第一篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

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酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。

三、基本要求

（一）基本原則

1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求?！? 2 — 2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。

3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

4.試劑在研制、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質(zhì)量控制 1.主要生物原料

與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生

— 3 — 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測。

（4）效價

效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（5）功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗：

（1）牛血清或羊血清

外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或— 4 — 沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥32mg/ml。

球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化鈉溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。

（2）牛血清白蛋白：

外 觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時，溶解時間應(yīng)≤15分鐘，pH值應(yīng)為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（3）酪蛋白：

應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（4）標(biāo)記用酶

應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材

— 5 — 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。

主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。

4.其他物料（1）酶標(biāo)板 ①外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性 采用合適的方法進(jìn)行檢驗。

一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計算CV值。CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。

（2）液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

（3）其他材料

包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?！? 6 — 5.企業(yè)質(zhì)控品

企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。

（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)

酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。

1.各種工作液的配制

酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。

各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。對于定量檢測試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。

應(yīng)對配制過程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的

— 7 — 功能性實驗及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測定。

2.包被酶標(biāo)反應(yīng)板

包被前應(yīng)對酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標(biāo)識。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。

選擇經(jīng)檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于2?8℃。

應(yīng)對包被過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監(jiān)控等。

3.分裝和包裝

樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于5%。

分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進(jìn)行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣

檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各— 8 — 組分，作號標(biāo)記、待檢。

（2）半成品檢驗

根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗。半成品檢驗，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

檢驗指標(biāo)一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。對于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時作37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.成品質(zhì)量控制

產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。

每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。

（1）成品檢驗

成品檢驗時，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家

— 9 — 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）穩(wěn)定性試驗

在批放行前，每一批試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

四、名詞解釋

酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和/或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和/或抗原的存在。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

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第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則(報批稿)

酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（報批稿）

2010-11-09 01:27

酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要原材料、生產(chǎn)工藝及 質(zhì)量控制注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（報批稿）

一、前言

本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范申請人對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料研究資料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究資料的準(zhǔn)備，并對產(chǎn)品質(zhì)量控制提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。

二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查，其它酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。

三、基本要求

（一）基本原則

1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。

3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

4.試劑在研制、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質(zhì)量控制 1.主要生物原料 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。

（3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測。

（4）效價

效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（5）功能性實驗

功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗：

（1）牛血清或羊血清

外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物 無菌試驗：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥32mg/ml。球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。

（2）牛血清白蛋白：

外 觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時，溶解時間應(yīng)≤15分鐘，pH值應(yīng)為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。

總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。

（3）酪蛋白：

應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（4）標(biāo)記用酶

應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。

主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更。化學(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。

4.其他物料（1）酶標(biāo)板 ①外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。

②吸附能力和精密性 采用合適的方法進(jìn)行檢驗。

一般用一定濃度的正常人IgG包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計算CV值。CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。

（2）液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

（3）其他材料

包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

5.企業(yè)質(zhì)控品

企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、hook效應(yīng)等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。

（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)

酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。1.各種工作液的配制

酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。

各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。對于定量檢測試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。

應(yīng)對配制過程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的功能性實驗及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測定。

2.包被酶標(biāo)反應(yīng)板

包被前應(yīng)對酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標(biāo)識。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。

選擇經(jīng)檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于2?8℃。

應(yīng)對包被過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監(jiān)控等。

3.分裝和包裝

樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于5%。

分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的SOP要求進(jìn)行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣

檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號標(biāo)記、待檢。

（2）半成品檢驗

根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗。半成品檢驗，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

檢驗指標(biāo)一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。對于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和校準(zhǔn)品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時作37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.成品質(zhì)量控制

產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。

每一批酶聯(lián)免疫診斷試劑報批批量應(yīng)至少為10000人份。（1）成品檢驗

成品檢驗時，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）穩(wěn)定性試驗

在批放行前，每一批試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

四、名詞解釋

酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和/或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和/或抗原的存在。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

第三篇：核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則3

附件3

核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對核酸擴(kuò)增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對核酸擴(kuò)增法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于核酸擴(kuò)增法檢測試劑的注冊技術(shù)審查，其他類核酸檢測試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。

三、基本要求

（一）基本原則

1.核酸擴(kuò)增類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和

— 23 — 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專用實驗室，實驗室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動，以最大限度地防止實驗過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。

3.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

4.核酸擴(kuò)增類檢測試劑的引物設(shè)計應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測設(shè)計的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。

5.企業(yè)使用新型原材料時，應(yīng)提供與通行原材料比對研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。

（二）原材料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。

1.脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為高效液相色譜（HPLC）純、PCR級，無DNase和RNase污染?！?0℃保存?！? 24 — 2.引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。

凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（PAGE）或HPLC級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。

應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物。-20℃保存。

3.探針

是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。

凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實，并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計進(jìn)行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、-20℃保存。

4.DNA聚合酶

如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時后仍保持50%活性。-20℃保存。

5.尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG

— 25 — 在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。-20℃保存。

6.逆轉(zhuǎn)錄酶

具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性?！?0℃保存。

（三）生產(chǎn)工藝

核酸擴(kuò)增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對電導(dǎo)率pH、等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制

（1）按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。

（2）以參考品/對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進(jìn)行分裝和包裝。2.成品質(zhì)量控制

（1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。— 26 —（2）產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。（3）以參考品/對照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗。結(jié)果應(yīng)符合要求。（4）成品檢驗的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。

5．試劑批放行前，應(yīng)對需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗。穩(wěn)定性試驗可采用加速破壞試驗。

四、名詞解釋

核酸擴(kuò)增法檢測試劑：核酸擴(kuò)增技術(shù)泛指以擴(kuò)增脫氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴(kuò)增法檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。

五、參考文獻(xiàn)

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

第四篇：孕酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件3 孕酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對孕酮檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對孕酮檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍 從方法學(xué)考慮，在本文中孕酮檢測試劑是指采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，以競爭法為基本原理，利用全自動、半自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，在醫(yī)學(xué)實驗室對人體樣本中孕酮的含量進(jìn)行體外定量分析的試劑。依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法修正案》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第30號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），孕酮檢測試劑管理類別為Ⅱ類醫(yī)療器械，分類編碼為6840。

本指導(dǎo)原則不適用于：

（一）單獨申請注冊的孕酮校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

（二）化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理之外的其他孕酮檢測試劑。

二、注冊申報材料要求 （一）綜述資料 孕酮是一種重要的孕激素，屬于類固醇激素，相對分子量 314.5，主要由卵巢黃體和妊娠期胎盤生成，是睪酮、雌激素及腎上腺皮質(zhì)激素的前體。正常男性和女性卵泡期產(chǎn)生的孕酮水平很低，分泌入血后主要結(jié)合于白蛋白和性激素結(jié)合蛋白在體內(nèi)進(jìn)行循環(huán)。孕酮水平與黃體的發(fā)育和萎縮有關(guān)。

孕酮的主要功能是使子宮為受精卵的著床做好準(zhǔn)備，并維持妊娠。在月經(jīng)周期的卵泡期，孕酮水平很低。排卵之后，由黃體產(chǎn)生的孕酮迅速升高，并在排卵后5—7天達(dá)到濃度最大值10ng/mL—20ng/mL，使子宮內(nèi)膜從增生狀態(tài)轉(zhuǎn)為分泌狀態(tài)。若未受孕，在月經(jīng)周期的最后4天黃體萎縮，孕酮濃度降低。若受孕，黃體不會凋落，繼續(xù)分泌孕酮，使孕酮保持在相當(dāng)于黃體中期的水平，并一直持續(xù)到妊娠的第六周。在懷孕期間，胎盤逐漸成為孕酮的主要來源，濃度從懷孕前3個月的10ng/mL—50ng/mL升高到7—9個月的50ng/mL—280ng/mL。臨床研究證明孕酮在非孕期女性體內(nèi)發(fā)揮著促進(jìn)排卵和維持黃體的正常功能。如果黃體產(chǎn)生的孕酮不足，可能說明黃體功能不足，而黃體功能不足與不孕及早期流產(chǎn)有關(guān)。

血中孕酮升高可見于以下情況：（1）觀察婦女排卵的時間及黃體酮的生成情況：在排卵的－1、0、+1天，孕酮含量成倍增加，提示為有排卵。（2）正常妊娠、雙胎和多胎妊娠時孕酮合成量明顯增加，血液中孕酮水平相對升高。（3）妊娠毒血癥、先兆子癇、葡萄胎及原發(fā)性高血壓時，孕酮含量也會升高。

血中孕酮含量降低見于以下情況：（1）先兆流產(chǎn)、宮外孕、早產(chǎn)、閉經(jīng)、不孕癥。（2）黃體功能不全、卵巢黃體發(fā)育不全時，孕酮含量相應(yīng)降低。（3）腎上腺、甲狀腺功能嚴(yán)重失調(diào)也可影響卵巢功能，使排卵發(fā)生障礙，孕酮含量也會相應(yīng)降低。

孕酮的檢測方法主要為酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫分析法是目前臨床檢測孕酮應(yīng)用較多的檢測方法。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性方面的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同方面進(jìn)行介紹，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）1.主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實驗驗證研究資料 檢測試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗資料。如抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗證。同時確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；

如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗報告，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。供貨商應(yīng)相對固定。

其他主要原材料的選擇及驗證資料，申請人應(yīng)詳述每一原材料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原材料作為主要原材料的依據(jù)，確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若為外購，應(yīng)提供外購方名稱并提交外購方出具的檢驗報告。

2.質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過程及實驗資料 3.校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。申請人應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008/ ISO17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)，以及不確定度等內(nèi)容。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示；

2.反應(yīng)原理介紹；

3.檢測方法的介紹：含樣本采集、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、測試步驟、結(jié)果計算等；

4.反應(yīng)體系研究：含樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等的研究資料；

5.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。應(yīng)當(dāng)對多批（至少3批）產(chǎn)品進(jìn)行性能評估。對于孕酮檢測試劑，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。

1.通過重復(fù)性和批間差考察精密度 1.1重復(fù)性 在重復(fù)性條件下，對濃度（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L的樣品分別重復(fù)測定10次，計算10次測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），根據(jù)公式（1）得出變異系數(shù)（CV），其測量結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%（儀器自動操作法）或不大于15%（手工操作法）。

CV=SD/×100%........................................（1）1.2批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。其測量結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.準(zhǔn)確度性能評估 按以下優(yōu)先順序選擇準(zhǔn)確度性能評估方法：

2.1相對偏差 2.1.1用可用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)/有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑（盒）進(jìn)行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

Bi =（Xi －T）/T………………………（2）式中：Xi—單次測試結(jié)果；

T—有證參考物質(zhì)標(biāo)示值或各濃度人源樣本定值；

Bi—單次相對偏差。

注：首選國家參考物質(zhì)，如無國家參考物質(zhì)可選用國際參考物質(zhì)。

2.1.2對企業(yè)參考品進(jìn)行檢測 用參考方法定值的企業(yè)參考品對試劑（盒）進(jìn)行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.2回收實驗 選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3—4份，在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標(biāo)液制備待回收分析樣本，加入體積不大于原體積的10%，制成2—3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進(jìn)行測定，通常對樣本進(jìn)行3次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進(jìn)行下述計算。

回收率應(yīng)在85%—115%范圍內(nèi)。用公式（3）計算回收率：

…………………………………（3）式中：R-回收率；

V-加入待測物標(biāo)準(zhǔn)液的體積；

V0-基礎(chǔ)樣本的體積 C-樣本加入待測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后的檢測濃度；

C0-基礎(chǔ)樣本的檢測濃度；

Cs-待測物標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。

2.3比對實驗 參考相關(guān)國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行準(zhǔn)確度評估。

用不少于40個覆蓋檢測濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，以申請人指定的試劑（盒）作為比對方法，每份樣品按待測試劑（盒）及比對試劑（盒）的操作方法分別檢測。線性回歸計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）、斜率及偏差，結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

3.檢出限性能評估 申請人需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。根據(jù)提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進(jìn)行測定，每份樣本測定5次。對測量結(jié)果按照大小進(jìn)行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為所提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

3.1低于申請人提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

3.2無高于3.18nmol/L的測量結(jié)果。

4.線性范圍性能評估 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度。其中，低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復(fù)測定最少2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r）。

5.特異性性能評估 推薦參考《WS/T416-2013 干擾實驗指南》或相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行特異性評估。孕酮的干擾物質(zhì)選取可參見表1，企業(yè)可在不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下根據(jù)實際情況選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行評估干擾程度。

5.1溶血（血紅蛋白）、脂血（甘油三酯）、黃疸（膽紅素）等干擾因素對檢測結(jié)果的影響；

5.2樣本中其他可能干擾試劑反應(yīng)的物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響；

5.3資料中所提到的干擾物質(zhì)，其干擾程度均不應(yīng)使用模糊的描述方式，而應(yīng)細(xì)化到干擾量，并提供相應(yīng)的實驗數(shù)據(jù)予以支持。

表 1 孕酮干擾物參考表 序號 干擾物質(zhì) 序號 干擾物質(zhì) 序號 干擾物質(zhì) 1 11-去氧皮質(zhì)酮 6 17β-雌二醇 11 克羅米酚 2 孕烯醇酮 7 雌酮 12 11-脫氧皮質(zhì)醇 3 皮質(zhì)醇 8 雌三醇 13 保泰松 4 皮質(zhì)酮 9 醛甾酮 14 睪酮 5 17a-羥基孕酮 10 丹那唑 15 強(qiáng)的松龍 評估方法：設(shè)置對照樣本組，使孕酮目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），重復(fù)測定（n≥7）并計算平均值（M）與標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。設(shè)置待測樣本組，分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮的目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），待測樣本測量結(jié)果的平均值（n≥2）應(yīng)在對照樣本組孕酮目標(biāo)濃度M±2SD范圍內(nèi)。其中，所添加潛在干擾物與含有孕酮的樣本之間體積比例為不大于1：9，對照樣本組的基質(zhì)盡可能與待測樣本組樣本的基質(zhì)一致。

6.校準(zhǔn)品及質(zhì)控品 參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的瓶間均勻性進(jìn)行評價。

7.其他需注意問題 7.1對于適用多個機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項中所列的所有適用機(jī)型的性能評估資料。

7.2如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料 應(yīng)提交驗證參考值（區(qū)間）所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。參考區(qū)間可參考文獻(xiàn)資料，應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，樣本來源應(yīng)考慮不同性別、生理周期等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。建議參考相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估文件開展評估。

孕酮參考區(qū)間的確定可以按性別（男性、女性）及女性的不同生理周期。如：非孕正常女性卵泡期、黃體期、絕經(jīng)后 ；

孕早期、中期、晚期等，以下列舉具有代表性的國內(nèi)外廠家參考區(qū)間僅供參考（見表2）。參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進(jìn)行相應(yīng)說明。

表2 各廠家參考區(qū)間篩選分組示例 廠家 篩選分組 A ng/mL B ng/mL C ng/mL D ng/mL 男性 0.27—1.22 0.2—1.4 0.026—2.75 0.1—2.0 卵泡期 0.15—1.39 0.2—1.5 0.4—2.3 0.2—2.40 排卵期 / 0.8—3.0 1.2—18.8 0.5—3.60 黃體期 3.33—25.55 1.7—27 / 6.0—20.5 絕經(jīng)期 ND—0.73 0.1—0.8 0.4—1.4 0.1—1.8 早期妊娠 0—12周 / / 15.8—46 / 中期妊娠13—28周 / / 15.6—74 / 晚期妊娠 29—40 周 / / 45—143 /（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑穩(wěn)定性研究主要包括注冊單元中所有組成部分的效期穩(wěn)定性及開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，如有需要可增加運輸穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性研究等。如試劑需要配制，還應(yīng)對配制后試劑的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。企業(yè)可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。常用的穩(wěn)定性研究方案為證實試劑在經(jīng)過被作用于指定條件后仍能證明主要性能指標(biāo)要求與未被作用于指定條件的試劑性能一致。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于效期穩(wěn)定性和開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期/開封效期后的研究資料。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進(jìn)行穩(wěn)定性驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的保存穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果分別在說明書《儲存條件及有效期》和《樣本要求》兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限若有相關(guān)文獻(xiàn)中已明確說明，亦可作為依據(jù)。

（七）臨床評價資料 此項目已經(jīng)列入《關(guān)于新修訂免于進(jìn)行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號）中免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑目錄。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申請人可按照《免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）要求進(jìn)行臨床評價。如無法按要求進(jìn)行臨床評價，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗。

對于通過臨床試驗方式進(jìn)行臨床評價時，臨床試驗資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》中臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。臨床試驗中的基本要求如下：

1.研究方法 選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能相近的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為對比試劑。

2.臨床試驗機(jī)構(gòu)的選擇 應(yīng)選擇不少于兩家（含兩家）已經(jīng)在備案系統(tǒng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗機(jī)構(gòu)，臨床試驗機(jī)構(gòu)實驗操作人員應(yīng)充分熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)、保養(yǎng)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他合理方法對額外的樣本類型進(jìn)行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應(yīng)當(dāng)按照試驗用體外診斷試劑的類別、風(fēng)險、預(yù)期用途等特性，組織制定科學(xué)、合理的臨床試驗方案。一般應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容：

3.1一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關(guān)信息、申請人相關(guān)信息等）；

3.2臨床試驗的背景資料；

3.3試驗?zāi)康模?/span>

3.4試驗設(shè)計；

3.5評價方法；

3.6統(tǒng)計方法；

3.7對臨床試驗方案修正的規(guī)定；

3.8臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）；

3.9數(shù)據(jù)處理與記錄保存; 3.10其他需要說明的內(nèi)容。

4.研究對象的選擇 4.1總體要求 選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群/在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，孕酮檢測樣本通常為血清，總體樣本數(shù)不少于200例，參考區(qū)間范圍外的樣本數(shù)不少于30%。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍。如果樣本類型包含血漿樣本，在上述樣本例數(shù)基礎(chǔ)上再增加100例與血清樣本的同源樣本比對，參考區(qū)間范圍外的樣本數(shù)不少于30%。建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的樣本，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風(fēng)濕因子陽性樣本及其他可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本等。

4.2非孕女性不同生理周期的考慮 非懷孕正常女性在不同的生理期，其孕酮的含量也不同，樣本選擇時，應(yīng)含有一定數(shù)量的各生理周期的樣本。如:卵泡期、排卵期、黃體期、絕經(jīng)期。

4.3懷孕女性不同孕期的考慮 選取一定數(shù)量的各孕期樣本，如：孕0—12周、孕13—28周、孕29—40周。

4.4樣本數(shù)量的考慮 申報的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗中進(jìn)行驗證。如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗；

變更抗體等主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

4.5樣本類型的考慮 血清應(yīng)明確存貯條件、可否凍融等。

血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、離心速度及時間要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

5.統(tǒng)計學(xué)分析 對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、Bland-Altman分析、線性回歸、配對t檢驗等。建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗證 對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，以便對臨床試驗結(jié)果進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說明理由。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫 根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

申請人或臨床試驗牽頭單位應(yīng)對各臨床試驗機(jī)構(gòu)的報告進(jìn)行匯總，并完成臨床試驗總結(jié)報告。臨床試驗報告的格式及內(nèi)容如下：

7.1首篇 首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應(yīng)包含該部分內(nèi)容。

7.1.1封面標(biāo)題 包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機(jī)構(gòu)（蓋章）、統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄 列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應(yīng)頁碼。

7.1.3研究摘要 對臨床試驗情況進(jìn)行簡單的介紹。

7.1.4試驗研究人員 列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責(zé)及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語 臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

7.2正文內(nèi)容和報告格式 7.2.1基本內(nèi)容 介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關(guān)的背景情況，包括：

7.2.1.1被測物的來源、生物及理化性質(zhì)；

7.2.1.2臨床預(yù)期使用目的，所針對的目標(biāo)適應(yīng)癥人群，目前針對該適應(yīng)癥所采用的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等；

7.2.1.3所采用的方法、原理、技術(shù)要求等；

7.2.1.4國內(nèi)外已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的應(yīng)用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機(jī)構(gòu)間的合作關(guān)系。

7.2.2研究目的 說明本臨床試驗所要達(dá)到的目的。

7.2.3試驗管理 對試驗管理結(jié)構(gòu)的描述。

管理結(jié)構(gòu)包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質(zhì)量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設(shè)計 7.2.4.1試驗總體設(shè)計及方案的描述 試驗的總體設(shè)計和方案的描述應(yīng)清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進(jìn)行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應(yīng)詳細(xì)敘述。應(yīng)包括：

7.2.4.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

7.2.4.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；

7.2.4.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

7.2.4.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn) 7.2.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇 試驗設(shè)計中應(yīng)包括以下內(nèi)容：

7.2.4.2.1樣本量及樣本量確定的依據(jù)。

7.2.4.2.2樣本選擇依據(jù)、入選標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)。

7.2.4.2.3樣本采集、保存、運輸方法等。

7.2.4.2.4對比試劑的確立。

7.2.4.2.5臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況。考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息。

7.2.4.2.6質(zhì)量控制方法。對質(zhì)量控制方法進(jìn)行簡要的闡述。試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

7.2.4.2.7臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法。對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

定量值相關(guān)性和一致性分析：用相關(guān)分析、Bland-Altman分析、線性分析、配對t檢驗等進(jìn)行定量值相關(guān)性和一致性分析，應(yīng)給出相關(guān)系數(shù)、95%一致性界限、回歸分析的擬合方程y=ax+b和R2、t值、p值、95%（99%）置信區(qū)間等統(tǒng)計結(jié)果，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

7.2.4.2.8具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

7.2.4.2.9試驗過程中方案的修改 一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應(yīng)說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進(jìn)行詳細(xì)闡述并論證其對整個研究結(jié)果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結(jié)果及分析 7.2.6討論和結(jié)論。對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

7.3有關(guān)臨床試驗中特別情況的說明 7.4附件 7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準(zhǔn)情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復(fù)核者簽字，臨床試驗機(jī)構(gòu)蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻(xiàn) 7.4.4主要研究者簡歷 7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料 申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求 產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》及《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。產(chǎn)品注冊單元劃分應(yīng)符合《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導(dǎo)原則》的要求。如已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則技術(shù)要求中不得低于其相關(guān)要求。

作為定量檢測試劑，孕酮檢測試劑的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、溯源性、準(zhǔn)確度、檢出限、線性范圍、重復(fù)性、批間差、特異性、穩(wěn)定性。各性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)清晰明了且具可操作性。

下面就技術(shù)要求中涉及的相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明 明確試劑的組成、組成成分及規(guī)格。

注1：如不同包裝規(guī)格適用不同的儀器型號，則應(yīng)在劃分說明中標(biāo)明。

注2：如試劑盒注冊單元中包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，校準(zhǔn)品質(zhì)控品可選購，但不能單獨銷售。包裝規(guī)格中可分別設(shè)計含校準(zhǔn)品/質(zhì)控品和不含校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的兩種包裝規(guī)格。

2.性能指標(biāo) 2.1外觀 外觀應(yīng)做如下要求：

2.1.1試劑盒各組分組成、性狀；

2.1.2試劑盒內(nèi)外包裝完整，文字符號標(biāo)識清晰。

2.2溯源性 應(yīng)根據(jù)GB/T21415及有關(guān)規(guī)定提供試劑盒校準(zhǔn)品的來源、賦值過程以及不確定度等內(nèi)容。

2.3檢出限 應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.4線性范圍 應(yīng)規(guī)定線性范圍，在所規(guī)定的線性范圍內(nèi)，試劑盒相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)≥0.9900.2.5 重復(fù)性 使用同一批試劑盒測試同一份樣本，其測試結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%。

2.6批間差 用三批試劑盒測試同一份樣本，其測試結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.7 準(zhǔn)確度 應(yīng)規(guī)定準(zhǔn)確度要求。

注：按相對偏差、比對實驗、回收實驗優(yōu)先順序。

2.8特異性 分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%，潛在干擾物濃度符合企業(yè)規(guī)定要求），各個樣本測量結(jié)果的均值應(yīng)在目標(biāo)濃度平均值（M）±2標(biāo)準(zhǔn)差（SD）范圍內(nèi)。

2.9穩(wěn)定性 根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇以下方法進(jìn)行驗證。

2.9.1應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品有效期，取到效期后一定時間內(nèi)的樣品檢測試劑檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性應(yīng)符合規(guī)定要求。

2.9.2根據(jù)所聲稱的熱穩(wěn)定性條件取有效期內(nèi)的試劑盒進(jìn)行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性，特異性，結(jié)果應(yīng)符合要求。

3.檢驗方法 3.1外觀 目測檢查，應(yīng)符合2.1的要求。

3.2溯源性 應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量及有校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》要求提供試劑盒校準(zhǔn)品的來源及溯源的賦值過程和不確定度的內(nèi)容2.2的要求。

3.3檢出限 需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。根據(jù)所提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進(jìn)行測定，每份樣本測定5次。對測量結(jié)果按照大小進(jìn)行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

3.3.1低于提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

3.3.2無高于3.18nmol/L的測量結(jié)果。

3.4線性范圍 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復(fù)測定最少2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r），所得結(jié)果應(yīng)符合2.4的要求。

3.5重復(fù)性 使用同一批號試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算10次測量濃度結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.5的要求。

3.6批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.6的要求。

3.7準(zhǔn)確度 方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.7的要求。

3.8特異性 方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.8的要求。

3.9穩(wěn)定性 3.9.1取到效期后一定時間內(nèi)的產(chǎn)品，按照檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性檢測方法進(jìn)行檢測，應(yīng)符合2.9.1的要求。

3.9.2熱穩(wěn)定性 根據(jù)所聲稱的熱穩(wěn)定性條件取有效期內(nèi)的試劑盒進(jìn)行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性，特異性，應(yīng)符合2.9.2的要求。

如注冊單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，其性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)當(dāng)包括準(zhǔn)確度、均勻性檢驗方法的詳細(xì)描述。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告 根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行注冊檢測。承接注冊檢測的機(jī)構(gòu)在出具檢測報告的同時，應(yīng)出具相應(yīng)的預(yù)評價意見，預(yù)評價意見在提交注冊資料時應(yīng)隨注冊檢測資料時一并提交。

（十一）產(chǎn)品說明書 產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）和《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，以申報產(chǎn)品為基礎(chǔ)，以研究結(jié)果為依據(jù)，對孕酮測定試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】 1.1通用名稱：試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：孕酮測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。名稱中不應(yīng)當(dāng)出現(xiàn)定性/定量等內(nèi)容。

1.2英文名稱（適用進(jìn)口產(chǎn)品）。如不適用，可刪除。

2．【包裝規(guī)格】 2.1應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致；

2.2應(yīng)能清晰地描述出試劑盒的構(gòu)成，不得出現(xiàn)試劑盒的組成成分與包裝規(guī)格中描述不一致的情況。

2.3應(yīng)注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××mL。

2.4如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，則應(yīng)同時明確適用機(jī)型。

2.5單一包裝規(guī)格，可以不加標(biāo)點符號；

多個包裝規(guī)格，按照分隔層次分別適用頓號、逗號、分號進(jìn)行區(qū)分，以句號結(jié)束。不得采用列表形式進(jìn)行描述。

3.【預(yù)期用途】 3.1第一段說明試劑盒用于體外定量測定血清或血漿中的孕酮的含量。

3.2第二段應(yīng)強(qiáng)調(diào)臨床適應(yīng)癥（可使用不同的描述方式），參考（一）綜述資料部分。

4.【檢驗原理】 應(yīng)詳細(xì)闡明試劑的工作原理，例如采用基于磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的競爭法反應(yīng)原理為：樣本中的孕酮和磁微粒包被的孕酮抗原競爭與吖啶酯標(biāo)記的抗體結(jié)合，樣本中的孕酮越多，吖啶酯標(biāo)記的抗體與固相磁珠包被的孕酮抗原結(jié)合的越少，樣本中的孕酮含量與光量子數(shù)成反比。

5.【主要組成成分】 5.1說明試劑盒包含組分的名稱信息，如果對于正確的操作或使用者理解其用途很重要，應(yīng)詳細(xì)說明。對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品也應(yīng)對主要組成成分及生物學(xué)來源進(jìn)行相應(yīng)說明，校準(zhǔn)品需注明其定值及溯源性。溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號。

如：校準(zhǔn)品：校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09199。

質(zhì)控品需注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6．【儲存條件及有效期】 6.1對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。如試劑需要配制，則應(yīng)對配制后的試劑的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。

6.2保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。小于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以日或小時為單位，大于或等于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以月為單位。

6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進(jìn)行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.5生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期（可見標(biāo)簽）。

7.【適用機(jī)型】 注明所適用的儀器類型，應(yīng)細(xì)化到型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以指導(dǎo)用戶操作。

如適用儀器為酶標(biāo)儀則需給出對酶標(biāo)儀配置的要求，如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號，避免“系列”。

8.【樣本要求】 　 應(yīng)在以下幾方面進(jìn)行說明：

8.1適用的樣本類型。

8.2在樣本收集過程中的特別注意事項。

8.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護(hù)劑等。

8.4已知的干擾物。

8.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法。

9.【檢驗方法】 詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序。

9.2校準(zhǔn)程序（如有）：應(yīng)說明校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、推薦的校準(zhǔn)周期，以及何種情況須重新校準(zhǔn)。

9.3質(zhì)量控制程序：應(yīng)說明質(zhì)控品的使用方法、注意事項、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.4試驗結(jié)果的計算或讀取，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。

10.【參考區(qū)間】 簡要參考區(qū)間的確定方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及孕期等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

應(yīng)與資料（五）參考區(qū)間確定性資料數(shù)據(jù)一致。

11．【檢驗結(jié)果的解釋】 應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。

說明試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮。

說明在何種情況下應(yīng)對樣本進(jìn)行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。

12.【檢驗方法的局限性】 明確常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，企業(yè)可根據(jù)自身情況對特殊干擾物進(jìn)行說明，并注明可接受的最高限值，不應(yīng)使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。

試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)，為達(dá)到診斷目的，此檢測結(jié)果要與臨床檢查、病史和其他的檢查結(jié)果結(jié)合適用。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 與技術(shù)要求中主要性能指標(biāo)保持一致，孕酮產(chǎn)品主要性能指標(biāo)可包含：

13.1檢出限；

13.2線性范圍；

13.3重復(fù)性；

13.4準(zhǔn)確度；

13.5特異性。

14.【注意事項】 14.1必要內(nèi)容，如：“本品僅用于體外診斷”。

14.2如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。說明不同分析系統(tǒng)間的檢測結(jié)果可能存在的差異。

說明對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.3說明檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書提供的操作步驟及相關(guān)實驗室規(guī)范要求進(jìn)行操作，否則可能對結(jié)果造成的影響。

14.4其他需要說明的注意事項。

15.【標(biāo)識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。可參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：YY/T0466.1—2016。

16.【參考文獻(xiàn)】 注明引用參考文獻(xiàn)，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

17.【基本信息】 17.1境內(nèi)體外診斷試劑 17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進(jìn)口體外診斷試劑 按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】 應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】 應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點 （一）關(guān)注檢驗報告中檢測結(jié)果的報告單位，孕酮的結(jié)果報告單位分為兩種：ng/mL和nmol/L兩個單位的轉(zhuǎn)換公式為。ng/mL×3.18=nmol/L。

（二）關(guān)注產(chǎn)品技術(shù)要求及說明書中性能指標(biāo)的一致性。

（三）關(guān)注臨床試驗所采用的樣本類型、樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（四）由于孕酮在不同時期的參考范圍不同，因此需關(guān)注臨床評價資料中是否涵蓋了不同時期的臨床數(shù)據(jù)，并重點關(guān)注參考范圍研究資料。

（五）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)、抗干擾能力等描述應(yīng)分別與臨床評價資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考范圍研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

四、名詞解釋 （一）化學(xué)發(fā)光免疫分析法。化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光的強(qiáng)度來確定物質(zhì)含量的分析方法?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用化學(xué)發(fā)光相關(guān)的物質(zhì)標(biāo)記抗體或抗原，與待測的抗原或抗體反應(yīng)后，經(jīng)過分離游離態(tài)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，加入化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的其他相關(guān)物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，進(jìn)行抗原或抗體的定量或定性檢測。

（二）準(zhǔn)確度（Accuracy）。一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

（三）分析特異性（Analytical Specificity）。測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。

（四）線性（Linearity）。在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

（五）精密度（Precision）。在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

（六）參考物質(zhì)（Reference Material）。具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了特性，用于校準(zhǔn)測量裝置、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)。對于該項目，指國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、可溯源至IFCC糖化血紅蛋白參考方法或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、可溯源至NGSP參考方法或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

五、指導(dǎo)原則編寫單位和人員 吉林省食品藥品監(jiān)督管理局。

第五篇：CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年）

附件2

CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑

注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

藥物代謝酶在藥物體內(nèi)代謝過程中起著重要作用，其活性強(qiáng)弱是藥物代謝速率的重要影響因素，直接決定了藥物作用的強(qiáng)度和持久性。人體內(nèi)的藥物代謝酶主要有細(xì)胞色素P450（CYP450）同工酶和N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（NAT）等。CYP2C19酶是一種重要的CYP450同工酶，臨床以CYP2C19酶為主要代謝酶的藥物包括抗血小板藥物（如：氯吡格雷）和質(zhì)子泵抑制劑等。氯吡格雷是一種抗血小板藥物，廣泛用于：急性冠脈綜合征（ACS）患者，包括非ST段抬高性ACS（不穩(wěn)定性心絞痛UA或非Q波心肌梗死）和ST段抬高性心肌梗死（NSTEMI）患者，其中，非ST段抬高性ACS包括經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)后置入支架的患者；外周動脈性疾病患者；近期心肌梗死或近期缺血性卒中患者。氯吡格雷作為一種前體藥物，本身并無藥理活性，主要經(jīng)CYP2C19酶代謝活化，產(chǎn)生活性代謝產(chǎn)物，后者與血小板表面的P2Y12受體不可逆結(jié)合，抑制血小板聚集，干擾ADP介導(dǎo)的血小板活化，發(fā)揮抗血小板效應(yīng)。

CYP2C19酶的編碼基因為CYP2C19基因，位于人類10號染色體上。CYP2C19基因含有42個等位基因，CYP2C19*1為野生型等位基因，其編碼的酶具有正常活性。CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）和CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）編碼的CYP2C19酶活性降低，是中國人群中存在的2種主要的等位基因，在中國人群的發(fā)生頻率分別為23.1%～35%和2%～7%。CYP2C19*17（rs12248560,c.-806C>T）編碼的CYP2C19酶活性增強(qiáng)，在中國人群的發(fā)生頻率約為0.5%～4%。除CYP2C19*2/*3/*17之外，可能影響CYP2C19酶活性的CYP2C19等位基因還包括CYP2C19*4～CYP2C19*8等，但這些等位基因在中國人群的發(fā)生頻率低，其功能與臨床意義有待進(jìn)一步研究。

CYP2C19基因的遺傳變異導(dǎo)致CYP2C19酶活性的個體差異，使人群出現(xiàn)超快代謝者（UM）、快代謝者（EM）、中間代謝者（IM）和慢代謝者（PM）4種表型。CYP2C19

UM患者應(yīng)用常規(guī)劑量的氯吡格雷后體內(nèi)生成的活性代謝產(chǎn)物增多，對血小板的抑制作用升高，抗血小板功能增強(qiáng)，出血風(fēng)險增大。而CYP2C19

PM患者應(yīng)用常規(guī)劑量的氯吡格雷后體內(nèi)生成的活性代謝產(chǎn)物減少，對血小板的抑制作用下降，抗血小板功能減弱，血栓風(fēng)險增大。UM個體的基因型可為CYP2C19*17/*17純合型或CYP2C19*1/*17雜合型；EM個體的基因型可為CYP2C19*1/*1純合型；IM個體的基因型可為CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*17或CYP2C19*3/*17雜合型；PM個體的基因型可為CYP2C19*2/*3、CYP2C19*2/*2和CYP2C19*3/*3雜合型或純合型。

通過CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測，可將服藥人群分為上述4類氯吡格雷代謝患者，從而用于氯吡格雷的用藥指導(dǎo)。美國FDA在氯吡格雷藥物說明書中建議：對于CYP2C19

PM患者，可考慮使用其他血小板P2Y12抑制劑。遺傳藥理學(xué)知識庫以及臨床遺傳藥理學(xué)實施聯(lián)盟（CPIC）發(fā)布的CYP2C19基因型和氯吡格雷用藥指導(dǎo)文件建議：對于CYP2C19

PM患者和IM患者，可選用其它抗血小板藥物（如：普拉格雷或替格瑞洛）進(jìn)行治療。2015年，原國家衛(wèi)生計生委發(fā)布的《藥物代謝酶和藥物作用靶點基因檢測技術(shù)指南（試行）》也建議：對于CYP2C19

PM患者的抗血小板治療，可增加氯吡格雷的劑量或選用其他不經(jīng)CYP2C19代謝的抗血小板藥物（如替格瑞洛）等。

然而，對于哪些氯吡格雷服藥人群需進(jìn)行CYP2C19基因型檢測，國內(nèi)外尚無統(tǒng)一意見。2013年發(fā)布的《抗血小板治療中國專家共識》建議：CYP2C19基因型檢測臨床應(yīng)用價值有限，不推薦常規(guī)進(jìn)行。CPIC在隨后發(fā)布的CYP2C19基因型和氯吡格雷用藥指導(dǎo)文件中建議：基于CYP2C19基因型的氯吡格雷抗血小板治療主要用于進(jìn)行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療的急性冠脈綜合征患者（簡稱為ACS/PCI患者），尚無證據(jù)表明CYP2C19基因型可用于指導(dǎo)氯吡格雷在其他患者中的抗血小板治療。2014年發(fā)布的《抗血小板藥物治療反應(yīng)多樣性臨床檢測和處理的中國專家建議》建議：不推薦常規(guī)進(jìn)行CYP2C19基因型檢測，僅對PCI術(shù)后血栓高危、且計劃調(diào)整P2Y12抑制劑治療方案的患者，推薦進(jìn)行血小板功能檢測和CYP2C19基因型檢測。2017年發(fā)布的《基因多態(tài)性與抗栓藥物臨床應(yīng)用專家建議》建議：CYP2C19基因型檢測主要對缺血高風(fēng)險/出血高風(fēng)險患者選用P2Y12抑制劑有參考價值。綜合考慮上述意見并結(jié)合中國實際情況，建議將本指導(dǎo)原則的預(yù)期適用人群限定為：

正在服用或?qū)⒁寐冗粮窭走M(jìn)行抗血小板治療的冠心病患者，主要為急性冠脈綜合征（ACS）且進(jìn)行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）的患者（ACS/PCI患者）、PCI術(shù)后血栓高危且計劃調(diào)整P2Y12抑制劑治療方案的患者、缺血高風(fēng)險或出血高風(fēng)險患者等。其中，PCI術(shù)后血栓高危患者以及缺血高風(fēng)險/出血高風(fēng)險患者的人群限定可參考相關(guān)指南。

本指導(dǎo)原則所述CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑是指：利用分子生物學(xué)檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等，以CYP2C19基因特定序列為檢測靶標(biāo)，對接受氯吡格雷治療患者的外周靜脈全血或口腔拭子等樣本基因組DNA中的CYP2C19基因多態(tài)性進(jìn)行體外定性檢測的試劑，用于氯吡格雷的用藥指導(dǎo)。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針PCR方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則僅對用于氯吡格雷用藥指導(dǎo)的CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑的相關(guān)要求進(jìn)行了說明，由于CYP2C19參與了多種不同藥物的代謝，對用于其他藥物用藥指導(dǎo)的CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評價和驗證。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗原理、最低檢測限及被測靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點）等方面詳細(xì)說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。除此之外，還應(yīng)說明被測靶標(biāo)純合型和雜合型在中國人群的發(fā)生頻率。

若被測靶標(biāo)為新的多態(tài)性位點，申請人還應(yīng)提交支持資料，以證明：1.攜帶新位點等位基因所編碼的CYP2C19酶對氯吡格雷具有預(yù)期的代謝活性；2.攜帶新位點等位基因的患者，其血小板功能具有預(yù)期的差異；3.接受氯吡格雷治療且攜帶新位點等位基因的患者表現(xiàn)出預(yù)期的主要不良心血管事件；4.根據(jù)基因型調(diào)整抗血小板治療方案后，攜帶新位點等位基因的患者預(yù)后獲得改善。上述資料應(yīng)為體內(nèi)臨床試驗數(shù)據(jù)，如：在預(yù)期適用人群體內(nèi)進(jìn)行的酶速率研究試驗，基因型與預(yù)期適用人群的主要不良心血管事件關(guān)聯(lián)試驗，基因型導(dǎo)向的抗血小板治療試驗等。上述資料必須包括基于中國人群的充分的臨床數(shù)據(jù)。如新位點可用于氯吡格雷用藥指導(dǎo)的結(jié)論已獲得行業(yè)認(rèn)可，應(yīng)同時提交證明其獲得行業(yè)認(rèn)可的支持資料。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品及企業(yè)參考品的研究資料。

1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTP、反應(yīng)緩沖液等。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的選擇、制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究資料。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗證資料。

1.2

引物、探針

本文所述CYP2C19基因多態(tài)性檢測一般針對等位基因CYP2C19*1、CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17。申請人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計兩套或多套引物探針以供篩選，針對待測位點的檢測靈敏度和特異性等進(jìn)行評價，選擇最佳設(shè)計，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。同時應(yīng)針對引物、探針核酸序列及檢測靶序列進(jìn)行同源性比對，如有同源序列應(yīng)著重評價是否會有交叉反應(yīng)。

申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗等，并依據(jù)評價結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3酶

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑可能涉及到的酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進(jìn)行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧三磷酸核苷（dNTP）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.質(zhì)控品

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒質(zhì)控品來實現(xiàn)。

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑的質(zhì)控品可分別設(shè)置野生型、雜合型及純合突變型DNA樣品（至少包含常見的多態(tài)性位點），同時設(shè)置不含待測靶序列的空白質(zhì)控品用于交叉污染的質(zhì)控；亦可直接采用常見多態(tài)性位點的雜合型樣品及空白質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制。

對于此類產(chǎn)品，一般情況下，反應(yīng)體系中野生型序列和突變型序列均有陽性反應(yīng)，可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則試劑盒中可不另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對照；否則，應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對照。

質(zhì)控體系應(yīng)能夠?qū)z測全過程進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，包括試劑及儀器性能、可能的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染等因素造成的假陰性或假陽性結(jié)果。質(zhì)控品可采用質(zhì)?；蚺R床樣本的核酸提取液等。空白質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)針對質(zhì)控品原料選擇、制備、定值過程等提供詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)，并對質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品等。申請人應(yīng)提交有關(guān)企業(yè)參考品原料選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗標(biāo)準(zhǔn)的研究資料，包括所用到的參考方法等。

3.1陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸提取液，樣本類型與待測樣本一致。應(yīng)至少包含野生型和所有多態(tài)性位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，需要時也可采用細(xì)胞系代替。

3.2陰性參考品：應(yīng)考慮檢測特異性的評價，納入同源序列交叉反應(yīng)樣本、干擾樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸提取液，至少包含所有多態(tài)性位點的雜合型樣本。

3.4精密度參考品應(yīng)至少包括所有多態(tài)性位點的低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸提取液。

如CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑已有國家參考品，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國家參考品要求。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTP濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

反應(yīng)體系研究指最佳反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集預(yù)處理、樣本保存、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟（如有）、PCR反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)針對下述各項分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)）、試驗可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結(jié)論等。有關(guān)背景信息也應(yīng)在資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號等。分析性能評估的實驗方法可以參考相關(guān)國內(nèi)或國外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

每項性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型也可采用細(xì)胞系等。

如產(chǎn)品適用樣本類型不止一種，申請人應(yīng)針對不同樣本類型分別完成性能評估。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進(jìn)行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的核酸提取/純化方法的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑的要求，提供詳細(xì)的評價資料。

2.檢測準(zhǔn)確性

建議采用若干份臨床樣本驗證CYP2C19基因多態(tài)性試劑的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與產(chǎn)品適用范圍一致；樣本應(yīng)涵蓋野生型和所有多態(tài)性位點的雜合突變、純合突變情況，并包含不同基因組DNA濃度。對于某些基因型樣本較為稀有的情況，亦可采用細(xì)胞系代替。

3.檢測限和可報告范圍

CYP2C19基因多態(tài)性檢測試劑的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)基因的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有多態(tài)性位點的雜合突變型。

可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度，即為最低檢測限。系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可根據(jù)各濃度梯度檢測結(jié)果直接判定，也可通過概率計算或其他適當(dāng)方法進(jìn)行測算。

同時，申請人亦應(yīng)評價CYP2C19基因多態(tài)性試劑可準(zhǔn)確檢出的人基因組DNA濃度上限，即適當(dāng)檢出率水平下的最高人基因組DNA濃度。

4.分析特異性

4.1

應(yīng)針對同源性序列（例如CYP2C19的其他突變序列、CYP2C9基因序列等）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗證資料。

4.2

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗研究。干擾物的選擇與所用樣本類型有關(guān)，例如：全血樣本，內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑、常用藥物等；對于口腔拭子樣本，干擾物需考慮全血、口腔定植菌以及口腔可能接觸到的抗菌漱口液、牙膏、食物、藥物、煙草等。

干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價干擾物質(zhì)對目標(biāo)基因檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗，試驗操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等樣本處理步驟。樣本應(yīng)至少涵蓋所有多態(tài)性位點的雜合突變型。

精密度評價需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗證，除檢測試劑（包括核酸提取/純化組分）本身外，還包括分析儀、操作者、地點、時間、檢測輪次、試劑批次等。

5.2設(shè)定合理的精密度評價周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實驗室進(jìn)行重復(fù)實驗以對室間重復(fù)性進(jìn)行評價。

5.3用于精密度評價的臨床樣本應(yīng)根據(jù)可報告范圍的基因組DNA濃度至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為檢測成功率等，申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。

精密度評價資料應(yīng)詳述試驗設(shè)計、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析及試驗結(jié)果，列出有關(guān)試劑、儀器、實驗室、人員、樣本的相關(guān)信息。

（五）陽性判斷值確定資料

對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的檢測準(zhǔn)確性的臨界值（Cut-off）。建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，涵蓋野生型和所有多態(tài)性位點的突變型，采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行研究。相關(guān)資料中應(yīng)詳述試驗方案、樣本來源、樣本量、樣本入組標(biāo)準(zhǔn)及試驗結(jié)果等。

應(yīng)針對不同樣本類型（如有）分別進(jìn)行陽性判斷值研究，明確是否有差異。

如果試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應(yīng)說明理由。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件、保存時間等方面的研究，如果包括多種樣本類型，則需分別完成相關(guān)研究。

申報產(chǎn)品實時穩(wěn)定性研究中，應(yīng)采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進(jìn)行產(chǎn)品性能評價，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

樣本穩(wěn)定性研究中，如核酸提取液不一定立即進(jìn)行檢測，則還需對核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

申請人應(yīng)提交有關(guān)穩(wěn)定性研究方案的確定依據(jù)、具體的試驗方法及詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)、結(jié)論。

（七）臨床試驗

應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，下面僅說明本類試劑臨床試驗中應(yīng)關(guān)注的重點問題。

1.臨床試驗機(jī)構(gòu)

申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于3家（含3家）臨床試驗機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)規(guī)定開展臨床試驗。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素選擇臨床試驗機(jī)構(gòu)。

2.臨床試驗人群

正在服用或?qū)⒁寐冗粮窭走M(jìn)行抗血小板治療的冠心病患者，主要為急性冠脈綜合征（ACS）且進(jìn)行經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）的患者（ACS/PCI患者）、PCI術(shù)后血栓高危且計劃調(diào)整P2Y12抑制劑治療方案的患者、缺血高風(fēng)險或出血高風(fēng)險患者等。其中，PCI術(shù)后血栓高危患者以及缺血高風(fēng)險/出血高風(fēng)險患者的人群限定可參考相關(guān)指南。

3.臨床樣本

應(yīng)為臨床原始樣本，如靜脈抗凝全血等，不應(yīng)直接采用提取的基因組DNA進(jìn)行試驗。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)同時滿足申報產(chǎn)品說明書以及對比試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

4.臨床試驗樣本量

如申報產(chǎn)品同時適用于靜脈全血或口腔拭子等不同基質(zhì)的樣本類型，則每種樣本類型的例數(shù)應(yīng)分別滿足法規(guī)要求。

5.臨床檢測準(zhǔn)確性驗證

5.1

對比試劑

5.1.1已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

對于已批準(zhǔn)的CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）、CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）以及CYP2C19*17（rs12248560,c.-806C>T）多態(tài)性位點，可選擇已上市同類試劑作為對比試劑。

5.1.2

無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

對于新的多態(tài)性位點，可選擇基因測序作為對比方法。

5.1.3基因測序

應(yīng)提交臨床試驗機(jī)構(gòu)和測序機(jī)構(gòu)簽章的委托測序協(xié)議。應(yīng)對選用的測序方法做詳細(xì)介紹，應(yīng)提供以下關(guān)于測序的詳細(xì)試驗資料，該部分資料需由臨床試驗機(jī)構(gòu)簽章。

5.1.3.1測序原理、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

5.1.3.2測序方法所用引物信息，如核酸序列、分子量、純度、功能性實驗等資料。引物設(shè)計應(yīng)涵蓋申報產(chǎn)品擴(kuò)增的被測靶標(biāo)。

5.1.3.3

測序方法的性能驗證，尤其是最低檢測限的確認(rèn)，建議將所選測序方法與申報產(chǎn)品的性能進(jìn)行比對分析。

5.1.3.4

測序方法應(yīng)建立合理的陽性和陰性質(zhì)控，以對臨床樣本的檢測結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

5.1.3.5

提交有代表性的樣本測序圖譜及結(jié)果分析資料。

6.氯吡格雷指導(dǎo)用藥臨床有效性的驗證

6.1

已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

已批準(zhǔn)的CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）、CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）以及CYP2C19*17（rs12248560,c.-806C>T）多態(tài)性位點，無需進(jìn)行該部分驗證。

6.2

無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

6.2.1如新多態(tài)性位點用于氯吡格雷用藥指導(dǎo)已獲行業(yè)認(rèn)可（包括：CPIC、國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R、相關(guān)藥物說明書以及臨床應(yīng)用等的認(rèn)可），且有充分的中國人群的體內(nèi)臨床數(shù)據(jù)，無需進(jìn)行該部分驗證。

6.2.2如新多態(tài)性位點用于氯吡格雷用藥指導(dǎo)未獲行業(yè)認(rèn)可，應(yīng)提交基于中國人群的充分的體內(nèi)臨床數(shù)據(jù)，包括但不限于：

6.2.2.1新的多態(tài)性位點等位基因編碼的CYP2C19酶對氯吡格雷的代謝動力學(xué)驗證資料。

6.2.2.2血小板功能檢測。比較不同基因型患者血小板功能的差異。

6.2.2.3基因型與主要不良心血管事件關(guān)聯(lián)性的體內(nèi)臨床試驗。

6.2.2.4基因型可指導(dǎo)氯吡格雷用藥的有效性證據(jù)。

6.2.3

需要強(qiáng)調(diào)的是，對于6.2所述申報產(chǎn)品（包括6.2.1和6.2.2），申請人應(yīng)在臨床試驗資料部分提交聲稱的新多態(tài)性位點已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)資料以及基于中國人群的充分的體內(nèi)臨床數(shù)據(jù)等，以證明申報產(chǎn)品可指導(dǎo)氯吡格雷用藥。

7.臨床試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析

7.1應(yīng)在臨床試驗方案或報告中描述申報產(chǎn)品和對比試劑/方法的試驗方法。

7.2臨床試驗原始數(shù)據(jù)應(yīng)以列表方式表示，包括申報產(chǎn)品的結(jié)果、對比試劑/方法的結(jié)果、臨床診斷、年齡、性別以及是否進(jìn)行PCI等。

7.3應(yīng)總結(jié)野生型、各多態(tài)性位點雜合型和純合突變型的例數(shù)，以交叉四格表分別總結(jié)兩種試劑對各多態(tài)性位點的定性檢測結(jié)果，并分別計算各多態(tài)性位點基因型的陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%置信區(qū)間，對定性結(jié)果分別進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗，以驗證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。

7.4

結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

8.臨床試驗方案

各臨床試驗機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程。

試驗方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結(jié)果判定時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機(jī)構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，申報產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

9.臨床試驗報告

應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。

如果申報產(chǎn)品已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應(yīng)提交連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的檢驗報告。如有國家標(biāo)準(zhǔn)品/參考品的檢驗項目，應(yīng)在產(chǎn)品檢驗時采用。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測人體xx樣本中的yy基因多態(tài)性，可檢測的多態(tài)性類型包括aa，本產(chǎn)品用于氯吡格雷的用藥指導(dǎo)。本產(chǎn)品不能預(yù)測患者對氯吡格雷的應(yīng)答情況，僅能輔助醫(yī)生確定氯吡格雷治療策略。本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為患者是否用藥的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情、療效及其他實驗室檢測指標(biāo)等對本產(chǎn)品的檢測結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

1.2介紹被測靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點），明確各多態(tài)性雜合型和純合型的臨床發(fā)生頻率，明確可進(jìn)行氯吡格雷用藥指導(dǎo)的適用人群，明確不同基因型與氯吡格雷的關(guān)系。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細(xì)信息。

3.【檢驗原理】

3.1對試劑盒的被測靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、多態(tài)性位點及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物、多態(tài)性的判定終點等進(jìn)行詳細(xì)的介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、質(zhì)控品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進(jìn)行介紹。

3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機(jī)理進(jìn)行適當(dāng)介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限（短期和長期）以及運送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗方法】

詳細(xì)說明實驗操作的各個步驟，包括：

7.1實驗條件：實驗室分區(qū)、實驗環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項。

7.2試劑配制方法和注意事項。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理的質(zhì)量控制，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動化檢測程序及相關(guān)注意事項。

7.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測多態(tài)性及其他質(zhì)控品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控品、樣本管檢測結(jié)果以及多態(tài)性類型與氯吡格雷表型之間的關(guān)系，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

9.【檢驗方法的局限性】

9.1申報產(chǎn)品僅對下述多態(tài)性類型xx進(jìn)行了驗證。

9.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.2.2未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】簡述以下性能指標(biāo)：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應(yīng)驗證：同源性序列等交叉反應(yīng)驗證。

10.4.2干擾物質(zhì)驗證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果。

11.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴(kuò)增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。