第一篇：儀器設(shè)備(液相色譜)購置報告

儀器購置申請

學(xué)院財務(wù)處、資產(chǎn)管理中心：

鑒于“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目進展的實際需要，統(tǒng)籌考慮研發(fā)、社會服務(wù)和生物技術(shù)（制藥）專業(yè)的資源建設(shè)，申請購置一臺兼具熒光和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀，相關(guān)報告附后，請予以批準，謝謝！

食品科學(xué)系

二O一三年三月十六日

江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心

液相色譜儀購置報告

一、申購背景

申請購置一臺兼具熒光檢測和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀，基于以下原因：

1.該臺儀器的購置，是“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目建設(shè)的預(yù)定計劃之一，是工程中心研究、開發(fā)、第三方服務(wù)的主要設(shè)備。投入使用后，將滿足新版國家標準“GB2762-2012 食品污染物限量”，“GB 2760-2011 食品安全國家標準”食品中污染物、添加劑檢測的要求，其精度、準確度和檢測限量是第三方檢測的必須裝備。

新版國家標準GB2762-2012 食品污染物限量標準自2013年6月1日正式施行。新標準逐項清理了以往食品標準中的所有污染物限量規(guī)定，整合修訂為鉛、鎘、汞、砷、苯并[a]芘、N-二甲基亞硝胺等13種污染物在谷物、蔬菜、水果、肉類、水產(chǎn)品、調(diào)味品、飲料、酒類等20余大類食品的限量規(guī)定。其中對食品污染物“苯并[a]芘”規(guī)定運用高效液相色譜-熒光檢測測定可以達到很好準確性、重現(xiàn)性和較低的檢測限，達到食品中“苯并[a]芘”痕量檢測的要求。

新版國家標準GB 2760-2011 食品安全國家標準“食品添加劑使用標準”對食品添加劑使用進行了嚴格的規(guī)定，衛(wèi)生部發(fā)布的“食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單”中如羅丹明B、堿性嫩黃等禁用物質(zhì)，沒有國家標準檢測方法。應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列檢測（可實現(xiàn)三維立體）可以更好更便揵的研究食品添加劑檢測方法，并可同時準確定性定量。

2.該臺儀器，對接香港中文大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院“天然產(chǎn)物與功能食品”研究項目組，將系統(tǒng)開展辣椒素、花菁素、芝麻素、姜醇等天然抗氧化劑在脂肪酸、膽固醇、血脂氧化等方面的研究與應(yīng)用開發(fā)。我院承擔的省“六大人才高峰”項目“天然辣椒素對血脂代謝的影響研究與開發(fā)”、江蘇省教育廳“青藍工程”科技創(chuàng)新團隊“農(nóng)業(yè)投入品的監(jiān)控與篩選”等相關(guān)研究內(nèi)容，將主要依賴這臺設(shè)備，相關(guān)合作，已于香港中文大學(xué)簽署科研合作協(xié)議。

3.兼顧院級重點建設(shè)專業(yè)“生物技術(shù)及應(yīng)用（制藥）”需要。該專業(yè)是我院重點建設(shè)專業(yè)，2012年9月第一批學(xué)生已經(jīng)入校，但是，實訓(xùn)資源建設(shè)缺口較大，特別是涉及到藥物中間體、活性成分、功能因子等成分的分離與鑒定，高精度熒光和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀是必備工具。

二、預(yù)期效益

這臺裝備，是“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”科研項目二期建設(shè)的既定內(nèi)容，主要服務(wù)對象是科研、第三方檢測和部分必須的專業(yè)實踐，其效益主要體現(xiàn)在如下方面：

1.執(zhí)行“江蘇省食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目建設(shè)計劃。投入運行后，我系將新增2-3個固定就（創(chuàng)）業(yè)崗位，滿足5-7名學(xué)生的頂崗實踐，全年將新增第三方檢測服務(wù)營業(yè)額20-30萬元。

2.提升科研質(zhì)量?！疤烊焕苯匪貙ρx的影響研究與開發(fā)”、“農(nóng)業(yè)投入品的監(jiān)控與篩選”等相關(guān)研究內(nèi)容，將主要依賴這臺設(shè)備，國際頂尖SCI期刊的研究報告，主要依賴這臺設(shè)備，社會效益較大，價值難以量化。

3.提升專業(yè)建設(shè)水平。生物技術(shù)及應(yīng)用（制藥）專業(yè)實訓(xùn)中，涉及藥物中間體、活性成分、功能因子等分離、鑒定，高精度熒光和二極管陣列檢測的高效液相色譜儀是必備工具。具有培養(yǎng)學(xué)生的功能，是實驗（訓(xùn)）資源建設(shè)的有效補充。

三、建議型號與附件

1.主機系統(tǒng)：SHIMADZU-LC20A（與香港實驗室相同，數(shù)據(jù)同步）；

2.附件：二元泵，脫氣機，熒光檢測，二極管陣列檢測，自動進樣，柱溫箱，氮吹儀，超聲波，恒溫水谷振震蕩儀等。

四、經(jīng)費來源

1.學(xué)院“校中園”建設(shè)專項20萬元。

2.剩余款項（約20萬元）擬從“食品安全快速檢測工程技術(shù)研究開發(fā)中心”項目經(jīng)費列支。

食品科學(xué)系 二O一三年三月十六日

第二篇：高效液相色譜基本概念和術(shù)語

高壓液相色譜HPLC培訓(xùn)教程(一)I．概論

一、液相色譜理論發(fā)展簡況

色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜法最早是由俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。

二、HPLC的特點和優(yōu)點 HPLC有以下特點：

高壓-壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。高速-流速為0.1~10.0 ml/min。

高效-可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。高靈敏度-紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：

速度快-通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。分辨率高-可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。

靈敏度高-紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達0.1pg。柱子可反復(fù)使用-用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收-樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

三、色譜法分類

按兩相的物理狀態(tài)可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物。GC根據(jù)固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應(yīng)用最廣。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨

為2.5~7.5（2~8），太高的pH值會使硅膠溶解，太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH 1.5~10范圍操作。

正相色譜法與反相色譜法比較表

正相色譜法 反相色譜法 固定相極性 高～中 中～低 流動相極性 低～中 中～高 組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出

從上表可看出，當極性為中等時正相色譜法與反相色譜法沒有明顯的界線（如氨基鍵合固定相）。3．離子交換色譜法

固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子交換樹脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換，根據(jù)各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。

緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團作用強弱有關(guān)外，它還受流動相的pH值和離子強度影響。pH值可改變化合物的解離程度，進而影響其與固定相的作用。流動相的鹽濃度大，則離子強度高，不利于樣品的解離，導(dǎo)致樣品較快流出。離子交換色譜法主要用于分析有機酸、氨基酸、多肽及核酸。4．離子對色譜法

又稱偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強度大的酸堿物質(zhì)。

分析堿性物質(zhì)常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強的離子對。

分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。

離子對色譜法常用ODS柱（即C18），流動相為甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的離子對試劑，在一定的pH值范圍內(nèi)進行分離。被測組分保時間與離子對性質(zhì)、濃度、流動相組成及其pH值、離子強度有關(guān)。5．排阻色譜法

固定相是有一定孔徑的多孔性填料，流動相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進入孔中，滯留時間長；大分子量的化合物不能進入孔中，直接隨流動相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。

第三篇：液相色譜培訓(xùn)小結(jié)

高效液相色譜培訓(xùn)小結(jié)

分析：XXX 我來研究院已經(jīng)一年多，主要做基本分析操作，需要負責液相，為了嚴格保證分析數(shù)據(jù)的準確性，必須以嚴謹科學(xué)的態(tài)度對待，從制備樣品過程到儀器采集過程都要非常謹慎、認真。

這次有幸得到公司提供的培訓(xùn)機會，去上海Agilent科技大學(xué)培訓(xùn)中心參加了為期四天的液相色譜培訓(xùn)。培訓(xùn)期間老師講述了從硬件、軟件及維護保養(yǎng)各個方面的問題，讓人一下充實了不少。

通過這次的學(xué)習(xí)培訓(xùn)，使我對分析過程有了深入的理解，并對高效液相色譜儀的使用和維護有了更全面的了解和更多的認識，現(xiàn)在做總結(jié)如下：

液相色譜主要分為：溶劑柜、脫機機、泵、自動進樣器(手動進樣器）、柱溫箱、檢測器。各個模塊由CAN 線進行通訊連接，使得各個模塊形成一整套系統(tǒng)?；瘜W(xué)工作站和儀器系統(tǒng)之間用LAN線連接。

一、硬件

1、在線脫氣機

2、泵（我公司使用的是四元泵，當使用鹽溶液和有機溶劑時，建議將鹽溶液接到四元比例閥下面的通道上（A或D），有機溶劑接到上面的通道上（B或C）。如果經(jīng)常使用鹽溶液，建議定期用水沖洗所有的通道以去除閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。）

3、進樣器（我公司為標準自動進樣器。進樣體積重復(fù)性高，進樣動態(tài)范圍寬，連續(xù)沖洗流路并有洗針功能，降低樣品殘留，可以容納不同規(guī)格的樣品瓶。靈活的進樣程序編程可以進行樣品前處理，使用旁路可以降低延遲體積。）

4、柱溫箱

5、檢測器（我公司使用的是VWD檢測器用于產(chǎn)品開發(fā)及質(zhì)量控制。）

二、化學(xué)工作站

1、方法的編輯和保存

2、譜圖處理及優(yōu)化

3、積分參數(shù)優(yōu)化

4、光譜功能

5、校正表建立，設(shè)定報告，報告設(shè)計

三、日常維護和常見色譜故障

1、溶劑準備：溶劑過濾是要防止固體顆粒損傷儀器或柱頭。常用0.45um的濾膜，使用色譜純的溶劑。定期更換溶劑，避免溶劑瓶直接日照，每兩天更換或過濾溶劑，用濾膜過濾溶劑去除微生物，在使用時一定要脫氣。

2、保護色譜柱

①過濾所有的溶劑和樣品 ②使用保護柱

③儀器在使用完畢，要沖洗整個系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中緩沖液 ④在適當?shù)娜軇┲斜４嬷?⑤柱子在不使用時，兩端密封保存 ⑥注意色譜柱的pH值使用范圍 ⑦不要高壓沖洗柱子

⑧不要高溫下過長時間使用硅膠鍵合相

3、常見色譜故障 ① 雙峰

原因：柱頭塌陷或柱床運動、柱前濾芯堵塞、樣品量過大、進樣器流路存在分叉流路。

② 基線噪音、基線漂移

原因：檢測池臟、燈能量下降、流動相臟、溫度不穩(wěn)定。③ 鬼峰、柱外擴散、峰擴展、拖尾峰、前伸峰、負峰 原因：流動相尤其水臟、連接接頭不匹配、進樣體積大、色譜柱過載、溶解樣品溶劑通過色譜柱時平衡破壞。

④ 壓力過高、壓力過低、壓力波動

原因：色譜柱過濾芯被污染、毛細管進樣針或針座阻塞、閥失靈、密封墊老化、泵內(nèi)有氣泡。

⑤ 常規(guī)維護區(qū)域：溶劑入口、泵、檢測器

四、Agilent Lab Advisor 軟件

Agilent Lab Advisor是獨立化學(xué)工作站之外的一個工具，這個工具提供維護、診斷、監(jiān)控及警告功能。

經(jīng)過這次的培訓(xùn)學(xué)習(xí)，使我對分析過程有了全新的認識，也解決了以前檢測分析操作中遇到的問題，重新認識了許多應(yīng)用方法，對儀器的操作使用維護有了新的認識，為以后的工作中更好地使用、養(yǎng)護儀器提供了更多理論依據(jù)。在此感謝領(lǐng)導(dǎo)，同事們對我的關(guān)心和支持，給我一個如此好的學(xué)習(xí)機會。

第四篇：液相學(xué)習(xí)心得

反沖色譜柱是否會降低柱效呢?

1.簡單來說，絕大多數(shù)硅膠基質(zhì)的色譜柱,正用反用都是一樣,沒有多大區(qū)別.反著用也不會對色譜柱柱效產(chǎn)生影響。

2.小心起見的話，建議大家看隨色譜柱來的一小頁的說明.上面可能都有注明該色譜柱是否可以反沖.如果沒說，一般都是可以反沖的。

3.還有一個問題,就是反沖后，是把柱子調(diào)回來用，還是就這么反著用呢？

在有些色譜柱壓力高的時候，反沖一段時間后，壓力下降到正常。換回正常的方向沒多久又開始升高，這個時候，可以考慮就將色譜柱反著用。

4.有一種情況下，色譜柱不能長期反沖，就是色譜柱前后篩板孔徑不一致的時候。有些3u色譜柱入口篩板孔徑可能是2u，出口0.5u。這樣可以讓色譜柱承受更大的壓力(因為出口比較小)。這種情況下，反沖一小段時間問題不大，但是時間長了以后，可能造成有些填料被沖出色譜柱，造成柱效下降的情況。如何防止這個問題出現(xiàn)呢？ 還是那句話，看說明書，看手冊。

RTFM！與大家共勉：）

2011.5.22 要重新開始學(xué)習(xí)色譜的一些原理和故障診斷，開這個帖子，跟大家分享一下學(xué)習(xí)筆記。歡迎大家交流。也算是對自己的一種監(jiān)督。學(xué)習(xí)資料來自LCGC雜志的各個專欄。

做液相的同學(xué)基本都會碰到分叉峰.很多時候,這都意味著硬件或者方法某些地方可能出現(xiàn)問題.這里我們一起看看導(dǎo)致峰分叉的原因以及如何解決這個問題的一些指導(dǎo)性的方法.1.首先,我們需要判斷,這到底是一個峰,還是兩個峰?

A圖主峰前面有一個肩峰.這到底是峰形不好,還是另外一個化合物沒分開呢?

判斷辦法:降低該成分在樣品中的濃度.B圖是降低該成分濃度后,進樣后得到的色譜圖.如果這是一個峰,那肩峰也應(yīng)該響應(yīng)變小.但是,這個例子里,肩峰沒有變小,這應(yīng)該是另外一個化合物.這時候,我們就要考慮如何改變方法,將這兩個東西分開.2.所有峰的峰形都不好.一般來說,一個樣品都會出多個峰.峰形不好,絕大多數(shù)時候,在每個峰上面都會出現(xiàn).比如像下面這樣:

A圖是所有峰都拖尾.B 圖是所有峰都有肩峰,也可以說峰分叉.這種情況一般都是色譜柱頭塌陷或者柱頭的篩板被堵導(dǎo)致的.為什么導(dǎo)致峰型問題呢? 請看下面的圖.A圖是正常的柱頭.B圖是篩板被堵的柱頭.正常情況下,所有樣品分子都是均勻通過色譜柱的,形成一個對稱的峰形.堵塞得情況下,有一部分樣品分子進入色譜柱就會收到阻擾,導(dǎo)致時間拖后,形成拖尾.對于色譜柱塌陷的情況,用同樣的方法,大家也不難理解.只不過這時候,是一些樣品分子可能跑的比正常的快了一些.如何解決這個問題呢:

1.反沖.柱出口放空，沖20-30ml流動相。雖然柱子上都有表明使用方向, 但是對于硅膠基質(zhì)的色譜柱,基本都可以反沖.將柱頭污染物(泵密封圈的碎屑，樣品中的污染等)沖走，就能解決問題。當然，還是要提倡大家注意樣品上機之前的前處理和及時更換磨損的泵密封圈。有條件的，還是用保護柱，大不了就換保護柱，也比換色譜柱強。

2．更換或清洗篩板?，F(xiàn)在估計做這個事情的人不多，但是誰有廢柱子，想練練也未嘗不可。

案例分析：

我們一起看看一個實際的例子。

根據(jù)之前說的，可能是柱頭堵了，或者塌陷了。但是進一步檢查，發(fā)現(xiàn)另有原因。方法用的150 mm 4.6 mm, 5-um C18 柱子，78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，進樣10ul，100%乙腈溶解的樣品。

一般來說，雖然10ul的純乙腈不會引起峰形不好，但是有時候樣品溶劑的極性跟流動相差異較大時，的確會引起峰形的問題。

我們怎么辦呢：

1． 從最容易的辦法做起，降低溶劑乙腈的比例。降到50%看看。從下圖B，4min的峰可以看出，沒啥改觀。

2． 接下來反沖柱子，結(jié)果圖C，基本沒變化。算，每天再說吧。

3． 第二天來到實驗室，還能干嘛呢？ 更換篩板？ 算了，直接換柱子吧。結(jié)果如D，噢，好很多噢。之前柱子肯定有問題，扔了。但是峰還是有點寬，估計還是哪兒有問題。

4． 手上忙，沒時間管這個。幾天過后，重新配了流動相，一跑，好了。如圖E。

雖然到底什么原因?qū)е碌闹胺逍蔚膯栴}已經(jīng)無從查找(柱子扔了，舊流動相也沒了)，但是也給我們一個解決問題的步驟：

1． 確定峰形問題是所有峰都有問題，還是就是某一個峰有問題。如果所有峰都有問題，基本都是色譜柱，或者儀器管路連接的問題。如果是某一個峰有問題，那就要從方法上來考慮，是否需要改變流動相比例，pH值，色譜柱溫度等等。

2． 從最簡單的做起，從不需要換什么東西的方法做起。比如改變樣品溶劑，反沖色譜柱等等。

3． 換東西。換保護柱，換色譜柱，換流動相(新配)。一步一步的換，有助于找到問題的根本。

4． 問題解決后，想想需不需要采取什么措施，防止類似問題的發(fā)生，比如說常換流動相啦，即時更換密封圈啦，記錄進樣次數(shù)了解什么時候色譜柱就不行了啊之類的

基線噪音是做液相的同學(xué)經(jīng)常感到頭疼的問題, 特別在做痕量分析時候.這次我們從物理,化學(xué)到電子等各個方面看看噪音的來源,以及如何減小和消除噪音.1.流動相的在線混合.所有的流動相在線混合都是從方便出發(fā)的結(jié)果, 流動相混合的不充分是基線噪音的一個重要來源.混合方式主要兩種:

a.低壓混合：采取時間脈沖的方式，利用比例閥，將不同流動相按一定比例混合。

b.高壓混合：利用多個泵頭，控制每個泵的流量，來將流動相按一定比例混合。

在流動相混合后，一般都有一個混合器(Mixer),來幫助混合的更加充分。從流動相開始混合在一起，到流動相到達色譜柱頭，這一段體積叫做延遲體積(Delay Volume).Mixer體積越大，混合越好，但是相應(yīng)延遲體積就越大，造成梯度的延遲。換句話說，就是流動相的變化，需要一定時間后，才能真正到達色譜柱，對分離產(chǎn)生影響。

a.這個現(xiàn)象在使用UPLC或者UHPLC的時候，會有比較明顯的作用。

b.為什么相同梯度方法，在不同儀器，或者不同品牌的儀器之間轉(zhuǎn)化時，保留時間可能不一樣？ 其主要原因就是延遲體積的不同。

在線混合很難做到非常均一的混合效果，這個在示差檢測器（RID）上的效果最明顯。這也是為什么示差檢測器都要求將流動相預(yù)混到一個瓶子里，不能走梯度的原因。

那如何減小因為混合而造成的基線噪音呢？

a.對于等度的方法，非常簡單，預(yù)混流動相就可以了。

b.對于梯度的方法，部分預(yù)混流動相也會幫助更好的混合，怎么做呢？看下面的例子。

方法要求乙腈/水比例從10%走到85%。那可以將流動相A配成10%的乙腈，流動相B配成85%的乙腈，然后A/B梯度從0%走到100%。這就是部分預(yù)混。

c.增大Mixer的體積。一般mixer的體積從幾百ul到幾個ml都有，在允許的延遲時間下，更換一個體積更大的Mixer，能夠有效提高混合的效率。每個色生產(chǎn)廠家的Mixer體積都不一樣,基本都可以混用.有碰到過一個Agilent的1100基線噪音大,后來換成1050的mixer就好了,因為1050的mixer比較大一些.2．液相硬件問題造成的基線噪音。

如果液相系統(tǒng)某些地方的工作不正常，也可能造成基線的噪音。

a.系統(tǒng)有漏。特別是肉眼無法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音。檢查的方法就是對系統(tǒng)進行壓力測試：將系統(tǒng)從某個地方用死堵堵上，如泵出口，或者自動進樣器出口，將壓力升高到350bar后停泵，監(jiān)測壓力下降的情況。一般的標準是2-3bar/min的下降是正常水平?；蛘?5%/10min的下降。

b.梯度比例問題?？梢詫ο到y(tǒng)進行一個梯度測試，來檢查梯度混合是否準確和一致。將A配成0.1%的丙酮，B是水。在265nm的波長下，將A的比例10%，20%，30%這樣一個一個的升高，每個比例走3min?？梢愿鶕?jù)計算，看每個基線臺階上升是否準確。也可以從0-100%走一個連續(xù)的梯度，看基線上升的平滑性和線性。

3．流動相脫氣不好造成的基線噪音。

對流動相進行脫氣，不僅僅是為了防止系統(tǒng)里面氣泡的產(chǎn)生。流動相脫氣越好，基線就會越好。如今最常用的脫氣方式是在線脫氣機，但是有的時候脫氣并不徹底。所以當有基線噪音問題是，可以考慮采取多種的脫氣方式。

4．系統(tǒng)潔凈程度。

前面1-3點講的都是內(nèi)在原因，造成的基線噪音或者波動。如果你前面的原因都找過了，問題還沒有解決，就得考慮一下是不是流動相里面是否有雜質(zhì)了。如何檢查判斷是否為流動相的問題呢？

a.每次更換一種流動相，看基線結(jié)果。

b.重新配置所有流動相。這種方式比較快，但可能無法找到根本原因。

要特別注意在流動相的配置過程中，是否引入了污染，比如使用了不干凈的玻璃器皿什么的。更換溶劑的品牌和批次也是方法之一。

色譜柱長期使用造成的污染有時候也會造成基線波動。有些時候樣品里面可能有些保留非常強的組分，可能在色譜柱上很長時間才慢慢被沖出來，這時候已經(jīng)不是一個峰了，而是基線的干擾或者波動了。

避免這種問題的方法：在每批樣品后，用甲醇或者已經(jīng)長時間沖洗色譜柱。另外，專柱專用也是一個好的習(xí)慣。如果一根色譜柱上作很多不同的樣品，也可能導(dǎo)致互相之間的污染和影響。

5．電路的噪音。

對于UV檢測器來說，就是采樣頻率不合適而產(chǎn)生的噪音?，F(xiàn)在隨著超高效液相的普及，檢測器的采樣頻率也越來越高，有的可以達到80Hz以上。但是如果一味追求高采樣頻率，可能對靈敏度沒有任何幫助，反倒產(chǎn)生比較大的噪音。(我們后面可能會有一起專門檢測器的時候,會更詳細的討論這個的原因)

一般來說，我們需要保證一個色譜峰上面有15-20個點，來保證比較平滑的峰形和比較準確的定量結(jié)果。如果我的一個峰的時間寬度是0.5min，就是是30s，那只要保證1Hz的采樣頻率就足夠了。如果在UPLC上面，一個峰的時間寬度是0.05min，也就是3s,就需要10Hz以上的采樣頻率。那80Hz的采樣頻率什么時候用呢？ 你的一個峰只有0.5s的時候。

理論上的計算是這樣的

N=16（T/W）^2

N是柱效。T是保留時間。W是峰寬。

一般色譜如果柱效12000的塔板數(shù)。在5min的時候，出峰寬度大概計算出來時11s。你可以根據(jù)計算結(jié)果來調(diào)整檢測器的合適的采樣頻率。

第五篇：氣相色譜培訓(xùn)教材

氣相色譜儀培訓(xùn)教材

第一章

氣相色譜簡介

氣相色譜儀的組成2

氣相色譜儀的原理

基本術(shù)語

常用概念

氣相色譜應(yīng)用的領(lǐng)域

氣相色譜儀的組成1.氣體

載氣：用于傳送樣品通過整個系統(tǒng)的氣體。

檢測器氣體：某些檢測器所需要的支持氣體。

2.進樣系統(tǒng)

將樣品蒸汽引入載氣

3.色譜柱

實現(xiàn)樣品組分的分離

4.檢測器

對流出柱的樣品組分進行識別和響應(yīng)

5.數(shù)據(jù)系統(tǒng)

將檢測器的信號轉(zhuǎn)換為色譜圖，并進行定性、6.氣相色譜的原理

在色譜法中存在.兩相，一相是固定不動的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相，我們把它叫做流動相。

7.氣相色譜的原理

色譜法的分離原理：.就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。使用外力使含有樣品的流動相(氣體、液體)通過與流動相互不相溶的固定相表面。當流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。按順序離開色譜柱進入檢測器，產(chǎn)生離子流信號經(jīng)放大后，在工作站中描繪出各組分的色譜峰。

8.基本術(shù)語

保留時間（Retention

time）：.組分從進樣到出現(xiàn)最大值所需要的時間；

峰面積（Peak

Area）：從峰的最大值到峰底的距離；

峰高（Peak

Heigh）：峰與峰底之間包圍的面積；

9.基本術(shù)語

分離度（resolution）：又稱分辨率，兩個相鄰峰的分離程度，兩個組分保留時間之差與其平均半峰寬值比值。

R＝2(tR2－tR1)/(W1＋W2)

固定相、柱溫及載氣的選擇是氣相色譜分離條件選擇的三個主要方面，用于提高相鄰兩組分的分離度，在作定量分析時，為了能獲得較好的精密度與準確度，應(yīng)使R≥1.5。

10.常用概念

噪聲：由于各種原.因引起的基線波動，稱為基線噪聲。無論在無組分流出還是有組分流出時，這種波動均存在。它是一種背景信號。噪聲分短期和長期噪聲二類。

漂移：基線隨時間單方向的緩慢變化，稱基線漂移。

響應(yīng)值：組分通過檢測器產(chǎn)生的信號。該值取決于組分的性質(zhì)和濃度。氣相色譜分析是用各組分的響應(yīng)值（峰面積或峰高）來定量的。為此，必須掌握各組分在不同檢測器上的響應(yīng)特征。

相對響應(yīng)因子：又稱相對響應(yīng)值（s）就是表明組分響應(yīng)特征的指標。它是指某一組分與相同量參比物質(zhì)，兩者響應(yīng)值之比。

靈敏度：指通過檢測器物質(zhì)的量變化時，該物質(zhì)響應(yīng)值的變化率。

.檢測限：將產(chǎn)生兩倍噪聲信號時，單位體積的載氣或單位時間內(nèi)進入檢測器的組分量

稱為檢測限。

線性：不同類型檢測器的響應(yīng)值與進入檢測器組分濃度、質(zhì)量或質(zhì)量流量之間的關(guān)系。

線性范圍：進入檢測器的組分量與其響應(yīng)值保持線性關(guān)系，或是靈敏度保持恒定所覆

蓋的區(qū)間。

11.氣相色譜應(yīng)用的領(lǐng)域

GC是一種極為廣泛.和重要的分析方法，范圍從石油化工、環(huán)境保護，到食品分析、醫(yī)療衛(wèi)生等

第二章

氣相色譜儀的主要組成部分

氣路部分

進樣口

色譜柱

檢測器

1.氣路

氣體：載氣（用于.傳送樣品通過整個系統(tǒng)的氣體）和檢測器氣體（部分檢測器所需要的支持氣體）。

載氣純度要求99.999%以上

氣體的選擇

根據(jù)檢測器類型而選擇.（不同檢測器使用載氣不同效果不同，F(xiàn)PD

和ECD可以選擇氮氣、氦氣及氬氣做載氣，但是氮氣效果更好）

惰性（所使用的氣體不能和樣品發(fā)生反應(yīng)）

純凈（氣體的純度可避免背景因素的影響）

干燥

捕集阱

脫水管：用來脫去氣體中微量的水分。

烴類捕集阱：用于捕集氣源中少量烴類。起源中的烴類會提高檢測器本底輸出，增大噪聲。

脫氧管：用來脫去氣體中微量的氧氣。微量的氧氣會破壞色譜柱，特別是毛細管柱，同時，氧氣也會降低電子捕獲檢測器的性能。

捕集阱的安裝

安裝捕集阱盡量靠近儀器位置。

安裝之前先將管路吹掃干凈防止沒必要的消耗。

安裝順序先脫水再脫烴后脫氧（脫烴和脫氧管可以捕集水份，成本比脫水管高，且難再生），定期更換

減壓閥壓力：推薦0.4MPa

1kPa=0.145psi=0.01bar

管路的選擇

使用銅管和不銹鋼管連接管路。

管路使用前應(yīng)用溶劑沖洗并使用載氣干燥。

定期對外加接頭檢漏。

塑料管不能用于管路連接（會滲透氧氣及其他污染物，同時會對檢測組分有干擾）

2.進樣口

進樣口類型

進樣口：使樣品以一種可重復(fù)的方式注入的裝置

填充進樣口

分流/不分流進樣口

程序升溫氣化進樣口

揮發(fā)進樣口

冷柱頭進樣

2.1

分流/不分流進樣口——分流模式

分流模式用于含量較高組分分析

載氣進入進樣口后經(jīng)總流量閥控制分兩部分，一部分通過隔墊表面吹掃流出，另一部分經(jīng)進樣口進入襯管，在襯管中與樣品氣體混合后小部分進入色譜柱，大部分經(jīng)分流出口放空，分流是通過分流平板的凹槽流出的。分流比為分流流量與柱流量的比值。

優(yōu)點

防止柱污染

適用范圍廣

靈活性大

分流比可調(diào)

分流歧視

在分流比一定條件下，不同樣品組分實際的分流比是不同的，這樣就會造成進入色譜柱的樣品組成不同于原來的樣品組成，從而影響定量分析的準確度。

造成分流歧視的原因有：

.不均勻汽化

.不同樣品組分在載氣中的擴散速度不同

.分流比的大小

.注意色譜柱的初始溫度，防止樣品發(fā)生部分冷凝

.還要保證色譜柱安裝時柱入口端超過分流點。

分流進樣口參數(shù)設(shè)置

.溫度：接近或等于組分中最重組分的沸點，保證組分快速汽化

.載氣流速：氮氣20-40cm/s

.分流比：20:1-200:1

分流比小分流歧視效應(yīng)小，溶劑峰變寬，分流比大溶劑峰窄分流歧視效應(yīng)大

襯管的選擇

分流進樣口可采用多種襯管，用于分流進樣的襯管大都不是直通的，常見的管內(nèi)都填充玻璃毛。

填充玻璃毛主要為了:

.增大與樣品接觸的比表面積，保證樣品完全汽化。

.減小分流歧視。

.防止固體顆粒和不揮發(fā)組分進入色譜柱。

2.2

分流/不分流進樣口——不分流模式

不分流模式用于痕量組分分析

不分流進樣和分流進樣采用同一個進樣口，將分流氣路的電磁閥關(guān)閉，使樣品全部進入色譜柱。不分流進樣不僅可以提高分析靈敏度，而且可以消除分流歧視。然而，在實際工作中，不分流進樣應(yīng)用遠沒有分流進樣普遍，只有在分流進樣不能滿足分析要求時（主要是靈敏度要求），才考慮使用不分流進樣。

這就要引入溶劑效應(yīng)的概念。

溶劑效應(yīng)

樣品汽化后的體積相對于柱內(nèi)載氣流量太大，汽化的樣品中溶劑是大量的，不可能瞬間進入色譜柱，結(jié)果溶劑峰就會嚴重拖尾，使早流出組分的峰被掩蓋在溶劑溶劑拖尾峰中，加大分析難度，這一現(xiàn)象被稱為溶劑效應(yīng)。

為了消除溶劑效應(yīng)，可以采用瞬間不分流技術(shù)，在進樣開始時關(guān)閉分流閥，使系統(tǒng)處于不分流狀態(tài)，待大部分樣品在襯管中汽化進入色譜柱后，在某指定時間開啟分流閥，使系統(tǒng)處于分流狀態(tài)，這樣，將襯管中剩余的蒸汽吹掃出襯管。就可以很大程度消除進樣體積大和柱流量小引起的溶劑拖尾。所以說不分流進樣不是絕對的不分流，而是分流與不分流的結(jié)合。

瞬間不分流時間的確定

這里，確定一個從進樣到開啟分流閥的時間是很關(guān)鍵的。這一時間（稱瞬間不分流時間或分流延遲時間、溶劑吹掃時間）應(yīng)足夠長，以保證絕大部分樣品進入色譜柱，避免分流歧視影響；同時又要盡可能短，以最大限度地消除溶劑拖尾，使早流出峰的分析更為準確。在實際工作中，常常是根據(jù)待測組分沸點和濃度等來確定一個優(yōu)化的折中點。大多采用0.75分鐘（即從進樣到開啟分流閥的時間為0.75分鐘），通常能保證95%以上的樣品進入色譜柱。

襯管的選擇

選擇直通式襯管，以保證樣品在襯管中盡可能少地稀釋。

對于相對“臟”的樣品，為保證分析的重現(xiàn)性和保護色譜柱不被污染則需填充玻璃毛。但由于不分流進樣時樣品在襯管中滯留的時間比分流進樣長，熱不穩(wěn)定化合物的分解可能性大，玻璃毛必須經(jīng)過硅烷化處理，且及時清洗更換。

溶劑的選擇

由于進樣口溫度、色譜柱初溫、溶劑吹掃時間和進樣體積都與溶劑沸點有關(guān)，所以不分流進樣對樣品溶劑有嚴格要求，一般來講，使用高沸點溶劑比低沸點溶劑有利，因為溶劑沸點高時，容易實現(xiàn)溶劑聚焦，且可使用較高的色譜柱初始溫度，還可以降低針尖歧視及襯管的壓力突變。另外，溶劑的極性一定要與樣品的極性相匹配，且要保證溶劑在所有被測組分之前出峰，溶劑還要與固定相匹配，才能實現(xiàn)有效的溶劑聚焦。

溶劑聚焦

.主要使溶劑峰變窄

.峰型美觀

.不會脫尾及變寬

.影響分離效果

.不分流進樣是分析高沸點痕量組分的首選方法。

不分流進樣口參數(shù)設(shè)置

.溫度：可以比分流進樣稍低，但要保證待測組分瞬間完全汽化。溫度過低會造成高沸點組分損失，溫度過高會造成樣品分解。

.載氣流速：流速應(yīng)高一點，分流出口的流量一般為30

至60ml/min

.溶劑吹掃時間：0.75分鐘。

分流/不分流進樣口——維護

.定期更換進樣墊。

.更換或清洗襯管。

.更換O型環(huán)。

.清洗分流平板。

.清洗更換進樣針

3.色譜柱

填充柱以一些材料.填充來吸附或吸收，由銅、不銹鋼或硅酸硼玻璃制成，內(nèi)徑大約2-4mm，長度為0.5-10m。

.毛細管柱內(nèi)壁覆蓋一種吸附或吸收材料，由熔融石英制成，內(nèi)徑細0.05-0.75mm，長度最長可達150m。

.氣相色譜中，固定相是一種固體材料，稱為氣固色譜法，用于永久氣體和低分子量的烴類分析。固定相是粘性液體時（一般是聚合物），稱為氣液色譜法，氣液色譜法占整個氣相色譜分析應(yīng)用的90%左右。

.通過樣品在固定相的分配或不同溶解度實現(xiàn)分離.組分基于不同的極性而分離（偶極力的作用），固定相可由其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同而引起的不同極性排序。

.通常遵循“相似相溶”或同極性相互作用。

.色譜柱越長分離效果越好。

.分離指標

.柱效：色譜柱形成尖銳峰的能力

.分離度：色譜柱將兩個峰彼此分開的能力

.選擇性：色譜柱確認兩個峰化學(xué)或物理性質(zhì)差別的能力

.影響分離指標的因素

.柱內(nèi)徑

.長度

.柱流量

.爐箱溫度

.柱子固定相類型。

.確保所分析組分與柱子的固定相有相互作用的能力。

.理論塔板：分離理論假定色譜柱被分為一些板，簡單理解為組分與固定相之間有相互作用的時刻

.如何提高柱效

.使用內(nèi)徑更小的色譜柱。

.減小固定相百分組成。

.減小固定相液膜厚度。

.減小進樣量。

.選用更長的色譜柱。

.使用程序升溫改善后流出組分峰形。

.長度：色譜柱的柱效與色譜柱的長度成正比，分辨率是色譜柱長度的平方根，保留時間與長度稱正比。

.直徑：色譜柱的直徑越小，效率越高，可加快分析速度；色譜柱的直徑越大，可容納的樣品量越大，但效率會下降。

.液膜厚度：液膜厚度影響分離的質(zhì)量，膜厚越厚，色譜柱樣品的容量越大，保留時間越長，峰越寬，效率越低，柱流失越大。

柱溫操作

.恒溫

在整個分析過程中，柱箱溫度保持恒定，升溫速率為零，導(dǎo)致后流出的峰展寬。

.程序升溫

針對組分有較寬的沸點范圍時使用，減少分析時間并使峰變窄，可設(shè)定多階程序升溫，導(dǎo)致增加了柱流失，引起基線漂移。

.保存

.色譜柱不使用時要密封保存。

.堵上柱子兩端，以保護柱子中固定液不被氧氣和其他污染物所污染。

.重新安裝色譜柱時注意安裝方向，.安裝時從柱頭截去少許以確保隔墊碎屑不會堵塞在柱子內(nèi)。

以下情況需老化：

.新柱應(yīng)老化除去殘留的溶劑。

.色譜柱中殘留有雜質(zhì)。

.長期不用的色譜柱應(yīng)老化去除存放過程中變性的固定相。

.步驟：

.將檢測器端色譜柱取下，用接口堵住檢測器入口；通入載氣，設(shè)定程序升溫循環(huán)老化（最高溫度比色譜柱的溫度上限低20℃），老化時間為2-3小時。

.設(shè)置老化溫度及時間時考慮的因素：溫度足夠高以除去不揮發(fā)物質(zhì)，溫度足夠低以延長柱壽命和減小柱流失，老化溫度越低老化時間應(yīng)越長。

安裝色譜柱

.選擇尺寸合適的密封墊材料；

.在色譜柱安裝前對柱端口進行切割，保證柱端口清潔平整；

.根據(jù)儀器制造廠商的指標，確定色譜柱安裝于進樣口和檢測器時插入適當?shù)木嚯x；

.毛細柱必須固定在柱架上，任何部分都不能接觸柱箱壁；

.安裝好后確保所有接頭不泄露。

3.檢測器

氣相色譜檢測器.是一種能檢測氣相色譜流出組分及其變化的器件。檢測器通常由傳感器和檢測電路組成。傳感器是利用被測物質(zhì)的各種物理性質(zhì)、化學(xué)性質(zhì)以及物理化學(xué)性質(zhì)與載氣的差異，來感應(yīng)出被測物質(zhì)的存在及其量的變化。檢測電路是將傳感器產(chǎn)生的各種信號轉(zhuǎn)變成電信號的裝置。從傳感器送出的信號是多種多樣的，有電阻、電流、電壓、離子流、頻率、光波等。檢測電路的作用是測定出這些參數(shù)的變化，并將其變成可測量的電信號。

常用檢測器的工作原理

.熱導(dǎo)檢測器：把載氣流分為兩部分，分別流經(jīng)一對參比熱導(dǎo)絲，當樣品通過其中一根熱導(dǎo)絲時，樣品稀釋了載氣而使熱導(dǎo)絲升溫，其電阻相對于參比熱導(dǎo)絲發(fā)生了變化，它對所有與載氣的熱電導(dǎo)有差異的化合物均有響應(yīng)。

.氫焰檢測器：樣品在氫氣、空氣火焰中燃燒產(chǎn)生離子，離子被收集后轉(zhuǎn)換成電流。氫焰檢測器對大多數(shù)有機物都有響應(yīng)，而多數(shù)無機物和一些帶雜原子的有機物響應(yīng)很小或沒有響應(yīng)。

.電子捕獲檢測器：通過Ni63放射源發(fā)射的低能電子被陽極收集產(chǎn)生電流，化合物捕獲這些電子導(dǎo)致電流降低而產(chǎn)生一個信號。電子捕獲檢測器對堿金屬化合物響應(yīng)非常靈敏。

.火焰光度檢測器：硫、磷化合物在氫氣、氧氣火焰中燃燒產(chǎn)生光發(fā)射。帶有濾光片的光電倍增器只選擇需要的波長來檢測這種發(fā)射?；鹧婀舛葯z測器對農(nóng)藥檢測尤其有用。

.氮磷檢測器：當燃燒的樣品通過氮磷檢測器中銣鹽珠時，產(chǎn)生離子。氮磷檢測器對農(nóng)藥中含N、P的檢測非常靈敏。

.質(zhì)量選擇檢測器：樣品被電子流轟擊后產(chǎn)生離子，這些離子按它們的質(zhì)荷比（M/Z）被分離后，測量器質(zhì)量數(shù)和豐度值。這種檢測器可以通過選擇適當?shù)馁|(zhì)量而使其選擇性強。

.響應(yīng)指標：

.靈敏度：單位含量樣品的響應(yīng)值，組分響應(yīng)值與含量構(gòu)成的直線的斜率，直線的最小值定義為最低檢出限，響應(yīng)高靈敏度大。

.選擇性：衡量檢測器對某些類型化合物是否有響應(yīng)。檢測器區(qū)分不同類別組分的能力。FID會識別任何烴的存在，ECD只可檢測電負性較大的物質(zhì)類型，如氟化物、氯化物、溴化物或碘化物等。NPD更具選擇性，只可檢測出有機氮或磷組分的存在，其他組分被忽略。

.動態(tài)范圍：檢測器提供的能正確定量的樣品濃度范圍，含量與電子捕獲檢測器。。

.電子捕獲檢測器是一種具有高靈敏度的離子化檢測器。它的選擇性高，僅對其有電負性的物質(zhì)有信號，電負性越強，靈敏度越高。.當電負性組分進入檢測器時，與電子碰撞并捕獲電子導(dǎo)致電流改變并產(chǎn)生信號

電子捕獲檢測器操作注意事項：

.尾吹氣不可采用氫氣或氦氣，一定使用氮氣；

.微量的氧氣會影響基線穩(wěn)定性；

.將檢測器出口通向室外；

.一旦檢測器污染，只能熱清洗。

.熱清洗步驟：

.關(guān)閉爐溫，從檢測器端取下色譜柱。

.用色譜柱螺母塞住檢測器連接口。

.檢測器溫度設(shè)定為350℃-375℃，尾吹氣設(shè)為60ml/min。

.保持熱清洗幾小時后將系統(tǒng)冷卻至正常操作溫度。

火焰光度檢測器

.原理

.利用富氫火焰使含硫或磷雜原子的有機物分解，形成激發(fā)態(tài)分子，當它們回到基態(tài)時，發(fā)射出一定波長的光，此光強度與被測組分量成正比，所以它是以物質(zhì)與光的相互關(guān)系為機理的檢測方法，屬于光度法?；鹧婀舛葯z測器是一種高靈敏度和高選擇性的檢測器。

.對于硫采用394nm或384nm濾光片，對磷用526nm濾光片，然后經(jīng)光電倍增管把光強度變成電訊號進行測量

.氣體設(shè)置

.尾吹氣：尾吹氣是從色譜柱出口處直接進入檢測器的一路氣體，又叫輔助氣，毛細管柱大都采用尾吹氣。.這是因為毛細管柱的柱內(nèi)載氣流量太低（常規(guī)柱為1-3ml/min），不能滿足檢測器的最佳操作條件（一般檢測器要求20ml/min的載氣流量）。在色譜柱后增加一路載氣直接進入檢測器，就可保證檢測器在高靈敏度狀態(tài)下工作。尾吹氣的另一個重要作用是消除檢測器死體積的柱外效應(yīng)。經(jīng)分離的化合物流出色譜柱后，可能由于管道體積增大而出現(xiàn)體積膨脹，導(dǎo)致流速緩慢，從而引起譜帶展寬，加入尾吹氣后就消除了這一問題。

.操作的注意事項

.更換濾光片前，關(guān)閉光電倍增管電壓；

.最高操作溫度嚴格按照廠商指標設(shè)置；

.避免使用腐蝕性強的氯化有機溶劑。

氮磷檢測器

.原理

.在一個氫氣/空氣等離子體環(huán)境下，氮磷檢測器的銣珠被電加熱至600-800℃，形成了催化活性的固體表面，有機氮或有機磷化合物分子被導(dǎo)入到催化活性表面周圍，被催化稱負離子及電子形成微電流，輸出的電流正比與收集到的離子數(shù)，用靜電計測量并將其轉(zhuǎn)化為數(shù)字形式，傳輸?shù)揭粋€輸出設(shè)備。

.參數(shù)設(shè)置

.推薦溫度設(shè)為325-335℃，設(shè)置較高的檢測器溫度好處：靈敏度有所提高，檢測器上端的絕緣環(huán)和密封圈的污染減輕，檢測器系統(tǒng)包括廢氣出口保持干凈，銣珠可以在較低的電壓下激發(fā)。

.操作注意事項

.安裝新銣珠初期手動調(diào)節(jié)銣珠電壓，選擇較小的銣珠電壓；

.設(shè)置較小的氫氣流量；

.溶劑峰通過銣珠時關(guān)閉氫氣；

.如果檢測器長期未使用，先烘烤然后再加電壓；

.使用高純氮氣、氫氣和空氣以確保檢測器的正常使用（純度99.999%以上）；

.如果靈敏度異常，不要輕易增加銣珠電壓，檢測收集極、噴嘴、陶瓷環(huán)和金屬密封圈是否需要清洗。

第三章

校正與定量

校正

定量

定量的方法

校正

.概念：是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應(yīng)組分的濃度或含量。

.必要性：當檢測器靈敏度針對不同的組分而變化時需要進行校正。

.檢測器對同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時需要進行校正。

.校正的過程：

.首先準備混合標樣，準確知道組分濃度；

.運行混合標樣；建立校正表；

.運行待測樣品并用校正表分析它；

.需要時進行重新校正。

*

對于需要時進行重新校正可以理解為使用質(zhì)控樣品衡量

.單級校正

.對每個峰只做一次校正。

.單級校正即單點校正，僅有一個濃度的標樣。

.單級校正定量結(jié)果不準確，但其簡單、快速。

.單級校正適用以下情況：

.做簡單的粗定量；

.當未知樣品的濃度小于且接近于標樣濃度時，所得定量結(jié)果較準確；

.主要用于檢出實驗，即不需要準確定量未知樣品含量，只關(guān)心未知樣品是否達標。

.多級校正

.對每個峰需要做至少兩次校正。

.多級校正即多點校正，糾正了單級校正的缺點，可以進行準確定量，將標樣等梯度稀釋，運行每一級稀釋好的標樣，在每一級上進行校正，先準備一個濃度必須高于未知樣品濃度，而且最終標樣的濃度范圍應(yīng)包含未知樣品濃度。

定量

定量是利用峰面積或峰高來確定樣品中化合物的含量。

.定量分析過程

.了解你所分析的化合物；

.建立一個分析的方法；

.運行一個或多個已知濃度的樣品，得到相應(yīng)的響應(yīng)值；

.分析未知濃度的樣品，得到相應(yīng)的響應(yīng)值；

.將未知濃度樣品的響應(yīng)值與已知濃度的該樣品的響應(yīng)值進行比較，確定其濃度。

.定量的方法

.百分比法

.歸一化法

.外標法

.內(nèi)標法

.外標百分比法

.內(nèi)標百分比法

.響應(yīng)因子

.響應(yīng)因子與組分的含量及其他組分的存在無關(guān)；在分析條件一定的條件下，響應(yīng)因子為物質(zhì)的特性；響應(yīng)因子可以校正檢測器響應(yīng)。

.百分比法

.常用于粗定量，或組分簡單、結(jié)構(gòu)相似的混合物分析，并且不需要建立校正表。

.外標法

.當校正樣和未知樣品在同樣的條件下分析時，未知樣品的結(jié)果與校正樣的結(jié)果相比較從而計算出未知物的含量，該方法是基本的定量方法，使用該方法時每次運行的進樣量必須是一致的。

.使用此法的前提假設(shè)是標樣中、未知樣品中待測組分的響應(yīng)因子相同。這就要求儀器必須具有良好的穩(wěn)定性，而且應(yīng)定期進行重新校正，否則標樣的響應(yīng)因子和未知樣品的響應(yīng)因子不相等，就無法進行準確定量。

外標法優(yōu)、缺點

.優(yōu)點：

.可以校正檢測器的響應(yīng)。

.只對欲分析的組分峰做校正。

.無需所有峰都能被檢測到。

.缺點：

.進樣量必須準確。

.儀器必須有良好的穩(wěn)定性。

.需定期做重新校正。

.內(nèi)標法

.內(nèi)標法是將內(nèi)標物加到一定量的被分析樣品混合物中，然后對含有內(nèi)標物的樣品進行色譜分析。

內(nèi)標法優(yōu)、缺點

.優(yōu)點：

.進樣不嚴格要求。

.只對欲分析的組分峰做校正

.校正檢測器的響應(yīng)

.缺點：

.必須加一個組分進到樣品。

內(nèi)標物的選擇

.選擇的標準

.樣品中不存在該組分。

.可迅速容易得到。

.化學(xué)性質(zhì)和樣品相似。

.與樣品有相似的響應(yīng)值（濃度范圍）。

.不會與樣品發(fā)生反應(yīng)。

.在感興趣組分附近流出。

.可得到分離良好的峰。

.色譜性質(zhì)穩(wěn)定。

外標法與內(nèi)標法比較

外標法是用標準品.的峰面積或峰高與其對應(yīng)的濃度做一條標準曲線,測出樣品的峰面積或峰高,通過該標準曲線上查對應(yīng)的濃度,內(nèi)標法是對應(yīng)外標法說的,外標法是用樣品和標準品對比,但是有時我們很難保證樣品和標準品進的體積是一樣的,畢竟要有誤差,這時候就用內(nèi)標法,就是在外標法的基礎(chǔ)上,在樣品和標準品里在加入一種物質(zhì),通過加入物質(zhì)的峰面積或峰高的變化,就可以看出我們標準品和樣品進樣體積的差別,如果進樣體積很難掌握,就用內(nèi)標法,可以消除進樣體積的誤差。內(nèi)標法工作曲線的橫、縱坐標分別為含量比和峰面積比；而外標法工作曲線的橫、縱坐標分別為含量和峰面積。

定量的方法

.歸一化法

.假定

–

所有組分都流出。

–

所有組分都被檢測到。

.優(yōu)點

缺點

進樣量不要求嚴格。

所有組分峰都要流出。

需測量所有的組分。

必須校正所有的峰。

第四章

儀器故障排除

不出峰與靈敏度降低

基線問題

色譜峰問題

分辨率降低

保留時間不重復(fù)

不出峰與靈敏度降低

.不出峰故障

.在選定操作條件下，給色譜儀注入規(guī)定的樣品，在記錄的譜圖上沒有相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)的現(xiàn)象。

.靈敏度異常故障

.雖然出峰，但大小卻與原來的已知譜圖相差甚大。

.排除故障步驟

.操作條件重復(fù)性檢查：核實操作條件是否與原條件接近。

.檢查檢測器有無反應(yīng)：檢測器響應(yīng)檢查應(yīng)檢測器類型而異。

.進樣針及進、取樣技術(shù)檢查：進樣針有無泄漏，抽取樣品時抽取了空氣或抽取樣品后沒及時進樣造成樣品揮發(fā)。

.載氣堵、漏檢查。

.進樣口安裝不當，載氣樣品流入不合理。

.儀器啟動后零點基線的調(diào)整檢查。

.檢測器連線及工作條件檢查。

基線問題

基線漂移一般是指基線向單方向持續(xù)升高或降低，最常見的原因是色譜柱固定性流失，色譜柱固定相流失是當色譜柱在其使用溫度上限時基線的升高。在較低的柱溫下如果有色譜峰，噪聲過高，基線漂移或基線升高等現(xiàn)象，就不是色譜柱的流失造成的。此類現(xiàn)象主要是由于柱效降低，例如柱污染等引起的。

.基線波動

.基線波動的原因比較多，進樣口、色譜柱、檢測器、載氣問題等都有可能導(dǎo)致基線的波動。

.基線噪聲

.基線噪聲增加最主要的原因

–

進樣口、色譜柱和檢測器污染

–

檢測器相關(guān)部件老化、設(shè)置不正確。

色譜峰問題

.色譜峰問題出現(xiàn)的表現(xiàn)

.前伸峰

.拖尾峰

.鬼峰

.分裂峰

.色譜峰大小改變

.拖尾峰

.色譜峰系中最常見的問題

.鬼峰

.氣相色譜分析中出現(xiàn)鬼峰，也就是色譜圖中的“

額外峰”，一般不是由于柱流失所引起，通常是由于污染引起的。另外在評價鬼峰時考查其峰寬是很重要的。寬的峰，有時候是原先樣品中的組分在色譜柱中慢慢洗脫導(dǎo)致的；窄的峰，可能是由于進樣口污染等引起的。

分辨率降低

.分辨率與分離度及峰寬有關(guān)

保留時間不重復(fù)

保留時間的重復(fù)性是.指3次或5次進同一樣品，其保留時間與它們的平均值的相對偏差值。如果這一相對偏差值超過了可接受的范圍，就認為保留時間不重復(fù)。

.引起保留時間不重復(fù)的最可能原因

.一個是柱溫不穩(wěn)定

.另一個是流速有變化

.其他原因還有

.進樣技術(shù)不佳

.進樣量過大及柱損傷等

.檢測器的故障不會造成保留時間的不重復(fù)

農(nóng)殘檢測技術(shù)

有國標法，行標法，我們經(jīng)常用的是行業(yè)標準檢測，這里以NY/T761-2008為例。

.試樣制備，按GB/T

8855標準抽取樣品，取可食部分粉碎后制成待測樣，在-20℃—-16

℃條件下保存

.農(nóng)藥標準溶液配制

.單一農(nóng)藥標準溶液：準確稱取一定量的農(nóng)藥標準品，用溶劑配制成大濃度的單一標準儲備液，儲存在-18

℃以下冰箱中，使用時根據(jù)各農(nóng)藥在對應(yīng)檢測器上的響應(yīng)值，稀釋成所需的標準

工作液

.農(nóng)藥混合標準溶液：對于多組分農(nóng)藥，可根據(jù)各農(nóng)藥在儀器上的響應(yīng)值，將各組分的單個農(nóng)藥儲備液按一定量注入同一容量瓶中，稀釋成所需質(zhì)量濃度的標準工作液。

有機磷類農(nóng)藥的測定

.原理

.試樣中有機磷類農(nóng)藥經(jīng)乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮、凈化后，用丙酮定容，經(jīng)毛細柱分離，火焰光度檢測器磷濾光片檢測，通過保留時間定性，外標法定量。

.提取

.經(jīng)乙腈提取的試樣通過高速勻漿后過濾，濾液經(jīng)分層后，收集一定量的上層乙腈相。

.凈化

.將提取的上層乙腈相蒸發(fā)近干后，用丙酮多次沖洗并轉(zhuǎn)移后定容，供測定。

.如果定容后的樣品溶液過于渾濁，應(yīng)用0.2μm濾膜過濾后再進行測定。

有機氯及擬除蟲菊酯菊酯類農(nóng)藥的檢測

.原理

.試樣中有機氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥用乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮后，采用固相萃取柱分離、凈化，淋洗液經(jīng)濃縮后，通過毛細柱分離，電子捕獲檢測器檢測，保留時間定性，外標法定量。

.提取

.試樣經(jīng)乙腈提取，過濾、濃縮后待凈化。

.凈化

.將待凈化溶液通過固相萃取柱（弗羅里矽柱）后收集洗脫液，準確定容，待測。

.固相萃取柱

.活化（使用活化試劑活化萃取柱）、上樣（將樣品注入）、淋洗（用淋洗液將雜質(zhì)洗掉）、洗脫（用洗脫液洗脫樣品）