第一篇：2011級生物制藥技術班 畢業(yè)散伙飯

2011級生物制藥技術班

畢業(yè)散伙飯

策

劃

書

策劃人：謝卓良

時間：2013年4月17日

一、活動目的大學生活即將說再見，不得不感嘆這時間如行云流水，快得我們都來不及珍惜。親愛的同學們，請珍惜我們在一起的最后一點時光吧，讓我們彼此留下最美好的回憶。

這是班上同學第一次這么齊整的去吃飯，也是最后一次。畢業(yè)之后，各奔東西，散落天涯，即使有個五年、十年之約，也不可能有這一次這么多人了。

N年后，同學聚會已經(jīng)演變成攀比會，發(fā)達了的人樂意來，落魄的人逃避，遠沒有畢業(yè)這年的散伙飯那么純情、溫情了。

希望通過這次畢業(yè)散伙飯再次增加彼此間的相互感情，讓大家更加的了解，更加的懂得珍惜彼此。畢業(yè)之后，我們都將紛紛的走入社會，在閑暇之余，我們是否會依稀記起，在大學生涯中，與身邊的同學朋友所發(fā)生的點點滴滴，是否會記得，曾經(jīng)一起哭過、一起笑過，那些守候在你身邊的可愛的人，那一張張熟悉的笑臉或許都要隨著這最后的一次畢業(yè)聚會慢慢的消失。親愛的同學們，希望我們以這次聚會來告別我們的讀書生涯，來迎接我們的新生活。

我們來自四面八方，來自五湖四海，卻相聚在重慶，相聚在11級生物制藥技術這個大家庭里，這是一種難得的緣分，記住，請珍惜，珍惜這難得的同學情誼。

二、活動名稱

朋友、請珍惜

三、活動主題

盡情耍、一起High

四、活動時間

2013年5月3日（星期五）

五、活動地點

校園和濱江路以及三峽廣場附近

六、活動宣傳

在班上以班會的形式征求大家的意見，讓同學們發(fā)表自己的看法，覺得怎樣組織才更有紀念意義

七、主辦單位

2011級生物制藥技術班

八、參與人員

2011級生物制藥技術班全體、輔導員、專業(yè)負責老師、院部書記

九、互動具體安排方案

1.5.1日晚自習時間在班上統(tǒng)一收取這次畢業(yè)散伙飯的活動經(jīng)費，每人100元（多退少補）。具體由韓立倩和呂婷婷負責收取，由呂婷婷主要負責此次活動的財務記賬工作，每一筆開支都需要有詳細的記錄，并且做到公開公平原則。活動結束后，剩余的錢再平均分配給每一位同學。

2.由謝卓良主要負責畢業(yè)紀念冊的設計制作，以及相片的收取工作。

每個同學發(fā)一張屬于自己的照片，并附上姓名電話QQ和 想說的話。

3.由陳丹和吳萬琴主要負責畢業(yè)照的照相工作，以及各寢室合影留戀。（這項工作越快越好，最近兩天）

4.散伙飯地方由謝卓良主要負責聯(lián)系，各班委配合。初步定為中餐。

5.5.3日下課后，在中午兩點半在學校林蔭道處集合，由輔導員敖文靜發(fā)表畢業(yè)講話（有可能也可以請書記這些來說兩句）。集合后我們再留半小時時間，愿意在合影的同學照相，和老師，和同學。

6.集合完畢后，我們第一站將奔赴我們旁邊的濱江路，我們可以集體在那里騎自行車，在磁器口河壩散步游玩談心。（預計此處活動兩小時左右）照相人員隨時跟拍

7.第一站完后，我們步行沙坪壩三峽廣場，直接進入吃飯點。在吃飯點，到時會有輔導員講話、班長發(fā)言、各班委發(fā)言以及同學代表發(fā)言。

8.班長發(fā)放畢業(yè)紀念冊，飯店合影留戀。

9.吃飯時候到時派人輪流攝像。到時安排。

10.有可能的情況下，到時我們制定一個5年、10年之約。

11.飯后基本完事，回校。

十、注意事項

1.此次活動規(guī)模較大，每個人必須注意自身安全，財務一定要保管好，每個寢室的室長一定要吧各寢室人員管理好。

2.此次活動盡量都喝點酒，除非確實不能喝的除外。但決不允許喝醉

3.希望在這最后的一次活動中，大家能夠表現(xiàn)積極，多交流，多談心。

4.這次活動也希望大家能夠放開的耍，不要擔心后面的什么工作問

題，這一次后大家再靜心下來準備工作問題。

5.安全、安全、安全，放在第一位。

此份策劃不完整，簡單的羅列了一下我們的活動以及一些安排。臨時變動的隨機處理。希望大家看后都提一些意見和看法

第二篇：畢業(yè)散伙飯

昨天論文答辯，進行的還是很順利的，至此我的大學生涯也就完整了。之后大家定在今天中午去新時代海鮮餅店吃散伙飯。其實我對這個散伙飯是沒有多大興趣的，原因是我跟班級里的很多人交流的都很少，尤其是女生，在大學四年里沒說過幾句話，應該說對她們是沒有多少感情的。所以我想本來都沒有搭成一伙，吃散伙飯還有什么意義？但是大學同學四年了，好聚終該好散，去就去吧，在一起吃點飯然后各回各的家，各找各的媽，也挺好。到了今天約定的時間了，我和二哥一起按時到了約定的地點。進了餐廳，發(fā)現(xiàn)已經(jīng)有很多同學到了，大家聚成小堆，各自在一起有說有笑的，一點沒有要散伙的那種憂傷的氛圍?？磥磉€真的被我說中了，原本就沒有搭成一伙還談什么散伙？于是我也找到我們男生的根據(jù)地坐下了，等著我們的老師和領導到場開席。終于領導陸陸續(xù)續(xù)的到場了，還不錯我們的院長和副院長還有系主任等“大腕”都到了，除了這些“大腕”還有我們班主任趙旭老師、鑫鑫老師、常穎老師、遲蕊老師、郭德軍老師也按時出席。人齊了，終于可以開席了。一開席大家都在自己的座位那悶頭的吃著自己眼前的菜，沒人多說什么，也沒有什么可以多說的。吃了一會有人開始敬酒了，我不喜歡喝酒，因而對餐桌敬酒的這個環(huán)節(jié)也不是很喜歡，就這樣大家輪流的敬酒，我就只能一杯接一杯的喝，心里卻想著趕緊吃完的了，回寢室上會網(wǎng)?? 就這樣敬酒、喝酒，偶然一抬頭我發(fā)現(xiàn)晶晶哭了，哭的挺傷心，我心里還暗自嘲笑，有什么的，就是各奔西東唄，有啥大不了的?？墒沁^了一會我發(fā)現(xiàn)自己也不對勁了，心里最柔弱的地方好像被什么的東西狠狠的刺了一下?；仡^想想，大學四年就這樣在不經(jīng)意間滑落了，記得剛上大一的時候是父親幫我拎著包裹送我來上學的，那時候我還給自己許下許多諾言，要在大學的四年里實現(xiàn)。我想自己出一本文集，我想加入書法家協(xié)會，我想在大學里找到一個溫暖的能陪我一生的她，我想的很多很多??但是現(xiàn)在回首發(fā)現(xiàn)我只有數(shù)十篇作品在網(wǎng)上流傳、書法只有一點點進步、她只是大學的小插曲??四年就這樣過去了，人生中有多少個四年？似水流年、浮生若夢?? 回想起大學里的點點滴滴，逃課的時候要兄弟幫忙答到，為了不讓老師發(fā)現(xiàn)還得變換著不同音調；期末的結課論文總是要在最后期限的頭一天晚上徹夜在網(wǎng)上蕩；考試的時候幫助兄弟做小抄貼在礦泉水瓶上；考試提前交卷，只為給兄弟發(fā)答案；要出去約會了發(fā)現(xiàn)自己沒有干凈的襪子，就死皮賴臉的跟哥們借襪子穿；晚上回寢室熄燈后罵罵某個變態(tài)的老師，談談某女生是背影殺手??這些日子都一去不復返了，只能埋在我們的心里的某個柔軟的角落。

席間我問了幾個同學的去向，書記要回青島、小溫州要回溫州、發(fā)哥要回江西、我“老婆”也要回山東或者去北京、扎布要去北京或者回香格里拉、茜茜要回鞍山、大嫂要去合肥、申淑煥也要回韓國了??就這樣，吃過這頓飯大家就要啟程了，各奔南北西東、各奔自己的前程??這次別離之后就不知道大家何時能再見面，或許幾年、或許十幾年、或許幾十年、或許這輩子都見不到了??想到這些，不爭氣的眼淚就嘩嘩的落下了??男人的眼淚應該像珍珠一樣珍貴，但是今天我發(fā)現(xiàn)我的眼淚真的是不值錢了，除了父親去世的時候我哭得特別慘，再就是這次散伙飯我哭得不成樣子了。我怕，我怕這次的分別就真的分別了??

大姐說，明年她結婚的時候大家一定要來??；我對我“老婆”說，你結婚的時候一定要記得告訴我啊??你們結婚我肯定想去，但是等你們結婚的時候我又會在哪里？你能否找得到我、能否通知到我??因為明日明日又將天涯遠隔??我告訴她們，等你們有孩子了我要做孩子的干爹。她們都欣然的答應了，可是等你們真的有了孩子我會在哪里？你們又會在哪里？或許你們會淡忘這個不經(jīng)意的約定，或許你們會等孩子大了一些拿著畢業(yè)照指給孩子看：這就是你傳說中的干爹，現(xiàn)在在很遠的XX地了。而我卻可能渾然不知我的干兒子、干女兒已經(jīng)會打醬油了??

后來好多同學都在抱在一起痛哭，也不窮講究男女授受不親了，大家都抱的那么緊，抱的那么真、那么重。此時我才驚訝的發(fā)現(xiàn)，原來大家的心一直在一起，我們一直都是一伙的。只是我太傻沒有懂得而已??

回到學校，發(fā)現(xiàn)有好多人已經(jīng)拖著行李箱陸續(xù)離開了，帶著四年的歡喜與憂愁、帶著對未來的憧憬離開了。寢室里的走廊也失去了往日“熙攘”的景象，有的寢室門緊鎖著，有的寢室門半開著，可以看見里面只有一兩張床鋪上還有行李，空床上放著收拾好的行囊，地上橫七豎八的躺著流著口水的啤酒瓶和憔悴的煙蒂??

回不去了，永遠也回不去了??

一切的相聚都是為了等待最后的分離，就像一切的出生都是為了迎接死亡的到來。

我會想你們的，你們永遠是我人生中最美麗的風景??

第三篇：生物制藥技術

08藥學***3陳省委

組合生物合成藥物進展

摘 要50年來抗生素在人類疾病治療中發(fā)揮了重要作用,今后的幾十年里它們也將是關鍵的治療劑。盡管在過去的20年中通過靶向篩選發(fā)現(xiàn)了一些微生物藥物,但是這種篩選方法很難發(fā)現(xiàn)新類型藥物。組合生物合成可以彌補這種不足,通過基因工程方法改造微生物基因和酶,產(chǎn)生新的抗生素,發(fā)現(xiàn)那些在自然界中不能發(fā)現(xiàn)的藥物。

關鍵詞 基因工程合生物合成新抗生素

微生物種類繁多,其產(chǎn)物化學結構豐富多彩,生物活性十分廣泛,是開發(fā)各種新產(chǎn)品的豐富資源,但是傳統(tǒng)的篩選方法已遠遠不能滿足社會發(fā)展的需要。隨著分子生物學和生物技術的發(fā)展,以及基因組學、蛋白質組學、生物信息組學、代謝組學研究的深入,人們對微生物基因組的研究也有了顯著進展,已經(jīng)闡明了許多與微生物代謝有關的生物合成基因,為微生物組合生物合成藥物的研究和開發(fā)奠定了良好的基礎。

一、研究背景

自1928年弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉素和1942年瓦克斯曼發(fā)現(xiàn)鏈霉素以來,微生物藥物在疾病防治和拯救人類生命中起著十分重要和不可替代的作用,特別是抗生素被國外科學家譽為20世紀醫(yī)學領域的皇冠寶石。微生物藥物一直是臨床最常用的藥物,在西方發(fā)達國家,抗生素占臨床處方藥物的20%以上,在中國約占處方藥物的30%。但自上世紀70年代后,隨著脊髓灰質炎、天花、麻風等傳染性疾病先后在全球范圍內(nèi)被消滅,國家對微生物藥物研究的支持逐漸下降,抗傳染病藥物研究進入了困難時期。上世紀90年代后,我國在已有億乙肝病毒攜帶者的基礎上,又出現(xiàn)了100萬以上人類免疫缺陷病毒(HIV)攜帶者。2002年末以來,重急性呼吸窘迫綜合征(SARS)的出現(xiàn)使我國的傳病控制告急,不得不重新思考微生物藥物的研究策略在新的時期里,微生物藥物研究再度升溫,原因

①新病原微生物不斷出現(xiàn),如SARS、艾滋病(AIDS)瘋牛病等;②生物武器的使用,如炭疽等;③各種耐菌株在世界范圍的傳播;④許多傳染性疾病,如肺核、血吸蟲病等的死灰復燃。目前國內(nèi)外側重研究的生物藥物,主要有抗新病原微生物,抗耐藥菌,抗病毒,抗腫瘤抗生素以及微生物來源的生理活性物質。微物藥物的研究主要

包括以下內(nèi)容:①抗新病原微生藥物的尋找與開發(fā);②細菌耐藥機制及其抗耐藥細藥物研究;③微生物藥物的生物合成基因研究;④組生物合成微生物藥物研究。其中組合生物合成微生藥物是近年發(fā)展較快的研究領域,將在創(chuàng)新藥物研中發(fā)揮重要作用。

二、組合生物合成生物技術,尤其是基因工程技術的不斷發(fā)展,為生物醫(yī)藥領域開辟了廣闊的前景;通過基因工程技術所得到的藥物也在臨床治療某些疑難疾病中發(fā)揮著越來越重要的作用。

廣義,基因工程產(chǎn)品分為兩類

①單基因直接產(chǎn)物。通常是指單個基因編碼序列的翻譯產(chǎn)物(蛋白質),它們一般是生物大分子如干擾素和單克隆抗體,目前生物醫(yī)藥領域中開發(fā)的多數(shù)產(chǎn)品均屬于此類,其中包含有效地用于臨床治療的如重組人胰島素、干擾素和促紅細胞生成素。我國在此領域獨創(chuàng)的藥物不多,而且這類藥物的一個突出缺點是它們比較容易被仿制,只要有了相應的細胞系即可利用基本設備進行生產(chǎn)。

②多基因間接產(chǎn)物。是指由多基因編碼的多酶體系介導而合成的小分子化合物和多肽,包括自然界由微生物和植物產(chǎn)生的天然產(chǎn)物,如抗生素、生理活性物質或萜類化合物等結構比較復雜的化合物。它們品種繁多,性能各異,僅就目前研究得比較深入的聚酮體和萜類化合物,就包括具有抗腫瘤作用的阿霉素、紫杉醇,具有免疫抑制作用的FK506、西莫羅司,具有降血酯作用的洛伐他汀、銀杏內(nèi)酯,具有抗結核桿菌作用的利福霉素,抗瘧藥物青蒿素等。

組合生物合成(combinatorial biosynthesis)是在微生物次級代謝產(chǎn)物合成基因和酶學研究基礎上形成的。組合生物合成的概念是結構不同但生物合成途徑相似的抗生素生物合成基因之間可以進行重組、組合或互補產(chǎn)生新結構的化合物。盡管微生物藥物的結構多樣,但形成這些產(chǎn)物的主要生化反應機制卻基本相同,它們通常是由非常簡單的化學物質,如小分子羧酸和某些氨基酸作為合成起始單位和延伸單位,通過由一系列基因編碼的多酶體系參與的生物化學反應(構成一個合成途徑)而形成的,參與這些天然產(chǎn)物生物合成的多酶體系是由多個結構明顯分開的功能區(qū)域所組成。研究表明,參與這類小分子生物合成的基因通常是連鎖或鄰接而構成一個基因簇(cluster),這為基因的克隆和操作提供了方便,同時由于參與

次級代謝生物合成酶系對底物的特異性,專一性要求不是很嚴格的,對結構相類似的底物均可識別,這一特點為不同基因組合產(chǎn)生新的化合物創(chuàng)造了條件。因此,有針對性地對某些基因進行操作,如替換、阻斷、重組以及添加、減少組件等,均有可能改變其生物合成途徑而產(chǎn)生新的代謝旁路(metabolic pathway),繼而形成新的化合物,這就為組合生物合成提供了基礎,國際上已有通過這些手段得到多個化合物的報道。

三、研究的科學意義

開展微生物基因工程組合生物合成創(chuàng)制新型藥物研究,具有如下意義。

1、利用組合生物合成體系,完成化學方法不能完或難以完成的活性化合物的合成,如抗癌藥物紫杉(taxol)等;這類活性化合物在自然界中含量少、需要大、醫(yī)學價值高,而且通?；瘜W合成困難(成本高,難大,環(huán)境污染嚴重),為了確保紅豆杉資源的可持續(xù)用,除正在開展的苗圃栽培,并以苗圃作為紫杉醇提的原料之外,通過生物合成來使它們具最終的商業(yè)值是一個極具潛力的手段。例如,與抗癌藥物紫杉醇用相似的埃波霉素(epothilone)已在鏈霉菌中通過合生物合成方法獲得表達,現(xiàn)已進入開發(fā)研究階段。、對一些現(xiàn)有的結構復雜的天然產(chǎn)物如青蒿素銀杏內(nèi)酯等有效組分進行定向合成,對臨床用抗生品種進行有針對性的修飾和改造,如對紅霉素進行造產(chǎn)生酮內(nèi)酯型的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,獲得對臨床藥菌具有活性的抗生素衍生物;或者通過對現(xiàn)有天產(chǎn)物或抗生素的結構改造,獲得具有全新活性的或化性能有明顯改善的天然產(chǎn)物或新抗生素。、組合生物合成產(chǎn)生新化合物的潛力很大,化合數(shù)是以可操作基因的指數(shù)方式形成,如設R為可利的基因數(shù),n是每個基因的不同等位形式(即不同天產(chǎn)物來源的數(shù)目),從理論上講經(jīng)過基因組合可得Rn種排列組合,即得到Rn個化合物。通過組合生合成,獲得一大批新化合物,作為高通量藥物篩選樣庫的來源之一。、由于多基因組合操作的平臺是以易于大規(guī)模產(chǎn)的微生物體系為基礎,使創(chuàng)制新型藥物的研究便產(chǎn)業(yè)化。、組合生物合成的研究,必將推動我國在基因水對天然資源的利用,更好地利用植物代謝產(chǎn)物,挖掘前實驗室條件下無法進行培養(yǎng)的生物體,包括海洋的生物體。隨著研究和應用的發(fā)展,植物和海洋生物級代謝產(chǎn)物的組合生物學研究,也將蓬勃

發(fā)展起來。

四、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀

1985年,Hopwood教授[4]在世界首次報道用遺工程的手段合成“非天然”的天然產(chǎn)物isochromanequinone,該工作為后來的組合生物合成奠定了礎。在以后的十幾年里,這一領域成為天然產(chǎn)物代工程研究中最活躍的領域,許多微生物次級代謝研的專家都加入這一領域的工作,因為組合生物合成潛力制造出很多先導化合物。目前的發(fā)展趨勢由最初的基礎研究逐步演變?yōu)榛A與應用兼顧,有的地向產(chǎn)業(yè)化邁進。該領域的研究也同樣得到工界的重視,美國加州高新技術產(chǎn)業(yè)公司研制的埃波素(epothilone D)已進入III期臨床評價階段。埃霉素原來由纖維堆囊黏細菌產(chǎn)生,其產(chǎn)量低,繁殖時間長,產(chǎn)品無法進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。該公司利用基因組合技術使纖維堆囊黏細菌的埃波霉素生物合成基因在鏈霉菌中得到表達,并通過?；D移酶域替換及羥基化酶基因的阻斷,獲得了主要產(chǎn)生埃波霉素中抗腫瘤活性最好組分的epothilone D的基因工程菌。我國自上世紀80年代初開展以多基因組合工程技術研制新藥的研究,在聚酮類抗生素如大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、利福霉素、安莎霉素及抗生素產(chǎn)生菌分子生物學研究方面,取得一定進展。國家重大專項支持的基因工程必特螺旋霉素己進入臨床研究,基因工程必特螺旋霉素的研制為組合生物合成技術應用于小分子化合物的創(chuàng)制中提供了良好的工作基礎和經(jīng)驗。我國微生物代謝產(chǎn)品研究歷史悠久,已形成多學科協(xié)調合作的體系,近年來在國家的支持下該體系已得到一定的發(fā)展,加強了微生物及代謝產(chǎn)物資源的開發(fā)。我們已逐步建立難培養(yǎng)極端微生物和未培養(yǎng)微生物資源及海洋微生物的挖掘工作,建立并完善從土壤或其他來源直接分離DNA技術。我國有很強的有機化學合成能力,可以合成進行組合合成的起始單元,開展前體介導的組合生物合成(precursor-directed biosynthesis)研究。我們已建立并不斷完善多種生物活性篩選模型,有天然產(chǎn)物化學分離鑒定及藥理、藥效、毒理評估的配套學科。

目前基因工程技術的發(fā)展水平,在單基因操作方面已經(jīng)比較成熟;在多基因操作層次上雖然技術難度相對比較大,但近年來在此研究領域已有了迅猛的發(fā)展,已積累了較好的研究基礎,許多次級代謝產(chǎn)物生物合成基因簇已得到克隆,基因結構與功能已得到闡明,并且發(fā)展了一系列大容量載體和合適的宿主表達系統(tǒng)。組合生物合成已形成國際藥物領域研究的熱點和一個重要發(fā)展方向。

五、研究方向與前景

我國天然微生物及植物資源豐富,以微生物作為平臺的藥物生產(chǎn)歷史悠久、種類繁多,利用這一寶庫開展組合生物合成研究,建立新型化合物庫,作為新型藥物或先導化合物的重要來源之一,有重要的理論與實際意義。組合生物合成為當今世界研究熱點,我國也有一定工作基礎,開展這方面的研究將有利于加深對次級代謝生物合成機理的研究與應用、促進生物技術新藥研制中的作用,對發(fā)展我國新藥有重要意義,并推動新藥研究中高通量篩選技術與方法的建立與善,篩選出有價值的新藥。

我們要重點加強難培養(yǎng)微生物及海洋生物資源挖掘工作,建立并完善從土壤或其他來源直接分DNA技術,以豐富組合生物合成基因資源;加強微物天然化學研究,建立微量、快速、高效鑒定天然產(chǎn)化學結構的技術和方法;充分利用我們已經(jīng)建立的種生物活性篩選模型,通過廣泛地聯(lián)合與協(xié)作,擴展合生物合成技術在創(chuàng)新藥物中的應用,建立我國基工程微生物組合生物合成創(chuàng)制新型藥物或先導化合研究的技術平臺。該研究將有助于開拓和促進我國新技術在新藥研究與開發(fā)中的應用,對創(chuàng)制具有我自主知識產(chǎn)權的新藥將會有積極推動作用。

對本課程的意見：

1、可能是因為選課人太少的問題，上課的時候沒有很好的聽課氣氛，不過主要

還可能是自己的原因，自己不能集中精神聽講。

2、以后只要選課的人比較多了，應該會好一些，上課的人少了，總是覺得就像

這門課不重要，老師講的很清晰，主要是我們上課時常開小差。自從上了大學，就沒太有人管了，有時聽起課來就愛聽不聽，這倒是對每門課都差不多的。

3、課堂上可以稍微提問一下，因為提問往往可以引起同學們的注意，這樣走神的情況可能會少一些。

4、課堂中還可以穿插一些與課程有關的歷史、說一下那些地方比較適合做研究、考研究生去哪里比較好啊什么的，這樣既可以對現(xiàn)在的科研大環(huán)境有所了解，課堂內(nèi)容也不至于太單調。

最后謝謝老師兢兢業(yè)業(yè)地為我們把課上完，盡管上課人數(shù)少，你還是把課完整地給我們講完，謝謝老師為我們的付出。

第四篇：生物制藥技術

酶

分離純化酶的一般程序

1粗酶液的制備：材料的選擇，發(fā)酵液處理，細胞破碎及酶的抽提 2酶的初步分離：鹽析，等電點沉淀，有機溶劑沉淀，離心分離 3酶的高度純化（酶的精制）：層析法（凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析及親和層析），電泳（等電聚焦電泳）

4濃縮干燥及結晶：透析，旋轉蒸發(fā)，超濾，冷凍干燥

酶的主要純化技術－層析技術

利用混合液中各組分的物理化學性質的不同，(分子的大小和形狀、分子極性、吸附力、分子親和力、分配系數(shù))，使各組分以不同的比例分布在兩相中，當流動相以一定的速度流經(jīng)固定相時，各組分的移動速度不同，從而使不同的組分分離的技術過程。稱為層析技術（chromatography）

離子交換層析（ion exchange chromatography）

在一定的pH條件下，帶電荷的蛋白質與高分子不溶性固定相偶聯(lián)的離子交換基團相吸附，流動相中解離的離子與被吸附的酶發(fā)生可逆的交換，而對不同吸附能力的蛋白質進行分離 離子交換劑的選擇：陰離子交換劑用于處理凈電荷為負的蛋白質，陽離子交換劑用于處理凈電荷為正的蛋白質

樣品在低離子濃度條件下上柱，逐漸增加洗脫液的離子濃度，使蛋白依次被洗脫下來 洗脫方式可以是步進式洗脫或線性梯度洗脫 洗脫液一般用 NaCl

凝膠過濾法（gel filtration）亦稱分子篩層析、排阻層析，是利用生物大分子的相對分子質量的差異進行層析分離的一種方法

凝膠層析的固定相是惰性的珠狀凝膠顆粒，凝膠顆粒的內(nèi)部具有立體網(wǎng)狀結構，形成很多孔穴。當含有不同分子大小的組分的樣品進入凝膠層析柱后，各個組分就向固定相的孔穴內(nèi)擴散，組分的擴散程度取決于孔穴的大小和組分分子大小。比孔穴孔徑大的分子不能擴散到孔穴內(nèi)部，完全被排阻在孔外，只能在凝膠顆粒外的空間隨流動相向下流動，它們經(jīng)歷的流程短，流動速度快，所以首先流出；而較小的分子則可以完全滲透進入凝膠顆粒內(nèi)部，經(jīng)歷的流程長，流動速度慢，所以最后流出；

分離提純 脫鹽 測定高分子物質的相對分子量

疏水層析（hydrophobic chromatography）

原理：蛋白質分子中含有亮氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸等疏水性較強的氨基酸，當?shù)鞍踪|溶液經(jīng)過疏水層析介質的疏水配基時，蛋白的疏水性集團（疏水補?。c疏水配基發(fā)生親和作用而被吸附在介質上。不同蛋白質分子中疏水基團的數(shù)量和特性有所不同。在洗脫時通過改變洗脫液的極性達到分離的目的

親和層析（affinity chromatography）

也稱功能層析、生物專一吸附或選擇層析。根據(jù)生物分子與特定的固相化配基（ligand）之間的親和力而使生物分子得到分離的方法 酶與激活劑/抑制劑/底物/輔酶；抗原與抗體；激素/配體與受體；蛋白質與DNA/RNA上特定區(qū)域

特定的配基（激活劑/抑制劑/底物/輔酶）固定于惰性載體 目的酶與配基特異性親和吸附，雜質被洗脫 改變洗脫條件，解除目的酶與配基的專一性結合

固定化酶（細胞）的定義

優(yōu)點：

1.穩(wěn)定性顯著提高；

2.同一批固定化酶能重復多次地使用； 3.固定化后，很容易與反應物分開（過濾），不污 染產(chǎn)物，而且有利于控制生產(chǎn)過程，同時也省去了 熱處理等使酶失活的步驟；

4.可長期使用，并可預測衰變的速度； 5.提供了研究酶動力學的良好模型。缺點：

①固定化時，酶活力往往有損失。②增加了生產(chǎn)的成本，初始投資大。

③只能用于可溶性底物，而且較適用于小分子底物，對大分子底物不適宜。④非均相反應。

①注意維持酶的催化活性及專一性。在酶的固定化過程中，酶與載體的結合部位不應當是酶的活性部位，而且要盡量避免那些可能導致酶蛋白高級結構破壞的條件。②固定化應該有利于生產(chǎn)自動化、連續(xù)化。為此，用于固定化的載體必須有一定的機械強度，不能因機械攪拌而破碎或脫落。

③固定化酶應有最小的空間位阻，盡可能不妨礙酶與底物的接近，以提高產(chǎn)品的產(chǎn)量。④酶與載體必須結合牢固，從而使固定化酶能回收貯藏，利于反復使用。

⑤固定化酶應有最大的穩(wěn)定性，所選載體不與廢物、產(chǎn)物或溶劑發(fā)生化學反應。⑥固定化酶成本要低，以利于工業(yè)使用。

載體結合法

1物理吸附法2離子結合法3共價結合法 是將酶結合于不溶性載體上的一種固定化方法。1）物理吸附法 作用方式：非特異性物理吸附作用：范德華力；氫鍵；疏水作用；靜電作用 優(yōu)點：制作簡單，酶分子的構象很少或基本不發(fā)生變化，固定化酶活力較高 缺點：酶與載體結合力弱，酶易從載體脫落 載體：纖維素、瓊脂糖、活性炭、沸石及硅膠等 2)離子結合法

作用方式：離子鍵結合

優(yōu)點：制作簡單，處理條件緩和，酶蛋白的活性中心和高級結構破壞較少，可以制得活力較高的固定化酶。

缺點：離子鍵結合較松散，如在高離子強度下進行反應時，酶與載體易分開。載體：多糖類離子交換劑，合成高分子離子交換樹脂 3)共價鍵結合法

作用方式：共價鍵結合

優(yōu)點：酶分子和載體間的共價鍵較牢固，有良好的穩(wěn)定性及重復使用性 缺點：制備過程復雜，反應條件比較劇烈，酶活性損失比較嚴重。

制作方法：先將載體活化，在載體上引入一個活化基團，然后該活化基團再與酶分子表面的基團（羧基/氨基/羥基）反應結合。有戊二醛法、重氮化法、烷基化法等。

交聯(lián)法

利用雙功能（或多功能）基團的試劑，使酶蛋白分子之間發(fā)生交聯(lián)，凝集成網(wǎng)狀結構而成為固定化酶

常用的雙功能試劑有戊二醛、己二胺、順丁烯二酸酐和雙偶氮苯等。其中最常用的是戊二醛

包埋法

1網(wǎng)格型2微囊型

將酶包埋在凝膠的微小空格內(nèi)或埋于半透膜的微型膠束內(nèi)，但底物仍能滲入到里面與酶接觸。

載體：凝膠，高分子聚合物（半透膜）

優(yōu)點：利用此法制得的固定化酶，由于酶分子僅僅是被包埋起來，而未受到化學作用。酶蛋白幾乎不起變化。

缺點：酶被包埋在內(nèi)部，對大分子底物很難發(fā)生催化作用。所以用包埋法制備的酶，一般只適用與小分子底物。

包埋法分為：網(wǎng)格包埋法和微囊包埋法。

酶傳感器（enzyme sensor）1生物傳感器的概念

由生物識別物質（如酶、微生物、動植物組織、抗體等）和能量轉換器相結合所構成的分析儀器，可以簡便快速的測定各種特異性很強的物質 要求識別物質對被測物具有高度的敏感性和選擇性

根據(jù)識別物質可分為：酶傳感器、組織傳感器、微生物傳感器、免疫傳感器

2、生物傳感器的一般結構與工作原理 結構:有兩個部分組成

生物分子識別元件（感受器）：酶、核酸、抗體、細胞等 信號轉換器（換能器）：電化學電極、光學檢測元件、熱敏電阻、表面等離子共振器件等 原理：待測物質經(jīng)擴散作用進入生物傳感器,通過分子識別發(fā)生特異的生物化學反應,產(chǎn)生的生化信號經(jīng)換能器轉換為可定量和可處理的電信號,進而可檢測出該物質的濃度.根據(jù)反應產(chǎn)生的信號不同，可選擇相應的換能器.抗體

多克隆抗體：由于一個抗原通常都有幾個抗原決定簇，因此每個免疫細胞都可能產(chǎn)生一種針對某一抗原決定簇（antigenic determinant）的抗體，這些由同一抗原產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多克隆抗體。這些由不同B細胞克隆產(chǎn)生的抗體，稱為多克隆抗體（polyclonal antibodies，PcAb）。

單克隆抗體：單一類型的只針對某一抗原決定簇的抗體分子，是由單一的B淋巴細胞克隆產(chǎn)生的結構和特異性完全相同的高純度抗體。

抗原的制備

1.用基因工程技術制備重組蛋白抗原

2.提取純化天然抗原

3.合成多肽半抗原

4.小分子半抗原

5.多肽半抗原及小分子半抗原與載體偶聯(lián)

免疫

動物選擇：Balb/c小鼠，品系一致

途徑

體內(nèi)，體外，脾內(nèi)免疫

篩選陽性克隆及克隆化

克?。河蓡蝹€細胞繁殖擴增而形成性狀均一的細胞集落的過程。

目的：篩選陽性克隆；確保雜交瘤細胞所分泌的抗體具有單克隆性以及從細胞群中篩選

出具有穩(wěn)定表現(xiàn)型。

篩選陽性克隆鑒定

單克隆抗體活性檢測方法：

1）酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）：可溶性抗原、細胞核病毒。2）放免測定（RIA）：可溶性抗原、細胞抗體。3）FAC（熒光激活細胞分選儀，流式培養(yǎng)儀）：針對細胞表面

抗原的抗體檢測。

4）IFA（間接免疫熒光法）：用于細胞和病毒抗體的檢測。

雜交瘤細胞的克隆化

（1）有限稀釋技術 柏松分布（2）半固體瓊脂培養(yǎng)法

0.5%瓊脂培養(yǎng)基中進行克隆

1ml含不同數(shù)量的細胞懸液

1ml42度0.5%的瓊脂液

單克隆抗體的大量制備

基因工程抗體（genetically engineered antibodies,gAb）

是通過基因工程技術研制的，即通過PCR技術獲得抗體基因或抗體基因片段，與適當載體重組后引入不同表達系統(tǒng)所產(chǎn)生的抗體。基因工程抗體既保持了單抗的均一性、特異性強的優(yōu)點，又能克服其為鼠源性的不足，是拓展單抗廣泛人體使用的重要途徑。

（一）嵌合抗體（chimeric antibody）

特點：是用人抗體的C區(qū)替代鼠的C區(qū)。效果：使鼠源性單抗的免疫原性明顯減弱，并可延長其在體內(nèi)的半衰期及改善藥物的動力學。嵌合抗體的優(yōu)點：

保持了親本鼠單抗的特異性和親和力；

減少人源性的恒定區(qū)的HAMA現(xiàn)象；

能有效地介導產(chǎn)生補體依賴的細胞毒作用(CDC)、抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用（ADCC）及免疫調理作用。缺點：

目前已有數(shù)十種嵌合抗體進入了臨床試用，雖然HAMA現(xiàn)象較鼠單抗大為下降，但有相當比例的患者仍會出現(xiàn)HAMA癥狀，針對可變區(qū)的抗獨特型抗體反應仍很明顯。

（二）改型抗體（reshaped antibody，RAb）亦叫“重構抗體”，“CDR移植抗體（CDR grafting antibody）”。它是利用基因工程技術，將人抗體可變區(qū)（V）中互補性決定區(qū)（complementarity determinative region，CDR）的氨基酸序列改換成鼠源單抗CDR 序列。

特點：此種抗體可以使人單抗獲得鼠單抗的特異性又保持人源抗體的親和力。

動物

動物細胞分類

1、貼壁依賴性細胞 概念：anchoraged-dependent cell需要有適量帶電荷的固體或半固體支持表面才能生長的細胞 大多數(shù)動物細胞都屬于此類。

2、非貼壁依賴性細胞

概念：anchoraged-independent cell不依賴于固體支持物表面生長的細胞，可在培養(yǎng)液中懸浮生長，被稱為懸浮細胞。舉例：血液、淋巴細胞、腫瘤細胞和某些轉化細胞，Namalwa細胞。

3、兼性貼壁細胞

概念：對支持物的依賴性不嚴格，既可貼壁生長，也可懸浮生長。舉例：CHO細胞、BHK細胞、L929細胞。理想的藥物生產(chǎn)細胞系

轉基因技術的基本原理

將體外構建的重組DNA分子(目的基因或基因組片段)通過顯微注射、或轉染胚胎干細胞等方法注入動物的受精卵或著床前的胚胎細胞,然后將此受精卵或胚胎再植入受體動物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶外源基因的轉基因動物。

同源重組

雙鏈DNA的兩個區(qū)段的DNA序列基本一致，但不一定完全相同，叫做同源區(qū)。同源的雙鏈DNA可以通過相互交換進行重組。

外源DNA如有同源區(qū)，也可通過類似的同源重組過程整合到生物的染色體基因組上。

胚胎干細胞（Embryonic Stem Cell，ES）是從早期胚胎的內(nèi)細胞團經(jīng)體外培養(yǎng)建立起來的多潛能細胞系，具有胚胎細胞相似的形態(tài)特征和分化特征。

新型

反義技術：根據(jù)堿基互補原理，使用與目標靶的遺傳物質（DNA或mRNA）特定互補的核苷酸片段來封閉基因表達的技術方法。

反義藥物：人工合成或生物合成的DNA或RNA，能與RNA互補，抑制疾病基因的表達。反義核酸（antisense nucleic acid）是一段與靶基因的某段序列互補的天然存在或人工合成的核苷酸序列。它可通過堿基配對與細胞內(nèi)核酸特異結合形成雜交分子，從而在轉錄和翻譯水平調節(jié)靶基因的表達，具有合成方便、序列設計簡單、容易修飾、選擇性高、親和力高等特點。

核酶(ribozyme)具有酶活性的RNA，可降解特異的mRNA序列。

RNA干擾（RNA interference，RNAi）

由雙鏈RNA介導的細胞內(nèi)特異性mRNA降解過程，導致靶基因的表達沉默。

基因導入方式

直接體內(nèi)療法（in vivo）

是指將目的基因直接導入體內(nèi)有關的組織器官，使其進入相應的細胞并進行表達。間接體內(nèi)療法（ex vivo）

是指在體外將目的基因導入靶細胞，經(jīng)過篩選和增殖后將細胞回輸給患者，使該基因在體內(nèi)有效地表達相應產(chǎn)物，以達到治療的目的。

腫瘤的基因治療

（一）通過抑癌基因抑制腫瘤細胞生長和誘導細胞凋亡。

（二）通過病毒感染殺傷腫瘤細胞

（三）通過誘導免疫系統(tǒng)識別并殺傷腫瘤細胞

（四）腫瘤的自殺基因治療

（五）腫瘤抗原靶向的腫瘤基因治療

（六）細胞因子基因治療

第五篇：畢業(yè)散伙飯班長致辭

畢業(yè)散伙飯班長致辭

各位同學大家晚上好，在我們晚宴開始之前我就說點吧，畢竟以后也沒機會了。時間就是一把殺豬刀對不對。無情的從我們身邊悄悄的劃過900多天。不知你們還記不記得2010年的9月，我們來報道的日子。那是個雨天。我們陸陸續(xù)續(xù)的在這所學校相遇的情景。還記得第一眼看見你室友的感覺么。我印像非常深刻，馬同學是她媽陪他來報道的，看到他媽手上戴著非常有民族特色的鐲子，我還熱情的與他媽交談，問她是否是少數(shù)民族，臨走之前還讓我們要好好相處。后來我又碰見了前來宿舍報道同學，那時的他略顯羞澀，話比他爸還少?，F(xiàn)在回想起這些事來還歷歷在目，然而事實是分別就在眼前?，F(xiàn)在你們也可以認真的回想，回想下900多天前，你們第一次見到對方的樣子。

900多天前，當我們一腳踏入學校的時候，我們各自的人生中就多了一層關系，大學同學。所謂同學，同師授業(yè)的人，互相幫助的人，共同攜手并肩的人，同在一起學習的人。這層關系永遠不會改變，不管是五年，十年，還是二十年。無論我們生，老，病，死，貧窮還是富裕。它都不會改變。

大家都來自中國的各個地方，有福建，浙江，上海，江蘇，安徽，河南，四川，重慶，遼寧，內(nèi)蒙古。中國960萬平方公里，大學有上千所。而我們偏偏能相聚在二工大的10物流01。除了緣分，我想也還是緣分。在900多天的時間里，我們和09屆的聯(lián)過誼，在川菜館也吃過一次。我們一起唱過《同一首歌》，唱過《中國人》。一起出現(xiàn)在籃球場上為班級榮譽而努力過。還頂著炎炎烈日在綠草地上走過正步。在濱江森林公園抓過螃蟹吃過燒烤坐過海盜船。每次活動，每次付出，每次參與，不一定有滿滿的回報。但我相信肯定會有收獲，那就是五年后 十年后當我們回首往事時的滿滿回憶。

這次“散伙飯”，應該是我們最后用心相聚的時刻了。我希望 “散伙飯”的意義遠不止一頓離別之宴這么簡單。這個聽起來直白得有些感傷的字眼，我相信總能在未來的某天喚起我們最難忘的回憶。

謝謝你們出現(xiàn)在大學里的軌跡上，劃過我的天空，你們必將留下痕跡，而我也必將會牢記這個痕跡。我還有一句話要送個在座的各位同學，無論你們是踏上社會工作還是選擇專升本。請記住，天高任鳥飛，海闊憑魚躍，你們的未來在你們自己手里。

最后愿大家今晚，吃飽，喝好，玩得開心，玩得痛快！