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      ABO血型正反鑒定結(jié)果不符的原因分析

      時間:2019-05-15 10:04:45下載本文作者:會員上傳
      簡介:寫寫幫文庫小編為你整理了多篇相關(guān)的《ABO血型正反鑒定結(jié)果不符的原因分析》,但愿對你工作學(xué)習(xí)有幫助,當(dāng)然你在寫寫幫文庫還可以找到更多《ABO血型正反鑒定結(jié)果不符的原因分析》。

      第一篇:ABO血型正反鑒定結(jié)果不符的原因分析

      大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      ABO血型系統(tǒng)是人類發(fā)現(xiàn)的第一個血型系統(tǒng),也是最重要的血型系統(tǒng),對臨床輸血意義重大。ABO血型系統(tǒng)上有A、B、O、AB四種表型,也存在A亞型、B亞型、AB亞型。ABO系統(tǒng)抗原則有A、B、AB、A1抗原,在胎兒的第9周就可以檢測出來,這些抗原隨著個體基因變異或疾病的影響而改變。ABO血型系統(tǒng)有兩個特點:

      一、人紅細(xì)胞上缺少某個抗原,血清中就存在針對該抗原的抗體,而且是高效價的;

      二、不僅紅細(xì)胞上有ABO抗原,分泌型者得分泌液中也存在某抗原[1]。根據(jù)這一特性來判斷ABO血型。

      臨床上,當(dāng)輸入ABO血型不相合的血液時,會引起溶血性輸血反應(yīng)[2],嚴(yán)重時會危及生命。為了保障臨床輸血的安全,對ABO血型定型規(guī)定做正反定型。當(dāng)正反定型一致時,方可準(zhǔn)確確定ABO血型。但實驗中,往往會出現(xiàn)ABO正反定型不一致的情況。導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有很多,有試劑、方法、技術(shù)等因素的影響,更重要的是血液免疫因素的影響。本文就血液免疫因素方面對ABO正反定型的影響進(jìn)行研究?,F(xiàn)將武漢血液中心2011年1~4月份健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不一致及1~4月份醫(yī)院送檢的正反定型不符的患者標(biāo)本進(jìn)行研究,報告如下。

      一. 材料與方法

      1.1標(biāo)本來源

      武漢血液中心1~4月份健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符標(biāo)本及1~4月份各醫(yī)院送檢的正反定型不符而進(jìn)行疑難血型鑒定的標(biāo)本。其中健康獻(xiàn)血者80例,患者標(biāo)本35例。

      1.2主要試劑與器材

      試劑:抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗-A1、抗-AB、譜細(xì)胞、O型試劑紅細(xì)胞均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,人源性抗-A、抗-B,A、B型試劑紅細(xì)胞為本輸血研究室自制。

      器材:離心機(jī)(日本久保田KA2200);恒溫水浴箱(HH60);顯微鏡(CKTV-2)。

      1.3實驗方法 1.3.1 ABO正定型實驗

      取兩支試管,分別加入兩滴抗-A、抗-B試劑,在各加一滴3-5%受檢者紅細(xì)胞懸液,混勻,3500r/min離心15秒,觀察結(jié)果。懷疑為亞型時,再加做抗-AB、抗-H試驗。

      1.3.2 ABO反定型實驗

      取四支試管,先各加入兩滴受檢者血清,再分別加入一滴A、B、O型試劑紅細(xì)胞和受檢者紅細(xì)胞懸液,混勻,3500r/min離心15秒,觀察結(jié)果。

      1.3.3 吸收放散及唾液血型物質(zhì)檢測

      吸收放散:用生理鹽水將3ml受檢者壓積紅細(xì)胞洗滌三次,取洗后的壓積紅細(xì)胞2ml,加入對應(yīng)的人源性抗血清,4℃下吸收1小時,吸收后用4℃生理鹽水洗滌5次,再放于56℃放散10min,數(shù)次振蕩,3500r/min離心1min,取2滴放散液,加入對應(yīng)的1滴A、B、O試劑紅細(xì)胞,混勻,3500r/min離心15秒,觀察結(jié)果。

      唾液血型物質(zhì)檢測:受檢者唾液離心去雜質(zhì)后,煮沸10min,3500r/min離心5min,以2+凝集強(qiáng)度為標(biāo)準(zhǔn)將抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H標(biāo)化,取1滴上清液與標(biāo)化后的1滴抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H中和,然后加入1滴對應(yīng)的A、B、O試劑紅細(xì)胞,混勻,大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      AB O AB 1 抗-JKb B AB AB 1 AmB亞型:A3B AB B AB 1 A2B有抗-A1 O A A 1 A亞型:Ael O B B 1 B亞型:Bel AB A AB 2 緡錢狀凝集 A AB AB 3 緡錢狀凝集 A O A 1 緡錢狀凝集 B O B 2 緡錢狀凝集 O A O 1 緡錢狀凝集 A O A 2 ABO以外抗體

      陽性,譜細(xì)胞無法確定其特異性

      B O B 1 同上 AB O AB 2 同上 AB A AB 3 同上 A AB A 1 同上 AB B AB 1 同上

      O B O 1 同上

      表-2健康獻(xiàn)血者ABO正反定型不符原因在血型分布情況

      血型 例數(shù) 冷抗體 抗原減弱或缺乏 抗體減弱或缺乏 不規(guī)則抗體 緡錢狀凝集

      A 26 12 1 1 11 1 B 23 7 1 0 13 2 O 8 2 0 0 5 1 AB 23 5 2 0 11 5

      表-1表-2中,獻(xiàn)血者標(biāo)本中引起正反定型不符的原因:冷抗體占32.5%(26/80),抗原減弱或缺乏占5%(4/80),抗體減弱或缺乏占1.25%(1/80),不規(guī)則抗體占50%(40/80),緡錢狀凝集占11.25%(9/80)。

      大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      三、討 論

      本文研究排除技術(shù)因素及試劑因素對ABO正反定型不符的影響。筆者對80例ABO正反定型不符的健康獻(xiàn)血者及35例定型不符的疾病患者進(jìn)行ABO定型、吸收放散、抗體鑒定等實驗,對結(jié)果分析如下:

      從表-1中可以看出,在健康獻(xiàn)血者中,引起ABO正反定型不符的主要原因是冷抗體32.5%(26/80)及不規(guī)則抗體50%(40/80)的產(chǎn)生。對于冷抗體,實驗中將反應(yīng)試管分別放在37℃水浴箱及4℃冰箱,改變反應(yīng)溫度來確認(rèn)冷抗體[3],當(dāng)冷抗體存在時,可以將試管放于37℃下孵育,去除冷抗體后再準(zhǔn)確定型。在不規(guī)則抗體引起的正反定型不符中,最多的是由于抗-M引起不符,占16.25%(13/80),其次是抗-Leb占12.5%(10/80),b這些獻(xiàn)血者無輸血史及妊娠史,這些抗體屬于天然抗體???M及抗-Le都是不規(guī)則抗體,都會引起配血的不合,這類抗體如果在37℃鹽水介質(zhì)和抗人球蛋白反應(yīng)是陽性,輸血時則會產(chǎn)生輸血反應(yīng)[4]。對于此類獻(xiàn)血者建議今后不宜獻(xiàn)血,已獻(xiàn)的血液適合做洗滌紅細(xì)胞。表-1中還有一例是由于A2B產(chǎn)生抗-A1抗體而引起正反定型不符。A型抗原有兩種,A、A1,A1型人紅細(xì)胞上兩種抗原都有,A2型人紅細(xì)胞上只有A抗原[5],在通常輸血前檢測試驗中,患者與獻(xiàn)血者的A1、A2型不必加以區(qū)分,除非當(dāng)A2型或A2B型人血清中有抗-A1抗體存在時[6]。22%--26%的A2B個體血清中可以檢出抗-Al[7],抗-A1抗體在臨床上意義不大,多數(shù)在25℃以上無活性,也有幾例是由于抗-A1引起的溶血性輸血反應(yīng)[8]。對于A2B患者血清中存在抗-A1抗體的輸血,應(yīng)選擇A2B亞型血,若無可以選擇O型洗滌紅細(xì)胞。本文還有11例正反定型標(biāo)本,ABO以外抗體陽性,但上海譜細(xì)胞無法確定其特異性,此種情況可以增加譜細(xì)胞數(shù),若仍不能確定特異性,可以采用分子生物學(xué)的方法來確定抗體的特異性。此外還有9例是由于緡錢狀凝集導(dǎo)致正反定型不符,可能與標(biāo)本使用的抗凝劑有關(guān),EDTA抗凝劑能阻止補(bǔ)體的活化,補(bǔ)體存在時使反定型出現(xiàn)凝集[9],導(dǎo)致正反定型的不符。4例亞型導(dǎo)致正反定型不符,減弱的抗原可以用吸收放散實驗檢測出來,它可以將抗原濃縮和粗純化,靈活運(yùn)用吸收放散實驗可以準(zhǔn)確定型[10]。出現(xiàn)亞型時,正定型加做抗-H、抗-AB,亞型紅細(xì)胞與抗-AB反應(yīng)是增強(qiáng)的[11],檢測H抗原的量對亞型鑒定是有幫助的。

      從表-2可以看出,本文研究的80例健康獻(xiàn)血者中,A型中出現(xiàn)ABO定型不符的例數(shù)最多,占32.5%(26/80),其次是B型、AB型,出現(xiàn)定型不符最少的血型是O型。可能是由于O血型的人體內(nèi)無A、B抗原,在抗原方面出現(xiàn)的變異情況少[12]。

      在35例患者標(biāo)本中,從表-

      3、4得出,抗原因素引起ABO正反定型不符的主要是白血病導(dǎo)致的抗原減弱。是因為白血病患者體內(nèi)N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶受抑制,引起抗原的減弱[13]。而在抗體因素中,較多是由于患者體內(nèi)產(chǎn)生較多的不規(guī)則抗體導(dǎo)致定型不符,最多的是抗-M,這些患者多數(shù)都有輸血史及妊娠史,體內(nèi)發(fā)生同種免疫反應(yīng)產(chǎn)生的同種抗體,多為IgG類。還有1例腫瘤患者,免疫功能下降導(dǎo)致抗體合成受抑制,抗體缺乏導(dǎo)致定型不符。而自身免疫性溶血性貧血患者,自身抗體與紅細(xì)胞結(jié)合,在高蛋白質(zhì)溶液中可自發(fā)凝集,包被嚴(yán)重的在低蛋白ABO定型試劑中也可以凝集,使定型不符,可以用45℃生理鹽水洗去自身抗體后就能準(zhǔn)確定型。

      綜上,排除試劑和技術(shù)因素的影響,導(dǎo)致ABO正反定型不符的原因有:(1)抗原減弱 此原因引起的定型不符,對健康獻(xiàn)血者是由于亞型,而患者則是疾病引起抗原減弱,最多的是白血病引起的減弱。(2)抗體減弱或缺乏 抗體水平與年齡有關(guān)。新生兒在出生后才產(chǎn)生IgM的ABO抗體,到3個月時才能檢測出來,5~10歲時抗體數(shù)目最多,隨后就漸漸下降,老年人在65~70歲以后,抗體水平最低。白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人,由于血漿蛋白質(zhì)中的丙種球蛋白減少從而導(dǎo)致抗體減

      大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      參考文獻(xiàn) 1、5.安萬新,于衛(wèi)建.輸血技術(shù)學(xué).第2版.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2010:45.2.Sazama K Reports of 355 transfusion-associated deaths,1976 through 1985.Transfusion 1990,30(7):583-590.3.張永海,李曉陽.ABO正反定型不符的原因及克服辦法.衛(wèi)生職業(yè)教育,2006,16(24):126-127.4.李雪英,王文莉,李志平,IgM+IgG抗-M引起ABO血型正反定不符1例.當(dāng)代醫(yī)學(xué),2010,16(19):120-120.6.朱自嚴(yán),郭忠慧,張雄民,ABO血型系統(tǒng).免疫血液學(xué),上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2002:33-50.7.杰夫·丹尼爾.人類血型.朱自嚴(yán).譯.北京:科學(xué)出版社.2007:27—28.8.江建峰,林正明,A2B亞型伴有抗A11例.中國輸血雜志,2008,21(1):47-47.9.王曉穎,張坤蓮.抗凝劑影響補(bǔ)體活化致ABO血型正反定型不符1例.中國誤診學(xué)雜志,2009,9(4):981-982.10.Engelfriet CP What is the best techniques for the detection of red cell alloantibodies.Vox.Sang.1995,69(3):292-300.11.舒群峰,田方,曾付芳,Ax亞型及家系調(diào)查1例.中國輸血雜志,2007,20(3):237-238.12.楊珊,健康獻(xiàn)血者與疾病患者ABO正反定型不符比較研究.臨床血液學(xué)雜志,2009,22(5):550-552.13.Akria Y,Takashik,Vibha D et al.Suppressed expression of blood group B antigen andblood group galactosyltransferase in a preleukemic subject.Blood.1985,66(4):990-992.14.王明元,周曉華,狄文英,等.ABO疑難血型基因分型研究.醫(yī)學(xué)理論與實踐,2009,22(4):393-394.15.趙桐茂,人類血型分型的新紀(jì)元.中國輸血雜志,2007,20(1):1221.16.郭如華,邢培清,張伯偉,PCR-SSP方法用于ABO疑難血型檢定.中國輸血雜志,2003,16(3):187-188.大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      4、血液免疫因素

      4.1、抗原減弱或封閉導(dǎo)致ABO正反定型不符。遺傳基因可以決定紅細(xì)胞表面抗原減弱或缺乏,這些減弱或缺乏的抗原也可以是獲得性的。對于健康獻(xiàn)血者來說,亞型最可能導(dǎo)致抗原的減弱,而患者則是由于所患疾病。最多的是白血病患者引起的抗原減弱或消失。白血病患者在疾病活動期抗原減弱,通常情況下抗原減弱是暫時的,但是患者在疾病緩解期又會恢復(fù)回原來的血型[5]。為了將抗原減弱與亞型區(qū)別,可以通過延長反應(yīng)時間,在4℃放置后再試驗,同時加做吸收放散,有條件的可以進(jìn)行過唾液血型物質(zhì)檢測。懷疑亞型時,因為亞型紅細(xì)胞上H抗原數(shù)目是增多的,正定型可以加做紅細(xì)胞與抗-H、抗-AB抗體反應(yīng),多數(shù)反應(yīng)比正常同型要強(qiáng)[6],反定型加做血清與A1c、A2c細(xì)胞反應(yīng),用吸收放散試驗來檢測紅細(xì)胞上是否有弱血型抗原及確定其亞型型別,檢測唾液血型物質(zhì)有助于ABO血型的準(zhǔn)確定型。此外,卵巢囊腫、胃癌或腸道阻塞的患者,本身血清中會有大量血型特異性的可溶物質(zhì)產(chǎn)生,能與抗-A抗-B試劑中和,使抗原被封閉,導(dǎo)致定型困難。這時可以將待檢測紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌三次后重新試驗。自免貧、輸血反應(yīng)、新生兒溶血病及服用抗高血壓藥物的患者,紅細(xì)胞由于被抗體致敏,使抗原被封閉,造成ABO正定型的困難,這時用吸收放散法去除致敏的抗體,然后再重復(fù)試驗來準(zhǔn)確定型。

      4.2、未知的抗原反應(yīng)導(dǎo)致正反定型不符

      (1)獲得性A或B抗原 患者紅細(xì)胞與抗-A試劑反應(yīng),在顯微鏡下觀察到混合視野凝集,Tn抗原活化的紅細(xì)胞,證明有獲得性A抗原。獲得性B抗原的紅細(xì)胞反應(yīng)像AB型,血清內(nèi)有抗B抗體,多為患腸道阻塞和消化道疾病的患者,病情好轉(zhuǎn)時,獲得性B抗原也隨即消失。獻(xiàn)血者的獲得性B抗原,可能是原患疾病產(chǎn)生的,提倡對獻(xiàn)血者進(jìn)行健康調(diào)查時注意胃腸道患病史,避免此類獻(xiàn)血者[7]。

      (2)改變的抗原 多凝集細(xì)胞是指紅細(xì)胞能被多數(shù)正常人血清所凝集,這種凝集反應(yīng)叫多凝集反應(yīng),產(chǎn)生的原因有:T抗原活化(一般是紅細(xì)胞受到細(xì)菌等污染)、Tn抗原活化(與血液學(xué)方面異常有關(guān)如溶血性貧血)、Cad多凝集。相對應(yīng)的解決辦法是:對于是由于Tn活化導(dǎo)致的多凝集反應(yīng),可用1%無花果酶或木瓜酶處理紅細(xì)胞,而T活化的多凝集反應(yīng),由于其再室溫下反應(yīng)較強(qiáng),在37℃下反應(yīng)則較弱,故實驗需在37℃下進(jìn)行。

      (3)低頻率的抗原抗體反應(yīng) 抗血清試劑抗-A、抗-B中可能存在低頻率抗體,通常情況下,獻(xiàn)血者或患者紅細(xì)胞很少與抗血清試劑內(nèi)的低頻率抗體反應(yīng),但在有料想不到的極弱抗原存在時應(yīng)該考慮低頻率的抗原抗體反應(yīng)。

      4.3、抗體減弱或缺乏導(dǎo)致ABO正反定型不符

      抗體的降低或缺乏,可以引起同族凝集素的減弱或缺乏。見于以下幾種情況:(1)嵌合現(xiàn)象 此原因?qū)е碌目贵w缺乏不是很常見。非同卵雙胎的個體,雙受精引起體內(nèi)都認(rèn)為是自己的兩種種群的紅細(xì)胞終生存在,這些人不會產(chǎn)生抗-A或抗-B抗體,從而導(dǎo)致正反定型不符。如骨髓移植后或換血治療的患者。(2)丙種球蛋白過低血癥、丙種球蛋白缺乏血癥 白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制藥物及骨髓移植的病人,由于血漿蛋白質(zhì)中的丙種球蛋白減少從而導(dǎo)致抗體減少,使正反定型不符。通過在反定型時,增加反應(yīng)時間,加大血清量,在4℃溫度下放置5~10min后再進(jìn)行試驗來準(zhǔn)確定型。(3)年齡 正反定型不符情況在新生兒中出現(xiàn)最多。新生兒在出生后才產(chǎn)生IgM的ABO抗體,到3個月時才能檢測出來,5~10歲時抗體數(shù)目最多,隨后就漸漸下降,老年人在65~70歲以后,抗體水平最低。所以一般新生兒不做反定型,如果做反定型,可以加大血清量或?qū)嶒炛惺褂玫碗x子強(qiáng)度溶液。(4)從正在輸液患者一側(cè)靜脈采集血液標(biāo)本,采集血液的部位不規(guī)范,導(dǎo)致血液被稀釋而抗體反應(yīng)假性減弱[8]。當(dāng)非AB型病人大量輸

      大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      ABO定型,可以用基因分型來避免假陰性結(jié)果。筆者建議研究中國人的ABO基因特點及分子遺傳背景,研制出適合我國人群的ABO血型鑒定試劑盒,提高血型鑒定的準(zhǔn)確性。

      大連醫(yī)科大學(xué)2012屆本科畢業(yè)論文

      致 謝

      感謝我的指導(dǎo)老師沈鋼和石小玲老師。在整個實驗中,從選題、查資料、寫綜述,到試驗,以及最后統(tǒng)計、分析、攥寫論文,他們都傾注了很多心血,給予了我很大的指導(dǎo)和幫助。他們不僅教給了我科研工作的基本的流程和方法,更重要的是,他們教給我科研工作者必須具備的嚴(yán)謹(jǐn)求實的科學(xué)態(tài)度。

      感謝輸血研究室的各位老師對我的關(guān)懷,感謝武漢市紅十字血液中心的領(lǐng)導(dǎo)對我的關(guān)愛。

      第二篇:abo血型鑒定

      生理鹽水凝集法

      ①玻片法:操作簡單,適于大量標(biāo)本檢查,但反應(yīng)時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細(xì)胞凝集,因此,不適于反向定型。

      ②試管法:由于離心作用可加速凝集反應(yīng),故反應(yīng)時間短,而且,借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密,促進(jìn)凝集作用,適于急診檢查。

      紅細(xì)胞亞型抗原性弱,如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時,易造成漏檢或誤定。如加用O型(抗A、B)血清和反向定型,可避免此類錯誤。

      玻片法凝集結(jié)果判斷:紅細(xì)胞呈均勻分布,無凝集顆粒,鏡下紅細(xì)胞分散。

      在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn):

      ①呈一片或幾片凝塊,僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為(++++)。

      ②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊,有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為(+++)。

      ③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒,游離紅細(xì)胞約占1/2為(++)。

      ④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察,每凝集團(tuán)中有5~8個以上紅細(xì)胞凝集為(+)。

      ⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起,周圍有很多的游離紅細(xì)胞(±)。

      ⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

      ⑦鏡下未見細(xì)胞凝集,紅細(xì)胞均勻分布為(-)。凝膠微柱法

      是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標(biāo)本,用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化,定量加樣,確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

      抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

      準(zhǔn)血清均采自健康人,并應(yīng)符合下述條件:①特異性:只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集,無非特異性凝集。②效價:我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1:128以上。③親和力:我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s;抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時,凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價:在1:4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。[3] 編輯本段注意事項

      1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血,凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染,建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后,應(yīng)待其平衡至室溫后再用,用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。

      2、加試劑順序:一般先加血清,然后再加紅細(xì)胞懸液,以便核實是否漏加血清。

      3、雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾,一般在室溫20℃~24℃內(nèi)進(jìn)行試驗,而37℃條件,可使反應(yīng)減弱。

      4、幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱,最好采用試管法鑒定血型。

      5、玻片法反應(yīng)時間不能少于10min,否則較弱凝集不能出現(xiàn),造成假陰性。

      6、正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。

      7、反定型法:先天性免疫球蛋白缺陷,長期大量應(yīng)用免疫抑制,血型抗體可減弱或消失;血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難;新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體,且自身血型抗體效價又低,因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及(或)抗B抗體,可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[4]

      ABO血型系統(tǒng)

      英文:ABO blood group system 根據(jù)紅細(xì)胞表面有無特異性抗原(凝集原)A和B來劃分的血液類型系統(tǒng)。ABO血型系統(tǒng)是1900年奧地利蘭茨泰納發(fā)現(xiàn)和確定的人類第一個血型系統(tǒng)。根據(jù)凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細(xì)胞上只有凝集原A的為A型血,其血清中有抗B凝集素;紅細(xì)胞上只有凝集原B的為B型血,其血清中有抗A的凝集素;紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血,其血清中無抗A、抗B凝集素;紅細(xì)胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型,其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細(xì)胞可被抗A凝集素凝集;抗B凝集素可使含凝集原B的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。輸血時若血型不合會使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生凝集,引起血管阻塞和血管內(nèi)大量溶血,造成嚴(yán)重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下,因O型紅細(xì)胞無凝集原,不會被凝集,可輸給任何其他血型的人。AB型的人,血清中無凝集素,可接受任何型的紅細(xì)胞。但是異型輸血輸入量大時,輸入血中的凝集素未能被高度稀釋,有可能使受血者的紅細(xì)胞凝集。所以大量輸血時仍應(yīng)采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外,還根據(jù)凝集反應(yīng)原理,將供血者和受血者的血液作交叉配血實驗,在體外確證兩者血液相混不發(fā)生凝集,方可進(jìn)行輸血以確保安全。近年來發(fā)現(xiàn)存在于紅細(xì)胞上的凝集原(即血型抗原)也存在于其他血細(xì)胞和一般組織細(xì)胞。所有細(xì)胞表面血型抗原的特異性可作為機(jī)體免疫系統(tǒng)鑒別自身和異物的標(biāo)志。因此,在臨床實踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關(guān)鍵。人類血型有遺傳特性,決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H,分別受ABO三個等位基因控制。A、B基因為顯性基因,O(H)基因為隱性基因。它們的遺傳規(guī)律所顯示的父、母血型與子代血型間的關(guān)系,在法醫(yī)學(xué)上可作為否定親子關(guān)系的依據(jù),若再配合其他血型系統(tǒng)的測定,則可判斷親子關(guān)系。

      血型不僅在輸血上有重要意義,而且在人種學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、移植免疫、疾病抵抗力(或易感性)等方面都有應(yīng)用價值,在輸血前,一定要檢查病人(受血者)和輸血人(供血者)的血型,并且要進(jìn)行交叉配血試驗。在臨床醫(yī)學(xué)中,除輸血、移植免疫外,對新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查,也都需要血型知識和有關(guān)技術(shù)。ABO血型抗原具有種族差異。例如,中歐地區(qū)的人群中,約40%以上的人為A型,近40%的人為O型,10%的人為B型,6%的人為AB型;而90%的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

      通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清,就可將群體分為四種血型。

      根據(jù)血型的遺傳規(guī)律,和臨床工作方例起見,配偶間所生子女的血型如下:

      各種ABO配偶所生子女的血型:

      婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

      A×A A、O B、AB

      A×B A、B、O、AB 無

      A×AB A、B、AB O

      A×O A、O B、AB

      B×B B、O A、AB

      B×AB A、B、AB O

      B×O B、O A、AB

      AB×AB A、B、AB O

      AB×O A、B AB、O

      O×O O A、B、AB

      婚配式 A型血的可能 B型血的可能

      A*A 75% 0% 25% 0%

      A*B 25% 25% 25% 25%

      A*O 50% 0% 50% 0%

      A*AB 50% 25% 0% 25%

      B*B 0% 75% 25% 0%

      B*O 0% 75% 25% 0%

      O型血的可能AB型血的可能

      B*AB 25% 50% 0% 25%

      O*O 0% 0% 100% 0%

      O*AB 50% 50% 0% 0%

      AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結(jié)

      AB0血型鑒定原理

      常用鹽水凝集法檢測紅細(xì)胞上存在的血型抗原,以及血清中存在的血型抗體,依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有:①正向定型:用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。②反向定型:用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定:凡紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集者為陽性,呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

      鑒定方法

      (1)生理鹽水凝集法:①玻片法:操作簡單,適于大量標(biāo)本檢查,但反應(yīng)時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細(xì)胞凝集,因此,不適于反向定型。②試管法:由于離心作用可加速凝集反應(yīng),故反應(yīng)時間短,而且,借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密,促進(jìn)凝集作用,適于急診檢查。

      紅細(xì)胞亞型抗原性弱,如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時,易造成漏檢或誤定。如加用O型(抗A、B)血清和反向定型,可避免此類錯誤。

      玻片法凝集結(jié)果判斷:紅細(xì)胞呈均勻分布,無凝集顆粒,鏡下紅細(xì)胞分散。在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn):①呈一片或幾片凝塊,僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為(++++)。②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊,有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為(+++)。③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒,游離紅細(xì)胞約占1/2為(++)。④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察,每凝集團(tuán)中有5~8個以上紅細(xì)胞凝集為(+)。⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起,周圍有很多的游離紅細(xì)胞(±)。⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細(xì)胞凝集,紅細(xì)胞均勻分布為(-)。

      (2)凝膠微柱法:是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標(biāo)本,用專用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化,定量加樣,確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

      抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

      準(zhǔn)血清均采自健康人,并應(yīng)符合下述條件:①特異性:只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集,無非特異性凝集。②效價:我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1:128以上。③親和力:我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s;抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時,凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價:在1:4以下。⑤無菌。⑥滅活補(bǔ)體。血型鑒定操作時注意事項

      一般注意事項:①所用器材必須干燥清潔、防止溶血,凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染,建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后,應(yīng)待其平衡至室溫后再用,用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。②加試劑順序:一般先加血清,然后再加紅細(xì)胞懸液,以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾,一般在室溫20℃~24℃內(nèi)進(jìn)行試驗,而37℃條件,可使反應(yīng)減弱。④幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱,最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應(yīng)時間不能少于10min,否則較弱凝集不能出現(xiàn),造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。⑦反定型法:先天性免疫球蛋白缺陷,長期大量應(yīng)用免疫抑制,血型抗體可減弱或消失;血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難;新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體,且自身血型抗體效價又低,因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及(或)抗B抗體,可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[6]

      第三篇:ABO正反定型不符的問題分析及解決辦法

      ABO正反定型不符的問題分析及解決辦法

      ABO正定型是用已知的標(biāo)準(zhǔn)血清檢測紅細(xì)胞上未知的抗原

      ABO反定型是用已知的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢測血清中未知的抗體

      一.引起ABO正反定型不一致的原因分析 1.技術(shù)因素例如

      (1)試劑貯存不當(dāng)

      (2)使用技術(shù)錯誤

      (3)使用錯誤的試劑

      (4)使用污染或失效的試劑

      (5)離心速度不當(dāng) 2.存在IgM性質(zhì)的自身冷抗體

      由于自身冷抗體(冷凝集病,CHD)而導(dǎo)致自身溶血的病人,在低于37℃時血細(xì)胞自發(fā)凝集,影響正反定型。

      3.抗原表達(dá)弱或缺失例如 a.白血病 b.雙胞胎 c.H基因變異 4.高水平可溶性血型物質(zhì)的病人。5.混合視野:例如

      (1)來自近期輸注非ABO同型紅細(xì)胞病人的血樣

      (2)骨髓移植后不久

      (3)Tn或A3型紅細(xì)胞 6.缺失或弱抗-A、抗-B例如

      (1)新生兒血清

      (2)免疫缺陷、紊亂病人

      (3)老年人 7.前帶現(xiàn)象

      當(dāng)抗-A或抗-B的效價(如35000)IgG太高時, 立即離心法與A 或B細(xì)胞不反應(yīng)。8.多凝集:多凝集紅細(xì)胞,具有不正常的膜結(jié)構(gòu),可被正常成人血清凝集。9.不正常血清蛋白:

      白蛋白/球蛋白比例失調(diào)的血清引起紅細(xì)胞產(chǎn)生緡錢狀假凝集。

      10.血樣血清中存在抗試劑成分的抗體:例如抗防腐劑的抗體、抗EDTA的抗體等,此種抗體可以通過將紅細(xì)胞洗滌而解除。

      二、ABO正反定型不符的解決方法有以下幾個

      (一)出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗原的解決方法有

      1.洗滌RBC且延長孵育時間進(jìn)行試驗,如果使用洗滌紅細(xì)胞后反應(yīng)加強(qiáng),則考慮是血型物質(zhì)的抑制

      2.酶處理紅細(xì)胞再次試驗 3.吸收放散確定是否是亞型。

      4.了解輸血史(尤其是O型紅細(xì)胞輸注)來分析混合視野 5.了解病情診斷(尤其是白血?。?.了解是否是骨髓移植受者 7.了解是否是雙胞胎

      8.是否使用從前未使用過的單克隆抗體血清進(jìn)行了血型鑒定 9.分泌型型物質(zhì)檢查

      10.進(jìn)行玫瑰花試驗來確定是否混入其它紅細(xì)胞,或進(jìn)行細(xì)胞分離

      (二)出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗體例如 1.年齡:新生兒及老人。

      2.低球蛋白血癥:如白血病人、使用免疫抑止藥物、低球蛋白的惡性淋巴瘤病人、骨髓移植后病人。

      3.丙球缺乏血癥:如免疫缺陷病人 4.雙胞胎嵌合體 解決方法有 1.延長反應(yīng)時間

      2.放在室溫檢查血清中的抗體。用A、B、O及自身紅細(xì)胞進(jìn)行檢查,用酶處理的A、B、O及自身細(xì)胞進(jìn)行檢查??赡苄枰谠囼炃斑M(jìn)行冷抗體的自身吸收 3.確定病人年齡以及臨床診斷(例如新生兒還有免疫病)有關(guān)新生兒血型,這是資格證經(jīng)??荚嚨念}目

      例如,6個月大新生兒正定性型是O型,反定型是B型,請問新生兒是什么血型?答案應(yīng)該是O型,因為嬰兒尚未產(chǎn)生自己的抗體或有從母親獲得的血型抗體,所以新生兒不適合用血清做反定型。

      4.確定輸血史(例如非ABO同型的血漿輸注)

      (三)出現(xiàn)多余抗原(額外抗原)可能情況有 1.抗原發(fā)生改變:

      (1)獲得性B:腸道疾病患者,細(xì)菌作用導(dǎo)致

      (2)多凝集現(xiàn)象:紅細(xì)胞被掘大多數(shù)人的正常血清凝集

      2.紅細(xì)胞已經(jīng)被抗體包被:例如自家免疫溶血性貧血、輸血反應(yīng)及HDN。

      3.非抗-A及抗-B的抗體與相應(yīng)抗原形成復(fù)合體吸附在紅細(xì)胞表面,引起正定型非特異性凝集。

      4.混合視野:非同型輸注,例如O型紅細(xì)胞給其他型輸用,非ABO同型的骨髓移植,A3亞型等。

      5.低頻率抗原抗體反應(yīng):定型血清中的存在低頻抗原的抗體,與對應(yīng)的低頻抗原產(chǎn)生陽性反應(yīng)。解決方法有

      1.將紅細(xì)胞洗滌再進(jìn)行試驗,確定是否是病人或獻(xiàn)血員的血清中存在針對ABO定型試劑成分的抗體

      2.用O型及自身紅細(xì)胞于室溫檢查病人血清,確定血清中是否有冷自身抗體,如果有,則用2ME或DTT處理。

      3.用不同廠家的試劑檢查洗滌的紅細(xì)胞 4.了解病人的臨床診斷

      5.如果懷疑是獲得性B,則用酸化的抗-B檢查 6.進(jìn)行ABH分泌型型物質(zhì)檢查

      7.如果用多克隆抗-A檢查結(jié)果是混合視野,則用蛋白酶處理RBC試驗,考慮是否是多凝集

      產(chǎn)生未知抗體反應(yīng)的可能情況有

      1.蛋白或血漿不正常引起的緡錢狀凝集:

      血清蛋白濃度異常,球蛋白濃度由于疾病而升高(例如多發(fā)性骨髓瘤),原發(fā)性巨球蛋白血癥,纖維蛋白原濃度升高,血漿擴(kuò)容劑的使用以及何杰金氏淋巴瘤,新生兒臍血中的華通氏膠。

      2.冷反應(yīng)性自身抗體:

      存在ABO系統(tǒng)的意外抗體:例如A2或A2B個體血清中可能存在天然抗-A1,順式AB人群中弱的抗-B,導(dǎo)致反定型試驗多出抗體。

      3.被檢者血清中存在ABO系統(tǒng)以外的特異性冷同種抗體,反定型時出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。解決方法有

      1.在室溫及4℃檢查,確定是否存在自身抗體或冷同種抗體

      2.洗滌紅細(xì)胞再次進(jìn)行試驗,防止血清中有針對試劑紅細(xì)胞保存液成分的抗體 在37℃定型,去除冷自生抗體干擾后定型,血型物質(zhì)檢測

      (五)混合視野凝集的解決方法有 1.確定是否近期懷孕或輸血 2.確定臨床診斷(尤其是白血?。?.是否是骨髓移植受者 4.是否是雙胞胎

      5.用細(xì)胞分離術(shù)將兩群細(xì)胞分開,分別定型 6.ABH型物質(zhì)檢查 7.了解輸血史

      第四篇:ABO血型鑒定假陽性的原因淺析(精選)

      ABO血型鑒定正反定型不一致的原因淺析

      【摘 要】目的:探討ABO血型正反定型不一樣的原因。方法:ABO血型玻片法正定型和試管法反定型。

      結(jié)果:血型鑒定的過程中會有某些干擾因素引起一些假象,造成血型鑒定假陰性或假陽性反應(yīng)。結(jié)論:臨床應(yīng)采用正反定型對照的方法來確認(rèn)血型,以免受各界因素影響而誤導(dǎo)對試驗結(jié)果的判斷。

      血型是以血液抗原形式表現(xiàn)出來的一種遺傳性狀,一般是不會發(fā)生改變的。我們平常所稱的血型泛指ABO血型系統(tǒng)和RH血型系統(tǒng)。這兩種血型系統(tǒng)不合極易造成輸血反應(yīng),所以ABO血型鑒定的準(zhǔn)確性是十分重要的。而血型鑒定的過程中會有某些干擾因素造成一些假象,如血液中含有較高的冷凝集素或自身免疫性抗體,使受檢者紅細(xì)胞上的抗原減弱等因素,造成血型鑒定假陰性或假陽性反應(yīng),病人血清或血漿中的白細(xì)胞過多,堵塞了凝膠間隙,從而影響了紅細(xì)胞的沉降,造成假陽性等。從而出現(xiàn)正反定型不一致的情況,在這里我們淺析一下影響因素。

      (1)新生兒:6個月以內(nèi)的嬰兒抗體多來自母親,自身血型抗體效價又低,反定型時可能不凝集或凝集很弱,所以不宜做反向定型。

      (2)老年人:隨年齡增長老年人抗體水平呈逐漸下降趨勢,造成鑒定困難。

      (3)白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制藥患者、先天性丙種球蛋白缺乏癥等。

      (4)被檢紅細(xì)胞凝集力減弱,如A 2、A 2 B等亞型紅細(xì)胞抗原性弱或由于惡病質(zhì)病人,如白血病、某些惡性腫瘤使A或B抗原變?nèi)酰律鷥杭t細(xì)胞血型抗原形成不足等。

      (5)全凝集與多凝集紅細(xì)胞:紅細(xì)胞被細(xì)菌污染,細(xì)菌酶消化了紅細(xì)胞表面的唾液酸,暴露出T抗原而被激活,正常人紅細(xì)胞上有T抗原,血清中有抗T,但因紅細(xì)胞表面存在的唾液酶T抗原無活性,當(dāng)紅細(xì)胞被細(xì)菌污染后,使紅細(xì)胞與多數(shù)人血清凝集稱為多凝集,如與所有人血清都凝集稱為全凝集。對這兩種疑為全凝集或多凝集紅細(xì)胞時,用多份AB型血清加以證實,因此種現(xiàn)象與AB型血清也發(fā)生凝集,應(yīng)重新抽血,用標(biāo)準(zhǔn)的定型方法來測定患者準(zhǔn)確血型。

      (6)獲得性B表現(xiàn),某些腸道桿菌感染的患者,由于細(xì)菌等引起的獲得性類B抗原,易產(chǎn)生假陽性結(jié)果,A型患者出現(xiàn)類B可判為AB型,O型錯判為B型,此種現(xiàn)象當(dāng)病情好轉(zhuǎn)類B即消失。

      (7)某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相對或絕對性增高,多發(fā)性骨髓瘤因患者血清中病理性球蛋白增加易形成錢串狀排列,而外觀類似凝集,臨床應(yīng)用血漿擴(kuò)容劑如低分子右旋糖酐均可使紅細(xì)胞成錢串狀假凝集。真與假的區(qū)別是在鏡下觀察時,假凝集紅細(xì)胞呈錢串狀排列,形狀基本完整,加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢串排列消失,而真凝集加等滲鹽水凝集不消失,紅細(xì)胞不會散開。

      (8)反應(yīng)溫度不合適亦會造成假性結(jié)果。ABO血型鑒定主要測定體內(nèi)的完全抗體,完全抗體最適溫度多在22℃至4℃左右,屬于IgM抗體,為冷性抗體,許多IgM類型的抗體在4℃時的反應(yīng)強(qiáng)度遠(yuǎn)高于37℃。另外血型鑒定方法也會影響結(jié)果。如玻片法定型簡單,不需要離心設(shè)備,僅靠抗體的力量,凝集紅細(xì)胞而無離心的加速反應(yīng),所以反應(yīng)的時間較長,不適合急診,另亞型紅細(xì)胞抗原與抗體的凝集反應(yīng)慢,凝集強(qiáng)度弱,有時容易被忽略而導(dǎo)致定型錯誤,不適合用于反定型和交叉配血,只適于大規(guī)模血型普查。而試管法定型反應(yīng)快,需時短,特別是緊急輸血時可在抗原抗體反應(yīng) 1min后離心觀察結(jié)果。通過離心增強(qiáng)凝集,可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的抗原抗體反應(yīng),結(jié)果準(zhǔn)確可靠,為臨床常規(guī)應(yīng)用的方法。

      為臨床輸血安全在鑒定血型時采用正反定型,正定型是用標(biāo)準(zhǔn)血型抗體,對紅細(xì)胞膜上ABO系統(tǒng)血型抗原的鑒定。反定型是用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞抗原對血清中ABO系統(tǒng)血型抗體的鑒定,其目的在于復(fù)檢正定型結(jié)果的準(zhǔn)確性糾正漏檢誤報,特別是一些具有弱抗原的亞型,正定型易被忽略,此外反定型還可以糾正某些腫瘤病人因紅細(xì)胞抗原性減弱造成的正定型錯誤以及克服排除獲得性類B抗原和全凝集現(xiàn)象對紅細(xì)胞定型的干擾,可發(fā)現(xiàn)血清中存在的一些不規(guī)則抗體等。

      總而言之,血型鑒定是一項重要而嚴(yán)肅的工作,關(guān)系到患者的生命安全。檢驗人員必須認(rèn)真負(fù)責(zé),嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作,熟練掌握操作步驟,能察覺出檢驗結(jié)果的異樣,并認(rèn)真復(fù)查。盡可能的規(guī)避干擾因素,保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

      【參考文獻(xiàn)】

      馮春顏,吳文權(quán),彭友堂等。ABO血型鑒定結(jié)果的質(zhì)量控制方法?,F(xiàn)代簡檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2007.22:113-114 王晨,錢寶華,韋燕萍等。7例ABO血型抗體減弱或缺乏的臨床分析。臨床輸血與檢驗雜志,2008.10:243-245.

      第五篇:試管法ABO血型鑒定

      試管法ABO血型鑒定

      1.檢驗?zāi)康?/p>

      鑒定供受血者ABO血型,保證臨床輸血安全。2.檢驗方法 試管法 2.1.試管法 2.1.1.實驗原理

      ABO血型鑒定,是根據(jù)IgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合能出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理,用已知IgM類特異性標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或(和)B抗原,同時用已知標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞和B型紅細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的天然IgM類抗A或(和)抗B。2.1.2.標(biāo)本要求

      靜脈EDTA抗凝血2.0~3.0ml,以3000r/min離心3分鐘,分離上清液。2.1.3.試劑

      單克隆或多克隆抗A、抗B試劑,3-5% A、B及O型試劑標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液。2.1.4.器材

      離心機(jī),4℃冰箱、顯微鏡,12×70mm試管(以下稱“小試管”),滴管,10mm×60mm透明的玻璃試管或塑料試管。2.1.5.操作步驟

      2.1.5.1.正定型(查抗原):取試管2支,分別標(biāo)明抗A、抗B,加入抗A和抗B分型血清各2滴于試管底部,再以滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴,混勻。

      2.1.5.2.反定型(查抗體):取試管3支,分別標(biāo)明A型、B型和O型細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部,再分別以滴管加入A、B、O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴,混勻。

      2.1.5.3.立即以3000r/min離心10秒。(離心時間為離心機(jī)校準(zhǔn)時間)。2.1.5.4.輕輕搖動試管,使沉于管底的紅細(xì)胞浮起,先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象,如肉眼觀察不見凝集,應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上,再以低倍鏡下觀察有無凝集。2.1.5.5.凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)

      ++++:紅細(xì)胞凝集成一大片或幾片,僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞,血清清晰透明。

      +++:紅細(xì)胞凝集成數(shù)個大顆粒凝塊,有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞,血清透明。

      ++:紅細(xì)胞凝成數(shù)個小顆粒凝塊,游離紅細(xì)胞<1/2。+:紅細(xì)胞凝成數(shù)個小顆粒凝塊,游離紅細(xì)胞>1/2?!溃杭t細(xì)胞凝成數(shù)個微小顆粒凝塊,周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF:混合凝集外觀(mixed field,MF),鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而絕大多數(shù)紅細(xì)胞呈分散分布。

      -:陰性,鏡下未見紅細(xì)胞凝集,紅細(xì)胞均勻分布。HP:部分溶血(part hemolysis,HP),有些殘留紅細(xì)胞。H:完全溶血(hemolysis,H),無殘留紅細(xì)胞。2.1.5.6.報告受檢者紅細(xì)胞ABO血型(表1001-1)。

      表1001-1 ABO血型鑒定結(jié)果判斷

      分型血清+受檢者紅細(xì)胞

      抗A + - - + 抗B - + - +

      A B O AB 受檢者血型

      A細(xì)胞 - + + -

      B細(xì)胞 + - + -

      O細(xì)胞 - - - -

      受檢者血清+試劑紅細(xì)胞

      注:+為凝集;-為不凝集

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