第一篇：氣相色譜檢測瘦肉精的方法及危害

氣相色譜檢測瘦肉精的方法及危害

瘦肉精是一類動物用藥，有數(shù)種藥物被稱為瘦肉精，例如萊克多巴胺及克倫特羅等。將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。

瘦肉精的危害：瘦肉精，指的是一類動物用藥，包括鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和硫酸特布他林等，屬于腎上腺類神經(jīng)興奮劑。把 “瘦肉精”添加到飼料中，的確可以增加動物的瘦肉量。但國內(nèi)外的相關(guān)科學(xué)研究表明，食用含有 “瘦肉精”的肉會對人體產(chǎn)生危害，常見有惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒癥狀，特別是對心臟病、高血壓患者危害更大。長期食用則有可能導(dǎo)致染色體畸變，會誘發(fā)惡性腫瘤，至于究竟攝入多大量，如何導(dǎo)致惡性腫瘤，有關(guān)病例研究國內(nèi)外尚無定論。但是，近幾年，各地 “瘦肉精”致人中毒甚至死亡的案例時有發(fā)生。

檢測方法： 感官識別法--飼喂鹽酸克倫特羅比較嚴(yán)重的豬宰后肉色特別鮮紅、后臀肌肉飽滿突出，脂肪非常薄，而一般健康肉淡紅色，肉質(zhì)彈性好。

化學(xué)分析法--正常新鮮肉用試紙測試其酸堿度多呈中性或弱堿性，而含有鹽酸克倫特羅的豬肉則偏酸性，pH值明顯小于正常范圍，所以酸堿度法也能測。(雜質(zhì)干擾不準(zhǔn)確)

酶聯(lián)免疫法--適合對活體動物做大批量樣品的快速分析，但不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測，不做介紹。

色譜檢測技術(shù)--色譜技術(shù)包括高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、氣相色譜-傅里葉紅外聯(lián)用法(GC-FTIR)及薄層色譜法(TLC)等。目前，應(yīng)用最多的是高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。

為了更準(zhǔn)確的檢測出瘦肉精，在這里我們主要介紹氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。

對樣品(動物尿液)在pH=5.2的緩沖溶液中進(jìn)行提取。萃取的樣液用C18和SCX小柱，固相萃取凈化，分離的藥物殘留經(jīng)過雙三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用帶有質(zhì)量選擇檢測器的靈華氣相色譜儀測定。

優(yōu)點：檢測精確度高，準(zhǔn)確度高，效率較高，重現(xiàn)性好，較高的靈敏度，假陽性率低

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第二篇：氣相色譜培訓(xùn)教材

氣相色譜儀培訓(xùn)教材

第一章

氣相色譜簡介

氣相色譜儀的組成2

氣相色譜儀的原理

基本術(shù)語

常用概念

氣相色譜應(yīng)用的領(lǐng)域

氣相色譜儀的組成1.氣體

載氣：用于傳送樣品通過整個系統(tǒng)的氣體。

檢測器氣體：某些檢測器所需要的支持氣體。

2.進(jìn)樣系統(tǒng)

將樣品蒸汽引入載氣

3.色譜柱

實現(xiàn)樣品組分的分離

4.檢測器

對流出柱的樣品組分進(jìn)行識別和響應(yīng)

5.數(shù)據(jù)系統(tǒng)

將檢測器的信號轉(zhuǎn)換為色譜圖，并進(jìn)行定性、6.氣相色譜的原理

在色譜法中存在.兩相，一相是固定不動的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相，我們把它叫做流動相。

7.氣相色譜的原理

色譜法的分離原理：.就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進(jìn)行分離的。使用外力使含有樣品的流動相(氣體、液體)通過與流動相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。按順序離開色譜柱進(jìn)入檢測器，產(chǎn)生離子流信號經(jīng)放大后，在工作站中描繪出各組分的色譜峰。

8.基本術(shù)語

保留時間（Retention

time）：.組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大值所需要的時間；

峰面積（Peak

Area）：從峰的最大值到峰底的距離；

峰高（Peak

Heigh）：峰與峰底之間包圍的面積；

9.基本術(shù)語

分離度（resolution）：又稱分辨率，兩個相鄰峰的分離程度，兩個組分保留時間之差與其平均半峰寬值比值。

R＝2(tR2－tR1)/(W1＋W2)

固定相、柱溫及載氣的選擇是氣相色譜分離條件選擇的三個主要方面，用于提高相鄰兩組分的分離度，在作定量分析時，為了能獲得較好的精密度與準(zhǔn)確度，應(yīng)使R≥1.5。

10.常用概念

噪聲：由于各種原.因引起的基線波動，稱為基線噪聲。無論在無組分流出還是有組分流出時，這種波動均存在。它是一種背景信號。噪聲分短期和長期噪聲二類。

漂移：基線隨時間單方向的緩慢變化，稱基線漂移。

響應(yīng)值：組分通過檢測器產(chǎn)生的信號。該值取決于組分的性質(zhì)和濃度。氣相色譜分析是用各組分的響應(yīng)值（峰面積或峰高）來定量的。為此，必須掌握各組分在不同檢測器上的響應(yīng)特征。

相對響應(yīng)因子：又稱相對響應(yīng)值（s）就是表明組分響應(yīng)特征的指標(biāo)。它是指某一組分與相同量參比物質(zhì)，兩者響應(yīng)值之比。

靈敏度：指通過檢測器物質(zhì)的量變化時，該物質(zhì)響應(yīng)值的變化率。

.檢測限：將產(chǎn)生兩倍噪聲信號時，單位體積的載氣或單位時間內(nèi)進(jìn)入檢測器的組分量

稱為檢測限。

線性：不同類型檢測器的響應(yīng)值與進(jìn)入檢測器組分濃度、質(zhì)量或質(zhì)量流量之間的關(guān)系。

線性范圍：進(jìn)入檢測器的組分量與其響應(yīng)值保持線性關(guān)系，或是靈敏度保持恒定所覆

蓋的區(qū)間。

11.氣相色譜應(yīng)用的領(lǐng)域

GC是一種極為廣泛.和重要的分析方法，范圍從石油化工、環(huán)境保護(hù)，到食品分析、醫(yī)療衛(wèi)生等

第二章

氣相色譜儀的主要組成部分

氣路部分

進(jìn)樣口

色譜柱

檢測器

1.氣路

氣體：載氣（用于.傳送樣品通過整個系統(tǒng)的氣體）和檢測器氣體（部分檢測器所需要的支持氣體）。

載氣純度要求99.999%以上

氣體的選擇

根據(jù)檢測器類型而選擇.（不同檢測器使用載氣不同效果不同，F(xiàn)PD

和ECD可以選擇氮氣、氦氣及氬氣做載氣，但是氮氣效果更好）

惰性（所使用的氣體不能和樣品發(fā)生反應(yīng)）

純凈（氣體的純度可避免背景因素的影響）

干燥

捕集阱

脫水管：用來脫去氣體中微量的水分。

烴類捕集阱：用于捕集氣源中少量烴類。起源中的烴類會提高檢測器本底輸出，增大噪聲。

脫氧管：用來脫去氣體中微量的氧氣。微量的氧氣會破壞色譜柱，特別是毛細(xì)管柱，同時，氧氣也會降低電子捕獲檢測器的性能。

捕集阱的安裝

安裝捕集阱盡量靠近儀器位置。

安裝之前先將管路吹掃干凈防止沒必要的消耗。

安裝順序先脫水再脫烴后脫氧（脫烴和脫氧管可以捕集水份，成本比脫水管高，且難再生），定期更換

減壓閥壓力：推薦0.4MPa

1kPa=0.145psi=0.01bar

管路的選擇

使用銅管和不銹鋼管連接管路。

管路使用前應(yīng)用溶劑沖洗并使用載氣干燥。

定期對外加接頭檢漏。

塑料管不能用于管路連接（會滲透氧氣及其他污染物，同時會對檢測組分有干擾）

2.進(jìn)樣口

進(jìn)樣口類型

進(jìn)樣口：使樣品以一種可重復(fù)的方式注入的裝置

填充進(jìn)樣口

分流/不分流進(jìn)樣口

程序升溫氣化進(jìn)樣口

揮發(fā)進(jìn)樣口

冷柱頭進(jìn)樣

2.1

分流/不分流進(jìn)樣口——分流模式

分流模式用于含量較高組分分析

載氣進(jìn)入進(jìn)樣口后經(jīng)總流量閥控制分兩部分，一部分通過隔墊表面吹掃流出，另一部分經(jīng)進(jìn)樣口進(jìn)入襯管，在襯管中與樣品氣體混合后小部分進(jìn)入色譜柱，大部分經(jīng)分流出口放空，分流是通過分流平板的凹槽流出的。分流比為分流流量與柱流量的比值。

優(yōu)點

防止柱污染

適用范圍廣

靈活性大

分流比可調(diào)

分流歧視

在分流比一定條件下，不同樣品組分實際的分流比是不同的，這樣就會造成進(jìn)入色譜柱的樣品組成不同于原來的樣品組成，從而影響定量分析的準(zhǔn)確度。

造成分流歧視的原因有：

.不均勻汽化

.不同樣品組分在載氣中的擴(kuò)散速度不同

.分流比的大小

.注意色譜柱的初始溫度，防止樣品發(fā)生部分冷凝

.還要保證色譜柱安裝時柱入口端超過分流點。

分流進(jìn)樣口參數(shù)設(shè)置

.溫度：接近或等于組分中最重組分的沸點，保證組分快速汽化

.載氣流速：氮氣20-40cm/s

.分流比：20:1-200:1

分流比小分流歧視效應(yīng)小，溶劑峰變寬，分流比大溶劑峰窄分流歧視效應(yīng)大

襯管的選擇

分流進(jìn)樣口可采用多種襯管，用于分流進(jìn)樣的襯管大都不是直通的，常見的管內(nèi)都填充玻璃毛。

填充玻璃毛主要為了:

.增大與樣品接觸的比表面積，保證樣品完全汽化。

.減小分流歧視。

.防止固體顆粒和不揮發(fā)組分進(jìn)入色譜柱。

2.2

分流/不分流進(jìn)樣口——不分流模式

不分流模式用于痕量組分分析

不分流進(jìn)樣和分流進(jìn)樣采用同一個進(jìn)樣口，將分流氣路的電磁閥關(guān)閉，使樣品全部進(jìn)入色譜柱。不分流進(jìn)樣不僅可以提高分析靈敏度，而且可以消除分流歧視。然而，在實際工作中，不分流進(jìn)樣應(yīng)用遠(yuǎn)沒有分流進(jìn)樣普遍，只有在分流進(jìn)樣不能滿足分析要求時（主要是靈敏度要求），才考慮使用不分流進(jìn)樣。

這就要引入溶劑效應(yīng)的概念。

溶劑效應(yīng)

樣品汽化后的體積相對于柱內(nèi)載氣流量太大，汽化的樣品中溶劑是大量的，不可能瞬間進(jìn)入色譜柱，結(jié)果溶劑峰就會嚴(yán)重拖尾，使早流出組分的峰被掩蓋在溶劑溶劑拖尾峰中，加大分析難度，這一現(xiàn)象被稱為溶劑效應(yīng)。

為了消除溶劑效應(yīng)，可以采用瞬間不分流技術(shù)，在進(jìn)樣開始時關(guān)閉分流閥，使系統(tǒng)處于不分流狀態(tài)，待大部分樣品在襯管中汽化進(jìn)入色譜柱后，在某指定時間開啟分流閥，使系統(tǒng)處于分流狀態(tài)，這樣，將襯管中剩余的蒸汽吹掃出襯管。就可以很大程度消除進(jìn)樣體積大和柱流量小引起的溶劑拖尾。所以說不分流進(jìn)樣不是絕對的不分流，而是分流與不分流的結(jié)合。

瞬間不分流時間的確定

這里，確定一個從進(jìn)樣到開啟分流閥的時間是很關(guān)鍵的。這一時間（稱瞬間不分流時間或分流延遲時間、溶劑吹掃時間）應(yīng)足夠長，以保證絕大部分樣品進(jìn)入色譜柱，避免分流歧視影響；同時又要盡可能短，以最大限度地消除溶劑拖尾，使早流出峰的分析更為準(zhǔn)確。在實際工作中，常常是根據(jù)待測組分沸點和濃度等來確定一個優(yōu)化的折中點。大多采用0.75分鐘（即從進(jìn)樣到開啟分流閥的時間為0.75分鐘），通常能保證95%以上的樣品進(jìn)入色譜柱。

襯管的選擇

選擇直通式襯管，以保證樣品在襯管中盡可能少地稀釋。

對于相對“臟”的樣品，為保證分析的重現(xiàn)性和保護(hù)色譜柱不被污染則需填充玻璃毛。但由于不分流進(jìn)樣時樣品在襯管中滯留的時間比分流進(jìn)樣長，熱不穩(wěn)定化合物的分解可能性大，玻璃毛必須經(jīng)過硅烷化處理，且及時清洗更換。

溶劑的選擇

由于進(jìn)樣口溫度、色譜柱初溫、溶劑吹掃時間和進(jìn)樣體積都與溶劑沸點有關(guān)，所以不分流進(jìn)樣對樣品溶劑有嚴(yán)格要求，一般來講，使用高沸點溶劑比低沸點溶劑有利，因為溶劑沸點高時，容易實現(xiàn)溶劑聚焦，且可使用較高的色譜柱初始溫度，還可以降低針尖歧視及襯管的壓力突變。另外，溶劑的極性一定要與樣品的極性相匹配，且要保證溶劑在所有被測組分之前出峰，溶劑還要與固定相匹配，才能實現(xiàn)有效的溶劑聚焦。

溶劑聚焦

.主要使溶劑峰變窄

.峰型美觀

.不會脫尾及變寬

.影響分離效果

.不分流進(jìn)樣是分析高沸點痕量組分的首選方法。

不分流進(jìn)樣口參數(shù)設(shè)置

.溫度：可以比分流進(jìn)樣稍低，但要保證待測組分瞬間完全汽化。溫度過低會造成高沸點組分損失，溫度過高會造成樣品分解。

.載氣流速：流速應(yīng)高一點，分流出口的流量一般為30

至60ml/min

.溶劑吹掃時間：0.75分鐘。

分流/不分流進(jìn)樣口——維護(hù)

.定期更換進(jìn)樣墊。

.更換或清洗襯管。

.更換O型環(huán)。

.清洗分流平板。

.清洗更換進(jìn)樣針

3.色譜柱

填充柱以一些材料.填充來吸附或吸收，由銅、不銹鋼或硅酸硼玻璃制成，內(nèi)徑大約2-4mm，長度為0.5-10m。

.毛細(xì)管柱內(nèi)壁覆蓋一種吸附或吸收材料，由熔融石英制成，內(nèi)徑細(xì)0.05-0.75mm，長度最長可達(dá)150m。

.氣相色譜中，固定相是一種固體材料，稱為氣固色譜法，用于永久氣體和低分子量的烴類分析。固定相是粘性液體時（一般是聚合物），稱為氣液色譜法，氣液色譜法占整個氣相色譜分析應(yīng)用的90%左右。

.通過樣品在固定相的分配或不同溶解度實現(xiàn)分離.組分基于不同的極性而分離（偶極力的作用），固定相可由其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同而引起的不同極性排序。

.通常遵循“相似相溶”或同極性相互作用。

.色譜柱越長分離效果越好。

.分離指標(biāo)

.柱效：色譜柱形成尖銳峰的能力

.分離度：色譜柱將兩個峰彼此分開的能力

.選擇性：色譜柱確認(rèn)兩個峰化學(xué)或物理性質(zhì)差別的能力

.影響分離指標(biāo)的因素

.柱內(nèi)徑

.長度

.柱流量

.爐箱溫度

.柱子固定相類型。

.確保所分析組分與柱子的固定相有相互作用的能力。

.理論塔板：分離理論假定色譜柱被分為一些板，簡單理解為組分與固定相之間有相互作用的時刻

.如何提高柱效

.使用內(nèi)徑更小的色譜柱。

.減小固定相百分組成。

.減小固定相液膜厚度。

.減小進(jìn)樣量。

.選用更長的色譜柱。

.使用程序升溫改善后流出組分峰形。

.長度：色譜柱的柱效與色譜柱的長度成正比，分辨率是色譜柱長度的平方根，保留時間與長度稱正比。

.直徑：色譜柱的直徑越小，效率越高，可加快分析速度；色譜柱的直徑越大，可容納的樣品量越大，但效率會下降。

.液膜厚度：液膜厚度影響分離的質(zhì)量，膜厚越厚，色譜柱樣品的容量越大，保留時間越長，峰越寬，效率越低，柱流失越大。

柱溫操作

.恒溫

在整個分析過程中，柱箱溫度保持恒定，升溫速率為零，導(dǎo)致后流出的峰展寬。

.程序升溫

針對組分有較寬的沸點范圍時使用，減少分析時間并使峰變窄，可設(shè)定多階程序升溫，導(dǎo)致增加了柱流失，引起基線漂移。

.保存

.色譜柱不使用時要密封保存。

.堵上柱子兩端，以保護(hù)柱子中固定液不被氧氣和其他污染物所污染。

.重新安裝色譜柱時注意安裝方向，.安裝時從柱頭截去少許以確保隔墊碎屑不會堵塞在柱子內(nèi)。

以下情況需老化：

.新柱應(yīng)老化除去殘留的溶劑。

.色譜柱中殘留有雜質(zhì)。

.長期不用的色譜柱應(yīng)老化去除存放過程中變性的固定相。

.步驟：

.將檢測器端色譜柱取下，用接口堵住檢測器入口；通入載氣，設(shè)定程序升溫循環(huán)老化（最高溫度比色譜柱的溫度上限低20℃），老化時間為2-3小時。

.設(shè)置老化溫度及時間時考慮的因素：溫度足夠高以除去不揮發(fā)物質(zhì)，溫度足夠低以延長柱壽命和減小柱流失，老化溫度越低老化時間應(yīng)越長。

安裝色譜柱

.選擇尺寸合適的密封墊材料；

.在色譜柱安裝前對柱端口進(jìn)行切割，保證柱端口清潔平整；

.根據(jù)儀器制造廠商的指標(biāo)，確定色譜柱安裝于進(jìn)樣口和檢測器時插入適當(dāng)?shù)木嚯x；

.毛細(xì)柱必須固定在柱架上，任何部分都不能接觸柱箱壁；

.安裝好后確保所有接頭不泄露。

3.檢測器

氣相色譜檢測器.是一種能檢測氣相色譜流出組分及其變化的器件。檢測器通常由傳感器和檢測電路組成。傳感器是利用被測物質(zhì)的各種物理性質(zhì)、化學(xué)性質(zhì)以及物理化學(xué)性質(zhì)與載氣的差異，來感應(yīng)出被測物質(zhì)的存在及其量的變化。檢測電路是將傳感器產(chǎn)生的各種信號轉(zhuǎn)變成電信號的裝置。從傳感器送出的信號是多種多樣的，有電阻、電流、電壓、離子流、頻率、光波等。檢測電路的作用是測定出這些參數(shù)的變化，并將其變成可測量的電信號。

常用檢測器的工作原理

.熱導(dǎo)檢測器：把載氣流分為兩部分，分別流經(jīng)一對參比熱導(dǎo)絲，當(dāng)樣品通過其中一根熱導(dǎo)絲時，樣品稀釋了載氣而使熱導(dǎo)絲升溫，其電阻相對于參比熱導(dǎo)絲發(fā)生了變化，它對所有與載氣的熱電導(dǎo)有差異的化合物均有響應(yīng)。

.氫焰檢測器：樣品在氫氣、空氣火焰中燃燒產(chǎn)生離子，離子被收集后轉(zhuǎn)換成電流。氫焰檢測器對大多數(shù)有機(jī)物都有響應(yīng)，而多數(shù)無機(jī)物和一些帶雜原子的有機(jī)物響應(yīng)很小或沒有響應(yīng)。

.電子捕獲檢測器：通過Ni63放射源發(fā)射的低能電子被陽極收集產(chǎn)生電流，化合物捕獲這些電子導(dǎo)致電流降低而產(chǎn)生一個信號。電子捕獲檢測器對堿金屬化合物響應(yīng)非常靈敏。

.火焰光度檢測器：硫、磷化合物在氫氣、氧氣火焰中燃燒產(chǎn)生光發(fā)射。帶有濾光片的光電倍增器只選擇需要的波長來檢測這種發(fā)射?；鹧婀舛葯z測器對農(nóng)藥檢測尤其有用。

.氮磷檢測器：當(dāng)燃燒的樣品通過氮磷檢測器中銣鹽珠時，產(chǎn)生離子。氮磷檢測器對農(nóng)藥中含N、P的檢測非常靈敏。

.質(zhì)量選擇檢測器：樣品被電子流轟擊后產(chǎn)生離子，這些離子按它們的質(zhì)荷比（M/Z）被分離后，測量器質(zhì)量數(shù)和豐度值。這種檢測器可以通過選擇適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量而使其選擇性強(qiáng)。

.響應(yīng)指標(biāo)：

.靈敏度：單位含量樣品的響應(yīng)值，組分響應(yīng)值與含量構(gòu)成的直線的斜率，直線的最小值定義為最低檢出限，響應(yīng)高靈敏度大。

.選擇性：衡量檢測器對某些類型化合物是否有響應(yīng)。檢測器區(qū)分不同類別組分的能力。FID會識別任何烴的存在，ECD只可檢測電負(fù)性較大的物質(zhì)類型，如氟化物、氯化物、溴化物或碘化物等。NPD更具選擇性，只可檢測出有機(jī)氮或磷組分的存在，其他組分被忽略。

.動態(tài)范圍：檢測器提供的能正確定量的樣品濃度范圍，含量與電子捕獲檢測器。。

.電子捕獲檢測器是一種具有高靈敏度的離子化檢測器。它的選擇性高，僅對其有電負(fù)性的物質(zhì)有信號，電負(fù)性越強(qiáng)，靈敏度越高。.當(dāng)電負(fù)性組分進(jìn)入檢測器時，與電子碰撞并捕獲電子導(dǎo)致電流改變并產(chǎn)生信號

電子捕獲檢測器操作注意事項：

.尾吹氣不可采用氫氣或氦氣，一定使用氮氣；

.微量的氧氣會影響基線穩(wěn)定性；

.將檢測器出口通向室外；

.一旦檢測器污染，只能熱清洗。

.熱清洗步驟：

.關(guān)閉爐溫，從檢測器端取下色譜柱。

.用色譜柱螺母塞住檢測器連接口。

.檢測器溫度設(shè)定為350℃-375℃，尾吹氣設(shè)為60ml/min。

.保持熱清洗幾小時后將系統(tǒng)冷卻至正常操作溫度。

火焰光度檢測器

.原理

.利用富氫火焰使含硫或磷雜原子的有機(jī)物分解，形成激發(fā)態(tài)分子，當(dāng)它們回到基態(tài)時，發(fā)射出一定波長的光，此光強(qiáng)度與被測組分量成正比，所以它是以物質(zhì)與光的相互關(guān)系為機(jī)理的檢測方法，屬于光度法。火焰光度檢測器是一種高靈敏度和高選擇性的檢測器。

.對于硫采用394nm或384nm濾光片，對磷用526nm濾光片，然后經(jīng)光電倍增管把光強(qiáng)度變成電訊號進(jìn)行測量

.氣體設(shè)置

.尾吹氣：尾吹氣是從色譜柱出口處直接進(jìn)入檢測器的一路氣體，又叫輔助氣，毛細(xì)管柱大都采用尾吹氣。.這是因為毛細(xì)管柱的柱內(nèi)載氣流量太低（常規(guī)柱為1-3ml/min），不能滿足檢測器的最佳操作條件（一般檢測器要求20ml/min的載氣流量）。在色譜柱后增加一路載氣直接進(jìn)入檢測器，就可保證檢測器在高靈敏度狀態(tài)下工作。尾吹氣的另一個重要作用是消除檢測器死體積的柱外效應(yīng)。經(jīng)分離的化合物流出色譜柱后，可能由于管道體積增大而出現(xiàn)體積膨脹，導(dǎo)致流速緩慢，從而引起譜帶展寬，加入尾吹氣后就消除了這一問題。

.操作的注意事項

.更換濾光片前，關(guān)閉光電倍增管電壓；

.最高操作溫度嚴(yán)格按照廠商指標(biāo)設(shè)置；

.避免使用腐蝕性強(qiáng)的氯化有機(jī)溶劑。

氮磷檢測器

.原理

.在一個氫氣/空氣等離子體環(huán)境下，氮磷檢測器的銣珠被電加熱至600-800℃，形成了催化活性的固體表面，有機(jī)氮或有機(jī)磷化合物分子被導(dǎo)入到催化活性表面周圍，被催化稱負(fù)離子及電子形成微電流，輸出的電流正比與收集到的離子數(shù)，用靜電計測量并將其轉(zhuǎn)化為數(shù)字形式，傳輸?shù)揭粋€輸出設(shè)備。

.參數(shù)設(shè)置

.推薦溫度設(shè)為325-335℃，設(shè)置較高的檢測器溫度好處：靈敏度有所提高，檢測器上端的絕緣環(huán)和密封圈的污染減輕，檢測器系統(tǒng)包括廢氣出口保持干凈，銣珠可以在較低的電壓下激發(fā)。

.操作注意事項

.安裝新銣珠初期手動調(diào)節(jié)銣珠電壓，選擇較小的銣珠電壓；

.設(shè)置較小的氫氣流量；

.溶劑峰通過銣珠時關(guān)閉氫氣；

.如果檢測器長期未使用，先烘烤然后再加電壓；

.使用高純氮氣、氫氣和空氣以確保檢測器的正常使用（純度99.999%以上）；

.如果靈敏度異常，不要輕易增加銣珠電壓，檢測收集極、噴嘴、陶瓷環(huán)和金屬密封圈是否需要清洗。

第三章

校正與定量

校正

定量

定量的方法

校正

.概念：是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應(yīng)組分的濃度或含量。

.必要性：當(dāng)檢測器靈敏度針對不同的組分而變化時需要進(jìn)行校正。

.檢測器對同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時需要進(jìn)行校正。

.校正的過程：

.首先準(zhǔn)備混合標(biāo)樣，準(zhǔn)確知道組分濃度；

.運行混合標(biāo)樣；建立校正表；

.運行待測樣品并用校正表分析它；

.需要時進(jìn)行重新校正。

*

對于需要時進(jìn)行重新校正可以理解為使用質(zhì)控樣品衡量

.單級校正

.對每個峰只做一次校正。

.單級校正即單點校正，僅有一個濃度的標(biāo)樣。

.單級校正定量結(jié)果不準(zhǔn)確，但其簡單、快速。

.單級校正適用以下情況：

.做簡單的粗定量；

.當(dāng)未知樣品的濃度小于且接近于標(biāo)樣濃度時，所得定量結(jié)果較準(zhǔn)確；

.主要用于檢出實驗，即不需要準(zhǔn)確定量未知樣品含量，只關(guān)心未知樣品是否達(dá)標(biāo)。

.多級校正

.對每個峰需要做至少兩次校正。

.多級校正即多點校正，糾正了單級校正的缺點，可以進(jìn)行準(zhǔn)確定量，將標(biāo)樣等梯度稀釋，運行每一級稀釋好的標(biāo)樣，在每一級上進(jìn)行校正，先準(zhǔn)備一個濃度必須高于未知樣品濃度，而且最終標(biāo)樣的濃度范圍應(yīng)包含未知樣品濃度。

定量

定量是利用峰面積或峰高來確定樣品中化合物的含量。

.定量分析過程

.了解你所分析的化合物；

.建立一個分析的方法；

.運行一個或多個已知濃度的樣品，得到相應(yīng)的響應(yīng)值；

.分析未知濃度的樣品，得到相應(yīng)的響應(yīng)值；

.將未知濃度樣品的響應(yīng)值與已知濃度的該樣品的響應(yīng)值進(jìn)行比較，確定其濃度。

.定量的方法

.百分比法

.歸一化法

.外標(biāo)法

.內(nèi)標(biāo)法

.外標(biāo)百分比法

.內(nèi)標(biāo)百分比法

.響應(yīng)因子

.響應(yīng)因子與組分的含量及其他組分的存在無關(guān)；在分析條件一定的條件下，響應(yīng)因子為物質(zhì)的特性；響應(yīng)因子可以校正檢測器響應(yīng)。

.百分比法

.常用于粗定量，或組分簡單、結(jié)構(gòu)相似的混合物分析，并且不需要建立校正表。

.外標(biāo)法

.當(dāng)校正樣和未知樣品在同樣的條件下分析時，未知樣品的結(jié)果與校正樣的結(jié)果相比較從而計算出未知物的含量，該方法是基本的定量方法，使用該方法時每次運行的進(jìn)樣量必須是一致的。

.使用此法的前提假設(shè)是標(biāo)樣中、未知樣品中待測組分的響應(yīng)因子相同。這就要求儀器必須具有良好的穩(wěn)定性，而且應(yīng)定期進(jìn)行重新校正，否則標(biāo)樣的響應(yīng)因子和未知樣品的響應(yīng)因子不相等，就無法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

外標(biāo)法優(yōu)、缺點

.優(yōu)點：

.可以校正檢測器的響應(yīng)。

.只對欲分析的組分峰做校正。

.無需所有峰都能被檢測到。

.缺點：

.進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確。

.儀器必須有良好的穩(wěn)定性。

.需定期做重新校正。

.內(nèi)標(biāo)法

.內(nèi)標(biāo)法是將內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被分析樣品混合物中，然后對含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析。

內(nèi)標(biāo)法優(yōu)、缺點

.優(yōu)點：

.進(jìn)樣不嚴(yán)格要求。

.只對欲分析的組分峰做校正

.校正檢測器的響應(yīng)

.缺點：

.必須加一個組分進(jìn)到樣品。

內(nèi)標(biāo)物的選擇

.選擇的標(biāo)準(zhǔn)

.樣品中不存在該組分。

.可迅速容易得到。

.化學(xué)性質(zhì)和樣品相似。

.與樣品有相似的響應(yīng)值（濃度范圍）。

.不會與樣品發(fā)生反應(yīng)。

.在感興趣組分附近流出。

.可得到分離良好的峰。

.色譜性質(zhì)穩(wěn)定。

外標(biāo)法與內(nèi)標(biāo)法比較

外標(biāo)法是用標(biāo)準(zhǔn)品.的峰面積或峰高與其對應(yīng)的濃度做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,測出樣品的峰面積或峰高,通過該標(biāo)準(zhǔn)曲線上查對應(yīng)的濃度,內(nèi)標(biāo)法是對應(yīng)外標(biāo)法說的,外標(biāo)法是用樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對比,但是有時我們很難保證樣品和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)的體積是一樣的,畢竟要有誤差,這時候就用內(nèi)標(biāo)法,就是在外標(biāo)法的基礎(chǔ)上,在樣品和標(biāo)準(zhǔn)品里在加入一種物質(zhì),通過加入物質(zhì)的峰面積或峰高的變化,就可以看出我們標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進(jìn)樣體積的差別,如果進(jìn)樣體積很難掌握,就用內(nèi)標(biāo)法,可以消除進(jìn)樣體積的誤差。內(nèi)標(biāo)法工作曲線的橫、縱坐標(biāo)分別為含量比和峰面積比；而外標(biāo)法工作曲線的橫、縱坐標(biāo)分別為含量和峰面積。

定量的方法

.歸一化法

.假定

–

所有組分都流出。

–

所有組分都被檢測到。

.優(yōu)點

缺點

進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格。

所有組分峰都要流出。

需測量所有的組分。

必須校正所有的峰。

第四章

儀器故障排除

不出峰與靈敏度降低

基線問題

色譜峰問題

分辨率降低

保留時間不重復(fù)

不出峰與靈敏度降低

.不出峰故障

.在選定操作條件下，給色譜儀注入規(guī)定的樣品，在記錄的譜圖上沒有相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)的現(xiàn)象。

.靈敏度異常故障

.雖然出峰，但大小卻與原來的已知譜圖相差甚大。

.排除故障步驟

.操作條件重復(fù)性檢查：核實操作條件是否與原條件接近。

.檢查檢測器有無反應(yīng)：檢測器響應(yīng)檢查應(yīng)檢測器類型而異。

.進(jìn)樣針及進(jìn)、取樣技術(shù)檢查：進(jìn)樣針有無泄漏，抽取樣品時抽取了空氣或抽取樣品后沒及時進(jìn)樣造成樣品揮發(fā)。

.載氣堵、漏檢查。

.進(jìn)樣口安裝不當(dāng)，載氣樣品流入不合理。

.儀器啟動后零點基線的調(diào)整檢查。

.檢測器連線及工作條件檢查。

基線問題

基線漂移一般是指基線向單方向持續(xù)升高或降低，最常見的原因是色譜柱固定性流失，色譜柱固定相流失是當(dāng)色譜柱在其使用溫度上限時基線的升高。在較低的柱溫下如果有色譜峰，噪聲過高，基線漂移或基線升高等現(xiàn)象，就不是色譜柱的流失造成的。此類現(xiàn)象主要是由于柱效降低，例如柱污染等引起的。

.基線波動

.基線波動的原因比較多，進(jìn)樣口、色譜柱、檢測器、載氣問題等都有可能導(dǎo)致基線的波動。

.基線噪聲

.基線噪聲增加最主要的原因

–

進(jìn)樣口、色譜柱和檢測器污染

–

檢測器相關(guān)部件老化、設(shè)置不正確。

色譜峰問題

.色譜峰問題出現(xiàn)的表現(xiàn)

.前伸峰

.拖尾峰

.鬼峰

.分裂峰

.色譜峰大小改變

.拖尾峰

.色譜峰系中最常見的問題

.鬼峰

.氣相色譜分析中出現(xiàn)鬼峰，也就是色譜圖中的“

額外峰”，一般不是由于柱流失所引起，通常是由于污染引起的。另外在評價鬼峰時考查其峰寬是很重要的。寬的峰，有時候是原先樣品中的組分在色譜柱中慢慢洗脫導(dǎo)致的；窄的峰，可能是由于進(jìn)樣口污染等引起的。

分辨率降低

.分辨率與分離度及峰寬有關(guān)

保留時間不重復(fù)

保留時間的重復(fù)性是.指3次或5次進(jìn)同一樣品，其保留時間與它們的平均值的相對偏差值。如果這一相對偏差值超過了可接受的范圍，就認(rèn)為保留時間不重復(fù)。

.引起保留時間不重復(fù)的最可能原因

.一個是柱溫不穩(wěn)定

.另一個是流速有變化

.其他原因還有

.進(jìn)樣技術(shù)不佳

.進(jìn)樣量過大及柱損傷等

.檢測器的故障不會造成保留時間的不重復(fù)

農(nóng)殘檢測技術(shù)

有國標(biāo)法，行標(biāo)法，我們經(jīng)常用的是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測，這里以NY/T761-2008為例。

.試樣制備，按GB/T

8855標(biāo)準(zhǔn)抽取樣品，取可食部分粉碎后制成待測樣，在-20℃—-16

℃條件下保存

.農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

.單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取一定量的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用溶劑配制成大濃度的單一標(biāo)準(zhǔn)儲備液，儲存在-18

℃以下冰箱中，使用時根據(jù)各農(nóng)藥在對應(yīng)檢測器上的響應(yīng)值，稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)

工作液

.農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：對于多組分農(nóng)藥，可根據(jù)各農(nóng)藥在儀器上的響應(yīng)值，將各組分的單個農(nóng)藥儲備液按一定量注入同一容量瓶中，稀釋成所需質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

有機(jī)磷類農(nóng)藥的測定

.原理

.試樣中有機(jī)磷類農(nóng)藥經(jīng)乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮、凈化后，用丙酮定容，經(jīng)毛細(xì)柱分離，火焰光度檢測器磷濾光片檢測，通過保留時間定性，外標(biāo)法定量。

.提取

.經(jīng)乙腈提取的試樣通過高速勻漿后過濾，濾液經(jīng)分層后，收集一定量的上層乙腈相。

.凈化

.將提取的上層乙腈相蒸發(fā)近干后，用丙酮多次沖洗并轉(zhuǎn)移后定容，供測定。

.如果定容后的樣品溶液過于渾濁，應(yīng)用0.2μm濾膜過濾后再進(jìn)行測定。

有機(jī)氯及擬除蟲菊酯菊酯類農(nóng)藥的檢測

.原理

.試樣中有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥用乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮后，采用固相萃取柱分離、凈化，淋洗液經(jīng)濃縮后，通過毛細(xì)柱分離，電子捕獲檢測器檢測，保留時間定性，外標(biāo)法定量。

.提取

.試樣經(jīng)乙腈提取，過濾、濃縮后待凈化。

.凈化

.將待凈化溶液通過固相萃取柱（弗羅里矽柱）后收集洗脫液，準(zhǔn)確定容，待測。

.固相萃取柱

.活化（使用活化試劑活化萃取柱）、上樣（將樣品注入）、淋洗（用淋洗液將雜質(zhì)洗掉）、洗脫（用洗脫液洗脫樣品）

第三篇：氣相色譜教案

程序升溫氣相色譜法分離多組分混合樣品

一、實驗?zāi)康?/p>

1、加深對氣相色譜儀器分析方法基本原理的理解，掌握分析實驗的基本知識和技能。

2、學(xué)會正確使用溫嶺分析儀器廠的GC-9790型氣相色譜儀。

3、初步學(xué)會根據(jù)分析樣品探討和摸索程序升溫實驗的操作條件。

4、正確處理數(shù)據(jù)和表達(dá)實驗結(jié)果，對問題進(jìn)行一定的探討和解決。

5、了解苯的同系物毛細(xì)管程序升溫氣相色譜分析方法。

二、實驗原理

色譜法是一種重要的分離分析方法，是利用混合物不同組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)（或吸附系數(shù)、滲透性等），當(dāng)兩相作相對運動時，不同組分在兩相中進(jìn)行多次反復(fù)分配實現(xiàn)分離后，通過檢測器得以檢測，進(jìn)行定性定量分析（一般是以保留時間定性，峰面積定量）。氣相色譜法（gas chromatography，GC）是采用氣體作為流動相的一種色譜法。

典型的氣相色譜儀流程：具有穩(wěn)定流量的載氣，將進(jìn)樣后的樣品在汽化室汽化后，帶入色譜柱得以分離，不同組分先后從色譜柱流出，經(jīng)過檢測器和記錄儀，得到由代表不同組分及濃度的色譜峰組成的色譜圖。其組成有5部分，包括：載氣系統(tǒng)（氣源、凈化器、氣體流量控制和測量等）、進(jìn)樣系統(tǒng)（進(jìn)樣器和汽化室）、分離系統(tǒng)（色譜柱和溫控柱箱）、檢測系統(tǒng)（檢測器）、記錄和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（放大器、記錄儀和色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）。

程序升溫是指在色譜進(jìn)樣后，在一次樣品分析的時間周期內(nèi)，按一定的速度以預(yù)先設(shè)定好的升溫程序使整個色譜柱隨分析時間的延長呈現(xiàn)線形或非線形升溫，從而使樣品中的各個組分實現(xiàn)完全的分離。使用程序升溫來分析多組分、寬沸程的樣品時，在一個分析周期內(nèi)，按預(yù)定的加熱速率，柱溫隨分析時間的增加而呈線形（或非線形）增加，就會使樣品中的各個組分的分配系數(shù)都處于連續(xù)變小的狀態(tài)，使它們在氣相中的濃度不斷的提高，檢測器可在較短的時間內(nèi)連續(xù)接收到高濃度的各個組分，使其都在最佳柱溫（或稱保留溫度）下逸出，而獲得滿意的分離度和相接近的柱效，并縮短了總分析時間。目前在氣相色譜各類操作方式中，程序升溫方式在70%以上。程序升溫的條件，包括起始溫度、維持起始溫度的時間、升溫速率、最終溫度、維持最終溫度的時間，通常都要反復(fù)實驗加以選擇。

三、儀器及色譜條件

儀器型號：溫嶺分析儀器廠的GC—9790氣相色譜儀

色譜柱：內(nèi)徑0.53mm，長30m的SE-54大口徑交聯(lián)石英毛細(xì)管柱 樣品：分析純的苯、甲苯、二甲苯的混合物 色譜條件：

1、柱溫：采用二階程序升溫，其升溫程序如：從60℃以10℃/min的升溫速率升至90℃，然后以2℃/min的升溫速率升至110℃保持1分鐘即可。

2、汽化室溫度：180℃；檢測器溫度：180℃；進(jìn)樣量：0.02uL；空氣壓力：0.02Mpa；氮氣壓力0.02Mpa；氫氣壓力：0.13Mpa； 注：壓縮空氣由天津醫(yī)療器械二廠生產(chǎn)的WM-2A型無油氣體壓縮機(jī)提供，氫氣由北京惠普分析技術(shù)研究所生產(chǎn)的GCD-300B型氫氣發(fā)生器提供，高純氮氣由昆明梅塞爾公司提供。

四、操作步驟

1、按正常操作規(guī)程打開氮氣，在儀器內(nèi)流通；

2、打開色譜的電源開關(guān)，分別按實驗條件設(shè)置柱溫、汽化室溫度、檢測器溫度；

3、待汽化室、檢測室溫度達(dá)到設(shè)定溫度時，打開空氣、氫氣，點火；

4、待各條件都達(dá)到設(shè)定值后，進(jìn)樣；

5、依次按下色譜儀的“起始”鍵、記錄儀以及工作站的 “起始”鍵，儀器開始進(jìn)行分析；

6、測量完成后，切斷空氣、氫氣，設(shè)置柱溫到室溫，待柱溫降至室溫后，關(guān)閉色譜電源，切斷氮氣，結(jié)束實驗。

五、思考與討論題（4、5題必做，其余任選三題）

1、如何對分離樣品進(jìn)行定性和定量分析？

2、為什么可用程序升溫的方法來分離多組分、寬沸點的樣品？

3、常見色譜柱的種類、性能和適用范圍？

4、求3、4峰(或任意相鄰峰)的分離度？

5、用第1、5峰（或任意兩個峰）分別計算理論塔板數(shù)，并進(jìn)行結(jié)果比較。

6、進(jìn)樣操作應(yīng)注意哪些事項？在一定的色譜條件下，進(jìn)樣量的大小是否會影響色譜峰的保留時間和半峰寬度？

7、熱導(dǎo)檢測器和氫焰檢測器的工作原理是什么？

8、什么是色譜的保留時間、校正保留時間？保留時間受哪些因素影響？為什么會有死時間、死體積，其關(guān)系如何？

第四篇：瘦肉精檢測方法

目前，檢測瘦肉精的方法主要有四種，即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質(zhì)譜法（GC－MS）、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法（CE）和免疫分析技術(shù)（IA）。而我國結(jié)合自己的實際情況，2001年農(nóng)業(yè)部首先組織制定了飼料中鹽酸克倫特羅的測定標(biāo)淮。該標(biāo)準(zhǔn)選擇確定了兩種：即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質(zhì)譜法（GC－MS）。其中將HPLC法作為檢測瘦肉精的半確證性方法，其最低檢測限為 0．05μg/kg，優(yōu)點是檢測精確度高，而且假陽性率低；缺點是檢測過程煩瑣、檢測時間長，需貴重儀器、難于操作、價格昂貴。而GC一MS法優(yōu)點是能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析。GC－MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低，已將GC－MS法定為檢測瘦肉精的確證性方法。GC－MS法的缺點同HPLC相似。

(1)試劑和材料 以下所有試劑，除特別注明外，均為分析純試劑；水為符合GB／T6682規(guī)定的二級水。

①鹽酸克倫特羅對照品：含鹽酸克倫特羅不得少于98．5％

②鹽酸

③無水甲醇

④氫氧化鈉

⑤磷酸二氫鉀

⑥磷酸

⑦鹽酸溶液 取鹽酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀68g，加水800ml溶解并用磷酸調(diào)pH值至3．O，用水稀釋至1000ml，即得。

⑨0．05mol幾磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀6．88，加水800ml溶解并用磷酸調(diào)pH值至3．0，用水稀釋至1000mi，即得。

a．氫氧化鈉溶液 取氫氧化鈉48，加水使溶解成100mi，即得。

b．鹽酸克倫特羅對照品儲備液(1mg／mi)準(zhǔn)確稱取28．3mg鹽酸克倫特羅對照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩鹽酸克倫特羅對照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi儲備液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1個月。

⑾鹽酸克倫特羅對照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1個月。

⑿鹽酸克倫特羅檢測試劑盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)儀器和設(shè)備

①酶聯(lián)免疫反應(yīng)讀數(shù)儀

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷凍離心機(jī)

⑤50mi具塞離心管

⑥勻漿機(jī)

⑦微型振蕩器

⑧回旋振蕩器

⑨微量移液器 單道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干熱濃縮器

①空氣壓縮機(jī)

(3)測定步驟

①試料的制備(尿)

取供試尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為供試試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

取空白尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為空白試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

取空白尿2ml，于3000r／min離心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克倫特羅對照溶液20／H。作為2ug/l空白添加試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

②試料的制備(肝)

取約l00g新鮮或冷凍后融化的空白或供試豬肝,用勻漿機(jī)以10000r／rain勻漿1-2min，使均勻呈糊狀，一20~C以下冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

取均漿后的供試肝樣，作為供試試料。

取均漿后的空白肝樣，作為空白試料。

取均漿后的空白肝樣(1土0．05)e添加l00ng／m1的克倫特羅對照溶液20tzL作為2ng／g空白添加試料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z試料，置50ml離心管中；加鹽酸溶液5.0mi，旋渦混勻，中速振蕩1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度離心15min；上清液移人另一50ml離心管中，加入氫氧化鈉溶液300gL，混勻，振蕩15min；加0.5mol／l磷酸二氫鉀溶液4。0ml，混勻，2—8~C放置過夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度離心15min，上清液備用。

b．凈化(肝)C，固相萃取柱依次用無水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液2mi預(yù)洗，不使柱床干涸；將備用上清液全部過柱；用0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液2ml淋洗，擠干，棄去所有淋洗液；用無水甲醇2mi洗脫，流速控制在0.5ml／mm以下，擠干，收集洗脫液；于50～60~C下用氮氣或空氣緩緩吹干洗脫液；殘余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度離心15rain，清液作為試樣溶液供酶聯(lián)免疫測定法測定。

③測定

a．室溫應(yīng)控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的試劑盒，按每個標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液至少兩孔計算所需酶聯(lián)板條的數(shù)量，插入框架。每個微孔加入用緩沖溶液100倍稀釋的抗體100~tL，封口膜封板，室溫孵育30min。

c倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒有殘余液體。用多道移液器加水250pL到酶聯(lián)板的微?L內(nèi)，稍后倒出孔內(nèi)液體，再將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，如此重復(fù)操作洗板3次。

d．分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白試料、空白添加試料和供試試料各20uL，分別放入不同微孔底中央，并在每孔內(nèi)加入用緩沖溶液100倍稀釋的酶結(jié)合物100~I。，在微型振蕩器上混勻，用封口膜封好，室溫孵育30min。

e．倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒有殘余液體，重復(fù)洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物緩沖溶液10倍稀釋的底物100uL，室溫避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加終止液100uL。

h．在1h內(nèi)將酶聯(lián)板放于酶標(biāo)儀內(nèi)，于450nm波長處測定吸光度值。

(4)計算 用數(shù)據(jù)分析軟件對結(jié)果進(jìn)行分析，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出試料中克倫特羅的含量。

(5)靈敏度和回收率

本方法的平均檢測下限為0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加濃度水平上豬尿回收率范圍為60％一120％，豬肝回收率范圍為40％～120％。

第五篇：瘦肉精檢測方法

瘦肉精檢測

中文名：瘦肉精；克倫特羅；學(xué)名鹽酸克倫特羅；是一種平喘藥。該藥物既不是獸藥，也不是飼料添加劑，而是腎上腺類神經(jīng)興奮劑。鹽酸雙氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨雙氯喘通；氨雙氯醇胺。英文名：Clenbuterol;Spiropent;Planipart;NAB365；4-Amino-3,5-dichloro-alpha-(((1,1-dimethylethyl)amino)methyl)benzenemethanolCAS號：37148-27-9

分子式：C12-H18-Cl2-N2-O

理化特性

白色或類白色的結(jié)晶粉末，無臭、味苦，熔點161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

編輯本段

瘦肉精檢測方法

GB/T 5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

GC-MS法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。Fente C.A等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留，最低檢測限為5ng/g；Pteer Batioens應(yīng)用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS-MS)對牛、羊、豬組織

中的CLB含量進(jìn)行檢測，最低檢測限為2ng/g；劉琪等用GC-MS法（EI離子源）檢測豬尿中的CLB，檢測限為0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB，衍生物用電脈沖方式或化學(xué)離子化方式掃描，會產(chǎn)生更高的靈敏度。另外，GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法（NY/T468~2001）。

高效液相色譜法（HPLC）

HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的β-激動劑及其代謝產(chǎn)物，而且，HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實現(xiàn)分析過程的自動化。黃士新等(1995)應(yīng)用紫外檢測器，在λ=243nm，色譜柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱溫：室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的CLB殘留，最低檢測限可達(dá)2ng/g[4]。國外有人應(yīng)用HPLC(二極管陣列檢測器)測定動物性食品中CLB殘留，測得最低檢測限為1.26ng/g，回收率達(dá)98.9%[5]。目前，我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15ng/g，其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點是樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實際應(yīng)用中受到一定的限制。

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

利用免疫學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用，通過化學(xué)

方法將植物辣根過氧化物酶（HRP）與克倫特羅（CL）結(jié)合，形成酶偶聯(lián)克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合，然后加入待測克倫特羅和酶偶聯(lián)克倫特羅，它們競爭性與克倫特羅抗體結(jié)合，洗滌后加底物，根據(jù)有色物的變化計量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多，則被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量，比色的最佳波長為450 nm，參比波長應(yīng)大于600 nm。膠體金免疫層析法（Colloidal gold immunochromatography）利用競爭法膠體金免疫層析技術(shù)，檢測液中的Clen與金標(biāo)墊上的金標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，若Clen在檢測液中濃度低于靈敏度值，未結(jié)合的金標(biāo)抗體流到T區(qū)時，被固定在膜上的Clen-BSA偶聯(lián)物結(jié)合，逐漸凝集成一條可見的T線；若Clen濃度高于靈敏度值，金標(biāo)抗體全部形成復(fù)合物，不會再與T線處Clen-BSA偶聯(lián)物結(jié)合形成可見T線。未固定的復(fù)合物流過T區(qū)被C區(qū)的二抗捕獲并形成可見的C線。C線出現(xiàn)則表明免疫層析發(fā)生，即試紙有效.液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）

參見SN/T 1924—2007 進(jìn)出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物源性食品肌肉和內(nèi)臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。

試樣中的藥物殘留采用pH5.2的乙酸銨緩沖液提取，同時加入β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進(jìn)行酶解后，提取液經(jīng)C18和SCX

雙SPE柱凈化，液相色譜—質(zhì)譜進(jìn)行測定，內(nèi)標(biāo)法定量。