第一篇：實(shí)驗(yàn)三 根莖葉顯微觀察與徒手切片

實(shí)驗(yàn)三 根莖葉顯微觀察與徒手切片

一、目的要求

1、學(xué)習(xí)植物的徒手切片技術(shù)

2、了解植物細(xì)胞的多樣性，積累植物組織的知識，建立組織與功能協(xié)調(diào)一致的概念。

二、基本原理

根莖葉是植物的營養(yǎng)器官，都是由各種細(xì)胞和組織組成的。通過切片，我們可以在不同的切片中分別看到保護(hù)組織、機(jī)械組織、營養(yǎng)組織、輸導(dǎo)組織、分生組織等。

徒手切片法是指手拿刀片把植物新鮮材料切成薄片，制成臨時(shí)的水裝片用于觀察的植物組織制片技術(shù)之一。所作的切片通常不經(jīng)染色或經(jīng)簡單染色，也可以通過脫水與染色制成永久制片。徒手切片的優(yōu)點(diǎn)是簡單、方便，不要復(fù)雜的設(shè)備，不經(jīng)化學(xué)藥物的處理，基本上保留了植物活體的狀態(tài)。其操作要點(diǎn)是：在培養(yǎng)皿中放入清水。用左手大拇指、食指、中指等拿住材料，拇指略低于食指，且拇指要伸直呈反彎狀態(tài)，中指等在下部穩(wěn)定材料。材料切面要高于拇指，但略低于食指，雙面刀片放在食指上，只有給它略加一個(gè)向下的力時(shí)，刀刃才能接觸到材料。右手用食指和大拇指捏住雙面刀片的一角，留出所有的刀刃部分，使刀刃近手指的一端首選接觸到材料，然后讓刀刃在材料上斜切下去，如果把材料切面看作是一個(gè)長方形的活，那么刀刃在材料上拉的是長方形的一條對角線，即從左前方向右后方拉切，注意不是垂直切向材料，一片，一片??，輕松、快速地切，估計(jì)有滿意的了，再一起放入盛有清水的培養(yǎng)皿中，挑選最薄的一片，裝片觀察。不要試圖每一片都很薄，也不要追求切片形狀的完整。其次，一定要注意，切片時(shí)不論是站著還是坐著，都要挺胸、放松地進(jìn)行，是整個(gè)手臂在用力，也就是你在切片時(shí)，是肩關(guān)節(jié)在動(dòng)，而不是肘關(guān)節(jié)，更不是腕關(guān)節(jié)。另外，切片時(shí)水是潤滑劑，你的手指上、材料上、刀片上隨時(shí)都應(yīng)該有水。

三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備

生物顯微鏡、載玻片、蓋玻片、雙面刀片、培養(yǎng)皿、滴管、吸水紙、毛筆，根莖葉結(jié)構(gòu)的相關(guān)切片、鳶尾Iris tectorum的根、某種合適的雙子葉植物的根、蠶豆Vicia faba的莖、蠶豆的葉、南瓜Cucurbita moschata莖、大葉黃楊 Euonymus japonicus的嫩莖、芹菜Apium graveoiens的葉柄、海桐Pittos-porum tobira或大葉黃楊的葉、小麥Triticum aestivum或其他禾本科小草的葉、蘿卜的肉質(zhì)直根，清水、I2-KI水溶液、0.1%番紅染液

四、實(shí)驗(yàn)步驟(一)根的顯微結(jié)構(gòu)

1、根尖的內(nèi)部結(jié)構(gòu)

取玉米或洋蔥根尖縱切永久制片，置于顯微鏡下，由根的最先端逐漸向上觀察根尖的各區(qū)，注意各區(qū)細(xì)胞的特點(diǎn)。

①根冠 在根尖的最先端，由薄壁細(xì)胞組成，像一個(gè)套在分生區(qū)前面的帽子，在根冠的外側(cè)，可見到某些正在脫落的細(xì)胞。

②分生區(qū) 根冠之內(nèi)，緊接根冠的一段區(qū)域。由排列緊密的等徑細(xì)胞組成，其細(xì)胞壁薄、核大、細(xì)胞質(zhì)濃厚。細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，?？梢砸姷秸谟薪z分裂的細(xì)胞。

③伸長區(qū) 位于分生區(qū)的上方，從靠近分生區(qū)略微伸長的細(xì)胞到接近成熟區(qū)的長形細(xì)胞，細(xì)胞逐漸伸長并液泡化，向成熟區(qū)過渡。伸長區(qū)的細(xì)胞仍具有分裂的能力，邊分裂，邊分化，可以見到正在分裂的細(xì)胞，并有了初步的組織分化。在伸長區(qū)如何區(qū)分原表皮、基本分生組織和原形成層?在制片上?？梢姷綄挻蟮某纱L細(xì)胞，想想這些細(xì)胞將來分化成根的什么結(jié)構(gòu)? ④成熟區(qū)（根毛區(qū)）位于伸長區(qū)上方，表面密生根毛的區(qū)域。在根毛區(qū)細(xì)胞分裂停止，分化成各種成熟組織時(shí)，可見到成熟的環(huán)紋、螺紋導(dǎo)管。注意根毛的起源以及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

2、單子葉植物根的結(jié)構(gòu)

取鳶尾根2-5cm進(jìn)行徒手橫切(此根有一定的硬度，且較細(xì)，橫切面一般低于1mm2，不適于初學(xué)切片，可以在芹菜葉柄和蠶豆莖切片之后再切此片)，并制成臨時(shí)裝片，不染色或用0.1％番紅染色后在顯微鏡下觀察，由外向內(nèi)分為表皮、皮層和維管柱三部分： ①表皮 根的最外層細(xì)胞，排列整齊，有根毛。

②皮層 外皮層細(xì)胞1-2層，細(xì)胞小，排列整齊。在較老的根中，外皮層細(xì)胞壁增厚，木質(zhì)化或栓質(zhì)化。內(nèi)皮層細(xì)胞幼時(shí)與一般雙子葉植物結(jié)構(gòu)差不多，有凱氏帶加厚。隨著發(fā)育的進(jìn)行，內(nèi)皮層細(xì)胞出現(xiàn)五面加厚，并栓質(zhì)化，僅外切向面為薄的，在橫切面上呈馬蹄形。注意內(nèi)皮層通道細(xì)胞的位置。

③維管柱 由中柱鞘、初生木質(zhì)部和初生韌皮部組成。中柱鞘為緊貼內(nèi)皮層的一層薄壁細(xì)胞。初生木質(zhì)部和初生韌皮部相間排列，木質(zhì)部脊數(shù)目較多，為多原型。維管柱中央是薄壁細(xì)胞組成的髓。

3、雙子葉植物根的結(jié)構(gòu)

⑴取蠶豆或向日葵幼根永久制片，也可以取其幼根的成熟區(qū)做徒手切片，置于顯微鏡下，由外向內(nèi)觀察雙子葉植物根的初生結(jié)構(gòu)。①表皮 幼根的最外層細(xì)胞，是徑向扁平、排列整齊的一層細(xì)胞，外壁具有角質(zhì)膜，有些細(xì)胞向外突起形成根毛。

②皮層 表皮之內(nèi)的多層薄壁細(xì)胞。緊接表皮之下的是一層排列緊密的薄壁細(xì)胞叫外皮層，皮層的最內(nèi)層細(xì)胞稱為內(nèi)皮層，也是一層排列緊密的細(xì)胞。在其徑向壁和上、下壁上常有局部木質(zhì)或栓質(zhì)的加厚，彼此聯(lián)結(jié)成環(huán)帶狀，這就是凱氏帶。由于在徑向壁上觀察凱氏帶僅為一個(gè)小點(diǎn)，亦稱為凱氏點(diǎn)。想想外皮層的作用是什么?凱氏帶在根中的作用是什么? ③維管柱 幼根的中央部分是維管柱，由中柱鞘、初生木質(zhì)部和初生韌皮部構(gòu)成。中柱鞘是中柱的最外層，緊接內(nèi)皮層，是1～2層排列整齊而緊密的薄壁細(xì)胞，在根的進(jìn)一步發(fā)育過程中有著重要作用。初生木質(zhì)部位于維管柱的中央，呈星芒狀，主要由導(dǎo)管和管胞組成，這些管狀分子的孔徑大小不同，觀察不同孔徑管狀分子的分布規(guī)律，找出原生木質(zhì)部和后生木質(zhì)部的位置，想想根的初生木質(zhì)部屬于何種發(fā)育方式?觀察木質(zhì)部脊的數(shù)目想想雙子葉植物常為幾原型?初生韌皮部位于初生木質(zhì)部兩個(gè)輻射角之間，由篩管和伴胞構(gòu)成。在初生木質(zhì)部和初生韌皮部之間，有1～2層薄壁細(xì)胞，想想其來源如何?在蠶豆幼根的中心部分，有一群薄壁細(xì)胞，如何解釋這個(gè)現(xiàn)象? ⑵取毛茛根橫切永久制片置于顯微鏡下，同樣從外向內(nèi)觀察，注意其與蠶豆或向日葵根的區(qū)別。特別注意內(nèi)皮層細(xì)胞壁的加厚情況，其細(xì)胞壁為全面加厚。內(nèi)皮層中不加厚的細(xì)胞是通道細(xì)胞，根的物質(zhì)交換通過內(nèi)皮層的通道細(xì)胞進(jìn)入維管柱。

⑶形成層的發(fā)生 取蠶豆根橫切永久制片，觀察形成層的發(fā)生。首先在初生木質(zhì)部和初生韌皮部之間出現(xiàn)形成層，呈圓弧型（觀察其數(shù)目與木質(zhì)部脊的數(shù)目是否一致，想想它們起源于什么細(xì)胞?），以后這些圓弧型的形成層向兩側(cè)擴(kuò)展，同時(shí)在木質(zhì)部脊的中柱鞘細(xì)胞，也恢復(fù)分裂的能力，兩者互相連接形成一個(gè)波浪狀的形成層環(huán)，其形狀與木質(zhì)部脊相似。形成層細(xì)胞進(jìn)行切向分裂，在初生木質(zhì)部和初生韌皮部之間的形成層細(xì)胞分裂較多，最終形成層環(huán)呈圓形。

⑷根的次生結(jié)構(gòu) 取棉老根橫切永久制片，在顯微鏡下由外向內(nèi)進(jìn)行觀察，分別為周皮、次生韌皮部、形成層、次生木質(zhì)部和初生木質(zhì)部。(二)莖的顯微結(jié)構(gòu)

1、莖的頂端分生組織

取丁香或大葉黃楊莖尖縱切制片，置于顯微鏡下，從莖尖的最先端往后觀察。頂端分生組織明顯地分成原體與原套兩部分，注意原體和原套的特點(diǎn)，以及識別莖尖的芽原基和葉原基。在原分生組織之下是已開始分化的初生分生組織，原表皮是最外面的一層細(xì)胞，原形成層為細(xì)胞質(zhì)濃厚并縱向伸長的細(xì)胞，縱切面上分布在器官的兩側(cè)。基本分生組織細(xì)胞近乎等徑，分布在器官的中央以及原表皮和原形成層之間。

2、莖的初生結(jié)構(gòu)

⑴雙子葉植物莖的初生結(jié)構(gòu)

觀察向日葵幼莖橫切永久制片，由外向內(nèi)分辨表皮、皮層和維管柱。①表皮 表皮細(xì)胞一層，排列緊密，外壁具有角質(zhì)層。細(xì)胞具核，但缺少葉綠體。有些表皮細(xì)胞形成表皮毛（有單細(xì)胞毛和多細(xì)胞毛）。表皮細(xì)胞中?？梢姷絻蓚€(gè)較小的細(xì)胞和兩個(gè)細(xì)胞之間的縫隙，這就是保衛(wèi)細(xì)胞和氣孔，氣孔之下是孔下室。②皮層 表皮以內(nèi)、維管柱以外的細(xì)胞。緊接表皮之下是幾層厚角組織，細(xì)胞相對較小。其內(nèi)是數(shù)層薄壁細(xì)胞，薄壁細(xì)胞中散布有小型的分泌腔。③維管柱 維管束在莖的橫切面上排成一環(huán)，將皮層和髓分隔開。韌皮部在維管束外方，木質(zhì)部在內(nèi)方，兩者之間是束中形成層（無限維管束）。髓在莖的中央，由薄壁組織構(gòu)成，細(xì)胞排列疏松，有貯藏的功能，?？梢姷胶芯w或單寧的細(xì)胞。在維管束之間的薄壁組織是髓射線，連接皮層和髓，想想它的作用是什么?觀察時(shí)注意比較莖的初生韌皮部和初生木質(zhì)部的組成成分與發(fā)育方式、束中形成層來源與根有什么異同。

⑵單子葉植物莖的初生結(jié)構(gòu)

取玉米或小麥莖橫切永久制片進(jìn)行觀察。注意單子葉植物莖與雙子葉植物莖的區(qū)別。①表皮 莖的最外層細(xì)胞，排列整齊，外壁具有較厚的角質(zhì)膜。氣孔的兩邊除了兩個(gè)較小的保衛(wèi)細(xì)胞外，還有兩個(gè)稍大的副衛(wèi)細(xì)胞。②維管束 玉米莖中維管束散生分布?？拷吘壊糠志S管束小、數(shù)日較多，在莖中部的維管束大，但數(shù)目較少。由于維管束的散生分布，因此沒有皮層和髓的界限。仔細(xì)觀察一個(gè)維管束，其外圍有一圈厚壁細(xì)胞組成的維管束鞘，鞘內(nèi)只有外方的初生韌皮部和內(nèi)方的初生木質(zhì)部，兩者間沒有形成層（有限維管束）。在初生韌皮部最外方的原生韌皮部有時(shí)被擠毀，失去了輸導(dǎo)的功能，內(nèi)側(cè)的后生韌皮部由排列規(guī)則的篩管和伴胞組成。初生木質(zhì)部由3-4個(gè)導(dǎo)管組成，在橫切面上呈V形。V形的底部是原生木質(zhì)部，由1-3個(gè)較小孔徑的導(dǎo)管和薄壁細(xì)胞組成。常由于莖的伸長將導(dǎo)管拉破，在V形底部形成一個(gè)空腔（氣腔或胞間道）。V形上半部兩側(cè)各有一個(gè)孔徑較大的導(dǎo)管，是后生木質(zhì)部，這兩個(gè)大導(dǎo)管之間有一些管胞分布。在小麥莖中維管束呈兩輪分布，外輪維管束小，分布在厚壁組織細(xì)胞中，與含有葉綠體的同化組織相間排列。內(nèi)輪維管束大，分布在薄壁細(xì)胞中。維管束的結(jié)構(gòu)與玉米相似。③基本組織 表皮和維管束之間的所有細(xì)胞稱之為基本組織（因沒有皮層和髓的界限）。玉米中，靠近表皮的數(shù)層細(xì)胞體積小，排列緊密，細(xì)胞壁增厚并木質(zhì)化，是厚壁組織，稱外皮層。維管束之間的細(xì)胞為薄壁細(xì)胞，細(xì)胞較大，排列疏松，有胞間隙。越靠近中央，細(xì)胞的個(gè)體越大。小麥中，靠近表皮有數(shù)層厚壁細(xì)胞，除有維管束分布外，還有與其相間排列的成群同化組織。厚壁細(xì)胞之內(nèi)是較大的薄壁細(xì)胞。在小麥莖干的中央形成髓腔。

3、莖的次生結(jié)構(gòu)

⑴雙子葉植物草本莖的次生結(jié)構(gòu) 取向日葵老莖橫切永久制片，觀察莖的次生結(jié)構(gòu)。向日葵莖次生生長的變化主要表現(xiàn)在維管柱。在初生韌皮部的外方，出現(xiàn)成堆的厚壁細(xì)胞，為韌皮纖維。束中形成層細(xì)胞有3-5層，向外分裂形成韌皮部的各種細(xì)胞，向內(nèi)分裂分化出本質(zhì)部的細(xì)胞。還可觀察到由部分束間形成層活動(dòng)形成的小型維管束。

⑵雙子葉植物木本莖的次生結(jié)構(gòu) 取椴樹（3-4年生）莖橫切永久制片，由外向內(nèi)依次觀察雙子葉植物木本莖的次生結(jié)構(gòu)。

①表皮 基本脫落，留下部分殘片。

②周皮 觀察木栓層、木栓形成層和栓內(nèi)層三部分所組成的周皮，并注意各層細(xì)胞特點(diǎn)。注意周皮是否有皮孔形成及皮孔的結(jié)構(gòu)如何?試想木栓形成層的來源。

③皮層 在周皮和維管柱之間所保留的數(shù)層厚角組織和薄壁組織。

④韌皮部 主要是次生韌皮部。形狀呈梯形，與喇叭口狀的韌皮射線在圓周方向相間排列。韌皮纖維與韌皮部的其他成員沿半徑方向相間排列。注意識別篩管、伴胞和韌皮薄壁細(xì)胞。初生韌皮部僅在最外側(cè)留下韌皮纖維（亦稱中柱鞘纖維）。

⑤形成層 理論上為一層細(xì)胞，但觀察時(shí)可見到3～5層細(xì)胞，試想這是為什么? ⑥木質(zhì)部 主要是次生木質(zhì)部，在靠近髓的部分有幾束初生木質(zhì)部。注意年輪和年輪線，并分辨早材和晚材。

⑦髓 位于莖的中心，多為薄壁細(xì)胞，雜有少數(shù)石細(xì)胞。外圍是一圈小型細(xì)胞，稱環(huán)髓帶。髓細(xì)胞除含有淀粉外，還包含有一些異細(xì)胞，在這些異細(xì)胞中，可見到簇晶、單寧和粘液。

⑧髓射線 內(nèi)連髓外接皮層的薄壁細(xì)胞。在木質(zhì)部為l～2列細(xì)胞，稱之為木射線。在韌皮部細(xì)胞變大，并沿切向方向擴(kuò)展呈喇叭口狀，稱之為韌皮射線。

⑨維管射線 短于髓射線。不能同時(shí)連接髓和皮層。與髓射線一樣，在木質(zhì)部叫木射線，在韌皮部叫韌皮射線。

⑶裸子植物莖的次生結(jié)構(gòu) 裸子植物莖的次生結(jié)構(gòu)與雙子葉植物木本莖的結(jié)構(gòu)相似，所不同的只是細(xì)胞的組成類型。它們的次生木質(zhì)部形成了木材。其結(jié)構(gòu)可通過橫切面、徑向縱切面和切向縱切面3個(gè)切面來觀察各種細(xì)胞的特點(diǎn)。①橫切面 可觀察木材的年輪、早材和晚材、邊材和心材的特征。在裸子植物（縱向系統(tǒng)主要由管胞組成）的橫切面上見到的是管胞的橫斷面觀，細(xì)胞的孔徑比較均勻，細(xì)胞的組成比較簡單。木射線展示的是長和寬。

②徑向縱切面 可見到長形的管胞及壁上的具緣紋孔。木射線像一堵磚墻，展示的是長和高。

③切向縱切面 木射線展示的是高和寬，有時(shí)在較大的木射線中，可見到橫向的樹脂道。

4、徒手切片觀察不同植物莖的結(jié)構(gòu)

①蠶豆莖橫切，主要可以觀察莖表皮細(xì)胞，莖薄壁細(xì)胞及其細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、原生質(zhì)流動(dòng)等，莖中的形成層，維管束結(jié)構(gòu)，等。

②南瓜莖橫切或斜切，斜切可以看到螺紋導(dǎo)管。

③大葉黃楊的嫩莖橫切，為雙子葉木本植物莖的徒手切片代表。以上切片均可以不染色或用0.1%番紅染色在顯微鏡下觀察。(三)葉的顯微結(jié)構(gòu)

1葉片的顯微結(jié)構(gòu)

⑴取大葉黃楊或海桐葉作徒手切片，方法是：先將葉片中間葉脈兩側(cè)各留下2-3mm后切去，再切去剩下部分的遠(yuǎn)葉柄端，使切面呈近似的長方形，然后讓葉正面貼向食指，材料、刀、手指均用清水濕潤后，進(jìn)行徒手切片，并做成臨時(shí)裝片。顯微鏡下觀察，分清上下表皮、葉肉和葉脈三部分。

①表皮 一層排列整齊而又緊密的細(xì)胞。橫切面上呈長方形，外壁較厚，其外有角質(zhì)層。在表皮細(xì)胞中有成對、較小的細(xì)胞即保衛(wèi)細(xì)胞，兩個(gè)保衛(wèi)細(xì)胞之間的縫隙是氣孔。在表皮上還可以見到表皮毛。注意觀察細(xì)胞中是否有葉綠體，以及上下表皮氣孔的數(shù)目的差異。

②葉肉 注意觀察柵欄組織和海綿組織的細(xì)胞特點(diǎn)，以及孔下室的分布位置。試想這些特點(diǎn)與環(huán)境及功能有什么關(guān)系? ③葉脈 葉肉中的維管組織，主脈較大，由主脈進(jìn)行分支形成側(cè)脈。主脈包埋在基本組織中，上方表皮下有厚角組織，下方基本組織中有厚壁細(xì)胞分布。葉脈維管束的木質(zhì)部在近軸面，而韌皮部在遠(yuǎn)軸面。在較大葉脈的木質(zhì)部與韌皮部之間有一層形成層細(xì)胞。側(cè)脈維管束的組成趨于簡單，木質(zhì)部和韌皮部只有少數(shù)幾個(gè)細(xì)胞，但一般具有薄壁細(xì)胞形成的維管束鞘。在切片中可以見到各種走向的葉脈，試想其原由。

⑵小麥葉的結(jié)構(gòu) 用小麥葉進(jìn)行徒手切片后觀察。小麥葉的徒手切片要用蘿卜條作為夾持物才可以。方法是用水果刀將蘿卜切成約3×4×40(mm)的蘿卜條，再在一端沿小長方形的長邊方向的中央切一10-20mm 的縫，并將小麥葉的一段夾進(jìn)去，捏緊，修切，作徒手切片?；?取小麥葉橫切永久制片，置于顯微鏡下逐項(xiàng)觀察。

①表皮 細(xì)胞一層，其外壁具有較厚的角質(zhì)層。在表皮中有成對的保衛(wèi)細(xì)胞，體積較小。在保衛(wèi)細(xì)胞的兩側(cè)是略大一些的副衛(wèi)細(xì)胞。上表皮中還有一些較大的細(xì)胞，常幾個(gè)連在一起，在橫切 面上略成扇形，叫泡狀細(xì)胞，因其與葉片的卷曲有關(guān)，也被稱為運(yùn)動(dòng)細(xì)胞。此外，還可見到表皮毛。

②葉肉 無柵欄組織和海綿組織的分化，細(xì)胞比較均一。葉肉細(xì)胞均富含葉綠體。若將葉肉細(xì)胞解離，可發(fā)現(xiàn)每個(gè)細(xì)胞的長壁呈有峰和谷之分的深的波浪狀。

③葉脈 維管束與莖中一樣都為有限維管束，木質(zhì)部位于近軸面，而韌皮部在遠(yuǎn)軸面。維管束外有兩層維管束鞘，外層細(xì)胞較大，壁薄，含有葉綠體；內(nèi)層細(xì)胞小，壁厚。維管束的上下兩側(cè)具有厚壁細(xì)胞，一直延伸到表皮之下。試想這些厚壁細(xì)胞的作用是什么? ⑶玉米葉的結(jié)構(gòu) 觀察玉米葉的橫切永久制片，并與小麥葉比較。玉米的維管束鞘只有一層大的薄壁細(xì)胞，含有大的葉綠體。維管束鞘與其外側(cè)相鄰的一圈葉肉細(xì)胞共同形成“花環(huán)狀”結(jié)構(gòu)，這是C4植物的結(jié)構(gòu)特征。葉柄的顯微結(jié)構(gòu)

取芹菜葉柄，作徒手切片進(jìn)行觀察。主要可以見到表皮細(xì)胞、薄壁組織、厚角組織、維管束等。芹菜葉柄是最易進(jìn)行徒手切片的實(shí)驗(yàn)材料之一。松針葉的顯微結(jié)構(gòu)

取松針葉橫切永久制片，由外向內(nèi)觀察。

①表皮 細(xì)胞一層，排列緊密。細(xì)胞壁厚，胞腔小，外壁覆蓋有厚的角質(zhì)層。②下皮層 由1至多層厚壁細(xì)胞構(gòu)成。氣孔下陷到下皮層，由一對保衛(wèi)細(xì)胞和一對副衛(wèi)細(xì)胞組成。保衛(wèi)細(xì)胞側(cè)壁與下皮層細(xì)胞相連。副衛(wèi)細(xì)胞在保衛(wèi)細(xì)胞的上方，拱蓋著保衛(wèi)細(xì)胞，側(cè)壁與表皮細(xì)胞相連。二者的胞壁都有不均勻的加厚，氣孔下是下陷的孔下室。

③葉肉 位于下皮層以內(nèi)，葉肉細(xì)胞的細(xì)胞壁內(nèi)折，胞質(zhì)內(nèi)富含葉綠體。在葉肉組織中有樹脂道分布。樹脂道由兩層細(xì)胞圍成，外層是厚壁的鞘細(xì)胞，內(nèi)層是薄壁的上皮細(xì)胞。樹脂道的數(shù)目與分布的不同可作為種的鑒別特征。

④內(nèi)皮層 葉肉細(xì)胞里面的一圈排列整齊的細(xì)胞，其徑向壁上有類似凱氏帶的加厚。⑤維管組織 位于針葉的中央，內(nèi)皮層以內(nèi)，有1～2個(gè)外韌維管束。木質(zhì)部在近軸面，韌皮部在遠(yuǎn)軸面。木質(zhì)部和韌皮部的細(xì)胞均成徑向排列，木薄壁細(xì)胞與管胞各自成行，相間排列；篩管和韌皮薄壁細(xì)胞排列也是如此。韌皮部外側(cè)有幾個(gè)成堆分布的細(xì)胞，含有濃厚的細(xì)胞質(zhì)，是蛋白細(xì)胞。內(nèi)皮層和維管柱之間排列緊密的細(xì)胞是傳輸組織，包括常含有鞣質(zhì)的生活薄壁細(xì)胞和壁稍厚略為木質(zhì)化且壁上有具緣紋孔的管胞狀細(xì)胞，前者占傳輸組織的大部分。

取雪松或黑松的葉作徒手切片觀察。4 不同生態(tài)環(huán)境下生長的植物葉結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

⑴旱生植物夾竹桃葉橫切永久制片

①表皮 細(xì)胞排列緊密，壁厚，外壁上有厚的角質(zhì)層。下表皮有一部分細(xì)胞構(gòu)成下陷的窩，窩內(nèi)有表皮細(xì)胞形成的表皮毛，毛下有氣孔分布。表皮細(xì)胞2～3層形成復(fù)表皮。

②葉肉 上、下表皮之內(nèi)都有柵欄組織，柵欄組織由多層細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞排列非常緊密。海綿組織位于上、下柵欄組織之間，細(xì)胞層數(shù)較多，胞間隙不發(fā)達(dá)。在葉肉細(xì)胞中常含有簇晶。

③葉脈 維管束發(fā)達(dá)。主脈很大，為雙韌維管束。⑵水生植物睡蓮和眼子菜葉橫切永久制片

①睡蓮葉橫切永久制片觀察 上表皮有氣孔。葉肉的柵欄組織和海綿組織的分化明顯，柵欄組織在上方，細(xì)胞含有較多的葉綠體；而海綿組織在下方，有十分發(fā)達(dá)的氣腔和一些分支石細(xì)胞分布。維管組織特別是木質(zhì)部不發(fā)達(dá)。

②眼子菜葉橫切永久制片觀察 表皮無氣孔，也沒有角質(zhì)層，但表皮細(xì)胞中含有葉綠體，試想這是為什么?葉肉細(xì)胞不發(fā)達(dá)，有1至幾層細(xì)胞組成。在靠近主脈處，葉肉細(xì)胞形成大的氣腔。葉脈的木質(zhì)部導(dǎo)管和機(jī)械組織都不發(fā)達(dá)

五、注意事項(xiàng)

1本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的實(shí)施需要學(xué)生具有一定的理論基礎(chǔ)，計(jì)劃學(xué)時(shí)為6學(xué)時(shí)。2 徒手切片技術(shù)非常簡單和實(shí)用，一定要掌握其操作要領(lǐng)。

六、思考題

1繪鳶尾根的橫切面圖（四分之一部分），并注明各部分名稱。

2繪玉米莖或小麥莖橫切面輪廓圖，詳繪一個(gè)維管束，并注明各部分結(jié)構(gòu)的名稱。3 繪大葉黃楊(或海桐)葉橫切面圖或小麥葉的橫切片圖。

第二篇：實(shí)驗(yàn)六ABO血型鑒定、血涂片的制作與血細(xì)胞顯微觀察(精)

實(shí)驗(yàn)六：ABO血型鑒定、血涂片的制作與血細(xì)胞顯微觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解 ABO 和 Rh 血型分類系統(tǒng)的背景知識和遺傳學(xué)原理 2.掌握微量采血及血涂片的制作方法

3.學(xué)習(xí)使用光學(xué)顯微鏡觀察和區(qū)分紅細(xì)胞與各種白細(xì)胞

二、實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)材料 ：醫(yī)用采血針、酒精棉球、載玻片、血推片、消毒牙簽 2.實(shí)驗(yàn)試劑： 瑞氏染液、抗 B 血清、抗 A 血清、生理鹽水、蒸餾水 3.儀器設(shè)備： Motic 光學(xué)顯微鏡

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法 ABO 血型鑒定

1.1 取一塊清潔玻片，用記號筆標(biāo)上記號。

1.2 用小滴管吸 A 型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗 B）一滴加入左側(cè)，用另一小滴管吸 B 型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗 A）一滴加入右側(cè)

1.3 以穿刺法自左手無名指指尖取血，在玻片的每側(cè)各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側(cè)抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。

1.4 靜置室溫下 10—15min 后，觀察有無凝集現(xiàn)象，并據(jù)此判斷血型。2 血涂片的制作及血細(xì)胞觀察

2.1 取末捎血一滴置于玻片的一端 , 左手持載玻片 , 右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方后移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然后便推片與載片夾角保持 30-45 度平穩(wěn)地向前移動(dòng) , 載片上保留下一薄層血膜

2.2 血涂片制成后可手持玻片在空氣中揮動(dòng) , 使血膜迅速干燥 , 以免血細(xì)胞皺縮.2.3 用蠟筆在血膜兩側(cè)劃線 , 以防染液溢出 , 然后將血膜平放在染色架上.加瑞氏

染液 2-3 滴 , 使覆蓋整個(gè)血膜 , 固定 0.5-1.0 分鐘.滴加等量或稍多的新鮮蒸餾水 , 與染料混勻染色 5-10 分鐘.2.4 用清水沖去染液 , 待自然干燥后或用吸水紙吸干 , 即可置血涂片于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

2.5 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù): 選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域 , 在油鏡下計(jì)數(shù) 100 個(gè)紅細(xì)胞 , 按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計(jì)數(shù) , 求出各類細(xì)胞所占比值。

注：

1.瑞氏染液 : 瑞氏染料 1g 加甲醇(AR)600ML。將瑞氏染料放在清潔干燥乳缽中 , 加少量甲醇 , 充分研磨使染料溶解.將已完全溶解的部分倒入棕色試劑瓶中 , 未溶解部分再加少量甲醇研磨 , 直至染料完全溶解于甲醇為止.新配制的染料偏堿 , 須在室溫和 37℃ 下一定時(shí)間待染料成熟 , 主要美藍(lán)逐漸增多為天青 B 后才能使用.貯存時(shí)間越久染色效果越好 , 因此 ,Deamgilliland 等采用吸光度比值(rA)作為瑞氏染料的質(zhì)量規(guī)格.rA 測定方法如下 : 取瑞氏染液 15-25ul(視染液濃度而定)加甲醇 10ml 稀釋 , 混勻后以甲醇為空白管分別以波長 650nm,525nm 比色 ,rA=A650/A525。因?yàn)槊浪{(lán)吸收峰為波長 650nm, 伊紅吸收峰波長為 525nm, 天青 B 吸收峰也為 650nm, 但吸光度 A 約為美藍(lán)的一半.所以新配制染料的 RA 接近2, 隨著美藍(lán)逐漸氧化為天青 B,RA 也相應(yīng)下降 ,RA 下降達(dá) 1.3±0.1 即可使用.瑞氏染料在貯存過程中必須塞嚴(yán) , 以防甲醇揮發(fā)和氧化為甲酸.有人主張配方中加入 30ml 甘油 , 防止甲酸揮發(fā) , 并可使細(xì)胞染色清晰.甲醇必須純凈 , 如甲醇中丙酮含量過多 , 染色偏酸 , 使細(xì)胞著色不良.2.磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀 0.3g 加磷酸氫二鈉 0.2g 再加蒸餾水至 1000ml, 配制成磷酸鹽緩沖液調(diào)整 PH, 如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替.3.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)正常參考值 細(xì)胞類別 成人

桿狀核 0.01-0.05 分葉核 0.50-0.70

嗜酸性粒細(xì)胞 0.005-0.05 嗜堿性粒細(xì)胞 0-0.01 淋巴細(xì)胞 0.20-0.40 單核細(xì)胞 0.03-0.08

四、注意事項(xiàng)

1)玻片的清洗：新玻片常有游離堿質(zhì) , 因此應(yīng)用清洗液或 10% 鹽酸浸泡 24 小時(shí) , 然后再徹底清洗。用過的玻片可放入適量肥皂水或合成洗滌劑的清水中煮沸 20 分鐘 , 再用熱水將肥皂和血膜洗去 , 用自來水反復(fù)沖洗 , 必要時(shí)再置 95% 乙醇中浸泡 1 小時(shí) , 然后擦干或烤干備用。使用玻片時(shí)只能手持玻片邊緣 , 切勿觸及玻片表面;, 以保持玻片清潔 , 干燥 , 中性、無油膩。

2)細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感 , 在染色過程中玻片必須化學(xué)清潔 , 配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇 , 稀釋染液必須用緩沖液 , 沖洗用水應(yīng)近中性 , 否則各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常 , 致使細(xì)胞的識別困難 , 甚至造成錯(cuò)誤。

3)一張良好的血片 , 要求厚薄適宜 , 頭體尾分明 , 分布均勻 , 邊緣整齊 , 兩側(cè)留有空隙。血片制好后最好立即固定染色 , 以免細(xì)胞溶解和發(fā)生退行性變。

4)血膜未干透 , 細(xì)胞尚未牢固附在玻片上 , 在染色過程中容易脫落 , 因此血膜必需充分干燥.5)染色時(shí)間與染液濃度 , 室溫高低 , 細(xì)胞多少有關(guān).染液越淡 , 室溫越低 , 細(xì)胞越多 , 所需染色時(shí)間越長或應(yīng)適當(dāng)增加染液量 , 因此染色時(shí)間應(yīng)視具體情況而定.特別是更換新染料時(shí)必須經(jīng)試染 , 摸索最佳染色條件.6)染液不可過少 , 以防蒸發(fā)干燥染料沉著于血片上難沖洗干凈.7)沖洗時(shí)應(yīng)用流水將染液沖去.不能先倒掉染液 , 以免染料沉著于血片上.8)染色過深可用甲醇或酒精適當(dāng)脫色 , 最好不復(fù)染 , 必須復(fù)染時(shí) , 可將染液先稀釋好再復(fù)染.9)染色時(shí)應(yīng)注意保護(hù)血膜尾部細(xì)胞 , 不能劃掉.因?yàn)轶w積較大細(xì)胞常在此處出現(xiàn).染色結(jié)果 : 在正常情況下血膜外觀為粉紅色 , 在顯微鏡下紅細(xì)胞呈肉紅色；白細(xì)胞胞漿能顯示各種細(xì)胞的特有色彩 , 細(xì)胞核染紫紅色 , 染色質(zhì)清楚 , 粗細(xì)松緊可辨。染色結(jié)果偏酸 , 則紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞顆粒偏紅 , 白細(xì)胞核呈淺藍(lán)色或不著色；染色結(jié)果偏堿 , 則所有細(xì)胞染成灰藍(lán)色 , 顆粒深暗，嗜酸性顆粒可染成暗褐色 , 甚至紫黑色或藍(lán)色。嗜中性顆粒偏粗 , 偏堿(紫黑色).血片原處呈綠色.五、思考題

(1)如何區(qū)別血液的凝集和凝固？其機(jī)理有何差別？

(2)根據(jù)你的血型，判斷你能接受何種血型并且能夠給何種血型供血？

(3)O 型血人又被稱為“萬能供血者”，試根據(jù) ABO 血型分型作出你對這一說法的理解(4)試根據(jù)父母的血型，寫出后代的可能血型：

第三篇：組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn) 組織切片的典型圖片

編輯

考試重點(diǎn)：以下切片的名稱、取材、主要結(jié)構(gòu)等

照片名稱：主細(xì)胞與壁細(xì)胞

照片名稱：中動(dòng)脈2副本

照片名稱：有髓神經(jīng)纖維2副本

照片名稱：血細(xì)胞

照片名稱：未角化復(fù)扁

照片名稱：胃粘膜層

照片名稱：心肌閏盤

照片名稱：心肌閏盤細(xì)胞核縱切

照片名稱：疏松結(jié)締組織（膠原纖維、彈性纖

照片名稱：生精小管

照片名稱：腎上腺1

照片名稱：神經(jīng)元1

照片名稱：脾臟

照片名稱：子宮分泌期2

照片名稱：蒲肯野纖維

照片名稱：氣管壁結(jié)構(gòu)

照片名稱：潘氏細(xì)胞

照片名稱：門管區(qū)-2

照片名稱：骨骼?。ü趋兰±w維細(xì)胞核）縱切

照片名稱：睪丸低倍

照片名稱：單層柱狀上皮（杯狀細(xì)胞柱狀細(xì)胞

照片名稱：肺的呼吸部jpg

照片名稱：復(fù)層扁平未角化jpg

照片名稱：肝臟巨噬細(xì)胞

照片名稱：垂體遠(yuǎn)側(cè)部細(xì)胞副本

照片名稱：次級卵泡2

照片名稱：大動(dòng)脈1

照片名稱：單層立方

照片名稱：平滑肌縱切

第四篇：觀察酵母菌與霉菌實(shí)驗(yàn)教案

《觀察酵母菌與霉菌》實(shí)驗(yàn)教案

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.觀察酵母菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)并掌握其特征。

2.觀察霉菌的菌落特征，學(xué)會(huì)霉菌的一般制作方法。3.觀察并掌握各種霉菌的個(gè)體形態(tài)及生長繁殖方式。4.進(jìn)一步熟悉顯微鏡的使用。二.實(shí)驗(yàn)原理

酵母菌是一類單細(xì)胞真菌，一般呈圓形、橢圓形，無性繁殖以芽孢為主，也有少數(shù)是裂殖，有些酵母菌能產(chǎn)生囊孢子，有的能形成假菌絲。酵母菌的菌落似細(xì)菌菌落，但較大且厚，多呈白色，少數(shù)為紅色。酵母菌在液體中生長可形成菌膜、菌環(huán)、沉淀和渾濁。酵母菌的細(xì)菌結(jié)構(gòu)較完善，即有壁、膜、質(zhì)、核等結(jié)構(gòu)。酵母菌的細(xì)胞形態(tài)、繁殖方式和培養(yǎng)特征均為菌種鑒定的依據(jù)。

酵母活細(xì)胞新陳代謝旺盛，活力強(qiáng)，還原力也強(qiáng)，若無毒的染料進(jìn)入細(xì)胞，既被還原脫色，但死細(xì)胞及代謝作用緩慢的老弱細(xì)胞無此還原力。美蘭是無毒染料，且能被活細(xì)胞還原成無色，故可用來區(qū)別細(xì)胞的死活。

霉菌是一些小型絲狀真菌、單細(xì)胞（根霉、毛霉）或多細(xì)胞（曲霉、青霉），其細(xì)胞結(jié)構(gòu)與酵母類似，同屬真核細(xì)胞。

霉菌形態(tài)較復(fù)雜，個(gè)體較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。其菌絲分為氣生菌絲與營養(yǎng)菌絲（菌絲比放線菌粗得多）觀察時(shí)請注意菌絲是否具有橫膈膜、有無假根、無性繁殖時(shí)形成何種孢子，孢子著生方式以及孢子頭的構(gòu)造等，以區(qū)別各種不同霉菌的形態(tài)。

霉菌菌落由分枝狀菌絲組成，較疏松，呈毛狀、棉絮狀、絨毛狀或氈狀。由于不同霉菌形成的孢子均有不同顏色、構(gòu)造、性狀，故菌落表面呈現(xiàn)出不同的結(jié)構(gòu)和色澤特征。菌絲一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌絲較老，先產(chǎn)生孢子，故常形成同心圓。三.實(shí)驗(yàn)器材

1.菌種：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。2.儀器：顯微鏡。

3.其它：生理鹽水、乳酸酚棉蘭染液、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、酒精燈、美蘭、鑷子、大頭針。四.步驟與方法

1.酵母菌細(xì)胞形態(tài)觀察

（1）制片：用接種環(huán)挑取一環(huán)面包酵母菌種于載玻片上的一滴美蘭染液中混勻，蓋上蓋玻片靜置4~5分鐘。蓋時(shí)先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后慢慢放下，避免產(chǎn)生氣泡。

（2）鏡檢：用高倍鏡觀察，光線弱些，繪圖表示個(gè)體細(xì)胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況，并觀察死活酵母情況。2.霉菌的形態(tài)觀察（1）制片方法：在潔凈的載玻片加一滴乳酸酚棉蘭染液，用大頭針或鑷子從菌落的不同部位菌絲體少許（連同培養(yǎng)基），放入載玻片上的乳酸酚棉蘭染液中，使菌絲在染液中展開，加上蓋玻片。（2）載片培養(yǎng)法制作霉菌標(biāo)本片。（3）鏡檢。

（4）觀察毛霉、根霉、曲霉、青霉的菌落。五.結(jié)果記錄

1.酵母菌的形態(tài)觀察

繪圖表示個(gè)體細(xì)胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況。2.霉菌的形態(tài)觀察

繪制鏡檢圖并描繪霉菌菌落特征。六.思考題

1.試比較酵母和細(xì)菌的形態(tài)。

2.為什么在觀察霉菌個(gè)體形態(tài)時(shí)要連同培養(yǎng)基一起挑起？

第五篇：實(shí)驗(yàn)三 植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察

實(shí)驗(yàn)三 植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)特征及其制備技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)器具及試劑 1．器具

普通光學(xué)顯微鏡、50ml燒杯、玻璃滴管、容量瓶、試劑瓶、載玻片、蓋玻片、鑷子、小剪刀、吸水紙、擦鏡紙。2．試劑

M-緩沖液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇雙醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫蘇糖醇)；（PH6.8）磷酸緩沖液（用NaHCO3調(diào)PH值）；Triton X-100，用M-緩沖液配制；考馬斯亮藍(lán)R250,其溶劑為：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性樹膠等。3.實(shí)驗(yàn)材料 洋蔥鱗莖

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

細(xì)胞骨架事由蛋白質(zhì)絲組成的復(fù)雜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)其組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細(xì)胞形態(tài)的維持，細(xì)胞的生長、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化，物質(zhì)運(yùn)輸，能量轉(zhuǎn)換，信息傳遞，基因表達(dá)等起到重要作用。當(dāng)用適當(dāng)濃度的Triton X-100處理細(xì)胞時(shí)，可經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不受破壞而被保存，經(jīng)用戊二醛固定，考馬斯亮藍(lán)R250染色后，可在光學(xué)顯微鏡下觀察到由微絲組成的微絲束為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，就是細(xì)胞骨架。

（一）溶液配制（1）M-緩沖液配制：

M-緩沖液(10×原液)：咪唑34.04g，氯化鎂(MgCl2?6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）3.8g，EDTA(乙二胺四乙酸)0.29g，巰基乙醇0.78g(0.7ml)蒸餾水加至1 000 ml。使用時(shí)，取100 ml(10×原液)加900 ml蒸餾水。（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸緩沖液配制： 甲液：NaH2PO4?2H2O，0.938g 溶于蒸餾水中，最后稀釋至1 000ml。乙液：Na2HPO4 ?12H2O，2.15g加蒸餾水溶解，最后加水至1 000ml。取甲液685ml，乙液315ml加蒸餾水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸緩沖液。

（3）1%Triton X-100，用M-緩沖液配制： 取22ml Triton X-100液加M-緩沖液至200ml。（4）0.2%考馬斯亮藍(lán)R250：

考馬斯亮藍(lán)R250為0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml（5）3%戍二醛，用磷酸緩沖液配制。

（二）實(shí)驗(yàn)方法與步驟

（1）撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮（約1cm2大小若干片）置于裝有PH6.8磷酸緩沖液的50ml燒杯中，使其下沉。

（2）吸去磷酸緩沖液，用1% Triton X-100處理20~30min。（3）吸去Triton X-100，用M-緩沖液洗3次，每次10min。（4）3%戊二醛固定0.5~1h。

（5）PH6.5磷酸緩沖液洗三次，每次10min。（6）0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色20~30min。

（7）用蒸餾水洗1~2次，細(xì)胞置于載破片上，加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察。

（8）如觀察效果好，可制作成永久切片。

在有樣品的50ml燒杯中，順序通過如下藥物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每級5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每級5-10min），然后撈取樣品，平展于載玻片上，經(jīng)鏡檢，效果好的，可加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片，即成永久片。

四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．繪出植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖。

2．分析在光學(xué)顯微鏡下觀察到的細(xì)胞骨架的形態(tài)特征。