第一篇：生物制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)生的自我鑒定

給大家來(lái)分享以下這一份生物制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)習(xí)的自我鑒定范文，歡迎廣大畢業(yè)生瀏覽。

時(shí)光飛逝，大學(xué)生活即將結(jié)束。本人于12年就讀廣東XX職業(yè)學(xué)院的生物制藥技術(shù)專業(yè)的兩年以來(lái)，一直以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度和無(wú)限熱情投身于學(xué)習(xí)和工作中，不斷奮斗、不斷完善自我，使自己在德智體方面得到全面發(fā)展。

在學(xué)習(xí)上，嚴(yán)格要求自己，刻苦鉆研，態(tài)度端正，目標(biāo)明確，對(duì)生物制藥的學(xué)習(xí)始終帶著一腔熱情，不但牢固地掌握了一些專業(yè)知識(shí)和技能外，還擴(kuò)展了各方面知識(shí)，從而提高自身的思想文化素質(zhì)。通過(guò)我的不斷努力，還曾獲得了學(xué)院的三等獎(jiǎng)學(xué)金。

在工作上，認(rèn)真負(fù)責(zé)，具有很強(qiáng)的組織能力，在系文娛部工作期間，工作踏實(shí)，責(zé)任心強(qiáng)，曾組織的系的大型晚會(huì)，豐富了同學(xué)們的大學(xué)生活，得到了老師和同學(xué)的一致好評(píng)。

在思想上，要求自己積極上進(jìn)，熱愛祖國(guó)、服務(wù)大眾，擁護(hù)中國(guó)共產(chǎn)黨的領(lǐng)導(dǎo)及各項(xiàng)方針政策，遵守法律法規(guī)及各項(xiàng)規(guī)章制度，積極向黨組織靠攏，更通過(guò)了黨校學(xué)習(xí)成為預(yù)備黨員；培養(yǎng)奉獻(xiàn)精神，刻苦耐勞，且勇于自我批評(píng)，樹立正確的人生觀和價(jià)值觀。

在生活上，養(yǎng)成了良好的生活習(xí)慣，生活充實(shí)而有條理，有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳顟B(tài)度和作風(fēng)，為人熱情大方，誠(chéng)實(shí)守信，樂(lè)于助人，有原則，交際能力強(qiáng)；積極參加各項(xiàng)課外活動(dòng)，不斷豐富自己的人生閱歷。

作為新時(shí)代青年,我會(huì)用自己的豐富的專業(yè)知識(shí)和自信服務(wù)更多人，并不斷提高自我！且我相信:用心一定能贏得精彩！

第二篇：生物制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)生的自我鑒定

生物制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)生的自我鑒定

給大家來(lái)分享以下這一份生物制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)習(xí)的自我鑒定范文，歡迎廣大畢業(yè)生瀏覽。

時(shí)光飛逝，大學(xué)生活即將結(jié)束。本人于XX年就讀廣東xx職業(yè)學(xué)院的生物制藥技術(shù)專業(yè)的兩年以來(lái)，一直以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度和無(wú)限熱情投身于學(xué)習(xí)和工作中，不斷奮斗、不斷完善自我，使自己在德智體方面得到全面發(fā)展。

在學(xué)習(xí)上，嚴(yán)格要求自己，刻苦鉆研，態(tài)度端正，目標(biāo)明確，對(duì)生物制藥的學(xué)習(xí)始終帶著一腔熱情，不但牢固地掌握了一些專業(yè)知識(shí)和技能外，還擴(kuò)展了各方面知識(shí)，從而提高自身的思想文化素質(zhì)。通過(guò)我的不斷努力，還曾獲得了學(xué)院的三等獎(jiǎng)學(xué)金。

在工作上，認(rèn)真負(fù)責(zé)，具有很強(qiáng)的組織能力，在系文娛部工作期間，工作踏實(shí)，責(zé)任心強(qiáng)，曾組織的系的大型晚會(huì)，豐富了同學(xué)們的大學(xué)生活，得到了老師和同學(xué)的一致好評(píng)。

在思想上，要求自己積極上進(jìn)，熱愛祖國(guó)、服務(wù)大眾，擁護(hù)中國(guó)共產(chǎn)黨的領(lǐng)導(dǎo)及各項(xiàng)方針政策，遵守法律法規(guī)及各項(xiàng)規(guī)章制度，積極向黨組織靠攏，更通過(guò)了黨校學(xué)習(xí)成為預(yù)備黨員；培養(yǎng)奉獻(xiàn)精神，刻苦耐勞，且勇于自我批評(píng)，樹立正確的人生觀和價(jià)值觀。

在生活上，養(yǎng)成了良好的生活習(xí)慣，生活充實(shí)而有條理，有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳顟B(tài)度和作風(fēng)，為人熱情大方，誠(chéng)實(shí)守信，樂(lè)于助人，有原則，交際能力強(qiáng)；積極參加各項(xiàng)課外活動(dòng)，不斷豐富自己的人生閱歷。

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作為新時(shí)代青年,我會(huì)用自己的豐富的專業(yè)知識(shí)和自信服務(wù)更多人，并不斷提高自我！且我相信:用心一定能贏得精彩！

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第三篇：生物制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)生的自我介紹

以下就是一名生物制藥技術(shù)專業(yè)的畢業(yè)生的自我介紹范文，由好范文為大家提供，歡迎瀏覽。

我叫XXX，是來(lái)自浙江醫(yī)藥學(xué)院生物制藥技術(shù)專業(yè)的XXX，很榮幸在面試時(shí)向各位考官學(xué)習(xí)！

在浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校學(xué)習(xí)生涯中，所學(xué)專業(yè)為生物制藥技術(shù)，所學(xué)課程有細(xì)胞生物學(xué)、現(xiàn)代分子生物學(xué)、生物化學(xué)與生化藥品、微生物學(xué)與免疫學(xué)、生物藥物制備工藝學(xué)、生物藥物化學(xué)與分析、藥劑學(xué)、生物制藥設(shè)備與儀表等。還要相關(guān)科目的實(shí)踐操作，如細(xì)胞培養(yǎng)，藥物制劑等。

作為一名好范文，有著一股沖勁，肯吃苦，有自信，自學(xué)能力強(qiáng)，有較強(qiáng)的榮譽(yù)感，對(duì)新事物的適應(yīng)能力強(qiáng)，能極快進(jìn)入環(huán)境并與人建立良好關(guān)系，總是抱著認(rèn)真的心態(tài)對(duì)待事物，塌實(shí)而努力的工作。

第四篇：生物制藥技術(shù)

08藥學(xué)***3陳省委

組合生物合成藥物進(jìn)展

摘 要50年來(lái)抗生素在人類疾病治療中發(fā)揮了重要作用,今后的幾十年里它們也將是關(guān)鍵的治療劑。盡管在過(guò)去的20年中通過(guò)靶向篩選發(fā)現(xiàn)了一些微生物藥物,但是這種篩選方法很難發(fā)現(xiàn)新類型藥物。組合生物合成可以彌補(bǔ)這種不足,通過(guò)基因工程方法改造微生物基因和酶,產(chǎn)生新的抗生素,發(fā)現(xiàn)那些在自然界中不能發(fā)現(xiàn)的藥物。

關(guān)鍵詞 基因工程合生物合成新抗生素

微生物種類繁多,其產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)豐富多彩,生物活性十分廣泛,是開發(fā)各種新產(chǎn)品的豐富資源,但是傳統(tǒng)的篩選方法已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足社會(huì)發(fā)展的需要。隨著分子生物學(xué)和生物技術(shù)的發(fā)展,以及基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息組學(xué)、代謝組學(xué)研究的深入,人們對(duì)微生物基因組的研究也有了顯著進(jìn)展,已經(jīng)闡明了許多與微生物代謝有關(guān)的生物合成基因,為微生物組合生物合成藥物的研究和開發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。

一、研究背景

自1928年弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉素和1942年瓦克斯曼發(fā)現(xiàn)鏈霉素以來(lái),微生物藥物在疾病防治和拯救人類生命中起著十分重要和不可替代的作用,特別是抗生素被國(guó)外科學(xué)家譽(yù)為20世紀(jì)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的皇冠寶石。微生物藥物一直是臨床最常用的藥物,在西方發(fā)達(dá)國(guó)家,抗生素占臨床處方藥物的20%以上,在中國(guó)約占處方藥物的30%。但自上世紀(jì)70年代后,隨著脊髓灰質(zhì)炎、天花、麻風(fēng)等傳染性疾病先后在全球范圍內(nèi)被消滅,國(guó)家對(duì)微生物藥物研究的支持逐漸下降,抗傳染病藥物研究進(jìn)入了困難時(shí)期。上世紀(jì)90年代后,我國(guó)在已有億乙肝病毒攜帶者的基礎(chǔ)上,又出現(xiàn)了100萬(wàn)以上人類免疫缺陷病毒(HIV)攜帶者。2002年末以來(lái),重急性呼吸窘迫綜合征(SARS)的出現(xiàn)使我國(guó)的傳病控制告急,不得不重新思考微生物藥物的研究策略在新的時(shí)期里,微生物藥物研究再度升溫,原因

①新病原微生物不斷出現(xiàn),如SARS、艾滋病(AIDS)瘋牛病等;②生物武器的使用,如炭疽等;③各種耐菌株在世界范圍的傳播;④許多傳染性疾病,如肺核、血吸蟲病等的死灰復(fù)燃。目前國(guó)內(nèi)外側(cè)重研究的生物藥物,主要有抗新病原微生物,抗耐藥菌,抗病毒,抗腫瘤抗生素以及微生物來(lái)源的生理活性物質(zhì)。微物藥物的研究主要

包括以下內(nèi)容:①抗新病原微生藥物的尋找與開發(fā);②細(xì)菌耐藥機(jī)制及其抗耐藥細(xì)藥物研究;③微生物藥物的生物合成基因研究;④組生物合成微生物藥物研究。其中組合生物合成微生藥物是近年發(fā)展較快的研究領(lǐng)域,將在創(chuàng)新藥物研中發(fā)揮重要作用。

二、組合生物合成生物技術(shù),尤其是基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展,為生物醫(yī)藥領(lǐng)域開辟了廣闊的前景;通過(guò)基因工程技術(shù)所得到的藥物也在臨床治療某些疑難疾病中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。

廣義,基因工程產(chǎn)品分為兩類

①單基因直接產(chǎn)物。通常是指單個(gè)基因編碼序列的翻譯產(chǎn)物(蛋白質(zhì)),它們一般是生物大分子如干擾素和單克隆抗體,目前生物醫(yī)藥領(lǐng)域中開發(fā)的多數(shù)產(chǎn)品均屬于此類,其中包含有效地用于臨床治療的如重組人胰島素、干擾素和促紅細(xì)胞生成素。我國(guó)在此領(lǐng)域獨(dú)創(chuàng)的藥物不多,而且這類藥物的一個(gè)突出缺點(diǎn)是它們比較容易被仿制,只要有了相應(yīng)的細(xì)胞系即可利用基本設(shè)備進(jìn)行生產(chǎn)。

②多基因間接產(chǎn)物。是指由多基因編碼的多酶體系介導(dǎo)而合成的小分子化合物和多肽,包括自然界由微生物和植物產(chǎn)生的天然產(chǎn)物,如抗生素、生理活性物質(zhì)或萜類化合物等結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的化合物。它們品種繁多,性能各異,僅就目前研究得比較深入的聚酮體和萜類化合物,就包括具有抗腫瘤作用的阿霉素、紫杉醇,具有免疫抑制作用的FK506、西莫羅司,具有降血酯作用的洛伐他汀、銀杏內(nèi)酯,具有抗結(jié)核桿菌作用的利福霉素,抗瘧藥物青蒿素等。

組合生物合成(combinatorial biosynthesis)是在微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物合成基因和酶學(xué)研究基礎(chǔ)上形成的。組合生物合成的概念是結(jié)構(gòu)不同但生物合成途徑相似的抗生素生物合成基因之間可以進(jìn)行重組、組合或互補(bǔ)產(chǎn)生新結(jié)構(gòu)的化合物。盡管微生物藥物的結(jié)構(gòu)多樣,但形成這些產(chǎn)物的主要生化反應(yīng)機(jī)制卻基本相同,它們通常是由非常簡(jiǎn)單的化學(xué)物質(zhì),如小分子羧酸和某些氨基酸作為合成起始單位和延伸單位,通過(guò)由一系列基因編碼的多酶體系參與的生物化學(xué)反應(yīng)(構(gòu)成一個(gè)合成途徑)而形成的,參與這些天然產(chǎn)物生物合成的多酶體系是由多個(gè)結(jié)構(gòu)明顯分開的功能區(qū)域所組成。研究表明,參與這類小分子生物合成的基因通常是連鎖或鄰接而構(gòu)成一個(gè)基因簇(cluster),這為基因的克隆和操作提供了方便,同時(shí)由于參與

次級(jí)代謝生物合成酶系對(duì)底物的特異性,專一性要求不是很嚴(yán)格的,對(duì)結(jié)構(gòu)相類似的底物均可識(shí)別,這一特點(diǎn)為不同基因組合產(chǎn)生新的化合物創(chuàng)造了條件。因此,有針對(duì)性地對(duì)某些基因進(jìn)行操作,如替換、阻斷、重組以及添加、減少組件等,均有可能改變其生物合成途徑而產(chǎn)生新的代謝旁路(metabolic pathway),繼而形成新的化合物,這就為組合生物合成提供了基礎(chǔ),國(guó)際上已有通過(guò)這些手段得到多個(gè)化合物的報(bào)道。

三、研究的科學(xué)意義

開展微生物基因工程組合生物合成創(chuàng)制新型藥物研究,具有如下意義。

1、利用組合生物合成體系,完成化學(xué)方法不能完或難以完成的活性化合物的合成,如抗癌藥物紫杉(taxol)等;這類活性化合物在自然界中含量少、需要大、醫(yī)學(xué)價(jià)值高,而且通常化學(xué)合成困難(成本高,難大,環(huán)境污染嚴(yán)重),為了確保紅豆杉資源的可持續(xù)用,除正在開展的苗圃栽培,并以苗圃作為紫杉醇提的原料之外,通過(guò)生物合成來(lái)使它們具最終的商業(yè)值是一個(gè)極具潛力的手段。例如,與抗癌藥物紫杉醇用相似的埃波霉素(epothilone)已在鏈霉菌中通過(guò)合生物合成方法獲得表達(dá),現(xiàn)已進(jìn)入開發(fā)研究階段。、對(duì)一些現(xiàn)有的結(jié)構(gòu)復(fù)雜的天然產(chǎn)物如青蒿素銀杏內(nèi)酯等有效組分進(jìn)行定向合成,對(duì)臨床用抗生品種進(jìn)行有針對(duì)性的修飾和改造,如對(duì)紅霉素進(jìn)行造產(chǎn)生酮內(nèi)酯型的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,獲得對(duì)臨床藥菌具有活性的抗生素衍生物;或者通過(guò)對(duì)現(xiàn)有天產(chǎn)物或抗生素的結(jié)構(gòu)改造,獲得具有全新活性的或化性能有明顯改善的天然產(chǎn)物或新抗生素。、組合生物合成產(chǎn)生新化合物的潛力很大,化合數(shù)是以可操作基因的指數(shù)方式形成,如設(shè)R為可利的基因數(shù),n是每個(gè)基因的不同等位形式(即不同天產(chǎn)物來(lái)源的數(shù)目),從理論上講經(jīng)過(guò)基因組合可得Rn種排列組合,即得到Rn個(gè)化合物。通過(guò)組合生合成,獲得一大批新化合物,作為高通量藥物篩選樣庫(kù)的來(lái)源之一。、由于多基因組合操作的平臺(tái)是以易于大規(guī)模產(chǎn)的微生物體系為基礎(chǔ),使創(chuàng)制新型藥物的研究便產(chǎn)業(yè)化。、組合生物合成的研究,必將推動(dòng)我國(guó)在基因水對(duì)天然資源的利用,更好地利用植物代謝產(chǎn)物,挖掘前實(shí)驗(yàn)室條件下無(wú)法進(jìn)行培養(yǎng)的生物體,包括海洋的生物體。隨著研究和應(yīng)用的發(fā)展,植物和海洋生物級(jí)代謝產(chǎn)物的組合生物學(xué)研究,也將蓬勃

發(fā)展起來(lái)。

四、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀

1985年,Hopwood教授[4]在世界首次報(bào)道用遺工程的手段合成“非天然”的天然產(chǎn)物isochromanequinone,該工作為后來(lái)的組合生物合成奠定了礎(chǔ)。在以后的十幾年里,這一領(lǐng)域成為天然產(chǎn)物代工程研究中最活躍的領(lǐng)域,許多微生物次級(jí)代謝研的專家都加入這一領(lǐng)域的工作,因?yàn)榻M合生物合成潛力制造出很多先導(dǎo)化合物。目前的發(fā)展趨勢(shì)由最初的基礎(chǔ)研究逐步演變?yōu)榛A(chǔ)與應(yīng)用兼顧,有的地向產(chǎn)業(yè)化邁進(jìn)。該領(lǐng)域的研究也同樣得到工界的重視,美國(guó)加州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)公司研制的埃波素(epothilone D)已進(jìn)入III期臨床評(píng)價(jià)階段。埃霉素原來(lái)由纖維堆囊黏細(xì)菌產(chǎn)生,其產(chǎn)量低,繁殖時(shí)間長(zhǎng),產(chǎn)品無(wú)法進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。該公司利用基因組合技術(shù)使纖維堆囊黏細(xì)菌的埃波霉素生物合成基因在鏈霉菌中得到表達(dá),并通過(guò)酰基轉(zhuǎn)移酶域替換及羥基化酶基因的阻斷,獲得了主要產(chǎn)生埃波霉素中抗腫瘤活性最好組分的epothilone D的基因工程菌。我國(guó)自上世紀(jì)80年代初開展以多基因組合工程技術(shù)研制新藥的研究,在聚酮類抗生素如大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、利福霉素、安莎霉素及抗生素產(chǎn)生菌分子生物學(xué)研究方面,取得一定進(jìn)展。國(guó)家重大專項(xiàng)支持的基因工程必特螺旋霉素己進(jìn)入臨床研究,基因工程必特螺旋霉素的研制為組合生物合成技術(shù)應(yīng)用于小分子化合物的創(chuàng)制中提供了良好的工作基礎(chǔ)和經(jīng)驗(yàn)。我國(guó)微生物代謝產(chǎn)品研究歷史悠久,已形成多學(xué)科協(xié)調(diào)合作的體系,近年來(lái)在國(guó)家的支持下該體系已得到一定的發(fā)展,加強(qiáng)了微生物及代謝產(chǎn)物資源的開發(fā)。我們已逐步建立難培養(yǎng)極端微生物和未培養(yǎng)微生物資源及海洋微生物的挖掘工作,建立并完善從土壤或其他來(lái)源直接分離DNA技術(shù)。我國(guó)有很強(qiáng)的有機(jī)化學(xué)合成能力,可以合成進(jìn)行組合合成的起始單元,開展前體介導(dǎo)的組合生物合成(precursor-directed biosynthesis)研究。我們已建立并不斷完善多種生物活性篩選模型,有天然產(chǎn)物化學(xué)分離鑒定及藥理、藥效、毒理評(píng)估的配套學(xué)科。

目前基因工程技術(shù)的發(fā)展水平,在單基因操作方面已經(jīng)比較成熟;在多基因操作層次上雖然技術(shù)難度相對(duì)比較大,但近年來(lái)在此研究領(lǐng)域已有了迅猛的發(fā)展,已積累了較好的研究基礎(chǔ),許多次級(jí)代謝產(chǎn)物生物合成基因簇已得到克隆,基因結(jié)構(gòu)與功能已得到闡明,并且發(fā)展了一系列大容量載體和合適的宿主表達(dá)系統(tǒng)。組合生物合成已形成國(guó)際藥物領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和一個(gè)重要發(fā)展方向。

五、研究方向與前景

我國(guó)天然微生物及植物資源豐富,以微生物作為平臺(tái)的藥物生產(chǎn)歷史悠久、種類繁多,利用這一寶庫(kù)開展組合生物合成研究,建立新型化合物庫(kù),作為新型藥物或先導(dǎo)化合物的重要來(lái)源之一,有重要的理論與實(shí)際意義。組合生物合成為當(dāng)今世界研究熱點(diǎn),我國(guó)也有一定工作基礎(chǔ),開展這方面的研究將有利于加深對(duì)次級(jí)代謝生物合成機(jī)理的研究與應(yīng)用、促進(jìn)生物技術(shù)新藥研制中的作用,對(duì)發(fā)展我國(guó)新藥有重要意義,并推動(dòng)新藥研究中高通量篩選技術(shù)與方法的建立與善,篩選出有價(jià)值的新藥。

我們要重點(diǎn)加強(qiáng)難培養(yǎng)微生物及海洋生物資源挖掘工作,建立并完善從土壤或其他來(lái)源直接分DNA技術(shù),以豐富組合生物合成基因資源;加強(qiáng)微物天然化學(xué)研究,建立微量、快速、高效鑒定天然產(chǎn)化學(xué)結(jié)構(gòu)的技術(shù)和方法;充分利用我們已經(jīng)建立的種生物活性篩選模型,通過(guò)廣泛地聯(lián)合與協(xié)作,擴(kuò)展合生物合成技術(shù)在創(chuàng)新藥物中的應(yīng)用,建立我國(guó)基工程微生物組合生物合成創(chuàng)制新型藥物或先導(dǎo)化合研究的技術(shù)平臺(tái)。該研究將有助于開拓和促進(jìn)我國(guó)新技術(shù)在新藥研究與開發(fā)中的應(yīng)用,對(duì)創(chuàng)制具有我自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新藥將會(huì)有積極推動(dòng)作用。

對(duì)本課程的意見：

1、可能是因?yàn)檫x課人太少的問(wèn)題，上課的時(shí)候沒有很好的聽課氣氛，不過(guò)主要

還可能是自己的原因，自己不能集中精神聽講。

2、以后只要選課的人比較多了，應(yīng)該會(huì)好一些，上課的人少了，總是覺得就像

這門課不重要，老師講的很清晰，主要是我們上課時(shí)常開小差。自從上了大學(xué)，就沒太有人管了，有時(shí)聽起課來(lái)就愛聽不聽，這倒是對(duì)每門課都差不多的。

3、課堂上可以稍微提問(wèn)一下，因?yàn)樘釂?wèn)往往可以引起同學(xué)們的注意，這樣走神的情況可能會(huì)少一些。

4、課堂中還可以穿插一些與課程有關(guān)的歷史、說(shuō)一下那些地方比較適合做研究、考研究生去哪里比較好啊什么的，這樣既可以對(duì)現(xiàn)在的科研大環(huán)境有所了解，課堂內(nèi)容也不至于太單調(diào)。

最后謝謝老師兢兢業(yè)業(yè)地為我們把課上完，盡管上課人數(shù)少，你還是把課完整地給我們講完，謝謝老師為我們的付出。

第五篇：生物制藥技術(shù)

酶

分離純化酶的一般程序

1粗酶液的制備：材料的選擇，發(fā)酵液處理，細(xì)胞破碎及酶的抽提 2酶的初步分離：鹽析，等電點(diǎn)沉淀，有機(jī)溶劑沉淀，離心分離 3酶的高度純化（酶的精制）：層析法（凝膠過(guò)濾、離子交換層析、吸附層析及親和層析），電泳（等電聚焦電泳）

4濃縮干燥及結(jié)晶：透析，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，超濾，冷凍干燥

酶的主要純化技術(shù)－層析技術(shù)

利用混合液中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的不同，(分子的大小和形狀、分子極性、吸附力、分子親和力、分配系數(shù))，使各組分以不同的比例分布在兩相中，當(dāng)流動(dòng)相以一定的速度流經(jīng)固定相時(shí)，各組分的移動(dòng)速度不同，從而使不同的組分分離的技術(shù)過(guò)程。稱為層析技術(shù)（chromatography）

離子交換層析（ion exchange chromatography）

在一定的pH條件下，帶電荷的蛋白質(zhì)與高分子不溶性固定相偶聯(lián)的離子交換基團(tuán)相吸附，流動(dòng)相中解離的離子與被吸附的酶發(fā)生可逆的交換，而對(duì)不同吸附能力的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離 離子交換劑的選擇：陰離子交換劑用于處理凈電荷為負(fù)的蛋白質(zhì)，陽(yáng)離子交換劑用于處理凈電荷為正的蛋白質(zhì)

樣品在低離子濃度條件下上柱，逐漸增加洗脫液的離子濃度，使蛋白依次被洗脫下來(lái) 洗脫方式可以是步進(jìn)式洗脫或線性梯度洗脫 洗脫液一般用 NaCl

凝膠過(guò)濾法（gel filtration）亦稱分子篩層析、排阻層析，是利用生物大分子的相對(duì)分子質(zhì)量的差異進(jìn)行層析分離的一種方法

凝膠層析的固定相是惰性的珠狀凝膠顆粒，凝膠顆粒的內(nèi)部具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，形成很多孔穴。當(dāng)含有不同分子大小的組分的樣品進(jìn)入凝膠層析柱后，各個(gè)組分就向固定相的孔穴內(nèi)擴(kuò)散，組分的擴(kuò)散程度取決于孔穴的大小和組分分子大小。比孔穴孔徑大的分子不能擴(kuò)散到孔穴內(nèi)部，完全被排阻在孔外，只能在凝膠顆粒外的空間隨流動(dòng)相向下流動(dòng)，它們經(jīng)歷的流程短，流動(dòng)速度快，所以首先流出；而較小的分子則可以完全滲透進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，經(jīng)歷的流程長(zhǎng)，流動(dòng)速度慢，所以最后流出；

分離提純 脫鹽 測(cè)定高分子物質(zhì)的相對(duì)分子量

疏水層析（hydrophobic chromatography）

原理：蛋白質(zhì)分子中含有亮氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸等疏水性較強(qiáng)的氨基酸，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液經(jīng)過(guò)疏水層析介質(zhì)的疏水配基時(shí)，蛋白的疏水性集團(tuán)（疏水補(bǔ)丁）會(huì)與疏水配基發(fā)生親和作用而被吸附在介質(zhì)上。不同蛋白質(zhì)分子中疏水基團(tuán)的數(shù)量和特性有所不同。在洗脫時(shí)通過(guò)改變洗脫液的極性達(dá)到分離的目的

親和層析（affinity chromatography）

也稱功能層析、生物專一吸附或選擇層析。根據(jù)生物分子與特定的固相化配基（ligand）之間的親和力而使生物分子得到分離的方法 酶與激活劑/抑制劑/底物/輔酶；抗原與抗體；激素/配體與受體；蛋白質(zhì)與DNA/RNA上特定區(qū)域

特定的配基（激活劑/抑制劑/底物/輔酶）固定于惰性載體 目的酶與配基特異性親和吸附，雜質(zhì)被洗脫 改變洗脫條件，解除目的酶與配基的專一性結(jié)合

固定化酶（細(xì)胞）的定義

優(yōu)點(diǎn)：

1.穩(wěn)定性顯著提高；

2.同一批固定化酶能重復(fù)多次地使用； 3.固定化后，很容易與反應(yīng)物分開（過(guò)濾），不污 染產(chǎn)物，而且有利于控制生產(chǎn)過(guò)程，同時(shí)也省去了 熱處理等使酶失活的步驟；

4.可長(zhǎng)期使用，并可預(yù)測(cè)衰變的速度； 5.提供了研究酶動(dòng)力學(xué)的良好模型。缺點(diǎn)：

①固定化時(shí)，酶活力往往有損失。②增加了生產(chǎn)的成本，初始投資大。

③只能用于可溶性底物，而且較適用于小分子底物，對(duì)大分子底物不適宜。④非均相反應(yīng)。

①注意維持酶的催化活性及專一性。在酶的固定化過(guò)程中，酶與載體的結(jié)合部位不應(yīng)當(dāng)是酶的活性部位，而且要盡量避免那些可能導(dǎo)致酶蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)破壞的條件。②固定化應(yīng)該有利于生產(chǎn)自動(dòng)化、連續(xù)化。為此，用于固定化的載體必須有一定的機(jī)械強(qiáng)度，不能因機(jī)械攪拌而破碎或脫落。

③固定化酶應(yīng)有最小的空間位阻，盡可能不妨礙酶與底物的接近，以提高產(chǎn)品的產(chǎn)量。④酶與載體必須結(jié)合牢固，從而使固定化酶能回收貯藏，利于反復(fù)使用。

⑤固定化酶應(yīng)有最大的穩(wěn)定性，所選載體不與廢物、產(chǎn)物或溶劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。⑥固定化酶成本要低，以利于工業(yè)使用。

載體結(jié)合法

1物理吸附法2離子結(jié)合法3共價(jià)結(jié)合法 是將酶結(jié)合于不溶性載體上的一種固定化方法。1）物理吸附法 作用方式：非特異性物理吸附作用：范德華力；氫鍵；疏水作用；靜電作用 優(yōu)點(diǎn)：制作簡(jiǎn)單，酶分子的構(gòu)象很少或基本不發(fā)生變化，固定化酶活力較高 缺點(diǎn)：酶與載體結(jié)合力弱，酶易從載體脫落 載體：纖維素、瓊脂糖、活性炭、沸石及硅膠等 2)離子結(jié)合法

作用方式：離子鍵結(jié)合

優(yōu)點(diǎn)：制作簡(jiǎn)單，處理?xiàng)l件緩和，酶蛋白的活性中心和高級(jí)結(jié)構(gòu)破壞較少，可以制得活力較高的固定化酶。

缺點(diǎn)：離子鍵結(jié)合較松散，如在高離子強(qiáng)度下進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，酶與載體易分開。載體：多糖類離子交換劑，合成高分子離子交換樹脂 3)共價(jià)鍵結(jié)合法

作用方式：共價(jià)鍵結(jié)合

優(yōu)點(diǎn)：酶分子和載體間的共價(jià)鍵較牢固，有良好的穩(wěn)定性及重復(fù)使用性 缺點(diǎn)：制備過(guò)程復(fù)雜，反應(yīng)條件比較劇烈，酶活性損失比較嚴(yán)重。

制作方法：先將載體活化，在載體上引入一個(gè)活化基團(tuán)，然后該活化基團(tuán)再與酶分子表面的基團(tuán)（羧基/氨基/羥基）反應(yīng)結(jié)合。有戊二醛法、重氮化法、烷基化法等。

交聯(lián)法

利用雙功能（或多功能）基團(tuán)的試劑，使酶蛋白分子之間發(fā)生交聯(lián)，凝集成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而成為固定化酶

常用的雙功能試劑有戊二醛、己二胺、順丁烯二酸酐和雙偶氮苯等。其中最常用的是戊二醛

包埋法

1網(wǎng)格型2微囊型

將酶包埋在凝膠的微小空格內(nèi)或埋于半透膜的微型膠束內(nèi)，但底物仍能滲入到里面與酶接觸。

載體：凝膠，高分子聚合物（半透膜）

優(yōu)點(diǎn)：利用此法制得的固定化酶，由于酶分子僅僅是被包埋起來(lái)，而未受到化學(xué)作用。酶蛋白幾乎不起變化。

缺點(diǎn)：酶被包埋在內(nèi)部，對(duì)大分子底物很難發(fā)生催化作用。所以用包埋法制備的酶，一般只適用與小分子底物。

包埋法分為：網(wǎng)格包埋法和微囊包埋法。

酶?jìng)鞲衅鳎╡nzyme sensor）1生物傳感器的概念

由生物識(shí)別物質(zhì)（如酶、微生物、動(dòng)植物組織、抗體等）和能量轉(zhuǎn)換器相結(jié)合所構(gòu)成的分析儀器，可以簡(jiǎn)便快速的測(cè)定各種特異性很強(qiáng)的物質(zhì) 要求識(shí)別物質(zhì)對(duì)被測(cè)物具有高度的敏感性和選擇性

根據(jù)識(shí)別物質(zhì)可分為：酶?jìng)鞲衅?、組織傳感器、微生物傳感器、免疫傳感器

2、生物傳感器的一般結(jié)構(gòu)與工作原理 結(jié)構(gòu):有兩個(gè)部分組成

生物分子識(shí)別元件（感受器）：酶、核酸、抗體、細(xì)胞等 信號(hào)轉(zhuǎn)換器（換能器）：電化學(xué)電極、光學(xué)檢測(cè)元件、熱敏電阻、表面等離子共振器件等 原理：待測(cè)物質(zhì)經(jīng)擴(kuò)散作用進(jìn)入生物傳感器,通過(guò)分子識(shí)別發(fā)生特異的生物化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生的生化信號(hào)經(jīng)換能器轉(zhuǎn)換為可定量和可處理的電信號(hào),進(jìn)而可檢測(cè)出該物質(zhì)的濃度.根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)不同，可選擇相應(yīng)的換能器.抗體

多克隆抗體：由于一個(gè)抗原通常都有幾個(gè)抗原決定簇，因此每個(gè)免疫細(xì)胞都可能產(chǎn)生一種針對(duì)某一抗原決定簇（antigenic determinant）的抗體，這些由同一抗原產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多克隆抗體。這些由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體，稱為多克隆抗體（polyclonal antibodies，PcAb）。

單克隆抗體：?jiǎn)我活愋偷闹会槍?duì)某一抗原決定簇的抗體分子，是由單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)和特異性完全相同的高純度抗體。

抗原的制備

1.用基因工程技術(shù)制備重組蛋白抗原

2.提取純化天然抗原

3.合成多肽半抗原

4.小分子半抗原

5.多肽半抗原及小分子半抗原與載體偶聯(lián)

免疫

動(dòng)物選擇：Balb/c小鼠，品系一致

途徑

體內(nèi)，體外，脾內(nèi)免疫

篩選陽(yáng)性克隆及克隆化

克?。河蓡蝹€(gè)細(xì)胞繁殖擴(kuò)增而形成性狀均一的細(xì)胞集落的過(guò)程。

目的：篩選陽(yáng)性克??；確保雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗體具有單克隆性以及從細(xì)胞群中篩選

出具有穩(wěn)定表現(xiàn)型。

篩選陽(yáng)性克隆鑒定

單克隆抗體活性檢測(cè)方法：

1）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）：可溶性抗原、細(xì)胞核病毒。2）放免測(cè)定（RIA）：可溶性抗原、細(xì)胞抗體。3）FAC（熒光激活細(xì)胞分選儀，流式培養(yǎng)儀）：針對(duì)細(xì)胞表面

抗原的抗體檢測(cè)。

4）IFA（間接免疫熒光法）：用于細(xì)胞和病毒抗體的檢測(cè)。

雜交瘤細(xì)胞的克隆化

（1）有限稀釋技術(shù) 柏松分布（2）半固體瓊脂培養(yǎng)法

0.5%瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行克隆

1ml含不同數(shù)量的細(xì)胞懸液

1ml42度0.5%的瓊脂液

單克隆抗體的大量制備

基因工程抗體（genetically engineered antibodies,gAb）

是通過(guò)基因工程技術(shù)研制的，即通過(guò)PCR技術(shù)獲得抗體基因或抗體基因片段，與適當(dāng)載體重組后引入不同表達(dá)系統(tǒng)所產(chǎn)生的抗體?；蚬こ炭贵w既保持了單抗的均一性、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，又能克服其為鼠源性的不足，是拓展單抗廣泛人體使用的重要途徑。

（一）嵌合抗體（chimeric antibody）

特點(diǎn)：是用人抗體的C區(qū)替代鼠的C區(qū)。效果：使鼠源性單抗的免疫原性明顯減弱，并可延長(zhǎng)其在體內(nèi)的半衰期及改善藥物的動(dòng)力學(xué)。嵌合抗體的優(yōu)點(diǎn)：

保持了親本鼠單抗的特異性和親和力；

減少人源性的恒定區(qū)的HAMA現(xiàn)象；

能有效地介導(dǎo)產(chǎn)生補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用(CDC)、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）及免疫調(diào)理作用。缺點(diǎn)：

目前已有數(shù)十種嵌合抗體進(jìn)入了臨床試用，雖然HAMA現(xiàn)象較鼠單抗大為下降，但有相當(dāng)比例的患者仍會(huì)出現(xiàn)HAMA癥狀，針對(duì)可變區(qū)的抗獨(dú)特型抗體反應(yīng)仍很明顯。

（二）改型抗體（reshaped antibody，RAb）亦叫“重構(gòu)抗體”，“CDR移植抗體（CDR grafting antibody）”。它是利用基因工程技術(shù)，將人抗體可變區(qū)（V）中互補(bǔ)性決定區(qū)（complementarity determinative region，CDR）的氨基酸序列改換成鼠源單抗CDR 序列。

特點(diǎn)：此種抗體可以使人單抗獲得鼠單抗的特異性又保持人源抗體的親和力。

動(dòng)物

動(dòng)物細(xì)胞分類

1、貼壁依賴性細(xì)胞 概念：anchoraged-dependent cell需要有適量帶電荷的固體或半固體支持表面才能生長(zhǎng)的細(xì)胞 大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞都屬于此類。

2、非貼壁依賴性細(xì)胞

概念：anchoraged-independent cell不依賴于固體支持物表面生長(zhǎng)的細(xì)胞，可在培養(yǎng)液中懸浮生長(zhǎng)，被稱為懸浮細(xì)胞。舉例：血液、淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和某些轉(zhuǎn)化細(xì)胞，Namalwa細(xì)胞。

3、兼性貼壁細(xì)胞

概念：對(duì)支持物的依賴性不嚴(yán)格，既可貼壁生長(zhǎng)，也可懸浮生長(zhǎng)。舉例：CHO細(xì)胞、BHK細(xì)胞、L929細(xì)胞。理想的藥物生產(chǎn)細(xì)胞系

轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本原理

將體外構(gòu)建的重組DNA分子(目的基因或基因組片段)通過(guò)顯微注射、或轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞等方法注入動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞,然后將此受精卵或胚胎再植入受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。

同源重組

雙鏈DNA的兩個(gè)區(qū)段的DNA序列基本一致，但不一定完全相同，叫做同源區(qū)。同源的雙鏈DNA可以通過(guò)相互交換進(jìn)行重組。

外源DNA如有同源區(qū)，也可通過(guò)類似的同源重組過(guò)程整合到生物的染色體基因組上。

胚胎干細(xì)胞（Embryonic Stem Cell，ES）是從早期胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)經(jīng)體外培養(yǎng)建立起來(lái)的多潛能細(xì)胞系，具有胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)特征和分化特征。

新型

反義技術(shù)：根據(jù)堿基互補(bǔ)原理，使用與目標(biāo)靶的遺傳物質(zhì)（DNA或mRNA）特定互補(bǔ)的核苷酸片段來(lái)封閉基因表達(dá)的技術(shù)方法。

反義藥物：人工合成或生物合成的DNA或RNA，能與RNA互補(bǔ)，抑制疾病基因的表達(dá)。反義核酸（antisense nucleic acid）是一段與靶基因的某段序列互補(bǔ)的天然存在或人工合成的核苷酸序列。它可通過(guò)堿基配對(duì)與細(xì)胞內(nèi)核酸特異結(jié)合形成雜交分子，從而在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，具有合成方便、序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、容易修飾、選擇性高、親和力高等特點(diǎn)。

核酶(ribozyme)具有酶活性的RNA，可降解特異的mRNA序列。

RNA干擾（RNA interference，RNAi）

由雙鏈RNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)特異性mRNA降解過(guò)程，導(dǎo)致靶基因的表達(dá)沉默。

基因?qū)敕绞?/p>

直接體內(nèi)療法（in vivo）

是指將目的基因直接導(dǎo)入體內(nèi)有關(guān)的組織器官，使其進(jìn)入相應(yīng)的細(xì)胞并進(jìn)行表達(dá)。間接體內(nèi)療法（ex vivo）

是指在體外將目的基因?qū)氚屑?xì)胞，經(jīng)過(guò)篩選和增殖后將細(xì)胞回輸給患者，使該基因在體內(nèi)有效地表達(dá)相應(yīng)產(chǎn)物，以達(dá)到治療的目的。

腫瘤的基因治療

（一）通過(guò)抑癌基因抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

（二）通過(guò)病毒感染殺傷腫瘤細(xì)胞

（三）通過(guò)誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞

（四）腫瘤的自殺基因治療

（五）腫瘤抗原靶向的腫瘤基因治療

（六）細(xì)胞因子基因治療