第一篇：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則
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體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則 ——酶聯(lián)免疫診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則
（征求意見(jiàn)稿）
酶聯(lián)免疫診斷試劑是指在酶標(biāo)板上包被相關(guān)的抗原（或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測(cè)樣品中的相關(guān)抗體（或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過(guò)酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來(lái)判斷樣本中相應(yīng)的抗體或抗原的存在。
為了規(guī)范酶聯(lián)免疫診斷試劑的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，制定本技術(shù)指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則適用于應(yīng)用酶聯(lián)免疫法的第三類(lèi)診斷試劑（病原微生物）的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，其他類(lèi)酶聯(lián)免疫診斷試劑參考本指導(dǎo)原則。國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。
一、基本原則
（一）酶聯(lián)免疫診斷試劑生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。
（二）酶聯(lián)免疫診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。
（三）酶聯(lián)免疫診斷試劑在研制時(shí)，應(yīng)當(dāng)遵循科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。
（四）酶聯(lián)免疫診斷試劑生產(chǎn)過(guò)程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
（五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測(cè)有效。
二、原材料質(zhì)量控制
（一）主要生物原料
與診斷試劑的質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種生物活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)、激素類(lèi)等生物原科。這類(lèi)原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。一般應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，必須進(jìn)行原料驗(yàn)證，并進(jìn)行補(bǔ)充申報(bào)。
主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：
1、外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀；或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。
2、純度和分子量
主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般情況下，每個(gè)電泳道加樣量為5μg，同時(shí)用已知分子量標(biāo)準(zhǔn)作參照，采用合適的電泳電流和電泳時(shí)間；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量。作為診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后，純度一般都要大于90％；用考馬斯亮藍(lán)染色后，純度一般都要大于95％。
3、蛋白濃度
蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè)；
4、效價(jià)
效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。
5、功能性實(shí)驗(yàn)
功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。
（二）生物輔料
生物輔料指的是在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類(lèi)生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料均應(yīng)按照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn)，達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方應(yīng)用于生產(chǎn)。
生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。
對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制10％濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。
對(duì)于標(biāo)記用酶，應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(chēng)（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢定方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。
（三）化學(xué)原材料
參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)。主要的檢測(cè)指標(biāo)包括：溶液外觀、一般鹽類(lèi)檢測(cè)、溶液pH值檢測(cè)、溶解情況檢測(cè)、干燥失重的檢測(cè)、熾灼殘?jiān)取?/p>
主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購(gòu)入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
（四）其他物料
1、酶標(biāo)板（1）外觀
明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量。如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。
（2）吸附能力和精密性
用一定濃度的正常人IgG包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過(guò)顯色反應(yīng)，雙波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（主波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm）讀數(shù)。計(jì)算CV值，批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。
2、液體試劑裝量瓶
包括陰陽(yáng)性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。
3、其他材料
包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說(shuō)明書(shū)、干燥劑和包裝外盒等，均應(yīng)符合相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如數(shù)量、規(guī)格等。
（五）企業(yè)質(zhì)控品 企業(yè)質(zhì)控品包括陰陽(yáng)性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、靈敏度、精密性（均一性）等質(zhì)控樣品，對(duì)于定量檢測(cè)試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能低于國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)已經(jīng)批復(fù)的第一家試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測(cè)樣品的基質(zhì)基本一致，如待測(cè)樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。
三、試劑盒各組分的生產(chǎn)
酶聯(lián)免疫診斷試劑盒主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過(guò)程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過(guò)產(chǎn)品的半成品檢定和成品檢定兩個(gè)質(zhì)控過(guò)程來(lái)完成。
（一）各種工作液的配制
酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過(guò)程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽(yáng)性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對(duì)定量檢測(cè)試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性陽(yáng)性對(duì)照或其他液體組分涉及生物安全性問(wèn)題，制備時(shí)應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實(shí)驗(yàn)室完成。
各種工作液在配制過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗(yàn)并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或者分裝。對(duì)于定量檢測(cè)試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)該在量值上具有溯源性。
應(yīng)對(duì)配制過(guò)程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的功能性實(shí)驗(yàn)及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值及電導(dǎo)率的測(cè)定等；酶作用的底物應(yīng)測(cè)定在無(wú)相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對(duì)其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測(cè)定。
（二）包被酶標(biāo)反應(yīng)板
包被前應(yīng)對(duì)酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號(hào)、數(shù)目、標(biāo)識(shí)。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗(yàn)合格后方能用于包被。不同批號(hào)的板條不能混用。
選擇經(jīng)檢定合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)置干燥劑），抽真空后，保存于2?8℃。
應(yīng)對(duì)包被過(guò)程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗(yàn)、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH）、包被過(guò)程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、濕度、時(shí)間等）、包被均一性檢驗(yàn)、干燥過(guò)程的監(jiān)控等。
（三）分裝和包裝 樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行無(wú)菌處理后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于<5%。
分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的SOP的要求進(jìn)行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號(hào)等，核對(duì)各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。
四、質(zhì)量控制
（一）半成品質(zhì)量控制
1、半成品抽樣
檢驗(yàn)人員按試劑的批號(hào)，根據(jù)抽樣申請(qǐng)單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號(hào)標(biāo)記、待檢。
2、半成品檢驗(yàn)
利用上一批檢定合格的試劑盒的相應(yīng)組分，對(duì)本批生產(chǎn)出的各種試劑盒組分分別進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
半成品檢驗(yàn)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的質(zhì)控品。若某類(lèi)試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，但該企業(yè)參考品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能低于國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)已經(jīng)批復(fù)的第一家試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
檢測(cè)所抽樣的半成品的試劑盒性能，包括陰陽(yáng)性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，對(duì)精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對(duì)定量檢測(cè)試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和校準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
企業(yè)應(yīng)該具有對(duì)每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。
（二）成品質(zhì)量控制
產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請(qǐng)單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫(xiě)抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢定用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時(shí)應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。
每一批酶聯(lián)免疫診斷試劑報(bào)批批量最低要求：達(dá)到1萬(wàn)人份/批。
1、檢驗(yàn)（1）成品檢驗(yàn)
一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）對(duì)成品進(jìn)行檢驗(yàn)，并達(dá)到質(zhì)控品的質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能低于國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)已經(jīng)批復(fù)的第一家試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)
在批放行前，每一批酶聯(lián)免疫診斷試劑需具備穩(wěn)定性研究資料。
第二篇：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則--生物芯片
附件6: 體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則 ——生物芯片類(lèi)試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則
前 言
本指導(dǎo)原則所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個(gè)生物探針(包括DNA片段,寡核苷酸,抗原,抗體,組織,細(xì)胞等)按預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式固定在特制的基質(zhì)(包括玻璃片,尼龍膜,硝酸纖維素膜等)上,用特定的方法提取生物靶分子并進(jìn)行標(biāo)記,然后與固定在基質(zhì)上的生物探針特異性的結(jié)合,再用相應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備(如激光掃描儀,CCD檢測(cè)儀等)和分析方法(包括軟件)進(jìn)行檢測(cè),記錄,分析,實(shí)現(xiàn)對(duì)生物靶分子的定性或定量檢測(cè)的試劑.根據(jù)芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分為核酸芯片,蛋白芯片,細(xì)胞芯片,組織芯片,芯片實(shí)驗(yàn)室等.本指導(dǎo)原則是針對(duì)核酸和蛋白為檢測(cè)靶分子生物芯片的生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則,其它類(lèi)型靶分子檢測(cè)的芯片診斷試劑可參考本指導(dǎo)原則.由于生物芯片技術(shù)還在不斷發(fā)展,國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)可依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要,適時(shí)組織對(duì)本指導(dǎo)原則進(jìn)行修訂.一,基本原則
(一)生物芯片診斷試劑生產(chǎn)用的物料包括:原料,輔料和包裝材料.各種物料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo),并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求.(二)生物芯片診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員,相適應(yīng)的儀器設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境,獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》;應(yīng)當(dāng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則(試行)》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系,形成文件和記錄,加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行;應(yīng)當(dāng)通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(試行)》的考核.(三)生物芯片診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué),規(guī)范的原則組織研發(fā),各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理.(四)生物芯片診斷試劑生產(chǎn)過(guò)程中所用的物料及工藝,應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜.二,物料質(zhì)量控制(一)核酸檢測(cè)芯片
核酸芯片檢測(cè)時(shí),從生物樣本中提取的核酸可用熒光標(biāo)記,金標(biāo)記和酶標(biāo)記.檢測(cè)方法包括光譜學(xué)方法和化學(xué)顯色.下面為熒光標(biāo)記芯片技術(shù)指導(dǎo)原則,采用金標(biāo)記和酶聯(lián)顯色等的生物芯片診斷試劑可參照核酸芯片和蛋白芯片相關(guān)部分.1,主要生物原料
核酸檢測(cè)芯片的主要生物原料包括模板DNA,dNTPs,引物,探針,標(biāo)記物等.應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn),以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).主要生物原料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定,不得隨意變更供應(yīng)商.(1)模板DNA 重組DNA:經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證,關(guān)鍵位置沒(méi)有錯(cuò)誤.1×TE溶解,濃度為1μg/μl以上,-20℃保存.(2)dNTPs(dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP)HPLC純,PCR級(jí),無(wú)DNase,RNase污染.-20℃以下保存.外購(gòu)者,由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證證明,達(dá)到生產(chǎn)要求.(3)引物
序列確證;進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,克隆測(cè)序鑒定驗(yàn)證,建立引物標(biāo)準(zhǔn)品.生產(chǎn)中的引物原材料為凍干粉,PAGE純或HPLC純,外購(gòu)者,供應(yīng)商應(yīng)提供該產(chǎn)品的質(zhì)檢證明,如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜;自己合成的引物,需有PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜.用標(biāo)準(zhǔn)DNA模板擴(kuò)增,電泳檢測(cè),譜帶單一,大小正確,與對(duì)照引物比較,產(chǎn)物量一致.符合視為合格引物.-20℃以下保存.(4)探針(用于陣列制備)重組DNA, 凍干粉(或1×TE溶解液):每種90μg以上,酶切鑒定分析圖譜.PCR產(chǎn)物,凍干粉(或1×TE溶解液):每種90μg以上,PCR電泳鑒定圖譜.合成寡核苷酸:PAGE純或HPLC純,每種90μg以上,提供該產(chǎn)品的PAGE電泳分析圖譜或HPLC分析圖譜.外購(gòu)者,供應(yīng)商應(yīng)提供質(zhì)量保證證明,達(dá)到生產(chǎn)要求.探針序列的正確性:應(yīng)用克隆鑒定的標(biāo)準(zhǔn)DNA雜交鑒定或進(jìn)行測(cè)序鑒定.外購(gòu)者,供應(yīng)商應(yīng)提供質(zhì)量保證證明,達(dá)到生產(chǎn)要求.純度和濃度檢測(cè):用電泳方法,電泳圖譜沒(méi)有雜帶,目標(biāo)條帶的強(qiáng)度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶進(jìn)行參比計(jì)算其強(qiáng)度.純度較高的DNA,可用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量.檢定合格后入庫(kù).避光,-20℃以下保存.(5)標(biāo)記物
含有激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)介于280680nm的所有熒光分子,HPLC純,供應(yīng)商應(yīng)提供質(zhì)量保證證明.(6)Taq DNA聚合酶
SDS-PAGE 檢測(cè),純度>95%,具DNA聚合酶活性,無(wú)核酸外切酶活性及核酸內(nèi)切酶活性,具熱穩(wěn)定性,94℃1小時(shí)后仍保持50%活性,由供應(yīng)商提供質(zhì)量保證.-20℃保存.(7)UNG(尿嘧啶糖基化酶)具尿嘧啶糖基化酶活性,無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性.1U UNG 37℃處理3分鐘后,103拷貝以下含U模板被降解后,不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物,供應(yīng)商提供質(zhì)量保證.-20℃保存.(8)RT 酶
具有逆轉(zhuǎn)錄活性,供應(yīng)商提供質(zhì)量保證.-20℃保存.(9)RT-PCR酶
具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和DNA聚合酶活性,無(wú)核酸外切酶活性及核酸內(nèi)切酶活性,具熱穩(wěn)定性,94℃1小時(shí)后仍保持50%活性.-20℃保存.(10)緩沖液
各類(lèi)酶制品需要的的反應(yīng)緩沖液由廠家隨酶制品提供,供應(yīng)商提供質(zhì)量保證.-20℃保存.2,主要生物輔料(1)雜交液
購(gòu)買(mǎi)成品者,供應(yīng)商提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并按要求保存.自制雜交液,按半成品檢定標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢定.(2)酶類(lèi)
蛋白酶,核酸酶等,供應(yīng)商提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并按要求保存.(3)核酸提取試劑
供應(yīng)商提供質(zhì)量保證,并按要求保存.如果是自制提取液,按半成品檢定要求.(4)魚(yú)精DNA 供應(yīng)商提供質(zhì)量保證,并按要求保存.(5)封閉用蛋白
包括牛血清白蛋白,奶粉等,提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并按要求保存.3,主要化學(xué)原輔料 參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)(2000年版)》分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn).主要的檢測(cè)指標(biāo)包括:溶液外觀,一般鹽類(lèi)檢測(cè),溶液pH值檢測(cè),溶解情況檢測(cè),干燥失重的檢測(cè),熾灼殘?jiān)?主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定,不得隨意發(fā)生變更.化學(xué)原材料在購(gòu)入時(shí),原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).(1)無(wú)機(jī)類(lèi)
主要包括氯化鈉,氫氧化鈉,純化水等.(2)有機(jī)類(lèi)
主要包括有丙酮,乙醇,枸櫞酸,吐溫20,乙二胺四乙酸二鈉,氨基吡啉等.(3)特殊化學(xué)原料
聚乙二醇,多聚賴氨酸,丙烯酰胺,甲叉雙丙烯酰胺,N,N,N',N'-四甲基二乙胺(TEMED),溴化乙錠(EB),染色劑等.4,其他物料(1)載玻片
外觀:明亮處用肉眼觀察無(wú)缺刻,無(wú)劃傷等.規(guī)格按設(shè)計(jì)要求.激光掃描儀掃描(波長(zhǎng)為芯片檢測(cè)波長(zhǎng)):包被層基本均勻.(2)試管,吸頭,試劑瓶等
一次性使用,由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證,達(dá)到設(shè)計(jì)要求.(3)其他:說(shuō)明書(shū),包裝外盒等
參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū),標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》執(zhí)行.(二)蛋白檢測(cè)芯片 1,主要生物原料
與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種活性抗原,重組抗原,單克隆杭體,多克隆抗體以及多肽類(lèi)生物原科.這類(lèi)原料可用于點(diǎn)膜,標(biāo)記相關(guān)酶,納米金,光學(xué)基團(tuán)及中和反應(yīng)用抗原或抗體等.使用前應(yīng)按工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn),以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量要求.主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn),其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定;若購(gòu)買(mǎi),其供應(yīng)商要求相對(duì)固定,不能隨意變更供應(yīng)商,如果主要原料(包括工藝)或其供應(yīng)商有變更,必須進(jìn)行原料驗(yàn)證,并進(jìn)行補(bǔ)充申報(bào).主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括:(1)外觀
肉眼觀察,大部分生物原料為澄清透明的液體,不含異物,渾濁或搖不散的沉淀;或者為白色粉末,不含有其他顏色的雜質(zhì);特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn).(2)純度和分子量
主要通過(guò)SDS-PAGE電泳和電泳結(jié)果掃描儀進(jìn)行檢測(cè),也可用其他適宜的方法,如高效液相法等.作為免疫診斷試劑用生物原材料,用銀染法染色后,純度一般都要大于90%;用考瑪氏亮藍(lán)染色后;純度一般都要大于95%.SDS凝膠電泳法測(cè)定分子量.(3)蛋白濃度
蛋白濃度可通過(guò)Lowry法,280nm光吸收法,雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè);(4)效價(jià)
效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行.效價(jià)應(yīng)達(dá)到設(shè)計(jì)規(guī)定的要求.(5)功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒試劑實(shí)際生產(chǎn)中的情況,一般考查該原料使用后的試劑靈敏度,特異性和穩(wěn)定性.2,主要生物輔料
生物輔料指的是在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類(lèi)生物原料,主要包括小牛血清,山羊血清,牛血清白蛋白和酪蛋白等.這些生物原料均應(yīng)按照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)(2000年版)》所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn),達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方應(yīng)用于生產(chǎn).生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定,不得隨意變更供應(yīng)商.對(duì)于小牛血清或山羊血清,牛血清白蛋白以及酪蛋白等,還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn),即以其為原料配制10%濃度的稀釋液作為樣品,進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定,均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng).對(duì)于標(biāo)記用酶,應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(chēng)(如辣根過(guò)氧化物酶,堿性磷酸酶等),同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢定方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn),酶的純度RZ值(OD403nm/OD280nm)應(yīng)大于3.0.3,化學(xué)原輔料
參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)(2000年版)》分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn).主要的檢測(cè)指標(biāo)包括:溶液外觀,一般鹽類(lèi)檢測(cè),溶液pH值檢測(cè),溶解情況檢測(cè),干燥失重的檢測(cè),熾灼殘?jiān)?主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定,不得隨意發(fā)生變更.化學(xué)原材料在購(gòu)入時(shí),原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).(1)無(wú)機(jī)類(lèi)
主要包括氯化鈉,氫氧化鈉,純化水等.(2)有機(jī)類(lèi)
主要包括有丙酮,乙醇,枸櫞酸,吐溫20,乙二胺四乙酸二鈉,氨基吡啉等.(3)特殊化學(xué)原料
DAB(聯(lián)苯二胺),染色劑等.4,其他物料(1)基質(zhì)
以硝酸纖維素膜為例:孔徑符合設(shè)計(jì)要求(0.45μm,0.22μm等),均一性(厚度及毛細(xì)遷移速度±20%),尺寸(與標(biāo)識(shí)吻合)(2)瓶子和干燥劑
由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證,達(dá)到規(guī)定要求.(3)其他:說(shuō)明書(shū),包裝外盒等
應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū),標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》執(zhí)行.三,試劑盒各組分的生產(chǎn)
生物芯片主要包括DNA芯片,蛋白芯片,組織芯片,細(xì)胞芯片以及芯片實(shí)驗(yàn)室等.生物芯片診斷試劑產(chǎn)品基本可分成二個(gè)部分,一部分是芯片,另一部分檢測(cè)用工作液.如果有配套的檢測(cè)儀器,還需對(duì)儀器及處理軟件的應(yīng)用加以說(shuō)明.(一)芯片的生產(chǎn)
芯片生產(chǎn)的基本過(guò)程包括探針的獲取方法,純化,點(diǎn)樣,固定.1,探針獲取
不同的芯片,主要是探針不同,生物芯片的探針主要包括以下幾類(lèi),其它探針可參考制定相應(yīng)的技術(shù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).(1)DNA探針的獲取
探針的形式有PCR產(chǎn)物,克隆DNA,人工合成DNA片段等;要求有生產(chǎn)程序和質(zhì)量指標(biāo)及檢測(cè)方法,要進(jìn)行純化,有固定的純化程序.(2)抗原的生產(chǎn)
抗原的獲得方法包括細(xì)胞培養(yǎng),從生物材料中分離提取,基因工程表達(dá)以及合成肽等.基因工程表達(dá)產(chǎn)物又分為純抗原蛋白,融合蛋白等.(3)抗體
抗體分單克隆抗體和多克隆抗體.抗體制備包括細(xì)胞培養(yǎng),動(dòng)物腹水,基因工程表達(dá)等方式.(4)細(xì)胞和組織
包括細(xì)胞或組織類(lèi)型,固定方法.組織材料還包括固定,包埋,切片等.(5)芯片實(shí)驗(yàn)室,包括各種管道泵的制作等.2,陣列的排列設(shè)計(jì)
陣列的排列包括依次排列,隨機(jī)排列,對(duì)角線排列等,設(shè)計(jì)時(shí)需考慮重復(fù)次數(shù)等.3,點(diǎn)陣的制作
使用儀器的要確定型號(hào),程序;手工制作的也要有標(biāo)準(zhǔn)操作程序.4,固定:包括固定方式,固定的條件等.應(yīng)對(duì)芯片生產(chǎn)的過(guò)程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制,如點(diǎn)樣和固定過(guò)程的監(jiān)控,點(diǎn)樣均一性檢驗(yàn)等.(二)工作液配制
1,芯片生產(chǎn)所需試劑,包括細(xì)胞培養(yǎng)基,探針制備試劑,陣列制作和固定試劑等.2,樣品處理試劑,芯片檢測(cè)靶分子分為核酸和蛋白質(zhì).檢測(cè)核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣,DNA提取或RNA提取試劑,逆轉(zhuǎn)錄試劑,PCR擴(kuò)增試劑,核酸標(biāo)記試劑等;檢測(cè)蛋白的處理試劑包括取樣試劑,蛋白稀釋液以及特殊試劑等.3,反應(yīng)液:檢測(cè)核酸時(shí)的反應(yīng)液包括預(yù)雜交液,雜交液,洗脫液等;檢測(cè)蛋白時(shí),包括封閉液,抗原/抗體反應(yīng)液,洗脫液,顯色液,顯色終止液等.(三)數(shù)據(jù)判讀
1,判斷標(biāo)準(zhǔn)及依據(jù),包括Cut off值的確定依據(jù).2,數(shù)據(jù)判讀方式:人工還是軟件判讀.3,如果是軟件判讀,應(yīng)提供軟件判斷的科學(xué)依據(jù)(包括生物學(xué)原理,數(shù)據(jù)獲取原理和判斷實(shí)驗(yàn)是否成立的依據(jù))以及實(shí)驗(yàn)測(cè)試的原始報(bào)告(或數(shù)據(jù)),并需要說(shuō)明:(1)軟件的來(lái)源:購(gòu)買(mǎi)或自己編制,是否獲得注冊(cè)等.(2)軟件的用途:包括對(duì)數(shù)據(jù)的分析,存儲(chǔ),解讀,含義等.(3)軟件的使用:基本的使用程序.四,半成品質(zhì)量控制(一)抽樣
檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取檢定需要數(shù)量的半成品,作好標(biāo)記,待檢.(二)質(zhì)控品
可用克隆并測(cè)序鑒定的DNA或經(jīng)特異性鑒定的抗原(或抗體).質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)盡可能與被測(cè)物基質(zhì)相一致.(三)檢定要求 1,芯片檢定
(1)靈敏度:最低檢測(cè)限達(dá)到規(guī)定要求.(2)特異性:應(yīng)達(dá)到規(guī)定要求.若進(jìn)行全陰,全陽(yáng)和交叉反應(yīng)檢測(cè),全陰性檢測(cè)應(yīng)在沒(méi)有靶分子存在時(shí),所有檢測(cè)位點(diǎn)沒(méi)有檢測(cè)信號(hào);全陽(yáng)性檢測(cè)應(yīng)在加入足夠量的靶分子,所有檢測(cè)位點(diǎn)均有檢測(cè)信號(hào);交叉反應(yīng)檢測(cè)時(shí),用某一位點(diǎn)的靶分子檢測(cè),應(yīng)只有該位點(diǎn)有檢測(cè)信號(hào),其它位點(diǎn)不能有檢測(cè)信號(hào).(3)精密性(均一性):用比最低檢測(cè)限高一個(gè)數(shù)量級(jí)的質(zhì)控品,重復(fù)檢測(cè)10次,判定結(jié)果一致.考慮到芯片的多位點(diǎn)檢測(cè),因此要進(jìn)行全位點(diǎn)和單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè).半成品檢定可以用克隆DNA和鑒定的抗原和抗體作質(zhì)控品.2,工作液的檢定
(1)物理檢測(cè):外觀顏色正常,沒(méi)有雜質(zhì).(2)質(zhì)量檢定:用被檢定的工作液檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣,檢測(cè)結(jié)果達(dá)到預(yù)定要求.五,成品質(zhì)量控制(一)生產(chǎn)批量
申報(bào)生產(chǎn)的批量每批原則上不低于1000人份.(二)抽樣
檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取檢定需要數(shù)量的半成品,做好標(biāo)記,待檢.(三)標(biāo)準(zhǔn)品(參考品)應(yīng)用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品進(jìn)行檢定,若無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品(參考品),可以使用企業(yè)參考品,但其標(biāo)準(zhǔn)不得低于第一家已經(jīng)獲得批準(zhǔn)的該類(lèi)試劑.(四)檢定要求
1,靈敏度:應(yīng)達(dá)到規(guī)定要求.2,特異性:應(yīng)達(dá)到規(guī)定要求.3,精密性(均一性):對(duì)某一樣本,重復(fù)10次,對(duì)病種的定性檢測(cè)結(jié)果一致.4,穩(wěn)定性(僅對(duì)蛋白芯片)37℃放置至少3天,靈敏度,特異性和精密度仍達(dá)到規(guī)定要求.熱加速破壞試驗(yàn)的時(shí)間長(zhǎng)短,可由生產(chǎn)單位根據(jù)不同產(chǎn)品在37℃貯存與常溫貯存(2℃8℃)中質(zhì)量變化的相關(guān)性來(lái)決定
第三篇：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則(化學(xué)發(fā)光報(bào)批稿)
體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則——發(fā)光免疫分析試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報(bào)批稿）
2009-05-15 09:00 發(fā)光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應(yīng)等生物學(xué)原理，利用發(fā)光信號(hào)的強(qiáng)弱來(lái)判斷樣本中相應(yīng)抗原或抗體是否存在來(lái)進(jìn)行檢測(cè)的一類(lèi)試劑。主要包括化學(xué)發(fā)光（酶促、非酶促），電化學(xué)發(fā)光和時(shí)間分辨熒光等法。
該指導(dǎo)原則主要適用于利用發(fā)光分析技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)等被測(cè)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的第三類(lèi)試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制，第二類(lèi)試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。
一、基本原則
（一）研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并符合有關(guān)法規(guī)的要求。
（二）診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對(duì)試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。
（三）診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。
（四）研制生產(chǎn)過(guò)程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
（五）試劑生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可控，使用有效。
二、原材料質(zhì)量控制
（一）主要生物原料
與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)、激素類(lèi)等生物原科。這類(lèi)原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。一般按工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。
主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：
1．外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。
2．純度和分子量
主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。
3．蛋白濃度
蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè)。
4．效價(jià)
效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。
5．功能性實(shí)驗(yàn)
功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。
（二）生物輔料
生物輔料一般指在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類(lèi)生物原料、主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。
建議作以下檢驗(yàn)：
1.牛血清或羊血清
外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無(wú)溶血或異物
無(wú)菌試驗(yàn)：將血清直接37℃度放置7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。
總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，蛋白含量不小于32mg/ml。
球蛋白含量：取待測(cè)血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法測(cè)定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。
2.牛血清白蛋白：
外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無(wú)吸潮，無(wú)結(jié)塊，無(wú)肉眼可見(jiàn)的其它雜質(zhì)顆粒。
溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18-26℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)不大于15分鐘。1%牛血清白蛋白水溶液的pH值應(yīng)為6.5?7.1。
總蛋白含量：用雙縮脲方測(cè)定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。
總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。
BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。
3.酪蛋白：
酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
4．標(biāo)記用酶
應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(chēng)（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。
對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行測(cè)定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。
生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。
（三）化學(xué)原材料
化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類(lèi)檢測(cè)、溶液pH值、重金屬檢測(cè)、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)?，均?yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。
1．無(wú)機(jī)類(lèi)：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。
2．有機(jī)類(lèi)：主要包括有吐溫20、三羥基氨基甲烷等。
3.特殊化學(xué)原料：Eu-DTTA，魯米諾等。
Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求Eu-DTTA各功能團(tuán)符合分子結(jié)構(gòu)，純度在96%以上。
（四）其他原輔料
1．微孔板條
外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無(wú)劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。
材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加200?L增強(qiáng)液，用發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)其熒光值，平均本底熒光值≤1500。
吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測(cè)熒光值，CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％,批間CV≤10％。
2．其他
粘膠紙、鋁箔袋、說(shuō)明書(shū)、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
三、試劑盒各組分的生產(chǎn)
發(fā)光免疫分析試劑主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過(guò)產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過(guò)程來(lái)保證其質(zhì)量符合規(guī)定。
(一)固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板為例進(jìn)行描述）
1．包被板的準(zhǔn)備
準(zhǔn)備經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被板，記錄批號(hào)、數(shù)目、狀態(tài)標(biāo)識(shí)。
質(zhì)控項(xiàng)目：尺寸，外觀，包裝。
2．包被液的配制
配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。
質(zhì)控項(xiàng)目：包被緩沖液配方，pH值，包被物成份。
3．包被板的包被
包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。
質(zhì)控項(xiàng)目：包被體積，溫度，時(shí)間，過(guò)程監(jiān)控。
4．洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）
按配方配制洗板工作液。
質(zhì)控項(xiàng)目：洗板工作液配方，pH值。
5．封閉液的配制
按配方配制封閉液。
質(zhì)控項(xiàng)目：封閉液配方，pH值。
6．洗板和封閉
包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。
質(zhì)控項(xiàng)目：封閉體積，溫度，時(shí)間，過(guò)程監(jiān)控。
質(zhì)檢項(xiàng)目：封閉前檢驗(yàn)包被均一性。
7．抽干
封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。
質(zhì)控項(xiàng)目：過(guò)程監(jiān)控。
8．干燥
反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進(jìn)行干燥。質(zhì)控項(xiàng)目：溫度，濕度，時(shí)間，過(guò)程監(jiān)控等。
9．密封包裝
將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。
質(zhì)控項(xiàng)目：密封性能，標(biāo)示及效期等。
10．反應(yīng)板（半成品）檢驗(yàn)
對(duì)裝袋密封后的反應(yīng)板進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、板內(nèi)變異、板間變異。
(二)滴配過(guò)程
1．酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實(shí)際情況，該步驟可不進(jìn)行）
采用常規(guī)過(guò)碘酸鈉——乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶（或其他酶），酶標(biāo)記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑保存于低溫。
質(zhì)控項(xiàng)目：標(biāo)記方法，過(guò)程控制。
2．酶結(jié)合物的鑒定
(1)功能性實(shí)驗(yàn)
將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
(2)穩(wěn)定性
將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋?zhuān)M(jìn)行2-8℃，及熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
3．酶結(jié)合物稀釋液
按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。
質(zhì)控項(xiàng)目：酶結(jié)合物稀釋液配方，pH值。
4．酶結(jié)合物工作濃度的滴配
取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進(jìn)行滴配。測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達(dá)到最優(yōu)的酶結(jié)合物工作濃度。
5．酶結(jié)合物工作液配制
將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。
質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，用配套的反應(yīng)板進(jìn)行檢驗(yàn)，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測(cè)定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準(zhǔn)品線性檢測(cè)。
6．酶結(jié)合物工作液的分裝
按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。
質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。
7．酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗(yàn)
對(duì)分裝后的酶結(jié)合物工作液進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、靈敏度、校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測(cè)定值。
(三)校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的制備
1．稀釋液
按稀釋液的配方配制，存放在2?8℃或-20℃保存，并于有效期內(nèi)使用。
質(zhì)控項(xiàng)目：稀釋液配方，pH值。
2．校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的配制
校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的配制應(yīng)具有量值溯源性，可參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、WHO標(biāo)準(zhǔn)品或其他級(jí)別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行配制。
質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，準(zhǔn)確性、劑量－反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測(cè)定值。
3．校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的分裝
按工藝要求分裝校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品。
質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、數(shù)量，分裝量。4．校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品（半成品）檢驗(yàn)
對(duì)分裝后的校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、準(zhǔn)確性、劑量－反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測(cè)定值。
(四)化學(xué)發(fā)光底物的制備
1．底物緩沖液
按底物緩沖液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于有效期內(nèi)使用。
質(zhì)控項(xiàng)目：底物緩沖液配方，pH值。
2．化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制
分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑
質(zhì)控項(xiàng)目：氧化劑和發(fā)光劑配方。
質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，本底、發(fā)光強(qiáng)度。
3．化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝
按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）。
質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。
4．化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗(yàn)
對(duì)分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強(qiáng)度。
（五）銪標(biāo)記物的制備
針對(duì)不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪-DTTA與標(biāo)記生物原料的比例，標(biāo)記溫度和標(biāo)記時(shí)間、標(biāo)記得率的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)等。在實(shí)際操作過(guò)程中要求嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作
（六）凍干
各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。
（七）分裝、燈檢和貼簽
分裝量用減重稱(chēng)量法進(jìn)行測(cè)量，把質(zhì)量換算成體積后進(jìn)行分裝量的控制。燈檢是目測(cè)檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。
（八）包裝
根據(jù)試劑盒包裝SOP要求及說(shuō)明書(shū)的要求，以流水線操作形式進(jìn)行包裝。包裝時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢查品名、批號(hào)、裝量，認(rèn)真核對(duì)各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。
四、質(zhì)量控制
（一）半成品質(zhì)量控制
1．半成品抽樣
檢驗(yàn)人員按試劑的批號(hào)，根據(jù)抽樣申請(qǐng)單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號(hào)標(biāo)記、待檢。
2．質(zhì)控品的要求
用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陰/陽(yáng)性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性，檢測(cè)范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)。如無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），可采用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。
3．半成品檢驗(yàn)
根據(jù)各個(gè)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對(duì)每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
（二）成品質(zhì)量控制
1．成品抽樣
產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請(qǐng)單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫(xiě)抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗(yàn)用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時(shí)應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。
每一批試劑的報(bào)批批量應(yīng)至少為10000人份。
2．成品檢驗(yàn)
一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）對(duì)成品進(jìn)行檢驗(yàn)，并達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）的質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。
在批放行前，每一批發(fā)光類(lèi)診斷試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
第四篇：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則(生物芯片報(bào)批稿)
體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則——生物芯片類(lèi)試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報(bào)批稿）
2009-05-15 09:00 本指導(dǎo)原則所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個(gè)生物探針（包括DNA片段，寡核苷酸、抗原、抗體，組織，細(xì)胞等）按預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式固定在特制的基質(zhì)（包括玻璃片，尼龍膜，硝酸纖維素膜等）上，用特定的方法提取生物靶分子并進(jìn)行標(biāo)記，然后與固定在基質(zhì)上的生物探針特異性的結(jié)合，再用相應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備（如激光掃描儀、CCD檢測(cè)儀等）和分析方法（包括軟件）進(jìn)行檢測(cè)、記錄、分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)生物靶分子的定性或定量檢測(cè)的試劑。
根據(jù)芯片制作的主要原料和方法，生物芯片可分為核酸芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等。本指導(dǎo)原則是針對(duì)核酸和蛋白為檢測(cè)靶分子生物芯片的生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則，其它類(lèi)型靶分子檢測(cè)的芯片診斷試劑可參考本指導(dǎo)原則。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。
一、基本原則
（一）試劑研制、生產(chǎn)用各種原料、輔料等應(yīng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并符合有關(guān)法規(guī)的要求。
（二）試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。
（三）生物芯片類(lèi)試劑在研制時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。
（四）試劑研制、生產(chǎn)過(guò)程中所用的物料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
（五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測(cè)有效。
二、原材料質(zhì)量控制
（一）核酸檢測(cè)芯片
核酸芯片檢測(cè)時(shí)，從生物樣本中提取的核酸可用熒光標(biāo)記、金標(biāo)記和酶標(biāo)記；檢測(cè)方法包括光譜學(xué)方法和化學(xué)顯色。下面為熒光標(biāo)記芯片技術(shù)指導(dǎo)原則，采用金標(biāo)記和酶聯(lián)顯色等的生物芯片診斷試劑可參照核酸芯片和蛋白芯片相關(guān)部分。
1、主要生物原料
核酸檢測(cè)芯片的主要生物原料包括模板DNA、dNTPs、引物、探針、標(biāo)記物等。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定，企業(yè)應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，同時(shí)，供應(yīng)商應(yīng)提供相應(yīng)的質(zhì)量保證證明和相應(yīng)的質(zhì)檢報(bào)告，達(dá)到生產(chǎn)規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。
（1）模板DNA 重組DNA：經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證，關(guān)鍵堿基或序列沒(méi)有錯(cuò)誤。1×TE溶解，濃度為100ng/μl以上，-20℃保存。作為陽(yáng)性參考品時(shí)，其稀釋度由企業(yè)根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)確定。（2）dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）
HPLC純，PCR級(jí)，無(wú)DNase、RNase污染，-20℃以下保存。
（3）引物
生產(chǎn)中的引物原材料為凍干粉，PAGE純或HPLC純。用標(biāo)準(zhǔn)DNA模板擴(kuò)增，電泳檢測(cè)，譜帶單一，大小正確，與對(duì)照引物比較，產(chǎn)物量一致。符合視為合格引物，-20℃以下保存。
（4）探針（用于陣列制備）
重組DNA, 凍干粉（或1×TE溶解液）：至少滿足一個(gè)批次的用量，酶切鑒定分析圖譜。
PCR產(chǎn)物，凍干粉（或1×TE溶解液）：至少滿足一個(gè)批次的用量，PCR電泳鑒定圖譜。
合成寡核苷酸：PAGE純或HPLC純，至少滿足一個(gè)批次的用量，提供該產(chǎn)品的PAGE電泳分析圖譜或HPLC分析圖譜。
探針序列的正確性：應(yīng)用克隆鑒定的標(biāo)準(zhǔn)DNA雜交鑒定或測(cè)序鑒定。
純度和濃度檢測(cè)：采用電泳方法，電泳圖譜沒(méi)有雜帶，目的條帶的強(qiáng)度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶進(jìn)行參比計(jì)算其強(qiáng)度。純度較高的DNA，可用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量。檢驗(yàn)合格后入庫(kù)，避光、-20℃以下保存。
（5）標(biāo)記物
含有激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)介于280?680nm的所有熒光分子，HPLC純。
（6）Taq DNA聚合酶
SDS-PAGE 檢測(cè)，純度＞95%，具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50％活性。產(chǎn)品-20℃保存。
（7）尿嘧啶糖基化酶（UNG）
具尿嘧啶糖基化酶活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。1U UNG 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板被降解后不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。產(chǎn)品-20℃保存。
（8）RT 酶
具有逆轉(zhuǎn)錄活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，-20℃保存。
（9）RT-PCR酶
具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，94℃ 1小時(shí)后仍保持50%活性。產(chǎn)品-20℃保存。
（10）緩沖液
各類(lèi)酶制品所需的反應(yīng)緩沖液由廠家隨酶制品提供，-20℃保存。
2、主要生物輔料
主要生物輔料包括酶類(lèi)（蛋白酶、核酸酶等）、核酸提取試劑、魚(yú)精DNA、封閉用蛋白、雜交液等，企業(yè)應(yīng)建立相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物輔料若為企業(yè)自己生產(chǎn)（配制），其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定，并按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，同時(shí)，供應(yīng)商應(yīng)提供相應(yīng)的質(zhì)量保證證明和相應(yīng)的質(zhì)檢報(bào)告，達(dá)到生產(chǎn)規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
3、主要化學(xué)原輔料
化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)。主要的檢測(cè)指標(biāo)包括：溶液外觀、一般鹽類(lèi)檢測(cè)、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)取?/p>
主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購(gòu)入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)檢報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
4、其他物料
（1）載玻片 外觀：明亮處用肉眼觀察無(wú)缺刻，無(wú)劃傷等。規(guī)格按設(shè)計(jì)要求。
激光掃描儀掃描（波長(zhǎng)為芯片檢測(cè)波長(zhǎng)）：包被層基本均勻。
（2）試管、吸頭、試劑瓶等
一次性使用，由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證，達(dá)到設(shè)計(jì)要求。
（3）其他：
包括試劑瓶標(biāo)簽、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說(shuō)明書(shū)、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
（二）蛋白檢測(cè)芯片
1．主要生物原料
與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)生物原科。這類(lèi)原料可用于點(diǎn)膜、標(biāo)記相關(guān)酶、納米金、光學(xué)基團(tuán)及中和反應(yīng)用抗原或抗體等。使用前應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求變更申請(qǐng)。
主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：
⑴ 外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。
⑵ 純度和分子量
生物原料經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析；也可用其他適宜的方法，如高效液相法等進(jìn)行分析。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。
⑶ 蛋白濃度
蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其它適宜方法進(jìn)行檢測(cè)。
⑷ 效價(jià)
效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。
⑸ 功能性實(shí)驗(yàn)
功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。
2．主要生物輔料
生物輔料指的是在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類(lèi)生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于企業(yè)生產(chǎn)。
建議作以下檢驗(yàn)：
⑴ 牛血清或羊血清
外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無(wú)溶血或異物
無(wú)菌試驗(yàn)：將血清直接37℃放置7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。
總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)為不小于32mg/ml。
球蛋白含量：取待測(cè)血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀。沉淀溶于0.85%NaCl溶液至1ml，用Lowry法測(cè)定蛋白含量不能大于2mg/ml。⑵ 牛血清白蛋白：
外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無(wú)吸潮，無(wú)結(jié)塊，無(wú)肉眼可見(jiàn)的其它雜質(zhì)顆粒。
溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時(shí)間在18-26℃時(shí)應(yīng)不大于15分鐘。pＨ值應(yīng)為6.5?7.1。
總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，其標(biāo)準(zhǔn)為不小于干重的95％。
總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為不小于總蛋白含量的95%。
BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為不小于90%。
⑶ 酪蛋白：
應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
⑷ 標(biāo)記用酶
應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(chēng)（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。
對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行測(cè)定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。
生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。
3．化學(xué)原輔料
參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)。主要的檢測(cè)指標(biāo)包括：溶液外觀、一般鹽類(lèi)、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)取?/p>
主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購(gòu)入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)檢報(bào)告，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
4．其他物料
⑴ 基質(zhì)
以硝酸纖維素膜為例：孔徑符合設(shè)計(jì)要求（0.45μm、0.22μm等）、均一性（厚度及毛細(xì)遷移速度±20％）、尺寸（與標(biāo)識(shí)吻合）
⑵ 試劑瓶和干燥劑
由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證，達(dá)到規(guī)定要求。
⑶ 其他：說(shuō)明書(shū)、包裝外盒等
應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如數(shù)量、規(guī)格等。
三、試劑盒各組分的生產(chǎn)
生物芯片主要包括DNA芯片、蛋白芯片、組織芯片和細(xì)胞芯片等。生物芯片診斷試劑產(chǎn)品基本可分成二個(gè)部分，一部分是芯片，另一部分檢測(cè)用工作液。如果有配套的檢測(cè)儀器，還需對(duì)儀器及處理軟件的應(yīng)用加以說(shuō)明。
（一）芯片的生產(chǎn)
芯片生產(chǎn)的基本過(guò)程包括探針的獲取方法，純化，點(diǎn)樣，固定。
1．探針獲取
不同芯片，主要是探針不同，生物芯片的探針主要包括以下幾類(lèi)，其它探針可參考制定相應(yīng)的技術(shù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
（1）DNA探針的獲取
探針的形式包括PCR產(chǎn)物、克隆DNA、人工合成DNA片段等；要求有生產(chǎn)程序和質(zhì)量指標(biāo)及檢測(cè)方法，要進(jìn)行純化，有固定的純化程序。（2）抗原的生產(chǎn)
抗原獲得方法包括細(xì)胞培養(yǎng)、從生物材料中分離提取、基因工程表達(dá)以及合成肽等?；蚬こ瘫磉_(dá)產(chǎn)物又分為純抗原蛋白、融合蛋白等。
（3）抗體
抗體分單克隆抗體和多克隆抗體?？贵w制備包括細(xì)胞培養(yǎng)，動(dòng)物腹水，基因工程表達(dá)等方式。
（4）細(xì)胞和組織
包括細(xì)胞或組織類(lèi)型，固定方法。組織材料包括固定，包埋，切片等。
2．陣列的排列設(shè)計(jì)
陣列的排列可以是依次排列、隨機(jī)排列、對(duì)角線排列以及其它排列方式，但設(shè)計(jì)時(shí)需考慮重復(fù)次數(shù)和對(duì)照等因素。
3．點(diǎn)陣的制作
使用儀器的需要確定型號(hào)，程序；手工制作的也應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)操作程序。
4．固定：包括固定方式，固定條件等。
應(yīng)對(duì)芯片生產(chǎn)的過(guò)程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如點(diǎn)樣和固定過(guò)程的監(jiān)控、點(diǎn)樣均一性檢驗(yàn)等。
（二）工作液配制
1．芯片生產(chǎn)所需試劑，包括細(xì)胞培養(yǎng)基，探針制備試劑，陣列制作和固定試劑等。
2．樣品處理試劑，芯片檢測(cè)靶分子分為核酸和蛋白質(zhì)。檢測(cè)核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣，DNA提取或RNA提取試劑，逆轉(zhuǎn)錄試劑，PCR擴(kuò)增試劑，核酸標(biāo)記試劑等；檢測(cè)蛋白的處理試劑包括取樣試劑，蛋白稀釋液以及特殊試劑等。
3．反應(yīng)液：檢測(cè)核酸時(shí)的反應(yīng)液包括預(yù)雜交液，雜交液，洗脫液等；檢測(cè)蛋白時(shí)，包括封閉液，抗原/抗體反應(yīng)液，洗脫液，顯色液，顯色終止液等。
（三）數(shù)據(jù)判讀
1．判斷標(biāo)準(zhǔn)及依據(jù)，包括Cut off值的確定依據(jù)。
2．?dāng)?shù)據(jù)判讀方式：人工還是軟件判讀。
3．如果是軟件判讀，應(yīng)提供軟件判斷的科學(xué)依據(jù)（包括生物學(xué)原理、數(shù)據(jù)獲取原理和判斷實(shí)驗(yàn)是否成立的依據(jù)）以及實(shí)驗(yàn)測(cè)試的原始報(bào)告（或數(shù)據(jù)），并需要說(shuō)明：
⑴ 軟件的來(lái)源：購(gòu)買(mǎi)或自己編制，是否獲得注冊(cè)等。
⑵ 軟件的用途：包括對(duì)數(shù)據(jù)的分析、存儲(chǔ)、解讀、含義等。
⑶ 軟件的使用：基本的使用程序。
四、半成品質(zhì)量控制
（一）抽樣
檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取檢驗(yàn)需要數(shù)量的半成品，作好標(biāo)記，待檢。
（二）半成品檢驗(yàn)
利用上一批檢驗(yàn)合格的試劑盒的相應(yīng)組分，對(duì)本批生產(chǎn)出的各種試劑盒組分分別進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
半成品檢驗(yàn)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品進(jìn)行。若某類(lèi)試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。
檢測(cè)所抽樣的半成品試劑盒的性能，包括陰/陽(yáng)性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。精密性用比最低檢測(cè)限高一個(gè)數(shù)量級(jí)的質(zhì)控品，重復(fù)檢測(cè)10次，判定結(jié)果一致。對(duì)定量檢測(cè)試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和校準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
企業(yè)應(yīng)該對(duì)每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性測(cè)試。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在在特定溫度或特定條件下完成。對(duì)蛋白芯片，應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
五、成品質(zhì)量控制
產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號(hào)、實(shí)際包裝量、抽樣申請(qǐng)單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫(xiě)抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗(yàn)用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時(shí)應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。
每一批生物芯片類(lèi)診斷試劑報(bào)批批量不少于2000人份。
（1）成品檢驗(yàn)
一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品進(jìn)行。若某類(lèi)試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。
（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)
試劑批放行前，應(yīng)完成穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可在特定溫度或特定條件下完成。對(duì)蛋白芯片，每批試劑批放行前，應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
第五篇：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則-核酸擴(kuò)增
體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則——核酸擴(kuò)增法試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報(bào)批稿）
2009-05-15 09:00
核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)泛指以擴(kuò)增DNA或RNA為手段，從而檢測(cè)特定核酸序列或篩查特定基因的檢測(cè)技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測(cè)、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。
本指導(dǎo)原則僅適用于核酸擴(kuò)增法檢測(cè)試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，其他類(lèi)核酸檢測(cè)試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。
一、基本要求
（一）核酸擴(kuò)增類(lèi)檢測(cè)試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。
（二）試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動(dòng)，以最大限度地防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測(cè)的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。
（三）試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。
（四）核酸擴(kuò)增類(lèi)檢測(cè)試劑的引物設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測(cè)設(shè)計(jì)的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。
（五）企業(yè)使用新型原材料時(shí)，應(yīng)提供與通行原材料比對(duì)研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。
二、原材料
應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料來(lái)自市場(chǎng)（從其他單位購(gòu)買(mǎi)），應(yīng)提供的資料包括：對(duì)物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購(gòu)買(mǎi)合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。
核酸類(lèi)檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無(wú)DNase和RNase污染。
（一）脫氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為HPLC純、PCR級(jí)，無(wú)DNase和RNase污染。—20℃保存。
（二）引物
由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。
凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)（PAGE）或HPLC級(jí)，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。
應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物?！?0℃保存。
（三）探針
是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'+'-端(和/或3'+'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'+'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。
凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對(duì)探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。應(yīng)以可見(jiàn)—紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長(zhǎng)處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫(kù)。避光、—20℃保存。
（四）DNA聚合酶
如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。—20℃保存。
（五）尿嘧啶糖基化酶（UNG）
具有尿嘧啶糖基化酶活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模版應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。—20℃保存。
（六）逆轉(zhuǎn)錄酶
具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性?！?0℃保存。
三、生產(chǎn)工藝
核酸擴(kuò)增類(lèi)檢測(cè)試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。
工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類(lèi)型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。
四、質(zhì)量控制
（一）半成品質(zhì)量控制
1．按批號(hào)抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。
2．以參考品 / 對(duì)照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。
3．半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。
4．半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時(shí)進(jìn)行分裝和包裝。
（二）成品質(zhì)量控制
1．每一批核酸擴(kuò)增類(lèi)檢測(cè)試劑報(bào)批批量應(yīng)不低于3000人份。
2．產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。
3．以參考品 / 對(duì)照品或參考品，進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。結(jié)果應(yīng)符合要求。
4。成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性和穩(wěn)定性。
5．試劑批放行前，應(yīng)對(duì)需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。
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