第一篇：2005級(jí)臨床醫(yī)學(xué)護(hù)理醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)[定稿]

大理學(xué)院職業(yè)技術(shù)學(xué)院

初中起點(diǎn)五年制高等職業(yè)教育2007級(jí)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)

畢業(yè)實(shí)習(xí)實(shí)施意見

各合作辦學(xué)學(xué)校：

畢業(yè)實(shí)習(xí)是大理學(xué)院醫(yī)學(xué)專業(yè)實(shí)現(xiàn)應(yīng)用型人才培養(yǎng)目標(biāo)重要的實(shí)踐性教學(xué)環(huán)節(jié)，是加強(qiáng)學(xué)生理論聯(lián)系實(shí)際、對(duì)學(xué)生開展綜合訓(xùn)練和檢測、全面提高學(xué)生專業(yè)動(dòng)手能力和綜合素質(zhì)的重要教學(xué)環(huán)節(jié)。根據(jù)初中起點(diǎn)五年制臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)教學(xué)計(jì)劃規(guī)定，結(jié)合專業(yè)特點(diǎn)及我院工作情況，特對(duì)昭通衛(wèi)校、臨滄衛(wèi)校、大理衛(wèi)校、德宏職院、麗江民專五個(gè)辦學(xué)單位2007級(jí)初中起點(diǎn)五年制臨床醫(yī)學(xué)專科專業(yè)，共209名學(xué)生的畢業(yè)實(shí)習(xí)工作制定以下實(shí)施意見。

一、學(xué)院組織領(lǐng)導(dǎo)機(jī)構(gòu)

組長：欒玉泉；

副組長：段蓉霖、張懷忠、董凌峰；

組員：何澤志、李建英、王婷燕、董師良。

各辦學(xué)學(xué)校的組織領(lǐng)導(dǎo)機(jī)構(gòu)由各辦學(xué)學(xué)校自定。

二、畢業(yè)實(shí)習(xí)工作

（一）組織原則

1．畢業(yè)實(shí)習(xí)的組織安排，由各辦學(xué)學(xué)校根據(jù)“大理學(xué)院職業(yè)技術(shù)學(xué)院初中起點(diǎn)五年制高等職業(yè)教育《教學(xué)管理文件匯編》

（一）”的相關(guān)規(guī)定組織完成。

2．學(xué)生畢業(yè)實(shí)習(xí)結(jié)束，必須參加畢業(yè)綜合考試和畢業(yè)總補(bǔ)考。

3．為了確保畢業(yè)實(shí)習(xí)和畢業(yè)考試工作的有效進(jìn)行，各辦學(xué)學(xué)校應(yīng)根據(jù)此《實(shí)施意見》，結(jié)合工作實(shí)際，制定完成本單位具體的《實(shí)習(xí)方案》，并于2011年5月30日前報(bào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院高職教綜合管理科。

（二）畢業(yè)實(shí)習(xí)時(shí)間及內(nèi)容安排

畢業(yè)實(shí)習(xí)時(shí)間共52周，開始實(shí)習(xí)時(shí)間及具體時(shí)段由各辦學(xué)單位確定，原則上實(shí)習(xí)結(jié)束時(shí)間為2012年5月30日前，實(shí)習(xí)時(shí)間不得任意減少或延長。

畢業(yè)實(shí)習(xí)時(shí)段分配及相關(guān)工作：

1．實(shí)習(xí)準(zhǔn)備階段（2周），主要完成：

①開展實(shí)習(xí)前動(dòng)員，強(qiáng)化實(shí)習(xí)紀(jì)律和安全教育，完成本單位《實(shí)習(xí)方案》的布置安排。

②開展實(shí)習(xí)前臨床技能強(qiáng)化訓(xùn)練：圍繞《大理學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)核心技能訓(xùn)練及考核手冊(cè)》（見附件）的相關(guān)內(nèi)容，結(jié)合本單位實(shí)際，組織開展7-10天的“臨床專業(yè)核心技能”短期強(qiáng)化訓(xùn)練。

③組織2007級(jí)學(xué)生開展一次《畢業(yè)就業(yè)指導(dǎo)》（不少于半天時(shí)間）。

④核對(duì)2007級(jí)學(xué)生基本信息。

2．學(xué)生實(shí)習(xí)階段（48周）：按“大理學(xué)院初中起點(diǎn)五年制高等職業(yè)教育臨床醫(yī)學(xué)專科專業(yè)實(shí)習(xí)大綱”要求，組織學(xué)生完成“內(nèi)科、外科、婦產(chǎn)科、兒科、傳染科、五官科”等6個(gè)臨床科室的實(shí)習(xí)任務(wù)。

3．實(shí)習(xí)總結(jié)階段（2周），主要完成：

①畢業(yè)實(shí)習(xí)總結(jié)。

②畢業(yè)綜合考及總補(bǔ)考。

③開展“畢業(yè)生就業(yè)講座”和“畢業(yè)前教育”，組織“畢業(yè)典禮”。

（三）具體要求

1．學(xué)生畢業(yè)實(shí)習(xí)單位必須在縣級(jí)或縣級(jí)以上醫(yī)院進(jìn)行。

2．辦學(xué)單位要高度重視實(shí)習(xí)前“臨床專業(yè)核心技能”強(qiáng)化訓(xùn)練工作。訓(xùn)練前應(yīng)有計(jì)劃，訓(xùn)練后要有總結(jié)。“臨床專業(yè)核心技能”訓(xùn)練計(jì)劃（請(qǐng)于2011年6月20日前）和“臨床專業(yè)核心技能”訓(xùn)練總結(jié)（請(qǐng)于2011年7月5日前）上報(bào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院高職教綜合管理科。

3．實(shí)習(xí)期間需嚴(yán)格學(xué)生考勤，加強(qiáng)學(xué)生安全管理。實(shí)習(xí)生必須嚴(yán)格遵守《大理學(xué)院實(shí)習(xí)生組織紀(jì)律管理規(guī)定》和《大理學(xué)院實(shí)習(xí)生守則》。

4．實(shí)習(xí)學(xué)員必須認(rèn)真如實(shí)填寫《大理學(xué)院畢業(yè)實(shí)習(xí)鑒定表》和《大理學(xué)院學(xué)生畢業(yè)實(shí)習(xí)考核表》，撰寫畢業(yè)實(shí)習(xí)報(bào)告。以上兩個(gè)表必須由實(shí)習(xí)科室（內(nèi)科、外科、婦產(chǎn)科、兒科、傳染科、五官科）簽署意見并加蓋公章后方能生效。

5．畢業(yè)實(shí)習(xí)考核成績不合格的學(xué)生，不予畢業(yè)。

三、關(guān)于畢業(yè)考試工作

畢業(yè)考試應(yīng)于學(xué)生實(shí)習(xí)結(jié)束返校后一周內(nèi)舉行，包括畢業(yè)綜合考試和畢業(yè)總補(bǔ)考兩部分?？荚嚥患案竦膶W(xué)生，不予畢業(yè)。具體的組織和安排另文通知。

1．畢業(yè)綜合考試

考試的內(nèi)容：理論綜合考占60%（其中，內(nèi)科占35%、外科占35%、婦產(chǎn)科

占15%、兒科占15%），成績以百分制記；臨床技能與操作考核占40%。

2．畢業(yè)總補(bǔ)考

有考試成績不及格的學(xué)生，實(shí)習(xí)結(jié)束返校后需報(bào)名參加畢業(yè)總補(bǔ)考。

四、上交材料及相關(guān)要求

1．上報(bào)材料：《大理學(xué)院五年制高等職業(yè)教育畢業(yè)實(shí)習(xí)成績匯總表》、所有學(xué)員的《大理學(xué)院畢業(yè)實(shí)習(xí)鑒定表》、《大理學(xué)院學(xué)生畢業(yè)實(shí)習(xí)考核表》和畢業(yè)實(shí)習(xí)報(bào)告。

2．上報(bào)要求：《大理學(xué)院畢業(yè)實(shí)習(xí)鑒定表》、《大理學(xué)院學(xué)生畢業(yè)實(shí)習(xí)考核表》和畢業(yè)實(shí)習(xí)報(bào)告按學(xué)號(hào)順序整理后上報(bào)，《大理學(xué)院初中起點(diǎn)五年制高等職業(yè)教育畢業(yè)實(shí)習(xí)成績匯總表》隨以上材料上報(bào)。

3．上報(bào)時(shí)間：務(wù)必于2012年6月12日前上報(bào)，以免影響畢業(yè)證書和檔案發(fā)放。

五、本學(xué)期的教學(xué)有求

鑒于2007級(jí)學(xué)生的實(shí)習(xí)時(shí)間比原來提前，為了不影響本學(xué)期的教學(xué)安排，請(qǐng)各合作學(xué)校在保證本學(xué)期各門課程應(yīng)開課時(shí)的前提下，酌情增加周學(xué)時(shí)，在2011年6月20日前結(jié)束本學(xué)期所有課程的教學(xué)任務(wù)，并完成課程考核（含統(tǒng)考課程考試）。從2011年6月21日起轉(zhuǎn)入實(shí)習(xí)準(zhǔn)備階段，完成相關(guān)工作。

六、未盡事宜，請(qǐng)與職業(yè)技術(shù)學(xué)院高職教綜合管理科聯(lián)系。

附件一：《大理學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)核心技能訓(xùn)練及考核手冊(cè)》

附件二：《大理學(xué)院畢業(yè)實(shí)習(xí)鑒定表》

附件三：《大理學(xué)院學(xué)生畢業(yè)實(shí)習(xí)考核表》

附件四：《大理學(xué)院初中起點(diǎn)五年制高等職業(yè)教育畢業(yè)實(shí)習(xí)成績匯總表》

大理學(xué)院職業(yè)技術(shù)學(xué)院

2011年3月25日

第二篇：臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

第九章　酶免疫技術(shù)

第一節(jié)　酶免疫技術(shù)的特點(diǎn)

它是將酶與抗體或抗原結(jié)合成酶標(biāo)記抗體或抗原，在酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng)完成后，加入酶的相應(yīng)底物，通過酶對(duì)底物的顯色反應(yīng)，對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量的測定分析。

一、酶和酶作用底物

（一）酶的要求：一個(gè)酶蛋白分子每分鐘可催化103～104個(gè)底物分子轉(zhuǎn)變成有色產(chǎn)物。

1.酶的活性要強(qiáng)，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，純度高。

2.易與抗體或抗原偶聯(lián)，標(biāo)記后酶活性保持穩(wěn)定，且不影響標(biāo)記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性。

3.作用專一性強(qiáng)，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標(biāo)記酶相同的內(nèi)源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測定的酶還要求當(dāng)抗體與酶標(biāo)抗原結(jié)合后，酶活性可出現(xiàn)抑制或激活。

4.酶催化底物后產(chǎn)生的產(chǎn)物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復(fù)性好。

5.酶、輔助因子及其底物對(duì)人體無害，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物應(yīng)價(jià)廉易得。

（二）常用的酶

1.辣根過氧化物酶（HRP）：目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的標(biāo)記用酶。由無色的糖蛋白（主酶）和亞鐵血紅蛋白（輔基）結(jié)合而成的復(fù)合物。輔基是酶活性基團(tuán)，而主酶則與酶活性無關(guān)，HRP的純度用RZ（HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值）表示，RZ值應(yīng)大于3.0。

RZ值僅說明血紅素基團(tuán)在HRP中的含量，并非表示HRP制劑的真正純度，而且RZ值高的HRP并不意味著酶活性也高，RZ值與酶活性無關(guān)。

酶活性以單位U表示：即1分鐘將1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。酶變性后，RZ值不變但活性降低，因此使用酶制劑時(shí)，酶活性單位比RZ值更為重要。

2.堿性磷酸酶（AP）：大腸桿菌來源的AP分子量80kD，酶作用最適pH為8.0；小牛腸黏膜AP分子量為100kD，最適pH為9.6；后一種AP的活性高于前者。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）：β-Gal來源于大腸桿菌。因人血中缺乏此酶，以其制備的酶標(biāo)志物在測定時(shí)不易受到內(nèi)源性酶的干擾，從而提高特異性，被用于均相酶免疫測定。

（三）常用的底物

1.HRP的底物

（1）鄰苯二胺（OPD）：是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色，加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD應(yīng)用液穩(wěn)定性差，易變色，需新配制后在1小時(shí)內(nèi)使用，顯色反應(yīng)過程需避光，而且具有致癌性。

（2）四甲基聯(lián)苯胺（TMB）：TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長450nm。TMB穩(wěn)定性好，成色無需避光，無致突變作用，是目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。缺點(diǎn)是水溶性差。

（3）其他：5-氨基水楊酸（5-ASA）和2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）。

2.AP的底物

常用對(duì)-硝基苯磷酸酯（p-NPP），p-NPP經(jīng)AP作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚，最大吸收峰波長為405nm。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）的底物

常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高強(qiáng)度熒光物4-甲基傘形酮（4-MU），其敏度性較HRP高30～50倍，但測量時(shí)需用熒光計(jì)。

二、酶標(biāo)記抗體或抗原

（一）酶標(biāo)記抗體或抗原的制備

標(biāo)記方法應(yīng)符合：技術(shù)方法簡單、產(chǎn)率高，且重復(fù)性好；標(biāo)記反應(yīng)不影響酶和抗原或抗體的活性；酶標(biāo)志物穩(wěn)定，應(yīng)避免酶、抗體（抗原）以及酶標(biāo)志物各自形成聚合物等。

1.戊二醛交聯(lián)法：同源雙功能交聯(lián)劑。

（1）一步法：連接AP。

①優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、有效，重復(fù)性好。

②缺點(diǎn)：交聯(lián)時(shí)分子間比例不嚴(yán)格，大小不一，影響效果。

（2）二步法：連接HRP。

先將HRP與戊二醛作用，透析除去戊二醛，在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。

優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)志物質(zhì)量較均一，標(biāo)記效率也較一步法高。

2.改良過碘酸鈉法

HRP標(biāo)記抗體或抗原的最常用方法。

（二）酶標(biāo)記物的純化及鑒定

常用的純化方法有葡聚糖凝膠G-200/G-150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。

常用免疫電泳或雙相擴(kuò)散法進(jìn)行鑒定。

1.出現(xiàn)沉淀線表示酶標(biāo)記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。

2.沉淀線經(jīng)生理鹽水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標(biāo)記物中的酶活性仍保留。

三、固相載體

除均相酶免疫測定外，各種非均相酶免疫測定反應(yīng)最后都需要分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物。

固相抗體或抗原就是把抗體或抗原結(jié)合到固相載體的表面上，是酶免疫技術(shù)中將游離和結(jié)合的酶標(biāo)志物迅速分離的最常用方法。

（一）固相載體的要求　結(jié)合抗體或抗原的容量大；可將抗體或抗原牢固地固定在其表面，經(jīng)長期保存和多次洗滌也不易脫落；不影響所固定的抗體或抗原的免疫反應(yīng)性，而且為使反應(yīng)充分進(jìn)行，最好其活性基團(tuán)朝向反應(yīng)溶液，固相方法簡便易行，快速經(jīng)濟(jì)。

（二）固相載體的種類和選擇

1.塑料制品：聚苯乙烯塑料最常采用。抗原或抗體以非共價(jià)或物理吸附方式結(jié)合到此載體上。

主要缺點(diǎn)是抗體（抗原）結(jié)合容量不高、固相抗體（抗原）脫吸附率較高且不均一，孔間變異大，重復(fù)性差，從而影響測定的靈敏度、精確度及檢測范圍。

目前采用非共價(jià)和化學(xué)偶聯(lián)共價(jià)吸附方法進(jìn)行抗原或抗體的固相化可改善上述缺點(diǎn)

2.微粒：易與抗體（抗原）形成化學(xué)偶聯(lián)，且結(jié)合容量大。均勻地分散到整個(gè)反應(yīng)溶液中，因此反應(yīng)速度快?？芍瞥纱呕㈩w粒。自動(dòng)化檢測中常用。

3.膜載體：常有硝酸纖維素膜（Nc）、玻璃纖維素膜及尼龍膜等通過非共價(jià)鍵吸附抗體（抗原），廣泛用于定性或半定量斑點(diǎn)ELISA的固相載體。

（三）包被與封閉

1.包被：將抗原或抗體結(jié)合在固相載體上的過程。普遍使用的聚苯乙烯載體，將抗原或抗體溶于緩沖液（常用為pH9.6的碳酸鹽緩沖液）中，加于ELISA板孔中4℃過夜。包被好的固相載體在低溫可放置一段時(shí)間而不失去免疫活性。

2.封閉：包被的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面不能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色致本底偏高，在這種情況下，需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除此干擾，此過程稱為封閉。

第二節(jié)　酶免疫技術(shù)的分類

包括兩種：

酶免疫組織化學(xué)技術(shù)：用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原的定位。

酶免疫測定技術(shù)（EIA）：用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需將結(jié)合和游離的酶標(biāo)志物分離，EIA一般可分為均相和異相兩種類型。

一、均相酶免疫測定

利用酶標(biāo)志物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變的原理，可以在不將結(jié)合和游離酶標(biāo)志物分離的情況下，通過測定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。該法主要用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定，均相法的優(yōu)點(diǎn)是適合于自動(dòng)化測定，但反應(yīng)中被抑制的酶活力較小，需用靈敏的光度計(jì)測定，反應(yīng)的溫度也需嚴(yán)格控制。

（一）酶放大免疫測定技術(shù)（EMIT）EMIT的基本原理是半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原。當(dāng)與抗體結(jié)合后，所標(biāo)的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。

（二）克隆酶供體免疫分析（CDEIA）DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如β-D半乳糖苷酶）分子的兩個(gè)片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨(dú)均無酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。克隆酶供體免疫測定（CDEIA）的反應(yīng)模式為競爭法。

標(biāo)本中的抗原和酶供體（ED）標(biāo)記的抗原與特異性抗體競爭結(jié)合，形成兩種抗原抗體復(fù)合物。ED標(biāo)記的抗原與抗體結(jié)合后由于空間位阻，不再能與酶受體（EA）結(jié)合，而游離的ED標(biāo)記的抗原上的ED可和EA結(jié)合，形成具有活性的酶，加入底物測定酶活性，酶活力的大小與標(biāo)本中抗原含量成正比。

二、異相酶免疫測定

是目前應(yīng)用最廣泛的一類標(biāo)記免疫測定技術(shù)。

（一）異相液相酶免疫測定　主要用于檢測樣品中極微量的短肽激素和某些藥物等小分子半抗原。酶標(biāo)志物具有更好的穩(wěn)定性，且無放射性污染。

1.平衡法：將待測樣品抗原、酶標(biāo)抗原及特異性抗體進(jìn)行一次性溫育，待反應(yīng)達(dá)平衡后，測定離心沉淀物（酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。

2.非平衡法：先將樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）與抗體混合反應(yīng)達(dá)平衡，然后加入酶標(biāo)記抗原繼續(xù)溫育一段時(shí)間，測定離心沉淀物（酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。

（二）固相酶免疫測定　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。

第三節(jié)　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

一、基本原理

把抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，測定時(shí)將受檢樣品和酶標(biāo)記抗原或抗體與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物；洗去未結(jié)合成分；加入底物后，底物被固相載體上的酶催化變成有色產(chǎn)物。故：

①固相的抗原或抗體；

②酶標(biāo)記的抗原或抗體；

③酶反應(yīng)的底物三種試劑為反應(yīng)必備。

二、方法類型及反應(yīng)原理

（一）檢測抗原的方法

1.雙抗體夾心法：屬于非競爭結(jié)合，檢測抗原最常用的方法，檢測含有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接；加入待測標(biāo)本，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心，洗滌；加底物顯色，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測。

如血清標(biāo)本中有類風(fēng)濕因子（RF）存在，則可出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，因?yàn)镽F是一種抗變性IgG的自身抗體，它能與多種動(dòng)物的變性IgG的Fc部分結(jié)合，因此RF就可作為固相抗體和酶標(biāo)抗體之間的橋接抗原。

雙抗體夾心法只適用于二價(jià)或以上的較大分子抗原的測定，不能用于小分子半抗原的檢測。

2.雙位點(diǎn)一步法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇，包被使用一種單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗。測定時(shí)將待測抗原和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測抗原濃度過高時(shí)，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，顯色降低，甚至假陰性。必要時(shí)可將標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)稀釋后重復(fù)測定。

3.競爭法

用于測定小分子抗原，如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時(shí)加入待測樣本和酶標(biāo)記的小分子，兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合，溫育一定時(shí)間后洗滌，加入酶底物顯色。

特點(diǎn)是：

①酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記抗原具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力；

②反應(yīng)體系中，固相抗體和酶標(biāo)抗原是固定限量，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)記和非標(biāo)記抗原的分子數(shù)量和；

③免疫反應(yīng)后，結(jié)合于固相載體上復(fù)合物中被測定的酶標(biāo)抗原的量（酶活性）與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中非標(biāo)記抗原的濃度成反比。

（二）檢測抗體的方法

1.間接法：最常用的方法，屬非競爭性結(jié)合試驗(yàn)。原理：將抗原包被在固相載體上，加入待測樣本形成固相抗原-受檢抗體復(fù)合物；經(jīng)溫育洗滌后，加入酶標(biāo)二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待測抗體-酶標(biāo)抗抗體復(fù)合物，加入底物后根據(jù)顯色的深淺確定待測抗體含量。多用于檢測IgG類型抗體。

2.雙抗原夾心法

此法可檢測各類抗體，因此雙抗原夾心法的靈敏度和特異性要高于間接法。其原理及操作步驟類似雙抗體夾心法，也可采用一步法。由于機(jī)體產(chǎn)生抗體IgG的效價(jià)有限，一般不會(huì)出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。

臨床上乙型肝炎表面抗體的測定常用此法。

3.競爭法

一般抗體檢測是較少采用，當(dāng)相應(yīng)抗原材料中含有與抗人IgG反應(yīng)的物質(zhì)，而且不易得到足夠的純化抗原或抗原的結(jié)合特異性不穩(wěn)定時(shí)，可采用這種方法測定抗體，目前臨床運(yùn)用較多的是乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）的檢測。

競爭抗體與待測抗體的特異性及親和力越接近，則測定的可靠性越強(qiáng)。

4.捕獲法又稱反向間接法

主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定，最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。原理：先將針對(duì)IgM的二抗包被于固相載體，加入待測標(biāo)本，其中IgM類抗體可被固相抗體捕獲，再加入特異性抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)記特異性抗原的抗體，形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，加底物顯色后，即可對(duì)待測標(biāo)本中IgM是否存在及含量進(jìn)行測定。

第四節(jié)　酶免疫測定的應(yīng)用

幾乎所有的可溶性抗原抗體系統(tǒng)均可用酶免疫測定檢測。

均相酶免疫測定主要用于藥物和小分子物質(zhì)的檢測。

非均相免疫測定中的ELISA在多種物質(zhì)的檢測中被廣泛的使用。

實(shí)戰(zhàn)演練

目前酶免疫技術(shù)中應(yīng)用較廣、提純較簡便的酶是

A.脲酶

B.堿性磷酸酶

C.葡萄糖氧化酶

D.辣根過氧化物酶

E.半乳糖苷酶

『正確答案』D

『答案解析』HRP是目前在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中應(yīng)用最為廣泛的標(biāo)記用酶。

酶放大免疫測定技術(shù)（EMIT）主要用來檢測

A.抗原

B.抗體

C.半抗原

D.不完全抗體

E.抗原抗體復(fù)合物

『正確答案』C

『答案解析』酶放大免疫測定技術(shù)（EMIT）主要用來檢測半抗原。

以下關(guān)于酶標(biāo)記抗體或抗原不正確的是

A.過碘酸鹽氧化法只用于HRP的標(biāo)記

B.未標(biāo)記上的游離的抗體與酶標(biāo)記抗體競爭固相上的抗原

C.制備的標(biāo)記物無須純化，因?yàn)橛坞x的酶或未標(biāo)記上的抗原或抗體成分在測定過程中被洗掉

D.制備的結(jié)合物需要純化

E.標(biāo)價(jià)物需要鑒定

『正確答案』C

『答案解析』每批制備的酶標(biāo)志物都要進(jìn)行質(zhì)量和標(biāo)記率的鑒定，質(zhì)量鑒定包括酶活性和抗體（抗原）的免疫活性鑒定。常用免疫電泳或雙相擴(kuò)散法，出現(xiàn)沉淀線表示酶標(biāo)記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。沉淀線經(jīng)生理鹽水反復(fù)漂洗后，滴加酶的底物溶液，若在沉淀線上能顯色，則表示酶標(biāo)記物中的酶活性仍保留。也可直接用ELISA方法測定。

關(guān)于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）錯(cuò)誤的是

A.屬于液相和固相酶免疫測定

B.固相常用聚苯乙烯反應(yīng)板

C.通過洗滌除去未結(jié)合成分

D.底物顯色

E.既能定性又能定量分析

『正確答案』A

『答案解析』酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）屬于固相酶免疫測定。

酶免疫技術(shù)中最常用的固相載體是

A.聚氯乙烯

B.聚苯乙烯

C.硝酸纖維素膜

D.瓊脂糖

E.尼龍膜

『正確答案』B

『答案解析』酶免疫技術(shù)中最常用的固相載體是聚苯乙烯。

酶免疫技術(shù)中懸浮在溶液中具有液相反應(yīng)速率的固相載體是

A.聚氯乙烯

B.聚苯乙烯

C.硝酸纖維素膜

D.磁性微粒

E.尼龍膜

『正確答案』D

『答案解析』酶免疫技術(shù)中懸浮在溶液中具有液相反應(yīng)速率的固相載體是磁性微粒。

將抗原或抗體固相化的過程稱為

A.吸附

B.包被

C.封閉

D.標(biāo)記

E.交聯(lián)

『正確答案』B

『答案解析』將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。

ELISA技術(shù)中，最常用來檢測抗體的方法是

A.雙抗體夾心法

B.間接法

C.競爭法

D.捕獲法

E.應(yīng)用生物素和親和素的ELISA

『正確答案』B

『答案解析』ELISA技術(shù)中，最常用來檢測抗體的方法是間接法。

下列有關(guān)雙位點(diǎn)一步法ELISA的敘述中，錯(cuò)誤的是

A.使用針對(duì)同一抗原不同決定簇的兩種單克隆抗體作為酶標(biāo)抗體

B.一種單克隆抗體作為固相抗體，另一種作為酶標(biāo)抗體

C.采用高親和力的單克隆抗體將提高測定的敏感性和特異性

D.可使標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入

E.標(biāo)本中抗原過高時(shí)，會(huì)出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)

『正確答案』A

『答案解析』雙位點(diǎn)一步法：在雙抗體夾心法基礎(chǔ)上，進(jìn)一步發(fā)展了雙位點(diǎn)一步法。該法是針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇的兩種單克隆抗體，即包被使用一種單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗。測定時(shí)將含待測抗原標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應(yīng)，兩種抗體互不干擾，經(jīng)過一次溫育和洗滌后，即可加入底物進(jìn)行顯色測定。但當(dāng)待測抗原濃度過高時(shí)，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)（hook

effect），顯色降低，嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。必要時(shí)可將標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)稀釋后重復(fù)測定。這是應(yīng)用此法必須要注意的問題。

ELISA技術(shù)中待測孔（管）顯色顏色的深淺與待測抗原或抗體呈負(fù)相關(guān)的是

A.雙抗體夾心法

B.雙位點(diǎn)一步法

C.間接法測抗體

D.競爭法

E.捕獲法

『正確答案』D

『答案解析』ELISA技術(shù)中待測孔（管）顯色顏色的深淺與待測抗原或抗體呈負(fù)相關(guān)的是競爭法。

雙位點(diǎn)一步法鉤狀效應(yīng)產(chǎn)生是因?yàn)?/p>

A.標(biāo)本中的抗原不純

B.洗滌不充分

C.孵育時(shí)間過長

D.酶標(biāo)抗體過量

E.標(biāo)本中的抗原濃度過高

『正確答案』E

『答案解析』雙位點(diǎn)一步法鉤狀效應(yīng)產(chǎn)生是因?yàn)闃?biāo)本中的抗原濃度過高。

用一種標(biāo)記物可檢測多種與抗原相應(yīng)的抗體的ELISA方法是

A.雙抗體夾心法

B.間接法

C.競爭法

D.雙抗原夾心法

E.雙位點(diǎn)一步法

『正確答案』B

『答案解析』用一種標(biāo)記物可檢測多種與抗原相應(yīng)的抗體的ELISA方法是間接法。

關(guān)于ELISA競爭法的敘述中，正確的是

A.只用于檢測抗原

B.待測成分優(yōu)先于酶標(biāo)記物與固相結(jié)合C.被測物含量多則標(biāo)記物被結(jié)合的機(jī)會(huì)少

D.待測管顯色顏色越淡表示被測物含量越少

E.只用于檢測抗體

『正確答案』C

『答案解析』關(guān)于ELISA競爭法的敘述中，正確的是被測物含量多則標(biāo)記物被結(jié)合的機(jī)會(huì)少。

ELISA間接法中固相上包被的是

A.抗體

B.不完全抗體

C.抗原

D.抗抗體

E.酶標(biāo)抗體

『正確答案』C

『答案解析』ELISA間接法中固相上包被的是抗原。

臨床上檢測IgM抗體常用的ELISA方法是

A.雙抗體夾心法

B.間接法

C.競爭法

D.雙抗原夾心法

E.捕獲法

『正確答案』E

『答案解析』捕獲法，又稱反向間接法。主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定，目前最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。

酶免疫技術(shù)分為兩類酶免疫測定，它們是

A.均相和異相

B.固相和液相

C.酶免疫組化和酶免疫測定

D.均相和固相

E.異相和液相

『正確答案』C

『答案解析』酶免疫技術(shù)分為兩類酶免疫測定，它們是酶免疫組化和酶免疫測定。

ELISA一般不用于檢測

A.病原體及其抗體

B.Ig、補(bǔ)體、腫瘤標(biāo)志物等蛋白質(zhì)

C.非肽類激素

D.藥物

E.半抗原

『正確答案』E

『答案解析』ELISA一般不用于檢測半抗原。半抗原一般用均相酶免疫測定法。

第三篇：2011年臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)(專升本)考試大綱.doc

2011檢驗(yàn)技師臨床檢驗(yàn)備考：紅細(xì)胞形態(tài)檢查臨床意義

2011初級(jí)檢驗(yàn)技師臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)備考預(yù)習(xí)：概述紅細(xì)胞形態(tài)檢查臨床意義......1、紅細(xì)胞體積大小變化

紅細(xì)胞體積大小變化包括小細(xì)胞、大細(xì)胞、巨紅細(xì)胞核紅細(xì)胞大小不均。

（1）小紅細(xì)胞：直徑<6μm的紅細(xì)胞。正常人偶見。小紅細(xì)胞血紅蛋白合成障礙，生理性淡染區(qū)擴(kuò)大，見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血。小紅細(xì)胞血紅蛋白充盈良好，生理性

淡染區(qū)消失，見于遺傳性球形細(xì)胞增多癥。

（2）大紅細(xì)胞：直徑>10μm的紅細(xì)胞，為未完全成熟紅細(xì)胞，體積較大，因殘留脫氧核糖核酸，瑞氏染色后呈多色性或嗜堿性點(diǎn)彩。見于巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、惡性貧血

等。

（3）巨紅細(xì)胞：直徑>15μm的紅細(xì)胞，因葉酸、維生素B12缺乏使幼稚細(xì)胞內(nèi)DNA合成不足，不能按時(shí)分裂，脫核后成為巨大紅細(xì)胞，血涂片還可見分葉過多中性粒細(xì)胞。見于巨

幼細(xì)胞性貧血。

（4）紅細(xì)胞大小不均：紅細(xì)胞間直徑相差一倍以上，大者可達(dá)12μm，小者僅2.5／μm，與骨髓粗制濫造紅細(xì)胞有關(guān)。見于嚴(yán)重的增生性貧血（如巨幼細(xì)胞性貧血）。

2、紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量改變

（1）正常色素性(normochmic)正常紅細(xì)胞在瑞特染色的血片中為淡紅色圓盤狀，中央有生理性空白區(qū)，通常稱正常色素性。除見于正常人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和白

血病。

（2）低色素性(hypochromic)紅細(xì)胞的生理性中心淺染色區(qū)擴(kuò)大，甚至成為環(huán)圈形紅細(xì)胞，提示其血紅蛋白含量明顯減少，常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生楊障礙性貧血、鐵幼粒細(xì)胞

性貧血，某些血紅蛋白病時(shí)也常見到。

（3）高色素性(hyperchromic)指紅細(xì)胞內(nèi)生下性中心淺染區(qū)消失，整個(gè)紅細(xì)胞均染成紅色，而且胞體也大。其平均紅細(xì)胞血紅蛋白的含量是增高的，但平均血紅蛋白濃度多屬于正

常。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。

（4）嗜多色性(polychromatic)屬于尚未完全成熟的紅細(xì)胞，故細(xì)胞較大，由于胞質(zhì)中含人多少不等的嗜堿性物策RNA而被染成灰色藍(lán)色。嗜多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓造紅細(xì)胞功能

活躍。在增生性貧血時(shí)增多，溶血性貧血時(shí)最為多見。

3、紅細(xì)胞形狀改變

紅細(xì)胞形狀改變有球形紅細(xì)胞、橢圓形紅細(xì)胞、靶形細(xì)胞、口形紅細(xì)胞、鐮形紅細(xì)胞、棘

紅細(xì)胞、裂紅細(xì)胞、緡錢狀紅細(xì)胞和有核紅細(xì)胞。

（1）球形紅細(xì)胞：細(xì)胞中央著色深、體積小、直徑與厚度比小于2.4：1（正常值3.4：

1），球形紅細(xì)胞氣體交換功能較正常紅細(xì)胞為弱，且容易導(dǎo)致破壞、溶解。見于遺傳性和獲

得性球形細(xì)胞增多癥（如自身免疫溶血性貧血、直接理化損傷如燒傷等）和小兒。

（2）橢圓形紅細(xì)胞：細(xì)胞呈橢圓形、桿形、兩端鈍圓、長軸增大，短軸縮短、長是寬的3～4倍，長徑為12.5μm，橫徑為2.5μm，其紅細(xì)胞生存時(shí)間一般正常也可縮短，血紅蛋白正常，與遺傳性細(xì)胞膜異?；蛴嘘P(guān)，細(xì)胞成熟后呈橢圓形，置于高滲、等滲、低滲、正常血清內(nèi)，其橢圓形保持不變。見于遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥（可達(dá)25%～75%）、大細(xì)胞性貧血（可達(dá)25%）、缺鐵性貧血、骨髓纖維化、巨幼細(xì)胞貧血、鐮形細(xì)胞性貧血、正常人（約占

1%，不超過15%）。

（3）靶形細(xì)胞：細(xì)胞中央染色較深，外圍為蒼白區(qū)域，而邊緣又深染，形如射擊之靶。有時(shí)，中央深染區(qū)呈細(xì)胞邊緣延伸的半島狀或柄狀。細(xì)胞直徑比正常大，但厚度變薄，由于紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白化學(xué)成分發(fā)生變異和鐵代謝異常所致，形成過程是：紅細(xì)胞中血紅蛋白溶解成鐮狀或弓形空白區(qū)，隨后弓形空白區(qū)兩端繼續(xù)彎曲延伸，形成環(huán)形透明帶，細(xì)胞生存時(shí)間約為正常細(xì)胞的一半或更短。見于各種低色素性貧血（如珠蛋白生成障礙性貧血、HbC?。?、阻塞

性黃疸、脾切除后。

（4）口形紅細(xì)胞：細(xì)胞中央有裂縫，中央淡染區(qū)呈扁平狀，似張開的口形或魚口，細(xì)胞有膜異常，Na+通透性增加，細(xì)胞膜變硬，使脆性增加，細(xì)胞生存時(shí)間縮短。見于口形紅細(xì)胞

增多癥、小兒消化系統(tǒng)疾患引起的貧血、酒精中毒、某些溶血性貧血、肝病和正常人

（<4%）。

（5）鐮形紅細(xì)胞：細(xì)胞呈鐮刀狀、線條狀或L、S、V形等，是含有異常血紅蛋白S（HbS）的紅細(xì)胞，在缺氧情況下，溶解度減低，形成長形或尖形結(jié)晶體，使細(xì)胞膜發(fā)生變形。檢查鐮形紅細(xì)胞時(shí)需加還原劑如偏亞硫酸鈉后觀察。見于鐮狀細(xì)胞貧血（HbS-S，HbS-

C）、鐮狀細(xì)胞特性樣本（HbA-S）。

（6）棘紅細(xì)胞：細(xì)胞表面有針狀突起、間距不規(guī)則、長和寬不一。見于遺傳性或獲得性β-脂蛋白缺乏癥（高達(dá)70%～80%）、脾切除后、酒精中毒性肝病、尿毒癥。需與皺縮紅細(xì)胞

（鋸齒狀紅細(xì)胞）鑒別，皺縮紅細(xì)胞邊緣呈鋸齒形、排列緊密、大小相等、外端較尖。

（7）裂紅細(xì)胞：為紅細(xì)胞碎片或不完整紅細(xì)胞，大小不

一、外形不規(guī)則、呈刺形、盔形、三角形、扭轉(zhuǎn)形等，是細(xì)胞通過阻塞的、管腔狹小的微血管所致。見于彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、嚴(yán)重?zé)齻?。正?/p>

人（<2%）。

（8）緡錢狀紅細(xì)胞：紅細(xì)胞互相連接如緡錢狀，是因?yàn)檠獫{中某些蛋白（纖維蛋白原、球蛋白）增高，使紅細(xì)胞正負(fù)電荷發(fā)生改變所致。

（9）有核紅細(xì)胞（幼稚紅細(xì)胞）：除1周內(nèi)嬰幼兒血涂片中可見少量有核紅細(xì)胞外，其

他則為病理現(xiàn)象，包括：

①溶血性貧血：嚴(yán)重的溶血性貧血、新生兒溶血性貧血、自身免疫性溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血。因紅細(xì)胞大量破壞、機(jī)體相對(duì)缺氧，使紅細(xì)胞生成素水平增高，骨髓紅系增生，網(wǎng)

織紅細(xì)胞和部分幼稚紅細(xì)胞提前釋放人血，說明骨髓有良好的調(diào)節(jié)功能。

②造血系統(tǒng)惡性疾患或骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤：各種急、慢性白血病、紅白血病。由于骨髓充滿大量白血病細(xì)胞而使幼紅細(xì)胞提前釋放，或因髓外造血所致，有核紅細(xì)胞以中、晚幼紅細(xì)胞為

主。紅白血病時(shí)可見更早階段幼稚紅細(xì)胞，并伴形態(tài)異常。

③慢性骨髓增生性疾?。喝绻撬枥w維化，血涂片可見有核紅細(xì)胞，來自髓外造血和纖維化的骨髓。

④脾切除后：骨髓中個(gè)別有核紅細(xì)胞能到達(dá)髓竇，當(dāng)脾切除后，不能被脾臟扣留，從而進(jìn)

入外周血。

（10）其他：①新月形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞著色極淡、殘缺不全、體積大、狀如新月形、直徑約20μm，見于某些溶血性貧血（如陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥）。②淚滴形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞形如淚滴樣或梨狀，因細(xì)胞內(nèi)含有Heinz小體或包涵體，或紅細(xì)胞膜被粘連而拉長所致。見于貧血、骨髓纖維化和正常人。③紅細(xì)胞形態(tài)不整：出現(xiàn)不規(guī)則的奇異形狀，如豆?fàn)?、梨形、?/p>

蚪狀、麥粒狀、棍棒形等。見于某些感染、嚴(yán)重貧血、巨幼細(xì)胞性貧血。

4、紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)

紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)包括嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞、豪焦小體、卡波環(huán)和寄生蟲。

（1）嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：瑞氏染色后，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)不一的藍(lán)色顆粒（RNA），屬于未完全成熟紅細(xì)胞，顆粒大小不

一、多少不等，原因?yàn)橹亟饘贀p傷細(xì)胞膜，使嗜堿性物質(zhì)凝集，或嗜堿性物質(zhì)變性，或血紅蛋白合成中阻斷原卟啉與鐵結(jié)合。見于鉛中毒。正常人血涂片中很少見到嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（約占1／10000）。其他各類貧血見到點(diǎn)彩紅細(xì)胞表明骨髓造

血旺盛或有紊亂現(xiàn)象。

（2）豪焦小體（Howell-Jolly’sbody、染色質(zhì)小體）：成熟紅細(xì)胞或幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有一個(gè)或多個(gè)直徑為1～2μm暗紫紅色圓形小體，為核碎裂、溶解后的殘余部分。見于脾切除

后、無脾癥、脾萎縮、脾功能低下、紅白血病、某些貧血（如巨幼細(xì)胞性貧血）。

（3）卡波環(huán)：在嗜多色性、堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)紫紅色細(xì)線圈狀結(jié)構(gòu)，呈環(huán)形、8字形，為核膜殘余物、紡錘體殘余物（電鏡下，可見形成紡錘體的微細(xì)管著色點(diǎn)異常）、脂蛋

白變性物。見于白血病、巨細(xì)胞性貧血、增生性貧血、鉛中毒、脾切除后。

（4）寄生蟲：紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見瘧原蟲、微絲蚴、杜利什曼原蟲等病原體。

第四篇：醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱考試寶典(臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn))-考試題庫

醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱考試寶典(臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn))-考試題庫

一、軟件基本信息

軟件題庫基本信息
軟件名稱：2013版醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱考試寶典(臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn))軟件大?。?4.9M 解題思路：有 軟件價(jià)格：198元/科 軟件語言：中文 題庫數(shù)量：12756 歷年真題：無 軟件授權(quán)：共享版 運(yùn)行環(huán)境：Win9x/me/NT/2000/XP/2003

二、軟件介紹
《醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱考試寶典(臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn))》系醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)仿真試題輔導(dǎo)軟 件，適用于醫(yī)學(xué)正、副高級(jí)衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格考試。題庫設(shè)計(jì)緊扣最新考 試大綱、考試教 材、考試科目、國家衛(wèi)生部最新頒布的人機(jī)對(duì)話標(biāo)準(zhǔn)版。符合醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考 試題型與考試科目，考試資料豐富，免費(fèi)試用、試題庫巨 大(注冊(cè)版試題量達(dá) 1 萬 2 千多題)，軟件收錄最新專業(yè)題庫強(qiáng)化練習(xí)題、臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理、綜合復(fù)習(xí)題、仿真試題，囊括了 目前所有的最新考試題型：臨床生 物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)、臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)、臨床免疫檢驗(yàn)、臨床 生物化學(xué)檢驗(yàn)、臨床微生物檢驗(yàn)、臨床血液檢驗(yàn)、臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)技術(shù)、臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)、臨床免疫檢驗(yàn)技 術(shù)、臨床血液檢驗(yàn)技術(shù)、臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理、綜合復(fù)習(xí)題，并對(duì)部分難 度較大考題提供專業(yè)級(jí)的解題思路、答題技巧、考試要點(diǎn)精解。通過人機(jī)對(duì)話的互動(dòng)模式即 可全面復(fù)習(xí)、又能有針對(duì)性的強(qiáng)化訓(xùn)練，提高應(yīng)試能力，助您考試成功！

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第五篇：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)材料

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：膽道疾病的臨床意義

正常時(shí)肝細(xì)胞內(nèi)ALT、AST的一部分可通過肝細(xì)胞膜到肝竇狀隙而進(jìn)入血液，一部分通過溶酶體分泌進(jìn)入毛細(xì)膽管排人小腸，故當(dāng)各種原因引起膽道梗阻時(shí)，后部分酶反流入血，可致ALT中度升高，梗阻緩解后l～2周即可恢復(fù)正常。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)講解：精液檢查的要求

如果取精液檢查，應(yīng)在檢查前5天內(nèi)不排精。一般收集精液，可以用自慰取得，用避孕套通過性交時(shí)收集也可以。精液取到后應(yīng)盛放在干燥、清潔的瓶內(nèi)，并立即送檢。

精液是體液的一種。因此，很多性病可以通過精液傳染給對(duì)方。艾滋病病人的精液含有艾滋病的病毒，因此可以通過性交傳染給對(duì)方。肛交是一種危險(xiǎn)的性行為，因?yàn)楦亻T附近的組織比較容易受傷害，如果有傷口破裂，那么帶有艾滋病病毒的精液就可以通過傷口傳染給被肛交的一方。這也是為什么同性戀的男性比較容易得艾滋病的原因。只要有體液的交流，異性戀的性行為也是可以傳播性病的。

醫(yī)生為了鑒定男性生育能力，常囑男方作精液檢查，正常精液顏色為灰白色或乳白色。如節(jié)欲時(shí)間長者，可呈淡黃色，若出現(xiàn)鮮紅色。暗紅色，則提示患者有炎癥或生殖道損傷。每次排精量為2～6毫升，常受排精次數(shù)與頻率的影響。新鮮精液呈稠厚膠凍狀，1小時(shí)之內(nèi)應(yīng)液化為稀薄的液體，用一根小玻璃棒插入精液中再提起，所形成的精液絲長度一般不超過2厘米，否則視為異常。精液呈弱堿性，PH值為7.2～7.8.正常精子數(shù)應(yīng)超過2000萬/毫升。排精后1小時(shí)內(nèi)活動(dòng)精》=50%.世界衛(wèi)生組織推薦精子活動(dòng)力分為四級(jí)：0級(jí)：不活動(dòng)；1級(jí)：精子原地?cái)[動(dòng)；2級(jí)：有中等的前向運(yùn)動(dòng)；3級(jí)：前向運(yùn)動(dòng)活躍，快速直線運(yùn)動(dòng)。正常的精子活動(dòng)力為2～3級(jí)的精子》=40%～50%.精子形態(tài)：畸形精子小于50%.分析男性生育能力不能單從精液的一項(xiàng)指標(biāo)定論，應(yīng)對(duì)精子數(shù)量、活力、活動(dòng)率、液化時(shí)間、畸形率等多方面進(jìn)行綜合能力分析。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)講解：精液常規(guī)檢查

精液由精子和精漿組成，其中精子占10%，其余為精漿。它除了含有水、果糖、蛋白質(zhì)和脂肪外，還含有多種酶類和無機(jī)鹽。精液中含有鋅元素。

精子由睪丸產(chǎn)生。精漿由前列腺、精囊腺和尿道球腺分泌產(chǎn)生。精漿里含有果糖和蛋白質(zhì)，是精子的營養(yǎng)物質(zhì)。另外，精漿中還含有前列腺素和一些酶類物質(zhì)。正常的精液呈乳白色、淡黃色或者無色，每毫升為精液中的精子數(shù)一般在6千萬至2億個(gè)。有活動(dòng)能力的精子占總數(shù)的60%以上?；尉討?yīng)總數(shù)的10%以下。在室溫下精子活動(dòng)力持續(xù)3－4小時(shí)。

精液是堿性，女性生殖器內(nèi)部則為酸性。因此，精液進(jìn)入女性內(nèi)部，就會(huì)被中和。

有生育力的正常男性一次射精最為2-6毫升，平均3.5ml.一次射精量與射精頻度呈負(fù)相關(guān)。若禁欲5-7天射精量仍少于2毫升，視為精液減少；若不射精，稱為無精液癥（aspermia）。精漿是精子活動(dòng)的介質(zhì)，并可中和陰道的酸性分泌物，以免影響精子活力。精液量減少（精漿不足）不利于精通過陰道進(jìn)入子宮和輸卵管，影響受精。若一次射精量超過8毫升，精子被稀釋，也不利于生育。此可因垂體前葉促性腺素的分泌功能亢進(jìn)，使雄激素的水平升高所致亦可見于禁欲時(shí)間過長者。

精液內(nèi)含有一種可與青霉素相媲美的抗菌物質(zhì)———精液胞漿素。專家們指出，精液胞漿素是一種具有獨(dú)特功能的蛋白質(zhì)，此物質(zhì)一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，就可以阻止核糖核酸的合成，從而殺死細(xì)菌。從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中觀察到，精液胞漿素能殺死葡萄球茵、鏈球菌等多種致病菌。

精液呈灰白色，自行液化后為半透明的乳白色，久未射精者可略顯淺黃色。凡精液呈鮮紅、淡紅、暗紅或醬油色并含有大量紅細(xì)胞者稱為血精，可能由于前列腺和精非特異性炎癥、生殖系結(jié)核、腫瘤或結(jié)石所致黃色或棕色膿性精液見于前列腺炎和精囊炎。對(duì)于普通的健康男性，如果沒有不潔的性行為，或者性病，精液是什么顏色，形狀，根本是無關(guān)緊要的。男性疾病不是從表面研究精液，就可以診斷出來的。精液中的精子和女性的卵子結(jié)合，用來繁衍后代，這就是精液的唯一的功能。因此，如果吞食了精液，是絕對(duì)不可能導(dǎo)致女人懷孕的。對(duì)于單身男性來說，如果連對(duì)象也沒有，根本就沒有必要擔(dān)心自己的精液問題，完全就是庸人自擾。如果結(jié)婚一年以后，女方仍然沒有懷孕，那時(shí)才是應(yīng)該看醫(yī)生，找出不孕的原因。

有些男性，受到一些封建迷信的宣傳，所以對(duì)于自己的精液特別重視。古人因?yàn)橛廾翢o知，所以有“一滴精，十滴血”，“精盡人亡”之類的錯(cuò)誤說法。這是完全沒有科學(xué)根據(jù)的。古代太監(jiān)，因?yàn)椴G丸被割掉，連一個(gè)精子都沒有。有些太監(jiān)還很長壽?，F(xiàn)代科學(xué)研究，證明精液根本就不是所謂男性的精華所在。精液也絕對(duì)不是什么美容佳品。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)基礎(chǔ)輔導(dǎo)：m-AST的意義

m-AST可協(xié)助判斷肝實(shí)質(zhì)損害的嚴(yán)重程度。

當(dāng)急性肝炎病變嚴(yán)重累及線粒體時(shí)，AST/ALT比值升高，此時(shí)應(yīng)注意是否發(fā)展為慢性肝炎。肝硬化時(shí)可達(dá)2.0.在Reye綜合征、妊娠脂肪肝、心肌梗死、做導(dǎo)管肝動(dòng)脈栓塞術(shù)后，m-AST也可升高

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)輔導(dǎo)：腎前性少尿

腎前性少尿：由于各種原因造成腎血流量不足，腎小球?yàn)V過率減低所致；如①腎缺血：各種原因引起的休克、過敏、失血過多、心力衰竭、腎動(dòng)脈栓塞、腫瘤壓迫等。②血液濃縮：嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、大面積燒傷、高熱等。③血容量減低：重癥肝病、低蛋白血癥引起全身水腫。④應(yīng)激狀態(tài)：嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染（如敗血癥）等。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)輔導(dǎo)：病理性多尿

1）內(nèi)分泌疾?。喝缒虮腊Y，指抗利尿激素（ADH）嚴(yán)重分泌不足或缺乏（中樞性尿崩癥），或腎臟對(duì)ADH不敏感或靈敏度減低（腎源性尿崩癥），患者24h尿量可多達(dá)5～15L，尿比密常為1.005以下，尿滲透壓在50～200mmol/L之間。多尿還見于甲狀腺功能亢進(jìn)、原發(fā)性醛固酮增多癥等。

2）代謝性疾?。喝缣悄虿。―M）引起的多尿，主要機(jī)制是滲透性利尿所致，患者尿比密、尿滲透壓均增高。

3）腎臟性疾?。喝缏阅I炎、慢性腎盂腎炎、慢性腎功能衰竭早期、腎小管酸中毒Ⅰ型、急性腎功能衰竭多尿期、失鉀性腎病等。腎小管破壞致腎濃縮功能逐漸減退均可引起多尿。腎性多尿常具有晝夜尿量的比例失常、夜尿量增多的特點(diǎn)，即晝夜間尿量比《2：1.2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：其他疾病的臨床意義

ALT廣泛存在于各組織中，機(jī)體器官有實(shí)質(zhì)性損害時(shí)，ALT均可增高。如急性心肌梗死、右心功能不全、多發(fā)性肌炎、肌營養(yǎng)不良、急性腎盂腎炎、大葉性肺炎、支氣管炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、潰瘍性結(jié)腸炎、細(xì)菌性或阿米巴性肝膿瘍等疾病、瘧疾、血吸蟲病，外傷、手術(shù)等均可造成血清ALT和AST增高。

某些化學(xué)藥物如異菸肼、氯丙嗪、利福平、環(huán)磷酰胺和某些抗生素等也可引起血清ALT增高，所以ALT單項(xiàng)增高，需要結(jié)合病情綜合分析。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)講解：血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用

血清學(xué)試驗(yàn)在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已廣泛應(yīng)用，可直接或間接從傳染病、寄生蟲病、腫瘤、自身免疫病和變態(tài)反應(yīng)性疾病的感染組織、血清、體液中檢出相應(yīng)的抗原或抗體，從而作出確切診斷。對(duì)傳染病來說，幾乎沒有不能用血清學(xué)試驗(yàn)確診的疾病。實(shí)驗(yàn)室只要備有各種診斷試劑盒和相應(yīng)的設(shè)備，即可對(duì)多種疾病作出確切診斷。在動(dòng)物疫病的群體檢疫、疫苗免疫效果監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查中，也已廣泛應(yīng)用了血清學(xué)試驗(yàn)以檢測抗原或抗體。血清學(xué)試驗(yàn)還廣泛應(yīng)用于生物活性物質(zhì)的超微定量、物種及微生物鑒定和分型等方面。此外，血清學(xué)試驗(yàn)也用于基因分離，克隆篩選，表達(dá)產(chǎn)物的定性、定量分析和純化等，已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)研究的重要手段。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：嗜酸性粒細(xì)胞的計(jì)數(shù)

嗜酸性粒細(xì)胞起源于骨髓內(nèi)CFU-s。經(jīng)過單向嗜酸性祖細(xì)胞（CFU-EO）階段，在有關(guān)生成素誘導(dǎo)下逐步分化，成熟為嗜酸性粒細(xì)胞，在正常人外周血中少見，僅為0.5-5%.嗜酸性粒細(xì)胞有微弱的吞噬作用，但基本是無殺菌力，它的主要作用是抑制嗜石破天驚生粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞合成與釋放其活性物質(zhì)，吞噬其釋出顆粒，并分泌組胺酶發(fā)破壞組胺，從而起到限制過敏反應(yīng)的作用。此外，實(shí)驗(yàn)癥明它還參加與對(duì)嚅蟲的免疫反應(yīng)。嗜酸性粒細(xì)胞的趨化因子至少有六大來源：

①從肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞而來的組胺（histamine）； ②由補(bǔ)體而來的C3AC5A、C567，其中以C5a最為重要； ③從致敏淋巴細(xì)胞而來的嗜酸性細(xì)胞趨化因子； ④從寄生蟲而來的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子；

⑤從某些細(xì)菌而的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（如乙型溶血性鏈球菌等）； ⑥從腫瘤細(xì)胞而來的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子。以上務(wù)因素均可引起的嗜酸性粒細(xì)胞增多。由于嗜酸性粒細(xì)胞在外周血中百分率很低，故經(jīng)白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞百分率換算而來的絕對(duì)值誤差較大，因此，在臨床上需在了解嗜酸性粒細(xì)胞的變化時(shí)，應(yīng)采用直接計(jì)數(shù)法。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)講解：血清學(xué)試驗(yàn)的概念

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)的抗體之間發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。它既可以發(fā)生在體內(nèi)，也可以發(fā)生在體外。在體內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)是體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)作用。體外的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)主要用于檢測抗原或抗體，用于免疫學(xué)診斷。因抗體主要存在于血清中，所以將體外發(fā)生的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)稱為血清學(xué)反應(yīng)或血清學(xué)試驗(yàn)。血清學(xué)試驗(yàn)具有高度的特異性，廣泛應(yīng)用于微生物的鑒定、傳染病及寄生蟲病的診斷和監(jiān)測。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿紅細(xì)胞形態(tài)分析的臨床意義

1.畸形紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)

Birech報(bào)告畸形紅細(xì)胞分類 紅細(xì)胞大小不等，形態(tài)異常多樣，歸為以下7種［6］：①酵母菌樣紅細(xì)胞：在紅細(xì)胞外膜有小泡突出或細(xì)胞呈霉菌孢子樣改變。②炸面包卷樣紅細(xì)胞：紅細(xì)胞膜呈明顯的內(nèi)外兩圈、四周肥厚、形似炸面包卷。③古錢樣紅細(xì)胞：形似中國古錢幣。④膜缺損紅細(xì)胞：紅細(xì)胞膜不完整，部分血紅蛋白（Hb）丟失。⑤大紅細(xì)胞：細(xì)胞體增大，中心淡，無雙盤凹陷感。⑥小紅細(xì)胞：胞體小，外膜增厚，折光增強(qiáng)。⑦手鐲樣紅細(xì)胞：胞體較大，呈明顯內(nèi)外兩層膜改變。

黃鋒先等關(guān)于畸形紅細(xì)胞分類 ①面包圈樣紅細(xì)胞。②古錢樣紅細(xì)胞。③紅細(xì)胞膜呈顆粒樣、串珠樣。④紅細(xì)胞大小不等，大者為正常的1～2倍，小者為其1/2，顏色變淺。⑤殘碎紅細(xì)胞。⑥芽孢樣紅細(xì)胞。⑦棘狀樣紅細(xì)胞。⑧其他形狀，如細(xì)胞膜破裂成各種形狀，馬蹄形、月牙型等。其他如紅細(xì)胞呈鋸齒型、固縮型、大小一致的均稱均一型。

2.均一型紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)

紅細(xì)胞大小一致，變化均一，圖相在兩種以內(nèi)，多數(shù)為正常及桑椹樣紅細(xì)胞，部分可出現(xiàn)影子紅細(xì)胞。此型多屬于非腎小球性血尿。

3.混合型紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)畸形和均一型紅細(xì)胞所占比例的不同，可分為畸形為主的混合型紅細(xì)胞血尿（畸形紅細(xì)胞》50%）和以均一型紅細(xì)胞為主的混合型紅細(xì)胞血尿（均一型紅細(xì)胞所占》50%）兩種。

4.判定界限

畸形紅細(xì)胞占80%以上為腎小球性血尿；畸形紅細(xì)胞《20%，均一型紅細(xì)胞》80%以上為非腎小球性血尿；畸形紅細(xì)胞》20%、《80%，為混合型血尿。

5.畸形紅細(xì)胞形態(tài)變化與腎小球性血尿

畸形紅細(xì)胞各種變化形狀分為7～8種。腎小球性血尿，絕大多數(shù)為畸形紅細(xì)胞，占80%以上；非腎小球性血尿絕大多數(shù)為均一型紅細(xì)胞，占80%以上；以及以畸形紅細(xì)胞為主（》50%）的混合型和以均一型紅細(xì)胞為主（》50%）的混合型。以上畸形紅細(xì)胞、均一型紅細(xì)胞和混合型紅細(xì)胞3型結(jié)果均有趨向性，不存在可逆行，當(dāng)然結(jié)合臨床癥狀觀察更為客觀。

畸形紅細(xì)胞的形成：一般認(rèn)為，紅細(xì)胞通過腎小球基底膜時(shí)受損和經(jīng)腎小球毛細(xì)血管壁漏出時(shí)受擠壓而變形，同時(shí)還與尿滲透壓、pH等因素有關(guān)。因此來自腎臟的紅細(xì)胞，除外形發(fā)生圖相變化外，其體積的大小也有顯著性差異。采用顯微鏡觀察檢查尿內(nèi)紅細(xì)胞形態(tài)的變化，對(duì)診斷腎小球疾病引起的血尿和鑒別診斷是有一定價(jià)值和臨床意義的。棘形、靶形紅細(xì)胞的出現(xiàn)更具有臨床診斷價(jià)值。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試質(zhì)量管理與控制輔導(dǎo)：如何制定允許總誤差

（1）Tonks于1963年從理論上研究此問題，提出根據(jù)參考值與參考值范圍而設(shè)定，其公式是：

允許總誤差（%）=（1/4）［（參考值上界-參考值下界）/參考值均值］100%

（2）目前國際上常推薦根據(jù)生物學(xué)變異制定不精密度標(biāo)準(zhǔn)。生物學(xué)變異或稱生理變異（CVB），包括個(gè)體內(nèi)變異（CVI）和個(gè)體間變異（CVG），也就是所說的生理波動(dòng)。生物學(xué)變異可用來導(dǎo)出臨床實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目的不精密度、不準(zhǔn)確度和總誤差的分析質(zhì)量。體內(nèi)和個(gè)體間變異分量表達(dá)為變異系數(shù)（分別為CVI和CVG）

2012醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試質(zhì)量管理與控制輔導(dǎo)：準(zhǔn)確度的總誤差概念

測定結(jié)果與真值的差異是隨機(jī)誤差（BE）和系統(tǒng)誤差（SE）的總和，即總誤差（TE）。也可用TE=1.96s+Bias表示（95%允許誤差限）。所選用的檢測方法的總誤差必須在臨床可接受的水平范圍內(nèi)（也就是允許總誤差，TEa）。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)輔導(dǎo)：精液的精子活動(dòng)率檢測

【正常參考值】正常精子活力一般在Ⅲ級(jí)（活動(dòng)較好，有中速運(yùn)動(dòng)，但波形運(yùn)動(dòng)的較多）以上，射精后1小時(shí)內(nèi)有Ⅲ級(jí)以上活動(dòng)能力的精于應(yīng)》0.60.【臨床意義】如果0級(jí)（死精子，無活動(dòng)能力，加溫后仍不活動(dòng)）和Ⅰ級(jí)（活動(dòng)不良，精子原地旋轉(zhuǎn)、擺動(dòng)或抖動(dòng)，運(yùn)動(dòng)遲緩）精子在0.40以上，常為男性不育癥的重要原因之一。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨床檢驗(yàn)技師綜合輔導(dǎo)：酶的作用機(jī)理

一、酶作用在于降低反應(yīng)活化能

在任何化學(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)物分子必須超過一定的能閾，成為活化的狀態(tài)，才能發(fā)生變化，形成產(chǎn)物。這種提高低能分子達(dá)到活化狀態(tài)的能量，稱為活化能。催化劑的作用，主要是降低反應(yīng)所需的活化能，以致相同的能量能使更多的分子活化，從而加速反應(yīng)的進(jìn)行。

酶能顯著地降低活化能，故能表現(xiàn)為高度的催化效率。例如前述的H2O2酶的例子，可以顯著地看出，酶能降低反應(yīng)活化能，使反應(yīng)速度增高千百萬倍以上。

二、中間復(fù)合物學(xué)說

目前一般認(rèn)為，酶催化某一反應(yīng)時(shí)，首先在酶的活性中心與底物結(jié)合生成酶－底物復(fù)合物，此復(fù)合物再進(jìn)行分解而釋放出酶，同時(shí)生成一種或數(shù)種產(chǎn)物，此過程可用下式表示： ES的形成，改變了原來反應(yīng)的途徑，可使底物的活化能大大降低，從而使反應(yīng)加速。

三、酶作用高效率的機(jī)理

詳細(xì)機(jī)制仍不太清楚，主要有下列四種因素： 1.趨近效應(yīng)和定向效應(yīng)

酶可以將它的底物結(jié)合在它的活性部位由于化學(xué)反應(yīng)速度與反應(yīng)物濃度成正比，若在反應(yīng)系統(tǒng)的某一局部區(qū)域，底物濃度增高，則反應(yīng)速度也隨之提高，此外，酶與底物間的靠近具有一定的取向，這樣反應(yīng)物分子才被作用，大大增加了ES復(fù)合物進(jìn)入活化狀態(tài)的機(jī)率。2.張力作用

底物的結(jié)合可誘導(dǎo)酶分子構(gòu)象發(fā)生變化，比底物大得多的酶分子的三、四級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，也可對(duì)底物產(chǎn)生張力作用，使底物扭曲，促進(jìn)ES進(jìn)入活性狀態(tài)。

3.酸堿催化作用

酶的活性中心具有某些氨基酸殘基的R基團(tuán)，這些基團(tuán)往往是良好的質(zhì)子供體或受體，在水溶液中這些廣義的酸性基團(tuán)或廣義的堿性基團(tuán)對(duì)許多化學(xué)反應(yīng)是有力的催化劑。

4.共價(jià)催化作用

某些酶能與底物形成極不穩(wěn)定的、共價(jià)結(jié)合的ES復(fù)合物，這些復(fù)合物比無酶存在時(shí)更容易進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。

例如：無酶催化的反應(yīng) RX+H2O→ROH+Hx 慢 有酶存在時(shí) RX+E桹H→ROH+EX快 EX+H2O→E桹H+HX快

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨床檢驗(yàn)技師綜合輔導(dǎo)：蛋白質(zhì)的變性

天然蛋白質(zhì)的嚴(yán)密結(jié)構(gòu)在某些物理或化學(xué)因素作用下，其特定的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致理化性質(zhì)改變和生物學(xué)活性的喪失，如酶失去催化活力，激素喪失活性稱之為蛋白質(zhì)的變性作用。變性蛋白質(zhì)只有空間構(gòu)象的破壞，一般認(rèn)為蛋白質(zhì)變性本質(zhì)是次級(jí)鍵，二硫鍵的破壞，并不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。

變性蛋白質(zhì)和天然蛋白質(zhì)最明顯的區(qū)別是溶解度降低，同時(shí)蛋白質(zhì)的粘度增加，結(jié)晶性破壞，生物學(xué)活性喪失，易被蛋白酶分解。

引起蛋白質(zhì)變性的原因可分為物理和化學(xué)因素兩類。物理因素可以是加熱、加壓、脫水、攪拌、振蕩、紫外線照射、超聲波的作用等；化學(xué)因素有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、尿素、重金屬鹽、十二烷基磺酸鈉（SDS）等。在臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用于消毒及滅菌。反之，注意防止蛋白質(zhì)變性就能有效地保存蛋白質(zhì)制劑。

變性并非是不可逆的變化，當(dāng)變性程度較輕時(shí)，如去除變性因素，有的蛋白質(zhì)仍能恢復(fù)或部分恢復(fù)其原來的構(gòu)象及功能，變性的可逆變化稱為復(fù)性。例如，前述的核糖核酸酶中四對(duì)二硫鍵及其氫鍵。在β巰基乙醇和8M尿素作用下，發(fā)生變性，失去生物學(xué)活性，變性后如經(jīng)過透析去除尿素，β-巰基乙醇，并設(shè)法使疏基氧化成二硫鍵，酶蛋白又可恢復(fù)其原來的構(gòu)象，生物學(xué)活性也幾乎全部恢復(fù)，此稱變性核糖核酸酶的復(fù)性。許多蛋白質(zhì)變性時(shí)被破壞嚴(yán)重，不能恢復(fù)，稱為不可逆性變性。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：異型淋巴細(xì)胞

在傳染性單核增多癥、病毒性肺肝炎、流行性出血熱等病毒感染或過敏原則刺激下，可使淋巴細(xì)胞增生，并出現(xiàn)某些形態(tài)學(xué)變化，稱為異型淋巴細(xì)胞。Downey將其按形態(tài)特征分為三型：

1型（空泡型）：最多見。胞體比正常淋巴細(xì)胞稍大，多為圓形、橢圓形或不規(guī)則形。核圓形、腎形或分葉狀、常偏位。染色質(zhì)粗糙，呈粗網(wǎng)狀或小塊狀，排列不規(guī)則。胞質(zhì)豐富，染深藍(lán)色，含空泡或呈泡沫狀。Ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。染色質(zhì)細(xì)致呈網(wǎng)狀排列，可見1～2個(gè)至發(fā)生母細(xì)胞化的結(jié)果。

Ⅲ型（不規(guī)則型）：胞體較大，外形常不規(guī)則，可有多數(shù)足。核形狀及結(jié)構(gòu)與1型相同或更不殊途同歸，染色質(zhì)較粗糙致密。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍(lán)或灰藍(lán)色，有透明感，邊緣處著色較深藍(lán)色?？捎猩贁?shù)空泡。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：胎兒血型的預(yù)測

羊水中存在ABH（O）血型物質(zhì)，故可在妊娠期預(yù)測胎兒的血型，以便對(duì)母體胎兒血型不合者進(jìn)行圍生期監(jiān)護(hù)、治療和對(duì)新生兒的作好搶救準(zhǔn)備。

一、ABH分泌型血型的預(yù)測

本試驗(yàn)是根據(jù)羊中分泌的血型物質(zhì)可將相應(yīng)抗血清中抗體中和原理設(shè)計(jì)的。將羊水與0.2毫升最適稀釋度的抗A抗B抗H血清0.2毫升分別混勻，馮分作用10min后，便血型物質(zhì)將抗體中和完全，再于各管加入相對(duì)應(yīng)的2%標(biāo)準(zhǔn)A型，B型，O型紅細(xì)胞懸液各0.2ml，充分混勻。置室溫30min，低速離心1分鐘觀察有無凝集。

本試驗(yàn)最關(guān)鍵的部分是要選擇好抗血清的最適稀釋度。即選擇抗血清與2%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液恰能產(chǎn)生4+凝集的最高稀釋度，這樣才能在加入羊水后將相應(yīng)抗體中和掉不再出現(xiàn)4+凝集。通常是將抗血清0.2ml用生理鹽水做1：1-1：256倍比稀釋后，將2%A，B，O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞加入0.2ml混勻，置室溫1小時(shí)后觀察結(jié)果，以出現(xiàn)4+凝塊的最高稀釋度定為最適稀釋度。實(shí)驗(yàn)中要注意控制溫度，以免由于抗血清中冷凝集素未被完全吸收而造成結(jié)果判斷錯(cuò)誤。

二、ABH（O）血型酶的測定

羊水ABH血型物質(zhì)的測定，無法預(yù)測非分泌型胎兒的血型。已知由A基因產(chǎn)生的N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶能將N-乙酰氨基半乳聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成A血型物質(zhì)，B基因產(chǎn)生的D-半乳糖轉(zhuǎn)移酶將D-半乳糖聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成B血型物質(zhì)。當(dāng)有糖供體、二價(jià)錳離子與O型紅細(xì)胞共同孵育時(shí)，羊水中的轉(zhuǎn)移酶可在紅細(xì)胞膜上合億A或B物質(zhì)，利用血型測定的方法可檢測埋分泌型胎兒的血型。這時(shí)有嚴(yán)重ABO同種免疫史的孕婦非分泌型的胎兒血型鑒定提供了可能，也為在位于ABO基因部位的遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷提供了可能，而可不必考慮胎兒是否為分泌型。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：精液的男性生育力指數(shù)測定

【計(jì)算公式】

I=M（N×V）/（A×106）式中I為男性生育力指數(shù)；M為活動(dòng)精子百分率；N為每毫升的精子數(shù)；V為精子運(yùn)動(dòng)的速度；A為畸形精子的百分率?！菊⒖贾怠?/p>

正常人生育力指數(shù)》1.【臨床意義】

1.生育指數(shù)為0，表明完全無生育能力。

2.生育指數(shù)為0-1之間，表明有不同程度的生育障礙。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：HIV-抗體常見檢測方法

目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養(yǎng)、核酸檢測和抗原檢測。其中對(duì)病毒抗體的檢測是最常規(guī)使用的方法，這不但是由于這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對(duì)簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染后除早期短暫的“窗口期”外的整個(gè)生命期間長期穩(wěn)定地存在并可被檢測到。

在一些特殊情況下，當(dāng)抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時(shí)，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對(duì)非典型血清學(xué)反應(yīng)樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對(duì)特殊樣品的診斷。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：HIV-抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶免疫試驗(yàn)（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）。國內(nèi)常用的確認(rèn)試驗(yàn)方法是WB.（一）免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB）

免疫印跡實(shí)驗(yàn)是廣泛用于許多傳染病診斷的實(shí)驗(yàn)方法，就HIV的病原學(xué)診斷而言，它是首選的用以確認(rèn)HIV抗體的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方法，WB的檢測結(jié)果常常被作為鑒別其他檢驗(yàn)方法優(yōu)劣的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

確認(rèn)試驗(yàn)流程：

有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應(yīng)，則報(bào)告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為HIV抗體檢測結(jié)果不確定。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報(bào)告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)則報(bào)告HIV-2抗體血清學(xué)陽性，并將樣品送國家參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸序列分析，WB的敏感性一般不低于初篩實(shí)驗(yàn)，但它的特異性很高，這主要是基于HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對(duì)不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。從WB確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果看出，初篩試驗(yàn)盡管選擇質(zhì)量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會(huì)有假陽性出現(xiàn)，必須通過確認(rèn)試驗(yàn)才能得出準(zhǔn)確結(jié)果。

（二）免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）

IFA法經(jīng)濟(jì)、簡便、快速，曾被FDA推薦用于WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓(xùn)練的技術(shù)人員、觀察和解釋結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實(shí)驗(yàn)室開展和應(yīng)用。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：重視血常規(guī)的復(fù)檢工作

目前血細(xì)胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對(duì)提高血細(xì)胞常規(guī)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，減輕工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度起促進(jìn)作用。但是我們應(yīng)該認(rèn)識(shí)到血細(xì)胞分析儀還是一個(gè)過篩工具，至今最先進(jìn)的全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀還不能完全取代人工檢查，仍然有部分標(biāo)本需要復(fù)檢。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細(xì)胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再復(fù)檢了。有的單位即使復(fù)檢，也沒有復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，隨心所欲，其復(fù)檢率只有百分之幾，這顯然是不負(fù)責(zé)任的?，F(xiàn)就此問題談?wù)剛€(gè)人看法。

一、為什么要復(fù)檢？考試用書 血細(xì)胞分析儀測定原理雖有不同，但它的各種項(xiàng)目的閾值是人設(shè)定的，而且是固定的，可是病人血細(xì)胞變化是千姿百態(tài)，有部分細(xì)胞難以識(shí)別或認(rèn)錯(cuò)干擾其它細(xì)胞計(jì)數(shù)，如有核紅細(xì)胞可影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)；細(xì)胞碎片、血小板聚集可影響血小板計(jì)數(shù)等。尤其是白細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類與血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞分類有本質(zhì)上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細(xì)胞大小來分而己，即使先進(jìn)的五分類也與形態(tài)學(xué)也有很大差異，又如中性粒細(xì)胞毒性病變、變異淋巴細(xì)胞、瘧原蟲等臨床需要的指標(biāo)無法顯示；有的幼稚細(xì)胞、有核紅細(xì)胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時(shí)還存在互相干擾?？傊?，血細(xì)胞分析儀的結(jié)果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。

根據(jù)1987年我赴日本考察時(shí)，日本對(duì)三分群儀器白細(xì)胞分類是不收費(fèi)的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報(bào)告。1989年Coulter公司制定了復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)查了11個(gè)床位及性質(zhì)不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細(xì)胞分析儀，根據(jù)該公司的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，其復(fù)檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時(shí)間好好為40%需要分類的病人服務(wù)。

最近日本名古屋大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬醫(yī)院報(bào)告，他們用SysmexXE-2100（五分類）儀器的總復(fù)檢率為32.3%.再次證明當(dāng)前最先進(jìn)血細(xì)胞分析儀也不能完全替代人工檢查。

由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細(xì)胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起我們深思。

二、復(fù)檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一

有人認(rèn)為“復(fù)檢”就是要在鏡下重新進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)而己，這是偏面的。復(fù)檢內(nèi)涵應(yīng)包據(jù)：

1、對(duì)血細(xì)胞分析儀測定的全部結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，必要時(shí)包括原標(biāo)本重查，或重新用人工復(fù)查等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：精液檢查的具備條件

受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標(biāo)本間隔時(shí)間至少不得少于100小時(shí)）；備大口有蓋清潔干燥容器一個(gè)，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標(biāo)本離體時(shí)間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗(yàn)室，并向檢驗(yàn)員提供標(biāo)本取出時(shí)間。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽?，精子活?dòng)情況，精子密度（個(gè)/毫升），精液液化時(shí)間（標(biāo)本取出到精液液化的時(shí)間），不動(dòng)精子（個(gè)/高倍視野）等。見不動(dòng)精子，須染色方可區(qū)分：不活動(dòng)的精子、死精子、未成熟精子等。

找不到精子必須離心后檢驗(yàn)，仍然找不到精子；方可報(bào)告無精。經(jīng)三次取樣化驗(yàn)，結(jié)果仍然找不到精子方可確認(rèn)無精子癥。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法

血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。人體含有2750-3300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運(yùn)載血細(xì)胞，同時(shí)也是運(yùn)輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。

將新鮮血液離心，使血細(xì)胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的主要作用

提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。

提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。

提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具

離心機(jī)（centrifuge）是實(shí)施離心技術(shù)的裝置。離心機(jī)的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機(jī)和分析型離心機(jī)。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機(jī)中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對(duì)分子質(zhì)量等性質(zhì)。兩類離心機(jī)由于用途不同，故其主要結(jié)構(gòu)也有差異。通常所使用的離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機(jī)、高速離心機(jī)和超速離心機(jī)三類

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況

離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。

根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：

1.差速離心法。通過逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。

2.密度梯度離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：

1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。

2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。

3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。

3.沉降平衡離心法。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況

離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。

根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：

1.差速離心法。通過逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。

2.密度梯度離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：

1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。

2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。

3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。

3.沉降平衡離心法。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：動(dòng)脈血?dú)鈽?biāo)本采集方法

一、抗凝劑的配制

首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，可以用0.9%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲(chǔ)藏。每抽血?dú)馇?，?ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個(gè)針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用?？鼓齽┥倭藭?huì)使血液凝集，堵塞血?dú)夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會(huì)影響血?dú)夂碗x子的檢測結(jié)果，大劑量的抗凝劑會(huì)嚴(yán)重使離子鈣偏低，誤導(dǎo)臨床。

二、采血方法的選擇

成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動(dòng)脈，次選股動(dòng)脈

小兒：

1、首選用顳淺動(dòng)脈或頭皮小動(dòng)脈，嚴(yán)格消毒后，用肝素化的5號(hào)頭皮針連接2ml注射器，待動(dòng)脈血流至注射器乳頭時(shí)，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍s0.5ml血），然后拔出針頭立即混勻送檢。

2、用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動(dòng)脈，小嬰兒可用顳淺動(dòng)脈取血，取完血一定要密封。

3、因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動(dòng)脈穿刺時(shí)，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細(xì)管采取動(dòng)脈化毛細(xì)血管的血亦可。動(dòng)脈化毛細(xì)血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達(dá)到動(dòng)脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動(dòng)流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細(xì)管吸?。ńㄗh采用廠家配套提供的專用毛細(xì)管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。未充分動(dòng)脈化的毛細(xì)管血的PO2偏低，對(duì)PH、PCO2和HCO3—的測定結(jié)果影響不明顯。

三、采血后處理

采血后針尖或毛細(xì)吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進(jìn)入，并立即充分混勻達(dá)到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細(xì)胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。若不能立即測定，應(yīng)將血?dú)鈽?biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測時(shí)間也不宜超過2小時(shí)。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：VC影響血糖尿糖檢測

解放軍總醫(yī)院檢驗(yàn)中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測試劑中的酶，會(huì)導(dǎo)致尿糖檢測的結(jié)果失真，對(duì)于糖尿病患者來說，服用維生素要謹(jǐn)慎。

第一次遇到尿糖檢測失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗(yàn)科的檢驗(yàn)員。一天晚上急診科一患者化驗(yàn)的結(jié)果是血糖8毫克。急診醫(yī)生一看檢驗(yàn)報(bào)告馬上產(chǎn)生疑問：怎么會(huì)是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個(gè)人早就死了。于是檢驗(yàn)科再次對(duì)病人的血樣化驗(yàn)，結(jié)果還是8毫克，叢玉隆仔細(xì)檢查了檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)設(shè)備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗(yàn)結(jié)果確實(shí)與病人實(shí)際病情不符。叢玉隆再仔細(xì)檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時(shí)，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗(yàn)試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗(yàn)結(jié)果。

vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗(yàn)，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測結(jié)果是每毫升尿含vc30毫克。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。叢玉隆說，假如一個(gè)糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個(gè)加號(hào)，吃了9片vc后，就可能是1個(gè)加號(hào)，甚至?xí)霈F(xiàn)陰性結(jié)果。

叢玉隆進(jìn)行的另一個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時(shí)間段取尿，30分鐘后尿含vc600多毫克、1小時(shí)500多毫克、5小時(shí)后含幾十毫克（正常值），說明靜脈使用大劑量vc對(duì)糖尿病人的尿糖檢查干擾更大。試驗(yàn)也證明5個(gè)小時(shí)以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗(yàn)結(jié)果。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷測定的參考值

參考值：血清磷：0.81～1.45mmol/L

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷的測定方法

血清無機(jī)磷的測定方法一般有磷鉬酸法、染料法和酶法。

磷鉬酸法是血清中無機(jī)磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍(lán)進(jìn)行比色測定。

染料法如孔雀綠直接顯色測定法。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復(fù)性也較差，不能用于常規(guī)檢驗(yàn)。

酶法是一個(gè)偶聯(lián)反應(yīng)，參與反應(yīng)的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸變位酶及葡萄糖6-磷酸脫氫酶，反應(yīng)中使NADP+還原成NADPH，形成NADPH在340nm波長下測定其吸光度，該方法不受有機(jī)磷酸酯的干擾。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的儀器

原始的火焰光度計(jì)由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測器組成?，F(xiàn)代的火焰分光光度計(jì)的基本框圖（見圖）示意出：試樣溶液經(jīng)霧化后噴入火焰，溶劑在火焰中蒸發(fā)，鹽粒熔融，轉(zhuǎn)化為蒸氣，離解成原子（部分電離），再由火焰高溫激發(fā)發(fā)光，發(fā)射的光經(jīng)切光器調(diào)制，并由單色器（通常是光柵）分光，選擇待測波長譜線，經(jīng)光電轉(zhuǎn)換和電信號(hào)放大后檢出。反射鏡起聚光作用。

火焰光度法常用的火焰是在大氣恒壓下經(jīng)化學(xué)反應(yīng)而燃燒的。不同的燃料氣體和助燃?xì)饨M分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學(xué)火焰能達(dá)到的最高溫度和化學(xué)作用性質(zhì)（見表）。這是火焰光度法應(yīng)用中要選擇的關(guān)鍵條件。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的簡史

1859年R.W.本生利用本生燈進(jìn)行焰色反應(yīng)，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。1928年瑞典植物生理學(xué)家H.G.龍德加德用火焰光譜法研究植物新陳代謝作用中微量元素的定量變化，并使用了參考元素技術(shù)。由于當(dāng)時(shí)使用照相方法記錄譜線，致使準(zhǔn)確定量分析工作較為繁瑣。1935年制成第一臺(tái)火焰光譜光電直讀光度計(jì)，以及后來W.吉爾伯特制作的直接注入式燃燒器的使用，使得火焰光度法應(yīng)用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的應(yīng)用

火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。方法簡單迅速，組分影響較小，取樣量小，用一份溶液即可進(jìn)行多種元素分析，每毫升10微克濃度的鈉溶液也可測定。此法不僅可作為一個(gè)光化學(xué)分析方法獨(dú)立使用，而且可作為一個(gè)有特色的光檢測器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓標(biāo)本的采集選擇

骨髓標(biāo)本的采集選擇

骨髓標(biāo)本大部分采用穿刺法吸取。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個(gè)方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應(yīng)淺表、易定位；③應(yīng)避開重要臟器。臨床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、脛骨等處。髂骨后上棘此處骨皮質(zhì)薄，骨髓腔大，進(jìn)針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓涂片的檢查

骨髓涂片的檢查

（1）普通光鏡低倍鏡檢驗(yàn)：判斷骨髓增生程度；估計(jì)巨核細(xì)胞系統(tǒng)增生情況；觀察涂片邊緣、尾部、骨髓小粒周圍，有無體積較大或成堆分布的異常細(xì)胞。

（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個(gè)細(xì)胞，按細(xì)胞的種類、發(fā)育階段分別計(jì)算，并計(jì)算它們各自的百分率；仔細(xì)觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的變化。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓象的分析與報(bào)告

骨髓象的分析與報(bào)告

包括骨髓有核細(xì)胞增生程度、粒細(xì)胞與有核紅細(xì)胞比例、粒系統(tǒng)細(xì)胞改變、紅系統(tǒng)細(xì)胞改變、巨核系統(tǒng)細(xì)胞改變、淋巴系統(tǒng)細(xì)胞改變、單核系統(tǒng)細(xì)胞改變和其他血細(xì)胞改變。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識(shí)輔導(dǎo)：均相酶免疫測定

均相酶免疫測定：屬于競爭結(jié)合分析方法。

①酶增強(qiáng)免疫測定技術(shù)（EMIT）：了解其基本原理，反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。

②克隆酶供體免疫分析：DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如β-D半乳糖苷酶）分子的兩個(gè)片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨(dú)均無酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識(shí)輔導(dǎo)：異相酶免疫測定

異相酶免疫測定：又分為液相和固相酶免疫測定。

①液相酶免疫測定：其測定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放射免疫方法的趨勢。②固相酶免疫測定：如常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：肝硬化的臨床意義

肝硬化代償期患者血清ALT可輕度增高或正常，失代償期ALT可持續(xù)升高。膽汁淤積性肝硬化ALT活性較高可與黃疸平行，AST升高不及ALT顯著。肝硬化病變累及線粒體時(shí)，多數(shù)AST升高程度超過ALT。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的方法學(xué)評(píng)價(jià)

尿色和透明度判斷，受主觀因素影響。尿透明度還易受某些鹽類結(jié)晶的影響。臨床應(yīng)用僅作參考

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的質(zhì)量控制

1.使用新鮮尿尿放置時(shí)間過長，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰亍⒓?xì)菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿顏色加深、混濁度增高。2.防止污染。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的生理性變化

（1）代謝產(chǎn)物：生理性影響尿顏色主要是尿色素、尿膽素（URB）、尿膽原（URO）等。

（2）飲水及尿量：大量飲水、尿量多則尿色淡；尿色深見于尿量少、飲水少或運(yùn)動(dòng)、出汗、水分丟失。

（3）藥物的影響：如服用核黃素、呋喃唑酮、痢特靈、黃連素、牛黃、阿的平使尿呈黃色或深黃色；番瀉葉、山道年等使尿呈橙色或橙黃色；酚紅、番瀉葉、蘆薈、氨基匹林、磺胺藥等使尿呈紅色或紅褐色。

（4）鹽類結(jié)晶及酸堿度：生理性尿混濁的主要原因是含有較多的鹽類，常見有：①尿酸鹽結(jié)晶：在濃縮的酸性尿遇冷時(shí)，可有淡紅色結(jié)晶析出。②磷酸鹽或碳酸鹽結(jié)晶：尿呈堿性或中性時(shí)，可析出灰白色結(jié)晶。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)

腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)：TNF對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有殺傷或抑制作用，敏感性因腫瘤細(xì)胞類型而異；TNF呈劑量依賴性地抑制病毒介導(dǎo)的細(xì)胞病變的發(fā)展，對(duì)RNA病毒和DNA病毒均有抑制作用；TNF能夠增強(qiáng)T細(xì)胞產(chǎn)生以IL-2為主的淋巴因子，提高IL-2R的表達(dá)水平，促進(jìn)T細(xì)胞增殖；還能促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體；TNF有中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化作用，并使之活化和脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)；TNF可刺激成骨細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性，誘導(dǎo)成骨細(xì)胞吸收骨質(zhì)、使軟骨細(xì)胞進(jìn)行軟骨更新，抑制軟骨形成。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究

腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究：由于TNF的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能，TNF療法的研究已被許多國家開展。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床經(jīng)驗(yàn)表明，TNF對(duì)某些腫瘤具有明顯的抑制作用，但副作用大，建立合理的用藥方案及治療措施，可望降低用量，減輕副作用，達(dá)到最佳治療效果。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：紅細(xì)胞鐮變?cè)囼?yàn)

（1）原理：在低氧分壓條件下，HbS轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)后溶解度降低，從而聚合成短棒狀凝膠使紅細(xì)胞變形，呈鐮刀狀。

結(jié)果：陰性，無鐮變細(xì)胞。

（2）臨床意義：陽性見于鐮狀細(xì)胞貧血（HbS病），HbBart、HbI病可見少量鐮狀細(xì)胞。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目

CDC將大腸埃希氏菌O157：H7列為常規(guī)檢測項(xiàng)目

EHEC的血清型》50種，最具代表性的是O157：H7.在北美許多地區(qū)，O157：H7占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見的病原菌，分離率占血便的40%，6、7、8三個(gè)月O157：H7感染的發(fā)生率最高。且0157是4歲以下兒童急性腎功衰的主要病原菌，所以CDC提出應(yīng)將大腸埃希氏菌0157：H7列為常規(guī)檢測項(xiàng)目。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的腸道感染

埃希菌屬的腸道感染：致病性大腸埃希菌有下列五個(gè)病原群。（1）腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）：引起霍亂樣腸毒素腹瀉（水瀉）。（2）腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要引起嬰兒腹瀉。（3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：可侵入結(jié)腸黏膜上皮，引起志賀樣腹瀉（粘液膿血便）。（4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：又稱產(chǎn)志賀樣毒素（VT）大腸埃希菌（SLTEC或UTEC），其中O157：H7可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征（HUS）。臨床特征為嚴(yán)重的腹痛、痙攣，反復(fù)出血性腹瀉，伴發(fā)熱、嘔吐等。嚴(yán)重者可發(fā)展為急性腎衰竭。（5）腸粘附（集聚）型大腸埃希菌（EAggEC）：也是新近報(bào)道的一種能引起腹瀉的大腸埃希菌。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：埃希菌屬的概念

埃希菌屬包括5個(gè)種，即大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。臨床最常見的是大腸埃希菌。

大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，大多數(shù)菌株是人類和動(dòng)物腸道正常菌群。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：腸桿菌科的鑒定

（1）初步鑒定：原則是：①確定腸桿菌科的細(xì)菌，應(yīng)采用葡萄糖氧化-發(fā)酵試驗(yàn)及氧化酶試驗(yàn)與弧菌科和非發(fā)酵菌加以鑒別；②腸桿菌科細(xì)菌的分群，多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)，將腸桿菌科的細(xì)菌分為苯丙氨酸脫氨酶陽性、葡萄糖酸鹽利用試驗(yàn)陽性和兩者均為陰性反應(yīng)三個(gè)類群；③選擇生化反應(yīng)進(jìn)行屬種鑒別。

將選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基上的可疑菌落分別接種克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）和尿素-靛基質(zhì)-動(dòng)力（MIU）復(fù)合培養(yǎng)基管中，并根據(jù)其六項(xiàng)反應(yīng)結(jié)果，將細(xì)菌初步定屬。

（2）最后鑒定：腸桿菌科各屬細(xì)菌的最后鑒定是根據(jù)生化反應(yīng)的結(jié)果定屬、種，或再用診斷血清做凝集反應(yīng)才能作出最后判斷。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子的類型

細(xì)胞因子分類按其作用大致可分為免疫調(diào)節(jié)因子和免疫調(diào)控因子兩大類。主要的細(xì)胞因子有：白細(xì)胞介素、干擾素、生長因子、趨化因子家族、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、轉(zhuǎn)化因子家族以及其他細(xì)胞因子等。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子共同特性

（1）化學(xué)性質(zhì)大都為糖蛋白。

（2）細(xì)胞因子可以旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。

（3）一種細(xì)胞可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，不同類型的細(xì)胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細(xì)胞因子。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：血象特點(diǎn)

血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)血象：血紅蛋白、紅細(xì)胞均減少，以血紅蛋白減少更為明顯。輕度貧血時(shí)紅細(xì)胞形態(tài)無明顯異常，中度以上貧血時(shí)紅細(xì)胞體積減小，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，嚴(yán)重時(shí)紅細(xì)胞可呈環(huán)狀，并有嗜多色性紅細(xì)胞及點(diǎn)彩紅細(xì)胞增多。網(wǎng)織紅細(xì)胞輕度增多或正常。白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類一般正常。血小板計(jì)數(shù)一般正常。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：單向擴(kuò)散試驗(yàn)

單向擴(kuò)散試驗(yàn)：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。

1、試管法：將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，在抗原抗體比例恰當(dāng)位置形成沉淀環(huán)。

2、平板法：是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴(kuò)散，24～48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測抗原的濃度。有兩種計(jì)算方法：l）Mancini曲線：適用大分子抗原的和長時(shí)間擴(kuò)散（》48h）的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.（其中c為抗原濃度 d為沉淀環(huán)直徑 k為常數(shù)）

3、單向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測時(shí)的注意點(diǎn)：

（1）抗血清必須特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)，在良好條件下保存。（2）每次測定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）每次測定時(shí)必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。

（4）注意雙環(huán)現(xiàn)象（出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分）。

（5）應(yīng)用單克隆抗體測量多態(tài)性抗原時(shí)，測定值偏低；用多克隆抗體測量單克隆病時(shí)，測定值偏高

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：雙向擴(kuò)散試驗(yàn)

雙向擴(kuò)散試驗(yàn)：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在最恰當(dāng)?shù)谋壤幮纬煽乖贵w沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可對(duì)抗原或抗體作出定性分析。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)也分為試管法和平板法。

1、試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴(kuò)散，在抗原、抗體濃度最適時(shí)形成沉淀線。

2、平板法：

是在瓊脂板上相距3～5mm打一對(duì)孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。在相應(yīng)孔中加入抗原或抗體，待其自由擴(kuò)散后，抗原、抗體形成可見的沉淀線。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：①抗原、抗體是否存在及其相對(duì)含量。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。

②抗原、抗體相對(duì)分子量的分析；抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量影響。分子量小者，擴(kuò)散快，反之較慢。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。如若兩者分子量相等，則形成直線。

③抗原性質(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況；

④抗體效價(jià)的滴定?？贵w效價(jià)是抗原、抗體經(jīng)過自由擴(kuò)散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：酸化甘油溶血試驗(yàn)

（1）原理：當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時(shí)，可阻止其中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使溶血過程緩慢。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜脂質(zhì)減少。當(dāng)紅細(xì)胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺陷時(shí)，它們?cè)趐H6.85甘油緩沖液中比正常紅細(xì)胞溶解速度快，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度降至50%的時(shí)間（AGLT50）明顯縮短。

參考值：AGLT50大于l800s（30min）

（2）臨床意義：減少見于遺傳性球形細(xì)胞增多癥（25～150s）、腎功能衰竭、慢性白血病、自身免疫性溶貧和妊娠婦女。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能

1.紅細(xì)胞膜的組成與結(jié)構(gòu)：紅細(xì)胞膜含脂類40%，蛋白質(zhì)50%，碳水化合物10%.膜的主要蛋白有主體蛋白和外周蛋白。后者包括收縮蛋白、肌動(dòng)蛋白、錨蛋白和區(qū)帶（4.1～4.5）等，即骨架系統(tǒng)，起支架作用，對(duì)維持紅細(xì)胞的形狀、穩(wěn)定性和變形性有重要作用。膜的主要脂類為磷脂和膽固醇，起屏障和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性作用。

2.紅細(xì)胞膜的功能：屏障作用和可變性；半透性；免疫性；受體特性：激素類受體、遞質(zhì)類受體、丙種球蛋白受體、病毒受體、EP0受體和鐵蛋白受體等。

3.影響紅細(xì)胞膜穩(wěn)定的因索：紅細(xì)胞能量代謝紊亂；紅細(xì)胞膜有遺傳性缺陷；酶缺陷。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血紅蛋白病的定義與分類

血紅蛋白病的定義與分類：血紅蛋白病是一組由于生成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈（α、β、γ、δ）的結(jié)構(gòu)異?；蚝铣呻逆溗俾实母淖?，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病。血紅蛋白病多為遺傳性，如：因控制遺傳的珠蛋白基因發(fā)生突變所致的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白??；因指導(dǎo)珠蛋白合成速率的遺傳基因缺陷所致的珠蛋白生成障礙性貧血或稱海洋性貧血。另外，也可見獲得性血紅蛋白病。通常是由接觸或誤服化學(xué)藥物所致。

常見的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白病是因合成的珠蛋白的氨基酸序列改變而引起血紅蛋白功能或理、化性質(zhì)異常的疾病，如：引起血紅蛋白異常聚合的HbS??；不穩(wěn)定血紅蛋白癥、高鐵血紅蛋白血癥等。常見的珠蛋白生成障礙性貧血為α或β珠蛋白生成障礙性貧血。也有多種基因異常導(dǎo)致的血紅蛋白病，如HbE、Hb Constant Spring、Hb Lepore等。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：溶血空斑形成試驗(yàn)

溶血空斑形成試驗(yàn)：經(jīng)典的溶血斑試驗(yàn)用于檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體形成細(xì)胞的功能，其原理是將綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾細(xì)胞，加入SRBC及補(bǔ)體，混合在溫?zé)岬沫傊芤褐校瑵苍谄矫髢?nèi)或玻片上，使成一蒲層，置37℃溫育。由于脾細(xì)胞內(nèi)的抗體生成細(xì)胞可釋放抗SRBC抗體，使其周圍的SRBC致敏，在補(bǔ)體參與下導(dǎo)致SRBC溶血，形成一個(gè)肉眼可見的圓形透明溶血區(qū)而成為溶血空斑（plaque）。

每一個(gè)空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞，空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少。這種直接法所測的細(xì)胞為IgM生成細(xì)胞，其他類型Ig由于溶血效應(yīng)較低，不能直接檢測，可用間接檢測法，即在小鼠脾細(xì)胞和SRBC混合時(shí)，再加抗鼠Ig抗體（如兔抗鼠Ig），使抗體生成細(xì)胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物，此時(shí)能活化補(bǔ)體導(dǎo)致溶血，稱間接空斑試驗(yàn)。但是上述直接和間接空斑形成試驗(yàn)都只能檢測抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需要事先免疫，難以檢測人類的抗體產(chǎn)生情況。如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被，則可檢查與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，這種非紅細(xì)胞抗體溶血空斑試驗(yàn)稱為空斑形成試驗(yàn)，它的應(yīng)用范圍較大。

現(xiàn)在常用的為SPA-SRBC溶血空斑試驗(yàn)。SBA能與人及多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc段呈非特異性結(jié)合，利用這一特征，首先將SPA包被SRBC，然后進(jìn)行溶血空斑測定，可提高敏感度和應(yīng)用范圍。在該測試系統(tǒng)中，加入抗人Ig抗體，可與受檢細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，復(fù)合物上的Fc段可與連接在SRBC上的SPA結(jié)合，同時(shí)激活補(bǔ)體，使SRBC溶解形成空斑。此法可用于檢測人類外周血中的IgG產(chǎn)生細(xì)胞，與抗體的特異性無關(guān)。用抗IgA、IgG或IgM抗體包被SRBC，可測定相應(yīng)免疫球蛋白的產(chǎn)生細(xì)胞，這種試驗(yàn)稱為反相空斑形成試驗(yàn)。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：淋巴細(xì)胞分離

1.純淋巴細(xì)胞群的采集：利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時(shí)，能主動(dòng)粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個(gè)核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞，從而獲得純淋巴細(xì)胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法；②吸附柱過濾法；③磁鐵吸引法。

2.淋巴細(xì)胞亞群的分離原則：根據(jù)相應(yīng)細(xì)胞的特性和不同的標(biāo)志加以選擇性純化。根據(jù)細(xì)胞的特性和標(biāo)志選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法；②尼龍毛柱分離法；③親和板結(jié)合分離法；④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：鋅的生理功能

（1）鋅可以作為多種酶的功能成分或激活劑；

（2）促進(jìn)生長發(fā)育，促進(jìn)核酸及蛋白質(zhì)的生物合成；（3）增強(qiáng)免疫及吞噬細(xì)胞的功能；（4）有抗氧化、抗衰老、抗癌的作用。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：鋅的吸收排泄

鋅在小腸上皮細(xì)胞內(nèi)吸收，運(yùn)送至肝和全身。從糞便、尿、汗、頭發(fā)、及乳汁排泄?？梢詼y定血鋅或發(fā)鋅判斷體內(nèi)含鋅情況。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：鋅的含量分布

鋅是體內(nèi)含量僅次于鐵的微量元素。鋅在在正常成人體內(nèi)含量為2～2.5g，男性略高于女性，視網(wǎng)膜、前列腺、胰腺濃度最高；肌肉內(nèi)儲(chǔ)鋅占全身鋅的62%，骨占28%。血鋅：80%存在于紅細(xì)胞，約18%的鋅分布于血漿。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師臨檢基礎(chǔ)知識(shí)講解：輸血傳播性疾病的概述

常見的有：乙型、丙型肝炎，艾滋病，巨細(xì)胞病毒感染，梅毒，瘧疾，弓形體病等。獻(xiàn)血者有EB病毒感染，黑熱病、絲蟲病、回歸熱感染時(shí)，均有可能通過輸血傳播。此外，如血液被細(xì)菌污染，可使受血者由此引起菌血癥，嚴(yán)重者可致敗血癥。在由輸血引起的疾病中，以肝炎和艾滋病危害性最大。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師臨檢基礎(chǔ)知識(shí)講解：常見輸血的不良反應(yīng)

1.免疫性

溶血反應(yīng)、非溶血性發(fā)熱反應(yīng)、過敏反應(yīng)、蕁麻疹、非心源性肺水腫、移植物抗宿主病、輸血后紫癜、對(duì)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板或血漿蛋白的同種（異體）免疫等。

2.非免疫性

高熱（有休克）、充血性心力衰竭、理化性溶血、空氣栓塞、出血傾向、枸櫞酸鈉中毒、鉀中毒、血液酸化、高血氨、含鐵血黃素沉著癥、血栓性靜脈炎、疾病傳播（乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、瘧疾，巨細(xì)胞病毒感染等）。

2012醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：淋病奈瑟菌的臨床意義

臨床意義：淋病奈瑟菌是常見的性傳播疾病淋病的病原菌，主要通過性接觸直接侵襲感染泌尿生殖道，口咽部及肛門直腸的黏膜。如單純性淋病、盆腔炎、淋菌型結(jié)膜炎。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：淋病奈瑟菌的生物學(xué)特性

（1）形態(tài)與染色：本菌的形態(tài)與腦膜炎奈瑟菌很相似。在膿汁標(biāo)本中，此菌通常位于中性粒細(xì)胞內(nèi)，而在慢性淋病時(shí)常位于細(xì)胞外。從患者體內(nèi)新分離的菌株可有莢膜和菌毛，經(jīng)人工培養(yǎng)后，呈卵圓形或球形，排列不規(guī)則。無芽胞和鞭毛。

（2）培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求較高，須在含有血液、血清或多種氨基酸和無機(jī)鹽類物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長良好。國內(nèi)常用血液瓊脂、巧克力瓊脂、EPV瓊脂等培養(yǎng)基。初次分離時(shí)，須置5%～10à2條件下才能生長。

（3）生化反應(yīng)：可發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)酸，但不酵解麥芽糖（常借此與腦膜炎奈瑟菌相鑒別）。氧化酶和觸酶試驗(yàn)均陽性。主要有三種抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。對(duì)外界抵抗力極低。

2012年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：淋巴細(xì)胞保存與活力的測定

1.淋巴細(xì)胞的保存技術(shù)

（1）短期保存技術(shù)：將分離的細(xì)胞用適量含10%～20%滅活小牛血清的Hanks、Tc-199、RPMIl640或其他培養(yǎng)液稀釋重懸。短期保存可置于4℃保存。

（2）長期保存技術(shù)：液氮深低溫（-196℃）環(huán)境保存細(xì)胞，加入二甲亞砜作為保護(hù)劑。

2.活力測定：最簡便常用的為臺(tái)盼藍(lán)染色法。臺(tái)盼藍(lán)又稱錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色，但死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色，通過死亡細(xì)胞與活細(xì)胞的百分比可反映細(xì)胞活力。

2012年臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：治療藥物監(jiān)測

治療藥物監(jiān)測（TDM）是指應(yīng)用一定的分析技術(shù)測定體液中藥物的濃度，以藥代動(dòng)力學(xué)理論為基礎(chǔ)和電子計(jì)算機(jī)為計(jì)算工具，研究藥物在體內(nèi)的過程，使臨床給藥個(gè)體化，科學(xué)化、合理化。

無論是藥物的治療作用還是不良反應(yīng)，從本質(zhì)上說都是通過藥物和靶位受體間的相互作用而產(chǎn)生的。當(dāng)藥物在體內(nèi)達(dá)到分布平衡后，雖然血液和靶位的藥物濃度往往并不相等，但血藥濃度與藥物效應(yīng)間存在相關(guān)性。故檢測相對(duì)易采集的血藥濃度，替代心、腦、腎等難以取樣的靶位藥物濃度的可行性基礎(chǔ)

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：水與鈉的代謝紊亂

水與鈉的代謝紊亂：等滲性缺水，低滲性缺水，高滲性缺水，水過多。

一、等滲性缺水

又稱急性缺水或混合性缺水，是外科病人最易發(fā)生的。水和鈉成比例的喪失，血清鈉仍在正常的沲圍，細(xì)胞外液滲透壓也保持正常。

（—）病因：常見的有：①消化液的急性喪失如大量嘔吐和腸瘺等；②體液喪失在感染區(qū)或軟組織內(nèi)如腹腔內(nèi)或腹膜后感染、腸梗阻和燒傷等。

（二）臨床表現(xiàn)：少尿、畏食、惡心、乏力、舌干燥、眼窩下陷、皮膚干燥、松弛，但不口渴。當(dāng)喪失體液達(dá)體重的5%（相當(dāng)于喪失細(xì)胞外液20%）時(shí)，出現(xiàn)血容量不足癥狀；當(dāng)喪失體液達(dá)體重的6%～7%時(shí)，可出現(xiàn)嚴(yán)重休克，當(dāng)體液的喪失主要是胃液時(shí)，可伴發(fā)代謝性堿中毒征象。

（三）診斷：主要依據(jù)病史和臨床表現(xiàn)進(jìn)行診斷。實(shí)驗(yàn)室檢查有血液濃縮表現(xiàn)，尿比重增高，但血Na+和Cl-濃度仍在正常范圍內(nèi)。

（四）治療 在積極治療原發(fā)病的同時(shí)，應(yīng)給予等滲鹽水，并注意補(bǔ)充血容量（包括晶體和膠體）糾正體克?？筛鶕?jù)臨床表現(xiàn)估計(jì)補(bǔ)液量，也可根據(jù)血細(xì)胞比容（hct，正常值：男0.48，女0.42）來計(jì)箅。

補(bǔ)液量（l）=hct上升值/hct正常值×體重（kg）×0.2

二、低滲性缺水

（一）病因：①胃腸道消化液持續(xù)喪失，②大創(chuàng)面慢性滲液；③腎排鈉過多。

（二）臨床表現(xiàn)：常見癥狀若頭暈、視光模糊、軟弱無力、脈納速，甚至神志不清，肌痙攣性疼痛、腱反射減弱、昏迷等。

1、輕度缺鈉：乏力、頭暈、手足麻木、口渴不明顯。

2、中度缺鈉：除上述癥狀外，尚有惡心、嘔吐、脈細(xì)速、血壓不穩(wěn)或下降、淺靜脈萎陷。

3、重度缺鈉：病人神志不清、肌痙攣性抽搐、腱反射減弱或消失，出現(xiàn)木僵，甚至昏迷。常發(fā)生休克。

（三）診斷：①依據(jù)病史及表現(xiàn)；②尿Na+和Cl-下明顯減少；③血清鈉低于135mmol/L；④紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容、血非蛋白氮和尿素氮均有增高；⑤尿比重常在1.010以下。

（四）治療：①積極處理病因；②采用含鹽溶液或高滲鹽水靜脈輸注。

三、高滲性缺水

（-）病因：①攝人水不足，如食管癌吞咽困難，病危病人給水不足等；②水分喪失過多，如高熱大汗、燒傷暴露療法、糖尿病昏迷等。

（二）臨床表現(xiàn)

1、輕度缺水 除口渴外，無其他癥狀，缺水量為體重的2%～4%.2、中度缺水 極度口渴、乏力、尿少、尿比重高；唇干舌燥、皮膚彈性差、眼窩下陷，常出現(xiàn)煩躁。缺水量為體重的4%～6%.3、重度缺水 除上述癥狀外，出現(xiàn)躁狂、幻覺、譫妄、甚至昏迷。缺水量超過體重的6%.（三）診斷：①依據(jù)病史及表現(xiàn)；②尿比重增高；③血清鈉在150mmol/l以上；④紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容輕度增高。

（四）治療：①盡早去除病因；②補(bǔ)充水分，不能經(jīng)口補(bǔ)充者，可以經(jīng)靜脈滴注5%葡萄糖溶液或0.45%氯化鈉溶液；③因血液濃縮，體內(nèi)總鈉量仍有減少，故補(bǔ)水的同時(shí)應(yīng)適當(dāng)?shù)难a(bǔ)充鈉鹽；④尿量達(dá)40ml/h后應(yīng)補(bǔ)充鉀鹽；⑤經(jīng)補(bǔ)液后酸中毒仍未能完全糾正者，應(yīng)給碳酸氫鈉。

四、水過多（—）臨床表現(xiàn)

1、急性水中毒：腦細(xì)胞腫脹或腦組織水腫致以顱內(nèi)壓增高，引起各種神經(jīng)精神癥狀：頭暈、失語、精神錯(cuò)亂、定向力失常、嗜睡、躁動(dòng)、驚厥、譫妄、甚至昏迷。有時(shí)可發(fā)生腦疝。

2、慢性水中毒：軟弱乏力、惡心、嘔吐、嗜睡等，但往往被原有疾病所掩蓋。病人體重明顯增加，皮膚蒼白而濕潤。有時(shí)唾液及淚液增多，一般無凹陷性水腫。

（二）診斷：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容和血漿蛋白量均降低；血漿滲透壓降低。

（三）治療：預(yù)防重于治療。對(duì)容易發(fā)生抗利尿激素增多的疼痛、失血、休克、創(chuàng)傷和大手術(shù)者以及急性腎功能不全和慢性心功能不全的病人，應(yīng)嚴(yán)格限制人水量。對(duì)水中毒病人，應(yīng)立即停止水分的攝人；程度嚴(yán)重者，除禁水外，用利尿劑，一般用滲透性利尿劑（甘露醇或山梨醇）靜脈快速滴注，也可靜脈注射袢利尿劑（速尿和利尿酸），尚可靜脈滴注5%氯化鈉溶液。

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：鐵染色與代謝的檢查特點(diǎn)

鐵染色顯示細(xì)胞外鐵增多，鐵粒幼細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加、鐵顆粒增多變粗；如幼紅細(xì)胞鐵顆粒在6個(gè)以上（正常少于4個(gè)），圍繞并靠近核排列成環(huán)狀或半環(huán)稱此為環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞，占幼紅細(xì)胞15%以上，為本病特征和重要診斷依據(jù)。

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：T細(xì)胞表面標(biāo)志檢測

1.特異性抗原檢測：用單克隆抗體檢測T細(xì)胞表面抗原的方法有兩大類：一類是用標(biāo)記抗體染色，如免疫熒光法、酶免疫法、ABC法及免疫金銀染色法；另一類用抗體致敏的紅細(xì)胞作花環(huán)試驗(yàn)。

2.特異性受體的檢測原理：T細(xì)胞表面有特異性綿羊紅細(xì)胞（E）受體，當(dāng)人的T細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞懸液按一定比例混合后，置4℃至少2小時(shí)或過夜，T細(xì)胞表面的E受體可與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花樣的花環(huán)，稱為活性E（Ea）花環(huán)。檢測Ea花環(huán)形成細(xì)胞可反映受檢者的細(xì)胞免疫水平。

3.T細(xì)胞亞群檢測：見第二十二章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)。

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：B細(xì)胞表面標(biāo)志檢測

B細(xì)胞具有多種特異性抗原和受體，據(jù)此建立了相應(yīng)的檢測方法，一般用以研究B細(xì)胞各分化發(fā)育階段的特性，也可藉以鑒定和計(jì)數(shù)各階段B細(xì)胞在人外周血和淋巴樣組織的分布以及疾病時(shí)的變化動(dòng)態(tài)，為臨床提供診治相關(guān)疾病的有用信息。

1.B細(xì)胞表面抗原的檢測：B細(xì)胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B細(xì)胞所共有，而有些僅活化B細(xì)胞所特有，據(jù)此可用相應(yīng)的CD系列單克隆抗體，通過間接熒光免疫法、酶免疫組化或ABC法加以檢測。

2.SmIg的檢測：大多采用間接熒光免疫法或包括ABC法在內(nèi)的酶免疫組化法，關(guān)鍵是選用高效價(jià)、高特異性和高親和力的熒光或酶標(biāo)記的多價(jià)抗人Ig抗體，也可分別用各種類型的Ig，即IgM、IgG、IgA、IgE等抗血清，檢測帶有各種類型Ig的B細(xì)胞，在人外周血中以帶有SmIgM的細(xì)胞數(shù)為最多。B細(xì)胞經(jīng)熒光標(biāo)記的抗Ig抗體染色，細(xì)胞膜表面呈現(xiàn)的熒光著色可有不同的形式，開始均勻分布呈環(huán)狀，其后集中在某些部位呈斑點(diǎn)狀，然后又可集在一個(gè)部位呈帽狀，最后可被吞飲入胞漿直至熒光消失。這一現(xiàn)象是由于淋巴細(xì)胞膜由雙層類脂組成，上嵌有蛋白分子，在體溫條件下，膜呈半液體狀，而鑲嵌物能在其中移動(dòng)。當(dāng)SmIg抗體發(fā)生結(jié)合時(shí)，由于抗血清為雙價(jià)，使SmIg出現(xiàn)交聯(lián)現(xiàn)象，這種抗原與抗體結(jié)合物可連成斑點(diǎn)和帽狀，時(shí)間過長，帽狀結(jié)合物可脫落或被吞飲而消失，因此染色后，觀察時(shí)間不能超過30min，或在染色時(shí)加疊氮鈉防止帽狀物形成或被吞飲。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：水與鈉的代謝紊亂

一、等滲性缺水

又稱急性缺水或混合性缺水，是外科病人最易發(fā)生的。水和鈉成比例的喪失，血清鈉仍在正常的沲圍，細(xì)胞外液滲透壓也保持正常。

（—）病因：常見的有：①消化液的急性喪失如大量嘔吐和腸瘺等；②體液喪失在感染區(qū)或軟組織內(nèi)如腹腔內(nèi)或腹膜后感染、腸梗阻和燒傷等。

（二）臨床表現(xiàn)：少尿、畏食、惡心、乏力、舌干燥、眼窩下陷、皮膚干燥、松弛，但不口渴。當(dāng)喪失體液達(dá)體重的5%（相當(dāng)于喪失細(xì)胞外液20%）時(shí)，出現(xiàn)血容量不足癥狀；當(dāng)喪失體液達(dá)體重的6%～7%時(shí)，可出現(xiàn)嚴(yán)重休克，當(dāng)體液的喪失主要是胃液時(shí)，可伴發(fā)代謝性堿中毒征象。

（三）診斷：主要依據(jù)病史和臨床表現(xiàn)進(jìn)行診斷。實(shí)驗(yàn)室檢查有血液濃縮表現(xiàn)，尿比重增高，但血Na+和Cl-濃度仍在正常范圍內(nèi)。

（四）治療 在積極治療原發(fā)病的同時(shí)，應(yīng)給予等滲鹽水，并注意補(bǔ)充血容量（包括晶體和膠體）糾正體克?？筛鶕?jù)臨床表現(xiàn)估計(jì)補(bǔ)液量，也可根據(jù)血細(xì)胞比容（hct，正常值：男0.48，女0.42）來計(jì)箅。

補(bǔ)液量（l）=hct上升值/hct正常值×體重（kg）×0.2

二、低滲性缺水

（一）病因：①胃腸道消化液持續(xù)喪失，②大創(chuàng)面慢性滲液；③腎排鈉過多。

（二）臨床表現(xiàn)：常見癥狀若頭暈、視光模糊、軟弱無力、脈納速，甚至神志不清，肌痙攣性疼痛、腱反射減弱、昏迷等。

1、輕度缺鈉：乏力、頭暈、手足麻木、口渴不明顯。

2、中度缺鈉：除上述癥狀外，尚有惡心、嘔吐、脈細(xì)速、血壓不穩(wěn)或下降、淺靜脈萎陷。

3、重度缺鈉：病人神志不清、肌痙攣性抽搐、腱反射減弱或消失，出現(xiàn)木僵，甚至昏迷。常發(fā)生休克。

（三）診斷：①依據(jù)病史及表現(xiàn)；②尿Na+和Cl-下明顯減少；③血清鈉低于135mmol/L；④紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容、血非蛋白氮和尿素氮均有增高；⑤尿比重常在1.010以下。

（四）治療：①積極處理病因；②采用含鹽溶液或高滲鹽水靜脈輸注。

三、高滲性缺水

（-）病因：①攝人水不足，如食管癌吞咽困難，病危病人給水不足等；②水分喪失過多，如高熱大汗、燒傷暴露療法、糖尿病昏迷等。

（二）臨床表現(xiàn)

1、輕度缺水 除口渴外，無其他癥狀，缺水量為體重的2%～4%.2、中度缺水 極度口渴、乏力、尿少、尿比重高；唇干舌燥、皮膚彈性差、眼窩下陷，常出現(xiàn)煩躁。缺水量為體重的4%～6%.3、重度缺水 除上述癥狀外，出現(xiàn)躁狂、幻覺、譫妄、甚至昏迷。缺水量超過體重的6%.（三）診斷：①依據(jù)病史及表現(xiàn)；②尿比重增高；③血清鈉在150mmol/l以上；④紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容輕度增高。

（四）治療：①盡早去除病因；②補(bǔ)充水分，不能經(jīng)口補(bǔ)充者，可以經(jīng)靜脈滴注5%葡萄糖溶液或0.45%氯化鈉溶液；③因血液濃縮，體內(nèi)總鈉量仍有減少，故補(bǔ)水的同時(shí)應(yīng)適當(dāng)?shù)难a(bǔ)充鈉鹽；④尿量達(dá)40ml/h后應(yīng)補(bǔ)充鉀鹽；⑤經(jīng)補(bǔ)液后酸中毒仍未能完全糾正者，應(yīng)給碳酸氫鈉。

四、水過多（—）臨床表現(xiàn)

1、急性水中毒：腦細(xì)胞腫脹或腦組織水腫致以顱內(nèi)壓增高，引起各種神經(jīng)精神癥狀：頭暈、失語、精神錯(cuò)亂、定向力失常、嗜睡、躁動(dòng)、驚厥、譫妄、甚至昏迷。有時(shí)可發(fā)生腦疝。

2、慢性水中毒：軟弱乏力、惡心、嘔吐、嗜睡等，但往往被原有疾病所掩蓋。病人體重明顯增加，皮膚蒼白而濕潤。有時(shí)唾液及淚液增多，一般無凹陷性水腫。

（二）診斷：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容和血漿蛋白量均降低；血漿滲透壓降低。

（三）治療：預(yù)防重于治療。對(duì)容易發(fā)生抗利尿激素增多的疼痛、失血、休克、創(chuàng)傷和大手術(shù)者以及急性腎功能不全和慢性心功能不全的病人，應(yīng)嚴(yán)格限制人水量。對(duì)水中毒病人，應(yīng)立即停止水分的攝人；程度嚴(yán)重者，除禁水外，用利尿劑，一般用滲透性利尿劑（甘露醇或山梨醇）靜脈快速滴注，也可靜脈注射袢利尿劑（速尿和利尿酸），尚可靜脈滴注5%氯化鈉溶液。

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：再生障礙性貧血診斷

（1）概念：是由多種原因致造血干細(xì)胞減少或功能異常，從而引起紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板減少的一種獲得性疾病。表現(xiàn)為貧血、感染和出血。與造血干細(xì)胞受損、造血微環(huán)境損傷及免疫介導(dǎo)有關(guān)。

（2）血象與骨髓象特點(diǎn)：呈正細(xì)胞正色素性貧血，可有小細(xì)胞增多。網(wǎng)織紅細(xì)胞極低，血小板計(jì)數(shù)早期減少。骨髓各穿刺部位大多增生不良，白細(xì)胞常低于2×109/L，粒細(xì)胞顯著減少，多為淋巴細(xì)胞，骨髓巨核細(xì)胞減少。骨髓活檢對(duì)再障的診斷具有十分重要價(jià)值。

（3）再生障礙性貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)：①全血細(xì)胞減少，網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值減少；②一般無肝、脾腫大；③骨髓至少1個(gè)部位增生減低或重度減低，骨髓小粒非造血細(xì)胞增多；④能引起全血細(xì)胞減少的其他疾病，如陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、骨髓增生異常綜合征中的難治性貧血等；⑤一般抗貧血藥物治療無效??

2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：膽堿酯酶肝病的檢測意義

人體組織中有兩種膽堿酯酶，一種是分布在紅細(xì)胞和神經(jīng)組織中的乙酰膽堿酯酶（又稱真性膽堿酯酶）；另一種是廣泛分布于血漿及許多非神經(jīng)組織中的假性膽堿酯酶（非特異性膽堿酯酶），我們一般稱假性膽堿酯酶（CHE）。CHE是一種生物酶，具有降解膽堿酯并在自主神經(jīng)系統(tǒng)和肌肉運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)中起神經(jīng)傳遞的功能，它存在于血清、肝、大腦、腎、腸及胰中，對(duì)其檢測常被用于有機(jī)磷中毒患者的輔助診斷。由于CHE是由肝臟生成后分泌入血的，所以它還能反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害的程度。因此，膽堿酯酶是一項(xiàng)具有重要臨床意義的的肝功能檢測指標(biāo)。

1、急性肝炎 此組患者的ALT均》200U/L，血清CHE降低者有17例，占的比例是65%，比有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的比例高，我們可以將CHE的測定作為一項(xiàng)急性肝炎有價(jià)值的輔助酶學(xué)指標(biāo)。

2、肝硬化 此組患者肝臟的功能性細(xì)胞減少，使蛋白質(zhì)合成降低，故其CHE均降低。值得注意的是部分肝硬化病例的ALT等一般肝功能指征不高或無明顯異常，而CHE明顯降低，提示CHE對(duì)肝硬化的診斷和病情觀察是一項(xiàng)有特色的指征之一。

3、肝癌 本組患者的CHE明顯降低，其下降幅度與肝細(xì)胞損害程度呈正相關(guān)，而ALT的升高與肝組織病理無固定關(guān)系。

4、大三陽與小三陽 臨床上大、小三陽患者區(qū)別在于病毒的復(fù)制不同。大三陽患者血清中能同時(shí)檢測出HBsAg、HBeAg、抗HBC，提示急慢性的HBV感染，而且有病毒復(fù)制；小三陽患者血清中能檢測出HBsAg、抗HBe、抗HBC，提示HBV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制極低或停止。CHE在大三陽組的32例中有4例降低，約占13%，在小三陽組的38例中只有2例降低，因此，我們認(rèn)為臨床上區(qū)別大、小三陽患者，不能預(yù)示其肝臟功能改變的程度。

CHE在肝臟受損時(shí)活力下降，是肝臟病變后唯一下降的酶，特別是蛋白質(zhì)合成受損時(shí)的肝病，其降低幅度與血清白蛋白大致平行。因此，CHE在肝病的診斷及治療中是一項(xiàng)很有價(jià)值的檢測指標(biāo)。

2011年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)輔導(dǎo)之血象與骨髓象特點(diǎn)

血象與骨髓象特點(diǎn)是檢驗(yàn)技師要求掌握的內(nèi)容，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家參考。①血象：為正細(xì)胞低色素性貧血，血片上細(xì)胞呈兩種紅細(xì)胞并存的“雙形性”，這是本病的特征之一。點(diǎn)彩紅細(xì)胞可增多。獲得性原發(fā)性者可出現(xiàn)中性粒細(xì)胞顆粒減少、Pelger樣核異常和少量幼稚粒細(xì)胞。

②骨髓象：紅細(xì)胞系明顯增生，以中幼紅細(xì)胞為主，有的細(xì)胞呈巨幼樣改變、雙核或核固縮，胞漿常缺少血紅蛋白或有空泡。

收集細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本首先應(yīng)注意無菌的原則，其次還應(yīng)注意：

（1）細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在抗生素治療前收集，并及時(shí)送檢。

（2）血培養(yǎng)成人抽血5～10ml，兒童3～5ml，注入規(guī)定培養(yǎng)瓶。

（3）尿標(biāo)本收集前應(yīng)清潔外陰部，留中段尿2～3ml于無菌小瓶中。

（4）胸腹水、膿、分泌物應(yīng)收集于無菌小瓶或無菌試管內(nèi)。

（5）厭氧培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)避免與氧接觸，并及時(shí)送檢。

1.血象：血液呈暗紫色，紅細(xì)胞數(shù)增多（[7.0～10.0）×1012/L]，血紅蛋白增高（180g～240g/L），紅細(xì)胞比容增高（0.54～0.80），網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率不增多。紅細(xì)胞形態(tài)正常，可輕度大小不均，嗜多色和嗜堿點(diǎn)彩紅細(xì)胞增多，偶見有核紅細(xì)胞。白細(xì)胞數(shù)增高（12～15）×109/L，少數(shù)患者可達(dá)50×109/L.分類以中性粒細(xì)胞為主，核左移，嗜酸及嗜堿性粒細(xì)胞稍多，血片可見中幼粒及晚幼粒細(xì)胞。血小板增高，可達(dá)（400～500）×109/L.中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶增高。

2.骨髓象：偶有“干抽”現(xiàn)象，髓液為深紅色，有核細(xì)胞增生明顯活躍，三系均增生，以紅系增生為顯著。巨核細(xì)胞增多，可成堆出現(xiàn)。各系各階段比值及形態(tài)大致正常。骨髓鐵減少或消失。

全血容量增加（為正常的150%～300%），紅細(xì)胞容量增加（>32ml/kg），血液比重增加（1.075～1.080），全血粘度增加（比正常高5～6倍）。血清維生素B12增高（>900μg/ml），血沉減慢，動(dòng)脈血氧飽和度正常，血清鐵正?；驕p低，未飽和鐵結(jié)合力正常或增高。