-85%+加羊毛脂（乳化劑）15—25%，充分乳化即成，簡寫FIA,Freunds incomplete advuant；弗氏完全佐劑：是在FIA中加入死結核桿菌或卡介苗即成，縮寫FCA.。

B、礦物油司本佐劑（現在經常用的，以后專講）

3、免疫刺激復合物佐劑—簡寫ISCOM佐劑（皂苷類）。

4、蜂膠佐劑

5、脂質體佐劑

其它佐劑—MF59，微膠囊佐劑。

（二）非顆粒佐劑

1、肽類佐劑：胞壁酰二肽（結核桿菌細胞壁），脂肽及免疫調節(jié)多肽。

2、表面活性劑：海藻糖合成的衍生物。

3、核酸類：合成核苷酸聚合體，次黃嘌呤衍生物，免疫刺激序列DNA。

4、含硫復合物：左旋咪唑（既可驅蟲，又可免疫增強）。

5、高分子碳水化合物，香菇多糖。

6、細胞因子：IL—1、2、4；干擾素，轉移因子等。

8、其它，霍亂毒素，類毒素。

二、常規(guī)免疫佐劑

（一）鹽類佐劑

1926年Gleny使用鋁膠佐劑，幾十年來，人畜疫苗已經廣泛使用該佐劑。

作用機理：a，儲存和延緩吸收；b、增加抗原表面積；c、形成巨噬細胞肉芽腫（增強體液和細胞免疫）。

1、氫氧化鋁膠

合成方法：有三種，鋁粉加燒堿；明礬加碳酸鈉以及明礬加氨水等。

明礬加氨水方法：20%澄清的明礬水，溫度60度，邊攪邊加氨水，到pH8時停止，然烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

后打磨均勻，清水漂洗多次硫酸根離子，到pH7時既可，裝瓶高壓滅菌，用時20%加入疫苗。

2、明礬：有鉀明礬和胺明礬，主要是吸附、沉淀、濃縮作用；精致10%明礬水，滅菌，25度保存，按疫苗量1—2%加入，搖勻即可，有沉淀作用。主要用于破傷風類毒素的沉淀和氣腫疽滅活疫苗的使用。

3、磷酸三鈣佐劑，與鋁膠同樣作用，制作簡便。

將滅菌的20%氯化鈣2、5ml加入100ml疫苗中搖勻，再加入20%磷酸氫二鈉7、5ml，搖勻即成白色絮狀沉淀。加的次序不能錯，該佐劑沉淀作用比鋁膠強。

（二）油類佐劑（礦物油司本佐劑）

乳化劑是一種降低其它溶液表面張力作用的物質，可使一種物質分散混合于另一不相容的液體中。司本80或吐溫80既是乳化劑。他們可使油類和水劑疫苗乳化均勻。

疫苗水劑是分散相（內相）,油類為連續(xù)相（外相），兩者中間是乳化劑，可以做成油包水，W/O；也可以做成水包油，O/W;前者不易吸收，儲存時間長。后者容易吸收和釋放。

最常用是白油司本佐劑

方法：制備油相：94%杭州10號白油，加6%司本80（HLB，親水親油值，值高親水強，值低親油強），HLB是4、2，混合后加2%硬質酸鋁，熬化溶解，高壓滅菌備用。水相：疫苗加4%吐溫80（HLB 15）攪拌均勻即成。按油：水，3—1：1進行高速攪拌或膠體磨磨3遍就成。如果攪拌油中慢慢加入水相，制成是油包水，W/O，反之是水包油，O/W。

油乳疫苗檢驗：

1、粘度檢測：口徑Ф1、2mm吸管，吸1ml乳劑，放出0、4ml的時間在2—6秒為宜，不可多于10—15秒，注射困難。

2、穩(wěn)定性檢查：①加速老化試驗，37度，10—30天，不破乳；②離心3000轉/分鐘，15分鐘不分層，可以保存一年。

（三）蜂膠佐劑

1、蜂膠的理化特性：蜂膠含樹脂、蜂分泌物，蜂蠟、花粉及其它多種物質，為固體粘稠狀，冷硬熱軟，灰褐色，20-40度發(fā)粘，15度下變硬脆，60-70度液化。

等級：乙醇溶解后測含量，含66-70%為一級；61-65%為二級；56-60%三級；50-55%是四級。方法：

2、5克蜂膠，加乙醇冷浸24h，濾紙過濾，45度干燥，計算浸出物的含量。

2、作用：抗菌抗病毒、抗腫瘤、消炎和免疫增強作用。

3、蜂膠的使用

①蜂膠處理：4-8度粉碎，過篩，1：4加入乙醇浸泡24-48h，過濾去渣，算出含量，4度保存。

②蜂膠的加入：一般按疫苗量的到10mg/ml，搖勻成乳濁狀。山東濱州獸醫(yī)研究所 生產蜂膠系列疫苗。

三、新型免疫佐劑

（一）細胞因子類佐劑

IL-1:淋巴細胞活化因子，活化多種免疫細胞

IL-2：T細胞生長因子，也促進B細胞增殖，應用多。IL-4：B細胞刺激因子

IL-12：B細胞產生的，促進淋巴細胞成熟 干擾素：抗病毒，抗腫瘤，免疫調節(jié)。

（二）免疫刺激復合物（iscom）

是抗原：皂苷：膽固醇=1：1：1制成，為脂質效泡，作用，提高抗原傳遞，可與多種疫苗混合，還可以粘膜免疫。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

（三）脂質體

人工合成多層脂質小體，包埋抗原，提高抗原傳遞。

（四）MF59佐劑 4、3%角鯊烷+0、5%吐溫80+0、5%司本85組成，多用于病毒疫苗佐劑，可刺激體液免疫也可以細胞免疫。思考題：

1、什么叫佐劑？作用原理是什么？

2、佐劑按物理性質，可分為哪些種類？

3、什么叫弗氏不完全佐劑和弗氏完全佐劑？

4、什么叫細胞因子？又和特點？主要有哪些？

5、常規(guī)佐劑有哪些？新型佐劑有哪些？

6、鋁膠和司本油類佐劑如何配制？

第四章 菌（毒）種選育技術及疫苗制備技術 第一節(jié) 菌（毒）種選育技術

一、獸用生物制品菌（毒）種的標準

1、生物學性狀明顯，歷史清楚：形態(tài)、生理、生化典型、血清學、來源、代數等清楚。

2、遺傳學純一穩(wěn)定：穩(wěn)定純一的菌種，才能制造出高質量穩(wěn)定的疫苗。

3、免疫抗原、反應抗原好：：高質量疫苗的基礎。

4、毒力在適當范圍內：滅活疫苗應該是強毒，弱毒疫苗安全，中等毒力的如ND-I系，IBD中等毒力苗。測定毒力要用敏感動物進行。

二、強菌（毒）種的選育

1、強毒種的用途：滅活疫苗、診斷試劑、抗血清、攻毒試驗。

2、強毒種來源：典型傳染病分離培養(yǎng)，保藏中心提供。

3、強毒種分離：a、純粹試驗（分離培養(yǎng)、鑒定）。

B、致病力（動物、雞胚、細胞試驗）。

C、抗原性（免疫及反應抗原試驗）

D、穩(wěn)定性（傳代不變異）

達到：毒力強，純粹，抗原好，穩(wěn)定的菌種，最后凍干保藏。這就是強毒菌種的標準 復壯：弱毒菌種在敏感動物或細胞上多次傳代，達到毒力增強的目的（日本731部隊用人試驗，目的是增強細菌毒力，做細菌武器使用。）。

三、弱（菌）毒種的選育

1、用途：弱毒疫苗，診斷試劑，免疫血清。

2、來源：自然界篩選和人工誘變。

3、弱毒篩選途徑：

自然界弱毒篩選：同源弱毒—新城疫I系

異源弱毒—火雞皰疹病毒疫苗

它們都是在自然界尋找發(fā)現的。人工誘變篩選：化學誘變：洗衣粉、錐黃素、醋酸鉈等加入培養(yǎng)基。

物理誘變：高溫培養(yǎng)，干燥，紫外線等。

生物誘變：通過鈍感動物，細胞以及細胞培養(yǎng)獲得。

4、初選的依據：

a)生物性狀改變—豬丹毒桿菌變長絲狀，菌落光滑變粗糙。b)病毒蝕斑變異。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

c)d)e)f)溫度敏感變異。藥物敏感變異 營養(yǎng)變異 宿主變異

第二節(jié) 細菌性疫苗和類毒素的制備技術

制造優(yōu)良疫苗的關鍵：a、優(yōu)良的菌種，b、適宜的培養(yǎng)方法；c、良好生產工藝；d、嚴格的檢驗和標準。

一、細菌性滅活疫苗的制備程序

1、種子：毒力強，免疫原性好，1—3個菌株，菌種逐級擴大培養(yǎng)。

2、培養(yǎng)：選適當培養(yǎng)基和方法，如固體或液體培養(yǎng)，要計數活菌和觀察純度。

3、滅活和無菌檢查：加適量甲醛37度滅活24h，接種斜面培養(yǎng)基無菌檢查，4、濃縮提高含菌量：離心或沉淀方法。

5、配佐劑分裝：加20%鋁膠，或油2：1水油乳化，無菌分裝，加塞，封蠟，標簽和裝箱。

6、動物安全試驗，接種小白鼠0、2ml觀察3天，健活。

二、細菌性活疫苗的制備程序

1、菌種：中監(jiān)所提供凍干種。

2、培養(yǎng)：1-3%量接種，檢查純度和計數。

3、濃縮：離心或吸附沉淀法（用0、2-0、25%羧甲基纖維素濃縮。

4、配苗和凍干：加入合適濃度保護劑，分裝，凍干，加塞，封口，標簽和裝箱。

5、動物安全試驗。

三、類毒素的制備程序

1、菌種與毒素

中監(jiān)所分發(fā)或批準的產毒效價高、免疫力強的菌株，必要時可對菌種進行帥選。

2、脫毒

甲醛溶液法

3、類毒素的精制

（1）物理學方法

冷凍干燥、超濾、蒸發(fā)、凍融等

（2）化學沉淀法

酸沉淀法、鹽析法、有機溶劑沉淀法等

（3）層析法

凝膠過濾、離子交換層析法

第三節(jié) 病毒疫苗的制備技術

一、病毒性組織苗的制備程序

病毒在易感動物體內增殖，用含毒量高的組織制造疫苗，叫滅活組織苗，如兔瘟，自家組織滅活苗；弱毒疫苗有豬瘟兔化弱毒疫苗。

（一）自家組織滅活苗

1、選癥狀典型、含毒量高的組織。

2、稱重和打勻：一般按組織和生理鹽水按1：5—8打勻。切碎組織，搗碎機打勻，1：5加生理鹽水，加青鏈霉素各1000u/ml。

3、凍融和過濾：冰柜反復冰凍和融化三次，釋放病毒，4層紗布過濾。

4、滅活：加0、4%甲醛滅活，37度24h，5、無菌檢查：接種斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h，無細菌生長。菌苗4層紗布再過濾一次。

6、加佐劑分裝：加20%鋁膠，分裝。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

7、動物安全檢查:接種小白鼠0、2ml，觀察3天，無反應，安全。

（二）病毒弱毒疫苗

1.選易感的SPF動物，年齡大小一致。

2.毒種：選適宜毒力的病毒，減少傳代次數，選適宜接種途徑。

3.觀察、收獲和測效價：觀察食欲、體溫、精神等，符合癥狀者剖殺，取含度高組織測效價，符合效價可以做疫苗。

4.研磨、稀釋和殺菌：將組織剪碎研磨，按1：10—1：100加入稀釋劑，過濾，1雙抗500-1000u/ml，0-4度處理過夜。

5.無菌檢查，半成品疫苗接種適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)，無細菌生長。6.加保護劑凍干分裝。

7.動物安全試驗，接種適宜動物，3天安全。

二、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗的制備程序

除禽病可以用禽胚外，其它正粘病毒（流感）、副粘病毒等，都可以用禽胚培養(yǎng)，生產工藝簡單，質量容易控制。

（一）雞胚的選擇：SPF、未免疫、未用抗生素，適宜的雞胚齡。

（二）種毒和繼代：凍干毒要雞胚活化三代以上，效價合格方可使用。

（三）接種與收獲

接種，合適部位、合適時間，適宜濃度和量，如ND Ⅰ系，為10-3、1ml接種。ND Ⅱ系是用10-4、1ml接種.培育及收獲：NDⅠ系，為38、5-39℃,60-70%濕度培育，收24-48h的雞胚，0-4℃冷卻，收尿囊液。

（四）檢查無菌和效價。ND NDⅠ系效價是1：80以上合格。

（五）配疫苗：

1.濕疫苗：尿囊液加雙抗，-20℃保存1-2年，0-8℃保存3-6個月。用時按10-4稀釋，每雞一滴。

2.凍干疫苗：尿囊液適當稀釋10-2，加等量保護劑，雙抗，分裝凍干，-15℃一年保存。

3.油乳滅活疫苗：尿囊液適當稀釋10-2，加0、1%甲醛滅活，加雙抗，按油：水疫苗，3-1：1乳化即成，3-15度保存半年，小雞0、1-0、2ml，大雞0、5—1ml。

三、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗的制備程序

(一)種毒和繼代：毒種要經過毒力、安全、無菌檢查合格才可以做毒種。其次，毒種要細胞適應后可以大規(guī)模培養(yǎng)。

（二）營養(yǎng)液：多用專門商品培養(yǎng)基。

（三）細胞制備：多用原代細胞和二倍體細胞，選擇依據：病毒適應性高、毒價高，細胞來源方便、制備簡單，生命力強。不能用癌細胞或其它含逆轉錄病毒的細胞。

（四）接毒和收獲：接毒分同步和異步，同步即細胞分裝后不久接種，如細小病毒。異步是細胞形成單層后接種，如豬水泡病病毒。一般按1—2%量接種，70-85%細胞病變時收獲。

（五）配疫苗：

1、滅活苗，加入滅火劑，阻滯劑，再加佐劑混合而成。

2、凍干疫苗，加保護劑混合，分裝凍干。

第四節(jié) 寄生蟲疫苗的制備技術

是新發(fā)展的疫苗，臨床主要用的有雞球蟲疫苗及原蟲疫苗。大寄生蟲因為抗原復雜，不可做疫苗。

（一）致弱疫苗

1、蟲體致弱，篩選天然弱毒蟲株做疫苗。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

2、人工致弱：體內傳代致弱，牛巴貝斯蟲在犢牛傳15代成弱毒。

體外傳代致弱，如艾美爾球蟲通過雞胚傳代，牛泰勒蟲是淋巴細胞傳代致弱，還有放射線和藥物致弱。

（二）抗原疫苗：大量提取寄生蟲有效保護性抗原制成。

1、寄生蟲抗原苗：獲取大量蟲體----機械粉碎裂解----提取抗原浸出物---濃縮配苗。

2、分子水平寄生蟲疫苗；通過基因生物工程，獲取大量純化的寄生蟲功能抗原，制成疫苗。

第五節(jié) 基因工程疫苗的制備技術

目前利用基因工程技術研制可發(fā)的新型疫苗主要有：重組亞單位疫苗、活載體疫苗、基因缺失疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗、轉基因植物疫苗等。

基因工程疫苗的優(yōu)點： 1.安全性好；

2.減少或消除了常規(guī)活疫苗或死疫苗難以避免的熱原、變應原、免疫抑制原和其它有害的反應原；

3.穩(wěn)定性好，便于保存和運輸,更適合于疫病的控制和消滅計劃。思考題：

1．生物制品毒種標準是什么？ 2.強毒、弱毒菌種如何選育？

3.簡述以下疫苗制備流程（細菌滅活苗，細菌活疫苗，病毒性組織苗）。4.簡述類毒素的生產要點。

第五章 診斷用生物制品制造技術

利用微生物、寄生蟲及其代謝產物，或動物血液、組織制備的，專供診斷動物疫病、監(jiān)測動物免疫狀態(tài)及鑒定病原微生物的制品稱為診斷制劑或診斷液。

第一節(jié)

診斷抗原

診斷抗原按性質分為顆粒性抗原、可溶性抗原兩種，顆粒性抗原主要用于凝集性反應，可溶性抗原可用于沉淀性反應極其他種類的診斷試驗。按照診斷試驗的種類可將診斷抗原分為凝集反應抗原、沉淀反應抗原、補體結合反應抗原、中和試驗抗原及變態(tài)反應抗原等。

一、凝集反應抗原

凝集反應抗原有直接凝集反應抗原和間接凝集反應抗原兩種。1.凝集反應抗原制備方法

一般選擇符合要求的合格菌株，若型別不同，則根據需要選擇使用。接種于適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)。用含福爾馬林生理鹽水洗下培養(yǎng)基上的細菌，經一定時間滅活，或用生理鹽水洗下后加熱滅活。將滅活的菌液過濾，除去大顆粒，離心棄上清，將沉淀用福爾馬林生理鹽水或石炭酸生理鹽水稀釋成每毫升含規(guī)定菌數。經無菌檢驗、特異性檢驗和標化合格者即為濃菌液。間接凝集抗原制備使用的載體多為紅細胞。先取可溶性抗原，然后將抗原按量吸附于雙醛化的載體紅細胞上，使紅細胞致敏，即為間接凝集反應。2.常用的凝集反應抗原

目前應用的有布氏桿菌凝集反應抗原、馬流產凝集反應抗原、豬萎縮性鼻炎凝集反應抗原、雞白痢傷寒多價平板凝集試驗抗原。

二、沉淀反應抗原 烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

根據使用方法不同，沉淀反應抗原可分為環(huán)狀反應抗原、絮狀反應抗原、瓊脂擴散反應抗原和免疫電泳抗原等。1.沉淀抗原制備方法（1）細菌沉淀抗原制備

選擇適宜菌種接種于合適的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)完畢后收集細菌培養(yǎng)物，滅菌、研磨成菌粉，按一定比例加入0.5%石炭酸生理鹽水浸泡，過濾后的濾液即為沉淀抗原。也可將收集的細菌培養(yǎng)物直接加入一定量的福爾馬林或酒精，靜置一定時間；或加入一定量醋酸，100℃水浴30min；或用裂解菌體等方法提取抗原，然后離心，收集上清，必要時濃縮即成為沉淀抗原。（2）病毒沉淀抗原制備

選用適宜的動物組織或細胞培養(yǎng)病毒。收獲含毒高的動物組織制成勻漿，加入緩沖液或生理鹽水，裂解細胞，置于40℃浸毒。高速離心取上清，滅活后即成沉淀抗原。

2.常用的沉淀反應抗原

雞法氏囊病瓊脂擴散反應抗原、馬立克氏病瓊脂擴散反應抗原、標準炭疽抗原、小鵝瘟病沉淀抗原、山羊痘沉淀抗原等。

三、補體結合反應抗原

補體結合反應是一種廣泛應用的經典性檢測抗原抗體的方法，補體結合反應抗原主要用于檢測相應抗體。

1.補體結合反應抗原制備方法

（1）細菌性抗原制備

先將合格的菌株在培養(yǎng)基上大量培養(yǎng)，然后用0.5%石炭酸生理鹽水沖下，收集菌液，高壓滅菌或加溫水浴滅活，或加福爾馬林滅活，然后離心除去上清，將沉淀懸浮于0.5%石炭生理鹽水中，置冷暗處浸泡一段時間，收集上清即為抗原。

（2）病毒性抗原制備

病毒在細胞上大量增殖后，收獲病毒液，凍融3次，3000r/min離心30min，收集上清，經適當處理即為抗原。2.常用的補體結合反應抗原

鼻疽補體結合試驗抗原、布魯氏菌補體結合試驗抗原、馬傳染性貧血補體結合試驗抗原等。

四、變態(tài)反應抗原制造

細胞內寄生菌，如鼻祖桿菌、結核桿菌、布氏桿菌等，在感染過程中引起以細胞免疫為主的變態(tài)反應，即感染機體再次遇到同種病原菌或其代謝產物時出現一種具有高度特異性和敏感性的異常反應，據此，臨床上常用以診斷某些傳染病。引起變態(tài)反應的抗原物質又稱為變應原。

1.變態(tài)反應抗原制備方法

變態(tài)反應抗原的制備分為粗變態(tài)反應抗原和提純變態(tài)反應抗原兩種方法。

（1）粗變態(tài)反應抗原制備

選擇抗原性良好的病原菌，接種于甘油肉湯培養(yǎng)基上培養(yǎng)2~4個月，收集培養(yǎng)物，然后高壓滅菌，過濾，濾液即為粗變態(tài)反應抗原。

（2）提純變態(tài)反應抗原

將菌種接種于合成培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2~4個月，高壓滅菌，過濾，在濾液中加入4%三氯醋酸，使蛋白質沉淀，去上清，把沉淀物懸浮于1%三氯醋酸中，離心洗滌3次，將沉淀物溶于PH值為4.0磷酸鹽緩沖液中，測定蛋白質含量，分裝備用或凍干保存。

第二節(jié)

診斷抗體

一、診斷血清 診斷血清，是一類是利用體外抗原抗體反應來診斷疫病或鑒別微生物的生物制劑。通常用抗原免疫動物制成，有些則需再經吸收除去非特異性抗體成分后供診斷用。含有多型或多群抗體的稱為多價診斷血清，含有一種抗體的稱為單價診斷血清。單含有鞭毛抗體成分的稱烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

為H血清。

二、單克隆抗體

(一)單克隆抗體的概念

單克隆抗體是指由一個B細胞分化增殖的子代細胞(漿細胞)產生的針對單一抗原決定簇的抗體。這種抗體的重鏈、輕鏈及其V區(qū)獨特型的特異性、親和力、生物學性狀及分子結構均完全相同。

(二)單克隆抗體的制備

B細胞的制備

2.骨髓瘤細胞的制備 3.飼養(yǎng)細胞的制備

4.選擇培養(yǎng)基 5.細胞融合 6.雜交瘤細胞篩選 7.雜交瘤細胞篩選

8.雜交瘤細胞凍存 9.單抗的生產

第三節(jié)

標記抗體

具有示蹤效應的化學物質與抗體結合后，仍保持其示蹤活性和與相應抗原特異結合能力，此種結合物稱為標記抗體。

一、熒光素標記抗體

將熒光素和抗體結合所制備的結合物稱為熒光素標記抗體。熒光素是一種染料，在紫外光、藍紫光等短光波照射下而被激活釋放出可見光，稱為熒光。

二、酶標記抗體

將酶和抗體結合所制備的結合物稱為酶標記抗體。酶標記抗體可與相應抗原形成酶標記的免疫復合物。結合在免疫復合物上的酶，在遇到相應的底物時，催化無色底物發(fā)生水解、氧化或還原，生成有色產物，從而出現顏色變化。

三、放射性同位素標記抗體

將某種放射性同位素與抗體標記起來，具有高靈敏度、精確性特異性。

四、膠體金標記抗體

將膠體金和抗體結合所制備的結合物稱為膠體金標記抗體。

思考題：

1.什么叫診斷抗原？包括哪些種類？ 2.簡述單克隆抗體的概念機制備要點。

第六章 治療用生物制品的制造技術

第一節(jié) 免疫血清的制備

一、免疫動物的選擇

制備免疫血清的動物有馬、牛、綿羊等。用同種動物生產的稱同源血清，用異種動物生產的稱異源血清。為了避免疫病的傳播，制備抗血清時，一般要求用異種動物，通常用馬和牛等大動物制備。生產中制備免疫血清用馬較多，因為血清滲出率較高，外觀顏色較好。由于動物存在個體免疫應答能力差異，所以選定動物應有一定的數量，一個批次應用多頭動物。

二、免疫抗原的制備

制造免疫血清的抗原，一般是用微生物或其毒素，或微生物的提取物等純化的完全抗原。1.細菌免疫原制備 基礎免疫用抗原多為疫苗或死菌，而加強免疫的抗原，一般選用烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

毒力較強的菌株。多價抗病血清用的抗原，要求用多血清型菌株。菌種接種于最適生長的培養(yǎng)基，按常規(guī)方法進行培養(yǎng)。通常活菌抗原需用新鮮培養(yǎng)菌液，并按規(guī)定的濃度使用，培養(yǎng)時間較死菌抗原稍短為好，多用16~18h培養(yǎng)物，經純粹檢查，證明無雜菌者，即可作為免疫抗原。為減少由培養(yǎng)基帶來的非特異性成分，可通過離心，棄上清，再將菌體制成一定濃度的細菌懸液，作為免疫原。

2.病毒免疫原制備 以病毒為免疫原，須通過反復凍融或超聲裂解方法，將病毒從細胞中釋放出來，并盡可能地提高病毒滴度和免疫原性。如豬瘟血清，基礎免疫的抗原，可用豬瘟兔化弱毒疫苗；加強免疫抗原，則用豬瘟血毒或脾淋毒乳劑等強毒。豬接種豬瘟強毒發(fā)病后5~7d，當出現體溫升高及典型豬瘟癥狀時，由動脈放血，收集全部血清，經無菌檢驗合格后即可作為抗原使用。接種豬瘟強毒的豬，除血中含有病毒外，脾臟和淋巴結也有大量的病毒，可采集并制成乳劑，作為抗原使用。

3.抗毒素血清免疫原制備 免疫原可用類毒素、毒素或全培養(yǎng)物（活菌加毒素），但后兩者只有需要加強免疫刺激的情況下才應用，一般多用類毒素作免疫原。

三、免疫程序

免疫程序分為兩個階段，第一階段為基礎免疫，第二階段為加強免疫。從被免疫動物初次接受免疫原刺激，到產生少量抗體，這段時間在制造程序中稱為基礎免疫。基礎免疫對第二階段的加強免疫有重要關系。

1．基礎免疫 通常先用本病的疫苗按預防劑量作第1次免疫，經1~3周再用較大劑量的滅活苗或活菌或特制的滅活抗原再免疫1~3次，即完成基礎免疫?；A免疫大多數1~3次即可，抗原無須過多過強，可為加強免疫產生有效地回憶應答打下基礎。2.加強免疫 亦稱高度免疫。一般在基礎免疫后2~4周開始進行。注射的抗原可采用滅活抗原，也可采用強毒微生物。微生物的毒力越強，一般免疫原性越好。免疫劑量逐漸增加，每次注射抗原間隔時間多為5~7d，加強的注射次數要視血清抗體效價而定。再用強毒微生物進行加強免疫時，必須在強毒動物舍或負壓隔離器中進行，并采取嚴格的控制措施，以防散毒。

3.免疫途徑 免疫原注射途徑一般采用皮下或肌肉注射。如果免疫劑量大，應采用多部位注射法，尤其在應用油佐劑抗原時更應注意此點。

四、血液采集與血清提取

1．采集次數和方法 一般血清抗體的效價高峰在最后1次免疫后的7~10d。采血可以全放血或部分采血，即1次采集或多次采集，盡可能做到無菌操作。多次采血者，按體重每千克采血約10ml。全放血者，在最后1次高免之后的8~11d進行放血。放血前，動物應禁食24h，但需飲水以防止血脂過高。

2.血清的分離 采血時一般不加抗凝劑，全血在室溫中自然凝固。待血液凝固后進行剝離或者將凝血切成若干小塊，并使其與容器剝離。先置于37℃1~2h，然后置于4℃冰箱過夜，次日離心收集血清。如果采集的血量較大時，可采用自然凝固加壓法。

第二節(jié) 卵黃抗體的制備

產蛋的禽類感染某些病原后，其血清和卵黃內均可產生相應的抗體，而且，卵黃中的抗體水平同樣也隨抗原的反復刺激而升高。因此，通過免疫注射產蛋雞，即可由其生產的蛋黃中提取相應的抗體，與高免血清一樣只限用于相應疫病的治療和緊急預防接種。該類制劑稱為卵黃抗體（IgY）。

一、使用范圍

治療雞法氏囊炎病、新城疫病、小餓瘟、鴨病毒肝炎，仔豬黃白痢等。

二、制備過程 烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

1．免疫：開產前一個月健康雞群，免疫3次法氏囊炎滅活疫苗，每次1-2ml，間隔10天一次，最后一次10天測效價，到1：128合格。

2.制備：0、3%新潔爾滅消毒雞蛋—分離蛋黃---按1：3加入生理鹽水—高速攪拌—加雙抗1000u/ml，單層紗布過濾分裝，冰凍保存（成品效價在1：16以上）。

3．使用：皮下或肌肉注射1-2ml/kg，病重隔天一次，也可以加水中飲用。免疫時間半個月，半月后需再注射疫苗。

參照上述血清的制備方法，其它抗血清也可以做，只是免疫的抗原不一樣。

思考題：

1、簡述免疫血清制備要點及保存方法。

2、簡述卵黃抗體的制備要點和保存方法。

第七章

實驗動物

第一節(jié) 常用實驗動物的特性與應用

一、小鼠：用途，半數致死量實驗，藥物及生物制品實驗等。注意，小白鼠對熱敏感，不可超過32℃

二、大鼠：用途，基本同小白鼠，并對維生素，氨基酸敏感，可做營養(yǎng)實驗。

三、豚鼠：用途，做補體使用；變態(tài)反應；不合成維生素C；對抗生素敏感；對霉變飼料和溫度敏感。

四、家兔：用途，生物制品制造；藥品安全、效力、熱原質實驗；對細菌和病毒敏感。

第二節(jié) 實驗動物的遺傳控制與微生物控制

一、實驗動物的遺傳質量控制

（一）實驗動物的遺傳學分類：

1.近交系動物：一般稱純系動物，近交連續(xù)20代以上，近交系數達88、6—99、8%，現有品系在300種以上。

2.封閉群動物：五年內不引進，群內隨機交配，一般是50—100頭的群。

3.突變系動物：由于正常染色體個別基因發(fā)生突變，而導致動物性狀的改變。

全球有350種，大鼠50種，如癲癇大鼠，高血壓大鼠，裸鼠（無胸腺），不同腫瘤多發(fā)鼠。可用于研究病的的機理和治療藥物。

4.雜交群動物：兩品或多品系之間有針對性的雜交，具有強的生命力和高的生產性能。如豬三元雜交：杜洛克♂+長白—大約克♀→杜長大，為我國主流商品豬品系。

（二）實驗動物遺傳控制質量方法 1.生產過程控制 2.遺傳監(jiān)測

二、實驗動物的微生物控制

（一）實驗動物的微生物控制分類

農業(yè)部規(guī)定生物制品實驗使用動物要求達到清潔級動物，雞，鴨胚胎要求達到SPF標準。1.普通級動物：（一級動物），未特殊控制的動物，但不攜帶人畜公患微生物，如沙門氏菌，結核桿菌，巴氏桿菌，李氏桿菌，鉤端螺旋體，皮膚霉菌及體外寄生蟲。2.清潔級動物（二級動物）：種群來自剖腹產SPF動物，飼養(yǎng)管理衛(wèi)生，種群清楚，微生物控制達到清潔動物標準。3.SPF動物（三級動物）：不存在某種病原微生物或寄生蟲的動物。通過檢查淘汰陽性動物選育。原種群多來自無菌動物或悉生動物基礎上選育。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

4.無菌動物（四級動物）：GF—germ free animals。指體內檢查不出任何細菌、病毒、寄生蟲的動物。是由剖腹產，無菌環(huán)境飼養(yǎng)的動物。5.悉生動物（gnotobiotic animals）：是有無菌動物人工植入某種已知微生物的動物。如單菌動物，雙菌動物，三菌動物，也可以叫X聯悉生動物。

（二）實驗動物的微生物學監(jiān)測

按照國家標準《實驗動物微生物學等級及監(jiān)測》（GB14922.1—2001）和《實驗動物微生物學等級及監(jiān)測》（GB14922.2.2—2001）。思考題：

1.什么叫實驗動物？有何特點和用途？

2.按遺傳和微生物控制，實驗動物可分哪些種類？ 3.常見實驗動物的特性和用途？

第八章

生產的主要設備及污物處理

第一節(jié) 滅菌器與空氣凈化設備

一、高壓蒸汽滅菌器

原理：水煮開后，壓力與溫度成正比，加快提高了滅菌效果；一般培養(yǎng)基滅菌溫度是121、3℃，15—30分鐘，含糖培養(yǎng)基一般為110℃滅菌。

注意事項：

1.水位：加水到隔板處，檢查設備儀表，密封圈。

2.排冷空氣：一般是壓力到3-5磅時開放氣閥，排冷空氣；也可以開始就開放氣閥，等熱氣不斷冒出時，關閉放氣閥。

3.滅菌溫度和時間：不同物品，用不同的溫度和時間。

4.滅菌結束后，壓力到零時，開蓋取物（不及時用鍋內物品，也要開放氣閥，防止壓力表損壞）。

二、干熱滅菌器

原理：干熱160-170℃2個小時，達到滅菌效果。注意事項：

1.僅供耐熱物品的滅菌，不能滅菌培養(yǎng)基以及塑料制品。2.滅菌后，溫度下降到60℃時才可以開門取物。3.滅菌物品5天內用完。

三、電離輻射滅菌

利用γ射線電離輻射，穿透物品，殺死其中的微生物。適用于各種怕熱的物品，穿透力殺菌。

優(yōu)點：a、消毒均勻；b、價格便宜；c、常溫可以滅菌；d、不破壞包裝；e、消毒快；f、穿透力強。

缺點：一次投資大，放射工作人員要專業(yè)培訓；用放射材料 60Co。

2原理：水被電離成H和OH離子，以及自由基、過氧化氫。破壞核酸、酶和蛋白質。

四、無菌室

微生物無菌實驗室分4級，一級最低，P3實驗室是叫生物安全防護三級實驗室，（P—protect保護），該實驗室是密封，負壓，用于烈性傳染病病原微生物的檢查，沒有這烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

個實驗室，不允許檢查診斷像“非典”，禽流感，口蹄疫等傳染病。防止病原擴散。

一般無菌室多由自己設計和建設，主要要密封房間，配紫外線燈，有緩沖間，遞物口，空氣過濾窗口，專用衣服和鞋，定時消毒，紫外線燈高度不超過2米。

五、凈化工作臺

原理：無菌空氣由上往下吹在工作臺面，保證了操作環(huán)境的無菌。

用前消毒藥水搽洗，紫外線燈照射半小時，然后開風扇操作。一般半年一檢修，過濾器18個月一更換。營養(yǎng)平板打開在工作臺5-10分鐘，蓋上培養(yǎng)，無菌才說明工作臺效果好。

第二節(jié)

微生物培養(yǎng)裝置

一、溫室

多自己設計，裝電爐多個，風扇，控溫儀表，多層格架，保溫材料墻壁，主要保證溫度室內均勻穩(wěn)定就可以。

二、細胞培養(yǎng)轉瓶機

細胞培養(yǎng)專用，主要是生產病毒疫苗使用。

三、發(fā)酵罐

小的幾升，大的上百噸，主要有自動滅菌，調溫，攪拌，供無菌空氣，測Ph,消沫，補液等。

四、生物反應器

自動細胞培養(yǎng)器，可自動控制O2，N 2，CO 2的濃度，自動穩(wěn)定pH，溫度，轉速等。

五、微生物濃縮裝置

中空纖維超濾膜，可濃縮不同微生物，提高疫苗濃度。

六、孵化器

可自動控溫，鼓風，翻蛋，降溫，加濕等功能。

第三節(jié)

乳化器

一、膠體磨

是制備油乳疫苗的主要設備，通過機器的高速剪切力，摩擦力，離心力和震蕩，達到混勻油水的目的。一般要通過三遍，油乳疫苗才均勻和穩(wěn)定。

二、高壓均漿機

制備油乳疫苗用，高壓產生空穴效應，湍流，剪切力，把油水混勻。

三、高速搗碎機

實驗室用于小量油乳疫苗的制備，也可以用于卵黃抗體的打勻。一般一次可以混勻300-500ml，高速攪拌2-3分鐘一次，最少攪拌三次。

第四節(jié)、冷凍真空干燥設備

實驗室有小型凍干機，通過實驗了解。主要有冷凍，真空泵，儀表，載物盤，壓蓋旋轉把手。

第五節(jié) 冷凍干燥疫苗分裝包裝設備

主要有：理瓶旋轉工作臺，多頭自動分裝機，膠塞定位機，自動灌裝半加塞聯動機。

第六節(jié)

冷藏設備

主要有冷庫，冷藏運輸車和液氮罐（196℃，保存馬立克氏疫苗）。

第七節(jié) 帶毒污水與廢棄物處理

一、污水處理

流程：帶毒污水—濾出粗渣—一級沉淀—沉淀池（臭氧和化學藥處理）--接觸池—檢驗烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

合格—暴曬—排放—養(yǎng)魚專用塘。

二、帶毒糞便、墊草等

小量墊草可以焚燒，糞便可以生物發(fā)酵2年以上。

三、動物尸體和臟器

焚燒或高壓滅菌 思考題：

1.生物制品有哪些滅菌和凈化設備？

2.高壓滅菌和干熱滅菌的原理和注意事項？ 3.培養(yǎng)設備有哪些？

4.乳化、凍干、分裝及冷藏設備有哪些？ 5.帶毒污水、廢物及動物尸體如何處理？

第九章

獸用生物制品質量監(jiān)控

第一節(jié) 生物制品監(jiān)察制度

一、生物制品管理體系

1.機構：中國獸醫(yī)監(jiān)察所

2.職能：A、負責生物制品監(jiān)督檢查和仲裁。B、檢驗用標準品、參照品，生產和檢驗的菌毒種。C、對生物制品成品的檢驗和判定。3.文件：

1)1952年公布了《獸醫(yī)生物制品制造及檢驗規(guī)程》。

2)2002年3月，發(fā)布了獸藥GMP規(guī)范《獸藥生產質量管理規(guī)范》。由管理機構，管理職能和管理文件，三項形成了生物制品管理體系。

二、菌毒種的管理

菌種、毒種和蟲種分三批管理：A、原種由研究單位和中國獸藥監(jiān)察所管；B、基礎種由中檢所或委托單位管；C、生產種由企業(yè)自己保管和傳代，記錄。

保管要做到：A、嚴格登記制度，由檔案，單位介紹信和公章。B、寄發(fā)菌毒種必須裝入金屬筒密封郵寄。C、烈性菌毒種需專人來領取，經農業(yè)部批準。

三、防止散毒的原則和措施

生物制品制造涉及到病原微生物，因此，要防止散毒。措施有：廠址選擇，廠房布置和廠內隔離區(qū)，污水污物處理方法，野生動物防范，生產程序和人員素質。

四、新生物制品制造及進口生物制品管理

新生物制品生產要報5項材料：菌種情況；免疫原性；生產檢驗步驟；免疫期；田間試驗數據。5項都需報中檢所。

進口生物制品，必須有進口獸藥登記許可證，注冊審批程序有：資料申請—農業(yè)部藥政處預審—評審委員會初審—中檢所質量復核及臨床試驗—新獸藥審評委員會審議—農業(yè)部審批—頒發(fā)《進口獸藥登記許可證》。

僅科學實驗，農業(yè)部審批就可以，不需要注冊。

第二節(jié) 獸用生物制品質量管理規(guī)范（GMP）

一、GMP的內容、原理和特點

（一）GMP的基本內容

1969年，世界衛(wèi)生組織宣布了《藥品生產和質量管理規(guī)范》。GMP:good manufacturing practices。1989年，我國頒布了《獸藥生產質量管理規(guī)范》，2002年3月修訂，6月實施。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

GMP包括三個內容：人員，廠房設備和管理制度和要求。

（二）特點：

GMP實施包括兩個方面：一是政府獸藥行政管理，把GMP作為獸藥企業(yè)生產的最低要求；二是獸藥企業(yè)以GMP作為產品質量保證的法規(guī)，自覺落實。

二、GMP對人員的基本要求

管理人員、技術人員和生產人員要具備大專學歷；并要有實踐經驗、管理經驗和質量意識。并要經上崗專業(yè)培訓。

三、GMP硬件要求

包括廠房、設備、環(huán)境和污水處理，工藝，實驗動物的具體要求等。

四、GMP軟件要求

包括衛(wèi)生及無菌管理操作規(guī)程，生產管理文件，制度和記錄；質量管理系統(tǒng)的人員及實施方案及記錄。

第三節(jié) 獸用生物制品的質量檢驗

主要是對成品的檢驗，包括5個方面:抽樣；無菌和純粹檢驗；安全檢驗；效力檢驗；物理性狀檢驗等。

一、抽樣：要有代表性。

人的生物制品是按0、4√￣抽樣，獸藥是500L以下抽5瓶，500—1000L抽10瓶，1000以上抽15瓶。凍干每柜抽5瓶；診斷液每批抽5瓶。

二、無菌和純粹檢驗

（一）檢驗用的培養(yǎng)基：不同疫苗選不同的培養(yǎng)基來培養(yǎng)。

（二）檢驗方法

1.含防腐劑、抗生素、滅活劑的制品要稀釋10倍檢驗。2.培養(yǎng)要需氧和厭氧同時培養(yǎng)。

3.發(fā)現個別有污染要重新檢驗，并加大檢驗量。

（三）污染雜菌病原性及計數

1.病原鑒定，疫苗稀釋后注射小白鼠實驗。

2.雜菌計數不可超標準（各疫苗有標準，如豬瘟，每頭份含菌不超過75個）。

（四）禽沙門氏菌檢驗

雞胚疫苗要接種麥康凱和SS平板培養(yǎng)，檢驗沙門氏菌。有些制品要檢驗支原體和衣原體。

三、安全檢驗

疫苗最需要是安全

（一）安全檢驗的內容;1.外源性病原的檢查：如動物帶毒，組織代毒。2.滅活檢查：用適宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法和敏感動物。

3.殘余毒檢驗:如炭疽疫苗可使小白鼠死亡，兔子不死亡。4.對胚胎的影響：豬瘟病毒影響胎兒。

（二）檢驗的要點

1.實驗動物選敏感和清潔動物。

2.安全劑量要大于免疫劑量5—10倍。3.外源病原檢查：選合適培養(yǎng)基和方法。

（三）結果判斷

結果從嚴處理，不合格的重新檢驗，可疑的重新檢驗，不合格要擴大檢驗量；選敏感動物檢驗。烏蘭察布職業(yè)學院《獸用生物制品技術》精品課程

四、效力檢驗：是檢驗生物制品免疫效果、治療效果、診斷的準確性。

（一）檢驗內容：

1.免疫原性：抗原要有針對性，和已知血清反應。2.免疫的持續(xù)期：決定免疫效果和接種次數。3.熱穩(wěn)定性：決定保質期。

4.抗原量的測定：決定最小免疫劑量，用半數保護量測定，或測細菌或病毒的含量。

（二）檢驗要點：

1、動物保護力試驗

1)定量免疫定量攻毒。2)變量免疫定量攻毒。3)定量免疫變量攻毒。4)免疫抗體的測定。

2、活菌計數和病毒量測定

1)活菌計數：計算每mlcfu，活菌一般達到百億/ml。芽孢達到1500-2500萬/ml.2)病毒量測定:馬立克火雞皰疹病毒每瓶含毒量不低于5000pfu,新城疫半數感染量EID50≥10-6.3血清學實驗,測定不同疫苗的抗體效價.五、物理性狀檢驗

(一)外觀：檢查封口，裝量，標簽，沉淀，凍干苗干縮，溶解情況，霉變等。

（二）殘余水分檢驗：凍干疫苗不超過4%，用真空干燥箱測定，60-70℃3h，計算前后重量。卡氏測定法：1分子水和1分子碘化合，溶液由棕色變無色，滴定計算出碘的用量，就知道水的含量。

（三）真空度檢驗：高頻火花槍測定，顏色是紫色、白色或粉紅色合格。思考題：

1.生物制品的特殊性是什么？

2.生物制品質量含義是什么？朱蘭質量螺旋模式是什么？ 3.生物制品監(jiān)察制度包括什么內容？ 4.GMP的含義和內容有哪些？ 5.成品檢驗包括哪些內容？

6.無菌或純粹檢驗、安全檢驗、效力檢驗各包括哪些內容？

第三篇：全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格

西雙版納傣族自治州農業(yè)系統(tǒng)養(yǎng)殖業(yè)系列作為全州重要的菜籃子工程及全州養(yǎng)殖業(yè)技術支撐的重要部門，為全州養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展和人民群眾身體健康提供堅強有力、科學可靠的疫病防控技術、技術保障及技術服務。為每一位從事動物診療和動物保健等經營活動的獸醫(yī)的相關工作人員都具備職業(yè)所必須的專業(yè)知識、技能水平和職業(yè)道德，建立起一支技術過硬、行為規(guī)范、紀律嚴明、支撐有力的執(zhí)業(yè)獸醫(yī)隊伍，提高動物疫病防控工作水平，加快畜牧業(yè)健康發(fā)展。我州農業(yè)系統(tǒng)養(yǎng)殖業(yè)系列執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試領導小組精心組織、積極準備，迎接2010

年首屆全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格統(tǒng)一考試。

一是高度重視，精心組織，做好各項準備工作。西雙版納州根據國家有關要求及時成立了考試領導小組并及時召開執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試動員會議，傳達國家、省、州執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試工作有關精神，讓大家對執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試有更深層次的了解和認識；二是加大宣傳營造氛圍。利用多種渠道和形式宣傳國家政策、執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試的重要性和必要性、執(zhí)業(yè)獸醫(yī)管理辦法、執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試宣傳手冊、執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格報考條件等，進一步提高技術人員對取得執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格緊迫性的認識，增強參加考試的積極性；三是積極做好考前準備工作及考務人員的培訓工作；四是完善執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試應急機制；五是加強宣傳發(fā)動工作；六是統(tǒng)一思想，堅

定信念，努力做好西

第四篇：全國獸醫(yī)考試

依據《中華人民共和國動物防疫法》、《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)管理辦法》和《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試管理暫行辦法》的規(guī)定，現就2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試有關事項公告如下：

一、考試類別

2012年執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試分為獸醫(yī)全科類和水生動物類兩類，兩類考試分別命題組卷，同時考試。符合報名條件的獸醫(yī)、畜牧獸醫(yī)、中獸醫(yī)（民族獸醫(yī)）專業(yè)考生或2009年1月1日前具有獸醫(yī)師以上專業(yè)技術職稱的考生報考獸醫(yī)全科類考試，符合報名條件的水產養(yǎng)殖專業(yè)考生報考水生動物類考試。

二、報名

（一）報名條件

符合下列條件之一的，可以報名參加2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試：

1.具有獸醫(yī)、畜牧獸醫(yī)、中獸醫(yī)（民族獸醫(yī)）和水產養(yǎng)殖專業(yè)大學?？埔陨蠈W歷的人員。

2.2009年1月1日前，不具有獸醫(yī)、畜牧獸醫(yī)、中獸醫(yī)（民族獸醫(yī)）和水產養(yǎng)殖專業(yè)大學專科以上學歷，但具有獸醫(yī)師以上專業(yè)技術職稱的人員。

3.2012年獸醫(yī)、畜牧獸醫(yī)、中獸醫(yī)（民族獸醫(yī)）和水產養(yǎng)殖專業(yè)應屆大學專科以上畢業(yè)生。

（二）報名方式、時間與地點

1.2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試報名采取先網上報名、再現場確認的方式進行。

2.考生登錄中國獸醫(yī)協(xié)會網（）進行報名。

3.網上報名時間為5月26日至6月22日?？忌W上報名時，應提交正面彩色免冠單色深底近期電子證件照片（電子照片尺寸為寬度與長度比例在1：1.46左右，高度不小于189像素，建議尺寸為寬230像素×高334像素，文件大小20～40KB，保證照片清晰，不變形）。

4.現場確認時間為7月2日至7月10日?，F場確認地點由考生在網上報名時自主選定。首次報名的考生現場確認時，應當提交以下材料：

（1）本人身份證原件及2份復印件；

（2）獸醫(yī)、畜牧獸醫(yī)、中獸醫(yī)（民族獸醫(yī)）或水產養(yǎng)殖專業(yè)大學?？萍耙陨蠈W歷證書原件及2份復印件；不具備大學?？埔陨蠈W歷，但在2009年1月1日前取得獸醫(yī)師以上技術職稱的，應當提交專業(yè)技術職稱證書原件及2份復印件；2012年獸醫(yī)、畜牧獸醫(yī)、中獸醫(yī)（民族獸醫(yī)）或水產養(yǎng)殖專業(yè)大學?？萍耙陨蠈W歷的在校應屆畢業(yè)生，應當提交考生所在學校院系證明1式2份（格式可在中國獸醫(yī)協(xié)會網下載，已取得畢業(yè)證書的應屆畢業(yè)生不需提供學校院系證明）。

參加過執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試再次報考的考生，報名信息沒有重大變化的，可以不進行現場確認，只需按有關要求繳納考試費用。

三、考試繳費標準及方式

考生應根據省級財政、價格部門核定的收費標準繳納考試費用。收費標準和具體繳費方式由各?。▍^(qū)、市）執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試領導小組向轄區(qū)內考生發(fā)布。

四、準考證打印

經資格審查合格的考生，應于9月24日至10月13日登錄執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試報名信息管理平臺自行打印準考證。

五、考試

（一）考試時間

2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試時間為10月14日。具體安排為：

試卷

一、試卷二：10月14日上午9:00～11:30。

試卷

三、試卷四：10月14日下午2:00～4:30。

（二）考試內容

全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試實行全國統(tǒng)一命題，命題范圍以全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試委員會發(fā)布的《2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試大綱（獸醫(yī)全科類）》和《2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試大綱（水生動物類）》為準。

（三）考試方式

2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試采用閉卷、筆試的方式。

（四）考試科目

獸醫(yī)全科類考試分為基礎、預防、臨床和綜合應用四張試卷，每張試卷100道題，每張試卷分值為100分，四卷總分為400分。各卷的具體科目為：

試卷一：基礎科目。包括獸醫(yī)法律法規(guī)與職業(yè)道德、動物解剖學、組織學與胚胎學、動物生理學、動物生物化學、獸醫(yī)病理學和獸醫(yī)藥理學；

試卷二：預防科目。包括獸醫(yī)微生物與免疫學、獸醫(yī)傳染病學、獸醫(yī)寄生蟲學和獸醫(yī)公共衛(wèi)生學；

試卷三：臨床科目。包括獸醫(yī)臨床診斷學、獸醫(yī)內科學、獸醫(yī)外科與外科手術學、獸醫(yī)產科學和中獸醫(yī)學；

試卷四：綜合應用科目。包括豬、牛、羊、雞、犬、貓和其他動物疫病的臨床診斷和治療。

水生動物類考試分為基礎、預防、臨床和綜合應用四張試卷，總題量300道，總分值300分。各卷的具體科目為：

試卷一：基礎科目。包括獸醫(yī)法律法規(guī)與職業(yè)道德、水生動物解剖組織及胚胎學、動物生物化學和水生動物生理學。

試卷二：預防科目。包括水生動物免疫學、水生動物病原生物學、水生動物公共衛(wèi)生

學。

試卷三：臨床科目。包括水產藥物學、水生動物病理學、水生動物疾病學。試卷四：綜合應用科目。包括水產養(yǎng)殖生態(tài)學、飼料與營養(yǎng)學。

（五）考試紀律

考生報名前應當認真閱讀《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試違紀行為處理暫行辦法》和《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試考場規(guī)則》（可在中國獸醫(yī)協(xié)會網上查閱），并自覺遵守。

六、考試成績公布與資格授予

全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試實行全國統(tǒng)一評卷。評卷工作結束后，考試成績由農業(yè)部執(zhí)業(yè)獸醫(yī)管理辦公室發(fā)布。

根據《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)管理辦法》和《執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試管理暫行辦法》的規(guī)定，2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試合格分數線，由全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試委員會在考試結束后確定并公布。

通過全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試的人員，由農業(yè)部統(tǒng)一頒發(fā)執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格證書。報名時未提交畢業(yè)證書的2012年應屆畢業(yè)生，成績合格的，領取執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格證書時應當提供畢業(yè)證書原件及2份復印件。未能提交畢業(yè)證書原件的，取消執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格。

七、考前復習與輔導

考生可依據《2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試大綱》進行復習、備考。農業(yè)部不舉辦考前培訓班，也不委托任何單位開展2012年全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試考前培訓輔導

第五篇：生物制品管理辦法

國家食品藥品監(jiān)督管理局令

（第11號）

《生物制品批簽發(fā)管理辦法》于2004年6月4日經國家食品藥品監(jiān)督管理局局務會審議通過，現予公布。本管理辦法自公布之日起施行。

局長：鄭筱萸

二00四年七月十三日

生物制品批簽發(fā)管理辦法

第一章 總則

第一條 為加強生物制品質量管理，保證生物制品安全、有效，根據《中華人民共和國藥品管理法》（以下簡稱《藥品管理法》）及《中華人民共和國藥品管理法實施條例》，制定

本辦法。

第二條 生物制品批簽發(fā)（以下簡稱批簽發(fā)），是指國家對疫苗類制品、血液制品、用于血源篩查的體外生物診斷試劑以及國家食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定的其他生物制品，每批制品出廠上市或者進口時進行強制性檢驗、審核的制度。檢驗不合格或者審核不被批準者，不

得上市或者進口。

第三條 國家食品藥品監(jiān)督管理局主管全國生物制品批簽發(fā)工作；承擔生物制品批簽發(fā)檢驗或者審核工作的藥品檢驗機構由國家食品藥品監(jiān)督管理局指定。

第四條 生物制品批簽發(fā)檢驗或者審核的標準為現行的國家生物制品規(guī)程或者國家食

品藥品監(jiān)督管理局批準的其他藥品標準。

第二章 申請

第五條 按批簽發(fā)管理的生物制品在生產、檢驗完成后，藥品生產企業(yè)應當填寫《生物制品批簽發(fā)申請表》，向承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構申請批簽發(fā)。

第六條 申請批簽發(fā)的生物制品必須具有下列藥品批準證明文件之一：

（一）藥品批準文號；

（二）《進口藥品注冊證》或者《醫(yī)藥產品注冊證》；

（三）體外生物診斷試劑批準注冊證明。

第七條 申請批簽發(fā)的技術要求及相關資料的格式，由中國藥品生物制品檢定所負責組織制定，報國家食品藥品監(jiān)督管理局批準并發(fā)布。

第八條 申請批簽發(fā)時應當提交以下資料及樣品：

（一）生物制品批簽發(fā)申請表；

（二）藥品生產企業(yè)質量保證部門負責人簽字并加蓋本部門印章的批制造及檢驗記錄摘要；

（三）檢驗所需的同批號樣品；

（四）與制品質量相關的其他資料；

（五）進口預防用疫苗類生物制品應當同時提交生產國國家藥品管理當局出具的批簽發(fā)

證明文件，并提供中文譯本。

第九條 對于效期短而且檢驗周期長的按照批簽發(fā)管理的生物制品，經國家食品藥品監(jiān)督管理局確認，藥品生產企業(yè)在完成生產后即可向承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構

申請批簽發(fā)。

第十條 按照批簽發(fā)管理的生物制品進口時，其批簽發(fā)申請按照《藥品進口管理辦法》的規(guī)定辦理。

第十一條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構接到生物制品批簽發(fā)申請后，應當在5日內決定是否受理。不予受理的，予以退審，并說明理由。

申請材料不齊全或者不符合法定形式的，承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構應當在5日內一次性告知申請人需要補正的全部內容，逾期不告知的，自收到申請材料之日起即

為受理。

申請材料存在可以當場更正的錯誤的，應當允許申請人當場更正。

第三章 檢驗、審核與簽發(fā)

第十二條 承擔批簽發(fā)的藥品檢驗機構應當配備與其承擔的批簽發(fā)檢驗或者審核工作相適應的人員和設備，符合生物制品檢驗或者審核工作的質量保證體系和技術要求。

第十三條 批簽發(fā)檢驗或者審核工作可單獨采取資料審查的形式，也可采取資料審查和樣品檢驗相結合的方式。樣品檢驗分為全部項目檢驗和部分項目檢驗。

具體品種所采用的批簽發(fā)檢驗或者審核方式以及檢驗的項目，由中國藥品生物制品檢定所負責組織論證后確定，報國家食品藥品監(jiān)督管理局批準，并予公告。

第十四條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構負責對申報資料進行審核，審核內

容包括：

（一）申報資料是否齊全、制品批制造及檢驗記錄摘要是否加蓋質量保證部門印章、是

否有負責人簽字；

（二）生產用菌種、毒種、細胞等是否與國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的一致；

（三）生產工藝是否與國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的工藝一致；生產過程的質量控制

是否達到國家藥品標準的要求；

（四）制品原液、半成品和成品的檢驗項目、方法和結果是否符合國家藥品標準的規(guī)定；

（五）制品包裝、標簽及使用說明書是否符合相關規(guī)定。

第十五條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構可以根據具體品種審查的需要增加檢驗項目。增加檢驗項目的情況及理由應當報國家食品藥品監(jiān)督管理局備案。

第十六條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構應當在本辦法規(guī)定的工作時限內

完成批簽發(fā)檢驗或者審核工作。

國家食品藥品監(jiān)督管理局根據批簽發(fā)檢驗或者審核結果作出批簽發(fā)的決定，并向申請批簽發(fā)的藥品生產企業(yè)發(fā)出批簽發(fā)證明文件。

第十七條 批簽發(fā)檢驗或者審核時限的要求：

承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構受理批簽發(fā)申請后，疫苗類制品應當在55日內完成；血液制品類制品應當在30日完成；血源篩查試劑類制品應當在15日內完成；其他類制品應當根據該制品檢驗周期確定其具體的檢驗或者審核時限。

第十八條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構在規(guī)定的時限內不能作出批簽發(fā)檢驗或者審核結論的，應當將延期的理由和時限書面通知批簽發(fā)申報企業(yè)，并報國家食品藥

品監(jiān)督管理局備案。

第十九條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構對申請資料中的有關數據需要核對的，應當一次性以書面方式通知批簽發(fā)申報企業(yè)。自書面通知發(fā)出之日起至申報企業(yè)將核對結果及其原始記錄回復承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構為止的期間不計入時限。

第二十條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構應當根據資料審查的需要，派員到

申報企業(yè)進行現場核查或者抽樣。

第二十一條 生物制品批簽發(fā)證明文件的簽發(fā)應當在5日內完成。符合要求的，簽發(fā)《生

物制品批簽發(fā)合格證》。

第二十二條 凡屬下列情形之一的，簽發(fā)《生物制品批簽發(fā)不合格通知書》，并注明不合格項目。《生物制品批簽發(fā)不合格通知書》發(fā)送申請批簽發(fā)的企業(yè)，同時抄送該企業(yè)所在地省、自治區(qū)、直轄市（食品）藥品監(jiān)督管理局：

（一）申報資料經審查不符合要求的；

（二）質量檢驗不合格的；

（三）申請企業(yè)對需要核對的有關數據的回復資料仍不符合要求的。

第二十三條 《生物制品批簽發(fā)合格證》和《生物制品批簽發(fā)不合格通知書》由承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構按照順序編號，其格式為“批簽×（進）檢××××××××”，其中，前×符號代表承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構所在地省級行政區(qū)域或者機構的簡稱；后8個×符號的前4位為公元年號，后4位為年內順序號。

第四章 復審

第二十四條 藥品生產企業(yè)對生物制品批簽發(fā)不合格通知書持有異議的，可以自收到通知之日起7日內，向原承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構或者中國藥品生物制品檢定

所提出復審的申請。

第二十五條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構或者中國藥品生物制品檢定所自收到藥品生產企業(yè)復審申請之日起20日內作出復審決定，復審內容僅限于原申請事項及其原報送資料。按規(guī)定需要復核檢驗的，其樣品為原承擔批簽發(fā)的藥品檢驗機構保留的樣品，其時限按照本辦法第十七條規(guī)定執(zhí)行。復審工作完成后5日內向申請復審的企業(yè)發(fā)出復審意

見。

第二十六條 復審維持原決定的，不再受理申請人再次提出的復審申請；復審改變原決定的，發(fā)給《生物制品批簽發(fā)合格證》，原《生物制品批簽發(fā)不合格通知書》同時廢止。

第五章 監(jiān)督與處罰

第二十七條 按照批簽發(fā)管理的生物制品在銷售時，必須提供加蓋本企業(yè)印章的該批生物制品《生物制品批簽發(fā)合格證》復印件。

第二十八條 批簽發(fā)不合格的生物制品由藥品生產企業(yè)按照有關規(guī)定予以銷毀，銷毀記錄應當同時報送所在地省、自治區(qū)、直轄市（食品）藥品監(jiān)督管理局和實施批簽發(fā)檢驗或者

審核的藥品檢驗機構備案。

第二十九條 藥品生產企業(yè)提供虛假資料或者樣品的，依照《藥品管理法》第八十三條的規(guī)定予以處罰。

第三十條 銷售未獲得《生物制品批簽發(fā)合格證》的生物制品，依照《藥品管理法》第四十八條和第七十四條的規(guī)定予以處罰。

第三十一條 偽造《生物制品批簽發(fā)合格證》的，依照《藥品管理法》第八十二條的規(guī)

定予以處罰。

第三十二條 承擔批簽發(fā)檢驗或者審核的藥品檢驗機構出具虛假檢驗報告的，依照《藥

品管理法》第八十七條的規(guī)定予以處罰。

第三十三條 屬于本辦法第三十條、第三十一條情形的，已上市銷售的生物制品，應當責令藥品生產企業(yè)收回，并按照有關規(guī)定在（食品）藥品監(jiān)督管理部門的監(jiān)督下予以銷毀。

第六章 附則

第三十四條 生物制品批制造及檢驗記錄摘要，是指每批生物制品從原材料至包裝的生產全過程及檢驗中影響生物制品質量和結果正確性的操作要點及結果，并由企業(yè)質量保證部門審核。

第三十五條 因公共衛(wèi)生健康的需要，為控制疫情或者突發(fā)事件而緊急使用的按照批簽發(fā)管理的生物制品，以及聯合國兒童基金會或者其他國際組織捐贈的按照批簽發(fā)管理的疫苗類制品，經國家食品藥品監(jiān)督管理局批準，可免予批簽發(fā)。

第三十六條 本辦法由國家食品藥品監(jiān)督管理局負責解釋。

第三十七條 本辦法自公布之日起實施。國家藥品監(jiān)督管理局令第36號《生物制品批簽發(fā)管理辦法》（試行）同時廢止。

附件：1．《生物制品批簽發(fā)申請表》

2．《生物制品批簽發(fā)登記表》

3．《生物制品批簽發(fā)合格證》

4．《生物制品批簽發(fā)不合格通知書》

附件1：

生物制品批簽發(fā)申請表

┌──────────────────────────────────┐││├──────────────────────────────────┤││├──────────────────────────────────┤││├─────────────────────────────┬────┤│

制

商申生

報產品

品

單企名

稱名位業(yè)

：

：

：

：

│產地： │├─────────────────────────────┴────┤│藥品批準文號／進口藥品注冊證號／醫(yī)藥產品注冊證號：

│├──────────────────────────────────┤│送審項目：

││

記錄摘要〔

〕

全套制檢記錄〔

〕 ││檢品及相應制檢記錄摘要〔

〕； 檢品及相應全套制檢記錄〔

〕│├─────────────────────┬────────────┤│批

號：

生

│批量／進口量：

產

日

期

：

│├─────────────────────┼────────────┤││有效期至：

│├─────────────────────┼────────────┤│檢品量：

│檢驗項目：

│├─────────────────────┼────────────┤│規(guī)格：

│劑型：

│├─────────────────────┼────────────┤│包裝規(guī)格：

│企業(yè)自檢結果：

│├─────────────────────┴────────────┤│稀釋液情況：

││

有

效

期

至

：

稀釋液規(guī)格：

││

批

號：

│├──────────────────────┬───────────┤│報驗方式：

送審（檢）〔

〕郵寄〔

〕│申請日期：

│├──────────────────────┼───────────┤│企業(yè)負責人（或授權人）簽字：

│

企

業(yè)

公

章

：

│├──────────────────────┴───────────┤│生產單位地址、郵編：

││

電話：

││

傳真：

│├──────────────────────────────────┤││└──────────────────────────────────┘

備

注

：

注：有選擇的項請在“[

]”內劃“√”（每張申請表只填寫一個批號的內容）

附件2：

生物制品批簽發(fā)登記表

檢品編號：

┌──────────────────────────────────┐│

制

品

名

稱

：

│├──────────────────────────────────┤││├──────────────────────────────────┤││├─────────────────────────┬────────┤│注冊證號

／

醫(yī)

藥

產

品

商申生注收檢

記

報產

品

單企冊審錄

〔

名位業(yè)號目

：

：

：

：

：

〕 │產地：

│├─────────────────────────┴────────┤│藥品批準文號／進口藥品

證項

│├──────────────────────────────────┤│摘要〔 〕；

檢

品

及

相

應

全

套

制││

記錄摘要〔

〕

全套制檢記錄〔

〕

││檢品及相應制檢記錄

│├───────────────────┬──────────────┤│批

號：

│批量／進口量：

│├───────────────────┼──────────────┤│生產日期：

│有效期至：

│├───────────────────┼──────────────┤│檢 品 量：

│檢驗項目：

│├───────────────────┼──────────────┤│規(guī)

格：

│劑

型：

│├───────────────────┼──────────────┤│包裝規(guī)格：

│企業(yè)自檢結果：

│├───────────────────┴──────────────┤│稀釋液情況：

稀釋液規(guī)格：

││

批

號：

││

有 效 期至：

│├─────────────────────┬────────────┤│報驗方式： 送審（檢）〔

〕郵寄〔

〕│登記日期：

│├──────────┬──────────┼────────────┤│送檢人：

│經手人：

│

主申

管報備科單室位接注

收地

人址

：

：

：

│├──────────┴──────────┴────────────┤││├──────────────────────────────────┤││└──────────────────────────────────┘ ││

預留量：

附科3：

生物制品批簽發(fā)合格證

Certificate for the Release of Biological Products

證書編號：

Certificate No：

制品名稱▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

Name of the product

生產企業(yè)▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

Manufacturer

地

址▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

Address

收檢編號 ▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

批

號 ▁▁▁▁▁▁▁▁

Regis.Code

Lot No.劑

型 ▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

規(guī)

格 ▁▁▁▁▁▁▁▁

Dosage Form

Strength

有效期至 ▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

批量/進口量▁▁▁▁▁▁▁

Valid until

Quantity

經審查，上述制品符合生物制品批簽發(fā)的有關規(guī)定，判定合格。

The product mentioned above complies with the provisions for the release of Biological products and has been approved for release.本證明系基于對企業(yè)申報的制品批制造及檢驗記錄摘要的審查（和實驗室檢定）而簽發(fā)。

This certificate is based on examination of summary manufacturing protocol（and Laboratory test（s））.簽發(fā)人：

Issued by

（公 章）

****年**月**日

Year Month Day

附件4：

生物制品批簽發(fā)不合格通知書

Notice of Not Release of Biological Products

編號：

No：

制品名稱▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

Name of the product

生產企業(yè)▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

Manufacturer

地

址▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

Address

收檢編號▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

批

號▁▁▁▁▁▁▁▁

Regis.Code

Lot No.劑

型▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

規(guī)

格▁▁▁▁▁▁▁▁

Dosage Form

Strength

有效期至▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

批量/進口量▁▁▁▁▁▁▁

Valid until

Quantity

經審查，上述制品不符合生物制品批簽發(fā)的有關規(guī)定，判定不合格。

The product mentioned above does not comply with the concerned provisions for therelease of biological products and is not approved for release.不合格項目為▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁

The item（s）of out of specification is（are）▁▁▁▁▁▁▁▁

簽發(fā)人：

發(fā)布部門：國家食品藥品監(jiān)督管理局（原國家藥品監(jiān)督管理局）發(fā)布日期：2004年07月13日 實施日期：2004年07月13日(中央法規(guī))

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