第一篇：關(guān)于染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)原理及實(shí)驗(yàn)總結(jié)

關(guān)于染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)原理及實(shí)驗(yàn)總結(jié)

ChIP實(shí)驗(yàn)原理

在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。

可以利用ChIP研究轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor, TF）與啟動(dòng)子（promoter）的關(guān)聯(lián)性。由于ChIP采用甲醛固定活細(xì)胞或者組織的方法，所以能比較真實(shí)的反映細(xì)胞內(nèi)TF與Promoter的結(jié)合情況。這個(gè)優(yōu)勢(shì)是EMSA這個(gè)體外研究核酸與蛋白相互結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法所不能比擬的。當(dāng)用甲醛處理時(shí)，相互靠近的蛋白與蛋白，蛋白與核酸（DNA或RNA）之間會(huì)產(chǎn)生共價(jià)鍵。細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)TF與Promoter相互結(jié)合（生物意義上的結(jié)合）時(shí)，它們必然靠的比較近，或者契合在一起，這個(gè)時(shí)候用甲醛處理，能使它們之間產(chǎn)生共價(jià)鍵。

一般ChIP的流程是：甲醛處理細(xì)胞——收集細(xì)胞，超聲破碎——加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合——加入Protein A，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀——對(duì)沉淀下來的復(fù)合物進(jìn)行清洗，除去一些非特異性結(jié)合——洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物——解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷——PCR分析。

ChIP實(shí)驗(yàn)步驟

第一天：

（一）、細(xì)胞的甲醛交聯(lián)與超聲破碎。

1、取出1平皿細(xì)胞（10cm平皿），加入243ul 37％甲醛，使得甲醛的終濃度為1％。（培養(yǎng)基共有9ml）2、37攝氏度孵育10min。

3、終止交聯(lián)：加甘氨酸至終濃度為0.125M。

450ul 2.5M甘氨酸于平皿中?；靹蚝?，在室溫下放置5min即可。

4、吸盡培養(yǎng)基，用冰冷的PBS清洗細(xì)胞2次。

5、細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞于15ml離心管中（PBS依次為5ml，3ml和3ml）。預(yù)冷后2000rpm 5min收集細(xì)胞。

6、倒去上清。按照細(xì)胞量，加入SDS Lysis Buffer。使得細(xì)胞終濃度為每200ul含2×106個(gè)細(xì)胞。這樣每100ul溶液含1×106個(gè)細(xì)胞。再加入蛋白酶抑制劑復(fù)合物。假設(shè)MCF7長滿板為5×106個(gè)細(xì)胞。本次細(xì)胞長得約為80％。即為4×106個(gè)細(xì)胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。將2管混在一起，共800ul。

7、超聲破碎：VCX750，25％功率，4.5S沖擊，9S間隙。共14次。當(dāng)然，如果實(shí)驗(yàn)室有Bioruptor這種神器的話那就輕松了。

（二）、除雜及抗體哺育。

8、超聲破碎結(jié)束后，10，000g 4度離心10min。去除不溶物質(zhì)。留取300ul做實(shí)驗(yàn)，其余保存于－80度。

300ul中，100ul加抗體做為實(shí)驗(yàn)組；100ul不加抗體做為對(duì)照組；100ul加入4ul 5M NaCl（NaCl終濃度為0.2M），65度處理3h解交聯(lián)，跑電泳，檢測(cè)超聲破碎的效果。

9、在100ul的超聲破碎產(chǎn)物中，加入900ul ChIP Dilution Buffer和20ul的50×PIC。再各加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。4度顛轉(zhuǎn)混勻1h。10、1h后，在4度靜置10min沉淀，700rpm離心1min。

11、取上清。各留取20ul做為input。一管中加入1ul 抗體，另一管中則不加抗體。4度顛轉(zhuǎn)過夜。

（三）、檢驗(yàn)超聲破碎的效果。

取100ul超聲破碎后產(chǎn)物，加入4ul 5M NaCl，65度處理2h解交聯(lián)。分出一半用酚/氯仿抽提。電泳檢測(cè)超聲效果。

第二天：

（一）、免疫復(fù)合物的沉淀及清洗。

12、孵育過夜后，每管中加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。4度顛轉(zhuǎn)2h。13、4度靜置10min后，700rpm離心1min。除去上清。

14、依次用下列溶液清洗沉淀復(fù)合物。清洗的步驟：加入溶液，在4度顛轉(zhuǎn)10min，4度靜置10min沉淀，700rpm離心1min，除去上清。洗滌溶液：a.low salt wash buffer----one wash b.high salt wash buffer-----one wash c.LiCl wash buffer------one wash d.TE buffer------two wash

15、清洗完畢后，開始洗脫。洗脫液的配方：100ul 10％SDS，100ul 1M NaHCO3，800ul ddH2O，共1ml。

每管加入250ul洗脫buffer，室溫下顛轉(zhuǎn)15min，靜置離心后，收集上清。重復(fù)洗滌一次。最終的洗脫液為每管500ul。

16、解交聯(lián)：每管中加入20ul 5M NaCl（NaCl終濃度為0.2M）。混勻，65度解交聯(lián)過夜。

第三天：

（一）、DNA樣品的回收

17、解交聯(lián)結(jié)束后，每管加入1ul RNaseA（MBI），37度孵育1h。

18、每管加入10ul 0.5M EDTA，20ul 1M Tris.HCl（PH 6.5），2ul 10mg/ml 蛋白酶K。45度處理2h。

19、DNA片段的回收―――omega膠回收試劑盒。最終的樣品溶于100ul ddH2O。

（二）、PCR分析

ChIP技術(shù)總結(jié)

（一）、關(guān)于細(xì)胞

細(xì)胞的生長狀態(tài)要好。因?yàn)榧?xì)胞的生長狀態(tài)直接影響細(xì)胞內(nèi)部的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，也很有可能影響你所研究的TF與其靶Promoter的結(jié)合。一般細(xì)胞長到75％－80％比較好。

（二）、關(guān)于抗體！

抗體是實(shí)驗(yàn)成敗的致命因素之一！必須是IP級(jí)別的抗體，另外如果經(jīng)濟(jì)條件許可的話，盡量買大廠的抗體。不推薦國產(chǎn)抗體和santa cruz的抗體，即使是IP級(jí)別的。

單抗與多抗的選擇也需要仔細(xì)考慮。兩種抗體各有利弊。單抗特異性強(qiáng)，背景低。但是單抗有一個(gè)致命的弱點(diǎn)，就是識(shí)別位點(diǎn)單一，而在ChIP甲醛交聯(lián)的過程中，很有可能該位點(diǎn)被其它蛋白或核酸結(jié)合而被封閉，導(dǎo)致單抗不能識(shí)別靶蛋白。多抗雖然沒有這個(gè)問題，但是多抗特異性較差，背景可能會(huì)偏高。

一般而言，如果沒有十足把握（單抗的識(shí)別位點(diǎn)遠(yuǎn)離靶蛋白與核酸結(jié)合的區(qū)域），選擇多抗比較穩(wěn)妥一些。

（三）、關(guān)于交聯(lián)與超聲破碎！

這一塊的確是ChIP實(shí)驗(yàn)中比較難把握的部分。交聯(lián)的程度會(huì)影響到超聲破碎的效果，交聯(lián)的程度越高，超聲破碎就越不易把基因組打碎成小片段。

交聯(lián)不充分，只有一部分靶蛋白與其Promoter相結(jié)合，富集得到的Promoter的量不高，實(shí)驗(yàn)假陰性。交聯(lián)過充分，基因組上結(jié)合了太多的蛋白，對(duì)超聲破碎造成障礙。另外也會(huì)增加背景。一般來講，按照我的經(jīng)驗(yàn)，交聯(lián)條件取決于細(xì)胞類型。不同的細(xì)胞系，交聯(lián)的條件也不一樣。例如：NIH－3T3的交聯(lián)條件是室溫（25攝氏度）下15min，1％的甲醛濃度，而別的細(xì)胞系則可能完全不一樣。而超聲破碎的條件，機(jī)器不一樣，條件也不一樣。當(dāng)然如果你有bioruptor這樣的神器，那么超聲破碎對(duì)你而言就是小菜一碟了。

一般，理想的超聲破碎得到的片段大小是200bp－1000bp。但是200bp－2000bp的范圍也是可以接受的。

（四）、關(guān)于操作

希望盡可能的保持低溫（4度）。

沉淀的時(shí)候可以先在4度放置一會(huì)，等它自然沉降一些，再超低轉(zhuǎn)速（500rpm等）離心使其完全沉降。

雖然說明書上說ChIP實(shí)驗(yàn)的過程中有幾個(gè)可以停頓的地方，我還是希望你能夠連續(xù)把它做完，直到PCR結(jié)果出來為止。盡量避免實(shí)驗(yàn)中不可預(yù)知的影響因素。

（五）、關(guān)于解交聯(lián)

雖然說明書上說4小時(shí)已經(jīng)足夠，但是我還是希望你可以解交聯(lián)過夜。因?yàn)樵谀菢拥沫h(huán)境里，DNA不會(huì)降解，過夜解交聯(lián)更充分些。只是不要忘記在EP管口封上封口膜。

（六）、關(guān)于DNA片段的回收

需要注意的是：樣品中SDS樣品較高，普通的PCR產(chǎn)物回收試劑盒回收，很有可能會(huì)在最終的樣品中混入SDS，影響PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

小Tip：過柱前，在樣品中加入一定量的異丙醇，能有效的消除SDS沉淀。

第二篇：染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)實(shí)驗(yàn)指南及技術(shù)總結(jié)

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)指南及技術(shù)總結(jié)

ChIP是一項(xiàng)比較流行的研究轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor, TF）與啟動(dòng)子（promoter）相互結(jié)合的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。由于ChIP采用甲醛固定活細(xì)胞或者組織的方法，所以能比較真實(shí)的反映細(xì)胞內(nèi)TF與Promoter的結(jié)合情況。這個(gè)優(yōu)勢(shì)是EMSA這個(gè)體外研究核酸與蛋白相互結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法所不能比擬的。當(dāng)用甲醛處理時(shí)，相互靠近的蛋白與蛋白，蛋白與核酸（DNA或RNA）之間會(huì)產(chǎn)生共價(jià)鍵。細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)TF與Promoter相互結(jié)合（生物意義上的結(jié)合）時(shí)，它們必然靠的比較近，或者契合在一起，這個(gè)時(shí)候用甲醛處理，能使它們之間產(chǎn)生共價(jià)鍵。

一般ChIP的流程是：甲醛處理細(xì)胞——收集細(xì)胞，超聲破碎——加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合——加入Protein A，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀——對(duì)沉淀下來的復(fù)合物進(jìn)行清洗，除去一些非特異性結(jié)合——洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物——解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷——PCR分析。

在PCR分析這一塊，比較傳統(tǒng)的做法是半定量－PCR。但是現(xiàn)在隨著熒光定量PCR的普及，大家也越來越傾向于Q－PCR了。此外還有一些由ChIP衍生出來的方法。例如RIP（其實(shí)就是用ChIP的方法研究細(xì)胞內(nèi)蛋白與RNA的相互結(jié)合，具體方法和ChIP差不多，只是實(shí)驗(yàn)過程中要注意防止RNase，最后分析的時(shí)候需要先將RNA逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA）；還有ChIP-chip（其實(shí)就是ChIP富集得到的DNA-片段，拿去做芯片分析，做法在ChIP的基礎(chǔ)上有所改變，不同的公司有不同的做法，要根據(jù)公司的要求來準(zhǔn)備樣品）。

第一天：

（一）、細(xì)胞的甲醛交聯(lián)與超聲破碎。

1、取出1平皿細(xì)胞（10cm平皿），加入243ul 37％甲醛，使得甲醛的終濃度為1％。（培養(yǎng)基共有9ml）2、37攝氏度孵育10min。

3、終止交聯(lián)：加甘氨酸至終濃度為0.125M。

450ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混勻后，在室溫下放置5min即可。

4、吸盡培養(yǎng)基，用冰冷的PBS清洗細(xì)胞2次。

5、細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞于15ml離心管中（PBS依次為5ml，3ml和3ml）。預(yù)冷后2000rpm 5min收集細(xì)胞。

6、倒去上清。按照細(xì)胞量，加入SDS Lysis Buffer。使得細(xì)胞終濃度為每200ul含2×106個(gè)細(xì)胞。這樣每100ul溶液含1×106個(gè)細(xì)胞。再加入蛋白酶抑制劑復(fù)合物。

假設(shè)MCF7長滿板為5×106個(gè)細(xì)胞。本次細(xì)胞長得約為80％。即為4×106個(gè)細(xì)胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。將2管混在一起，共800ul。

7、超聲破碎：VCX750，25％功率，4.5S沖擊，9S間隙。共14次。

（二）、除雜及抗體哺育。

8、超聲破碎結(jié)束后，10，000g 4度離心10min。去除不溶物質(zhì)。留取300ul做實(shí)驗(yàn)，其余保存于－80度。

300ul中，100ul加抗體做為實(shí)驗(yàn)組；100ul不加抗體做為對(duì)照組；100ul加入4ul 5M NaCl（NaCl終濃度為0.2M），65度處理4h解交聯(lián)，跑電泳，檢測(cè)超聲破碎的效果。

9、在100ul的超聲破碎產(chǎn)物中，加入900ul ChIP Dilution Buffer和20ul的50×PIC。再各加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。4度顛轉(zhuǎn)混勻1h。10、1h后，在4度靜置10min沉淀，700rpm離心1min。

11、取上清。各留取20ul做為input。一管中加入1ul 抗體，另一管中則不加抗體。4度顛轉(zhuǎn)過夜。

（三）、檢驗(yàn)超聲破碎的效果。

取100ul超聲破碎后產(chǎn)物，加入4ul 5M NaCl，65度處理4h解交聯(lián)。分出一半用酚/氯仿抽提。電泳檢測(cè)超聲效果。

第二天：

（一）、免疫復(fù)合物的沉淀及清洗。

12、孵育過夜后，每管中加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。4度顛轉(zhuǎn)2h。13、4度靜置10min后，700rpm離心1min。除去上清。

14、依次用下列溶液清洗沉淀復(fù)合物。清洗的步驟：加入溶液，在4度顛轉(zhuǎn)10min，4度靜置10min沉淀，700rpm離心1min，除去上清。

洗滌溶液：a.low salt wash buffer—-one wash b.high salt wash buffer—–one wash c.LiCl wash buffer——one wash d.TE buffer——two wash

15、清洗完畢后，開始洗脫。洗脫液的配方：100ul 10％SDS，100ul 1M NaHCO3，800ul ddH2O，共1ml。

每管加入250ul洗脫buffer，室溫下顛轉(zhuǎn)15min，靜置離心后，收集上清。重復(fù)洗滌一次。最終的洗脫液為每管500ul。

16、解交聯(lián)：每管中加入20ul 5M NaCl（NaCl終濃度為0.2M）?；靹颍?5度解交聯(lián)過夜。第三天：

（一）、DNA樣品的回收

17、解交聯(lián)結(jié)束后，每管加入1ul RNaseA（MBI），37度孵育1h。

18、每管加入10ul 0.5M EDTA，20ul 1M Tris.HCl（PH 6.5），2ul 10mg/ml 蛋白酶K。45度處理2h。

19、DNA-片段的回收―――omega膠回收試劑盒。最終的樣品溶于100ul ddH2O。

（二）、PCR分析

二、技術(shù)總結(jié)

（一）、關(guān)于細(xì)胞

細(xì)胞的生長狀態(tài)要好。因?yàn)榧?xì)胞的生長狀態(tài)直接影響細(xì)胞內(nèi)部的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，也很有可能影響你所研究的TF與其靶Promoter的結(jié)合。

一般細(xì)胞長到75％－80％比較好。

（二）、關(guān)于抗體！

抗體是實(shí)驗(yàn)成敗的致命因素之一！必須是IP級(jí)別的抗體，另外如果經(jīng)濟(jì)條件許可的話，盡量買大廠的抗體。不推薦國產(chǎn)抗體和santa cruz的抗體，即使是IP級(jí)別的。

單抗與多抗的選擇也需要仔細(xì)考慮。兩種抗體各有利弊。單抗特異性強(qiáng)，背景低。但是單抗有一個(gè)致命的弱點(diǎn)，就是識(shí)別位點(diǎn)單一，而在ChIP甲醛交聯(lián)的過程中，很有可能該位點(diǎn)被其它蛋白或核酸結(jié)合而被封閉，導(dǎo)致單抗不能識(shí)別靶蛋白。多抗雖然沒有這個(gè)問題，但是多抗特異性較差，背景可能會(huì)偏高。

一般而言，如果沒有十足把握（單抗的識(shí)別位點(diǎn)遠(yuǎn)離靶蛋白與核酸結(jié)合的區(qū)域），選擇多抗比較穩(wěn)妥一些。

（三）、關(guān)于交聯(lián)與超聲破碎！

這一塊的確是ChIP實(shí)驗(yàn)中比較難把握的部分。交聯(lián)的程度會(huì)影響到超聲破碎的效果，交聯(lián)的程度越高，超聲破碎就越不易把基因組打碎成小片段。

交聯(lián)不充分，只有一部分靶蛋白與其Promoter相結(jié)合，富集得到的Promoter的量不高，實(shí)驗(yàn)假陰性。交聯(lián)過充分，基因組上結(jié)合了太多的蛋白，對(duì)超聲破碎造成障礙。另外也會(huì)增加背景。

一般來講，按照我的經(jīng)驗(yàn)，交聯(lián)條件取決于細(xì)胞類型。不同的細(xì)胞系，交聯(lián)的條件也不一樣。例如：NIH－3T3的交聯(lián)條件是室溫（25攝氏度）下15min，1％的甲醛濃度，而別的細(xì)胞系則可能完全不一樣。而超聲破碎的條件，機(jī)器不一樣，條件也不一樣。當(dāng)然如果你有bioruptor這樣的神器，那么超聲破碎對(duì)你而言就是小菜一碟了。

一般，理想的超聲破碎得到的片段大小是200bp－1000bp。但是200bp－2000bp的范圍也是可以接受的。

（四）、關(guān)于操作

希望盡可能的保持低溫（4度）。

沉淀的時(shí)候可以先在4度放置一會(huì)，等它自然沉降一些，再超低轉(zhuǎn)速（500rpm等）離心使其完全沉降。

雖然說明書上說ChIP實(shí)驗(yàn)的過程中有幾個(gè)可以停頓的地方，我還是希望你能夠連續(xù)把它做完，直到PCR結(jié)果出來為止。盡量避免實(shí)驗(yàn)中不可預(yù)知的影響因素。

（五）、關(guān)于解交聯(lián)

雖然說明書上說4小時(shí)已經(jīng)足夠，但是我還是希望你可以解交聯(lián)過夜。因?yàn)樵谀菢拥沫h(huán)境里，DNA不會(huì)降解，過夜解交聯(lián)更充分些。只是不要忘記在EP管口封上封口膜。

（六）、關(guān)于DNA-片段的回收

需要注意的是：樣品中SDS樣品較高，普通的PCR產(chǎn)物回收試劑盒回收，很有可能會(huì)在最終的樣品中混入SDS，影響PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

小Tip：過柱前，在樣品中加入一定量的異丙醇，能有效的消除SDS沉淀。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的細(xì)節(jié)問題

本文來自互聯(lián)網(wǎng)搜索，僅供參考使用，最好實(shí)驗(yàn)條件需要自己摸索：

1、cell counting：盡量做到準(zhǔn)確，會(huì)影響input結(jié)果。

2、cross link：甲醛的終濃度是1%，這個(gè)基本所有的protocol上都會(huì)強(qiáng)調(diào)。

3、resuspend cells with SDS:一定要選用小的tip頭，在液面下吹打，否則很容易產(chǎn)生氣泡，后面的sonication就麻煩了。

4、sonication：ChIP中最重要的一部分，合適的條件要自己摸索，可以一次嘗試不同次數(shù)的sonication，然后建議采用EZ-ChIP上推薦的方法看看sonication的效果如何。

5、加入salmon sperm DNA/Protein A or G之前要先混勻，因?yàn)閟almon sperm DNA是很粘稠的物質(zhì)，若不混勻，后面你會(huì)發(fā)現(xiàn)beads的量不一樣，自然也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

6、wash 的時(shí)候前面幾個(gè)步驟可以不用洗的太干凈，但最后一個(gè)要盡量吸干凈，必要時(shí)可用gel loading tips吸。

7、含beads的samples離心時(shí)，有的protocol上推薦是1000rpm，45秒，但可以根據(jù)情況調(diào)整，但要注意轉(zhuǎn)速不能太快防止beads破碎。（當(dāng)然如果采用的是magnetic的beads就不存在這個(gè)問題）

8、reverse crosslink可以是65°4個(gè)小時(shí)，也可以overnight。

9、reverse crosslink后的在進(jìn)行下面步驟之前建議先離心，把蒸發(fā)到離心管蓋子上的部分離下來。

10、每次行real time PCR之前都要把sample離心保證取樣的準(zhǔn)確。11、1~10ul的槍取3ul以上才比較準(zhǔn)確，所以考慮好自己PCR反應(yīng)體系的配置。

Upstate生物技術(shù)公司chip試劑盒英文Protocol ChIP assay: Chromatin immunoprecipitation assay was performed according to the protocol of ChIP assay kit(Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY).1, For cells cultured in 2D, about 1—2×107 S1 cells were growth in 100mm dish, and were cross-linked by adding formaldehyde to final concentration of 1% and incubated in room temperature for 10 minutes.For cells growth in 3D, cells were isolated from EHS using PBS/EDTA, and also cross-linked as cells growth in 2D.2, Wash cells twice using ice cold PBS containing protease inhibitors(1mM phenylmethylsulfonyl fluoride(PMSF), 1microgram/ml aprotinin and 1microgram/ml pepstatin A).Note: Add protease inhibitors to PBS just prior to use.PMSF has a half-life of approximately 30 minutes in aqueous solutions.3, Scrape cells into conical tube, Pellet cells for 4 minutes at 2000 rpm at 4℃.4, Cells were washed with PBS and resuspended in ChIP lysis buffer(1% SDS, 10mM EDTA, 50 mM Tris-HCl pH8.0)add protease inhibitors(inhibitors: 1mM PMSF, 1microgram/ml aprotinin and 1microgram/ml pepstatin A)..After incubated 10 minutes on ice, cells were sonicated to shear DNA to lengths between 200 and 1000 basepairs being sure to keep samples ice cold.5, Centrifuge samples(part A, step 7)for 10 minutes at 13,000 rpm at 4℃, and detected the OD260 of the lysates.6, Sonicated lysates were then diluted to OD260 2 with ChIP dilution buffer().60 ul protein A-agarose beads(Upstate Catalog # 16-157)was added to sonicated lysates and rotated at 4 for one hour to reduce the non-specific dinding.7, Pellet agarose by brief centrifugation and collect the supernatant fraction, 20ul of lystates were taken out as input control.9, Add the immunoprecipitating antibody(the amount will vary per antibody)to the 2ml supernatant fraction and incubate 2h at 4℃ with rotation.For a negative control, perform a no-antibody immunoprecipitation by incubating the supernatant fraction with 60 microliters of Salmon Sperm DNA/Protein A Agarose Slurry for one hour at 4℃ with rotation.10, Pellet agarose by gentle centrifugation(700 to 1000 rpm at 4℃, ~1min).Carefully remove the supernatant that contains unbound, non-specific DNA.Wash the protein A agarose/antibody/histone complex for 3-5 minutes on a rotating platform with 1ml of each of the buffers listed in the order as given below: Low salt wash buffer(0.1% SDS, 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 20 mM Tris-HCl pH8.0, 150 mM NaCl);High salt wash buffer(0.1% SDS, 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 20 mM Tris-HCl pH8.0, 500 mM NaCl);LiCl buffer(0.25 M LiCl, 1% NP-40, 1% SDC, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl pH8.0);TE buffer(20 mM Tris-HCl pH8.0, 1 mM EDTA pH8.0).11, Elute the histone complex from the antibody by adding 250 microliter elution buffer(1%SDS, 0.1M NaHCO3)to the pelleted protein A agarose/antibody/histone complex from step 10 above.Vortex briefly to mix and incubate at room temperature for 15 minutes with rotation.Spin down agarose, and carefully transfer the supernatant fraction(eluate)to another tube and repeat elution.Combine eluates(total volume=approximately 500 microliters.)12, Add 20 microliters 5M NaCl to the combined eluates(500 microliters)and reverse histone-DNA crosslinks by heating at 65℃ for 4 hours.Note: Include the input DNA from this step.13, Add 10 microliters of 0.5M EDTA, 20 microliters 1M Tris-HCl, pH 6.5 and 2 microliters of 10mg/ml Proteinase K to the combined eluates and incubate for one hour at 45℃.14, Recover DNA by phenol/chloroform extraction and ethanol precipitation.Addition of an inert carrier, such as 20 micrograms glycogen, helps visualize the DNA pellet.Wash pellets with 70% ethanol and air dry.15, Resuspend pellets in an appropriate buffer for PCR or slot-blot reactions.PCR or slot-blot conditions must be determined empirically.

第三篇：Millipore ChIP實(shí)驗(yàn)說明書

ChIP實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)

陽性對(duì)照抗體是兔抗乙?；M蛋白H3抗體（可檢測(cè)人，鼠和四膜蟲）。陰性對(duì)照是正常的兔IgG。對(duì)照引物mix是檢測(cè)166 bp人體GAPDH啟動(dòng)子序列的（both end-point and real-time quantitative PCR）。用啟動(dòng)子特異性引物進(jìn)行PCR時(shí)建議用來分析富集度較高的DNA片段。

需自己準(zhǔn)備的材料：

? 細(xì)胞，? 自己要檢測(cè)用的ChIP抗體，? 37%的甲醛，? Taq DNA聚合酶（PCR用），? dNTPs，2.5 mM each，? SYBR-Green for qPCR，? DNase and RNase-free sterile H2O。

引物設(shè)計(jì)：

? Primer Length：24 nt

? Optimum Tm：60°C? Optimum GC：50%? Amplicon size：100-700 bp Detailed Chromatin Immunoprecipitation Protocol

A.In vivo Crosslinking and Lysis

開始前準(zhǔn)備：

? 150 mm培養(yǎng)皿中裝20 ml培養(yǎng)基，讓細(xì)胞鋪板率達(dá)到80~90%。

? HeLa細(xì)胞數(shù)大約有107個(gè)，可用來制備10次獨(dú)立的免疫沉淀反應(yīng)。

? 細(xì)胞數(shù)量可以根據(jù)抗體的性能進(jìn)行縮放。例如提供的對(duì)照抗體能夠用105個(gè)細(xì)

胞來進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。為了確?？贵w的性能，此protocol用了106個(gè)細(xì)胞來進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。

? 將PBS和培養(yǎng)皿放在冰上（步驟3和6）。

? 每塊150 mm培養(yǎng)皿準(zhǔn)備42 ml 1×PBS（4.2 ml 10×PBS加37.8 ml水）并放

在冰上。

? 將Nuclear Lysis Buffer放在室溫下使SDS充分溶解。

? 取出Protease Inhibitor Cocktail II在室溫下解凍（步驟3和13使用）。該溶液

中含有DMSO在18.4℃以下就會(huì)凍結(jié)。

1、加550 μl 37%的甲醛（或1100 μl新鮮的18.5%甲醛）到20 ml細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，輕輕地晃動(dòng)混勻。

? 甲醛的終濃度為1%。盡量使用新鮮的甲醛（配置方法見附錄B）。

2、室溫下孵育10 min，不要振蕩細(xì)胞。

3、取出2 ml冰冷的PBS，每ml PBS中加5 μl Protease Inhibitor Cocktail II。

4、加2 ml 10×Glycine到培養(yǎng)皿中將未反應(yīng)的甲醛消除。

5、晃動(dòng)混勻并在室溫下孵育5 min。

6、將培養(yǎng)皿放在冰上。

7、吸出培養(yǎng)基，盡可能的將培養(yǎng)基去除干凈，小心不要擾亂細(xì)胞。

8、加20 ml冰冷的PBS來洗滌細(xì)胞。

9、除去PBS，再用PBS洗滌一次。

10、加2 ml含1×Protease Inhibitor Cocktail II的冷PBS到培養(yǎng)皿中。

11、將細(xì)胞從培養(yǎng)皿刮下來放到離心管中。

12、4℃ 800 g（900~1000 rpm）離心5 min沉淀細(xì)胞。

13、準(zhǔn)備好0.5 ml cell Lysis Buffer（含2.5 μl Protease Inhibitor Cocktail II）。

14、除去上清液（此步中的細(xì)胞沉淀可以放在-80℃中保存）。

15、用準(zhǔn)備好的0.5 ml cell Lysis Buffer重懸細(xì)胞。

16、冰上孵育15 min，每5 min漩渦振蕩一下細(xì)胞懸液。

? 可選：孵育之后，用Dounce勻漿器將細(xì)胞懸液勻漿化10次以促進(jìn)核釋放。17、4℃ 800 g（900~1000 rpm）離心5 min。

18、準(zhǔn)備0.5 ml Nuclear Lysis Buffer（含2.5 μl Protease Inhibitor Cocktail II）。

19、離心后除去上清，用0.5 ml Nuclear Lysis Buffer重懸細(xì)胞。

? 107個(gè)HeLa細(xì)胞建議加0.5 ml Nuclear Lysis Buffer。如果細(xì)胞濃度不同可以相

應(yīng)的改變用量，因?yàn)榱呀庖汉图?xì)胞的比例會(huì)影響細(xì)胞的裂解效果。

20、如果已經(jīng)確定了最適的超聲處理?xiàng)l件，繼續(xù)B部分，否則，看附錄A。

B、Sonication to Shear DNA

選擇最佳的超聲條件來打斷交聯(lián)的DNA，使其長度為200~1000 bp。

1、需要的話，從步驟A-17中取5 μl細(xì)胞裂解液進(jìn)行電泳檢測(cè)未打斷的DNA。

2、在冰上超聲處理細(xì)胞裂解液。（條件摸索）

3、4℃ 10000~15000 g（~12000 rpm）離心10 min除去不溶解的沉淀。

4、有需要的話，可以取出5 μl打斷的DNA電泳檢測(cè)超聲效果。

5、將上清液吸到一個(gè)新的離心管中，分為50 μl一份。

? 每50 μl包含106個(gè)細(xì)胞的裂解產(chǎn)物，可以用來做一次免疫沉淀反應(yīng)。? 打斷的交聯(lián)染色質(zhì)可以在-80℃中保存3個(gè)月。

C、Immunoprecipitation(IP)of Crosslinked Protein/DNA

開始該步驟之前：取出Protease Inhibitor Cocktail II在室溫融化（步驟3用）。

1、準(zhǔn)備足夠的稀釋液（含蛋白酶抑制劑），放在冰上。

? 每個(gè)IP實(shí)驗(yàn)需要450 μl Dilution Buffer和2.25 μl Protease Inhibitor Cocktail II。? 測(cè)試樣品包括：陽性對(duì)照Anti-Acetyl Histone H3，陰性對(duì)照Normal Rabbit IgG，和自己實(shí)驗(yàn)用的抗體。建議增加一個(gè)與自己所用抗體同源的陰性對(duì)照IgG。2、50 μl打斷的交聯(lián)好的染色質(zhì)放在冰上。

? 若用同一樣品進(jìn)行多個(gè)免疫沉淀反應(yīng)，可將0.5 m樣品放在一管中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3、加450 μl稀釋液（含Protease Inhibitor Cocktail II）到50 μl染色質(zhì)樣品中。

4、取出5 μl（1%）上清液作為“Input”并放在4℃直到步驟D-1。

5、加入免疫沉淀抗體和20 μl混勻的protein A magnetic beads。

? 陽性對(duì)照anti-Acetyl Histone H3，5.0 μg抗體每管。

? 陰性對(duì)照Normal Rabbit IgG，5.0 μg抗體每管。

? 用戶使用的抗體和對(duì)照，每管加1~10 μg抗體每管（根據(jù)抗體效價(jià)進(jìn)行調(diào)整）。6、4℃旋轉(zhuǎn)孵育1~ 4 h或過夜。

7、用magnetic separator將Protein A magnetic beads沉淀下來并除去上清。

8、用0.5 ml下列冷的緩沖液洗脫P(yáng)rotein A bead-antibody/chromatin complex，每次在旋轉(zhuǎn)臺(tái)上孵育3~5 min以清楚磁性，并小心的除去上清。

a、Low Salt Immune Complex Wash Buffer(Cat.# 20-154), one washb、High Salt Immune Complex Wash Buffer(Cat.# 20-155), one washc、LiCl Immune Complex Wash Buffer(Cat.# 20-156), one wash

d、TE Buffer(Cat.# 20-157), one wash

D、洗脫P(yáng)rotein/DNA復(fù)合物和反交聯(lián)Protein/DNA復(fù)合物為單獨(dú)的DNA。

1、在室溫下解凍Proteinase K和ChIP Elution Buffer(w/o Proteinase K)，確保SDS完全溶解了。為所有的IP管和Input管準(zhǔn)備最終的的洗脫液。

? 每管用的洗脫液：100 μl ChIP Elution Buffer(不含蛋白酶K)，1 μl Proteinase K。2、62℃振蕩孵育2 h3、95℃孵育10 min。

4、將樣品冷卻至室溫。

5、用磁鐵分離beads并將上清液移到一個(gè)新的管子中。

E、DNA Purification Using Spin Columns1、取出Spin Filter到Collection Tube中。

2、加0.5 ml Bind Reagent “A”到每個(gè)100 μl的DNA樣品管中并混勻。

? 5倍體積的Bind Reagent “A”用于1倍體積的樣品，可能有沉淀，但不影響。

3、將sample/Bind Reagent “A”混合液轉(zhuǎn)移到Spin Filter中。

4、10000~15000 g（~12000 rpm）離心30 s。

5、將Collection Tube中的離心液除去。

6、將Spin Filter放回Collection Tube。

7、加500 μl Wash Reagent “B”到Spin Filter中。

8、10000~15000 g（~12000 rpm）離心30 s。

9、除去Collection Tube中的離心液。

10、把Spin Filter放回Collection Tube中。

11、10000~15000 g（~12000 rpm）離心30 s。

12、除去Collection Tube中的液體。

13、將Spin Filter放到一個(gè)干凈的Collection Tube中。

14、將50 μl Elution Buffer “C”加到Spin Filte的膜上。

15、10000~15000 g（~12000 rpm）離心30 s。

16、除去Spin Filte，洗脫液就是純化的DNA，可以用于檢測(cè)或存于-20℃。

第四篇：化工原理實(shí)驗(yàn)總結(jié)

化工原理實(shí)驗(yàn)總結(jié)

化工原理是環(huán)境工程專業(yè)必修的一門極為重要的專業(yè)基礎(chǔ)課，化工原理實(shí)驗(yàn)是學(xué)習(xí)、掌握和運(yùn)用這門課程的重要環(huán)節(jié)。比起我們之前做的普通實(shí)驗(yàn)，化工原理實(shí)驗(yàn)更具工程特點(diǎn)，要求我們對(duì)理論知識(shí)的掌握也更加嚴(yán)格。通過化工原理及做實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過程，我不僅學(xué)到了專業(yè)知識(shí)，在理解和鞏固了理論知識(shí)的同時(shí)也積累了許多生活經(jīng)驗(yàn)，了解到生活中我們所接觸的普通事物的基本原理。

每次實(shí)驗(yàn)之前，在我們預(yù)習(xí)了教材的有關(guān)理論，理解了實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理及要求，了解了?shí)驗(yàn)流程及操作步驟基礎(chǔ)上，會(huì)先做仿真實(shí)驗(yàn)具體了解實(shí)驗(yàn)主要操作及過程，真正做實(shí)驗(yàn)時(shí)老師會(huì)及其細(xì)致的再將實(shí)驗(yàn)原理及實(shí)驗(yàn)所涉及的知識(shí)講解一遍，同時(shí)具體的介紹實(shí)驗(yàn)流程、裝置及主要設(shè)備的結(jié)構(gòu)、測(cè)控元件及儀器儀表的使用方法，介紹實(shí)驗(yàn)操作步驟、數(shù)據(jù)測(cè)量和整理方法，最后，輔助我們對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正確處理。這一整套流程，保證我們實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌M(jìn)行，并能夠?qū)?shí)驗(yàn)中發(fā)生的現(xiàn)象加以分析，從而找出原因加以解決。這種手腦結(jié)合的方式，啟發(fā)和誘導(dǎo)了我們的思維，充分調(diào)動(dòng)我們的參與意識(shí)和學(xué)習(xí)積極性，同時(shí)培養(yǎng)我們的學(xué)習(xí)興趣，鍛煉和培養(yǎng)了獨(dú)立思考、分析問題和解決問題的能力，達(dá)到了高效學(xué)習(xí)的效果。

無論是化工原理課程學(xué)習(xí)中還是做實(shí)驗(yàn)過程中，老師都強(qiáng)調(diào)了伯努力方程的重要性，老師在講到流體流動(dòng)一章中的伯努利方程時(shí)，引導(dǎo)我們思考“人往高處走，水往低處流”的科學(xué)道理的基礎(chǔ)上，思考著“水能不能由低處流向高處？能不能由低壓容器流向高壓容器呢？”。我們思維會(huì)使我們直接回答不會(huì)，但仔細(xì)思考，在無外界作用下確實(shí)不會(huì)，但如果這時(shí)把問題引到能量守恒上來，對(duì)流體做功使得流體具有能量再將能量轉(zhuǎn)換成勢(shì)能是完全可以的，這時(shí)又會(huì)想到引出流體的輸送設(shè)備即“泵與風(fēng)機(jī)”。老師在講解原理時(shí)，將實(shí)際生活中與之緊密聯(lián)系的現(xiàn)象，諸如飛機(jī)起飛、乒乓球的弧線球的產(chǎn)生與噴霧器原理等加以解釋，強(qiáng)化我們對(duì)伯努力原理的理解，這樣就可以在實(shí)際生活及科研過程中靈活地運(yùn)用伯努力原理。在老師引導(dǎo)下，我懂得了不僅要考慮設(shè)備費(fèi)及節(jié)能降耗，還要考慮產(chǎn)品產(chǎn)量與操作穩(wěn)定性等問題，從而提煉一些工程觀點(diǎn)。我們通過這種獨(dú)立思考的方式，對(duì)問題產(chǎn)生濃厚的興趣，從而產(chǎn)生急于找出問題答案和解決問題的心理狀態(tài)，很好地培養(yǎng)思維能力和想象力。

這學(xué)期我們做了三個(gè)化工原理實(shí)驗(yàn)，每一次實(shí)驗(yàn)都有不足之處，理論知識(shí)的不完善導(dǎo)致對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程理解不夠透徹，最后在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)不能夠準(zhǔn)確分析出實(shí)驗(yàn)中所出現(xiàn)的問題并總結(jié)出結(jié)論，但每一次實(shí)驗(yàn)都比前一次實(shí)驗(yàn)有經(jīng)驗(yàn)，做之前也會(huì)更注重理論知識(shí)的理解與掌握。流體流動(dòng)阻力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，我們主要研究影響流體阻力的因素，測(cè)定了在鍍鋅鋼管、不銹鋼管及突然擴(kuò)大管中流體流動(dòng)情況，從而推算出直管阻力和局部阻力，得出λ與Re的關(guān)系。同時(shí)聯(lián)系實(shí)際我們也就懂得了泳衣，船頭，模仿鮪魚體形的核潛艇，流線型汽車的工作原理。在離心泵的性能測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，不僅對(duì)離心泵的原理有了深入了解，更對(duì)離心泵的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，葉輪，平衡孔，軸封裝置等有了初步認(rèn)識(shí)，同時(shí)知道了確定泵的最佳工作范圍的方法。而傳熱實(shí)驗(yàn)更與我們生活實(shí)際密切相關(guān)。

“化工原理”是一門與生產(chǎn)和生活實(shí)際緊密聯(lián)系的課程，其基本理論在實(shí)際生產(chǎn)、科研和生活中應(yīng)用非常廣泛。工程理論的重要性就體現(xiàn)在它的實(shí)用性，應(yīng)用工程理論處理實(shí)際問題時(shí)，一定要明確工程理論的應(yīng)用條件。因此，在學(xué)習(xí)過程中不僅要充分利用書本知識(shí)，而且應(yīng)注意聯(lián)系實(shí)際生活，注意將各種工程問題進(jìn)行分類，培養(yǎng)抓住問題的本質(zhì)，從根本上找出解決問題的思路、方法和步驟的能力。簡單來說，化工原理是用直觀的實(shí)例，來喚起聯(lián)想的靈感，發(fā)揮我們的創(chuàng)新思維，所以學(xué)好化工原理大有益處。

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第五篇：化工原理實(shí)驗(yàn)總結(jié)

化工原理實(shí)驗(yàn)論文

化工原理實(shí)驗(yàn)是化工原理課程中理論與實(shí)踐相聯(lián)系、相結(jié)合的重要教學(xué)環(huán)節(jié)之一。，其基本任務(wù)是鞏固和加深對(duì)化工原理課程中基本理論知識(shí)的理解，通過實(shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察，使學(xué)生掌握一定的基本實(shí)驗(yàn)技能。

本學(xué)期化工原理實(shí)驗(yàn)課堂上我們一共做了十個(gè)實(shí)驗(yàn)，分別為伯努利方程實(shí)驗(yàn)、流體流動(dòng)形態(tài)的觀察和測(cè)定、流體流動(dòng)阻力的測(cè)定、離心泵特性曲線的測(cè)定、恒壓過濾常數(shù)的測(cè)定、空氣-蒸汽給熱系數(shù)的測(cè)定、填料精餾塔實(shí)驗(yàn)、填料吸收塔的操作及吸收傳質(zhì)系數(shù)的測(cè)定、流化床干燥實(shí)驗(yàn)以及膜分離實(shí)驗(yàn)。

開始的時(shí)候，我并不是很明白許多實(shí)驗(yàn)儀器的使用方法以及如何通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證理論知識(shí)，雖然每次實(shí)驗(yàn)前都會(huì)有預(yù)習(xí)，但是在沒有真正接觸到實(shí)驗(yàn)的時(shí)候還是會(huì)有一頭霧水的感覺。課前老師的講解對(duì)我來說十分重要，自己不明白的地方，在聽老師講解時(shí)有時(shí)便會(huì)豁然開朗。我知道如果不明白實(shí)驗(yàn)原理，不知道實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，我們是不?huì)真正利用到實(shí)驗(yàn)的價(jià)值。

我認(rèn)為做實(shí)驗(yàn)的過程是一個(gè)既快樂又充滿理性知識(shí)的過程。就像書本上的知識(shí)跳躍了起來一樣，不再那么枯燥無味，通過自己的親手操作和認(rèn)真計(jì)算將原理進(jìn)行證明的過程我們仿佛能夠體會(huì)以前科學(xué)家的智慧結(jié)晶，自己也可以身臨其境的體會(huì)學(xué)習(xí)化工原理的快樂。

例如流體阻力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)旨在讓我們了解流體流動(dòng)阻力的測(cè)定方法，確定摩擦系數(shù)與雷諾準(zhǔn)數(shù)的關(guān)系以及局部阻力由于一開始對(duì)這個(gè)實(shí)驗(yàn)不是很了解，使得流體的流量過小達(dá)不到實(shí)驗(yàn)預(yù)期效果。

恒壓過濾實(shí)驗(yàn)時(shí)，第一組實(shí)驗(yàn)因?yàn)闆]有正確裝好板框?qū)е聦?shí)驗(yàn)重來，讓我們從中吸取教訓(xùn)：實(shí)驗(yàn)一定要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)步驟的每一個(gè)要求，否則可能前功盡棄。

還有吸收實(shí)驗(yàn)中，我們了解了填料塔吸收裝置的基本結(jié)構(gòu)及操作方法，這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，我們組的進(jìn)出口二氧化碳含量出現(xiàn)了問題。在實(shí)驗(yàn)的過程中，我們遇到過挫折，一開始心里還是很著急，有點(diǎn)不知所措，但后來我調(diào)整了心態(tài)，理性分析實(shí)驗(yàn)過程問題，才能使實(shí)驗(yàn)順利完成。

化工原理實(shí)驗(yàn)最重要的就是將理論付諸實(shí)踐，平時(shí)我們上化工原理課的時(shí)候，只能通過老師的講解，自己的想象了解知識(shí)，許多時(shí)候我們甚至不能明白為什么就能有這樣的結(jié)論。而化工原理實(shí)驗(yàn)就提供給我們一個(gè)平臺(tái)，一個(gè)能更深入了解化工原理知識(shí)、更鍛煉自己動(dòng)手能力、在學(xué)習(xí)上更加豐富的平臺(tái)。我們可以通過實(shí)驗(yàn)鍛煉動(dòng)手能力，團(tuán)隊(duì)合作能力，不再讀死書，死讀書。

化工原理實(shí)驗(yàn)從各個(gè)方面鍛煉了我們的能力。

首先，預(yù)習(xí)是幫助理解實(shí)驗(yàn)原理，了解實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，操作步驟以及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)以利于完成實(shí)驗(yàn)達(dá)到較好的教學(xué)效果。在每次實(shí)驗(yàn)前，我們都會(huì)寫預(yù)習(xí)報(bào)告，了解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，清楚?shí)驗(yàn)原理，實(shí)驗(yàn)儀器，這培養(yǎng)了我們自學(xué)的能力；

其次，正確進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，是成功作好實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。在實(shí)驗(yàn)過程中，我們需要耐心，細(xì)心，認(rèn)真的完成實(shí)驗(yàn)步驟，掌握實(shí)際操作和掌握化工實(shí)驗(yàn)的基本技能，培養(yǎng)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，測(cè)定化工參數(shù)的能力，掌握用計(jì)算機(jī)讀數(shù)和數(shù)據(jù)記錄。

最后就是實(shí)驗(yàn)過后的數(shù)據(jù)處理和回答思考題，這也是完成一個(gè)實(shí)驗(yàn)的最后一個(gè)階段，是整個(gè)實(shí)驗(yàn)最終能夠出結(jié)果的重要階段，通過數(shù)據(jù)處理我們可以跟所學(xué)知識(shí)進(jìn)行比較，進(jìn)而提高到能應(yīng)用實(shí)驗(yàn)誤差和誤差理論分析、解決化工原理實(shí)際問題，得出較正確的結(jié)論。看是否能夠驗(yàn)證試驗(yàn)原理，實(shí)驗(yàn)做得是否成功，而思考題更是將我們引入了一個(gè)深入思考實(shí)驗(yàn)的階段，讓我們對(duì)實(shí)驗(yàn)更加清楚。

學(xué)習(xí)化工原理實(shí)驗(yàn)課程，可以在學(xué)習(xí)化工原理課程的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步理解一些比較典型的已被或?qū)⒈粡V泛應(yīng)用的化工過程與設(shè)備的原理和操作，鞏固和深化化工原理的理論知識(shí)，將所學(xué)的化工原理等化學(xué)化工的理論知識(shí)去解決實(shí)驗(yàn)中遇到的各種實(shí)際問題，同時(shí)學(xué)習(xí)在化工領(lǐng)域內(nèi)如何通過實(shí)驗(yàn)獲得新的知識(shí)和信息，這學(xué)期的化工原理實(shí)驗(yàn)課我收獲很多，了解了典型化工過程和化工設(shè)備結(jié)構(gòu)的特點(diǎn) 也逐步對(duì)化工原理產(chǎn)生了更加濃厚的興趣。