第一篇：液相培訓(xùn)總結(jié)-1218

島津高效液相色譜培訓(xùn)小結(jié)

2017年12月12日—15日我參加了島津企業(yè)管理（北京）有限公司北京分析中心組織的高效液相色譜LabSolutiongs DB/SC課程培訓(xùn)。非常感覺公司領(lǐng)導(dǎo)提供這樣的學(xué)習(xí)機會，使我們能系統(tǒng)地學(xué)習(xí)液相的知識，增強自身技能，提高工作能力。這次培訓(xùn)主要從液相色譜儀基礎(chǔ)知識、LabSolutions DB/CS軟件操作兩大塊去分析講解。

LabSolutions DB/CS軟件操作包括三部分：數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)處理、管理工具。

數(shù)據(jù)采集：主要包括分析方法和運行控制，是我們操作中最常用的。方法的組成：方法信息、儀器/采集參數(shù)、數(shù)據(jù)分析參數(shù)、運行時選項表。它包括分析一個樣品所需要的所有參數(shù)。運行控制講解了系統(tǒng)配置及儀器開關(guān)機的設(shè)置。

數(shù)據(jù)處理：這部分是數(shù)據(jù)分析處理和報告生成。講解了通過利用再解析、瀏覽器對數(shù)據(jù)進行分析處理，以及報告模板編輯、報告集的創(chuàng)建和模板編輯。

老師通過上機演練，向我們詳細講解數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)處理中的方法的建立、數(shù)據(jù)采集、報告生成等內(nèi)容。并讓我們自己上機操作，對幾個樣品進行檢測，利用建立標準曲線對樣品定量分析的方法來掌握方法的建立、數(shù)據(jù)采集、報告生成和報告集建立的操作。

管理工具：管理工具主要是對儀器系統(tǒng)進行設(shè)置，是液相儀的使用基礎(chǔ)。包括六個部分：安全策略、項目管理、用戶管理、儀器管理、系統(tǒng)設(shè)置、數(shù)據(jù)備份與恢復(fù)。安全策略主要用于設(shè)定LabSolutions系統(tǒng)中，關(guān)于設(shè)置密碼、軟件登錄方法、未經(jīng)授權(quán)的訪問對應(yīng)方法、審查追蹤功能、文件訪問限制和在分析結(jié)果中顯示簽名等信息。因為法規(guī)對這部分有要求，因此對這部分進行了詳細講解。

通過這部分的學(xué)習(xí)，對LabSolutions軟件有了更深入和全面的了解，從液相基本的數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)處理，再到軟件的系統(tǒng)管理。在實際應(yīng)用中能更好的去設(shè)置和使用。

液相色譜儀基礎(chǔ)知識包括四部分：色譜基礎(chǔ)知識、硬件基礎(chǔ)知識、定量基礎(chǔ)知識、維護基礎(chǔ)知識。

色譜基礎(chǔ)知識:從色譜的起源和發(fā)展，到高效液相色譜的簡易流程圖和它的原理及特點，如疏水性，流動相，固定相極性對分離度的影響，相互作用力，水，有機溶劑的選擇及緩沖鹽的配制。以及高效液相色譜的分類，包括反相色譜，離子對色譜，正相色譜，離子交換色譜，尺寸排阻色譜等。通過這堂課的學(xué)習(xí)，增強了我們的理論知識，對高效液相色譜的原理大有了解。其中講解的各種因素對分離度的影響，對我們在平時的工作中，在流動相的選擇和其他實驗條件的摸索有很大幫助。

硬件基礎(chǔ)知識:學(xué)習(xí)高效液相色譜構(gòu)成高效液相色譜構(gòu)成:(1)儲液瓶和溶劑；(2)脫氣機；(3)輸液泵；(4)色譜柱；(5)檢測器；(6)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。每一部分都有相關(guān)使用要求：流動相要選擇恰當，pH要符合范圍，流動相使用前要過濾和脫氣。對于不同性質(zhì)的樣品要選擇不同的色譜柱以及對色譜柱的維護，如果走過緩沖鹽，那一定要先用高比例的水來置換掉里面的鹽后才能用有機溶劑來沖洗，在使用緩沖鹽之前也要用高比例的水來沖洗。

檢測器分為通用型和高選擇性、高靈敏度的。高選擇性、高靈敏度：紫外可見光檢測器，二極管陣列檢測器，熒光檢測器。通用型：示差折光檢測器，電導(dǎo)檢測器，蒸發(fā)光散射檢測器，質(zhì)譜檢測器等。其次，因分離的目的不同對檢測器的要求也不同。如果是定量，要用選擇性高，靈敏度高的檢測器，如果是定性或制備，則可選擇通用型的。

定量基礎(chǔ)知識:詳細闡述了定量分析的基本要求，基本公式，常用定量方法(面積歸一法、外標法、內(nèi)標法、標準加入法)，并通過LC Solution軟件的應(yīng)用來講解樣品檢測方法的建立。常用定量方法一般分為四個步驟：一是設(shè)置儀器控制參數(shù)，包括泵參數(shù)、色譜柱參數(shù)、檢測器參數(shù)等；二是根據(jù)采集的信號設(shè)置積分功能，主要是優(yōu)化積分參數(shù)；三是設(shè)置校正參數(shù)，主要是對化合物進行定量分析，計算其含量;四是設(shè)置報告參數(shù)，主要是結(jié)果的輸出模式。

維護基礎(chǔ)知識：主要是液相色譜常見問題及故障排除經(jīng)驗，日常使用中的注意點及基本維護，容易出故障的部件及常見故障的排除等。這些問題，都是我們平時工作時經(jīng)常遇到的，學(xué)習(xí)了這方面的知識和經(jīng)驗，能指導(dǎo)我們在日常工作中保證儀器處于順暢的工作狀態(tài)，有效降低儀器發(fā)生故障的頻率，延長儀器的使用壽命，保障檢測工作的順利進行。最后，就這四天的培訓(xùn)進行了理論知識的考核，并對試題進行講解分析。并和我們一起培訓(xùn)的同行就日常工作中遇到的實際問題與老師進行交流討論，從實際應(yīng)用中把所學(xué)到的知識進一步鞏固。

這次的培訓(xùn)，讓我學(xué)到了很多有關(guān)液相分析儀器的知識，使我們對液相專業(yè)理論知識有了更深的理解和認識，實際操作能力得到了進一步的提升，為我們能更好的勝任自己的工作，打下堅實的基礎(chǔ)。我們將不斷學(xué)習(xí)專業(yè)知識、不斷完善自我，提高自身綜合能力，將所學(xué)知識應(yīng)用于實際工作當中，為公司奉獻自己的一份力量。

樊 佳 2017年12月18日

第二篇：液相學(xué)習(xí)心得

反沖色譜柱是否會降低柱效呢?

1.簡單來說，絕大多數(shù)硅膠基質(zhì)的色譜柱,正用反用都是一樣,沒有多大區(qū)別.反著用也不會對色譜柱柱效產(chǎn)生影響。

2.小心起見的話，建議大家看隨色譜柱來的一小頁的說明.上面可能都有注明該色譜柱是否可以反沖.如果沒說，一般都是可以反沖的。

3.還有一個問題,就是反沖后，是把柱子調(diào)回來用，還是就這么反著用呢？

在有些色譜柱壓力高的時候，反沖一段時間后，壓力下降到正常。換回正常的方向沒多久又開始升高，這個時候，可以考慮就將色譜柱反著用。

4.有一種情況下，色譜柱不能長期反沖，就是色譜柱前后篩板孔徑不一致的時候。有些3u色譜柱入口篩板孔徑可能是2u，出口0.5u。這樣可以讓色譜柱承受更大的壓力(因為出口比較小)。這種情況下，反沖一小段時間問題不大，但是時間長了以后，可能造成有些填料被沖出色譜柱，造成柱效下降的情況。如何防止這個問題出現(xiàn)呢？ 還是那句話，看說明書，看手冊。

RTFM！與大家共勉：）

2011.5.22 要重新開始學(xué)習(xí)色譜的一些原理和故障診斷，開這個帖子，跟大家分享一下學(xué)習(xí)筆記。歡迎大家交流。也算是對自己的一種監(jiān)督。學(xué)習(xí)資料來自LCGC雜志的各個專欄。

做液相的同學(xué)基本都會碰到分叉峰.很多時候,這都意味著硬件或者方法某些地方可能出現(xiàn)問題.這里我們一起看看導(dǎo)致峰分叉的原因以及如何解決這個問題的一些指導(dǎo)性的方法.1.首先,我們需要判斷,這到底是一個峰,還是兩個峰?

A圖主峰前面有一個肩峰.這到底是峰形不好,還是另外一個化合物沒分開呢?

判斷辦法:降低該成分在樣品中的濃度.B圖是降低該成分濃度后,進樣后得到的色譜圖.如果這是一個峰,那肩峰也應(yīng)該響應(yīng)變小.但是,這個例子里,肩峰沒有變小,這應(yīng)該是另外一個化合物.這時候,我們就要考慮如何改變方法,將這兩個東西分開.2.所有峰的峰形都不好.一般來說,一個樣品都會出多個峰.峰形不好,絕大多數(shù)時候,在每個峰上面都會出現(xiàn).比如像下面這樣:

A圖是所有峰都拖尾.B 圖是所有峰都有肩峰,也可以說峰分叉.這種情況一般都是色譜柱頭塌陷或者柱頭的篩板被堵導(dǎo)致的.為什么導(dǎo)致峰型問題呢? 請看下面的圖.A圖是正常的柱頭.B圖是篩板被堵的柱頭.正常情況下,所有樣品分子都是均勻通過色譜柱的,形成一個對稱的峰形.堵塞得情況下,有一部分樣品分子進入色譜柱就會收到阻擾,導(dǎo)致時間拖后,形成拖尾.對于色譜柱塌陷的情況,用同樣的方法,大家也不難理解.只不過這時候,是一些樣品分子可能跑的比正常的快了一些.如何解決這個問題呢:

1.反沖.柱出口放空，沖20-30ml流動相。雖然柱子上都有表明使用方向, 但是對于硅膠基質(zhì)的色譜柱,基本都可以反沖.將柱頭污染物(泵密封圈的碎屑，樣品中的污染等)沖走，就能解決問題。當然，還是要提倡大家注意樣品上機之前的前處理和及時更換磨損的泵密封圈。有條件的，還是用保護柱，大不了就換保護柱，也比換色譜柱強。

2．更換或清洗篩板。現(xiàn)在估計做這個事情的人不多，但是誰有廢柱子，想練練也未嘗不可。

案例分析：

我們一起看看一個實際的例子。

根據(jù)之前說的，可能是柱頭堵了，或者塌陷了。但是進一步檢查，發(fā)現(xiàn)另有原因。方法用的150 mm 4.6 mm, 5-um C18 柱子，78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，進樣10ul，100%乙腈溶解的樣品。

一般來說，雖然10ul的純乙腈不會引起峰形不好，但是有時候樣品溶劑的極性跟流動相差異較大時，的確會引起峰形的問題。

我們怎么辦呢：

1． 從最容易的辦法做起，降低溶劑乙腈的比例。降到50%看看。從下圖B，4min的峰可以看出，沒啥改觀。

2． 接下來反沖柱子，結(jié)果圖C，基本沒變化。算，每天再說吧。

3． 第二天來到實驗室，還能干嘛呢？ 更換篩板？ 算了，直接換柱子吧。結(jié)果如D，噢，好很多噢。之前柱子肯定有問題，扔了。但是峰還是有點寬，估計還是哪兒有問題。

4． 手上忙，沒時間管這個。幾天過后，重新配了流動相，一跑，好了。如圖E。

雖然到底什么原因?qū)е碌闹胺逍蔚膯栴}已經(jīng)無從查找(柱子扔了，舊流動相也沒了)，但是也給我們一個解決問題的步驟：

1． 確定峰形問題是所有峰都有問題，還是就是某一個峰有問題。如果所有峰都有問題，基本都是色譜柱，或者儀器管路連接的問題。如果是某一個峰有問題，那就要從方法上來考慮，是否需要改變流動相比例，pH值，色譜柱溫度等等。

2． 從最簡單的做起，從不需要換什么東西的方法做起。比如改變樣品溶劑，反沖色譜柱等等。

3． 換東西。換保護柱，換色譜柱，換流動相(新配)。一步一步的換，有助于找到問題的根本。

4． 問題解決后，想想需不需要采取什么措施，防止類似問題的發(fā)生，比如說常換流動相啦，即時更換密封圈啦，記錄進樣次數(shù)了解什么時候色譜柱就不行了啊之類的

基線噪音是做液相的同學(xué)經(jīng)常感到頭疼的問題, 特別在做痕量分析時候.這次我們從物理,化學(xué)到電子等各個方面看看噪音的來源,以及如何減小和消除噪音.1.流動相的在線混合.所有的流動相在線混合都是從方便出發(fā)的結(jié)果, 流動相混合的不充分是基線噪音的一個重要來源.混合方式主要兩種:

a.低壓混合：采取時間脈沖的方式，利用比例閥，將不同流動相按一定比例混合。

b.高壓混合：利用多個泵頭，控制每個泵的流量，來將流動相按一定比例混合。

在流動相混合后，一般都有一個混合器(Mixer),來幫助混合的更加充分。從流動相開始混合在一起，到流動相到達色譜柱頭，這一段體積叫做延遲體積(Delay Volume).Mixer體積越大，混合越好，但是相應(yīng)延遲體積就越大，造成梯度的延遲。換句話說，就是流動相的變化，需要一定時間后，才能真正到達色譜柱，對分離產(chǎn)生影響。

a.這個現(xiàn)象在使用UPLC或者UHPLC的時候，會有比較明顯的作用。

b.為什么相同梯度方法，在不同儀器，或者不同品牌的儀器之間轉(zhuǎn)化時，保留時間可能不一樣？ 其主要原因就是延遲體積的不同。

在線混合很難做到非常均一的混合效果，這個在示差檢測器（RID）上的效果最明顯。這也是為什么示差檢測器都要求將流動相預(yù)混到一個瓶子里，不能走梯度的原因。

那如何減小因為混合而造成的基線噪音呢？

a.對于等度的方法，非常簡單，預(yù)混流動相就可以了。

b.對于梯度的方法，部分預(yù)混流動相也會幫助更好的混合，怎么做呢？看下面的例子。

方法要求乙腈/水比例從10%走到85%。那可以將流動相A配成10%的乙腈，流動相B配成85%的乙腈，然后A/B梯度從0%走到100%。這就是部分預(yù)混。

c.增大Mixer的體積。一般mixer的體積從幾百ul到幾個ml都有，在允許的延遲時間下，更換一個體積更大的Mixer，能夠有效提高混合的效率。每個色生產(chǎn)廠家的Mixer體積都不一樣,基本都可以混用.有碰到過一個Agilent的1100基線噪音大,后來換成1050的mixer就好了,因為1050的mixer比較大一些.2．液相硬件問題造成的基線噪音。

如果液相系統(tǒng)某些地方的工作不正常，也可能造成基線的噪音。

a.系統(tǒng)有漏。特別是肉眼無法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音。檢查的方法就是對系統(tǒng)進行壓力測試：將系統(tǒng)從某個地方用死堵堵上，如泵出口，或者自動進樣器出口，將壓力升高到350bar后停泵，監(jiān)測壓力下降的情況。一般的標準是2-3bar/min的下降是正常水平?；蛘?5%/10min的下降。

b.梯度比例問題?？梢詫ο到y(tǒng)進行一個梯度測試，來檢查梯度混合是否準確和一致。將A配成0.1%的丙酮，B是水。在265nm的波長下，將A的比例10%，20%，30%這樣一個一個的升高，每個比例走3min?？梢愿鶕?jù)計算，看每個基線臺階上升是否準確。也可以從0-100%走一個連續(xù)的梯度，看基線上升的平滑性和線性。

3．流動相脫氣不好造成的基線噪音。

對流動相進行脫氣，不僅僅是為了防止系統(tǒng)里面氣泡的產(chǎn)生。流動相脫氣越好，基線就會越好。如今最常用的脫氣方式是在線脫氣機，但是有的時候脫氣并不徹底。所以當有基線噪音問題是，可以考慮采取多種的脫氣方式。

4．系統(tǒng)潔凈程度。

前面1-3點講的都是內(nèi)在原因，造成的基線噪音或者波動。如果你前面的原因都找過了，問題還沒有解決，就得考慮一下是不是流動相里面是否有雜質(zhì)了。如何檢查判斷是否為流動相的問題呢？

a.每次更換一種流動相，看基線結(jié)果。

b.重新配置所有流動相。這種方式比較快，但可能無法找到根本原因。

要特別注意在流動相的配置過程中，是否引入了污染，比如使用了不干凈的玻璃器皿什么的。更換溶劑的品牌和批次也是方法之一。

色譜柱長期使用造成的污染有時候也會造成基線波動。有些時候樣品里面可能有些保留非常強的組分，可能在色譜柱上很長時間才慢慢被沖出來，這時候已經(jīng)不是一個峰了，而是基線的干擾或者波動了。

避免這種問題的方法：在每批樣品后，用甲醇或者已經(jīng)長時間沖洗色譜柱。另外，專柱專用也是一個好的習(xí)慣。如果一根色譜柱上作很多不同的樣品，也可能導(dǎo)致互相之間的污染和影響。

5．電路的噪音。

對于UV檢測器來說，就是采樣頻率不合適而產(chǎn)生的噪音。現(xiàn)在隨著超高效液相的普及，檢測器的采樣頻率也越來越高，有的可以達到80Hz以上。但是如果一味追求高采樣頻率，可能對靈敏度沒有任何幫助，反倒產(chǎn)生比較大的噪音。(我們后面可能會有一起專門檢測器的時候,會更詳細的討論這個的原因)

一般來說，我們需要保證一個色譜峰上面有15-20個點，來保證比較平滑的峰形和比較準確的定量結(jié)果。如果我的一個峰的時間寬度是0.5min，就是是30s，那只要保證1Hz的采樣頻率就足夠了。如果在UPLC上面，一個峰的時間寬度是0.05min，也就是3s,就需要10Hz以上的采樣頻率。那80Hz的采樣頻率什么時候用呢？ 你的一個峰只有0.5s的時候。

理論上的計算是這樣的

N=16（T/W）^2

N是柱效。T是保留時間。W是峰寬。

一般色譜如果柱效12000的塔板數(shù)。在5min的時候，出峰寬度大概計算出來時11s。你可以根據(jù)計算結(jié)果來調(diào)整檢測器的合適的采樣頻率。

第三篇：液相色譜培訓(xùn)小結(jié)

高效液相色譜培訓(xùn)小結(jié)

分析：XXX 我來研究院已經(jīng)一年多，主要做基本分析操作，需要負責(zé)液相，為了嚴格保證分析數(shù)據(jù)的準確性，必須以嚴謹科學(xué)的態(tài)度對待，從制備樣品過程到儀器采集過程都要非常謹慎、認真。

這次有幸得到公司提供的培訓(xùn)機會，去上海Agilent科技大學(xué)培訓(xùn)中心參加了為期四天的液相色譜培訓(xùn)。培訓(xùn)期間老師講述了從硬件、軟件及維護保養(yǎng)各個方面的問題，讓人一下充實了不少。

通過這次的學(xué)習(xí)培訓(xùn)，使我對分析過程有了深入的理解，并對高效液相色譜儀的使用和維護有了更全面的了解和更多的認識，現(xiàn)在做總結(jié)如下：

液相色譜主要分為：溶劑柜、脫機機、泵、自動進樣器(手動進樣器）、柱溫箱、檢測器。各個模塊由CAN 線進行通訊連接，使得各個模塊形成一整套系統(tǒng)。化學(xué)工作站和儀器系統(tǒng)之間用LAN線連接。

一、硬件

1、在線脫氣機

2、泵（我公司使用的是四元泵，當使用鹽溶液和有機溶劑時，建議將鹽溶液接到四元比例閥下面的通道上（A或D），有機溶劑接到上面的通道上（B或C）。如果經(jīng)常使用鹽溶液，建議定期用水沖洗所有的通道以去除閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。）

3、進樣器（我公司為標準自動進樣器。進樣體積重復(fù)性高，進樣動態(tài)范圍寬，連續(xù)沖洗流路并有洗針功能，降低樣品殘留，可以容納不同規(guī)格的樣品瓶。靈活的進樣程序編程可以進行樣品前處理，使用旁路可以降低延遲體積。）

4、柱溫箱

5、檢測器（我公司使用的是VWD檢測器用于產(chǎn)品開發(fā)及質(zhì)量控制。）

二、化學(xué)工作站

1、方法的編輯和保存

2、譜圖處理及優(yōu)化

3、積分參數(shù)優(yōu)化

4、光譜功能

5、校正表建立，設(shè)定報告，報告設(shè)計

三、日常維護和常見色譜故障

1、溶劑準備：溶劑過濾是要防止固體顆粒損傷儀器或柱頭。常用0.45um的濾膜，使用色譜純的溶劑。定期更換溶劑，避免溶劑瓶直接日照，每兩天更換或過濾溶劑，用濾膜過濾溶劑去除微生物，在使用時一定要脫氣。

2、保護色譜柱

①過濾所有的溶劑和樣品 ②使用保護柱

③儀器在使用完畢，要沖洗整個系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中緩沖液 ④在適當?shù)娜軇┲斜４嬷?⑤柱子在不使用時，兩端密封保存 ⑥注意色譜柱的pH值使用范圍 ⑦不要高壓沖洗柱子

⑧不要高溫下過長時間使用硅膠鍵合相

3、常見色譜故障 ① 雙峰

原因：柱頭塌陷或柱床運動、柱前濾芯堵塞、樣品量過大、進樣器流路存在分叉流路。

② 基線噪音、基線漂移

原因：檢測池臟、燈能量下降、流動相臟、溫度不穩(wěn)定。③ 鬼峰、柱外擴散、峰擴展、拖尾峰、前伸峰、負峰 原因：流動相尤其水臟、連接接頭不匹配、進樣體積大、色譜柱過載、溶解樣品溶劑通過色譜柱時平衡破壞。

④ 壓力過高、壓力過低、壓力波動

原因：色譜柱過濾芯被污染、毛細管進樣針或針座阻塞、閥失靈、密封墊老化、泵內(nèi)有氣泡。

⑤ 常規(guī)維護區(qū)域：溶劑入口、泵、檢測器

四、Agilent Lab Advisor 軟件

Agilent Lab Advisor是獨立化學(xué)工作站之外的一個工具，這個工具提供維護、診斷、監(jiān)控及警告功能。

經(jīng)過這次的培訓(xùn)學(xué)習(xí)，使我對分析過程有了全新的認識，也解決了以前檢測分析操作中遇到的問題，重新認識了許多應(yīng)用方法，對儀器的操作使用維護有了新的認識，為以后的工作中更好地使用、養(yǎng)護儀器提供了更多理論依據(jù)。在此感謝領(lǐng)導(dǎo)，同事們對我的關(guān)心和支持，給我一個如此好的學(xué)習(xí)機會。

第四篇：高效液相色譜基本概念和術(shù)語

高壓液相色譜HPLC培訓(xùn)教程(一)I．概論

一、液相色譜理論發(fā)展簡況

色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜法最早是由俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。

二、HPLC的特點和優(yōu)點 HPLC有以下特點：

高壓-壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。高速-流速為0.1~10.0 ml/min。

高效-可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。高靈敏度-紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：

速度快-通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。分辨率高-可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。

靈敏度高-紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達0.1pg。柱子可反復(fù)使用-用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收-樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

三、色譜法分類

按兩相的物理狀態(tài)可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物。GC根據(jù)固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應(yīng)用最廣。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨

為2.5~7.5（2~8），太高的pH值會使硅膠溶解，太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH 1.5~10范圍操作。

正相色譜法與反相色譜法比較表

正相色譜法 反相色譜法 固定相極性 高～中 中～低 流動相極性 低～中 中～高 組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出

從上表可看出，當極性為中等時正相色譜法與反相色譜法沒有明顯的界線（如氨基鍵合固定相）。3．離子交換色譜法

固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子交換樹脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換，根據(jù)各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。

緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團作用強弱有關(guān)外，它還受流動相的pH值和離子強度影響。pH值可改變化合物的解離程度，進而影響其與固定相的作用。流動相的鹽濃度大，則離子強度高，不利于樣品的解離，導(dǎo)致樣品較快流出。離子交換色譜法主要用于分析有機酸、氨基酸、多肽及核酸。4．離子對色譜法

又稱偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強度大的酸堿物質(zhì)。

分析堿性物質(zhì)常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強的離子對。

分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。

離子對色譜法常用ODS柱（即C18），流動相為甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的離子對試劑，在一定的pH值范圍內(nèi)進行分離。被測組分保時間與離子對性質(zhì)、濃度、流動相組成及其pH值、離子強度有關(guān)。5．排阻色譜法

固定相是有一定孔徑的多孔性填料，流動相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進入孔中，滯留時間長；大分子量的化合物不能進入孔中，直接隨流動相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。

第五篇：儀器設(shè)備(液相色譜)購置報告

儀器購置申請

學(xué)院財務(wù)處、資產(chǎn)管理中心：

鑒于“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目進展的實際需要，統(tǒng)籌考慮研發(fā)、社會服務(wù)和生物技術(shù)（制藥）專業(yè)的資源建設(shè)，申請購置一臺兼具熒光和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀，相關(guān)報告附后，請予以批準，謝謝！

食品科學(xué)系

二O一三年三月十六日

江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心

液相色譜儀購置報告

一、申購背景

申請購置一臺兼具熒光檢測和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀，基于以下原因：

1.該臺儀器的購置，是“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目建設(shè)的預(yù)定計劃之一，是工程中心研究、開發(fā)、第三方服務(wù)的主要設(shè)備。投入使用后，將滿足新版國家標準“GB2762-2012 食品污染物限量”，“GB 2760-2011 食品安全國家標準”食品中污染物、添加劑檢測的要求，其精度、準確度和檢測限量是第三方檢測的必須裝備。

新版國家標準GB2762-2012 食品污染物限量標準自2013年6月1日正式施行。新標準逐項清理了以往食品標準中的所有污染物限量規(guī)定，整合修訂為鉛、鎘、汞、砷、苯并[a]芘、N-二甲基亞硝胺等13種污染物在谷物、蔬菜、水果、肉類、水產(chǎn)品、調(diào)味品、飲料、酒類等20余大類食品的限量規(guī)定。其中對食品污染物“苯并[a]芘”規(guī)定運用高效液相色譜-熒光檢測測定可以達到很好準確性、重現(xiàn)性和較低的檢測限，達到食品中“苯并[a]芘”痕量檢測的要求。

新版國家標準GB 2760-2011 食品安全國家標準“食品添加劑使用標準”對食品添加劑使用進行了嚴格的規(guī)定，衛(wèi)生部發(fā)布的“食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單”中如羅丹明B、堿性嫩黃等禁用物質(zhì)，沒有國家標準檢測方法。應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列檢測（可實現(xiàn)三維立體）可以更好更便揵的研究食品添加劑檢測方法，并可同時準確定性定量。

2.該臺儀器，對接香港中文大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院“天然產(chǎn)物與功能食品”研究項目組，將系統(tǒng)開展辣椒素、花菁素、芝麻素、姜醇等天然抗氧化劑在脂肪酸、膽固醇、血脂氧化等方面的研究與應(yīng)用開發(fā)。我院承擔的省“六大人才高峰”項目“天然辣椒素對血脂代謝的影響研究與開發(fā)”、江蘇省教育廳“青藍工程”科技創(chuàng)新團隊“農(nóng)業(yè)投入品的監(jiān)控與篩選”等相關(guān)研究內(nèi)容，將主要依賴這臺設(shè)備，相關(guān)合作，已于香港中文大學(xué)簽署科研合作協(xié)議。

3.兼顧院級重點建設(shè)專業(yè)“生物技術(shù)及應(yīng)用（制藥）”需要。該專業(yè)是我院重點建設(shè)專業(yè)，2012年9月第一批學(xué)生已經(jīng)入校，但是，實訓(xùn)資源建設(shè)缺口較大，特別是涉及到藥物中間體、活性成分、功能因子等成分的分離與鑒定，高精度熒光和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀是必備工具。

二、預(yù)期效益

這臺裝備，是“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”科研項目二期建設(shè)的既定內(nèi)容，主要服務(wù)對象是科研、第三方檢測和部分必須的專業(yè)實踐，其效益主要體現(xiàn)在如下方面：

1.執(zhí)行“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目建設(shè)計劃。投入運行后，我系將新增2-3個固定就（創(chuàng)）業(yè)崗位，滿足5-7名學(xué)生的頂崗實踐，全年將新增第三方檢測服務(wù)營業(yè)額20-30萬元。

2.提升科研質(zhì)量?！疤烊焕苯匪貙ρx的影響研究與開發(fā)”、“農(nóng)業(yè)投入品的監(jiān)控與篩選”等相關(guān)研究內(nèi)容，將主要依賴這臺設(shè)備，國際頂尖SCI期刊的研究報告，主要依賴這臺設(shè)備，社會效益較大，價值難以量化。

3.提升專業(yè)建設(shè)水平。生物技術(shù)及應(yīng)用（制藥）專業(yè)實訓(xùn)中，涉及藥物中間體、活性成分、功能因子等分離、鑒定，高精度熒光和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀是必備工具。具有培養(yǎng)學(xué)生的功能，是實驗（訓(xùn)）資源建設(shè)的有效補充。

三、建議型號與附件

1.主機系統(tǒng)：SHIMADZU-LC20A（與香港實驗室相同，數(shù)據(jù)同步）；

2.附件：二元泵，脫氣機，熒光檢測，二極管陣列檢測，自動進樣，柱溫箱，氮吹儀，超聲波，恒溫水谷振震蕩儀等。

四、經(jīng)費來源

1.學(xué)院“校中園”建設(shè)專項20萬元。

2.剩余款項（約20萬元）擬從“食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目經(jīng)費列支。

食品科學(xué)系 二O一三年三月十六日