第一篇：土壤有機碳檢測方法介紹與自我總結(jié)

土壤有機碳檢測方法介紹

土壤有機碳是以有機物形式存在于土壤中的C元素的一種存在形式，作為土壤碳庫中的重要組成部分，一方面在土壤品質(zhì)監(jiān)測中是一項重要的檢測項目，另一方面對研究空氣中二氧化碳來源也有很大的作用。

土壤有機碳根據(jù)其穩(wěn)定性可分為活性有機碳、慢性有機碳和惰性有機碳三種，其中活性有機碳是反映土壤肥力和土壤管理措施的較好指標(biāo)。而根據(jù)土壤中有機碳的溶解性質(zhì)又可分為溶解性有機碳和非溶解性有機碳。非溶解性有機碳屬于惰性有機碳，由于不能溶解不能被植物吸收也不易產(chǎn)生遷移，所以在土壤質(zhì)量監(jiān)控和環(huán)境監(jiān)測方面沒有實際意義，而活性有機碳和慢性有機碳大多屬于溶解性有機碳。

目前土壤有機碳的檢測方法主要是干燒法和濕氧化法。常用的重鉻酸鉀和濃硫酸濕氧化滴定技術(shù)由于不能確保樣品完全氧化，檢測效果較差檢測結(jié)果必須進行修正。而干燒法目前又有土壤直接高溫燃燒和土壤經(jīng)溶液萃取后高溫燃燒溶液兩種方法。

土壤直接燃燒法大多需在樣品燃燒前使用磷酸溶液或鹽酸溶液去除土壤中的無機碳。磷酸酸性較弱不易將土壤中的難溶碳酸鹽氧化（西南地區(qū)廣布卡斯特地貌，碳酸巖形成的土壤比重較高），而直接燃燒需要在900℃以上的溫度才能保證燃燒完全，碳酸鹽在800℃左右就會分解，所以檢測結(jié)果受無機碳干擾明顯。鹽酸溶液雖然可將大部分碳酸鹽去除，但是殘留的鹽酸會對催化劑和檢測器的壽命造成嚴重影響，使用時必須將樣品再次淋洗、烘干才能上機檢測，沖洗過程中又會造成溶解性有機碳的損失，所以檢測結(jié)果也不是很準(zhǔn)確。這正是Tekmar在第6帶產(chǎn)品設(shè)計生產(chǎn)時取消固體進樣器的一個主要原因。所以相對來說檢測更準(zhǔn)確的則是溶液萃取法。

溶液萃取法是通過一定濃度的鹽溶液將土壤中的有機碳轉(zhuǎn)移至液相后再對溶液進行檢測的方法。一方面該方法只將溶液中的溶解性碳轉(zhuǎn)移至溶液，溶液再上儀器進行檢測，檢測過程中儀器會自動清除無機碳，所以檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠；而不溶解性碳（包括難溶性碳酸巖和不溶性有機碳）不是土壤的有效養(yǎng)分或污染物所以實際監(jiān)測意義不大，這也是為什么中國農(nóng)科院和中科院下屬單位長期將溶液萃取法作為土壤有機碳檢測手段的根本原因。

第二篇：骨質(zhì)疏松癥與自我檢測

骨質(zhì)疏松癥與自我檢測

信息來源：預(yù)防保健科 時間：2013-02-20

1.什么是骨質(zhì)疏松癥？

骨質(zhì)疏松癥是一種骨質(zhì)變脆，從而容易發(fā)生骨折的疾病。當(dāng)人體成長到30歲左右，骨骼強度達到頂峰，然后骨骼強度開始下降，特別是在步入老年后，骨量下降尤為明顯。而女性在絕經(jīng)后的3-5年內(nèi)，因為雌激素的減少，骨量也會快速丟失。骨質(zhì)的流失會造成骨骼內(nèi)部產(chǎn)生海綿樣的小孔，骨骼異常疏松，脆弱不堪，即使是輕微的創(chuàng)傷或無外傷的情況下容易發(fā)生骨折。

2.那些人容易患骨質(zhì)疏松癥？

① 已經(jīng)絕經(jīng)的婦女和65歲以上的人群 ② 有骨質(zhì)疏松家族史的人群

③ 長期進行低鈣飲食、營養(yǎng)缺乏的人群 ④ 身材消瘦、體重偏輕的人群

⑤ 過早閉經(jīng)或進行過卵巢切除手術(shù)的人群 ⑥平時有酗酒或大量吸煙的習(xí)慣 ⑦ 愛喝濃茶或長期喝咖啡

⑧ 患有糖尿病、腎功能不全等疾病，以及因為患病而需要長期、大劑量使用免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素的人群。

3.怎樣自我檢測骨質(zhì)疏松？ ①

腰背疼痛、骨痛 ②

身材變矮 ③

駝背 ④

腿抽筋

⑤

脊柱、髖部或腕部任一部位的骨折。

只要出現(xiàn)上面任意一條，便可懷疑您存在骨質(zhì)疏松。

第三篇：電腦無法開機,自我檢測方法

將BIOS電池放電（恢復(fù)BIOS出廠默認值）建議插拔一下顯卡、內(nèi)存，清理一下衛(wèi)生，并且擦亮顯卡、內(nèi)存的金手指。

電腦開機無顯示故障的排除方法。

第1步：首先檢查電腦的外部接線是否接好，把各個連線重新插一遍，看故障是否排除。第2步：如果故障依舊，接著打開主機箱查看機箱內(nèi)有無多余金屬物，或主板變形造成的短路，聞一下機箱內(nèi)有無燒焦的糊味，主板上有無燒毀的芯片，CPU周圍的電容有無損壞等。第3步：如果沒有，接著清理主板上的灰塵，然后檢查電腦是否正常。

第4步：如果故障依舊，接下來拔掉主板上的Reset線及其他開關(guān)、指示燈連線，然后用改錐短路開關(guān)，看能否能開機。

第5步：如果不能開機，接著使用最小系統(tǒng)法，將硬盤、軟驅(qū)、光驅(qū)的數(shù)據(jù)線拔掉，然后檢查電腦是否能開機，如果電腦顯示器出現(xiàn)開機畫面，則說明問題在這幾個設(shè)備中。接著再逐一把以上幾個設(shè)備接入電腦，當(dāng)接入某一個設(shè)備時，故障重現(xiàn)，說明故障是由此設(shè)備造成的，最后再重點檢查此設(shè)備。

第6步：如果故障依舊，則故障可能由內(nèi)存、顯卡、CPU、主板等設(shè)備引起。接著使用插拔法、交換法等方法分別檢查內(nèi)存、顯卡、CPU等設(shè)備是否正常，如果有損壞的設(shè)備，更換損壞的設(shè)備。

第7步：如果內(nèi)存、顯卡、CPU等設(shè)備正常，接著將BIOS放電，采用隔離法，將主板安置在機箱外面，接上內(nèi)存、顯卡、CPU等進行測試，如果電腦能顯示了，接著再將主板安裝到機箱內(nèi)測試，直到找到故障原因。如果故障依舊則需要將主板返回廠家修理。

第8步：電腦開機無顯示但有報警聲，當(dāng)電腦開機啟動時，系統(tǒng)BIOS開始進行POST（加電自檢），當(dāng)檢測到電腦中某一設(shè)備有致命錯誤時，便控制揚聲器發(fā)出聲音報告錯誤。因此可能出現(xiàn)開機無顯示有報警聲的故障。對于電腦開機無顯示有報警聲故障可以根據(jù)BIOS報警聲的含義，來檢查出現(xiàn)故障的設(shè)備，以排除故障。

無法開機，指示燈不亮故障診斷

當(dāng)電腦出現(xiàn)無法開機故障時，按照下面的方法進行檢測：

（1）首先檢查電腦的電源線是否連接好。如果正常，接著打開主機箱檢查主板電源線是否與主板電源接口連接正常。

（2）如果連接正常，接著查看主機箱內(nèi)有無多余的金屬物或觀察主板有無與機箱接觸，如果有，則可能由于短路造成的無法開機。

（3）如機箱中沒有多余的金屬物，主板也沒有與機箱接觸，接著拔掉主板電源開關(guān)線，用鑷子將主板電源開關(guān)接口短路，電腦如果能夠啟動，則可能是機箱上的電源開關(guān)連接線接觸不良或損壞，維修電源開關(guān)線即可。

（4）如果將主板電源開關(guān)短路電腦不能啟動，接著將主板上的電源線拔下，用一根導(dǎo)線將連接主板電源接口的電源接頭的綠線孔和旁邊的黑線孔連接短路，觀察電源的風(fēng)扇是否轉(zhuǎn)動，如果電扇不轉(zhuǎn)動，則可能是電源損壞，更換電源。

如果電源風(fēng)扇轉(zhuǎn)動，則故障可能由主板的開關(guān)電路故障造成，接著用萬用表測試主板的開關(guān)電路，并排除故障。

Phoenix的BIOS自檢響鈴及其意義 1短 系統(tǒng)啟動正常

1短1短1短 系統(tǒng)加電初始化失敗 1短1短2短 主板錯誤 1短1短3短 CMOS或電池失效 1短1短4短 ROM BIOS校驗錯誤 1短2短1短 系統(tǒng)時鐘錯誤 1短2短2短 DMA初始化失敗 1短2短3短 DMA頁寄存器錯誤 1短3短1短 RAM刷新錯誤 1短3短2短 基本內(nèi)存錯誤 1短3短3短 基本內(nèi)存錯誤

1短4短1短 基本內(nèi)存地址線錯誤 1短4短2短 基本內(nèi)存校驗錯誤 1短4短3短 EISA時序器錯誤 1短4短4短 EISA NMI口錯誤 2短1短1短 前64K基本內(nèi)存錯誤 3短1短1短 DMA寄存器錯誤 3短1短2短 主DMA寄存器錯誤

3短1短3短 主中斷處理寄存器錯誤 3短1短4短 從中斷處理寄存器錯誤 3短2短4短 鍵盤控制器錯誤

3短1短3短 主中斷處理寄存器錯誤 3短4短2短 顯示錯誤 3短4短3短 時鐘錯誤

4短2短2短 關(guān)機錯誤 4短2短3短 A20門錯誤

4短2短4短 保護模式中斷錯誤 4短3短1短 內(nèi)存錯誤 4短3短3短 時鐘2錯誤 4短3短4短 時鐘錯誤

4短4短1短 串行口錯誤 4短4短2短 并行口錯誤

4短4短3短 數(shù)字協(xié)處理器錯誤

AMI 的BIOS自檢響鈴及其意義

1短: 內(nèi)存刷新失敗。更換內(nèi)存條。

2短: 內(nèi)存ECC較驗錯誤。在CMOS Setup中將內(nèi)存關(guān)于ECC校驗的選項設(shè)為Disabled就可以解決，不過最根本的解決辦法還是更換一條內(nèi)存。

3短: 系統(tǒng)基本內(nèi)存（第1個64kB）檢查失敗。換內(nèi)存。4短: 系統(tǒng)時鐘出錯。

5短: 中央處理器（CPU）錯誤。6短: 鍵盤控制器錯誤。

7短: 系統(tǒng)實模式錯誤，不能切換到保護模式。

8短: 顯示內(nèi)存錯誤。顯示內(nèi)存有問題，更換顯卡試試。

9短: ROM BIOS檢驗和錯誤。

1長3短: 內(nèi)存錯誤。內(nèi)存損壞，更換即可。

1長8短: 顯示測試錯誤。顯示器數(shù)據(jù)線沒插好或顯示卡沒插牢。高頻率常響： CPU過熱報警。

Award 的BIOS自檢響鈴及其意義

1短: 系統(tǒng)正常啟動。這是我們每天都能聽到的，也表明機器沒有任何問題。2短: 常規(guī)錯誤，請進入CMOS Setup，重新設(shè)置不正確的選項。

1長1短: RAM或主板出錯。換一條內(nèi)存試試，若還是不行，只好更換主板。1長2短: 顯示器或顯示卡錯誤。

1長3短: 鍵盤控制器錯誤。檢查主板。

1長9短: 主板Flash RAM或EPROM錯誤，BIOS損壞。換塊Flash RAM試試。不斷地響（長聲）: 內(nèi)存條未插緊或損壞。重插內(nèi)存條，若還是不行，只有更換 一條內(nèi)存。

不停地響: 電源、顯示器未和顯示卡連接好。檢查一下所有的插頭。重復(fù)短響: 電源問題。無聲音無顯示: 電源問題。

第四篇：碳計量方法專題培訓(xùn)培訓(xùn)總結(jié)

“碳計量方法專題培訓(xùn)”培訓(xùn)總結(jié)

2010年4月2日，本人作為北京經(jīng)開投資開發(fā)股份有限公司成員參加了國家發(fā)改委培訓(xùn)中心主辦的“碳計量方法專題培訓(xùn)班”。

我國是《聯(lián)合國氣候變化框架公約》和《京都議定書》的締約方，中國政府已鄭重向全世界宣布：到2020年，單位國內(nèi)生產(chǎn)總值（GDP）二氧化碳排放量比2005年下降40%-45%。國務(wù)院常務(wù)會議在提出上述目標(biāo)的同時，還提出要把綠色發(fā)展作為我國在可持續(xù)發(fā)展框架下應(yīng)對氣候變化的重要手段。國家發(fā)展和改革委員會是中國政府應(yīng)對氣候變化工作的綜合協(xié)調(diào)主管部門。因此，學(xué)習(xí)碳排放計算方法是落實控制目標(biāo)要求的一項必不可少的技術(shù)基礎(chǔ)。

通過本次培訓(xùn)和國家發(fā)改委CDM中心主任揚宏偉的講授，系統(tǒng)學(xué)習(xí)了以下內(nèi)容：目前我國節(jié)能減排工作面臨的形勢和任務(wù)；節(jié)能提高能效的政策措施；優(yōu)化經(jīng)濟結(jié)構(gòu)的主要路徑和方法；優(yōu)化能源結(jié)構(gòu)的主要路徑和方法；植樹造林，增加碳匯的戰(zhàn)略思路；我國實用節(jié)能減排技術(shù)介紹與分析；國際通行碳計量、碳認證方法；不同領(lǐng)域碳計量、碳認證案例分析與介紹；清潔發(fā)展機制項目中介公司、節(jié)能技術(shù)推廣公司與開展不同領(lǐng)域碳計量、碳認證業(yè)務(wù)工作的有機結(jié)合。

參加本次會議的是全國各地區(qū)與碳排放相關(guān)行業(yè)的管理人員，會上我代表北京經(jīng)開公司與各地政府有關(guān)人員及相關(guān)企業(yè)界人士進行了相關(guān)交流和業(yè)務(wù)探討。尤其是，可再生能源和節(jié)能、環(huán)保、金融機構(gòu)等相關(guān)行業(yè)項目管理人員對經(jīng)開公司目前開展的低碳高端產(chǎn)業(yè)園區(qū)具有濃厚的興趣。在會后，我們介紹了目前北京經(jīng)開公司開展的低碳產(chǎn)業(yè)、低碳產(chǎn)業(yè)地產(chǎn)等相關(guān)碳計量工作的進展和公司未來低碳戰(zhàn)略的定位等。

總體來說，本次培訓(xùn)收獲很大，強烈感受到目前國內(nèi)與碳排放相關(guān)的整個行業(yè)迅猛發(fā)展的勢頭，從政府節(jié)能減排、碳政策的制定，研究機構(gòu)的碳計量、碳產(chǎn)業(yè)、碳研發(fā)，再到企業(yè)的節(jié)能減排、碳金融、碳融資、項目合作等。發(fā)展低碳經(jīng)濟必將成為勢不可擋的中國經(jīng)濟發(fā)展潮流。

第五篇：細胞凋亡檢測方法總結(jié)

1、磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V法）

磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進行熒光素（FITC、PE）或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。

PS轉(zhuǎn)移到細胞膜外不是凋亡所獨特的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。

在雙變量流式細胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細胞，為（FITC-/PI-）；右上象限是非活細胞，即壞死細胞，為（FITC+/PI+）；而右下象限為早期凋亡細胞，顯現(xiàn)（FITC+/PI-）。右上象限為獨立的核（FITC-/PI+）。

Annexin-V可以再鈣離子存在的情況下，和細胞表面外翻的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，而磷脂酰絲氨酸的外翻是細胞凋亡的早期事件。

PI是一種DNA染料，當(dāng)細胞凋亡的晚期，細胞的細胞膜通透性增加，PI從而進入細胞核與DNA結(jié)合。

所以

Annexin-V陰性-PI陰性 代表正常細胞

Annexin-V陽性-PI陰性 代表凋亡早期的細胞

Annexin-V陽性-PI陽性 代表凋亡晚期的細胞或壞死的細胞

Annexin-V陰性-PI陽性 一般不存在這一群細胞，如果出現(xiàn)這一團細胞可能是PI標(biāo)記時間過長，或者操作過于劇烈而傷害到原本正常的細胞。（還有一種說法是凋亡最后階段的細胞，細胞已經(jīng)沒有細胞膜了說以不結(jié)合Annexin-V而只結(jié)合PI）

2.線粒體膜電位變化的檢測

實驗原理

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1 聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以產(chǎn)生紅色熒光（FL-2 通道）；在線粒體膜電位較低時，JC-1 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1 為單體(monomer)，可以產(chǎn)生綠色熒光（FL-1 通道）。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標(biāo)志性事件。通過 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標(biāo)。

JC-1 單體的最大激發(fā)波長為 514nm，最大發(fā)射波長為 527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激發(fā)波長為 585nm，最大發(fā)射波長為 590nm。

A-C 為對照，細胞亞群(R1)在 FL-2和FL-1 通道同時顯示 JC-1 的熒光信號。D-F 顯示 JC-1在FL-2通道熒光信號降低的細胞亞群(R2)顯著增加，證明線粒體膜電位△Ψm 下降，細胞發(fā)生凋亡。凋亡與線粒體膜電位的去極化相關(guān)。細胞凋亡時線粒體膜電位發(fā)生去極化，JC-1進入線粒體以單體形式存在，僅在Fl-1通道有熒光。

檢測原理

正常細胞：JC-1聚集在線粒體內(nèi)，形成多聚體，呈鮮紅色熒光，細胞質(zhì)內(nèi)有綠色；即紅光++，綠光++。

凋亡細胞：由于線粒體跨膜電位的破壞，不能聚集到線粒體內(nèi)，紅色熒光減弱，單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光。即紅光+，綠光++

3、Caspase-3活性的檢測

Caspase家族在介導(dǎo)細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基（17KD）和兩個小亞基（12KD）組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，最終導(dǎo)致細胞凋亡。但在細胞凋亡的晚期和死亡細胞，caspase-3的活性明顯下降。

(1)Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及對底物多聚ADP-核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。

(2)熒光分光光度計分析

檢測原理：活化的Caspsae與其特異性底物DEVD-pNA結(jié)合切割，釋放出游離pNA，通過測定其吸光度，根據(jù)其發(fā)光強度的高低代表其活化程度。

(3)流式細胞術(shù)分析

PharMingen 多克隆或單克隆 Caspase-3 抗體可以識別 Caspase-3 活化形式，它特異性識別由無活性的 Pro-Caspase-3 活化水解后的暴露的斷裂端, 熒光標(biāo)記多克隆兔抗 Active-Caspase-3 抗體為流式細胞術(shù)分析凋亡細胞的 Caspase-3 而設(shè)計。1、2、3是早期凋亡現(xiàn)象；

4、5是晚期凋亡現(xiàn)象。

4、TUNEL法(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記)

細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。TUNEL實際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法，對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色，能準(zhǔn)確地反應(yīng)細胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細胞和從組織中分離的細胞的細胞形態(tài)測定，并可檢測出極少量的凋亡細胞，因而在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。

5、DNA ladder 細胞凋亡晚期，核酸內(nèi)切酶在核小體之間剪切核DNA，產(chǎn)生大量長度在180-200 bp 的DNA片段。細胞經(jīng)處理后，采用常規(guī)方法分離提純DNA，進行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色，在凋亡細胞群中可觀察到典型的DNA ladder。在瓊脂糖凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。壞死細胞---連續(xù)性條帶。

一、形態(tài)學(xué)觀察方法

1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)成團塊狀，細胞表面有“出芽”現(xiàn)象?！咎K木精 — 伊紅染色法，(hematoxylin-eosin staining)，簡稱HE染色法。蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色 ；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色?！?/p>

2、丫啶橙（AO）染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光，胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè)，可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。

3、臺盼藍染色：如果細胞膜不完整、破裂，臺盼藍染料進入細胞，細胞變藍，即為壞死。如果細胞膜完整，細胞不為臺盼藍染色，則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性，區(qū)別壞死細胞有一定的幫助。

4、透射電鏡觀察：可見凋亡細胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮、邊集，常呈新月形，核膜皺褶，胞質(zhì)緊實，細胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現(xiàn)象。

一、細胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測

1、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

（1）未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。

（2）染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

2、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

一般以細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細胞凋亡的進展情況。常用的DNA特異性染料有：HO 33342(Hoechst 33342)，HO 33258(Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA的結(jié)合是非嵌入式的，主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光。

Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。

DAPI為半通透性，用于常規(guī)固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。

結(jié)果評判：細胞凋亡過程中細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體(圖1)。

3、透射電子顯微鏡觀察

結(jié)果評判：凋亡細胞體積變小，細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)(圖2)；Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細胞凋亡的晚期，細胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。圖2

七、凋亡相關(guān)蛋白TFAR19蛋白的表達和細胞定位分析

TFAR19（PDCD5）是由本研究室在國際上首先報導(dǎo)的一個擁有自己知識產(chǎn)權(quán)的人類新基因，前期的功能研究表明，它是促進細胞凋亡的增強劑。利用熒光素（FITC）標(biāo)記的TFAR19單克隆抗體為探針，對細胞凋亡過程中TFAR19蛋白的表達水平及定位研究發(fā)現(xiàn)，凋亡早期TFAR19表達水平增高并出現(xiàn)快速核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象，伴隨著細胞核形態(tài)學(xué)的變化，持續(xù)較長時間，在凋亡小體中仍然可見。同時我們發(fā)現(xiàn)，凋亡早期TFAR19蛋白的核轉(zhuǎn)位早于磷脂酰絲氨酸（PS）外翻和細胞核DNA的片段化，提示TFAR19蛋白的核轉(zhuǎn)位是細胞凋亡更早期發(fā)生的事件之一。進一步的研究證明，凋亡早期TFAR19的核轉(zhuǎn)位具有普遍意義，不同細胞凋亡早期均出現(xiàn)TFAR19高表達和核轉(zhuǎn)位。這為研究細胞凋亡早期所發(fā)生的事件，提供了一種新的技術(shù)和指標(biāo)。