第一篇：菌種安全管理制度

鹽城市婦幼保健院

菌種安全管理制度

1、菌種應專人負責保管，并由部門負責人經常督促檢查。若因工作變動，應及時作好全面交換工作。

2、菌種應保存于安全的地方，所用冰箱等保存容器均應加鎖，若要運輸或攜帶必須置于金屬罐內密封，由專人領取。

3、建立嚴格使用登記制度。

（1）所有菌種須按種類、來源、數量購買時期一一登記入冊。

（2）使用時須使用者簽字，主任審批。

（3）實驗菌種使用完畢須高壓來菌處理并作好銷毀記錄。

4、保存的菌種應于規(guī)定時間定期移種。

5、培養(yǎng)菌種的試管和干燥菌種的安瓿上應貼標簽，寫明編號，菌名及日期。

6、菌種不得外借，不得隨便帶出實驗室。

7、菌種保存范圍，轉移和銷毀等必須嚴格遵守衛(wèi)生部有關規(guī)定，主任不定期檢查，核實菌種使用銷毀情況。

第二篇：菌種傳代操作規(guī)程

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題

目

菌種傳代操作規(guī)程

編碼：

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總頁

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制

定

審

核

批

準

制訂日期

審核日期

批準日期

頒發(fā)部門

質量部

生效日期

分發(fā)部門

化驗室

一、目的：為使菌種傳代操作規(guī)范化、制度化，故建立此規(guī)程

二、適用范圍：菌種傳代須按本規(guī)程執(zhí)行。

三、責任者：微生物限度檢查化驗員，質量檢測中心主任。

四、正文：

1、培養(yǎng)基的制備

按微生物限度檢查用稀釋劑、培養(yǎng)基配制操作規(guī)程及斜面配制操作規(guī)程配制好相應培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、沙門菌、用胰酪大豆胨瓊脂斜面培養(yǎng)基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，制備好的培養(yǎng)基預培養(yǎng)48小時后，確認無菌落生長方可使用。

2.菌種傳代

2.1菌種傳代前應準備好適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設備，所有操作均應在符合生物安全保護的生物安全柜內進行。

2.2點燃酒精燈，在火焰上部操作，將原有的菌種斜面（簡稱菌種管）與待接種的新鮮斜面培養(yǎng)基（簡稱接種管）持在左手拇指、食指及中指之間，菌種管在前，接種管在后，使試管內斜面向上，兩支試管口平齊，應斜持試管呈45°角，以免管底凝集水浸濕培養(yǎng)基表面。用右手在火焰旁轉動兩支試管膠塞，以便接種時易于撥取。再用右手持接種環(huán)的柄端，垂直或稍斜地把接種環(huán)在火焰上灼燒。將接種環(huán)燒紅約30s，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，以徹底滅菌。用右手的小指和手掌之間以及無名指與小指之間，在火焰旁分別拔除兩支試管的膠塞，持住。在將試管口在火焰上通過以殺滅管口的細菌，但勿燒的過熱，將燒灼的接種環(huán)插入菌種管內，先接觸無菌苔生長的培養(yǎng)

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題

目

菌種傳代操作規(guī)程

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基上，如有溶印則表明接種環(huán)未冷卻，待冷后，再從斜面上挑取少許菌苔。取出時接種環(huán)不能通過火焰，應在火焰旁迅速插入接種管，在斜面上由下而上劃

“Z”字型曲線，當接種完畢，立即將管口通過火焰滅菌，右手到火焰旁塞上膠塞，不要將管口離開火焰旁去迎接右手的膠塞。最后將接種環(huán)燒灼滅菌放置備用。

3.培養(yǎng)

將以上接種好的各菌管放入相應溫度的培養(yǎng)箱內，白色念珠菌放入23-28℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24-48h，黑曲霉放入23-28℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)5-7天，其它菌種放入30-35℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18-24小時。

4.保存

除銅綠假單胞菌需室溫保存外，將其它傳代培養(yǎng)后的菌種應放入4-6℃的冰箱冷藏保存。

依據：《中國藥典》2015版及中國藥品檢驗標準操作規(guī)范

第三篇：食用菌菌種買賣合同[最終版]

出賣人： 簽訂時間：

買受人： 簽訂地點：

起始日期: 截止日期: 計劃金額(元):

第一條 標的、數量、價款及交(提)貨時間

產品名稱

交貨時間

單位

（kg）

數 量

單 價

保護價

（元/kg）

總金額

（元）

第二條 質量標準：按《食用菌菌種管理條例》和《無公害江山白菇省級地方質量標準》標準執(zhí)行。檢驗標準、方法、地點及期限；買方于菌種接種之日起10日內提出驗收要求的，按前款規(guī)定的質量標準到買方種菇地驗收。賣方自接到買方在上述期限內提出的驗收要求之日起3日內未辦理驗收的，視為質量不合格。買方在上述期限內未提出要求的，視為質量合格。

第三條 白菇菌種的交貨地點、時間及提供方式：和方式為：_____________。

第四條 定金:買方在 年 月 日前向賣方支付收購定金______元。交貨時定金(抵作貨款)。定金支付后，因買方違約解除合同的，定金不予退還；因賣方違約解除合同的，應雙倍返還定金。

第五條 標的物的所有權自_______時起轉移，但買受人未履行支付款價義務的，標的物屬于_________所有。

第六條 運輸方式及運輸費用負擔；由賣方送到買方指定的——投售點。運輸費用由_______方負擔。

第七條 結算方式、時間及地點：_______________________________________。

第八條 擔保方式(也可另立擔保合同)__________________________________。

第九條 菌種瓶的供應及回收和費用負擔：菌種瓶由賣方提供，每個菌種瓶收取押金______元，由買方于菌種出售后_____日內返還菌種瓶時按實際返還的個數退回。

第十條 本合同解除的條件____________________________________________。

第十一條 違約責任：違約方按合同總金額的______％向守約方支付違約金。

第十二條 合同爭議的解決方式：本合同在履行過程中發(fā)生的爭議，由雙方當事人協(xié)商解決；也可由當地工商行政管理部門調解；協(xié)商或調解不成的，按下列第__種方式解決：

(一)提交______仲裁委員會仲裁；(二)依法向_______人民法院起訴。

第十三條 本合同自_______________起生效。

第十四條 其他約定事項；賣方必須做好對買方的售后技術指導服務。買方未按賣方的技術指導操作而引起的損害，由買方自負。菌種在有效期內出現質量問題的，由賣方負責調換。

出 賣 人 買 受 人

出賣人(章)： 買受人(章)：

住所： 住所：

法定代表人： 法定代表人：

居民身份證號碼； 居民身份證號碼；

委托代理人： 委托代理人：

電話： 電話：

開戶銀行： 開戶銀行：

帳號： 帳號：

第四篇：微生物菌種純度檢測技術規(guī)程

微生物菌種純度檢測技術規(guī)程范圍

本規(guī)程規(guī)定了古菌、細菌、真菌、病毒（種）純度檢測的程序和方法。

本規(guī)程適用于從事微生物菌種資源保藏及研究的機構、大學、企業(yè)、個人等。術語、定義

下列術語和定義適用于本規(guī)程

2.1

純度檢測 purity check

指通過適當的方法檢測菌種是否為純培養(yǎng)物。

2.2

純培養(yǎng)pure culture

由單個細胞的后代組成的培養(yǎng)物，即單細胞培養(yǎng)物或無性繁殖系。通常是由挑取單個菌落或利用單胞分離技術，移種繁殖獲得。菌種的純度檢測

3.1 古菌和細菌的純度檢測

3.1.1 菌落形態(tài)

在特定的培養(yǎng)基上，將待檢測培養(yǎng)物稀釋涂布或平板劃線，適宜培養(yǎng)后，同一平板上的單菌落的大小、形狀、顏色、質地、光澤等是否相似；對于兩種或以上形態(tài)的出發(fā)菌株，應再分別挑取單菌落劃線或稀釋涂布培養(yǎng)，檢測是否重復出現相同特征。

3.1.2 細胞形態(tài)

對數生長期的培養(yǎng)物革蘭氏染色反應應呈現一致性；細胞形狀、大小、莢膜等特征應相似

3.1.3 芽孢大小、位置、形狀

宜檢測樣品是否形成芽孢，對形成芽孢的菌種，其芽孢大小、位置、形狀應相似。

3.2 放線菌菌種純度檢測

3.2.1 菌落形態(tài)

在特定的培養(yǎng)基上，將待檢測培養(yǎng)物稀釋涂布或平板劃線,挑取單菌落，適宜培養(yǎng)后，在同一平板上單菌落形狀、大小、表面狀況、質地、光澤、顏色等應相似。如懷疑為細菌污染，則30℃液體培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)液不應渾濁，如渾濁則視為細菌污染。

3.2.2 培養(yǎng)特征

分別接種三種以上培養(yǎng)基，在三種以上培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征應想同，包括氣生菌絲、基內菌絲、可溶性色素的顏色等。

3.2.3 孢子絲及孢囊

在特定的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度及培養(yǎng)時間等條件下，孢子著生方式、孢子絲形態(tài)及其顏色或孢囊著生位置（氣絲或基絲）、孢囊的形狀，大小應呈現出一致性。

3.3 酵母菌種純度檢測

3.3.1 菌落形態(tài)

應對菌落形態(tài)相似性進行檢測。在特定的培養(yǎng)基上，通過對待檢測菌株進行稀釋或劃線涂布平板獲取單菌落，一定的培養(yǎng)條件下，比較同一平板內，菌落的大小、形狀、顏色、隆起、表面狀況、質地、光澤等應一致。

3.3.2 個體形態(tài)

應對檢測樣品的個體形態(tài)進行檢測。在指定的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件下，細胞形狀、大小及細胞的增殖方式應一致。

3.3.3 繁殖方式

酵母繁殖的方式應一致，如是芽殖，出芽的方位、數量應一致。

3.4 絲狀真菌菌種純度檢測

3.4.1 菌落特征

菌落的形態(tài)等表觀特征應一致。

3.4.2 菌絲特征

在特定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，菌絲分隔、菌絲形態(tài)等應一致。

3.4.3 其他主要顯微特征應一致

3.4.4 檢測是否有細菌污染

3.4.5 對于外觀上不能確定菌種純度的，利用單胞分離技術獲得純培養(yǎng)物進行對比，其菌絲、孢子等特征應與原始菌株的描述一致。

3.5 病毒的純度檢測

3.5.1 純粹檢查

應將待檢病毒液直接接種含硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（T.G）、酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（G.A）、葡萄糖蛋白胨湯。通過一定溫度時間培養(yǎng)后，檢查結果應無細菌生長為純粹。

3.5.2 支原體檢查

檢測由禽胚組織或其細胞所培養(yǎng)的病毒應用改良Frey氏培養(yǎng)基。檢測其它培養(yǎng)方法所得病毒應用支原體培養(yǎng)基。任何一次瓊脂平板上出現支原體菌落，判為陽性。陽性對照中至少有一個平板長菌落，而陰性對照中無菌落生長，則檢驗有效。

3.5.3 外源病毒檢查

病毒類制品在毒種選育和生產過程中，經常使用動物或細胞基質培養(yǎng)，因此，有可能造成外源因子（特別是外源病毒因子）的污染。為了保證制品質量，需要對毒種和細胞進行外源因子檢測。

3.5.3.1 病毒種子批外源因子檢查

對病毒主種子批或工作種子批，應抽取足夠檢測試驗需要量的供試品進行病毒外源因子檢測。在試驗前應用特異性抗體（血清）中和本病毒（或單克隆抗體），所用的抗體免疫源應采用與生產疫苗（或制品）不同種而且無外源因子污染的細胞（或動物）制品。如果病毒曾在禽類組織或細胞中繁殖過，則抗體不能用禽類來制備。若用雞胚，應來自SPF雞群。以下方法可以選擇一種或多種進行。

3.5.3.1.1 動物試驗法

3.5.3.1.1.1 小鼠試驗法

取15－20g小鼠至少10只，用經抗血清中和后的病毒懸液，每只腦內接種0.03ml，同時腹腔接種0.5ml。至少觀察21天。在觀察期內至少有80％最初接種的小鼠存活，試驗才有效。如果沒有小鼠出現病毒感染，為符合要求。解剖所用在試驗24小時后死亡或有患病體征的小鼠，直接觀察期病理改變，并將有病變的相應的組織懸液通過腦內和顱腔接種另外至少5只15－20g小鼠，并觀察21天，如果沒有小鼠出現病毒感染，則符合要求。

3.5.3.1.1.2 乳鼠試驗法

取出生后24小時內的乳鼠至少10只，用經抗血清中和后的病毒懸液，腦內接種0.01ml，同時腹腔接種至少0.1ml。每天觀察，至少14天。在觀察內至少有80％最初接種的乳鼠存活，試驗才有效。如果沒有小鼠出現病毒感染，為符合要求。解剖所有在試驗24小時后死亡或有患病體征的乳鼠，直接肉眼觀察其病理改變，并取有病變的相應的組織和腦、脾制備成懸液通過腦內和腹腔接種另外至少5只出生后24小時內乳鼠，并每天觀察至接種第14天，如果沒有小鼠出現病毒感染，則符合要求。

3.5.3.1.2 細胞培養(yǎng)法

3.5.3.1.2.1 非血吸附檢查

用經抗血清中和后的病毒懸液，接種于生產用的同種的細胞。細胞至少接種6瓶，每瓶病毒懸液接種量不少于培養(yǎng)液總量的25％。于36±1℃培養(yǎng)，觀察14天，必要時可更換細胞培養(yǎng)液，未見細胞病變（CPE）為陰性，符合要求。

3.5.3.1.2.2 血吸附病毒檢查

上述接種病毒的各個細胞于第6－8天后和第14天，取出2瓶進行血吸附病毒檢查。用0.2％－0.5%雞和豚鼠紅細胞混合菌懸液覆蓋于細胞表面，分別置于2－8℃，20－25℃，30分鐘后顯微鏡下觀察，未見血球吸附現象為陰性，符合要求。

3.5.3.1.3 雞胚檢查法

在禽類組織或細胞中繁殖過的病毒種子需用雞胚檢查禽類病毒的污染。選用9－11日和5－7日齡兩組SPF雞胚，每組至少5只，分別于尿囊腔和卵黃囊接種經抗體血清中和后的病毒懸液，每胚0.5ml。孵育7日后，取尿囊液用豚鼠和雞血細胞混合懸液做血球凝集試驗應為陰性。被接種的雞胚至少80％存活7天，試驗有效。

3.5.3.2 生產用細胞外源因子檢查

3.5.3.2.1 細胞直接觀察

每批生產用細胞應留取5％（或不少于500ml）,細胞懸液不接種病毒，作為對照細胞加入與疫苗生產相同的細胞維持液，置于與疫苗生產相同的條件下培養(yǎng)，觀察14天，在顯微鏡下觀察是否有細胞病變（CPE）出現，無細胞病變（CPE）出現者為陰性，符合要求。在觀察期末至少有80％的對照細胞培養(yǎng)物存活，試驗有效。

3.5.3.2.2 血清吸附病毒檢查

對生產用細胞外源因子檢查的（1）項細胞培養(yǎng)物在觀察期末取至少25％的細胞培養(yǎng)瓶進行血吸附病毒檢查。（方法同病毒種子批外源因子檢查的血吸附病毒檢查）

參考文獻

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[4] 中國科學院微生物研究所《常見與常用真菌》編寫組.常見與常用真菌.北京：科學出版社,P1-317，1978

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第五篇：NY_T 528-2002_食用菌菌種生產技術規(guī)程

NY/T 528-2002 食用菌菌種生產技術規(guī)程

基本信息

【英文名稱】Technical inspection of pure culture making of edible fungi 【標準狀態(tài)】被代替 【全文語種】中文簡體 【發(fā)布日期】2002/8/27 【實施日期】2002/12/1 【修訂日期】2002/8/27 【中國標準分類號】暫無 【國際標準分類號】暫無

關聯(lián)標準

【代替標準】暫無 【被代替標準】暫無

【引用標準】GB 4789.28-1994,GB 9687-1988,GB 9688-1988

適用范圍&文摘

暫無