第一篇：基于核酸檢測方法金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件3 基于核酸檢測方法的金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試劑注冊技術(shù)審查 指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對基于核酸檢測方法進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別檢測的體外診斷試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門審評注冊申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對基于核酸檢測方法進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別檢測的體外診斷試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍 （一）臨床背景 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）為革蘭陽性球菌，是葡萄球菌屬的一種，分布廣泛，多種動(dòng)物和人均有易感性，是臨床上常見的致病菌。隨著抗菌藥物的使用，逐漸出現(xiàn)耐藥型金黃色葡萄球菌，如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA）。MRSA具有多重耐藥性，不僅對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥，也對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和喹諾酮類藥物都表現(xiàn)出不同程度的耐藥，其對不同抗菌藥物的耐藥率存在較大的地域差異，并有不同的變化趨勢。

MRSA分為醫(yī)療機(jī)構(gòu)相關(guān)性MRSA（healthcare-associated MRSA，HA-MRSA)、社區(qū)相關(guān)性MRSA(community-associated MRSA，CA-MRSA)和家畜相關(guān)性（Livestock-associated MRSA，LA-MRSA）。CA-MRSA 和HA-MRSA、LA-MRSA在微生物學(xué)、細(xì)菌耐藥（如HA-MRSA相較于CA-MRSA表現(xiàn)出更多多重耐藥）及臨床特點(diǎn)方面（如感染部位）有較大差異，根據(jù)這些特點(diǎn)可以將兩者進(jìn)行區(qū)分。但由于人員在醫(yī)院和社區(qū)間不斷流動(dòng)，CA-MRSA 和HA-MRSA 的差異日漸縮小。MRSA的分型有多種方式，如SCCmec、spa基因分型、多位點(diǎn)序列分型（MLST）、基于脈沖場凝膠電泳（PFGE）的分型等。

MRSA的耐藥機(jī)制可能是由于MRSA受到外界刺激后本身固有耐藥基因被激活或是引入了外來的耐藥基因并激活。目前臨床分離的MRSA菌株對大多數(shù)β-內(nèi)酰胺抗菌藥物耐藥（新型頭孢菌素類除外），大部分耐藥是由mecA、mecC基因介導(dǎo)，但是小部分MRSA不攜帶mecA基因，存在其它耐藥機(jī)制。

目前SA的臨床檢測方法包括：分離培養(yǎng)后，經(jīng)染色觀察、血漿凝固酶試驗(yàn)、生化鑒定，質(zhì)譜鑒定及聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測耐熱核酸酶（nuc）基因、SA保守基因16S rRNA和SA多種毒素基因。

MRSA的檢測方法包括頭孢西丁紙片擴(kuò)散法、苯唑西林微量肉湯/瓊脂稀釋法（MIC）、苯唑西林瓊脂篩選法、青霉素結(jié)合蛋白（PBP2a）乳膠凝集法、顯色培養(yǎng)基法、自動(dòng)化藥敏檢測以及聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測mecA等基因方法。

美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）推薦用于MRSA的檢測方法有：紙片擴(kuò)散法、2%NaCl肉湯/瓊脂稀釋法和苯唑西林瓊脂篩選法，這些檢測方法均需要在33-35℃條件下孵育24小時(shí)。

目前臨床推薦選擇頭孢西丁篩查試驗(yàn)進(jìn)行MRSA的檢測，還可以選擇苯唑西林微量肉湯/瓊脂稀釋法（MIC）。

MRSA/SA的臨床檢測樣本類型包括但不限于鼻拭子、痰液、皮膚及軟組織感染樣本、血培養(yǎng)陽性并革蘭染色法陽性球菌的樣品等人體樣本和培養(yǎng)物。不同樣本類型可能適用于不同的臨床預(yù)期用途：如用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)對住院病人包括重癥監(jiān)護(hù)病人、手術(shù)病人及長期護(hù)理病人等MRSA院內(nèi)感染的預(yù)防和控制的監(jiān)測，用于結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢測如微生物培養(yǎng)等輔助診斷MRSA/SA的感染，用于臨床需進(jìn)行培養(yǎng)檢測的患者M(jìn)RSA/SA感染的輔助診斷等。

（二）本指導(dǎo)原則適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于基于核酸檢測方法進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別檢測的體外診斷試劑。常見方法包括熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法、基因芯片法等。本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容基于熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法對產(chǎn)品相關(guān)申報(bào)資料提出要求，其他方法的相關(guān)產(chǎn)品可依據(jù)方法學(xué)的具體特點(diǎn)參照執(zhí)行。

二、注冊申報(bào)資料要求 （一）綜述資料 綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)以及其他內(nèi)容，其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述申報(bào)產(chǎn)品所檢測的金黃色葡萄球菌鑒定基因的選擇依據(jù)、耐藥突變位點(diǎn)與耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的相關(guān)性、基因選擇的依據(jù)及覆蓋的耐藥菌的情況、產(chǎn)品驗(yàn)證覆蓋的耐藥菌株及其在我國的流行特征；

產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品所有可檢出的耐藥基因型（可包含不同分型方式下的分型，如SCCmec型、spa型以及PFGE分型）、尚未驗(yàn)證的耐藥菌株型別；

同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從所檢菌株覆蓋情況、檢測的最低檢出限及不同菌株和型別間的交叉反應(yīng)等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求及說明》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料 此類產(chǎn)品主要為PCR方法，主要原材料包括引物、探針、DNA聚合酶、dNTP、尿嘧啶糖基化酶（如有）、核酸分離/純化組分（如有）、試劑盒質(zhì)控品及企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料、質(zhì)控品的確認(rèn)試驗(yàn)資料；

生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)提供企業(yè)參考品的原材料選擇、來源、質(zhì)量指標(biāo)、參考品的制備及陰陽性的確認(rèn)過程等。

1.引物和探針：包括申報(bào)產(chǎn)品檢測靶序列的引物和探針以及內(nèi)對照的引物和探針。應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。針對檢測靶序列的引物和探針，建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，針對預(yù)期適用的型別進(jìn)行檢出準(zhǔn)確性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評價(jià)，可采用擴(kuò)增靶序列與SA和MRSA基因組比對研究的方法，最終確認(rèn)最佳組合，并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度檢查、濃度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。

2.酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下：

2.1DNA聚合酶應(yīng)包括DNA聚合酶活性、無核酸內(nèi)切酶活性、熱啟動(dòng)能力（如適用）、熱穩(wěn)定性等。

2.2如申報(bào)產(chǎn)品中包含尿嘧啶DNA糖基化酶，應(yīng)對其酶活性及熱穩(wěn)定性等質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)定。

3.dNTP：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括純度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。

4.核酸分離/純化組分（如有）的原理介紹、主要組成、主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)驗(yàn)證資料。

5.試劑盒質(zhì)控品 試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒質(zhì)控品來實(shí)現(xiàn)，針對陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，申請人應(yīng)明確質(zhì)控品的來源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控品陰陽性的確認(rèn)方法及相關(guān)驗(yàn)證資料。質(zhì)控品應(yīng)參與樣本處理和檢測的全過程，如核酸的平行提取等步驟。申報(bào)產(chǎn)品的質(zhì)控體系應(yīng)考慮以下幾個(gè)方面：

5.1陽性質(zhì)控品中應(yīng)含有包含試劑盒所檢靶序列的DNA，優(yōu)先使用MRSA/SA分離滅活菌株，也可以采用工程菌株、克隆菌株等。企業(yè)應(yīng)對質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求（如Ct值）。

5.2陰性質(zhì)控品應(yīng)不含試劑盒所檢靶序列的基因，陰性質(zhì)控的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際樣本基質(zhì)一致或接近，以對可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

5.3對照（內(nèi)標(biāo)）可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，申請人應(yīng)對內(nèi)對照（內(nèi)標(biāo)）的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。對內(nèi)對照的檢測結(jié)果亦應(yīng)做出明確的范圍要求（如Ct值）。

6.企業(yè)參考品：應(yīng)詳細(xì)說明有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備過程、提供陰陽性確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

企業(yè)參考品應(yīng)充分考慮產(chǎn)品檢測靶物質(zhì)的各種基因型別和耐藥菌株，考慮產(chǎn)品驗(yàn)證的性能需求進(jìn)行設(shè)置。具體要求如下：

6.1陽性參考品 陽性參考品應(yīng)采用經(jīng)鑒定確認(rèn)的多個(gè)臨床流行分離菌株、含有菌株純化的基因組DNA等，包含申報(bào)產(chǎn)品聲稱的應(yīng)檢出的MRSA/SA基因型。應(yīng)覆蓋我國主要的流行耐藥菌株，可包含不同分型方式下的分型，如SCCmec型、spa型以及PFGE分型等。

6.2陰性參考品（特異性參考品）陰性參考品應(yīng)考慮檢測MRSA和SA的特異性分別進(jìn)行評價(jià)的要求，應(yīng)納入不在試劑盒檢測范圍內(nèi)的其他葡萄球菌、革蘭陽性菌菌株和其他病原體樣品，特別是可能存在潛在競爭抑制的甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌。

6.3檢測限參考品 檢測限參考品應(yīng)分別針對MRSA和SA每個(gè)分析物靶基因和不同樣本類型設(shè)定檢測限附近連續(xù)稀釋的參考品，應(yīng)使用處于對數(shù)增長期的菌進(jìn)行制備，明確每個(gè)參考品的活菌數(shù)，以CFU/mL表示。應(yīng)明確CFU的確定方法。

6.4精密度參考品 精密度參考品應(yīng)使用菌株針對每個(gè)檢測目標(biāo)物設(shè)定一組參考品，包括陰性、弱陽性（略高于臨界值，預(yù)期重復(fù)檢測95%陽性）、中等陽性（高于臨界值，預(yù)期檢測結(jié)果100%陽性）三個(gè)水平。

如產(chǎn)品適用于不同的樣本類型，建議針對不同樣本類型設(shè)定不同的參考品基質(zhì)，應(yīng)與實(shí)際樣本類型基質(zhì)一致或相似，模擬基質(zhì)應(yīng)經(jīng)證實(shí)與天然基質(zhì)無顯著差異。

若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并提交主要原材料制備過程；

如主要原材料購自其他供應(yīng)商，則需針對供應(yīng)商的選擇提供評價(jià)數(shù)據(jù)，并提供供應(yīng)商出具的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及申請人對該原材料進(jìn)行的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 1.介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可以圖表方式表示，并說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.詳述樣本采集、樣本處理方式的選擇和設(shè)置，提供相關(guān)的研究資料。

4.確定最佳反應(yīng)體系的研究資料，包括樣本用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。

5.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

6.如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對核酸分離/純化過程進(jìn)行選擇的研究資料。

（四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能評價(jià)的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、試驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號和臨床樣本來源等。

針對不同的樣本類型如鼻拭子、痰液、皮膚和軟組織感染拭子樣本、血培養(yǎng)分離樣本等，申請人應(yīng)分別完成性能評估，包括陰陽性符合率、最低檢測限、精密度評價(jià)、干擾驗(yàn)證等。

分析性能評價(jià)的試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的國外或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。各項(xiàng)性能評價(jià)應(yīng)符合以下要求。

1.核酸分離/純化性能（如適用）在進(jìn)行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的核酸分離/純化試劑針對聲稱樣本類型的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗(yàn)證，提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

2.最低檢測限 申報(bào)產(chǎn)品最低檢出限的性能評估資料應(yīng)包含最低檢出限的確定及驗(yàn)證過程。

應(yīng)使用臨床分離獲得的特征良好的MRSA/SA分離菌株進(jìn)行最低檢測限研究。所選菌株建議包含來自不同地區(qū)的MRSA/SA，以涵蓋金黃色葡萄球菌的遺傳多樣性，應(yīng)覆蓋不同分型方式下的不同分型，如SCCmec型、spa型、PFGE分型，涵蓋我國不同地區(qū)臨床常見型別。最低檢測限的確定研究試驗(yàn)應(yīng)使用上述選定的多種有代表性的MRSA/SA分離菌株進(jìn)行連續(xù)稀釋，以CFU/mL為檢測單位，如引入DNA拷貝數(shù)作為單位，應(yīng)確定兩者之間的換算關(guān)系。稀釋基質(zhì)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品聲稱的樣本類型分別配合相應(yīng)的基質(zhì)。如樣本類型為鼻拭子、痰液或皮膚及軟組織感染拭子，建議使用陰性鼻拭子或陰性皮膚及軟組織拭子洗液或模擬基質(zhì)進(jìn)行稀釋，如可使用含生理鹽水、粘蛋白及人類基因組DNA的基質(zhì)作為鼻拭子、痰液樣本替代基質(zhì)，使用含白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血漿的基質(zhì)作為皮膚及軟組織拭子樣本的替代基質(zhì)；

如樣本類型為經(jīng)血培養(yǎng)并確定含革蘭陽性球菌（GPC）的樣本，應(yīng)使用含人血液和適配的血液培養(yǎng)基作為模擬基質(zhì)，并應(yīng)添加高濃度的常見感染菌?？蓪⒛M樣本稀釋液培養(yǎng)一段時(shí)間。無論使用何種模擬或替代基質(zhì)，應(yīng)進(jìn)行基質(zhì)比對性試驗(yàn)證明替代基質(zhì)與臨床實(shí)際樣本的等效性。

將各稀釋液重復(fù)檢測3-5次，預(yù)估檢測限范圍后制備至少20份檢測限濃度樣本，證實(shí)MRSA/SA檢出率達(dá)到95%的濃度作為最低檢測限。針對不同的血培養(yǎng)瓶或血培養(yǎng)系統(tǒng)，應(yīng)分別驗(yàn)證檢測限是否一致。

3.包容性 應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)產(chǎn)品能夠檢出的金黃色葡萄球菌中存在的基因多態(tài)性的MRSA/SA。在實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證菌株納入時(shí)考慮金黃色葡萄球菌的進(jìn)化結(jié)構(gòu)，常見克隆系和型別，并納入不同SCCmec型、spa型、PFGE類型的菌株。建議檢索近年國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道并收集各地區(qū)、不同菌株（社區(qū)和醫(yī)院內(nèi)感染，鼻腔、皮膚和軟組織感染等）進(jìn)行菌株驗(yàn)證。被驗(yàn)證細(xì)菌的濃度應(yīng)接近檢測限水平，所有菌株應(yīng)進(jìn)行鑒定和濃度測定。并應(yīng)在預(yù)期可能存在高濃度（高于106CFU/mL）的其他感染菌如甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌情況下進(jìn)行試驗(yàn)。

4．申請人應(yīng)對申報(bào)產(chǎn)品精密度指標(biāo)做出合理要求。精密度評價(jià)使用菌株配制的企業(yè)參考品或相應(yīng)臨床樣本進(jìn)行，且精密度評價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對本類產(chǎn)品的精密度評價(jià)主要包括以下要求。

4.1對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，還應(yīng)對分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

4.2設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測，從而對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。

4.3用于精密度評價(jià)的參考品或臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性、弱陽性（略高于臨界值，預(yù)期重復(fù)檢測95%陽性）、中等陽性（高于臨界值，預(yù)期檢測結(jié)果100%陽性），并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫螅R床樣本精密度評價(jià)中的每一次檢測均應(yīng)從核酸提取開始。

5.分析特異性 5.1交叉反應(yīng) 交叉反應(yīng)的驗(yàn)證應(yīng)結(jié)合樣本來源進(jìn)行，針對不同樣本類型考慮可能共生的潛在的交叉反應(yīng)病原體。應(yīng)使用高濃度交叉反應(yīng)病原體（如高于106CFU/mL的細(xì)菌和酵母，高于105PFU/mL的病毒）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，以明確是否存在交叉反應(yīng)所致的假陽性。

針對鼻拭子、痰液樣本，應(yīng)考慮在鼻中及呼吸道的致病菌和共生菌，如甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）、凝固酶陰性葡萄球菌、耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE），以及革蘭陰性桿菌、革蘭陰性球菌、奈瑟菌、莫拉菌、酵母菌、革蘭陽性桿菌、革蘭陽性球菌等臨床常見菌種，凝固酶陽性葡萄球菌代表菌株。

針對皮膚和軟組織感染樣本或檢測來自血培養(yǎng)測定為陽性微生物生長并經(jīng)革蘭染色證實(shí)為革蘭陽性球菌的樣本，應(yīng)納入更多微生物，包括皮膚菌群。對于血培瓶來源的樣本無必要進(jìn)行病毒交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

5.2微生物干擾 同樣采用上述潛在交叉反應(yīng)微生物，評價(jià)潛在微生物干擾，即是否對MRSA/SA臨界水平樣本檢測產(chǎn)生干擾。建議采用存在于各標(biāo)本類型的（鼻拭子、痰液、皮膚和軟組織感染、血培養(yǎng)樣本）和代表不同MRSA基因型的至少兩個(gè)MRSA菌株在臨界水平進(jìn)行微生物干擾試驗(yàn)。

5.3干擾物質(zhì) 評價(jià)各樣本類型中可能存在的干擾物質(zhì)是否對檢測造成干擾。建議采用存在于各標(biāo)本類型的（鼻拭子、痰液、皮膚和軟組織感染、血培養(yǎng)樣本）和代表不同MRSA基因型的至少兩個(gè)MRSA菌株的臨界濃度對干擾物質(zhì)（潛在最高濃度）進(jìn)行驗(yàn)證。鼻拭子樣本的干擾物質(zhì)應(yīng)考慮血液、鼻腔分泌物或黏液、鼻腔用藥。痰液樣本的干擾物應(yīng)考慮如血液、粘液、人細(xì)胞等。皮膚和軟組織感染樣本的潛在干擾物應(yīng)考慮血液、膿液、血漿、常用外用抗菌藥、抗生素等皮膚用藥。血培養(yǎng)樣本的潛在干擾物質(zhì)應(yīng)考慮血培養(yǎng)基、樹脂及活性炭等，具體結(jié)合培養(yǎng)瓶類型確定。

6.陽性/陰性參考品符合率 陽性參考品的檢測旨在驗(yàn)證試劑盒檢測范圍內(nèi)的MRSA/SA均可以在適當(dāng)?shù)臐舛缺粰z測到，陽性參考品檢測結(jié)果應(yīng)為陽性。陰性參考品旨在評價(jià)試劑特異性，陰性參考品檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

7.方法學(xué)比對研究 為驗(yàn)證擬申報(bào)產(chǎn)品靶核酸檢測的準(zhǔn)確性，應(yīng)選擇部分臨床樣本將擬申報(bào)產(chǎn)品與已上市核酸檢測試劑進(jìn)行比較研究。所選對比試劑檢測靶基因應(yīng)與擬申報(bào)試劑一致，方法性能可比，且臨床公認(rèn)質(zhì)量較好；

對于無已上市核酸檢測試劑的目的基因，可與病毒核酸序列測定方法進(jìn)行比對。用于核酸序列測定的引物序列應(yīng)不同于考核試劑中用于檢測目的基因的引物序列。建議對擴(kuò)增子進(jìn)行雙向測序。方法學(xué)比對研究的具體方式可參考相關(guān)的國外或國內(nèi)有關(guān)的指導(dǎo)文件進(jìn)行，臨床樣本數(shù)量及其特性應(yīng)具有代表性，能夠充分驗(yàn)證擬申報(bào)產(chǎn)品靶核酸檢測的準(zhǔn)確性。

8.其他性能研究（如涉及）如攜帶污染的驗(yàn)證，使用高陽性樣本和陰性樣本交叉檢測多次運(yùn)行，考察設(shè)備多樣本檢驗(yàn)是否存在攜帶污染。

（五）陽性判斷值確定資料 對于此類試劑，陽性判斷值即為針對每個(gè)目標(biāo)物能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值（Cutoff），對于熒光探針PCR方法即為Ct值的確定資料。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行相關(guān)研究。申請人應(yīng)選取適當(dāng)?shù)淖銐驍?shù)量的臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)以確定陽性判斷值。

（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對儲存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。

對于樣本提取后不能立即進(jìn)行檢測的，應(yīng)明確核酸儲存條件、儲存時(shí)間等內(nèi)容，同時(shí)應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料 申請人應(yīng)參考YY/T 0316《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》規(guī)定的過程和方法，在產(chǎn)品生命周期內(nèi)對申報(bào)產(chǎn)品可能造成的危害進(jìn)行判定（可重點(diǎn)參考YY/T 0316的附錄H），對每一危害處境的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行判定和評價(jià)，形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告，控制這些風(fēng)險(xiǎn)并監(jiān)視控制的有效性，充分保證產(chǎn)品的安全性和有效性。

該試劑的主要危害大致可包括三個(gè)方面，即：生物學(xué)和化學(xué)危害、操作危害、信息危害。

1.生物學(xué)和化學(xué)危害 生物學(xué)：如細(xì)菌、病毒引起的交叉感染、檢測完成后剩余樣本、試劑和廢棄物處理不當(dāng)引起的交叉感染。

化學(xué)：如使用的清潔劑、消毒劑殘留引發(fā)的危害。

2.操作危害 不正確的測量：

如未按使用說明書中的要求進(jìn)行測量，造成的測量失敗、測量誤差過大。

使用未經(jīng)驗(yàn)證的不同廠家的分析儀或使用未經(jīng)正確保養(yǎng)或校準(zhǔn)的儀器，造成的測量失敗、測量誤差過大。

在制造商規(guī)定的使用環(huán)境條件外使用產(chǎn)品，可能造成測量誤差過大。

3.信息危害 如說明書或標(biāo)簽缺少或不正確，標(biāo)記的位置不正確，不能被正確的識別，不能清楚易認(rèn)。

不符合法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的產(chǎn)品說明書，包括產(chǎn)品說明書中未對限制充分告知，未對不正確的操作、與其他設(shè)備共同使用時(shí)易產(chǎn)生的危害進(jìn)行警告，未正確標(biāo)示儲存條件、消毒方法、維護(hù)信息，未對因長期使用產(chǎn)生功能喪失而可能引發(fā)的危害進(jìn)行警告，未對合理可預(yù)見的誤用進(jìn)行警告等引發(fā)的危害。

（八）臨床評價(jià)資料 臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求。

1.研究方法 建議采用前瞻性臨床試驗(yàn)對擬申報(bào)產(chǎn)品進(jìn)行臨床評價(jià)，以SA和MRSA鑒定和藥敏檢測臨床參考方法作為對照方法，金黃色葡萄球菌鑒定應(yīng)結(jié)合形態(tài)學(xué)、凝固酶試驗(yàn)和生化鑒定、質(zhì)譜方法等方法，藥敏方法建議使用頭孢西丁紙片法或苯唑西林微量肉湯/瓊脂稀釋法（MIC），也可以應(yīng)用相應(yīng)的全自動(dòng)鑒定藥敏方法，證明擬上市產(chǎn)品的臨床性能和預(yù)期用途。針對不同樣本類型對應(yīng)的不同預(yù)期用途，分別設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)進(jìn)行研究。

2.臨床試驗(yàn)病例數(shù) 臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。本臨床試驗(yàn)的主要評價(jià)指標(biāo)為擬申報(bào)產(chǎn)品相對于臨床參考方法的靈敏度和特異性。

臨床總體樣本量應(yīng)分別考慮SA和MRSA陽性和陰性樣本量的統(tǒng)計(jì)需求，綜合估算。SA和MRSA的臨床試驗(yàn)陽性樣本例數(shù)的估算建議采用單組目標(biāo)值法，考核試劑的SA鑒定和MRSA藥敏檢測靈敏度目標(biāo)值建議針對不同樣本類型設(shè)置，建議鼻拭子、痰液、皮膚軟組織拭子等直接樣本的目標(biāo)值不低于90%，血培養(yǎng)樣本目標(biāo)值不低于95%。通過參數(shù)估計(jì)（含相應(yīng)可信區(qū)間估計(jì)）的方法證明產(chǎn)品針對SA鑒定和MRSA藥敏檢測的靈敏度不低于目標(biāo)值，可參考如下樣本量公式計(jì)算。

n=Z1-α/2P01-P0+Z1-βPT1-PT2PT-P02 公式中，n為樣本量；

Z1-α/2、Z1-β為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價(jià)指標(biāo)的目標(biāo)值，PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

SA和MRSA的陰性樣本量的估算可不采用目標(biāo)值法，建議根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得的特異度的預(yù)期值采用如下公式計(jì)算：

n=Z1-α/22P(1-P)Δ2 公式中n為樣本量，Z1-α/2為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P為評價(jià)指標(biāo)預(yù)期值，Δ為P的允許誤差大小，一般取P的95%可信區(qū)間寬度的一半，常用的取值為0.05-0.1。

同時(shí)總體樣本確定時(shí)應(yīng)考慮到培養(yǎng)鑒定的成功率、其他可能造成樣本脫落的情況以及可能需要納入的干擾等適當(dāng)增加樣本量。如不同樣本類型適用不同預(yù)期用途，針對每一種預(yù)期用途臨床試驗(yàn)總病例數(shù)均應(yīng)分別滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

3.臨床研究單位的選擇 應(yīng)選擇不少于3家（含3家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，鑒于不同地區(qū)及醫(yī)療機(jī)構(gòu)中SA/MRSA流行情況的差異，應(yīng)選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，不得選擇同一地區(qū)地域相近的醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評價(jià)方案。

4.病例選擇及樣本類型 臨床試驗(yàn)病例選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品聲稱預(yù)期用途中使用的樣本類型及適用人群進(jìn)行選擇，如臨床背景內(nèi)容中所述，該產(chǎn)品適用不同樣本類型時(shí)對應(yīng)不同的臨床預(yù)期用途，采用鼻拭子樣本的試劑用于MRSA院內(nèi)感染的預(yù)防和控制時(shí)，應(yīng)采用醫(yī)療機(jī)構(gòu)中的住院病人包括重癥監(jiān)護(hù)病人、手術(shù)病人及長期護(hù)理病人等病例進(jìn)行臨床研究；

皮膚及軟組織感染拭子用于結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢測如微生物培養(yǎng)等輔助診斷MRSA/SA的皮膚和軟組織感染時(shí)，應(yīng)采用臨床皮膚和軟組織感染病例進(jìn)行臨床研究；

血培養(yǎng)測定為陽性微生物生長并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革陽性球菌（GPC）的樣本用于臨床需進(jìn)行血培養(yǎng)檢測的患者M(jìn)RSA/SA感染的輔助診斷時(shí)，應(yīng)采用臨床需進(jìn)行血培養(yǎng)檢測的患者，且血培養(yǎng)測定為陽性微生物生長并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革蘭陽性球菌的患者作為病例進(jìn)行臨床研究。同時(shí)適用于上述不同樣本類型時(shí)，應(yīng)分別進(jìn)行相關(guān)病例的臨床研究。

申請人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)綜合考慮到試劑所適用的各類人群的潛在差異，如年齡、性別、病情等。

同時(shí)應(yīng)關(guān)注樣本中其他病原體的存在情況、內(nèi)源和外源干擾因素。

5.倫理學(xué)要求 臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。

6.臨床試驗(yàn)方案 臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測結(jié)果一致性分析、臨床靈敏度、特異度等。常選擇2×2表的形式總結(jié)兩種方法的定性檢測結(jié)果。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評價(jià)考核試劑與參比方法是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。靈敏度結(jié)果的95%置信區(qū)間下限應(yīng)高于目標(biāo)值。特異性結(jié)果與預(yù)期值差異應(yīng)有明確可接受標(biāo)準(zhǔn)，如差異較大，應(yīng)有合理的解釋或繼續(xù)擴(kuò)大樣本量。應(yīng)分別對SA和MRSA的檢測結(jié)果進(jìn)行比較統(tǒng)計(jì)和分析。

對于不一致樣本，應(yīng)在方案中明確是否需進(jìn)一步復(fù)測或確認(rèn)，并對不一致原因進(jìn)行分析。

8.質(zhì)量控制 臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可精密度精密度。

9.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫 根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

9.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述 9.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

9.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)、盲態(tài)檢測要求等。

9.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

9.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

9.2 具體的臨床試驗(yàn)情況 9.2.1臨床試驗(yàn)所用體外診斷試劑及儀器的名稱、批號、機(jī)型等信息。

9.2.2對各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況分布情況進(jìn)行綜合，建議以列表或圖示方式列出各年齡組的樣本例數(shù)。

9.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況。

9.2.4具體試驗(yàn)過程，樣本收集、樣本保存、樣本檢測、結(jié)果處理、結(jié)果不一致樣本的確認(rèn)等。

9.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 9.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改；

9.3.2結(jié)果的一致性分析 計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總體符合率，采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如四格表卡方檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

9.4討論和結(jié)論 對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

9.5其他 臨床試驗(yàn)中如涉及核酸序列測定方法，應(yīng)在臨床研究報(bào)告中對選用的測序方法做詳細(xì)介紹，并提供以下關(guān)于測序試驗(yàn)的詳細(xì)信息及資料。

9.5.1測序方法原理、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

9.5.2測序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子量、純度、功能性試驗(yàn)等資料。

9.5.3對所選測序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測限的確認(rèn)，建議將所選測序方法與擬申報(bào)產(chǎn)品的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對分析。

9.5.4測序方法應(yīng)建立合理的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對臨床樣本的檢測結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

9.5.5提交有代表性的樣本測序圖譜及結(jié)果分析資料。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求 申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

該試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。性能指標(biāo)應(yīng)依據(jù)分析性能評估試驗(yàn)結(jié)果確定，檢驗(yàn)方法應(yīng)明確具體操作方法和使用的樣本及參考品情況。

該產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（十）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告 應(yīng)提供該產(chǎn)品符合產(chǎn)品技術(shù)要求的，在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告；

應(yīng)提供連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)合格報(bào)告。

（十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別和檢測的體外診斷試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。

1.【預(yù)期用途】 1.1試劑盒用于定性檢測人鼻拭子、痰液、皮膚及軟組織感染拭子、血培養(yǎng)測定為陽性微生物生長并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革蘭陽性球菌的樣品等樣本的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌，適用樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究完成情況進(jìn)行確認(rèn)。

1.2明確試劑不同樣本類型的臨床意義，如鼻拭子樣本用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)對住院病人包括重癥監(jiān)護(hù)病人、手術(shù)病人及長期護(hù)理病人等MRSA院內(nèi)感染的預(yù)防和控制；

皮膚及軟組織感染拭子用于結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢測如微生物培養(yǎng)等輔助診斷MRSA/SA的皮膚和軟組織感染；

血培養(yǎng)測定為陽性微生物生長并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革蘭陽性球菌的樣本用于臨床需進(jìn)行血培養(yǎng)檢測的患者M(jìn)RSA/SA感染的輔助診斷等。

1.3SA和MRSA流行特征介紹。

1.4簡單介紹待測目標(biāo)的特征，如待測靶基因特征及與SA和MRSA的關(guān)系等。

2.【檢驗(yàn)原理】 詳細(xì)說明試劑盒技術(shù)原理，即核酸分離/純化方法、原理。說明檢測的靶基因座位、序列長度等；

介紹引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)體系（管）組合、對照品（質(zhì)控品）設(shè)置及熒光信號標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分（如尿嘧啶DNA糖基化酶，即UDG/UNG等），也應(yīng)對其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成分】 詳細(xì)說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息，如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性；

說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、貨號以及醫(yī)療器械注冊證號/備案號（如有）等詳細(xì)信息。當(dāng)試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分時(shí)，應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。

4.【儲存條件及有效期】 試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。

5.【適用儀器】 所有適用的儀器型號，提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

6.【樣本要求】? 明確適用的樣本類型。并詳細(xì)描述樣本采集及預(yù)處理要求、運(yùn)輸要求、保存條件及期限等。特別是樣本采集所需設(shè)備及保存液，需特別明確供應(yīng)商、貨號及注冊證號（如有）。有關(guān)描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評價(jià)及穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上。

樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，并在此處引用。

7.【檢驗(yàn)方法】 詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。對照品（質(zhì)控品）參與樣本核酸的平行提取的要求等。

7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。

7.4 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.5儀器設(shè)置：特殊參數(shù)，待測基因、內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇等。

7.6質(zhì)量控制：說明對照品（質(zhì)控品）的檢測要求。

8.【陽性判斷值】 簡要總結(jié)陽性判斷值研究方法及結(jié)論。明確說明樣本的陽性判斷值。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】 說明對照品、內(nèi)標(biāo)的正確結(jié)果要求，結(jié)合對照品（質(zhì)控品）以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】 應(yīng)至少包括如下描述：

10.1本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

10.2基因檢測結(jié)果僅能覆蓋耐藥機(jī)制為相應(yīng)基因（如mecA基因和或mecC）的耐藥結(jié)果，但是小部分MRSA不攜帶mecA和/或mecC基因，存在其它耐藥機(jī)制，可能出現(xiàn)漏檢。

10.3不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述分析性能評估的試驗(yàn)結(jié)果并簡要描述臨床試驗(yàn)的基本信息、試驗(yàn)方法和結(jié)論。

12.【注意事項(xiàng)】 應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出生物安全性的警告。

12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

12.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說明的樣本采集和處理方法（包括樣本采集液等）進(jìn)行了驗(yàn)證，其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。

12.4強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護(hù)程序。

四、編寫單位 國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

第二篇：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的預(yù)防與控制措施

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的預(yù)防與控制措施

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是一種流行范圍廣、致病力強(qiáng)、發(fā)病率和死亡率高的病原菌。人體一旦感染，特別是抵抗力降低的患者如住重癥監(jiān)護(hù)室的患者、應(yīng)用免疫抑制劑者、較長時(shí)間應(yīng)用光譜抗菌藥物的患者和老年人，可引起敗血癥、肺炎和毒血癥等，延長患者住院時(shí)間，如治療不及時(shí)，可危及患者的生命。

一、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）感染的臨床表現(xiàn)

發(fā)熱，精神差，局部感染癥狀，而最常見的是肺部感染，其他如皮膚、泌尿道、產(chǎn)婦生殖道感染，重者為敗血癥。

二、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的監(jiān)測和報(bào)告

1、微生物實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）時(shí)應(yīng)按危急值報(bào)告要求向所在臨床科室、院感科報(bào)告。做到早發(fā)現(xiàn)、早診治、早隔離、早治療。

2、經(jīng)管醫(yī)生如確診為醫(yī)院感染病例，必須在24 小時(shí)內(nèi)填卡上報(bào)院感科。

三、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）預(yù)防

①合理使用抗生素。認(rèn)真落實(shí)《抗菌藥物臨床應(yīng)用的基本原則》和《衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)抗菌藥物臨床應(yīng)用管理的知識》要求，嚴(yán)格執(zhí)行抗菌藥物臨床應(yīng)用的基本原則，正確、合理的實(shí)施抗菌藥物的給藥方案，加強(qiáng)抗菌藥物臨床合理應(yīng)用的管理，減少或者延緩耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的產(chǎn)生。

②早期檢出帶菌者。加強(qiáng)對從其他醫(yī)院轉(zhuǎn)入者及MRSA易感者的檢查，重點(diǎn)篩查高危人群，提高病原學(xué)監(jiān)測送檢率。同時(shí)微生物室應(yīng)選用準(zhǔn)確的檢測手段，發(fā)現(xiàn)MRSA，及時(shí)向臨床和院感科報(bào)告，以便控制感染和隔離治療。

③加強(qiáng)消毒與環(huán)境保潔。醫(yī)護(hù)人員檢查病人前后要嚴(yán)格洗手消毒，應(yīng)用一次性口罩、帽子、手套，醫(yī)療用品要固定，以防交叉感染。每天按要求對環(huán)境及物體表面進(jìn)行清潔與消毒。

四、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的控制措施

1、微生物實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的監(jiān)測，一旦發(fā)現(xiàn)MRSA耐藥模式，立即通知患者所在臨床科室和院感科。

2、臨床科室接到檢驗(yàn)科報(bào)告后，立即報(bào)告科主任、護(hù)士長，并采取相應(yīng)的預(yù)防控制措施。

⑴立即將感染或定植患者隔離于單間或同種病原同室隔離。

⑵在患者病床床頭、病歷夾、病人一欄表上張貼隔離標(biāo)識（藍(lán)色為接觸隔離）。⑶盡量減少與MRSA感染或定植者接觸的醫(yī)務(wù)人員數(shù)量；最好限制每班診療患者為醫(yī)生、護(hù)士各一人，所有診療盡可能由他們完成，包括標(biāo)本的采集。

⑷嚴(yán)格執(zhí)行手衛(wèi)生，有可能接觸患者的傷口、潰爛面、黏膜、體液、引流液、分泌物、排泄物時(shí)，應(yīng)當(dāng)戴手套。

⑸近距離操作如吸痰、插管等戴防護(hù)鏡?？赡芪廴竟ぷ鞣r(shí)穿隔離衣。⑹對于非急診用儀器（如血壓計(jì)、聽診器、體溫表、輸液架）等應(yīng)盡量專用。不能專人專用的物品（如輪椅、擔(dān)架）每次使用后應(yīng)進(jìn)行消毒。接觸患者后的儀器設(shè)備（如拍片、心電圖）檢查完成后應(yīng)進(jìn)行消毒。

⑺MRSA感染或定植患者的病室，其清潔、消毒用品（抹布、拖布等）應(yīng)專室專用；對患者經(jīng)常接觸的物體、設(shè)施設(shè)備表面，每天清潔消毒不少于2次，被患者血液、體液污染時(shí)應(yīng)當(dāng)立即消毒。使用過的抹布、拖布必須消毒處理（500mg/L含氯消毒劑作用30分鐘）。

⑻加強(qiáng)醫(yī)療廢物管理，分類收集醫(yī)療廢物，利器放入利器盒，密閉運(yùn)送。⑼嚴(yán)格執(zhí)行抗菌藥物臨床使用的基本原則，切實(shí)落實(shí)抗菌藥物的分級管理等。

⑽患者在轉(zhuǎn)科、轉(zhuǎn)院之前要通知接診的科室和醫(yī)院，或開具放射、B超檢查單時(shí)，要注明多重耐藥菌感染，以便檢查科室采取防控措施。

⑾此類病人如去其他科室檢查，應(yīng)有工作人員陪同并向接收方說明使用接觸傳播預(yù)防控制措施，用后器械設(shè)備需清潔消毒。

⑿盡量限制探視人員，并囑探視者嚴(yán)格執(zhí)行洗手或衛(wèi)生手消毒。⒀選用密閉容器運(yùn)送患者標(biāo)本。⒁生活物品無特殊處理。

⒂感染者或攜帶者應(yīng)隔離至癥狀好轉(zhuǎn)、治愈或連續(xù)兩次標(biāo)本（每次間隔>24小時(shí)）培養(yǎng)均陰性，方可解除隔離。并對床單位消毒。

3、攜帶MRSA的手術(shù)醫(yī)生不得進(jìn)行手術(shù)，直至檢測轉(zhuǎn)為陰性。

4、院感科需及時(shí)到相關(guān)科室檢查督導(dǎo)耐甲氧西林金葡菌控制措施的落實(shí)情況，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)反饋、整改，保證耐甲氧西林金葡菌控制措施的有效落實(shí)。

五、參考文件

①衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于加強(qiáng)多重耐藥菌醫(yī)院感染控制工作的通知 衛(wèi)生部（2008）30號

②多重耐藥菌醫(yī)院感染預(yù)防與控制技術(shù)指南（試行）衛(wèi)生部（2011）5號 ③醫(yī)院隔離技術(shù)規(guī)范 WS/T 311-2009

第三篇：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐萬古霉素腸球菌醫(yī)院感染防控措施

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐萬古霉素腸球菌醫(yī)院感染防控措施

一、微生物室負(fù)責(zé)對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、耐萬古霉素腸球菌（VRE）的監(jiān)測，一旦發(fā)現(xiàn)MRSA或VRE耐藥模式，立即通知相應(yīng)患者所在臨床科室和醫(yī)院感染管理科。

二、臨床科室立即把該患者隔離于單間病房，進(jìn)行隔離診治、護(hù)理操作，并盡可能盡量集中進(jìn)行，減少與病人接觸次數(shù)。

三、在病床床頭和病歷本第一頁上夾上藍(lán)底版黃色MRSA或VRE字樣的卡片標(biāo)識。

四、醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生、消毒隔離、保潔與環(huán)境消毒同多重耐藥菌醫(yī)院感染防控措施中的手衛(wèi)生、消毒隔離、保潔與環(huán)境消毒措施。避免MRSA或VRE在科內(nèi)爆發(fā)流行。

五、主管醫(yī)生應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果及時(shí)使用MRSA或VRE的相應(yīng)最有效的抗菌藥物。

六、醫(yī)務(wù)處和藥學(xué)部要加強(qiáng)對抗菌藥物臨床合理應(yīng)用的督導(dǎo)管理，提高抗菌藥物臨床應(yīng)用管理質(zhì)量。

七、醫(yī)院感染管理科及時(shí)到相應(yīng)臨床科室督導(dǎo)檢查耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）或耐萬古霉素腸球菌（VRE）的控制措施的落實(shí)情況。發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)發(fā)出整改通知，并及時(shí)進(jìn)行效果評價(jià)。保證耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）或耐萬古霉素腸球菌（VRE）的控制措施的落實(shí)。

八、嚴(yán)格執(zhí)行手衛(wèi)生、環(huán)境清潔消毒、醫(yī)療廢物管理和職業(yè)防護(hù)、抗菌藥物合理使用等措施同多重耐藥菌防控措施。

第四篇：核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則3

附件3

核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對核酸擴(kuò)增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對核酸擴(kuò)增法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于核酸擴(kuò)增法檢測試劑的注冊技術(shù)審查，其他類核酸檢測試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。

三、基本要求

（一）基本原則

1.核酸擴(kuò)增類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和

— 23 — 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專用實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動(dòng)，以最大限度地防止實(shí)驗(yàn)過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。

3.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

4.核酸擴(kuò)增類檢測試劑的引物設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測設(shè)計(jì)的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。

5.企業(yè)使用新型原材料時(shí)，應(yīng)提供與通行原材料比對研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。

（二）原材料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。

1.脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為高效液相色譜（HPLC）純、PCR級，無DNase和RNase污染?！?0℃保存?！? 24 — 2.引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。

凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（PAGE）或HPLC級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。

應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計(jì)測定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物。-20℃保存。

3.探針

是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。

凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、-20℃保存。

4.DNA聚合酶

如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。-20℃保存。

5.尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG

— 25 — 在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。-20℃保存。

6.逆轉(zhuǎn)錄酶

具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性。—20℃保存。

（三）生產(chǎn)工藝

核酸擴(kuò)增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對電導(dǎo)率pH、等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制

（1）按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。

（2）以參考品/對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時(shí)進(jìn)行分裝和包裝。2.成品質(zhì)量控制

（1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測及注冊檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求?！? 26 —（2）產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。（3）以參考品/對照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。結(jié)果應(yīng)符合要求。（4）成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。

5．試劑批放行前，應(yīng)對需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。

四、名詞解釋

核酸擴(kuò)增法檢測試劑：核酸擴(kuò)增技術(shù)泛指以擴(kuò)增脫氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴(kuò)增法檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。

五、參考文獻(xiàn)

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

第五篇：地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年）

附件3

地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑

注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點(diǎn)突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現(xiàn)，重者以進(jìn)行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達(dá)10%以上，廣西更是達(dá)到了20%以上。

α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達(dá)的2個(gè)基因（α2和α1），基因的排列順序?yàn)?’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個(gè)α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個(gè)α基因同時(shí)缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個(gè)α1或α2基因發(fā)生點(diǎn)突變或少數(shù)幾個(gè)堿基的缺失。中國現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點(diǎn)突變。其中，6

種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377

T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。

α-地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α-地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個(gè)α-基因缺失或點(diǎn)突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素；（2）2個(gè)α-基因缺失或復(fù)合-α基因點(diǎn)突變，或點(diǎn)突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征；（3）3個(gè)α-基因缺失或復(fù)合α基因點(diǎn)突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb

H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb

H病。通常，--/αTα的非缺失型

Hb

H病較單純?nèi)笔虷b

H病（--/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb

H病患者，貧血程度較為嚴(yán)重；（4）4個(gè)α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb

Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個(gè)體一般無法存活到出生或分娩后半小時(shí)內(nèi)死亡。

β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點(diǎn)突變?yōu)橹鳎贁?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個(gè)成人期表達(dá)基因（β和δ），基因的排列順序?yàn)?’-δ-β-3’。根據(jù)β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報(bào)道84種β-珠蛋白基因點(diǎn)突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點(diǎn)突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：

c.79G>A，HBB：

c.316-197C>T和HBB：

c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學(xué)表型正常或臨界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r(shí)無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。

2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進(jìn)行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規(guī)定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。

另外，國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發(fā)省份實(shí)施地貧防控試點(diǎn)項(xiàng)目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計(jì)劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進(jìn)行血常規(guī)初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽性的夫婦進(jìn)行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進(jìn)行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結(jié)果，判定為高風(fēng)險(xiǎn)夫婦。對高風(fēng)險(xiǎn)夫婦進(jìn)行追蹤，及時(shí)了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時(shí)期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項(xiàng)目為相應(yīng)的地貧基因檢測。

綜上，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實(shí)際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。

結(jié)合該類產(chǎn)品在中國注冊的實(shí)際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知，本指導(dǎo)原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)闡述。針對其他預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充并做出相應(yīng)評價(jià)。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)（如：PCR-反向點(diǎn)雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對照品（質(zhì)控品）及企業(yè)參考品的研究資料。

1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖液等。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的選擇、制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

1.2

引物、探針

申請人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計(jì)多套引物探針以供篩選，針對待測位點(diǎn)的特異性等進(jìn)行評價(jià)，選擇最佳設(shè)計(jì)，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。

申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料，以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.對照品（質(zhì)控品）

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對照品（質(zhì)控品）來實(shí)現(xiàn)。陽性對照應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液?？瞻讓φ諡椴缓怂岬娜芤?。

如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗(yàn)原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應(yīng)體系均可報(bào)出核酸序列結(jié)果，均可對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。

對照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系或質(zhì)粒等。空白對照應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。

3.1

陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應(yīng)與待測樣本一致。應(yīng)至少包含所有檢測位點(diǎn)的雜合型樣本，同時(shí)盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.2

陰性參考品：應(yīng)包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本，同時(shí)應(yīng)盡量包含檢測范圍外其他檢測位點(diǎn)的樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點(diǎn)的雜合型樣本。

3.4

精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型，且在每一反應(yīng)體系均有分布。

目前，該類產(chǎn)品已有國家參考品，對于申報(bào)產(chǎn)品所聲稱的檢測位點(diǎn)，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國家參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)針對下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則。

每項(xiàng)性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進(jìn)行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應(yīng)對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗(yàn)證，并評價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。

2.檢測準(zhǔn)確性

建議采用若干份臨床樣本驗(yàn)證該類產(chǎn)品的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應(yīng)涵蓋野生型、所有檢測位點(diǎn)的雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.最低檢測限

該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪MDNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價(jià)建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有檢測位點(diǎn)的雜合突變型。應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組DNA濃度的對應(yīng)關(guān)系。

4.分析特異性

4.1

應(yīng)針對同源序列或檢測范圍外基因和位點(diǎn)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

4.2

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細(xì)胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。

干擾試驗(yàn)可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價(jià)干擾物質(zhì)對目標(biāo)序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評價(jià)。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價(jià)；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應(yīng)對每一反應(yīng)體系進(jìn)行精密度評價(jià)，并至少覆蓋代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。

精密度評價(jià)需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測輪次和試劑批次等。

5.2設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對室間重復(fù)性進(jìn)行評價(jià)。

5.3用于精密度評價(jià)的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有），申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。

（五）陽性判斷值確定資料

建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應(yīng)包括所有檢測位點(diǎn)的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。

如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應(yīng)說明理由。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報(bào)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時(shí)間等的研究。

實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)品性能評價(jià)，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

（七）臨床試驗(yàn)

應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途

1.1

臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

1.2

臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本

具有地貧癥狀和/或體征，或血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進(jìn)行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細(xì)胞性貧血或先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血等。

臨床試驗(yàn)所用樣本應(yīng)為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報(bào)產(chǎn)品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

1.3臨床試驗(yàn)方法

1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品

對于已批準(zhǔn)的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測性能。

1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品

1.3.2.1

如新突變位點(diǎn)的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R），且上述認(rèn)可基于充分的中國人群的臨床數(shù)據(jù)，則臨床試驗(yàn)可選擇Sanger基因測序（針對新的點(diǎn)突變）或臨床普遍使用的其他公認(rèn)方法（針對其他類型的新突變位點(diǎn)，如缺失）作為對比方法，評價(jià)新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點(diǎn)臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可不納入臨床方案和報(bào)告。

1.3.2.2

如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，則臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩個(gè)目的，新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能評價(jià)和臨床意義評價(jià)。新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能評價(jià)可參考1.3.2.1；新突變位點(diǎn)的臨床意義評價(jià)應(yīng)提交基于中國人群的充分的臨床證據(jù)，證明基因型與表型的關(guān)系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關(guān)系的臨床驗(yàn)證資料。

1.4最低樣本量和陽性例數(shù)

臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。

1.4.1

臨床檢測性能評價(jià)的樣本量估算

臨床檢測性能評價(jià)的樣本量估算可分為以下幾種情況。

對于常見突變位點(diǎn)，建議采用單組目標(biāo)值法分別估算每個(gè)突變位點(diǎn)臨床試驗(yàn)的最低樣本量，通過陽性符合率計(jì)算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計(jì)算所需陰性樣本的例數(shù)，同時(shí)考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。

對于罕見突變位點(diǎn)，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽性樣本則應(yīng)保證一定的例數(shù)。

對于極其罕見的、且有確切臨床證據(jù)證明其臨床意義的突變位點(diǎn)，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽性樣本的例數(shù)則應(yīng)結(jié)合臨床證據(jù)確定。

1.4.2

新位點(diǎn)臨床意義評價(jià)的樣本量估算

新位點(diǎn)臨床意義評價(jià)的樣本量估算，建議采用抽樣調(diào)查公式或其他合理方法進(jìn)行估算。

2.針對“地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估”和“胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷”預(yù)期用途

針對上述兩個(gè)預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)并進(jìn)行評價(jià)。

2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和人員

如申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，除滿足法規(guī)要求外，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)還應(yīng)取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)。臨床試驗(yàn)人員應(yīng)為經(jīng)過專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機(jī)構(gòu)應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》。

2.2

臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本

如預(yù)期用途為地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會和地貧高發(fā)地區(qū)相關(guān)政策確定。

如預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的胎兒。地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的確定可參考國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件。

臨床試驗(yàn)所用樣本應(yīng)為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。

2.3

最低樣本量和陽性例數(shù)

針對每種不同的預(yù)期用途，應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預(yù)期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。

3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計(jì)科學(xué)的臨床試驗(yàn)，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。

4.不同預(yù)期用途的通用要求

4.1

臨床試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析

4.1.1應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案或報(bào)告中明確申報(bào)產(chǎn)品、對比試劑和第三方試劑的試驗(yàn)方法。

4.1.2臨床試驗(yàn)病例總結(jié)表應(yīng)以列表方式表示，包括申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果、對比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測結(jié)果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。

4.1.3以交叉表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。

4.1.4

結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

4.2

臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由該實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

4.3臨床試驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。

目前，該類產(chǎn)品已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時(shí)應(yīng)提交連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)報(bào)告。目前，該產(chǎn)品已有國家參考品，產(chǎn)品檢驗(yàn)應(yīng)滿足國家參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對該類產(chǎn)品說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。

1.2介紹地貧相關(guān)的臨床背景信息及實(shí)驗(yàn)室診斷方法等，介紹被測靶標(biāo)（突變位點(diǎn)）的相關(guān)情況。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗(yàn)證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細(xì)信息。

3.【檢驗(yàn)原理】

3.1對試劑盒的被測靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、突變位點(diǎn)及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進(jìn)行詳細(xì)介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、對照品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進(jìn)行介紹。

3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機(jī)理進(jìn)行適當(dāng)介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運(yùn)送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運(yùn)送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。

7.2試劑配制方法和注意事項(xiàng)。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)控，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合對照品、樣本管檢測結(jié)果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

9.【檢驗(yàn)方法的局限性】

9.1申報(bào)產(chǎn)品僅對下述檢測類型xx進(jìn)行了驗(yàn)證。

9.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.2.2未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】簡述以下性能指標(biāo)：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應(yīng)驗(yàn)證：同源性序列等交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

10.4.2干擾物質(zhì)驗(yàn)證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

10.5對比試驗(yàn)研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

11.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。