第一篇：PCR實(shí)驗(yàn)室報(bào)批細(xì)節(jié)、注意事項(xiàng)、常見問題問答

報(bào) 批 細(xì) 節(jié)

1、技術(shù)檔案：

技術(shù)人員簡歷表、培訓(xùn)檔案、要求有實(shí)質(zhì)性文件如每人的學(xué)歷證書、上崗證、科研成果（課題）、技術(shù)文章、獲獎證書等的復(fù)印件

2、儀器檔案：

實(shí)驗(yàn)室所有儀器的購買、使用、校正、放置地點(diǎn)、出廠編號、說明書復(fù)印件等

實(shí)驗(yàn)室所有儀器維護(hù)校正記錄如：加樣器、溫度計(jì)、溫濕度計(jì)需出具計(jì)量局校正報(bào)告文件（可每種只校正一套作為標(biāo)準(zhǔn)）。

擴(kuò)增儀需有儀器廠家專業(yè)技術(shù)人員維護(hù)校正報(bào)告，和校正后的參數(shù)。加樣器的出廠編號、使用時間、校正記錄。

5700維護(hù)后驗(yàn)證記錄—用同一公司或校準(zhǔn)試劑或用自制質(zhì)控血清并記錄數(shù)值

3、其他細(xì)節(jié): 垃圾處理：按生物污染性制品，交醫(yī)院統(tǒng)一處理。儀器簡單操作流程

標(biāo)記筆、槍頭盒等一些小物品都要標(biāo)明分區(qū)。儀器的申請、采購、使用、驗(yàn)證程序

樣本采集（針對臨床醫(yī)護(hù)人員）、運(yùn)輸、收集程序 樣品的唯一編號原則—應(yīng)區(qū)分開不同天、不同種類的標(biāo)本

標(biāo)本的保存程序—包括處理前、剛處理后、報(bào)告發(fā)放后的原始標(biāo)本（原則上至少保留一周）應(yīng)有專人負(fù)責(zé)。

檢測結(jié)果的保存、備份記錄、質(zhì)控記錄保存，除電腦記錄外應(yīng)有相應(yīng)的手抄記錄（類似于基因日檢測統(tǒng)計(jì)表類型的）。

抱怨記錄—應(yīng)有時間、事件（項(xiàng)目）、接待人、處理方法、處理結(jié)果、處理人簽字確認(rèn)

注 意 事 項(xiàng)

1、回答任何問題都應(yīng)與自己寫的SOP文件相一致.“寫你所做的,做你所寫的”.2、SOP文件不能寫的太虛,無法做到的東西不要寫,比如公司版的SOP文件里的加樣器的校準(zhǔn)一般實(shí)驗(yàn)室就做不到.模棱兩可也不要寫,比如“消毒時間一到兩小時”不能這樣寫,多少就是多少.3、處理標(biāo)本要在生物安全柜內(nèi),而加樣則在柜外.4、各區(qū)門口要貼有各區(qū)的工作制度,限入標(biāo)志.還要準(zhǔn)備兩個登記本,一個來記錄紫外消毒,一個來記錄工作人員出入.區(qū)內(nèi)還要有一個工作記錄本,用來記錄各區(qū)每天的工作內(nèi)容,便于監(jiān)測每天的工作全過程.5、每把槍的用途要清楚,不能弄亂.比如稀釋陽模的槍和處理標(biāo)本的槍不可混用.6、普通離心機(jī)處理分泌物標(biāo)本時應(yīng)在離心后靜置20分鐘才能開蓋.(許斌這樣認(rèn)為)

7、所有儀器、設(shè)備都要有檔案卡.8、所有的清潔消毒要在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后馬上進(jìn)行,尤其是儀器、設(shè)備.像擴(kuò)增儀，每天都要清潔，做完的反應(yīng)管決對不能留在樣品槽內(nèi)。

9、各區(qū)的拖把、抹布不得混用,標(biāo)記清楚.10、生物防護(hù)意識要強(qiáng),手套要隨時更換.生物防護(hù)安全的保證要從三個方面:制度、硬件、意識。

11、爆管如何處理:立即停止實(shí)驗(yàn),水浴里的水要倒掉,沖洗.所有可能污染的地方要用消毒液擦洗,紫外照射,通風(fēng)排風(fēng).12、各區(qū)應(yīng)有日常工作核查表,做為每天工作記錄的補(bǔ)充.13、各區(qū)要有泡有消毒液的生物污物桶,用來處理生物垃圾.14、驗(yàn)收組帶來的標(biāo)本要按平時對待臨床標(biāo)本一樣處理,要有接收記錄,結(jié)果登記等.15、拒絕電話或代領(lǐng)等非正常方式發(fā)放報(bào)告單.16、存放標(biāo)本的冰箱要上鎖,鑰匙及電腦資料的密碼要由本科室人員專人保管.17、報(bào)告單上要注明試劑的檢測下限,不能寫成參考范圍.除了有操作者,還要有核校者,且兩者姓名除了電子打印還要用手簽.定量結(jié)果不能有陰陽性提示,只能報(bào)數(shù)值.18、SOP文件中PE5700的溫濕度要求應(yīng)該為溫度15－30℃、濕度為< 80％。

19、SOP中

醫(yī)院申報(bào)實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

專家組參觀實(shí)驗(yàn)室回答的問題

1，“你們的冰箱的鐵鏈我可以從底下抽上來，實(shí)驗(yàn)室能做好保密性嗎？

可以的，你們能做到就行，注意保密！

2，實(shí)驗(yàn)室需要配置冷凍離心機(jī)，生物安全柜，如果做HCV時,注意重新添置新實(shí)驗(yàn)室。

3，生物防護(hù)中是否有銳器的防護(hù)注意事項(xiàng)？ 4，實(shí)驗(yàn)室的溫濕度計(jì)的放置位置？ 最好放在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

5，實(shí)驗(yàn)室中如何做好離心管抑制物的檢測？ 而非爆管、裂管的檢測！

6，在做HCV時規(guī)定從抽血化驗(yàn)到送達(dá)實(shí)驗(yàn)室要幾個小時要有明規(guī)定！3小時左右！

7，溶血標(biāo)本有何具體的判斷標(biāo)準(zhǔn)？脂血呢？

實(shí)驗(yàn)室末次會議的提問

1，你們單位（達(dá)安）試劑，當(dāng)我們新鮮標(biāo)本做HBV時，提取中40微升+40微升提取液處理，待放置過夜后，第二天加樣時，有的標(biāo)本特難取樣，有何處理辦法？ 2，實(shí)驗(yàn)室中垃圾你們?nèi)绾翁幚淼模?/p>

3，實(shí)驗(yàn)室中陰性標(biāo)準(zhǔn)檢測后變成陽性你怎么辦？（我們實(shí)驗(yàn)室一共有三管陰性陰性對照，第一個陰性檢測管是試劑什么都不加，直接上機(jī)，第二個陰性檢測管是試劑中加入在實(shí)驗(yàn)開始時打開蓋的1.5離心管帶有蒸餾水的，第三個陰性檢測管是與實(shí)驗(yàn)一起提取的陰性血清。）4，實(shí)驗(yàn)中如果陽性質(zhì)控，陽性梯度，標(biāo)本呈陰性請分別解釋？ 5，實(shí)驗(yàn)室必須配置生物安全柜，高速離心機(jī)！

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收現(xiàn)場問卷

（口試和/或筆試）

一.現(xiàn)有一個患者向你提出：“我在你們醫(yī)院檢測HBV DNA為陽性，但在另一家醫(yī)院檢測為陰性，你們醫(yī)院是怎么做的檢測？”，此時，你怎么辦？

（該題主要是考實(shí)驗(yàn)室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序）

二．現(xiàn)有一個臨床大夫拿著幾張HBV DNA定量PCR檢驗(yàn)報(bào)告單找到PCR實(shí)驗(yàn)室，說：“你們的PCR結(jié)果到底準(zhǔn)不準(zhǔn)，我這個病人剛開始檢測，HBV DNA是57×10拷貝數(shù)/ml，用了拉米呋啶治療后二周，再檢測結(jié)果為3×107拷貝數(shù)/ml，降了不少，但再過二周檢測，又變成了6×107拷貝數(shù)/ml，升高不少，這到底是怎么回事？”，如果這個大夫剛好問的是你，你怎么辦？并如何解釋其提出的問題？

(該題除了考實(shí)驗(yàn)室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序外，還要求其對特定PCR檢驗(yàn)的批間變異有充分的認(rèn)識)

回答思路：

這兩題分別對應(yīng)患者和臨床醫(yī)生提出的抱怨?？键c(diǎn)為你是否按照所制定的程序來處理：無論是患者還是醫(yī)生提出抱怨，我們都應(yīng)該“按照”程序先記錄抱怨人姓名、抱怨內(nèi)容等，然后等問題解決后記錄處理結(jié)果等，最后記錄反饋意見等。

注意：一般問題中出現(xiàn)“此時，你怎么辦？”，其考核的重點(diǎn)均為“形式”而非“內(nèi)容”。所以題目中無論病人抱怨的是服務(wù)態(tài)度不好還是結(jié)果報(bào)告不準(zhǔn)，醫(yī)生抱怨的是檢測結(jié)果和臨床診斷不符還是報(bào)告發(fā)放不及時，回答的方向都應(yīng)該是：“我們接待他們后，先在登記表上記錄抱怨的什么什么相關(guān)信息，做相應(yīng)處理，解決后記錄處理結(jié)果，最后填反饋表，歸檔總結(jié)，跟著以后改進(jìn)等等等等”。對各種具體問題的處理就按照實(shí)際情況來回答就行。

如果題目中出現(xiàn)要你具體“解釋某某提出的問題”時，這時是具體考察某一“內(nèi)容細(xì)節(jié)”了。第二題中看你對PCR檢驗(yàn)的批間變異有否充分的認(rèn)識：一般PCR檢測試劑盒存在著一定的批間甚至批內(nèi)差異，而且PCR檢測前處理也存在著一定的誤差，分析軟件相關(guān)參數(shù)的選擇也會使定量結(jié)果發(fā)生變動，這是方法學(xué)造成的不可避免的事實(shí)。同一操作人、同一儀器、同一批號試劑、同一份標(biāo)本同時做多份平行管，得到的結(jié)果都會不盡相同。所以我們都會允許結(jié)果存在一定范圍的偏差，一般為一個數(shù)量級的拷貝數(shù)。5×107、3×107和6×107均在允許的誤差范圍內(nèi)，排除了各種影響因素后，出現(xiàn)這種情況很正常，這說明了該病人用藥效果不佳。若定量結(jié)果有1～2個數(shù)量級甚至更大的變化才能反映用藥療效。

三．現(xiàn)有一人打電話到科室，說：“我孩子在你們醫(yī)院做了一項(xiàng)丙肝的PCR檢測，名字叫XXX，請你告訴我檢測結(jié)果好嗎？”。如果是你剛好接了這個電話，你會怎樣去做？

（該題考的是實(shí)驗(yàn)室人員在患者要求以電子郵件、電話、傳真等方式傳遞報(bào)告時，是否能按相應(yīng)的程序去做）

回答思路： 也是考形式?！皩τ谶@種非正常的報(bào)告發(fā)放形式，我們按照程序，是這樣這樣處理的。”因?yàn)楦鱾€醫(yī)院實(shí)際情況不同，所以無論你怎樣處理，只要程序中體現(xiàn)了對患者結(jié)果的保密原則，具體細(xì)節(jié)不會太要求。

在程序中按以下幾個方式寫都是可以的：

1、我們均不以任何非正常形式發(fā)放報(bào)告。（最干脆！就是有點(diǎn)不近人情，不過對我們來說省事）

2、實(shí)在有特殊情況，可以電話查結(jié)果，其它發(fā)放形式不行。但必須確認(rèn)身份，包括核對其所查詢的患者姓名、性別、年齡、檢測項(xiàng)目、送檢醫(yī)生、送檢日期、病區(qū)床號等情況，并提供患者ID號。

3、可以通過電話、圖文傳真、電子郵件等形式傳送結(jié)果，和上面一樣，需要核實(shí)身份。（最寬松了，不過麻煩了很多）

要注意的是：這些情況均應(yīng)明確告知查詢者，這幾種非正常形式發(fā)放的報(bào)告均僅為臨床提供參考，實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果以正式檢測報(bào)告單為準(zhǔn)。特殊情況報(bào)告發(fā)放后需詳細(xì)登記，簽署報(bào)告人姓名，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人簽字。

“報(bào)告的正確發(fā)放”為考核重點(diǎn)，一般可能還會引申出“你們是如何發(fā)放檢測結(jié)果報(bào)告？”之類的問題，按照程序中寫的實(shí)際情況回答就行的了。只要遵循保密原則就OK。

最簡單的無非把事情都推給醫(yī)院：說門診患者報(bào)告單送至服務(wù)臺門診報(bào)告發(fā)放處，由那里的醫(yī)生確認(rèn)身份后發(fā)放。（具體她們是怎么確認(rèn)、確不確認(rèn)這已經(jīng)不關(guān)我們的事了）。

若寫病人到科室領(lǐng)報(bào)告也行，只是“我們怎么確認(rèn)病人身份”要在程序中體現(xiàn)：詢問相關(guān)信息、根據(jù)收費(fèi)單或病歷唯一條形碼（若醫(yī)院采用計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)）確認(rèn)等等。

四．現(xiàn)有你科室同事，拿了一份血清標(biāo)本給你，說：“這是我一個熟人的標(biāo)本，他要做HCV RNA檢測，剛好他還做生化和免疫檢測，我從生化標(biāo)本分了一些出來，給你做HCV RNA?！蹦阌X得這樣行嗎？為什么？

（該題主要是考實(shí)驗(yàn)室人員對有關(guān)標(biāo)本的收集程序是否清楚并遵守）

回答思路：

問到了“為什么？”表示具體考到細(xì)節(jié)了。按照我們的收集程序，做PCR尤其是RNA項(xiàng)目需要獨(dú)立取血，不能從其它檢測的標(biāo)本中分出一些來做。而且對RNA標(biāo)本的采集、保存、運(yùn)輸都有嚴(yán)格的要求。

一般驗(yàn)收組會對這類問題加以引申。問你每天標(biāo)本在哪兒采集？采血的人員有否經(jīng)過專門培訓(xùn)？采集的標(biāo)本如何保存？

還可以順便問你結(jié)果發(fā)放后的標(biāo)本如何保存、保存在哪兒？保存多久？甚至要你把這多久多久前的標(biāo)本拿出來給他們看。

五．某一天，你在做HBV DNA熒光定量PCR檢測（方法的定量測定范圍為103～107拷貝數(shù)/ml）中，發(fā)現(xiàn)有1份標(biāo)本的測定Ct值超出方法的測定上限，此時你怎么辦？對于沒有特異擴(kuò)增曲線的標(biāo)本你又怎么報(bào)告結(jié)果？

回答思路： 此為具體問題：題目已經(jīng)假設(shè)了方法的定量測定范圍為103～107拷貝數(shù)/ml，我們就按照這個假設(shè)來考慮。先看是否為特異擴(kuò)增的曲線（即看曲線是否為標(biāo)準(zhǔn)的S形曲線），若為標(biāo)準(zhǔn)S形曲線表示的確為陽性標(biāo)本，Ct值超出檢測上限，表示未知標(biāo)本HBV DNA濃度過大，不在檢測線性范圍內(nèi)，應(yīng)該進(jìn)行濃度梯度稀釋（1/

10、1/100、1/1000??），重做實(shí)驗(yàn)，看哪個梯度處于線性范圍內(nèi)，得到原始濃度乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)即得。

若不是特異擴(kuò)增的曲線（也就是常見的那種前面翹、與閾值線有交點(diǎn)的陰性曲線，計(jì)算機(jī)不會具體分析，見有交點(diǎn)就給Ct值，而且Ct值還很小，小于測定上限的Cycle數(shù)），按陰性報(bào)。

六．在PCR檢測的核酸提取離心中，如發(fā)現(xiàn)有一管離心管出現(xiàn)破裂，此時你怎么辦？

（該題是考實(shí)驗(yàn)室人員對于其制定的實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備消毒清潔程序是否知道并遵守）

回答思路：

按照離心機(jī)的消毒清潔程序：必須先停止實(shí)驗(yàn)，將破裂管密封放入生物垃圾 桶，再用75%酒精擦拭離心室消毒，用移動紫外燈照射30～60分鐘后才能開始實(shí)驗(yàn)。

可以引申出：離心管破裂，可能質(zhì)量有問題，為防止以后同類事情的發(fā)生，按照耗材質(zhì)檢程序進(jìn)行離心管質(zhì)檢實(shí)驗(yàn)，若不合格停止使用，重新購買并進(jìn)行質(zhì)檢，合格的耗材才能使用。

七．有一個PCR實(shí)驗(yàn)室的熒光定量PCR儀如ABI 7000因某種原因搬動到了另一個實(shí)驗(yàn)臺面，實(shí)驗(yàn)室只是將儀器外表面擦了擦，即用于常規(guī)擴(kuò)增檢測工作，你覺得該實(shí)驗(yàn)室做得對嗎？為什么？

（該題是考實(shí)驗(yàn)室人員對于其制定的PCR儀校準(zhǔn)程序是否知道并遵守）

回答思路：

考核實(shí)驗(yàn)室人員對于其制定的PCR儀校準(zhǔn)程序是否知道并遵守。儀器移動應(yīng)該按照程序進(jìn)行校準(zhǔn)后才能重新用于常規(guī)擴(kuò)增檢測工作，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7000型核酸擴(kuò)增熒光檢測儀為復(fù)雜精密儀器，其校準(zhǔn)工作需由專業(yè)工程師 進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系儀器廠家派技術(shù)人員來校準(zhǔn)儀器。

平時就算不搬動儀器，實(shí)驗(yàn)室也應(yīng)與儀器廠家達(dá)成協(xié)議，定期校準(zhǔn)儀器。八．有一位實(shí)驗(yàn)室工作人員在做PCR實(shí)驗(yàn)中，一開始將化驗(yàn)單帶至標(biāo)本處理區(qū)，核酸提取完成后，進(jìn)入了擴(kuò)增區(qū)，但將化驗(yàn)單忘在了標(biāo)本處理區(qū)，此時，他應(yīng)該怎樣做？

（該題是考實(shí)驗(yàn)室人員對于其制定的實(shí)驗(yàn)室單一流向工作程序是否知道并遵守）

回答思路：

很簡單，按照單一流向原則，該實(shí)驗(yàn)員不能直接回2區(qū)拿單，要么請其他當(dāng)日未進(jìn)過擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的人員幫拿，要么嚴(yán)格按要求淋浴、換衣服后再次進(jìn)入2區(qū)拿化驗(yàn)單。

第二篇：PCR實(shí)驗(yàn)室

簡介

Pcr實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù)

條件

1、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實(shí)驗(yàn)室;實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出 由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它 有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣 泛應(yīng)用。本文試就其定量原理、方法及參照問題作一介紹

2、檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求;熒光定量PCR儀+實(shí)時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實(shí)時熒光定量檢測系統(tǒng)。

3、必須通過國家臨床檢驗(yàn)中心的驗(yàn)收和認(rèn)證;

4、檢測人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書;PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作人員必須參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗(yàn)中心舉辦的臨床基因擴(kuò)增培訓(xùn)班，并持證上崗。PCR實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收，實(shí)驗(yàn)室至少必須應(yīng)有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實(shí)驗(yàn)室必須建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP）、建立系列質(zhì)量管理文件等，確保實(shí)驗(yàn)室日常運(yùn)行符合國家衛(wèi)生部的要求，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確、確保實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生安全，確保實(shí)驗(yàn)室長期穩(wěn)定運(yùn)行

5、必須在無菌無塵環(huán)境下進(jìn)行操作

功能

能夠?qū)颊卟∏檫M(jìn)行科學(xué)、準(zhǔn)確、實(shí)時的掌控，并結(jié)合抗HBV與T細(xì)胞免疫來打破免疫耐受，阻斷肝病病毒復(fù)制的療法、有效的分解肝炎病毒，解決了乙肝病毒易變異、耐藥，病毒復(fù)制模板難以治療，人體免疫耐受狀態(tài)不易打破等醫(yī)學(xué)難題，能迅速消除臨床癥狀，而且有效抑制乙肝病毒復(fù)制，明顯加快e抗原、抗體的血清轉(zhuǎn)換速度，殺滅血液及肝細(xì)胞內(nèi)的病毒，為防止再感染提供了長期保護(hù)，有效阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化、肝硬化進(jìn)程。

建立方法

1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)

這個區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采取預(yù)防措施：⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無菌一次性移液管吸取。⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會產(chǎn)生氣溶膠。⑺任何時候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。

2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。

3、建立前PCR區(qū)。

該去專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)，這個區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。

4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。

⑴所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。⑵所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。⑸所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。⑹新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。⑺樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應(yīng)該小心保存。

5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。

⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時這樣做很有用。⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。⑸當(dāng)做陽性對照時，有兩個理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。⑹由于必須有對照反應(yīng)，對照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。

6、控制污染的方法。

已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消除污染問題，但可以將污染降低幾個數(shù)量級。

7、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的，決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動

第三篇：PCR實(shí)驗(yàn)室

高端PCR實(shí)驗(yàn)室控制設(shè)計(jì)說明

PCR實(shí)驗(yàn)室即分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，在醫(yī)療、科研、生物技術(shù)方面得到廣泛的應(yīng)用。因其在不同行業(yè)的應(yīng)用各有區(qū)別，在具體設(shè)計(jì)時也有不同之處，就醫(yī)療機(jī)構(gòu)的應(yīng)用而言，主要使用三區(qū)或四區(qū)設(shè)計(jì)，即試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品提取區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)；此類三區(qū)設(shè)計(jì)時候應(yīng)用于類似熒光定量型或同類PCR分析設(shè)備，及擴(kuò)增與分析過程在設(shè)備內(nèi)一次完成。而四區(qū)設(shè)計(jì)在三區(qū)的基礎(chǔ)上講擴(kuò)增分析區(qū)拆分為擴(kuò)增區(qū)與分析區(qū)適用于其他類型的pcr設(shè)備及手工處理。

在PCR實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)上，經(jīng)過多年的經(jīng)驗(yàn)累積，已經(jīng)在一些關(guān)鍵技術(shù)上達(dá)成了共識。因?yàn)镻CR實(shí)驗(yàn)中所產(chǎn)生的DNA與RNA片段過于微小，以至于可以穿透高效過濾器，所以在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)上已經(jīng)不在強(qiáng)制要求設(shè)計(jì)高效凈化系統(tǒng)，但是為了提高實(shí)驗(yàn)環(huán)境水平及保護(hù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的敖貴設(shè)備方面，如果在具備條件的情況下可考慮追加高效空氣凈化系統(tǒng)；建議凈化級別萬級。在PCR實(shí)驗(yàn)中所產(chǎn)生的DNA與RNA片段污染是一直以來PCR實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)問題。此類污染主要至上次試驗(yàn)中所產(chǎn)生的基因片段對下次試驗(yàn)產(chǎn)生的污染，而且一旦試驗(yàn)環(huán)境中的污染形成后很難處理。因?yàn)橄镜葌鹘y(tǒng)方式對于基因污染沒有很良好的效果。所以在PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中一般將整套實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)為全新風(fēng)型實(shí)驗(yàn)室，這樣而已通過有效的換氣次數(shù)來達(dá)到凈化室內(nèi)污染的作用。而在控制方面也有很多不同之處，因?yàn)楦鲉挝粚CR實(shí)驗(yàn)的重視程度各有不同，所以在設(shè)計(jì)上也有不同，主要的控制設(shè)計(jì)有定送定排式壓力控制系統(tǒng)、變送定排式壓力控制系統(tǒng)變送變排式壓力控制系統(tǒng)。在控制設(shè)備方面也有很多區(qū)分如壓力無關(guān)型控制系統(tǒng)、壓力有關(guān)型控制系統(tǒng)。

根據(jù)業(yè)主要求，本PCR實(shí)驗(yàn)室為三區(qū)設(shè)計(jì)，各區(qū)可獨(dú)立使用，不設(shè)置高效過濾系統(tǒng)等相關(guān)要求，根據(jù)業(yè)主以上要求，我方給出的設(shè)計(jì)方案為壓力無關(guān)型變送變排壓力控制系統(tǒng)。本系統(tǒng)的特點(diǎn)是，設(shè)備啟動后可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用節(jié)點(diǎn)調(diào)節(jié)送風(fēng)量及排風(fēng)量來控制各房間狀態(tài)，系統(tǒng)說明見下圖

? 每個房間可分別控制，使用時通過房間開關(guān)輸出啟動信號，當(dāng)設(shè)備接到啟動信號時設(shè)備運(yùn)行，運(yùn)行中根據(jù)管道壓力反饋決定變頻器大小，房間內(nèi)送排風(fēng)量由壓力無關(guān)型風(fēng)量調(diào)節(jié)閥控制。? 當(dāng)有多個房間開啟或關(guān)閉時，設(shè)備更加管道壓力反饋，調(diào)節(jié)設(shè)備變頻器增加或減少送排風(fēng)量來穩(wěn)定管道壓力。各房間內(nèi)壓力又房間內(nèi)的壓力無關(guān)型定風(fēng)量閥進(jìn)行控制。

? 當(dāng)BSC（生物安全柜，B2全排）開啟時BSC專用供風(fēng)機(jī)組運(yùn)行，BSC-供風(fēng)機(jī)-排風(fēng)機(jī)連鎖運(yùn)轉(zhuǎn)。

? 當(dāng)BSC做變風(fēng)量調(diào)節(jié)時，根據(jù)房間內(nèi)壓力變化，BSC專用供風(fēng)機(jī)組前安裝的壓力無關(guān)型變風(fēng)量調(diào)節(jié)閥根據(jù)壓力變化增減送風(fēng)量，確保房間壓力執(zhí)行在可控范圍內(nèi)。

? 當(dāng)房間不適用時，房間與緩沖間均關(guān)閉電動密閉閥，確保房間處在密閉狀態(tài)避免布朗運(yùn)動造成的可能污染風(fēng)險。

? 房間換氣次數(shù)均按照一定凈化標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)，當(dāng)室內(nèi)污染發(fā)生時，通過一定時間的換氣處理后，污染問題可以基本解決。? 本系統(tǒng)如果業(yè)主需要，可在室內(nèi)送風(fēng)口末端加裝高效過濾設(shè)備，房間可升級為凈化型實(shí)驗(yàn)室。

? 壓力無關(guān)型風(fēng)閥簡介：壓力無關(guān)型風(fēng)閥的特點(diǎn)是不會根據(jù)管道壓力的變化而影響風(fēng)閥內(nèi)部的送風(fēng)量，在一定管道壓力區(qū)間內(nèi)能夠自行調(diào)節(jié)閥體阻力，來穩(wěn)定送風(fēng)量，是高端實(shí)驗(yàn)室必備的關(guān)鍵部件，目前此類閥體技術(shù)均有國外生產(chǎn)廠家控制，目前國內(nèi)主用使用的產(chǎn)品有妥思、文丘里、西門子等品牌。

第四篇：PCR實(shí)驗(yàn)常見問題

【實(shí)驗(yàn)】PCR常見問題總結(jié)

作者: gene121(站內(nèi)聯(lián)系TA)發(fā)布: 2005-07-04 PCR產(chǎn)物的電泳檢測時間一般為48h以內(nèi)，有些最好于當(dāng)日電泳檢測，大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。一.假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶

PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量及活性 ④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析研究。

模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質(zhì)沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹底。在酶和引物質(zhì)量好時，不出現(xiàn)擴(kuò)增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應(yīng)固定不宜隨意更改。

酶失活：需更換新酶，或新舊兩種酶同時使用，以分析是否因酶的活性喪失或不夠而導(dǎo)致假陰性。需注意的是有時忘加Taq酶或溴乙錠。

引物：引物質(zhì)量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱，是PCR失敗或擴(kuò)增條帶不理想、容易彌散的常見原因。有些批號的引物合成質(zhì)量有問題，兩條引物一條濃度高，一條濃度低，造成低效率的不對稱擴(kuò)增，對策為：①選定一個好的引物合成單位。②引物的濃度不僅要看OD值，更要注重引物原液做瓊脂糖凝膠電泳，一定要有引物條帶出現(xiàn)，而且兩引物帶的亮度應(yīng)大體一致，如一條引物有條帶，一條引物無條帶，此時做PCR有可能失敗，應(yīng)和引物合成單位協(xié)商解決。如一條引物亮度高，一條亮度低，在稀釋引物時要平衡其濃度。③引物應(yīng)高濃度小量分裝保存，防止多次凍融或長期放冰箱冷藏部分，導(dǎo)致引物變質(zhì)降解失效。④引物設(shè)計(jì)不合理，如引物長度不 夠，引物之間形成二聚體等。

Mg2+濃度：Mg2+離子濃度對PCR擴(kuò)增效率影響很大，濃度過高可降低PCR擴(kuò)增的特異性，濃度過低則影響PCR擴(kuò)增產(chǎn)量甚至使PCR擴(kuò)增失敗而不出擴(kuò)增條帶。

反應(yīng)體積的改變：通常進(jìn)行PCR擴(kuò)增采用的體積為20ul、30ul、50ul。或100ul，應(yīng)用多大體積進(jìn)行PCR擴(kuò)增，是根據(jù)科研和臨床檢測不同目的而設(shè)定，在做小體積如20ul后，再做大體積時，一定要模索條件，否則容易失敗。

物理原因：變性對PCR擴(kuò)增來說相當(dāng)重要，如變性溫度低，變性時間短，極有可能出現(xiàn)假陰性;退火溫度過低，可致非特異性擴(kuò)增而降低特異性擴(kuò)增效率退火溫度過高影響引物與模板的結(jié)合而降低PCR擴(kuò)增效率。有時還有必要用標(biāo)準(zhǔn)的溫度計(jì)，檢測一下擴(kuò)增儀或水溶鍋內(nèi)的變性、退火和延伸溫度，這也是PCR失敗的原因之一。

靶序列變異：如靶序列發(fā)生突變或缺失，影響引物與模板特異性結(jié)合，或因靶序列某段缺失使引物與模板失去互補(bǔ)序列，其PCR擴(kuò)增是不會成功的。1假陽性

出現(xiàn)的PCR擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。

引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計(jì)引物。

靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：①操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。②除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或 器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及樣進(jìn)槍頭等均應(yīng)一次性使用。③必要時，在加標(biāo)本前，反應(yīng)管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性?？苫ハ嗥唇樱c引物互補(bǔ)后，可擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物，而導(dǎo)致假陽性的產(chǎn)生，可用巢式PCR方法來減輕或消除。2出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶

PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關(guān)。其次是酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。其對策有：①必要時重新設(shè)計(jì)引物。②減低酶量或調(diào)換另一來源的酶。③降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。④適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法(93℃變性，65℃左右退火與延伸)。3出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶

PCR擴(kuò)增有時出現(xiàn)涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)過多引起。其對策有：①減少酶量，或調(diào)換另一來源的酶。②減少dNTP的濃度。③適當(dāng)降低Mg2+濃度。④增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。二.PCR污染與對策

PCR反應(yīng)的最大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。污染原因

(一)標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散，導(dǎo)致彼此間的污染。

(二)PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染:這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題，因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量 大(一般為1013拷貝/ml)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物 污染，就可造成假陽就可形成假陽性。

還有一種容易忽視，最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管，開蓋時、吸樣時及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染.據(jù)計(jì)算一個氣溶膠顆?？珊?8000拷貝，因而由 其造成的污染是一個值得特別重視的問題.(四)實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染:在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗(yàn)室，這個問題也比較常見。因?yàn)榭寺≠|(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細(xì)胞的生長繁殖的簡便性及具有很強(qiáng)的生命力，其污染可能性也很大。污染的監(jiān)測

一個好的實(shí)驗(yàn)室，要時刻注意污染的監(jiān)測，考慮有無污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。對照試驗(yàn)

1.陽性對照:在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對照，它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標(biāo)志。陽性對照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽性對照，其含量宜低不宜高(100個拷貝以下)，但陽性對照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽性標(biāo)本，其對檢測或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大。因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定，檢驗(yàn)人員心中有數(shù)時，在以后的實(shí)驗(yàn)中可免設(shè)陽性對照。

2.陰性對照:每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對照。它包括①標(biāo)本對照:被檢的標(biāo)本是血清就用鑒定后的正常血清作對照;被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對照。②試劑對照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以監(jiān)測試劑是否污染。

3.重復(fù)性試驗(yàn)

4.選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增 防止污染的方法

(一)合理分隔實(shí)驗(yàn)室:將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行，特別注意樣本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng)與其它步驟嚴(yán)格分開。最好能劃分①標(biāo)本處理區(qū);②PCR反應(yīng)液制備區(qū);③PCR循環(huán)擴(kuò)增區(qū);④PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實(shí)驗(yàn)用品及吸樣槍應(yīng)專用，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將實(shí)驗(yàn)室用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。

(二)吸樣槍:吸樣槍污染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)或粘上槍頭是一個嚴(yán)重的污染源，因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心，吸樣要慢，吸樣時盡量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。

(三)預(yù)混和分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應(yīng)小量分裝，如有可能，PCR反應(yīng)液應(yīng)預(yù)先配制好，然后小量分裝，-20℃保存。以減少重復(fù)加樣次數(shù)，避免污染機(jī)會。另外，PCR試劑，PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同一冰盒或同一冰箱。

(四)防止操作人員污染，使用一次性手套、吸頭、小離心管應(yīng)一次性使用。(五)設(shè)立適當(dāng)?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ?，陽性對照以能出現(xiàn)擴(kuò)增條帶的最低量的標(biāo)準(zhǔn)病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性，每次反應(yīng)都應(yīng)有一管不加模板的試劑對照及相應(yīng)不含有被擴(kuò)增核酸的樣品作陰性對照。

(六)減少PCR循環(huán)次數(shù)，只要PCR產(chǎn)物達(dá)到檢測水平就適可而止。

(七)選擇質(zhì)量好的Eppendorf管，以避免樣本外溢及外來核酸的進(jìn)入，打開離心管前應(yīng)先離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。開管動作要輕，以防管內(nèi)液體濺出。

第五篇：PCR實(shí)驗(yàn)室說明

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個區(qū)域，進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出，四區(qū)域分別為： 1.試劑配制區(qū)n 2.樣品處理區(qū)n 3.核酸擴(kuò)增區(qū)n 4.產(chǎn)物分析區(qū)n 如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并,三四區(qū)可合并為擴(kuò)增產(chǎn)物分析。

各區(qū)的功能是： 1.1.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。1.1.2 樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。1.1.3 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報(bào)告。1.2 擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，須使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔。1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制。1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)： 1.4.1 在生物安全柜內(nèi)操作。1.4.2 每個實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)組分別使用各自的試劑及耗材。1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。1.4.4 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行清潔及消毒。設(shè)計(jì)要求：

PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式,現(xiàn)要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實(shí)驗(yàn)過程，若實(shí)驗(yàn)工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程。

一、分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室 所謂分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室，是指完成上述實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實(shí)驗(yàn)室，由于各個實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。

二、組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室 所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室, 是指完成PCR四個實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置，組成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室，由于各個實(shí)驗(yàn)間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換。

試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染,可以通過控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達(dá)到正壓效果。

核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓，以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品，可以通過控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)到負(fù)壓效果。

在理想情況下，PCR實(shí)驗(yàn)室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。

PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)風(fēng)由原有中央空調(diào)控制，要求將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到指定定點(diǎn)，且高度為地面鋪裝好后2600mm處。

如果使用熒光PCR儀，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并。

若房間進(jìn)深允許，可設(shè)PCR內(nèi)部專用走廊。需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。各個區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線條過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

如果使用熒光PCR儀，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并。

若房間進(jìn)深允許，可設(shè)PCR內(nèi)部專用走廊。需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。各個區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線條過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。主要設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū) 儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機(jī)等，加樣器、天平除了要專用外，還應(yīng)有定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進(jìn)行 擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級的，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴(kuò)增效果。標(biāo)本制備區(qū) 儀器設(shè)備主要有生物安全柜、加樣器、離心機(jī)、溫育儀、混勻器等

擴(kuò)增區(qū) 擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機(jī)、可移動紫外燈。擴(kuò)增儀需進(jìn)行校準(zhǔn)。并配備UPS電源，以防止由于電壓的波動，停電對擴(kuò)增效果的影響。分析區(qū) 本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等

潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實(shí)驗(yàn)室的八分之一,這是有規(guī)定的.1、主體結(jié)構(gòu)： 主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。

2、標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)： 將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物分析四個獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染?？纱蜷_緩沖區(qū)Ⅰ，緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣，在實(shí)驗(yàn)區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。

3、消毒： 在三個實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū) 還設(shè)置移動紫外線燈，對實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。

4、不銹鋼傳遞窗： 試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。

5、地面 地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。

6、照明 燈具要選用凈化燈具，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。在建設(shè)的過程中應(yīng)注意： ●規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程?！駠?yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程?！癜惭b前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進(jìn)線位置，電話網(wǎng)絡(luò)線進(jìn)線位置，進(jìn)水水壓，最小安裝空間，地面平整度，通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的空間尺寸 樣本處理區(qū)

三、工作區(qū)域及設(shè)備要求

（一）試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) 1、2-8C和-15C冰箱

2、混勻器

3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）

4、移動紫外燈（近工作臺面）

5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）

6、專用工作服和工作鞋

7、專用辦公用品

（二）標(biāo)本制備區(qū) 1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱

2、高速臺式冷凍離心機(jī)

3、混允器

4、水浴箱或加熱模塊

5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）

6、可移動紫外燈（近工作臺面）

7、生物安全柜

8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）

9、專用工作服和工作鞋

10、專用辦公用品 如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。

（三）擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

1、核酸擴(kuò)增儀

2、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）

3、可移動紫外燈（近工作臺面）

4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）

5、專用工作服和工作鞋

6、專用辦公用品(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 視檢驗(yàn)方法不同而定。基本儀器設(shè)備如下：

1、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）

2、可移動紫外燈（近工作臺面）

3、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）

4、專用工作服和工作鞋

5、專用辦公用品 5.人員和樣品的安全是由生物安全柜和定向氣流共同來保證。PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)程中規(guī)定人員和樣品必須單向流動。即從 “試劑準(zhǔn)備區(qū)到樣品制備區(qū)，再從樣品制備走向擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)”，絕對不能反向流動，以辟免交叉污染。氣流方向只規(guī)定試劑準(zhǔn)備區(qū)為微正壓或常壓，樣品制備區(qū)為常壓或負(fù)壓，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)為負(fù)壓，壓力梯度是從試劑準(zhǔn)備到產(chǎn)物分析區(qū)，是高到低的。規(guī)程并沒有規(guī)定要做成全新風(fēng)系統(tǒng)，但是為降低交叉污染的風(fēng)險，建議做成全新風(fēng)系統(tǒng)。概述 臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn)，是專門用來檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法，測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗(yàn)難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點(diǎn)，因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是，這種實(shí)驗(yàn)需要有能保證絕對安全、配置合理的實(shí)驗(yàn)室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)越來越得到重視，因?yàn)樗鼘z測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。本文主要從臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的平面布局，空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣流控制和污染的防制幾個方面對 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中的主要特點(diǎn)進(jìn)行了闡述。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。因此，實(shí)驗(yàn)室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進(jìn)行的。下面就對這幾個方面分別進(jìn)說明。2 PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。PCR實(shí)驗(yàn)室平面布置示意圖如圖1所示。圖1 PCR實(shí)驗(yàn)室平面布置示意圖 3 實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制 PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。3.1 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。3.2 標(biāo)本制備區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。3.3 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。3.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。4 污染的預(yù)防與控制 PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。在實(shí)際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到找到污染源為止，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費(fèi)人力物力。因此要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除。4.1 工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分（1）各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)置合理；（2）各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等），以避免各個不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2 合理的系統(tǒng)設(shè)置（1）合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；（2）嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。4.3 規(guī)范的操作（1）臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作；（2）在實(shí)驗(yàn)操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；（3）清潔工作及時、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。4.4 嚴(yán)格的管理（1）嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室，有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個實(shí)驗(yàn)區(qū)的門；（2）在各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服（如不同顏色），當(dāng)工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域；（3）盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；（5）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。4.5 完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施 完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺、離心機(jī)、加樣器等。

PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。3.1 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。3.2 標(biāo)本制備區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。3.3 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。3.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。4.0傳遞窗口的尺寸：

普通傳遞窗規(guī)格: SAT500 500x500x500（工作尺寸）SAT600 600x600x600（工作尺寸）潔凈傳遞窗規(guī)格: SAT600 600x600x600（工作尺寸）SAT1000 600x1000x600（工作尺寸）