第一篇：基因工程藥物的生產(chǎn)原理及其應(yīng)用

基因工程藥物的生產(chǎn)原理及其應(yīng)用

摘要：近年來(lái)，基因工程藥物在目的基因制備、載體的構(gòu)建、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)、宿主表達(dá)系統(tǒng)和生物反應(yīng)發(fā)生器等方面取得了令人矚目的成就。本文簡(jiǎn)單介紹基因工程藥物的生產(chǎn)原理及其重要應(yīng)用。關(guān)鍵詞：基因工程藥物 生產(chǎn)原理 應(yīng)用

隨著基因研究的深入，人類已經(jīng)可以生產(chǎn)出許多基因工程產(chǎn)品?；蚬こ趟幬镆脶t(yī)藥產(chǎn)業(yè),由此引起了醫(yī)藥工業(yè)的重大變革,使得醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)成為最活躍、發(fā)展最快的產(chǎn)業(yè)之一，同時(shí)大大提高了21世紀(jì)人類的整體健康狀況。

基因工程藥物又稱生物技術(shù)藥物是指利用基因工程技術(shù)研制和生產(chǎn)的藥物，是根據(jù)人們的愿望設(shè)計(jì)的基因,在體外剪切組合,并和載體DNA 連接,然后將載體導(dǎo)入靶細(xì)胞(微生物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或人體組織靶細(xì)胞),使目的基因在靶細(xì)胞中得到表達(dá),最后將表達(dá)的目的蛋白質(zhì)純化及做成制劑,從而成為蛋白類藥或疫苗。主要種類有：胰島素、單克隆抗體、荷爾蒙、干擾素、白細(xì)胞介素、組織型纖溶酶原激活因子、紅細(xì)胞生成素、集落刺激因子。生產(chǎn)原理

基因工程制藥技術(shù)分獲取目標(biāo)基因的上游技術(shù)和大量培養(yǎng)上游技術(shù)階段。上游技術(shù)實(shí)質(zhì)就是基因工程技術(shù)。下游技術(shù)則包括菌體培養(yǎng)，細(xì)胞破碎，大量培養(yǎng)以及分離純化幾個(gè)步驟。

1.1 基因工程制藥的上游技術(shù)

基因工程是生物工程的一個(gè)重要分支，它和細(xì)胞工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程和微生物工程共同組成了生物工程。所謂基因工程是在分子水平上對(duì)基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技術(shù)，是將外源基因通過(guò)體外重組后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使這個(gè)基因能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)的操作。它是用人為的方法將所需要的某一供體生物的遺傳物質(zhì)——DNA大分子提取出來(lái)，在離體條件下用適當(dāng)?shù)墓ぞ呙高M(jìn)行切割后，把它與作為載體的DNA分子連接起來(lái)，然后與載體一起導(dǎo)入某一更易生長(zhǎng)、繁殖的受體細(xì)胞中，以讓外源物質(zhì)在其中“安家落戶”，進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá)。

基因工程研究采用的技術(shù)方法很多，以下介紹常見(jiàn)基本兩種：聚合酶鏈反應(yīng)技和Sanger雙脫氫鏈終止法。

1.1.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法。

類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：

① 模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；

② 模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；

③ 引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍

作者簡(jiǎn)介:任灝詩(shī),女,漢族,籍貫(廣東佛山),大學(xué)本科,華南師范大學(xué)大二本科生, Email: 1030156661@qq．com 現(xiàn)在有些PCR因?yàn)閿U(kuò)增區(qū)很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的時(shí)間內(nèi)復(fù)制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時(shí)在60℃-65℃間進(jìn)行，以減少一次升降溫過(guò)程，提高了反應(yīng)速度。1.1.2 雙脫氫鏈終止法

核酸模板在核酸聚合酶、引物、四種單脫氧堿基存在條件下復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時(shí)，如果在四管反應(yīng)系統(tǒng)中分別按比例引入四種雙脫氧堿基，只要雙脫氧堿基摻入鏈端，該鏈就停止延長(zhǎng)，鏈端摻入單脫氧堿基的片段可繼續(xù)延長(zhǎng)。如此每管反應(yīng)體系中便合成以共同引物為5’端，以雙脫氧堿基為3’端的一系列長(zhǎng)度不等的核酸片段。反應(yīng)終止后，分四個(gè)泳道進(jìn)行電泳。以分離長(zhǎng)短不一的核酸片段(長(zhǎng)度相鄰者僅差一個(gè)堿基)，根據(jù)片段3’端的雙脫氧堿基，便可依次閱讀合成片段的堿基排列順序。主要步驟如下：

Sanger雙脫氧鏈終止法(酶法)測(cè)序程序 操作程序是按DNA復(fù)制和RNA反轉(zhuǎn)錄的原理設(shè)計(jì)的。

1.分離待測(cè)核酸模板，模板可以是DNA，也可以是RNA，可以是雙鏈，也可以是單鏈。

2.在4只試管中加入適當(dāng)?shù)囊?、模板?種dNTP(包括放射性標(biāo)記dATP，例如?32 PdATP和DNA聚合酶（如以RNA為模板，則用反轉(zhuǎn)錄酶），再在上述4只管中分別加入一種一定濃度的ddNTP(雙脫氧核苷酸)。

3.與單鏈模板（如以雙鏈作模板，要作變性處理)結(jié)合的引物，在DNA聚合酶作用下從5’端向3’端進(jìn)行延伸反應(yīng)，32P隨著引物延長(zhǎng)摻入到新合成鏈中。當(dāng)ddNTP摻入時(shí)，由于它在3’位置沒(méi)有羥基，故不與下一個(gè)dNTP結(jié)合，從而使鏈延伸終止。ddNTP在不同位置摻入，因而產(chǎn)生一系列不同長(zhǎng)度的新的DNA鏈。

4.用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳同時(shí)分離4只反應(yīng)管中的反應(yīng)產(chǎn)物，由于每一反應(yīng)管中只加一種ddNTP(如ddATP)，則該管中各種長(zhǎng)度的DNA都終止于該種堿基(如A)處。所以凝膠電泳中該泳道不同帶的DNA 3’ 末端都為同一種雙脫氧堿基。

5.放射自顯影。根據(jù)四泳道的編號(hào)和每個(gè)泳道中DNA帶的位置直接從自顯影圖譜上讀出與模板鏈互補(bǔ)的新鏈序列。1.2 基因工程制藥下游技術(shù)

1.2.1 基因工程菌的培養(yǎng)

基因工程菌的培養(yǎng)過(guò)程主要包括：

① 通過(guò)搖瓶操作了解工程菌生長(zhǎng)的基礎(chǔ)條件；

② 通過(guò)培養(yǎng)罐操作確定培養(yǎng)參數(shù)和控制的方案以及順序。

由于細(xì)胞生長(zhǎng)和異源基因表達(dá)之間有著較大的差異，各培養(yǎng)參數(shù)在全過(guò)程中必須分段控制。

培養(yǎng)方式主要有：

一、補(bǔ)料分批培養(yǎng)

補(bǔ)料分批培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進(jìn)一步生長(zhǎng)的培養(yǎng)方法。

二、連續(xù)培養(yǎng)

連續(xù)培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中，攪拌培養(yǎng)至一定菌體濃度后，開(kāi)動(dòng)進(jìn)料和出料的蠕動(dòng)泵，以控制一定稀釋率進(jìn)行不間斷的培養(yǎng)。連續(xù)培養(yǎng)可為微生物提供恒定的生活環(huán)境，控制其比生長(zhǎng)速率。

三、透析培養(yǎng)

透析培養(yǎng)是利用膜的半透性原理使代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基分離，通過(guò)去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來(lái)解除其對(duì)生產(chǎn)菌的不利影響。采用膜透析裝置是在發(fā)酵過(guò)程中用蠕動(dòng)泵將發(fā)酵液打作者簡(jiǎn)介:任灝詩(shī),女,漢族,籍貫廣東佛山),大學(xué)本科,華南師范大學(xué)大二本科生, Email: 1030156661@qq．com．

入罐外的膜透析器的一側(cè)循環(huán)，其另一側(cè)通入透析液循環(huán)。

四、固定化培養(yǎng)

基因工程菌經(jīng)固定化培養(yǎng)后，解決了質(zhì)粒的穩(wěn)定性問(wèn)題，該培養(yǎng)方式對(duì)分泌型菌更為有利

1.2.2基因工程菌細(xì)胞的破碎

現(xiàn)今，在基因工程菌的研究中，主要涉及有細(xì)菌，酵母和藻類。微生物的細(xì)胞壁比較堅(jiān)韌。

目前已發(fā)展了多種細(xì)胞破碎方法，以便適應(yīng)不同用途和不同類型的細(xì)胞壁破碎。破碎方法可規(guī)納為機(jī)械法和非機(jī)械法兩大類。

機(jī)械法有很多類型，常見(jiàn)的有：高壓勻漿破碎法（homogenization），振湯珠擊破碎法(Skaking Bead)，高速攪拌珠研磨破碎法（fine grinding），超聲波破碎法（ultrasonication）。

非機(jī)械法有如下類型：滲透壓沖擊破碎法（osmotic shock），凍融破碎法（freezing and thawing），酶溶破碎法（enzyme lysis），化學(xué)破碎法（chemical treatment），去垢劑破碎（detergents）。

1.2.3基因工程蛋白的分離和純化

基因重組產(chǎn)物均在其宿主細(xì)胞內(nèi)克隆表達(dá)，且大多為胞內(nèi)物質(zhì)?；蛑亟M蛋白的分離和純化，由于目標(biāo)產(chǎn)物的性質(zhì)和對(duì)產(chǎn)品純化要求不同，其分離和純化的方法和選擇的純化路徑也不同，但主要分為兩個(gè)方面：1.目標(biāo)產(chǎn)物的粗級(jí)分離，主要是在細(xì)胞培養(yǎng)后，將細(xì)胞從培養(yǎng)液中分離出來(lái)，然后再破碎細(xì)胞釋放產(chǎn)物，溶解包含體，復(fù)原蛋白質(zhì)以除去大部分雜質(zhì)；2.目標(biāo)產(chǎn)物的純化，這是在分離的基礎(chǔ)上，用各種具體高選擇性的精密儀器，使產(chǎn)物的純度和回收率。

主要分離技術(shù): 1．離心及沉淀 離心分離的原理是在轉(zhuǎn)子高速轉(zhuǎn)動(dòng)所產(chǎn)生的離心力的驅(qū)動(dòng)下，利用固體及液體間的密度差來(lái)進(jìn)行懸浮液，乳濁液的分離。沉淀原理是利用油和雜質(zhì)的不同密度，借助策略的作用，達(dá)到自然分離才者的一種方法。

2.膜分離 膜分離是在20世紀(jì)初出現(xiàn)，20世紀(jì)60年代后迅速崛起的一門(mén)分離新技術(shù)。膜分離技術(shù)由于兼有分離、濃縮、純化和精制的功能，又有高效、節(jié)能、環(huán)保、分子級(jí)過(guò)濾及過(guò)濾過(guò)程簡(jiǎn)單、易于控制等特征，因此，目前已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、生物、環(huán)保、化工、冶金、能源、石油、水處理、電子、仿生等領(lǐng)域，產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，已成為當(dāng)今分離科學(xué)中最重要的手段之一。

3.雙水相萃取 某些親水性高分子聚合物的水溶液超過(guò)一定濃度后可以形成兩相，并且在兩相中水分均占很大比例，即形成雙水相系統(tǒng)。利用親水性高分子聚合物的水溶液可形成雙水相的性質(zhì)，Albertsson于20世紀(jì)50年代后期開(kāi)發(fā)了雙水相萃取法，又稱雙水相分配法。20世紀(jì)70年代,科學(xué)家又發(fā)展了雙水相萃取在生物分離過(guò)程中的應(yīng)用，為蛋白質(zhì)特別是胞內(nèi)蛋白質(zhì)的分離和純化開(kāi)辟了新的途徑。

4.反膠團(tuán)萃取 蛋白質(zhì)溶解于小水池中(正萃，或稱萃取)，其周?chē)幸粚铀ぜ氨砻婊钚詣O性頭的保護(hù)，使其避免與有機(jī)溶劑接觸而失活。改變pH、鹽濃度等條件蛋白質(zhì)又可回到水相(反萃)，實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)的萃取分離、純化目的。反膠團(tuán)萃取蛋白質(zhì)的機(jī)理目前尚不十分清楚。一般認(rèn)為，萃取過(guò)程是靜電力、疏水力、空間力、親和力或幾種力協(xié)同作用的結(jié)果，其中蛋白質(zhì)與表面活性劑極性頭間的靜電相互作用是主要推動(dòng)力。根據(jù)所用表面活性劑類型，通過(guò)控制水相pH高于或低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)，達(dá)到正萃反萃的目的。

作者簡(jiǎn)介:任灝詩(shī),女,漢族,籍貫廣東佛山),大學(xué)本科,華南師范大學(xué)大二本科生, Email: 1030156661@qq．com．

基因工程藥物應(yīng)用事例

2.1胰島素

胰島素是基因工程藥物最重要的代表。胰島素是由胰產(chǎn)生的一種蛋白。它在人體新陳代謝中起著重要作用，如果體內(nèi)不足就會(huì)引發(fā)糖尿病，因此胰島素是治療糖尿病的特效藥。這種病發(fā)病率很高，困擾著上千萬(wàn)人。過(guò)去從豬、牛胰中提取胰島素，產(chǎn)量低，滿足不了患者的需求?，F(xiàn)在利用基因工程技術(shù)，有兩種方法可以讓微生物發(fā)酵產(chǎn)生胰島素。一種是先在大腸桿菌中分別合成胰島素A鏈和B鏈，然后再在體外用化學(xué)方法將兩條鏈連接成胰島素。美國(guó)Eli lilly公司采用這種方法生產(chǎn)胰島素。另一種是采用分泌型載體表達(dá)胰島素原，然后再將其轉(zhuǎn)化為胰島素。丹麥Novo Nordisk公司就是采用重組酵母分泌產(chǎn)生胰島素原，再用酶法轉(zhuǎn)化為人胰島素。2.2干擾素

干擾素是病毒入侵人體或其他動(dòng)物后，機(jī)體產(chǎn)生的可以對(duì)多種病毒具有抵抗能力，抑制它們復(fù)制、增殖的一種蛋白質(zhì)。它是一類在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性受細(xì)胞基因組的調(diào)控。在一般生理狀態(tài)下，細(xì)胞的干擾素基因呈靜止?fàn)顟B(tài)，只有在干擾素誘導(dǎo)劑作用下，干擾素基因才進(jìn)行轉(zhuǎn)錄并翻譯出具有種屬特異性的干擾素。干擾素本身不能直接殺滅活病毒，但是它能使細(xì)胞產(chǎn)生許多抗病毒蛋白質(zhì)，使病毒的mRNA不能和核酸體結(jié)合，因而無(wú)法合成病毒蛋白質(zhì)，從而減少了新病毒粒子的合成，阻斷了病毒的增殖。它在臨床上主要用于惡性腫瘤和病毒性疾病的治療。

過(guò)去，干擾素一般只能從感染病毒的人血液中的白細(xì)胞或纖維中提取，量少價(jià)昂，難以應(yīng)用于臨床。1980年美國(guó)基因技術(shù)公司把人體血細(xì)胞干擾素基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌或酵母菌中，成功表達(dá)。其中a、β、r種干擾素已工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品已投放市場(chǎng)。我國(guó)也已生產(chǎn)出a型和r型干擾素。2.3重組疫苗

所謂重組疫苗就是利用重組DNA技術(shù)，克隆并表達(dá)抗原基因的編碼序列，并將表達(dá)產(chǎn)物用作疫苗。重組疫苗的重要性在于它可以替代滅活或無(wú)感染力的病原微生物來(lái)進(jìn)行免疫。第一個(gè)應(yīng)用于人體的重組疫苗是用酵母菌生產(chǎn)的乙肝疫苗。它是將乙肝表面蛋白抗原基因在酵母菌 中克隆和表達(dá)，生產(chǎn)出來(lái)的蛋白及其聚合物與在感染體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的十分相似，將這些聚合物純化，制成乙肝疫苗，可以用于使人體產(chǎn)生對(duì)乙肝病毒的免疫力。

在生物技術(shù)總的發(fā)展趨勢(shì)下，基因工程制藥仍是21世紀(jì)生物制藥中最具活力的研究領(lǐng)域．隨著人類基因組中更多基因的功能被研究清楚和藥物基因組學(xué)的不斷完善，將可能有數(shù)以千計(jì)的具有特殊療效的蛋白質(zhì)藥物問(wèn)世。這將使傳統(tǒng)的醫(yī)藥業(yè)發(fā)生革命性變化。藥物的生產(chǎn)和使用將會(huì)更加趨于種族化、家族化甚至個(gè)體化。參考文獻(xiàn)

[1] 青島海博生物技術(shù)有限公司 http:///refere1180.htm [2] 基因工程藥物 百度百科 http://baike.baidu.com/ [3] 李元 主編 陳松森 王渭池 副主編《基因工程藥物》第二版 化工工業(yè)出版社 [4]微生物學(xué).http://202.116.160.98:8000/course/weishengwx/bujinkecheng/diliuzhang/l43.htm.作者簡(jiǎn)介:任灝詩(shī),女,漢族,籍貫廣東佛山),大學(xué)本科,華南師范大學(xué)大二本科生, Email: 1030156661@qq．com．

第二篇：基因工程藥物論文

基因工程藥物

姓名：陳劍云 學(xué)號(hào)：U201210914 班級(jí)：機(jī)械學(xué)院測(cè)控1204班

摘要：自１９７２年ＤＮＡ重組技術(shù)誕生以來(lái)，生命科學(xué)進(jìn)入了一個(gè)嶄新的發(fā)展時(shí)期。１９８２年美國(guó)禮萊公司推出基因工程胰島素，這是第一個(gè)人用基因工程藥物。從那時(shí)起，以基因工程為核心的現(xiàn)代生物技術(shù)已應(yīng)用到農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、化工、環(huán)境等各個(gè)領(lǐng)域。基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展不僅使醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科發(fā)生了革命性的變化，也為醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展開(kāi)辟了廣闊的前景，以ＤＮＡ重組技術(shù)為基礎(chǔ)的基因工程技術(shù)改造和替代傳統(tǒng)醫(yī)藥工業(yè)技術(shù)，已成為重要的發(fā)展方向。

關(guān)鍵詞：基因工程制藥應(yīng)用

基因的定義：基因是脫氧核糖核酸（DNA）分子上的一個(gè)特定片段。不同基因的遺傳信息，存在于各自片段上的堿基排列順序之中?；蛲ㄟ^(guò)轉(zhuǎn)錄出的信使使核糖核酸（mRNA），指導(dǎo)合成特定的蛋白質(zhì)，使基因得以表達(dá)。

基因工程定義：基因工程又稱基因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來(lái)源的基因(DNA分子)，按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品。基因工程藥物定義:基因工程藥物又稱生物技術(shù)藥物,是根據(jù)人們的愿望設(shè)計(jì)的基因,在體外剪切組合,并和載體DNA 連接,然后將載體導(dǎo)入靶細(xì)胞(微生物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或人體組織靶細(xì)胞),使目的基因在靶細(xì)胞中得到表達(dá),最后將表達(dá)的目的蛋白質(zhì)純化及做成制劑,從而成為蛋白類藥或疫苗。

基因工程藥物的發(fā)展歷程：自1972年DNA重組技術(shù)誕生以來(lái),作為現(xiàn)代生物技術(shù)核心的基因工程技術(shù)得到飛速的發(fā)展。1982年美國(guó)Lilly公司首先將重組胰島素投放市場(chǎng),標(biāo)志著世界第一個(gè)基因工程藥物的誕生。美國(guó)是現(xiàn)代醫(yī)藥生物技術(shù)的發(fā)源地,也是率先應(yīng)用基因工程藥物的國(guó)家,其基因工程技術(shù)研究開(kāi)發(fā)以及產(chǎn)業(yè)化居于世界領(lǐng)先地位。美國(guó)已擁有世界上一半的生物技術(shù)公司和一半的生物技術(shù)專利。據(jù)1998年美國(guó)藥學(xué)會(huì)統(tǒng)計(jì),美國(guó)FDA已批準(zhǔn)了56種生物技術(shù)醫(yī)藥產(chǎn)品上市,其中絕大多數(shù)為基因工程藥物。此外,還有200多種基因工程藥物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn),其中至少有1/5的產(chǎn)品將可能在今后10年內(nèi)上市?；蚬こ趟幬餅槊绹?guó)的一些公司創(chuàng)造了豐厚的回報(bào),取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。歐洲在發(fā)展基因工程藥物方面也進(jìn)展較快,英、法、德、俄等國(guó)在開(kāi)發(fā)研制和生產(chǎn)基因工程藥物方面成績(jī)斐然,在生命科學(xué)技術(shù)與產(chǎn)業(yè)的某些領(lǐng)域甚至趕上并超過(guò)了美國(guó)。我國(guó)基因工程藥物的研究和開(kāi)發(fā)起步較晚,直至20世紀(jì)70年代初才開(kāi)始將DNA重組技術(shù)應(yīng)用到醫(yī)學(xué)上,但在國(guó)家產(chǎn)業(yè)政策的大力支持下,這一領(lǐng)域發(fā)展迅速,逐步縮短了與先進(jìn)國(guó)家的差距。1989年我國(guó)批準(zhǔn)了第一個(gè)在我國(guó)生產(chǎn)的基因工程藥物———重組人干擾素重組人干擾素αIb,標(biāo)志著我國(guó)生產(chǎn)的基因工程藥物實(shí)現(xiàn)了零的突破。重組人干擾素αIb是世界上第一個(gè)采用基因克隆和表達(dá)的基因工程藥物,也是到目前為止唯一的一個(gè)我國(guó)自主研制成功的擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的基因工程一類新藥。從此以后,我國(guó)基因工程制藥產(chǎn)業(yè)從無(wú)到有,不斷發(fā)展壯大。截止1998年底,我國(guó)已批準(zhǔn)上市的基因工程藥物和疫苗產(chǎn)品共計(jì)15種，國(guó)內(nèi)已有30余家生物制藥企業(yè)取得基因工程藥物或疫苗試生產(chǎn)或正式生產(chǎn)批準(zhǔn)文號(hào)。至2000年,我國(guó)已有200多家生物技術(shù)公司,有20多家生產(chǎn)銷(xiāo)售人干擾素、白細(xì)胞介素、乙肝疫苗等12種基因工程藥物。

基因工程藥物的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，生產(chǎn)基因工程藥物的方法是：將目的基因連接在載體上，然后將導(dǎo)入靶細(xì)胞（微生物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或人體組織靶細(xì)胞），使目的基因在靶細(xì)胞中的到表達(dá)，最后將表達(dá)的目的蛋白質(zhì)提純做成制劑，從而成為蛋白類藥或疫苗。若目的基因直接在人體組織靶細(xì)胞表達(dá)，就稱為基因治療。

基因治療：基因治療就是從遺傳物質(zhì)本身，即基因入手，不必產(chǎn)生或純化基因的最終產(chǎn)物，而是將基因，通常是通過(guò)一個(gè)載體直接導(dǎo)入人體，再利用人體自身就具有的基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄與翻譯功能來(lái)產(chǎn)生這些產(chǎn)物，達(dá)到補(bǔ)充正?；虍a(chǎn)物或?qū)巩惓；虻哪康?。將基因?qū)氩溉轭悇?dòng)物細(xì)胞的方法有兩種，一類是理化方法，一類是病毒介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)移。

利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)在于：大量生產(chǎn)過(guò)去難以獲得的生理活性物質(zhì)和多肽；挖掘更多的生理活性物質(zhì)和多肽；改造內(nèi)源生理活性物質(zhì)；可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來(lái)源。

基因藥物的發(fā)展前景

與傳統(tǒng)制藥相比，生物制藥有便于大規(guī)模生產(chǎn)、利潤(rùn)高、生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、人力投入少、無(wú)污染、生產(chǎn)周期短等優(yōu)點(diǎn)，因此，隨著人類基因組計(jì)劃的實(shí)施和科技水平的進(jìn)一步發(fā)展，基因藥物在醫(yī)藥市場(chǎng)的比例也將會(huì)日益提升，也將越來(lái)越影響人類的生活。

基因藥物同時(shí)具有高投入、高收益、高風(fēng)險(xiǎn)、長(zhǎng)周期的特征。Frost&Sullivan公司的一份最新報(bào)告指出，2004年，全球生物制藥市場(chǎng)的收入為450億美元。到2011年，其有望達(dá)到982億美元。據(jù)預(yù)測(cè)，全球第一個(gè)用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)的生物藥物可望于2005～2006年上市。隨著公眾認(rèn)知度的提高和相關(guān)法規(guī)的逐步完善，用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)生物藥物的市場(chǎng)將飛速增長(zhǎng)，到2011年，單美國(guó)市場(chǎng)就將達(dá)到22億美元。2002年底到2003年5月間一場(chǎng)突如其來(lái)的SARS疫情，再加上2005禽流感病毒傳播，席卷了亞洲及加拿大等地。在緊張而又嚴(yán)肅的應(yīng)對(duì)這場(chǎng)疫情的過(guò)程中，生物制藥又成為醫(yī)藥行業(yè)人士關(guān)注的焦點(diǎn)。

我國(guó)生物制品需求巨大，過(guò)去的幾年我國(guó)企業(yè)一直能保持年均15％以上增幅，并且近年來(lái)銷(xiāo)售的增長(zhǎng)速度有加快的趨勢(shì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2005年國(guó)內(nèi)生物制品銷(xiāo)售收入總額為157．4億元人民幣，銷(xiāo)售利潤(rùn)總額為38.7億元人民幣。預(yù)計(jì)到2006年生物技術(shù)工業(yè)總產(chǎn)值將達(dá)400億到500億元，到2015年總產(chǎn)值可達(dá)1100億到1300億元。我國(guó)的生物制藥業(yè)將進(jìn)入一個(gè)快速發(fā)展的階段,生物醫(yī)藥工業(yè)將成為醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)增長(zhǎng)最快的部分。目前,我國(guó)許多省市已將生物制藥作為本地的支柱產(chǎn)業(yè)重點(diǎn)扶持。一大批生物醫(yī)藥科技園相繼在各地高新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)建成。面對(duì)入世帶給我國(guó)生物制藥業(yè)的挑戰(zhàn)和機(jī)遇,專家們預(yù)測(cè),在未來(lái)若干年,我國(guó)的生物制藥業(yè)將以超過(guò)全球平均增長(zhǎng)速度步入高速發(fā)展軌道,前景十分廣闊。

基因工程藥物的發(fā)展概況

20世紀(jì)70年代，隨著DNA重組技術(shù)的成熟，誕生了基因工程藥物，高產(chǎn)值、高效率的基因藥物給醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了一場(chǎng)革命，推動(dòng)了整個(gè)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)進(jìn)入了新的歷史時(shí)期。基因藥物經(jīng)歷了三個(gè)階段：第一階段是把藥用蛋白基因?qū)氲酱竽c桿菌等細(xì)菌中，通過(guò)大腸桿菌等表達(dá)藥用蛋白但這類藥物往往有缺陷，人類的基因在低等生物的細(xì)菌中往往不表達(dá)或表達(dá)的蛋白沒(méi)有生物活性。第二階段是人們用哺動(dòng)物的細(xì)胞代替細(xì)菌，生產(chǎn)第二代基因工程藥物。第三階段是到了80年代中期，隨著基因重組和基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，科學(xué)家可以將人們所需要的藥用蛋白基因?qū)氲讲溉閯?dòng)物體內(nèi)，使目的基因在哺乳動(dòng)物身上表達(dá)，從而獲得藥用蛋白。

基因工程技術(shù)制藥展望

基因工程技術(shù)在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用非常廣泛，利用基因工程技術(shù)開(kāi)發(fā)藥物已成為當(dāng)前.最為活躍和迅猛發(fā)展的領(lǐng)域。隨著人類基因組計(jì)劃的完成，以及基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)等研究的深入，為醫(yī)藥生物技術(shù)開(kāi)拓了一個(gè)新的領(lǐng)域，基因工程制藥將有更多機(jī)會(huì)獲得突破性進(jìn)展，為保障人類健康做出更大的貢獻(xiàn)。

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第三篇：基因工程藥物教學(xué)大綱（范文）

基因工程藥物教學(xué)大綱

課程名稱：基因工程藥物

課程編號(hào)：0235203 學(xué)分：1.5 學(xué)時(shí)數(shù)：28

考核方式：N+2。筆記10%，考試成績(jī)占40%，過(guò)程成績(jī)N占50%。先修課程：生物化學(xué)、微生物學(xué)、基因工程等。課程說(shuō)明：專業(yè)選修課。

一、課程的性質(zhì)

基因工程技術(shù), 不僅使整個(gè)生命科學(xué)的研究發(fā)生了前所未有的深刻變化, 而且也給工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益, 給人類進(jìn)步帶來(lái)了新的契機(jī)。目前，基因工程學(xué)正以新的勢(shì)頭繼續(xù)向前迅猛發(fā)展, 成為當(dāng)今生物科學(xué)研究諸領(lǐng)域中最具生命力、最引人注目的前沿學(xué)科之一, 特別是基因工程在醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域中的研究和應(yīng)用，其意義深遠(yuǎn)、潛力之巨大。

二、課程的目的與教學(xué)基本要求

課程目的：為了適應(yīng)生物工程技術(shù)的迅速發(fā)展、拓寬專業(yè)面, 為了使學(xué)生對(duì)當(dāng)今世界生物工程領(lǐng)域日新月異地發(fā)展的高新技術(shù)有更多的了解, 進(jìn)一步擴(kuò)大學(xué)生的知識(shí)面和視野，同時(shí)為他們今后從事這方面的工作和研究打下一定理論基礎(chǔ), 特開(kāi)設(shè)該課程。

課程任務(wù): 通過(guò)講授基因工程制藥的概貌及國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展、基因工程制藥常用的工具酶和克隆載體、基因工程藥物無(wú)性繁殖系的組建以及基因工程藥物的生產(chǎn)和質(zhì)量控制等, 使學(xué)生對(duì)基因工程的基本理論、基本步驟和操作技術(shù)以及基因工程藥物的生產(chǎn)技術(shù)原理和方法有比較系統(tǒng)的了解, 初步掌握基因工程制藥有關(guān)基本知識(shí)。

三、課程適用專業(yè)

本課程適用于生物技術(shù)專業(yè)等相關(guān)專業(yè)。

四、教學(xué)內(nèi)容、要求與學(xué)時(shí)分配

第一章 基因工程制藥概述(2學(xué)時(shí))

第一節(jié)：基因工程的概貌 簡(jiǎn)述基因工程的誕生和興起，基因工程的定義、特點(diǎn)與基本步驟，基因工程早期的開(kāi)創(chuàng)性研究成就，基因工程的應(yīng)用與發(fā)展趨勢(shì)等。

第二節(jié)：基因工程與生物制藥 簡(jiǎn)述基因工程藥物的研究和發(fā)展概況，介紹應(yīng)用基因工程和蛋白質(zhì)工程技術(shù)研究開(kāi)發(fā)的幾種新型基工藥物。

第二章 基因工程制藥常用的工具酶(2學(xué)時(shí))

第一節(jié)：限制性核酸內(nèi)切酶 簡(jiǎn)述限制酶的發(fā)現(xiàn)、限制酶的種類、限制酶的命名和限制酶的特性與用途等。

第二節(jié) DNA連接酶 重點(diǎn)介紹DNA連接酶連接作用的特點(diǎn)，基因工程中常用的連接酶(T4噬菌體DNA連接酶、大腸桿菌DNA連接酶)的酶活性和用途，DNA連接酶連接作用的分子機(jī)理。

第三節(jié) DNA聚合酶 重點(diǎn)介紹大腸桿菌DNA聚合酶

1、Klenow大片段酶、T4噬菌體DNA聚合酶、TaqDNA聚合酶及、反轉(zhuǎn)錄酶等的酶活性和用途。

第四節(jié) DNA修飾酶 重點(diǎn)介紹末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、T4噬菌體多核苷酸激酶等的酶活性和用途。

第五節(jié) 單鏈核酸內(nèi)切酶 重點(diǎn)介紹S1核酸酶、Bal31核酸酶等的酶活性和用途。

第三章 基因工程制藥常用的克隆載體(4學(xué)時(shí))第一節(jié) 質(zhì)粒載體 內(nèi)容：質(zhì)粒的定義、質(zhì)粒DNA分子的特性、質(zhì)粒載體的改造及構(gòu)建。重點(diǎn)介紹基因工程制藥中常用的幾種質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)和用途，主要包括pBR322及其衍生栽體、pUC系列載體。

第二節(jié) λ噬菌體載休 內(nèi)容：λ噬菌體的基本特性、λ噬菌體基因組的結(jié)構(gòu)與功能、λ噬菌體DNA的改造及其載體的構(gòu)建。重點(diǎn)介紹基因工程制藥中常用的幾種λ噬菌體載體，主要包括 Charon系列載體、EMBL系列載體、λgt系列載體。

第三節(jié) M13噬菌體載體 內(nèi)容包括：M13噬菌體的基本特性、M13絲狀噬菌體載體的構(gòu)建、常用的M13噬菌體載體，主要包括M13mp18和M13mp19載體。

第四節(jié) 粘粒（Cosmid）載體 內(nèi)容：粘粒載體的構(gòu)建、常用的粘粒載體。

第五節(jié) 哺乳動(dòng)物細(xì)胞載體系統(tǒng) 主要介紹：SV40載體、BPV載體、EBV病毒載體。

第四章 目的基因的制取(2學(xué)時(shí))

第一節(jié) 目的基因的化學(xué)合成 內(nèi)容：目的基因的設(shè)計(jì), 寡聚核苷酸片段的合成, 寡核苷酸片段的分離和純化, 用寡核苷酸片段組裝目的基因, 化學(xué)合成寡核苷酸的其它用途。

第二節(jié) 構(gòu)建基因文庫(kù)法分離目的基因 內(nèi)容：構(gòu)建基因文庫(kù)法分離目的基因的基本步驟, 真核基因組DNA文庫(kù)的構(gòu)建過(guò)程

第三節(jié) 酶促合成法制取目的基因 內(nèi)容：真核生揚(yáng)細(xì)胞中的mRNA, 從構(gòu)建 的cDNA文庫(kù)中篩選目的cDNA, RT-PCR法合成目的cDNA。

第五章 目的基因與克隆載體的體外重組(2學(xué)時(shí))

第一節(jié) 目的基因與質(zhì)粒載體的連接 內(nèi)容：粘性末端連接法, 定向克隆法,平末端連接法, 同聚物加尾法, 加人工接頭連接法, 加DNA銜接物連接法, 其它轉(zhuǎn)換末端形式連接法。

第二節(jié) 目的基因與噬菌體載體的連接 內(nèi)容包括：噬菌體載體臂DNA的制備, 噬菌體載體臂與外源目的DNA片段的連接。

第六章 重組克隆載體引入受體細(xì)胞(2學(xué)時(shí))

第一節(jié) 概述 內(nèi)容：基因工程的受體細(xì)胞, 重組體分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的途徑。

第二節(jié) 重組體DNA分子的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染 內(nèi)容包括：用氯化鈣制備新鮮的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法, 用復(fù)合劑制備感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法, 高壓電穿孔轉(zhuǎn)化法。

第三節(jié) 重組噬菌體DNA的體外包裝與轉(zhuǎn)染 內(nèi)容：噬菌體體外包裝的基本原理, 噬菌體DNA的體外包裝, 包裝提取物的制備, 重組DNA的體外包裝與感染方法。

第四節(jié) 重組克隆載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染

第七章 含目的基因重組體的篩選、鑒定與分析(6學(xué)時(shí))

第一節(jié) 重組體(菌)的篩選 內(nèi)容：抗生素抗性基因插入失活法, b-半乳糖苷酶 基因插入失活法, 快速細(xì)胞破碎與凝膠電泳篩選法, 放射性標(biāo)記核酸探針雜交篩選法, 免疫化學(xué)篩選法。

第二節(jié) 重組體的鑒定 內(nèi)容：酶切及凝膠電泳鑒定法, Southern印跡雜交法, 電鏡R-環(huán)檢測(cè)法, 基因產(chǎn)物鑒定法。

第三節(jié) 重組DNA的序列分析 內(nèi)容：Sanger雙脫氧鏈終止法DNA測(cè)序, Maxam-Gilbert化學(xué)修飾法DNA測(cè)序。

第八章 目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)(2學(xué)時(shí))

第一節(jié) 外源目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá) 內(nèi)容：原核基因表達(dá)載體的構(gòu)建, 常見(jiàn)的原核細(xì)胞表達(dá)載體系統(tǒng), 外源目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)形式, 在原核細(xì)胞中高效表達(dá)目的基因, 基因定點(diǎn)誘變技術(shù)。

第二節(jié) 外源目的基因在真核細(xì)胞中的表達(dá) 內(nèi)容：真核細(xì)胞表達(dá)載體的功能元件, 酵母菌表達(dá)系統(tǒng), 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。

第九章 基因工程無(wú)性繁殖系的組建(2學(xué)時(shí))

內(nèi)容：人胰島素原融合蛋白重組菌的組建, 人a2b型干擾素工程菌的組建, 集落刺激因子工程菌的組建, 白細(xì)胞介素融合蛋白工程菌的組建, 乙型肝炎表面抗原重組酵母的組建, 人組織型纖溶酶原激活劑細(xì)胞株的組建, 紅細(xì)胞生成素CHO細(xì)胞株的組建, 人腫瘤壞死因子昆蟲(chóng)細(xì)胞株的組建。

第十章 基因工程藥物的生產(chǎn)(2學(xué)時(shí))

第一節(jié) 基因工程菌（細(xì)胞）的培養(yǎng)與發(fā)酵 內(nèi)容包括：工程細(xì)菌的培養(yǎng)與發(fā)酵, 工程酵母的培養(yǎng)與發(fā)酵, 工程細(xì)胞的培養(yǎng)與發(fā)酵。

第二節(jié) 基因工程藥物的分離純化 內(nèi)容包括：影響分離純化工藝的主要因素, 各種產(chǎn)物表達(dá)形式采用的分離純化方法,。

第三節(jié) 基因工程藥物的分離純化實(shí)例 內(nèi)容包括：以包涵體形式表達(dá)的rGM-CSF中試分離純化, 以分泌型表達(dá)的人a1-干擾素的分離純化, 以可溶性形式表達(dá)的rhG-CSF的分離純化, 在酵母中表達(dá)的HBsAg的分離純化。

第十一章 基因工程藥物的檢驗(yàn)(學(xué)生自學(xué))

第一節(jié) 基因工程藥物的質(zhì)量控制 內(nèi)容包括：主要的基因工程藥物, 基因工程藥物的特點(diǎn), 基因工程藥物的質(zhì)量要求, 基因工程藥物的質(zhì)控要點(diǎn), 基因工程藥物的制造及檢定規(guī)程。

第二節(jié) 基因工程藥物常用的檢驗(yàn)方法 內(nèi)容：化學(xué)檢定法, 肽圖分析法，外源性DNA殘留量的測(cè)定，宿主細(xì)胞蛋白雜質(zhì)的檢測(cè)，無(wú)菌試驗(yàn)，內(nèi)毒素試驗(yàn)，異常毒性試驗(yàn)，熱原質(zhì)試驗(yàn)，生物學(xué)活性(效價(jià))檢定。

第三節(jié) 主要基因工程藥物的檢驗(yàn) 內(nèi)容：重組人胰島素的檢驗(yàn)，重組人生長(zhǎng)激素的檢驗(yàn)，重組人干擾素的檢驗(yàn)，重組人白細(xì)胞介素的檢驗(yàn)，重組人紅細(xì)胞生成素的檢驗(yàn)，重組人集落刺激因子的檢驗(yàn)，重組人組織型纖溶酶原激活劑的檢驗(yàn), 重組人腫瘤壞死因子的檢驗(yàn)，重組乙型肝炎疫苗的檢驗(yàn)。

五、教材和主要參考資料

理論教學(xué)教材： 《基因工程》, 楊汝德主編，華南理工大學(xué)出版社，2006.8 主要參考教材： 《基因克隆技術(shù)在制藥中的應(yīng)用》, 楊汝德主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2004.1

執(zhí)筆人：闞勁松

教研室：

系主任審核簽名：

第四篇：基因工程藥物開(kāi)發(fā)利用前景

基因工程藥物開(kāi)發(fā)利用前景

摘 要：生物制藥是以基因工程為基礎(chǔ)的現(xiàn)代生物工程，即利用現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)DNA進(jìn)行切割、連接、改造，生產(chǎn)出傳統(tǒng)制藥技術(shù)難以獲得的生物藥品。而現(xiàn)代生物技術(shù)是以基因?yàn)樵搭^，基因工程和基因組工程為主導(dǎo)技術(shù)，與其他高技術(shù)相互交叉、滲透的高新技術(shù)。比爾·蓋茨預(yù)言：下一個(gè)首富可能是從事生物技術(shù)的投資者。本文簡(jiǎn)要分析了國(guó)內(nèi)外基因工程藥物開(kāi)發(fā)的現(xiàn)狀和前景。

以基因工程，細(xì)胞工程，發(fā)酵工程和酶工程為主體的現(xiàn)代生物技術(shù)是70年代開(kāi)始異軍突起的高新技術(shù)領(lǐng)域，近一，二十年來(lái)發(fā)展極為神速，它與微電子技術(shù)，新材料和新能源技術(shù)并列為影響未來(lái)國(guó)計(jì)民生的四大科學(xué)技術(shù)支柱，被認(rèn)為是21世紀(jì)世界科學(xué)技術(shù)的核心。現(xiàn)代生物技術(shù)又是一項(xiàng)與醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)結(jié)合極為密切的高新技術(shù)，它的發(fā)展已帶給了某些醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科的革命性變化，并給醫(yī)藥工業(yè)開(kāi)辟了更為廣闊的心領(lǐng)域。

自1982年全世界第一個(gè)基因重組醫(yī)藥產(chǎn)品“人胰島素”在美國(guó)面市以來(lái)，至今已有數(shù)十個(gè)生物技術(shù)藥物上市?，F(xiàn)代生物技術(shù)開(kāi)辟了人體內(nèi)源性多肽，蛋白質(zhì)藥物的新天地。于此同時(shí)它也正滲透到傳統(tǒng)醫(yī)藥的哥哥領(lǐng)域，以抗生素，氨基酸，細(xì)胞融合及基因工程菌，化學(xué)合成藥物的生物轉(zhuǎn)化性，到單克隆抗體靶向制劑等等。不久之前美國(guó)的Eli Lilly公司又提出了生物技術(shù)在醫(yī)藥上的更大應(yīng)用，是在新藥研究篩選方法上的革命，即用基因工程受體實(shí)驗(yàn)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，所有這一切都表明了醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的技術(shù)基礎(chǔ)正在發(fā)生戰(zhàn)略性的變革。世界各大醫(yī)藥企業(yè)已瞅準(zhǔn)目標(biāo)，紛紛投入巨資圍繞以現(xiàn)代生物技術(shù)為核心的產(chǎn)品和技術(shù)結(jié)構(gòu)開(kāi)拓，展開(kāi)了面向21世紀(jì)的空前激烈的競(jìng)爭(zhēng)?；蛩幬锏那把丶夹g(shù)及部分基因藥物

基因藥物的直接體內(nèi)基因治療發(fā)展迅速,新型基因藥物不斷產(chǎn)生?，F(xiàn)著重介紹對(duì)效果比較肯定關(guān)于基因藥物的幾項(xiàng)前沿技術(shù)，基因疫苗、反義RNA 藥物、三鏈DNA 藥物這三種新型基因藥物技術(shù)的基本方法。1.1基因疫苗

基因疫苗的免疫方法即基因疫苗的給藥途徑,目前使用的方法有以下幾種:（1）裸DNA 直接注射:將裸質(zhì)粒DNA 直接注射到機(jī)體的肌肉、皮內(nèi)、皮下、粘膜、靜脈內(nèi)。這種方法簡(jiǎn)單易行。

（2）脂質(zhì)體包裹DNA 直接注射:包裹DNA 的脂質(zhì)體能與組織細(xì)胞發(fā)生膜融合,而將DNA 攝入,減少了核酸酶對(duì)DNA 的破壞。注射途徑同裸DNA直接注射。

（3）金包被DNA 基因槍轟擊法:將質(zhì)粒DNA 包被在金微粒子表面,用基因槍使包被DNA 的金微粒子高速穿入組織細(xì)胞.。

（4）繁殖缺陷細(xì)菌攜帶質(zhì)粒DNA 法:選擇一種容易進(jìn)入某組織器官的細(xì)菌,將其繁殖基因去掉,然后用質(zhì)粒DNA 轉(zhuǎn)化細(xì)菌,當(dāng)這些細(xì)菌進(jìn)入某組織器官后,由于不能繁殖,則自身裂解而釋放出質(zhì)粒DNA。1.2反義RNA 反義RNA 指與mRNA 互補(bǔ)后,能抑制與疾病發(fā)生直接相關(guān)基因的表達(dá)的RNA。它封閉基因表達(dá),具有特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn),可用來(lái)治療由基因突變或過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致的疾病和嚴(yán)重感染性疾病,反義RNA 治療的基本方法有： 1)反義寡核苷酸：體外合成十至幾十個(gè)核苷酸的反義寡核苷酸或反義硫代磷酸酯寡核苷酸序列,用脂質(zhì)體等將反義寡核苷酸導(dǎo)入體內(nèi)靶細(xì)胞,然后反義寡核苷酸與相應(yīng)mRNA特異性結(jié)合,從而阻斷mRNA 的翻譯。

2)反義RNA表達(dá)載體:合成或PCR 擴(kuò)增獲取反義RNA 的DNA ,將它克隆到表達(dá)載體,然后

將表達(dá)載體用脂質(zhì)體導(dǎo)入靶細(xì)胞, 該DNA 轉(zhuǎn)錄反義RNA ,反義RNA 即與相應(yīng)的mRNA 特異性結(jié)合,同樣阻斷某基因的翻譯。

反義RNA目前主要用于惡性腫瘤、病毒感染性疾病等。有報(bào)導(dǎo)，用反義封閉胰腺癌、肺癌的癌基因，對(duì)癌細(xì)胞具有明顯的抑制作用。1.3三鏈DNA 脫氧寡核苷酸能與雙螺旋雙鏈DNA 專一性序列結(jié)合,形成三鏈DNA ,來(lái)阻止基因轉(zhuǎn)錄或DNA 復(fù)制,此脫氧寡核苷酸被稱為三鏈DNA 形成脫氧寡核苷酸(TFO)。為了與作用在mRNA 翻譯水平的反義RNA 的反義技術(shù)相區(qū)別,將三鏈DNA 技術(shù)稱之為反基因技術(shù)。

基本方法與機(jī)理

設(shè)計(jì)合成15～40個(gè)堿基的脫氧寡核苷酸, 這些序列具有較短而兼并性較高的特點(diǎn), 與雙鏈DNA結(jié)合,通常結(jié)合在蛋白識(shí)別位點(diǎn)處,形成三鏈DNA ,干擾DNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合, 如轉(zhuǎn)錄激活因子, 從而阻止基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。1.4部分基因藥物

生物技術(shù)的開(kāi)發(fā)迅猛異常、日新月異。生物技術(shù)的核心是基因工程, 基因工程技術(shù) 最成功的是用于生物治療的新型藥物的研制。已有近50 種基因工程藥物投入市場(chǎng), 產(chǎn)生 了巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。生物技術(shù)用于疾病的預(yù)防和疑難病癥的治療已經(jīng)成為現(xiàn) 實(shí)?；蛩幬镏饕獮橐韵聨讉€(gè)系列：

（1）干擾素系列(IFN)IFN是一類具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，僅在同種細(xì)胞上可發(fā)揮作用。根據(jù)其來(lái)源、理化及生物學(xué)性質(zhì)的不同，可分為IFN-α、IFN-β、IFN-γ 3種干擾素。干擾素具有很強(qiáng)的生物活性，主要表現(xiàn)在：

①抗病毒作用 目前慢性丙型肝炎的治療以IFN-α為首選。②抗腫瘤作用。③免疫調(diào)節(jié)作用。

（2）白介素系列 白細(xì)胞介素是非常重要的細(xì)胞因子家族，現(xiàn)在得到承認(rèn)的成員已達(dá)15個(gè)；它們?cè)诿庖呒?xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等一系列過(guò)程中均發(fā)揮重要作用，此外它們還參與機(jī)體的多種生理及病理反應(yīng)。

（3）集落刺激因子類藥物(CSF)一些細(xì)胞因子可刺激不同的造血干細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基中形成細(xì)胞集落，這些因子被命名為集落刺激因子，根據(jù)其作用對(duì)象，進(jìn)一步命名分為粒細(xì)胞-CSF，巨噬細(xì)胞-CSF，粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞-CSF及多集落刺激因子。

（4）其他基因工程藥物

①促進(jìn)紅細(xì)胞生成素 促紅細(xì)胞生成素(Epo)是一種調(diào)節(jié)紅細(xì)胞生成的體液因子，自從成功地克隆人類Epo基因后，其產(chǎn)物重組人促紅細(xì)胞生成素被成功用于治療腎性貧血及腫瘤等疾病伴發(fā)的貧血。最近的研究認(rèn)為Epo是一種由缺氧誘導(dǎo)因子(Hypoxia-inducible factor，HIF)家庭誘導(dǎo)產(chǎn)生的多功能細(xì)胞因子超家庭成員，對(duì)于多種器官都有保護(hù)作用。有報(bào)導(dǎo)，Epo能通過(guò)降低腎IRI時(shí)MDA、IL-6水平，增加SOD水平從而發(fā)揮保護(hù)作用，而最新研究還表明Epo有促進(jìn)血管生成的作用。

②人生長(zhǎng)激素人類的生長(zhǎng)激素(Growth hormone，GH)是一條單鏈、非糖化、191個(gè)氨基酸合成的親水性球蛋白，分子量21700Da，等電點(diǎn)pI為4.9.人生長(zhǎng)激素具有促生長(zhǎng)、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、對(duì)脂肪、糖、能量代謝有影響。

③人表皮生長(zhǎng)因子 皮膚細(xì)胞表達(dá)10種以上的生長(zhǎng)因子，它們以自分泌和旁分泌的方式對(duì)細(xì)胞自身和鄰近細(xì)胞進(jìn)行多種調(diào)節(jié)。

④重組鏈激酶 對(duì)心腦血管疾病有一定的療效。

⑤腫瘤壞死因子 研究表明，巨噬細(xì)胞是產(chǎn)生TNF的主要來(lái)源。當(dāng)肝、脾等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)受到刺激后，借助于脂多糖的幫助，TNF基因開(kāi)始轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生并釋放TNF。同時(shí)B淋巴細(xì)胞也

產(chǎn)生一種與TNF類似的淋巴毒素，并與TNF享有共同受體。為了便于區(qū)分二者，將巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的毒素稱為T(mén)NF—α，淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的毒素稱為T(mén)NF-β。

TNF-α是迄今為止發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子，它能特異性地直接殺傷腫瘤細(xì)胞，而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)不良影響，能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖并促使其溶解，還可激活機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。但是由于TNF-α能被腎快速排泄和各種蛋白酶分解作用，在體內(nèi)很不穩(wěn)定，半衰期很短(15～30min)，而殺傷腫瘤細(xì)胞需要12～36 h。若希望通過(guò)靜脈給藥獲得明顯的抗腫瘤效果，則必須頻繁大劑量注射，進(jìn)而導(dǎo)致嚴(yán)重的不良反應(yīng)。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其的制劑研究主要集中在高分子化學(xué)修飾和藥物載體傳遞系統(tǒng)兩方面．無(wú)論采取何種手段，其最終目的有二：一是減少RES的攝取，延長(zhǎng)藥物血中半衰期；二是提高藥物的靶向性，降低不良反應(yīng).國(guó)外基因工程藥物研究開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀和展望

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，歐美諸國(guó)目前已經(jīng)上市的基因工程藥物近100 種，還有約300 種藥物正在臨床試驗(yàn)階段，處于研究和開(kāi)發(fā)中的品種約2 000 個(gè)。近兩年基因藥物上市的周期明顯縮短，與一般藥物研究開(kāi)發(fā)相比，基因工程藥物研究投入較大。

美國(guó)作為基因重組技術(shù)的發(fā)源地和眾多基因工程藥物的第一制造者，每年在基因工程藥物研究方面的投資高達(dá)數(shù)十億美元，現(xiàn)已成為國(guó)際公認(rèn)的現(xiàn)代生物技術(shù)研究和開(kāi)發(fā)的“帶頭羊”。日本，歐洲等地也不甘落后，都根據(jù)各自的特點(diǎn)，制定出符合本國(guó)國(guó)情的發(fā)展戰(zhàn)略和對(duì)策，進(jìn)行著激烈的競(jìng)爭(zhēng)和角逐，就連亞洲的韓國(guó)，新加坡等也野心勃勃地著手這方面的研究和開(kāi)發(fā)。

美國(guó)：在基因工程藥物的研究和開(kāi)發(fā)方面美國(guó)一直保持著世界領(lǐng)先地位。從1971年成立第一家美國(guó)生物技術(shù)公司到現(xiàn)在已形成擁有1300余家公司（占全世界生物技術(shù)公司總數(shù)的2/3的令人注目的產(chǎn)業(yè)規(guī)模，不過(guò)短短25年的歷史，到1996年8月美國(guó)有20多種基因工程藥物和疫苗上市。（詳見(jiàn)表1）另有113家美國(guó)公司的284個(gè)產(chǎn)品處于臨床試驗(yàn)階段或等待FDA批準(zhǔn)，呈現(xiàn)了強(qiáng)勁的發(fā)展勢(shì)頭。

日本：日本在基因工程藥品的研究和開(kāi)發(fā)方面也投入了大量資金，并取得了豐碩成果?，F(xiàn)已開(kāi)發(fā)出干擾素，乙肝疫苗，人促紅細(xì)胞生產(chǎn)素，組織纖溶酶原激活劑，人生長(zhǎng)激素，人胰島素，人巨噬細(xì)胞集落刺激因子，人粒細(xì)胞集落刺激因子等眾多產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)基因工程藥物研究開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀及展望

我國(guó)生物工程藥物研究雖起步較晚，基礎(chǔ)較差，但一開(kāi)始就受到黨和國(guó)家的高度重視。為跟蹤世界新技術(shù)革命迅猛發(fā)展的浪潮，1986年3月我國(guó)一批著名科學(xué)家倡導(dǎo)起草了“高技術(shù)研究計(jì)劃”——“863計(jì)劃”，并將現(xiàn)代生物技術(shù)列為“863計(jì)劃”最優(yōu)先發(fā)展的項(xiàng)目和國(guó)家“七五”，“八五”攻關(guān)項(xiàng)目。經(jīng)過(guò)廣大科技工作者的艱苦努力，已取得了鼓舞人心的進(jìn)展，一批基因工程產(chǎn)品的上游研究正在努力展開(kāi)；一些產(chǎn)品正逐步進(jìn)入開(kāi)發(fā)研究階段，不少產(chǎn)品已步入臨床試驗(yàn)階段或已獲新藥證書(shū)，進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)，詳見(jiàn)表2。

與傳統(tǒng)制藥相比，生物制藥有便于大規(guī)模生產(chǎn)、利潤(rùn)高、生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、人力投入少、無(wú)污染、生產(chǎn)周期短等優(yōu)點(diǎn)，因此，隨著人類基因組計(jì)劃的實(shí)施和科技水平的進(jìn)一步發(fā)展，基因藥物在醫(yī)藥市場(chǎng)的比例也將會(huì)日益提升，也將越來(lái)越影響人類的生活。

基因藥物同時(shí)具有高投入、高收益、高風(fēng)險(xiǎn)、長(zhǎng)周期的特征。Frost&Sullivan公司的一份最新報(bào)告指出，2004年，全球生物制藥市場(chǎng)的收入為450億美元。到2011年，其有望達(dá)到982億美元。據(jù)預(yù)測(cè)，全球第一個(gè)用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)的生物藥物可望于2005～2006年上市。隨著公眾認(rèn)知度的提高和相關(guān)法規(guī)的逐步完善，用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)生物藥物的市場(chǎng)將飛速增長(zhǎng)，到2011年，單美國(guó)市場(chǎng)就將達(dá)到22億美元。2002年底到2003年5月間一場(chǎng)突如其來(lái)的SARS疫情，再加上2005禽流感病毒傳播，席卷了亞洲及加拿大等地。在緊張而又嚴(yán)肅的應(yīng)對(duì)

這場(chǎng)疫情的過(guò)程中，生物制藥又成為醫(yī)藥行業(yè)人士關(guān)注的焦點(diǎn)。

我國(guó)生物制品需求巨大，過(guò)去的幾年我國(guó)企業(yè)一直能保持年均15％以上增幅，并且近年來(lái)銷(xiāo)售的增長(zhǎng)速度有加快的趨勢(shì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2005年國(guó)內(nèi)生物制品銷(xiāo)售收入總額為157．4億元人民幣，銷(xiāo)售利潤(rùn)總額為38.7億元人民幣。預(yù)計(jì)到2006年生物技術(shù)工業(yè)總產(chǎn)值將達(dá)400億到500億元，到2015年總產(chǎn)值可達(dá)1100億到1300億元。我國(guó)的生物制藥業(yè)將進(jìn)入一個(gè)快速發(fā)展的階段,生物醫(yī)藥工業(yè)將成為醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)增長(zhǎng)最快的部分。目前,我國(guó)許多省市已將生物制藥作為本地的支柱產(chǎn)業(yè)重點(diǎn)扶持。一大批生物醫(yī)藥科技園相繼在各地高新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)建成。面對(duì)入世帶給我國(guó)生物制藥業(yè)的挑戰(zhàn)和機(jī)遇,專家們預(yù)測(cè),在未來(lái)若干年,我國(guó)的生物制藥業(yè)將以超過(guò)全球平均增長(zhǎng)速度步入高速發(fā)展軌道,前景十分廣闊。

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第五篇：基因工程及其應(yīng)用說(shuō)課稿

《基因工程及其應(yīng)用》說(shuō)課稿

一、說(shuō)教材

1．教材的地位和作用

《基因工程及其應(yīng)用》是人教版生物必修2第六章第二節(jié)內(nèi)容。本節(jié)的教學(xué)內(nèi)容是在學(xué)生對(duì)基因有一定的理解的基礎(chǔ)上，引入基因工程，讓學(xué)生了解基因工程在生活中的運(yùn)用，激發(fā)學(xué)生的求知欲。在教學(xué)內(nèi)容的組織上體現(xiàn)了學(xué)科內(nèi)在邏輯性與學(xué)生認(rèn)識(shí)規(guī)律的統(tǒng)一。這一節(jié)主要講述了基因工程的原理、基因工程 的應(yīng)用以及轉(zhuǎn)基因生物和轉(zhuǎn)基因食品的安全性三個(gè) 方面的內(nèi)容?；蚬こ痰脑砑仁菍W(xué)生進(jìn)入高中以來(lái)第一次接 觸到的生物工程方面的內(nèi)容。為了避免與《現(xiàn)代生物科 技專題》模塊中基因工程的內(nèi)容重復(fù)，教材沒(méi)有過(guò) 多地展開(kāi)介紹。其地位更是由《課程標(biāo)準(zhǔn)》上的了解層次上升為 《考試說(shuō)明》上的理解層次，其重要性顯而易見(jiàn)。

2.教學(xué)目標(biāo)

根據(jù)本教材結(jié)構(gòu)和內(nèi)容分析，結(jié)合著學(xué)生的認(rèn)知結(jié)構(gòu)及其心理特征，我制定了以下的教學(xué)目標(biāo)：

(1)、知識(shí)目標(biāo)：掌握基因工程的概念、原理及安全性問(wèn)題；基因操作的工具及其操作過(guò)程。

(2)、能力目標(biāo)：培養(yǎng)學(xué)生分析、推理、歸納、總結(jié)的能力。

(3)、情感目標(biāo)：培養(yǎng)學(xué)生實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度，從微觀到宏觀，從現(xiàn)象到本質(zhì)的科學(xué)的研究方法；培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)習(xí)態(tài)度和思維習(xí)慣。

3.說(shuō)教學(xué)的重、難點(diǎn)

本著高二新課程標(biāo)準(zhǔn)和考試大綱，在吃透教材基礎(chǔ)上，我確定了以下教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)(1)、教學(xué)重點(diǎn)

基因工程的基本原理及安全性問(wèn)題、基因操作的工具，基本步驟及其應(yīng)用。(2)、教學(xué)難點(diǎn)

基因工程的基本原理，基因工程的應(yīng)用及其安全性。

4.課程資源的開(kāi)發(fā)及有機(jī)整合：本節(jié)課安排2課時(shí)，應(yīng)當(dāng)充分利用學(xué)生已有的知識(shí)經(jīng)驗(yàn)和網(wǎng)絡(luò)條件學(xué)習(xí)本課知識(shí)。

二、說(shuō)學(xué)法：本節(jié)課的授課對(duì)象是高二的學(xué)生，此年齡段的學(xué)生求知欲望強(qiáng)，因?yàn)楸竟?jié)知識(shí)難度不是很大，學(xué)生將通過(guò)多種途徑，如：觀察、閱讀、思考、分析、討論、實(shí)踐等等，來(lái)開(kāi)展學(xué)生之間的協(xié)作學(xué)習(xí)和自主學(xué)習(xí)，形成以學(xué)生為主體的教學(xué)模式。

三、說(shuō)教法

圍繞本節(jié)課的教學(xué)目標(biāo)、教學(xué)重點(diǎn)和學(xué)生情況的分析，采用了觀察法、演示法、討論法、實(shí)踐法等多種教學(xué)方法，積極創(chuàng)設(shè)一個(gè)可以讓學(xué)生在輕松愉快的氛圍中，去主動(dòng)探求知識(shí)的過(guò)程。在教學(xué)過(guò)程中，開(kāi)展師生互動(dòng)、生生互動(dòng)，體現(xiàn)出以學(xué)生為主體，教師為主導(dǎo)的主動(dòng)探究式教學(xué)理念。

四、說(shuō)教學(xué)過(guò)程

在這節(jié)課的教學(xué)過(guò)程中，我注重突出重點(diǎn)，條理清晰，緊湊合理。各項(xiàng)活動(dòng)的安排也注重互動(dòng)、交流，最大限度的調(diào)動(dòng)學(xué)生參與課堂的積極性、主動(dòng)性。

1、導(dǎo)入新課： 提問(wèn)：各種生物間的性狀千差萬(wàn)別這是為什么呢?

引導(dǎo)：生物體的不同性狀是通過(guò)基因特異性表達(dá)而形成的。

列舉：幾種生物的不同性狀：蠶吐出絲；豆科植物的根瘤菌能夠固定空氣中的氮?dú)?；青霉菌能產(chǎn)生對(duì)人類有用的抗生素——青霉素。

提問(wèn)：人類能不能改造性狀？能不能使本身沒(méi)有某個(gè)性狀的生物具有某個(gè)特定性狀呢？ 引導(dǎo)：讓禾本科植物能夠固定空氣中的氮?dú)?；能否讓?xì)菌“吐出”蠶絲；讓微生物生產(chǎn)出人的胰島素、干擾素等珍貴的藥物。（這種設(shè)想能實(shí)現(xiàn)嗎？）定向改造生物的新技術(shù)——基因工程。

2、講授新課：（1）基因工程的原理

指導(dǎo)學(xué)生閱讀教材P102頁(yè)第二段，通過(guò)提問(wèn)的方式指導(dǎo)學(xué)生找出概念中的關(guān)鍵詞語(yǔ)，并讓學(xué)生理解基因工程概念，引導(dǎo)學(xué)生獨(dú)立完成。最后歸納列表，便于學(xué)生的記憶。概念：在生物體外，通過(guò)對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出所需要的基因產(chǎn)物。（2）基因操作的工具

利用多媒體課件演示抗蟲(chóng)棉培育過(guò)程示意圖，同時(shí)提出討論問(wèn)題，進(jìn)行分組討論，最后交流討論結(jié)果，教師進(jìn)行歸納總結(jié)。

思考：在以上的基因工程培育的過(guò)程中，關(guān)鍵步驟或難點(diǎn)是什么？

引導(dǎo)：關(guān)鍵步驟的完成過(guò)程中都要用到基因操作工具，并使學(xué)生形象地記憶“工具”的作用。A基因的剪刀——限制性內(nèi)切酶（簡(jiǎn)稱限制酶）。

要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性未端 B基因的針線——DNA連接酶

用DNA連接酶連接兩個(gè)相同的黏性未端要連接幾個(gè)磷酸二酯鍵？

限制酶切一個(gè)特定基因要切斷幾個(gè)磷酸二酯鍵？ C基困的運(yùn)輸工具——運(yùn)載體

大家一起思考下這些工具到底怎樣操作才能完成基因工程的過(guò)程呢？ 思考題： 簡(jiǎn)要?dú)w納基因工程操作的基本步驟和大致過(guò)程。

啟發(fā)學(xué)生思考：想像科學(xué)家在分子水平上進(jìn)行這一操作的精確性。

(3)基因工程的應(yīng)用。

學(xué)生閱讀教科書(shū)P.104的內(nèi)容。教師總結(jié)，并從具體事例引入關(guān)于轉(zhuǎn)基因生物和轉(zhuǎn)基因食品安全性的爭(zhēng)議，啟發(fā)學(xué)生對(duì)其安全性問(wèn)題進(jìn)行討論。

3、課堂小結(jié)，強(qiáng)化認(rèn)識(shí)。

復(fù)習(xí)基因工程操作的基本步驟和重要工具，完成課后習(xí)題

4、板書(shū)設(shè)計(jì) 基因工程操作的基本步驟： 剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)

結(jié)束語(yǔ)：

本節(jié)課設(shè)置了一系列問(wèn)題情境，層層設(shè)問(wèn)，在學(xué)生答問(wèn)、質(zhì)疑、討論過(guò)程中讓學(xué)生建構(gòu)新概念和新的知識(shí)體系，并通過(guò)教師及時(shí)掌握反饋信息，適時(shí)點(diǎn)撥、調(diào)節(jié)，讓學(xué)生在推理判斷中培養(yǎng)良好的思維習(xí)慣和對(duì)知識(shí)的遷移能力，而且通過(guò)留出一定的時(shí)間讓學(xué)生提問(wèn)，體現(xiàn)了以學(xué)生為主體的思想。我的說(shuō)課完畢，謝謝大家。